CN104781251B - 可作为激酶调节剂的经双环杂环取代的吡啶基化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供具有式(I)的化合物，或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R2为双环杂环，且R1、R3、R4、R5及R6如本文所定义，其可作为激酶调节剂，包括IRAK‑4调节。

Description

可作为激酶调节剂的经双环杂环取代的吡啶基化合物
技术领域
本发明涉及可作为激酶抑制剂(包括IRAK-4调节)的化合物。本文提供经双环杂环取代的吡啶基化合物、包含这些化合物的组合物及其使用方法。本发明另外关于适用于治疗与激酶调节相关的病状的含有至少一种本发明化合物的药物组合物，以及抑制哺乳动物体内激酶(包括IRAK-4)活性的方法。
背景技术
Toll/IL-1受体家族成员为炎症及宿主抗性的重要调节剂。Toll样受体(Tolllike receptor，TLR)家族识别源自包括细菌、真菌、寄生虫及病毒的感染性生物体的分子模式(于Kawai,T.等人,Nature Immunol.,11:373-384(2010)中评述)。结合受体的配位体诱发接附分子二聚化且将其募集至受体中称为Toll/IL-1受体(TIR)结构域的保守细胞质基元。除TLR3以外，所有TLR均募集接附分子MyD88。IL-1受体家族亦含有细胞质TIR基元且在配位体结合后募集MyD88(于Sims,J.E.等人,Nature Rev.Immunol.,10:89-102(2010)中评述)。
丝氨酸/苏氨酸激酶的IRAK家族成员经由与MyD88相互作用而募集至受体。该家族由四个成员组成。若干条证据表明IRAK4在经由MyD88依赖性TLR及IL-1R家族成员引发信号传导中具有关键且非多余的作用。结构资料证实IRAK4直接与MyD88相互作用且随后募集IRAK1或IRAK2至受体复合物以便于下游信号传导(Lin,S.等人,Nature,465:885-890(2010))。IRAK4直接磷酸化IRAK1以便于下游信号传导至E3泛素接合酶TRAF6，导致丝氨酸/苏氨酸激酶TAK1活化，随后NFκB路径及MAPK级联活化(Flannery,S.等人,Biochem.Pharmacol.,80:1981-1991(2010))。识别缺乏IRAK4表现的人类患者子集(Picard,C.等人,Science,299:2076-2079(2003))。来自这些患者的细胞无法对除TLR3以外的所有TLR促效剂以及对包括IL-1β及IL-18的IL-1家族成员作出反应(Ku,C.等人,J.Exp.Med.,204:2407-2422(2007))。小鼠体内缺失IRAK4导致严重阻断IL-1、IL-18及除TLR3以外的所有TLR依赖性反应(Suzuki,N.等人,Nature,416:750-754(2002))。相反，缺失IRAK1(Thomas,J.A.等人,J.Immunol.,163:978-984(1999)；Swantek,J.L.等人,J.Immunol.,164:4301-4306(2000))或IRAK2(Wan,Y.等人,J.Biol.Chem.,284:10367-10375(2009))导致信号传导部分损失。此外，IRAK4为激酶活性展示为引发信号传导所需的唯一IRAK家族成员。以激酶失活突变体(KDKI)替代小鼠基因组中的野生型IRAK4削弱经由所有MyD88依赖性受体(包括IL-1、IL-18及除TLR3以外的所有TLR)的信号传导(Koziczak-Holbro,M.等人,J.Biol.Chem.,282:13552-13560(2007)；Kawagoe,T.等人,J.Exp.Med.,204:1013-1024(2007)；及Fraczek,J.等人,J.Biol.Chem.,283:31697-31705(2008))。
如与野生型动物相比，IRAK4KDKI小鼠在多发性硬化(Staschke,K.A.等人,J.Immunol.,183:568-577(2009))、类风湿性关节炎(Koziczak-Holbro,M.等人,ArthritisRheum.,60:1661-1671(2009))、动脉粥样硬化(Kim,T.W.等人,J.Immunol.,186:2871-2880(2011)及Rekhter,M.等人,Biochem.Biophys.Res.Comm.,367:642-648(2008))及心肌梗塞(Maekawa,Y.等人,Circulation,120:1401-1414(2009))的小鼠模型中展示极大降低的疾病严重性。如所述，IRAK4抑制剂将阻断所有MyD88依赖性信号传导。MyD88依赖性TLR已展示在多发性硬化、类风湿性关节炎、心血管疾病、代谢综合征、败血症、全身性红斑狼疮、炎性肠病(包括克罗恩氏病(Crohn's disease)及溃疡性结肠炎)、自身免疫葡萄膜炎、哮喘、过敏、I型糖尿病及同种异体移植排斥反应的发病机理中起作用(Keogh,B.等人,TrendsPharmacol.Sci.,32:435-442(2011)；Mann,D.L.,Circ.Res.,108:1133-1145(2011)；Horton,C.G.等人,Mediators Inflamm.,Article ID 498980(2010),doi:10.1155/2010/498980；Goldstein,D.R.等人,J.Heart Lung Transplant.,24:1721-1729(2005)及Cario,E.,Inflamm.Bowel Dis.,16:1583-1597(2010))。已鉴别弥漫性大B细胞淋巴瘤中的致癌活性MyD88突变，其对IRAK4抑制作用具敏感性(Ngo,V.N.等人,Nature,470:115-121(2011))。全基因组定序亦鉴别MyD88中与慢性淋巴性白血病相关的突变，表明IRAK4抑制剂亦可用于治疗白血病(Puente,X.S.等人,Nature,475:101-105(2011))。
除阻断TLR信号传导以外，IRAK4抑制剂亦阻断藉由IL-1家族成员的信号传导。已显示IL-1的中和在多种疾病中有效，包括痛风、痛风性关节炎、2型糖尿病、自身炎性疾病(包括隐热蛋白(cryopyrin)相关周期性综合征(Cryopyrin-Associated PeriodicSyndromes，CAPS)、TNF受体相关周期性综合征(TNF Receptor Associated PeriodicSyndrome，TRAPS)、家族性地中海热(Familial Mediterranean Fever，FMF)、成人斯蒂尔病(adult onset stills))、全身性幼年型特发性关节炎(systemic onset juvenileidiopathic arthritis)、中风、移植物抗宿主病(Graft-versus-Host Disease，GVHD)、和缓性多发性骨髓瘤、复发性心包炎、骨关节炎、肺气肿(Dinarello,C.A.,Eur.J.Immunol.,41:1203-1217(2011)及Couillin,I.等人,J.Immunol.,183:8195-8202(2009))。在阿兹海默氏病(Alzheimer's disease)的小鼠模型中，阻断IL-1受体改善认知缺陷、削弱τ病变且减少寡聚形式的淀粉状蛋白-β(Kitazawa,M.等人,J.Immunol.,187:6539-6549(2011))。亦已显示IL-1与适应性免疫有重要关联，驱使TH17效应T细胞子集分化(Chung,Y.等人,Immunity,30:576-587(2009))。因此，预测IRAK4抑制剂在TH17相关疾病中具有功效，这些疾病包括多发性硬化、牛皮癣、炎性肠病、自身免疫葡萄膜炎及类风湿性关节炎(Wilke,C.M.等人,Trends Immunol.,32:603-661(2011))。
鉴于可受益于包含蛋白激酶调节的治疗的病状，即刻显而易见能够调节蛋白激酶(诸如IRAK-4)的新颖化合物及使用这些化合物的方法可对许多患者提供实质性治疗益处。
本发明涉及一类新颖的经杂环取代的吡啶基化合物，发现其为蛋白激酶(包括IRAK-4)的有效抑制剂。
发明内容
本文提供发现的一般可描述为经杂环取代的吡啶基化合物的激酶活性调节剂。
本发明涉及可作为IRAK-4抑制剂且适用于治疗增生性疾病、过敏性疾病、自身免疫疾病及炎性疾病的式(I)化合物，或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
本发明亦提供用于制造本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药的方法及中间体。
本发明亦提供包含药学上可接受的载剂及至少一种本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药的药物组合物。
本发明亦提供一种抑制IRAK-4的方法，其包含向需要此治疗的宿主给药治疗有效量的至少一种本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
本发明亦提供一种治疗增生性、代谢性、过敏性、自身免疫及炎性疾病的方法，其包含向需要此治疗的宿主给药治疗有效量的至少一种本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
一优选实施方案为一种治疗炎性及自身免疫疾病的方法，其中治疗炎性疾病甚至更优选。具体炎性及自身免疫疾病包括(但不限于)克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、哮喘、移植物抗宿主病、同种异体移植排斥反应、慢性阻塞性肺病；格雷夫斯病(Graves' disease)、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、牛皮癣；CAPS、TRAPS、FMF、成人斯蒂尔病(adult onsetstills)、全身性幼年型特发性关节炎(systemic onset juvenile idiopathicarthritis)、多发性硬化、神经病性疼痛、痛风及痛风性关节炎。
一备选优选实施方案为一种治疗代谢性疾病的方法，这些代谢性疾病包括2型糖尿病及动脉粥样硬化。
本发明亦提供本发明的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其为用于疗法中。
本发明亦提供本发明的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药的用途，其为用于制造用以治疗癌症的药物。
随揭示内容继续，将以展开形式描述本发明的这些及其他特征。
本发明实施方案的详细描述
本文提供至少一种化学实体，其选自式(I)化合物：
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中
R1为经0至7个R1a取代的C1-6烷基、C1-6卤烷基、经0至7个R1a取代的C2-6烯基、经0至7个R1a取代的C2-6炔基、经0至7个R1a取代的-(CH2)r-C3-10环烷基、经0至7个R1a取代的-(CH2)r-C6-10芳基或经0至7个R1a取代的含有1至4个选自N、O及S的杂原子的-(CH2)r-5至10员杂环；
R1a在每次出现时均独立地为氢、＝O、F、Cl、Br、OCF3、CF3、CHF2、CN、NO2、-(CH2)rORb、-(CH2)rSRb、-(CH2)rC(O)Rb、-(CH2)rC(O)ORb、-(CH2)rOC(O)Rb、-(CH2)rNR11R11、-(CH2)rC(O)NR11R11、-(CH2)rNRbC(O)Rc、-(CH2)rNRbC(O)ORc、-NRbC(O)NR11R11、-S(O)pNR11R11、-NRbS(O)pRc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc、经0至2个Ra取代的C1-6烷基、C1-6卤烷基、经0至3个Ra取代的-(CH2)r-3至14员碳环或经0至3个Ra取代的包含碳原子及1至4个选自N、O及S(O)p的杂原子的-(CH2)r-5至7员杂环；
R2为经0至4个R2a取代的含有1至4个选自N、O及S的杂原子的8至11员杂环；
R2a在每次出现时均独立地选自氢、＝O、卤基、OCF3、CN、NO2、-(CH2)rORb、-(CH2)rSRb、-(CH2)rC(O)Rb、-(CH2)rC(O)ORb、-(CH2)rOC(O)Rb、-(CH2)rNR11R11、-(CH2)rC(O)NR11R11、-(CH2)rNRbC(O)Rc、-(CH2)rNRbC(O)ORc、-NRbC(O)NR11R11、-S(O)pNR11R11、-NRbS(O)pRc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc、经0至2个Ra取代的C1-6烷基、C1-6卤烷基、经0至1个Ra取代的-(CH2)r-3至14员碳环及经0至2个Ra取代的包含碳原子及1至4个选自N、O及S(O)p的杂原子的-(CH2)r-5至7员杂环；
R3为经0至3个R3a取代的C1-6烷基、C1-6卤烷基、经0至3个R3a取代的C2-6烯基、经0至3个R3a取代的C2-6炔基、经0至3个R3a取代的C3-10环烷基或经0至3个R3a取代的C6-10芳基；
R3a在每次出现时均独立地为氢、＝O、F、Cl、Br、OCF3、CF3、CHF2、CN、NO2、-(CH2)rORb、-(CH2)rSRb、-(CH2)rC(O)Rb、-(CH2)rC(O)ORb、-(CH2)rOC(O)Rb、-(CH2)rNR11R11、-(CH2)rC(O)NR11R11、-(CH2)rNRbC(O)Rc、-(CH2)rNRbC(O)ORc、-NRbC(O)NR11R11、-S(O)pNR11R11、-NRbS(O)pRc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc、经0至3个Ra取代的C1-6烷基、C1-6卤烷基、经0至3个Ra取代的-(CH2)r-3至14员碳环或经0至3个Ra取代的包含碳原子及1至4个选自N、O及S(O)p的杂原子的-(CH2)r-5至10员杂环；
R4与R5独立地选自氢及经0至1个Rf取代的C1-4烷基；
R11在每次出现时均独立地为氢、经0至1个Rf取代的C1-6烷基、CF3、经0至1个Rf取代的C3-10环烷基、经0至3个Rd取代的-(CH)r-苯基或经0至3个Rd取代的包含碳原子及1至4个选自N、O及S(O)p的杂原子的-(CH2)r-5至7员杂环；或
一个R11连同第二个R11及其两者所连接的氮原子一起可组合形成氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、吗啉基或4-(C1-6烷基)哌嗪基环；
Ra在每次出现时均独立地为氢、F、Cl、Br、OCF3、CF3、CHF2、CN、NO2、-(CH2)rORb、-(CH2)rSRb、-(CH2)rC(O)Rb、-(CH2)rC(O)ORb、-(CH2)rOC(O)Rb、-(CH2)rNR11R11、-(CH2)rC(O)NR11R11、-(CH2)rNRbC(O)Rc、-(CH2)rNRbC(O)ORc、-NRbC(O)NR11R11、-S(O)pNR11R11、-NRbS(O)pRc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc、经0至3个Rf取代的C1-6烷基、C1-6卤烷基、-(CH2)r-3至14员碳环或经0至3个Rf取代的包含碳原子及1至4个选自N、O及S(O)p的杂原子的-(CH2)r-5至7员杂环，或者相邻或同一碳原子上的两个Ra形成式-O-(CH2)n-O-或-O-CF2-O-的环状缩醛，其中n选自1或2；
Rb为氢、经0至2个Rd取代的C1-6烷基、C1-6卤烷基、经0至2个Rd取代的C3-6环烷基或经0至3个Rd取代的-(CH2)r-苯基；
Rc为经0至3个Rf取代的C1-6烷基、经0至3个Rf取代的-(CH2)r-C3-6环烷基或经0至3个Rf取代的-(CH2)r-苯基，或
Rd在每次出现时均独立地为氢、F、Cl、Br、OCF3、CF3、CN、NO2、-ORe、-(CH2)rC(O)Rc、-NReRe、-NReC(O)ORc、C1-6烷基或经0至3个Rf取代的-(CH2)r-苯基；
Re选自氢、C1-6烷基、C3-6环烷基及经0至3个Rf取代的-(CH2)r-苯基；
Rf在每次出现时均独立地为氢、卤基、NH2、OH、C3-6环烷基、CF3或-O(C1-6烷基)；
p为0、1或2；且
r为0、1、2、3或4。
在另一实施方案中提供式(I)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R2为苯并硫杂苯基(benzothiazphenyl)、吡唑并嘧啶基、苯并噻唑基、吡唑并吡啶基、苯并异噻唑基、***并吡啶基、咪唑并吡啶基、苯并噁唑基、***并吡啶基、咪唑并吡啶基、吡啶并吡嗪基、喹唑啉基、吡啶并吡嗪基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、苯并咪唑基、***并吡啶基、咪唑并哒嗪基、吡啶并吡嗪基、二氮杂萘基、喹喔啉基、酞嗪基、喹啉基、吲哚基、噻唑并吡啶基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并噻吩基、异喹啉基、苯并吡喃基、吲哚嗪基、苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基或异吲哚基。
在另一实施方案中，提供一种式(I)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R4与R5两者均为氢。
在另一实施方案中，提供一种式(II)化合物，其中
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
R1为C1-6烷基、-(CH2)rC3-10环烷基、含有1至4个选自N、O及S的杂原子的-(CH2)r-5至7员杂环或-(CH2)r苯基，每一基团经0至4个R1a取代；
R1a在每次出现时均独立地为氢、＝O、F、Cl、Br、OCF3、CF3、CHF2、CN、NO2、-(CH2)rORb、-(CH2)rSRb、-(CH2)rC(O)Rb、-(CH2)rC(O)ORb、-(CH2)rOC(O)Rb、-(CH2)rNR11R11、-(CH2)rC(O)NR11R11、-(CH2)rNRbC(O)Rc、-(CH2)rNRbC(O)ORc、-NRbC(O)NR11R11、-S(O)pNR11R11、-NRbS(O)pRc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc、经0至4个Ra取代的C1-6烷基、C1-6卤烷基、经0至4个Ra(氢或-C(O)NHCH3)取代的-(CH2)r-3至14员碳环或经0至4个Ra取代的包含碳原子及1至4个选自N、O及S(O)p的杂原子的-(CH2)r-5至7员杂环；
R2为苯并硫杂苯基、吡唑并嘧啶基、苯并噻唑基、吡唑并吡啶基、苯并异噻唑基、***并吡啶基、咪唑并吡啶基、苯并噁唑基、***并吡啶基、咪唑并吡啶基、吡啶并吡嗪基、喹唑啉基、吡啶并吡嗪基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、苯并咪唑基、***并吡啶基、咪唑并哒嗪基、吡啶并吡嗪基、二氮杂萘基、喹喔啉基、酞嗪基、喹啉基、吲哚基、噻唑并吡啶基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并噻吩基、异喹啉基、苯并吡喃基、吲哚嗪基、苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基或异吲哚基，每一基团经0至4个选自R2a的基团取代；
R2a在每次出现时均独立地为氢、＝O、F、Cl、Br、OCF3、CN、NO2、-(CH2)rORb、-(CH2)rSRb、-(CH2)rC(O)Rb、-(CH2)rC(O)ORb、-(CH2)rOC(O)Rb、-(CH2)rNR11R11、-(CH2)rC(O)NR11R11、-(CH2)rNRbC(O)Rc、-(CH2)rNRbC(O)ORc、-NRbC(O)NR11R11、-S(O)pNR11R11、-NRbS(O)pRc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc、经0至2个Ra取代的C1-6烷基、C1-6卤烷基、经0至1个Ra取代的-(CH2)r-3至14员碳环或经0至1个Ra取代的包含碳原子及1至4个选自N、O及S(O)p的杂原子的-(CH2)r-5至7员杂环；
R3为C1-6烷基、C3-10环烷基、苯基或经0至3个R3a取代的含有1至4个选自N、O及S的杂原子的5至10员杂环；
R3a在每次出现时均独立地为氢、＝O、F、Cl、Br、OCF3、CF3、CHF2、CN、NO2、-(CH2)rORb、-(CH2)rSRb、-(CH2)rC(O)Rb、-(CH2)rC(O)ORb、-(CH2)rOC(O)Rb、-(CH2)rNR11R11、-(CH2)rC(O)NR11R11、-(CH2)rNRbC(O)Rc、-(CH2)rNRbC(O)ORc、-NRbC(O)NR11R11、-S(O)pNR11R11、-NRbS(O)pRc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc、经0至3个Ra取代的C1-6烷基、C1-6卤烷基、经0至3个Ra取代的-(CH2)r-3至14员碳环或经0至3个Ra取代的包含碳原子及1至4个选自N、O及S(O)p的杂原子的-(CH2)r-5至10员杂环；
R11在每次出现时均独立地为氢、经0至1个Rf取代的C1-6烷基、CF3、经0至1个Rf取代的C3-10环烷基、经0至3个Rd取代的-CH2-苯基或经0至3个Rd取代的包含碳原子及1至4个选自N、O及S(O)p的杂原子的-(CH2)-5至7员杂环；
Ra在每次出现时均独立地为氢、Cl、Br、OCF3、CF3、CHF2、CN、NO2、-(CH2)rORb、-(CH2)rSRb、-(CH2)rC(O)Rb、-(CH2)rC(O)ORb、-(CH2)rOC(O)Rb、-(CH2)rNR11R11、-(CH2)rC(O)NR11R11、-(CH2)rNRbC(O)Rc、-(CH2)rNRbC(O)ORc、-NRbC(O)NR11R11、-S(O)pNR11R11、-NRbS(O)pRc、-S(O)Rc、-S(O)2Rc、C1-6烷基、C1-6卤烷基、-(CH2)r-3至14员碳环或包含碳原子及1至4个选自N、O及S(O)p的杂原子的-(CH2)r-5至7员杂环；
两个Ra连同其所连接的碳原子一起组合形成式-O-(CH2)n-O-或-O-CF2-O-的环状缩醛，其中n为1或2；
Rb为氢、经0至2个Rd取代的C1-6烷基、C1-6卤烷基、经0至2个Rd取代的C3-6环烷基或经0至3个Rd取代的-(CH2)r-苯基；
Rc为C1-6烷基、C3-6环烷基或经0至3个Rf取代的-(CH2)r-苯基；
Rd为氢、F、Cl、Br、OCF3、CF3、CN、NO2、-ORe、-(CH2)rC(O)Re、-NReRe、-NReC(O)ORc、C1-6烷基或经0至3个Rf取代的-(CH2)r-苯基；
Re为氢、C1-6烷基、C3-6环烷基或经0至3个Rf取代的-(CH2)r-苯基；
Rf为氢、卤基、NH2、OH或-O(C1-6烷基)；
r为0、1、2、3或4；且
p为0、1或2。
在另一实施方案中，提供一种化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R2选自苯并硫杂苯基、吡唑并嘧啶基、苯并噻唑基、吡唑并吡啶基、苯并噁唑基、***并吡啶基、吡啶并吡嗪基、吡啶并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、喹唑啉基、吡啶并吡嗪基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、***并吡啶基、咪唑并哒嗪基、吡啶并吡嗪基、二氮杂萘基、喹喔啉基、喹啉基、吲哚基、噻唑并吡啶基、异喹啉基及噌啉基，每一基团经0至4个R2a取代。
在又一实施方案中，提供一种化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R2选自苯并硫杂苯基及吡唑并嘧啶基，每一基团经0至4个R2a取代。
在一优选实施方案中，R2a独立地选自＝O、F、Cl、CN、-(CH2)rORb、-(CH2)rC(O)Rb、-(CH2)rC(O)ORb、-(CH2)rNR11R11、经0至2个Ra取代的C1-6烷基及吡啶基(尤其其中Rb为乙基或甲基，R11为氢且r为0)。
在一更优选实施方案中，提供式(I)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R2选自：
在又一更优选实施方案中，提供式(I)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
R1为C1-6烷基、-(CH2)rC3-10环烷基、含有1至4个选自N、S及O的杂原子的-(CH2)r-6员杂环或-(CH2)r苯基，每一基团经0至5个R1a取代；且
R1a在每次出现时均独立地为F、CF3、CN、-(CH2)rORb、-(CH2)rC(O)NR11R11、-(CH2)rNRbC(O)Rc或-NRbC(O)NR11R11；或C1-6烷基、C3-10环烷基(尤其为环丙基或环丁基)、苯基或包含碳原子及1至3个选自N及O的杂原子的5至7员杂环(尤其为吡咯烷基或吗啉基)，每一基团经0至4个Ra取代；
Ra独立地为氢、-(CH2)rC(O)NR11R11、C1-4烷基或包含碳原子及1至3个选自N及O的杂原子的5至7员杂环(尤其为***基)；
Rb为氢或甲基；
Rc在每次出现时均独立地为C1-4烷基、OH或卤基；或C5-10环烷基(尤其为环戊基或环己基)、苯基或含有1至3个选自N及O的杂原子的5至7员杂环(尤其为***基、吡喃基或吗啉基)；
R11在每次出现时均独立地为氢或C1-4烷基；且
r为0-4。
在另一实施方案中，提供一种式(I)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R1为C1-6烷基或环己基，每一者经0至4个R1a取代。
在另一实施方案中，提供一种式(I)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R1选自：甲基、乙基、-CH2CHFCH2OH、-CH2CHFCH(CH3)OH、-CH2CHFCH(环丙基)OH、-CH2CHFCH(异丙基)OH、-CH2CN、-CH2CH2NHC(O)CH3、-CH2CH2C(CH3)2OH、-CH2CHFC(OH)(CF3)CH3、-CH2CHFC(环丙基)(OH)(CF3)、-CH2CF2C(CH3)2(OH)、-CH2CHFC(CH3)2(OH)、-CH2CH2CH(CH3)NHC(O)OC(CH3)3、-CH2CH2CH(CH3)NHC(O)CH3、-CH2CH2CH(CH3)NHC(O)CH2CH2CH2C(CH3)2OH、-CH2CH2CH(CH3)NHC(O)NHCH(CH3)2、-CH2CH2CH(CH3)NHC(O)OC(CH3)2OH、-CH2CH2CH(CH3)NHC(O)CH2CH2C(CH3)2OH、-CH2CH2CH2NHC(O)CH3、-(CH2)3NHC(O)(CH2)4C(CH3)2OH、-CH2CH2CH(CH3)NHC(O)CH2N(CH3)2、
在一更优选实施方案中，提供式(I)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中
R3为C1-6烷基、C3-10环烷基、苯基或含有1至3个选自N、O及S的原子的5至7员杂环(四氢吡喃基、四氢呋喃基或氧杂环丁烷基)，每一基团视情况经0至3个R3a取代；
R3a独立地为氢、F、Cl、CF3、CHF2、-(CH2)rORb、-(CH2)rC(O)ORb、-(CH2)rNR11R11或-(CH2)rC(O)NR11R11；或
R3a为C1-6烷基、-(CH2)r-苯基、C3-10环烷基或包含碳原子及1至4个选自N、O及S(O)p的杂原子的-(CH2)r-5至7员杂环，每一基团经0至3个Ra取代；
Ra为氢、OH、Cl、F或-(CH2)rORb；
Rb为氢、CHF2或C1-4烷基；
R11独立地为氢、C3-10环烷基、CF3或视情况经OH取代的C1-4烷基；且
r为0-4。
在一更优选实施方案中，提供式(I)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R3为甲基、乙基、异丙基、异丁基、环丙基、环戊基或吡喃基，每一基团视情况经1至2个独立地选自F及CF3的基团取代。
在另一实施方案中，提供一种式(I)化合物，其中R3选自以下基团：-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH2CH2CH3、-C(CH3)3、-CH2C(CH3)3、-CH2CH(CH3)2、-CH2CF3、-CH(CH3)CF3、-CH2CH2CH(CH3)2、-CH2CF2C(CH3)2OH、-CH2C(CH3)2F、-CH2CH2OH、-CH(CH3)CH2OH、-CH2(环丙基)、-CH2(环丙基)、-CH(环丙基)2、-CH2CH2(环丙基)、环丙基、环丁基、
在另一实施方案中，提供一种式(II)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
R1为：
(a)经0至4个R1a取代的C2-3羟烷基，其中R1a独立地选自F、Cl、-OH、-CHF2、-CN、-CF3、-OCH3及环丙基；
(b)经0至7个R1a取代的C4-8烷基，其中R1a独立地选自F、Cl、-OH、-CHF2、-CF3、-CN-OCH3及环丙基；
(c)-(CH2)2-4NHC(O)(C1-6烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(C1-6烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)O(C1-6烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1NH(C1-6烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1N(C1-4烷基)2、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1(C3-6环烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1(C3-6氟环烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(C1-6羟烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)N(C1-3烷基)(苯基)或-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1R，其中R为苯基、吗啉基、吡咯烷基、***基或四氢吡喃基；
(d)经0至2个选自以下的取代基取代的环己基：-OH、-OCH3、＝O、-NH2、C1-6烷基、C1-6羟烷基、-NHS(O)2CH3、-NO2、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-3烷基)、-C(O)NH(C1-6羟烷基)、-C(O)NH(C3-6环烷基)、-C(O)NH(C3-6氰基环烷基)、-NHC(O)(C1-3烷基)、-NHC(O)(吡啶基)、-NHC(O)(吗啉基)、-NHC(O)(羟基双环[2.2.1]庚基)、-NHC(O)NH(C1-4烷基)及甲基吡唑基；
(e)-(CH2)2(苯基)，其中该苯基经-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-3烷基)或-S(O)2NH2取代；或
R2为苯并噁唑基、吡唑并吡啶基、吡咯并吡啶基、苯并噻唑基、噻唑并吡啶基、吡唑并嘧啶基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、喹啉基、噌啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、1,5-二氮杂萘基、吡啶并吡嗪基或吡啶并嘧啶基，每一者经0至2个独立地选自F、Cl、-CH3、-CN、-NH2、-OCH3、＝O及-C(O)NH2的取代基取代；
R3为：
(a)C2-6烷基或C2-6氟烷基；
(b)经1至2个环丙基取代的C1-3烷基；
(c)经苯基、四氢呋喃基或吗啉基取代的C1-3烷基；
(d)经0至3个选自F、苯基、氟苯基、二氟苯基及二氯苯基的取代基取代的C2-6羟烷基；
(e)经0至2个选自F、-OH、C1-3羟烷基、-CH3、-CF2H、-NH2及-C(O)OCH2CH3的取代基取代的-(CH2)0-2(C3-7环烷基)；
(f)经0至1个选自F及-CH3的取代基取代的四氢吡喃基或四氢噻喃基；
(g)-(CH2)0-2苯基，其中该苯基经0至2个选自以下的取代基取代：F、Cl、C1-3烷基、C1-3羟烷基、-OH、-O(C1-3烷基)、-OCF3、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-3烷基)、-C(O)NH(C1-3氟烷基)、-C(O)NH(C1-3羟烷基)、-C(O)NH(C3-5环烷基)、-C(O)N(C1-3烷基)2、-S(O)2CH3及吡唑基；
(h)经0至2个选自C1-3羟烷基的取代基取代的噻唑基；或
在另一实施方案中，提供一种式(II)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
R1为：
(a)经0至3个R1a取代的羟丙基，其中R1a独立地选自F、-CF3及环丙基；
(b)经0至5个R1a取代的C4-8烷基，其中R1a独立地选自F、Cl、-OH、-CHF2、-CF3、-CN-OCH3及环丙基；
(c)-(CH2)2-4NHC(O)(C1-3烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(C1-3烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)O(C1-3烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1NH(C1-3烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1N(C1-3烷基)2、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1(C3-6环烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1(C3-6氟环烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(C1-6羟烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)N(CH3)(苯基)或-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1R，其中R为苯基、吗啉基、吡咯烷基、***基或四氢吡喃基；
(d)经0或2个选自以下的取代基取代的环己基：-OH、-OCH3、＝O、-NH2、C1-3烷基、C1-3羟烷基、-NHS(O)2CH3、-NO2、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-2烷基)、-C(O)NH(C1-4羟烷基)、-C(O)NH(C3-6环烷基)、-C(O)NH(C3-4氰基环烷基)、-NHC(O)(C1-3烷基)、-NHC(O)(吡啶基)、-NHC(O)(吗啉基)、-NHC(O)(羟基双环[2.2.1]庚基)、-NHC(O)NH(C1-4烷基)及甲基吡唑基；
(e)-(CH2)2(苯基)，其中该苯基经-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-3烷基)或-S(O)2NH2取代；或-CH2(苯基)；或
在另一实施方案中，提供一种式(II)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
R1为：-CH2CH2CH(CH3)2、-(CH2)2C(CH3)2OH、-CH2CHFCH2OH、-CH2CHFCH(CH(CH3)2)OH、-CH2CHFCH(环丙基)OH、-CH2CHFCH(CH3)OH、-CH2CHFCH(环丙基)(CF3)OH、-CH2CHFC(CH3)2OH、-CH2CHFC(CH3)(CH2CH3)OH、-CH2CHFC(CH2CH3)2OH、-CH2CHFC(CH3)(CF3)OH、-CH2CF2C(CH3)2OH、-(CH2)2NHC(O)CH3、-(CH2)3NHC(O)CH3、-(CH2)4NHC(O)CH3、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH3、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)OCH(CH3)2、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)OC(CH3)3、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH2N(CH3)2、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)NHCH(CH3)2、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(环丙基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(3-氟环戊基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(3,3-二氟环戊基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(吗啉基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(苯基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(吡咯烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH2(四氢吡喃基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH2(2,2-二氟环己基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH2(***基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)3C(CH3)2OH、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)4C(CH3)2OH、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)N(CH3)(苯基)、
R2为：
且
R3为：C2-5烷基、-CH2CHF2、-CH2CF3、-CH2CHFCH3、-CH2CF2CH3、-CH(CH3)CF3、CH2CF(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH2F、-CH(CH3)(环丙基)、-CH(环丙基)2、-CH2(环丙基)、-CH2(四氢呋喃基)、-CH2CH2OH、-CH(CH3)CH2OH、-(CH2)2(环丙基)、C3-7环烷基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、-CH(CH3)CH2OH、-CH(苯基)CH2OH、-CH2CF2C(CH3)2OH、-CH(苯基)CH(OH)CH2OH、-CH(3-氟苯基)CH(OH)CH2OH、-CH(3,5-二氟苯基)CH(OH)CH2OH、-CH(2,5-二氟苯基)CH(OH)CH2OH、-CH(3,5-二氯苯基)CH(OH)CH2OH、-(CH2)2(吗啉基)、-(CH2)2(苯基)、
在另一实施方案中，提供一种式(II)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R1为-CH2CH2CH(CH3)2、-(CH2)2C(CH3)2OH、-CH2CHFCH2OH、-CH2CHFCH(CH(CH3)2)OH、-CH2CHFCH(环丙基)OH、-CH2CHFCH(CH3)OH、-CH2CHFC(CH3)2OH、-CH2CHFCH(环丙基)(CF3)OH、-CH2CHFC(CH3)(CH2CH3)OH、-CH2CHFC(CH2CH3)2OH、-CH2CHFC(CH3)(CF3)OH、-CH2CF2C(CH3)2OH、-(CH2)2NHC(O)CH3、-(CH2)3NHC(O)CH3、-(CH2)4NHC(O)CH3、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH3、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)OCH(CH3)2、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)OC(CH3)3、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH2N(CH3)2、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)NHCH(CH3)2、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(环丙基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(3-氟环戊基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(3,3-二氟环戊基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(吗啉基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(苯基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(吡咯烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH2(四氢吡喃基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH2(2,2-二氟环己基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH2(***基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)3C(CH3)2OH、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)4C(CH3)2OH或-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)N(CH3)(苯基)。此实施方案中包括式(II)化合物，其中R3为：
(a)C2-6烷基或C2-6氟烷基；
(b)经1至2个环丙基取代的C1-3烷基；
(c)经苯基、四氢呋喃基或吗啉基取代的C1-3烷基；
(d)经0至3个选自F、苯基、氟苯基、二氟苯基及二氯苯基的取代基取代的C2-6羟烷基；或
(e)经0至2个选自F、-OH、C1-3羟烷基、-CH3、-CF2H、-NH2及-C(O)OCH2CH3的取代基取代的-(CH2)0-2(C3-6环烷基)。
在另一实施方案中，提供一种式(II)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R1为：
此实施方案中包括式(II)化合物，其中R3为：
(a)C2-6烷基或C2-6氟烷基；
(b)经1至2个环丙基取代的C1-3烷基；
(c)经苯基、四氢呋喃基或吗啉基取代的C1-3烷基；
(d)经0至3个选自F、苯基、氟苯基、二氟苯基及二氯苯基的取代基取代的C2-6羟烷基；或
(e)经0至2个选自F、-OH、C1-3羟烷基、-CH3、-CF2H、-NH2及-C(O)OCH2CH3的取代基取代的-(CH2)0-2(C3-6环烷基)。
在另一实施方案中，提供一种式(II)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R2为：
此实施方案中包括式(II)化合物，其中R3为：
(a)C2-6烷基或C2-6氟烷基；
(b)经1至2个环丙基取代的C1-3烷基；
(c)经苯基、四氢呋喃基或吗啉基取代的C1-3烷基；
(d)经0至3个选自F、苯基、氟苯基、二氟苯基及二氯苯基的取代基取代的C2-6羟烷基；或
(e)经0至2个选自F、-OH、C1-3羟烷基、-CH3、-CF2H、-NH2及-C(O)OCH2CH3的取代基取代的-(CH2)0-2(C3-6环烷基)。
在另一实施方案中，提供一种式(II)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R2为：
在另一实施方案中，提供一种式(II)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R3为：
(a)C2-6烷基或C2-6氟烷基；
(b)经1至2个环丙基取代的C1-3烷基；
(c)经苯基、四氢呋喃基或吗啉基取代的C1-3烷基；
(d)经0至3个选自F、苯基、氟苯基、二氟苯基及二氯苯基的取代基取代的C2-6羟烷基；或
(e)经0至2个选自F、-OH、C1-3羟烷基、-CH3、-CF2H、-NH2及-C(O)OCH2CH3的取代基取代的-(CH2)0-2(C3-6环烷基)。
在一个实施方案中，提供一种式(II)化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中该化合物选自实例5-20、22-59、61-142、149-259、261-374及379-527。
在另一实施方案中，提供一种药物组合物，其包含一或多种式(I)化合物及药学上可接受的载剂或稀释剂。
本发明亦关于适用于治疗与激酶调节(包括IRAK-4的调节(尤其抑制))相关的疾病的药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载剂或稀释剂。
本发明另外关于治疗与激酶调节(包括IRAK-4的调节)相关的疾病的方法，其包含向需要此治疗的患者给药治疗有效量的式(I)化合物。
本发明亦提供用于制造本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药的方法及中间体。
本发明亦提供一种治疗增生性、代谢性、过敏性、自身免疫及炎性疾病的方法(或本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药用于制造用以治疗这些疾病的药物的用途)，其包含向需要此治疗的宿主给药治疗有效量的至少一种本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药。
本发明亦提供一种治疗疾病的方法(或本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药用于制造用以治疗这些疾病的药物的用途)，其包含向需要此治疗的患者给药治疗有效量的式(I)化合物，其中该疾病为克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、哮喘、移植物抗宿主病、同种异体移植排斥反应、慢性阻塞性肺病；格雷夫斯病、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、牛皮癣；CAPS、TRAPS、FMF、成人斯蒂尔病、全身性幼年型特发性关节炎、多发性硬化、神经病性疼痛、痛风及痛风性关节炎。
本发明亦提供一种治疗炎性或自身免疫疾病的方法(或本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药用于制造用以治疗这些疾病的药物的用途)，其包含向需要此治疗的患者给药治疗有效量的式(I)化合物。
本发明亦提供一种治疗炎性或自身免疫疾病的方法(或本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药用于制造用以治疗这些疾病的药物的用途)，其中该疾病选自克罗恩氏病(Crohn's)、溃疡性结肠炎、哮喘、移植物抗宿主病、同种异体移植排斥反应、慢性阻塞性肺病；格雷夫斯病、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、牛皮癣；CAPS、TRAPS、FMF、成人斯蒂尔病、全身性幼年型特发性关节炎、多发性硬化、神经病性疼痛、痛风及痛风性关节炎。
另外，本发明亦提供一种治疗病状的方法(或本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药用于制造用以治疗这些病状的药物的用途)，其包含向需要此治疗的患者给药治疗有效量的式(I)化合物，其中该病状选自急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、转移性黑素瘤、卡堡氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、多发性骨髓瘤、实体肿瘤、眼部新血管生成及婴儿血管瘤、B细胞淋巴瘤、全身性红斑狼疮(systemiclupus erythematosus，SLE)、类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、多发性血管炎、特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP)、重症肌无力、过敏性鼻炎、多发性硬化(multiple sclerosis，MS)、移植排斥反应、I型糖尿病、膜性肾炎、炎性肠病、自身免疫溶血性贫血、自身免疫甲状腺炎、冷及温凝集素疾病、伊凡斯综合征(Evan'ssyndrome)、溶血性尿毒综合征/栓塞性血小板减少性紫癜(hemolytic uremic syndrome/thrombotic thrombocytopenic purpura，HUS/TTP)、类肉瘤病、修格连氏综合征(syndrome)、周边神经病、寻常天疱疮及哮喘。
本发明亦提供一种治疗类风湿性关节炎的方法(或本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药用于制造用以治疗类风湿性关节炎的药物的用途)，其包含向需要此治疗的患者给药治疗有效量的式(I)化合物。
本发明亦提供一种治疗TLR/IL-1介导的疾病的方法(或本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药用于制造用以治疗这些疾病的药物的用途)，其包含向需要此治疗的患者给药治疗有效量的式(I)化合物。
本发明亦提供一种治疗TLR/IL-1介导的疾病的方法(或本发明化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药用于制造用以治疗这些疾病的药物的用途)，其包含向需要此治疗的患者给药治疗有效量的式(I)化合物，其中该TLR/IL-1介导的疾病为由选自IRAK-4的激酶调节的疾病。
本发明亦提供一种治疗疾病的方法，其包含向需要此治疗的患者给药治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐与其他治疗剂的组合。
本发明亦提供本发明的化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、溶剂合物或前药，其为用于疗法中。
在另一实施方案中，式(I)化合物选自例示化合物或例示化合物的组合或本文的其他实施方案。
在另一实施方案中，为在下文所述的IRAK-4分析中具有IC50<1000nM的化合物。
本发明可以其他特定形式体现而不悖离其精神或基本属性。本发明涵盖本文所述的本发明的优选方面和/或实施方案的所有组合。应了解，本发明的任何及所有实施方案均可结合任何其他实施方案来描述额外的更优选实施方案。亦应了解，优选实施方案的每一个别要素为其自身独立的优选实施方案。此外，一实施方案的任何要素将意欲与来自任何实施方案的任何及所有其他要素组合来描述另一实施方案。
具体实施方式
以下为本说明书及随附申请专利范围中使用的术语的定义。除非另外指示，否则为本文中的基团或术语提供的初始定义适用于本说明书及申请专利范围通篇中的个别或作为另一基团的一部分的彼基团或术语。
本发明的化合物可具有一或多个不对称中心。除非另外指示，否则本发明化合物的所有手性(对映异构及非对映异构)及外消旋形式均包括于本发明中。烯烃、C＝N双键及其类似者的许多几何异构体亦可存在于化合物中，且所有这些稳定异构体均涵盖于本发明中。描述本发明化合物的顺式及反式几何异构体且其可呈异构体混合物形式或分开的异构形式分离。本发明化合物可以光学活性或外消旋形式分离。本领域中熟知如何制备光学活性形式，诸如藉由解析外消旋形式或藉由自光学活性起始物质合成。除非具体指示特定立体化学或异构体形式，否则一种结构的所有手性(对映异构及非对映异构)及外消旋形式以及所有几何异构体形式均为所要的。
当任何变量(例如R3)在化合物的任何组分或式中出现一次以上时，其在每次出现时的定义与其在所有其他处出现时的定义无关。因此，举例而言，若展示一基团经0至2个R3取代，则该基团可视情况经至多两个R3基团取代且R3在每次出现时均独立地选自R3的定义。同样，取代基和/或变量的组合仅在产生稳定化合物时，方可许可这些组合。
当展示一环中结合取代基的键横跨连接两个原子的键时，则该取代基可键结至该环上的任何原子。当列举取代基而未指明该取代基与给定式化合物的其余部分键结所经的原子时，则该取代基可经由该取代基中的任何原子键结。取代基和/或变量的组合仅在产生稳定化合物时，方可许可这些组合。
在本发明的化合物上存在氮原子(例如胺)的情况下，这些化合物可藉由经氧化剂(例如MCPBA和/或过氧化氢)处理转化为N-氧化物，从而提供本发明的其他化合物。>因此，所有所示及主张的氮原子均被视为涵盖所示氮及其N-氧化物(N→O)衍生物。
根据本领域中使用的惯例，在本文的结构式中用以描述作为部分或取代基与核心或主链结构的连接点的键。
并非位于两字母或符号间的短划线“-”用以指示取代基的连接点。举例而言，-CONH2经由碳原子连接。
关于式(I)化合物的特定部分的术语“视情况经取代”(例如视情况经取代的杂芳基)是指具有0、1、2或2个以上取代基的部分。举例而言，“视情况经取代的烷基”涵盖如下文定义的“烷基”及“经取代烷基”。本领域技术人员将了解，关于含有一或多个取代基的任何基团，这些基团不欲引入空间上不实际、合成上不可行和/或本身不稳定的任何取代或取代型。
如本文所用，术语“至少一种化学实体”与术语“化合物”可互换。
如本文所用，术语“烷基”或“亚烷基”欲包括具有特定数目碳原子的支链及直链饱和脂族烃基。举例而言，“C1-10烷基”(或亚烷基)欲包括C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9及C10烷基。另外，例如“C1-C6烷基”表示具有1至6个碳原子的烷基。烷基可未经取代或经取代以使得其一或多个氢由另一化学基团置换。烷基的实例包括(但不限于)甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如正丙基及异丙基)、丁基(例如正丁基、异丁基、叔丁基)、戊基(例如正戊基、异戊基、新戊基)及其类似基团。
“烯基”或“亚烯基”欲包括具有直链或支链构型且在沿链的任何稳定点可存在一或多个碳碳双键的烃链。举例而言，“C2-6烯基”(或亚烯基)欲包括C2、C3、C4、C5及C6烯基。烯基的实例包括(但不限于)乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、2-己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基、2-甲基-2-丙烯基、4-甲基-3-戊烯基及其类似基团。
“炔基”或“亚炔基”欲包括具有直链或支链构型且在沿链的任何稳定点可存在一或多个碳碳参键的烃链。举例而言，“C2-6炔基”(或亚炔基)欲包括C2、C3、C4、C5及C6炔基；诸如乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基、己炔基及其类似基团。
本领域技术人员将了解，当本文中使用标记“CO2”时，此欲指基团
当术语“烷基”连同另一基团一起使用时，诸如在“芳基烷基”中，此结合更特定地定义经取代烷基将含有的至少一个取代基。举例而言，“芳基烷基”是指如上文定义的经取代烷基，其中至少一个取代基为芳基，诸如苄基。因此，术语芳基(C0-4烷基)包括具有至少一个芳基取代基的经取代低碳数烷基且亦包括直接与另一基团键结的芳基，亦即芳基(C0烷基)。术语“杂芳基烷基”是指如上文定义的经取代烷基，其中至少一个取代基为杂芳基。
当提及经取代烯基、炔基、亚烷基、亚烯基或亚炔基时，这些基团经一至三个如上文关于经取代烷基所定义的取代基取代。
如本文所定义，术语“烷氧基”是指经烷基或经取代烷基取代的氧原子。举例而言，术语“烷氧基”包括基团-O-C1-6烷基，诸如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、2-戊氧基、异戊氧基、新戊氧基、己氧基、2-己氧基、3-己氧基、3-甲基戊氧基及其类似基团。“低碳数烷氧基”是指具有一至四个碳的烷氧基。
应了解，将由本领域技术人员来选择所有基团，包括例如烷氧基、硫烷基及氨基烷基，以提供稳定化合物。
如本文所用，术语“经取代”意谓指定原子或基团上的任一或多个氢由选自指定基团者置换，其限制条件为不超过指定原子的正常价数。当取代基为氧代或酮基(亦即，＝O)时，则置换原子上的2个氢。酮基取代基不存在于芳族部分上。除非另外规定，否则取代基命名于核心结构中。举例而言，应了解当(环烷基)烷基列举为可能的取代基时，此取代基与核心结构的连接点位于烷基位置。如本文所用，环双键为在两个相邻环原子间形成的双键(例如C＝C、C＝N或N＝N)。
取代基和/或变量的组合仅在产生稳定化合物或适用合成中间体时，方可许可这些组合。稳定化合物或稳定结构欲表示足够稳固以承受自反应混合物分离至适用纯度，且随后经调配成有效治疗剂的化合物。本发明所叙述的化合物优选不含N-卤基、S(O)2H或S(O)H基团。
术语“环烷基”是指环化烷基，包括单环、双环或多环的环***。C3-7环烷基欲包括C3、C4、C5、C6及C7环烷基。环烷基的实例包括(但不限于)环丙基、环丁基、环戊基、环己基、降冰片烷基及其类似基团。如本文所用，“碳环”或“碳环残基”欲意谓任何稳定的3、4、5、6或7员单环或双环的环或7、8、9、10、11、12或13员双环或三环的环，其任一者均可为饱和、部分不饱和、不饱和或芳族。这些碳环的实例包括(但不限于)环丙基、环丁基、环丁烯基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基、环庚烯基、金刚烷基、环辛基、环辛烯基、环辛二烯基、[3.3.0]双环辛烷、[4.3.0]双环壬烷、[4.4.0]双环癸烷、[2.2.2]双环辛烷、芴基、苯基、萘基、茚满基、金刚烷基、蒽基及四氢萘基(萘满)。如上文所示，碳环定义中亦包括桥连环(例如[2.2.2]双环辛烷)。除非另外规定，否则优选碳环为环丙基、环丁基、环戊基、环己基及苯基。当使用术语“碳环”时，其欲包括“芳基”。当一或多个碳原子连接两个非相邻碳原子时，出现桥连环。优选桥为一或两个碳原子。应注意，桥总是使单环转化为双环。当环经桥连时，对于该环所叙述的取代基亦可存在于桥上。
术语“芳基”是指环部分中具有6至12个碳原子的单环或双环芳族烃基，诸如苯基及萘基，每一者可经取代。
因此，在式(I)化合物中，术语“环烷基”包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、双环辛基等以及以下环***：
及其类似基团，其视情况可在环的任何可用原子处经取代。优选环烷基包括环丙基、环戊基、环己基及
术语“卤基”或“卤素”是指氯、溴、氟及碘。
术语“卤烷基”意谓具有一或多个卤基取代基的经取代烷基。举例而言，“卤烷基”包括单、双及三氟甲基。
术语“卤烷氧基”意谓具有一或多个卤基取代基的烷氧基。举例而言，“卤烷氧基”包括OCF3。
因此，芳基的实例包括：
(芴基)及其类似基团，其视情况可在任何可用碳或氮原子处经取代。一优选芳基为视情况经取代的苯基。
术语“杂环烷基”、“杂环(heterocyclo)”、“杂环(heterocyclic)”或“杂环基”可互换使用且是指经取代及未经取代的3至7员单环基团、7至11员双环基团及10至15员三环基团，其中至少一个环具有至少一个杂原子(O、S或N)，该含杂原子的环优选具有1、2或3个选自O、S及N的杂原子。此类含杂原子的基团的每一环可含有一或两个氧或硫原子和/或一至四个氮原子，其限制条件为每一环中的杂原子总数为四个或四个以下，且进一步限制条件为环含有至少一个碳原子。氮及硫原子可视情况经氧化且氮原子可视情况经四级铵化。达成双环及三环基团的稠环可仅含碳原子且可为饱和、部分饱和或不饱和的。杂环基团可在任何可用的氮或碳原子连接。术语“杂环”包括“杂芳基”。如价数允许，若该另一环为环烷基或杂环，则其另外视情况经＝O(氧代)取代。
例示性单环杂环基包括氮杂环丁烷基、吡咯烷基、氧杂环丁烷基、咪唑啉基、噁唑烷基、异噁唑啉基、噻唑烷基、异噻唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮杂基、氮杂基、1-吡啶酮基、4-哌啶酮基、四氢吡喃基、吗啉基、噻吗啉基、噻吗啉基亚砜、噻吗啉基砜、1,3-二氧杂环戊烷及四氢-1,1-二氧代噻吩基及其类似基团。例示性双环杂环基团包括喹啉环基(quinuclidinyl)。其他单环杂环基包括
术语“杂芳基”是指经取代及未经取代的芳族5或6员单环基团、9或10员双环基团及11至14员三环基团，其至少一个环中具有至少一个杂原子(O、S或N)，该含杂原子的环优选具有1、2或3个选自O、S及N的杂原子。含杂原子的杂芳基的每一环可含有一或两个氧或硫原子和/或一至四个氮原子，其限制条件为每一环中的杂原子总数为四个或四个以下且每一环具有至少一个碳原子。达成双环及三环基团的稠环可仅含碳原子且可为饱和、部分饱和或不饱和的。氮及硫原子可视情况经氧化且氮原子可视情况经四级铵化。双环或三环的杂芳基必须包括至少一个完全芳族环，但其他稠环可为芳族或非芳族的。杂芳基可在任何环的任何可用氮或碳原子连接。如价数允许，若该另一环为环烷基或杂环，则其另外视情况经＝O(氧代)取代。
例示性单环杂芳基包括吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基及其类似基团。
例示性双环杂芳基包括吲哚基、苯并噻唑基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲哚嗪基、苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基、二氢异吲哚基、四氢喹啉基及其类似基团。
例示性三环杂芳基包括咔唑基、苯并吲哚基、菲咯啉基、吖啶基、菲啶基、呫吨基及其类似基团。
在式(I)化合物中，优选杂芳基包括
及其类似基团，其视情况可在任何可用碳或氮原子处经取代。
除非另外指示，否则当提及特定命名的芳基(例如苯基)、环烷基(例如环己基)、杂环(例如吡咯烷基、哌啶基及吗啉基)或杂芳基(例如四唑基、咪唑基、吡唑基、***基、噻唑基及呋喃基)时，该提及欲在适当时包括具有0至3个、优选0至2个选自上文关于芳基、环烷基、杂环基和/或杂芳基叙述的那些取代基的取代基的环。
术语“碳环基”或“碳环”是指饱和或不饱和单环或双环，其中所有环的所有原子均为碳。因此，该术语包括环烷基环及芳基环。单环碳环具有3至6个环原子、又更通常5或6个环原子。双环碳环具有7至12个例如排列为双环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]***的环原子或9或10个排列为双环[5,6]或[6,6]***的环原子。单环及双环碳环的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、苯基及萘基。碳环可经取代，在此情形下这些取代基选自上文关于环烷基及芳基所叙述的那些取代基。
术语“杂原子”将包括氧、硫及氮。
当本文中使用术语“不饱和”提及环或基团时，该环或基团可完全不饱和或部分不饱和。
在整个说明书中，本领域技术人员可选择基团及其取代基以提供稳定部分及化合物及适用作医药学上可接受的化合物的化合物和/或适用于制备医药学上可接受的化合物的中间化合物。
式(I)化合物可以游离形式存在(无离子化)或可形成亦在本发明范畴内的盐。除非另外指示，否则提及本发明化合物应理解为包括提及其游离形式及盐。术语“盐”表示与无机和/或有机酸及碱形成的酸式和/或碱式盐。另外，术语“盐”可包括两性离子(内盐)，例如当式(I)化合物含有碱性部分(诸如胺或吡啶或咪唑环)与酸性部分(诸如羧酸)时。药学上可接受的(亦即，无毒性、生理学上可接受的)盐为优选，诸如其中阳离子对盐的毒性或生物活性无显著贡献的可接受金属及胺盐。然而，其他盐例如在制备期间可采用的分离或纯化步骤中为适用的且因此涵盖于本发明的范畴内。式(I)化合物的盐例如可藉由使式(I)化合物与一定量的酸或碱(诸如等量)在诸如盐于其中沉淀的介质中或在水性介质中反应，继而冻干来形成。
例示性酸加成盐包括乙酸盐(诸如与乙酸或三卤乙酸(例如三氟乙酸)形成的盐)、己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、反丁烯二酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、已酸盐、盐酸盐(与盐酸形成)、氢溴酸盐(与氢溴酸形成)、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、顺丁烯二酸盐(与顺丁烯二酸形成)、甲磺酸盐(与甲磺酸形成)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(诸如与硫酸形成的那些盐)、磺酸盐(诸如本文提及的那些磺酸盐)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(toluenesulfonate)(诸如甲苯磺酸盐(tosylate))、十一烷酸盐及其类似盐。
例示性碱式盐包括铵盐、碱金属盐(诸如钠、锂及钾盐)；碱土金属盐(诸如钙及镁盐)；钡、锌及铝盐；与有机碱(例如有机胺)形成的盐，这些有机碱诸如三烷基胺(诸如三乙胺)、普鲁卡因(procaine)、二苄基胺、N-苄基-β-苯乙胺、1-安非胺、N,N'-二苄基乙二胺、脱氢松香胺(dehydroabietylamine)、N-乙基哌啶、苄基胺、二环己基胺或类似药学上可接受的胺，以及与氨基酸(诸如精氨酸、赖氨酸及其类似物)形成的盐。碱性含氮基团可经以下试剂四级铵化，诸如低碳数烷基卤化物(例如甲基、乙基、丙基及丁基的氯化物、溴化物及碘化物)、硫酸二烷酯(例如硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯及硫酸二戊酯)、长链卤化物(例如癸基、十二烷基、十四烷基及十八烷基的氯化物、溴化物及碘化物)、芳烷基卤化物(例如苄基溴化物及苯乙基溴化物)及其他物质。优选盐包括单盐酸盐、硫酸氢盐、甲磺酸盐、磷酸盐或硝酸盐。
短语“医药学上可接受”在本文中用以指在合理医学判断的范畴内，适用于接触人类及动物组织而无过度毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症，与合理益处/风险比率相当的那些化合物、物质、组合物和/或剂型。
如本文所用，“药学上可接受的盐”是指所揭示化合物的衍生物，其中母体化合物藉由制成其酸式盐或碱式盐而改质。药学上可接受的盐的实例包括(但不限于)碱性基团(诸如胺)的无机或有机酸盐及酸性基团(诸如羧酸)的碱盐或有机盐。药学上可接受的盐包括例如由无毒性无机或有机酸形成的母体化合物的习知无毒盐或四级铵盐。举例而言，这些习知无毒盐包括衍生自无机酸的那些盐，这些无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、胺磺酸、磷酸及硝酸；及自有机酸制备的盐，这些有机酸诸如乙酸、丙酸、丁二酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、双羟萘酸、顺丁烯二酸、羟基顺丁烯二酸、苯基乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、反丁烯二酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸及羟乙磺酸及其类似物。
本发明的药学上可接受的盐可藉由习知化学方法由含有碱性或酸性部分的母体化合物合成。一般而言，这些盐可藉由使这些化合物的游离酸或游离碱形式与化学计量的量的适当碱或酸于水或有机溶剂中或于两者的混合物中反应来制备；一般而言，如***、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈的非水性介质为优选。适合盐的清单见于Remington'sPharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing Company,Easton,PA(1990)，其揭示内容以引用的方式并入本文中。
涵盖呈混合物或呈纯的或实质上纯形式的本发明化合物的所有立体异构体。立体异构体可包括经由具备一或多个手性原子而为光学异构体的化合物，以及由于绕一或多个键有限旋转而为光学异构体的化合物(滞转异构体)。本发明化合物的定义涵盖所有可能的立体异构体及其混合物。其极尤其涵盖外消旋形式及具有指定活性的分离的光学异构体。外消旋形式可藉由物理方法解析，诸如分步结晶法、非对映异构体衍生物的分离或结晶法或手性管柱层析分离法。个别光学异构体可由习知方法自外消旋体获得，诸如与光学活性酸形成盐，继而结晶。
本发明意欲包括存在于本发明化合物中的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子数、但不同质量数的那些原子。举一般实例且不加以限制，氢同位素包括氘及氚。碳同位素包括13C及14C。经同位素标记的本发明化合物一般可藉由本领域技术人员已知的习知技术或藉由类似于本文所述的那些方法使用适当经同位素标记的试剂替代另外使用的未经标记试剂来制备。举例而言，甲基(-CH3)亦包括氘化甲基，诸如-CD3。
亦涵盖本发明化合物的前药及溶剂合物。术语“前药”表示给药个体时藉由代谢或化学方法经受化学转化而产生式(I)化合物和/或其盐和/或溶剂合物的化合物。经活体内转化提供生物活性剂(亦即式(I)化合物)的任何化合物均为本发明范畴及精神内的前药。举例而言，含有羧基的化合物可形成生理学可水解酯，其藉由在体内水解产生式(I)化合物本身而充当前药。这些前药优选口服，因为多数情况下的水解主要在消化酶的影响下发生。当酯本身具活性时，或在血液中发生水解的那些情况下，可使用非经肠给药。式(I)化合物的生理学上可水解酯的实例包括C1-6烷基苄基、4-甲氧基苄基、茚满基、酞酰基、甲氧基甲基、C1-6烷酰氧基-C1-6烷基(例如乙酰氧甲基、特戊酰氧甲基或丙酰氧甲基)、C1-6烷氧基羰氧基-C1-6烷基(例如甲氧基羰氧基甲基或乙氧基羰氧基甲基)、甘氨酰氧基甲基、苯基甘氨酰氧基甲基、(5-甲基-2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯-4-基)-甲基及其他熟知的例如用于青霉素及头孢菌素技术中的生理学上可水解酯。这些酯可藉由本领域中已知的习知技术来制备。
本领域中熟知各种形式的前药。关于这些前药衍生物的实例，参见：
a)Bundgaard,H.编,Design of Prodrugs,Elsevier(1985)及Widder,K.等人编,Methods in Enzymology,112:309-396,Academic Press(1985)；
b)Bundgaard,H.,第5章,“Design and Application of Prodrugs”,Krosgaard-Larsen,P.等人编,A Textbook of Drug Design and Development,第113-191页,HarwoodAcademic Publishers(1991)；及
c)Bundgaard,H.,Adv.Drug Deliv.Rev.,8:1-38(1992)，
每一者均以引用的方式并入本文中。
式(I)化合物及其盐可以其互变异构形式存在，其中氢原子换位至分子的其他部分且分子原子间的化学键因此重排。应了解，所有互变异构形式只要其可存在即包括于本发明中。另外，本发明化合物可具有反式及顺式异构体。
另外应了解，式(I)化合物的溶剂合物(例如水合物)亦在本发明的范畴内。本领域中一般已知溶合方法。
效用
本发明的化合物调节激酶活性，包括调节IRAK-4。可由本发明化合物调节的其他类型激酶活性包括(但不限于)Pelle/IRAK家族及其突变体。
因此，式(I)化合物具有治疗与激酶活性调节相关、且尤其与对IRAK-4活性的选择性抑制或对IRAK及其他Pelle家族激酶的抑制相关的病状的效用。这些病状包括TLR/IL-1家族受体相关疾病，其中细胞激素含量由于细胞内信号传导的结果来调节。此外，式(I)化合物对于IRAK-4活性具有有利选择性，优选至少20倍至1,000倍以上的更多选择性。
如本文所用，术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”涵盖治疗哺乳动物、尤其人类的疾病病况，且包括：(a)预防或延缓哺乳动物中该疾病病况的出现，尤其当该哺乳动物易患该疾病病况但尚未诊断为患病时；(b)抑制该疾病病况，亦即阻止其发展；和/或(c)达成症状或疾病病况的完全或部分减轻，和/或缓和、改善、减轻或治愈疾病或病症和/或其症状。
鉴于其作为IRAK-4选择性抑制剂的活性，式(I)化合物适用于治疗TLR/IL-1家族受体相关疾病，但不限于炎性疾病，诸如克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、哮喘、移植物抗宿主病、同种异体移植排斥反应、慢性阻塞性肺病；自身免疫疾病，诸如格雷夫斯病、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、牛皮癣；自身炎性疾病，包括CAPS、TRAPS、FMF、成人斯蒂尔病、全身性幼年型特发性关节炎、痛风、痛风性关节炎；代谢性疾病，包括2型糖尿病、动脉粥样硬化、心肌梗塞；破坏性骨病，诸如骨骼再吸收疾病、骨关节炎、骨质疏松症、多发性骨髓瘤相关骨病；增生性病症，诸如急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病；血管生成病症，诸如包括实体肿瘤、眼部新血管生成及婴儿血管瘤的血管生成病症；感染性疾病，诸如败血症、败血性休克及志贺杆菌病(Shigellosis)；神经退化性疾病，诸如阿兹海默氏病、帕金森氏病(Parkinson's disease)、大脑缺血或由外伤性损伤引起的神经退化性疾病；致癌及病毒性疾病，诸如分别为转移性黑素瘤、卡堡氏肉瘤、多发性骨髓瘤以及HIV感染及CMV视网膜炎、AIDS。
更具体地，可用本发明化合物治疗的特定病状或疾病包括(不限于)胰脏炎(急性或慢性)、哮喘、过敏症、成人呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺病、丝球体肾炎、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、硬皮病、慢性甲状腺炎、格雷夫斯病、自身免疫胃炎、糖尿病、自身免疫溶血性贫血、自身免疫嗜中性球减少症、血小板减少症、异位性皮炎、慢性活动性肝炎、重症肌无力、多发性硬化、炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病、牛皮癣、移植物抗宿主病、内毒素诱发的炎性反应、结核病、动脉粥样硬化、肌肉变性、恶病质、牛皮癣性关节炎、莱特尔氏综合征(Reiter's syndrome)、痛风、外伤性关节炎、风疹性关节炎、急性滑膜炎、胰脏β细胞病；以大量嗜中性球浸润为特征的疾病；类风湿性脊椎炎、痛风性关节炎及其他关节炎病状、脑型疟疾、慢性炎性肺病、硅肺病、肺部类肉瘤病、骨骼再吸收疾病、同种异体移植排斥反应、感染所致发热及肌痛、感染继发性恶病质、瘢痕瘤形成、疤痕组织形成、溃疡性结肠炎、发热、流行性感冒、骨质疏松症、骨关节炎、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、转移性黑素瘤、卡堡氏肉瘤、多发性骨髓瘤、败血症、败血性休克及志贺杆菌病；阿兹海默氏病、帕金森氏病、大脑缺血或由外伤性损伤引起的神经退化性疾病；血管生成病症，包括实体肿瘤、眼部新血管生成及婴儿血管瘤；病毒性疾病，包括急性肝炎感染(包括A型肝炎、B型肝炎及C型肝炎)、HIV感染及CMV视网膜炎、AIDS、ARC或恶性病变及疱疹；中风、心肌缺血、中风心脏病发作中的缺血、器官低氧、血管增生、心及肾再灌注损伤、血栓形成、心脏肥大、凝血酶诱发的血小板凝集、内毒血症和/或毒性休克综合征、与***素内生过氧化酶合成酶-2相关的病状及寻常天疱疮。优选治疗方法为其中病状选自以下的那些治疗方法：克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、同种异体移植排斥反应、类风湿性关节炎、牛皮癣、僵直性脊椎炎、牛皮癣性关节炎及寻常天疱疮。或者，优选治疗方法为其中病状选自以下的那些治疗方法：缺血性再灌注损伤，包括由中风引起的大脑缺血再灌注损伤及由心肌梗塞引起的心脏缺血再灌注损伤。另一优选治疗方法为其中病状为多发性骨髓瘤的治疗方法。
另外，本发明的激酶抑制剂抑制诱导性促炎性蛋白的表现，这些蛋白诸如***素内过氧化物合成酶-2(prostaglandin endoperoxide synthase-2，PGHS-2)(亦称为环加氧酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2))、IL-1、IL-6、IL-18、趋化激素。因此，其他IRAK-4相关病状包括水肿、痛觉缺失、发热及疼痛，诸如神经肌肉痛、头痛、癌症所致疼痛、牙痛及关节炎痛。本发明化合物亦可用于治疗兽医学病毒感染，诸如慢病毒感染，包括(但不限于)马感染性贫血病毒；或反转录病毒感染，包括猫免疫缺陷病毒、牛免疫缺陷病毒及犬免疫缺陷病毒。
当本文中使用术语“IRAK-4相关病状”或“IRAK-4相关疾病或病症”时，每一者欲涵盖上文确认的详尽重复的所有病状以及受IRAK-4激酶活性影响的任何其他病状。
因此，本发明提供治疗这些病状的方法，其包含向有此需要的个体给药治疗有效量的至少一种式(I)化合物或其盐。“治疗有效量”欲包括本发明化合物在单独或组合给药时有效抑制IRAK-4和/或治疗疾病的量。
治疗IRAK-4激酶相关病状的方法可包含单独或彼此组合和/或与其他适用于治疗这些病状的适合治疗剂组合给药式(I)化合物。因此，“治疗有效量”亦意欲包括有效抑制IRAK-4和/或治疗与IRAK-4相关的疾病的所主张化合物组合的量。
这些其他治疗剂的实例包括皮质类固醇、咯利普兰(rolipram)、卡弗他丁(calphostin)、细胞激素-抑制性消炎药(cytokine-suppressive anti-inflammatorydrug，CSAID)、介白素-10、糖皮质激素、水杨酸盐、氧化氮及其他免疫抑制剂；核转位抑制剂，诸如去氧斯匹胍素(deoxyspergualin，DSG)；非类固醇消炎药(non-steroidal anti-inflammatory drug，NSAID)，诸如布洛芬(ibuprofen)、塞内昔布(celecoxib)及罗非昔布(rofecoxib)；类固醇，诸如***(prednisone)或***(dexamethasone)；抗病毒剂，诸如阿巴卡韦(abacavir)；抗增生剂，诸如甲胺喋呤(methotrexate)、来氟米特(leflunomide)、FK506(他克莫司(tacrolimus)、)；抗疟疾剂，诸如羟氯奎宁(hydroxychloroquine)；细胞毒性药物，诸如氮杂硫代嘌呤及环磷酰胺；TNF-α抑制剂，诸如替尼达普(tenidap)、抗TNF抗体或可溶性TNF受体及雷帕霉素(rapamycin)(西罗莫司(sirolimus)或)或其衍生物。
上文其他治疗剂在与本发明化合物组合使用时可例如以医师桌上手册(Physicians' Desk Reference，PDR)中所示或如另外由一般技术者确定的那些量使用。在本发明的方法中，这些其他治疗剂可在给药本发明化合物的前、与其同时或在其之后给药。本发明亦提供能够治疗IRAK-4激酶相关病状(包括如上所述的TLR及IL-1家族受体介导的疾病)的药物组合物。
本发明组合物可含有如上所述的其他治疗剂且可例如根据医药学调配物领域中熟知的那些技术的技术，藉由采用习知固体或液体媒剂或稀释剂以及适合所需给药模式的类型的医药学添加剂(例如赋形剂、黏合剂、防腐剂、稳定剂、香料等)来调配。
因此，本发明另外包括包含一或多种式(I)化合物及药学上可接受的载剂的组合物。
“药学上可接受的载剂”是指在本领域中普遍接受用于将生物活性剂传递至动物(尤其为哺乳动物)的介质。药学上可接受的载剂根据多种因素来调配，此完全在一般技术者的能力范围内。这些因素包括(但不限于)所调配活性剂的类型及性质；待给药含药剂组合物的个体；组合物的预期给药途径；及所靶向的治疗适应症。药学上可接受的载剂包括水性及非水性液体介质以及各种固体及半固体剂型。除活性剂以外，这些载剂可包括多种不同成分及添加剂，这些其他成分出于一般技术者所熟知的各种原因，例如稳定活性剂、黏合剂等，而包括于调配物中。关于适合的药学上可接受的载剂及与其选择相关的因素的描述可见于各种易于获得的来源，例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第17版(1985)，其以全文引用的方式并入本文中。
式(I)化合物可藉由适合待治疗病状的任何方式来给药，其可视待传递药物的部位特异性治疗或用量的需要而定。尽管涵盖其他传递模式，但局部给药对于皮肤相关疾病而言一般优选，且全身性治疗对于癌症或癌前病状而言一般优选。举例而言，这些化合物可诸如以锭剂、胶囊、颗粒、散剂或包括糖浆的液体调配物形式经口传递；诸如以溶液、悬浮液、凝胶或油膏形式局部传递；经舌下传递；经颊传递；诸如藉由皮下、静脉内、肌肉内或胸骨内注射或浸润技术(例如以无菌可注射水溶液或非水溶液或悬浮液形式)非经肠传递；诸如由吸入喷雾经鼻传递；诸如以乳膏或油膏形式局部传递；诸如以栓剂形式经直肠传递；或经脂质体传递。可给药含有药学上可接受的无毒媒剂或稀释剂的单位剂量调配物。这些化合物可以适于即刻释放或延时释放的形式给药。可由适合的药物组合物或(尤其在延时释放的情形下)由诸如皮下植入物或渗透泵的装置来达成即刻释放或延时释放。
局部给药的例示性组合物包括局部载剂，诸如(以聚乙烯胶凝化的矿物油)。
用于经口给药的例示性组合物包括悬浮液，其可含有例如微晶纤维素用于增加体积、海藻酸或海藻酸钠作为悬浮剂、甲基纤维素作为黏度增强剂，及甜味剂或调味剂，诸如本领域中已知的那些甜味剂或调味剂；及即刻释放锭剂，其可含有例如微晶纤维素、磷酸氢钙、淀粉、硬脂酸镁和/或乳糖和/或其他赋形剂、黏合剂、增量剂、崩解剂、稀释剂及润滑剂，诸如本领域中已知的那些试剂。本发明化合物亦可藉由舌下和/或经颊给药，例如使用模制、压缩或冷冻干燥的锭剂经口传递。例示性组合物可包括诸如甘露糖醇、乳糖、蔗糖和/或环糊精的速溶稀释剂。这些调配物中亦包括高分子量赋形剂，诸如纤维素或聚乙二醇(PEG)；有助于黏膜黏附的赋形剂，诸如羟丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(SCMC)和/或顺丁烯二酸酐共聚物(例如)；及用于控制释放的试剂，诸如聚丙烯酸共聚物(例如CARBOPOL)。亦可添加润滑剂、滑动剂、香料、着色剂及稳定剂以易于制造及使用。
供鼻用气雾剂或吸入给药的例示性组合物包括可含有例如苯甲醇或其他适合防腐剂、增强吸收和/或生物可用性的吸收促进剂和/或其他增溶剂或分散剂(诸如本领域中已知的那些试剂)的溶液。
非经肠给药的例示性组合物包括可注射溶液或悬浮液，其可含有例如适合的非经肠可接受的无毒稀释剂或溶剂(诸如甘露糖醇、1,3-丁二醇、水、林格氏溶液(Ringer'ssolution)、等张氯化钠溶液)或包括合成单酸或二酸甘油酯的其他适合分散剂或润湿剂及悬浮剂，以及包括油酸的脂肪酸。
用于直肠给药的例示性组合物包括栓剂，其可含有例如适合的非刺激性赋形剂，诸如可可脂、合成甘油酯或聚乙二醇，其在常温下为固体但在直肠腔内将液化和/或溶解以释放药物。
本发明化合物的治疗有效量可由一般技术者确定，且包括如下用于哺乳动物的例示性剂量：每天每公斤体重约0.05mg至1000mg、1至1000mg、1至50mg、5-250mg、250-1000mg活性化合物，其可呈单次剂量或呈个别分次剂量形式给药，诸如每天1至4次。应了解，任何特定个体的特定剂量及给药频率均可能变化且将视各种因素而定，这些因素包括所采用特定化合物的活性、该化合物的代谢稳定性及作用期长度、个体种类、年龄、体重、一般健康状况、性别及饮食、给药模式及时间、***速率、药物组合及特定病状的严重性。较适合治疗的个体包括动物，最优选为哺乳动物类，诸如人类；及家畜，诸如狗、猫、马及其类似动物。因此，当本文中使用术语“患者”时，此术语欲包括受IRAK-4酶含量介导影响的所有个体，最优选为哺乳动物类。
生物学分析
IRAK4抑制分析
在U型底384孔盘中进行分析。最终分析体积为由15μL酶及底物(荧光标记肽及ATP)及测试化合物添加于分析缓冲液(20mM HEPES pH 7.2，10mM MgCl2，0.015％Brij35及4mM DTT)中制成30μL。藉由将IRAK4与底物及测试化合物组合而开始反应。将反应物在室温下培育60分钟且藉由向每一样品中添加45μL的35mM EDTA而终止反应。在Caliper3000(Caliper,Hopkinton,MA)上藉由电泳法分离荧光底物与磷酸化产物来分析反应混合物。藉由与以无酶对照反应物作为100％抑制及仅含媒剂的反应物作为0％抑制进行比较，来计算抑制数据。分析法中试剂的最终浓度为ATP，500μM；FL-IPTSPITTTYFFFKKK肽，1.5μM；IRAK4，0.6nM；及DMSO，1.6％。
PBMC TLR2诱发IL-6分析法
藉由经Ficoll梯度离心自含有抗凝血剂EDTA(2.5mM)的人类血液分离周边血液单核细胞(Peripheral blood mononuclear cell，PBMC)。将PBMC(250000个细胞/孔)在5％CO2培育器中在37℃下于分析培养基(具有10％热失活FCS的RPMI)中与化合物一起培育30分钟。以化合物预处理之后，以10μg/ml脂磷壁酸(Invivogen,San Diego,CA)(一种TLR2促效剂)刺激细胞5小时。培养结束时，以1800rpm使培养盘离心10分钟以粒化细胞。收集上清液且藉由ELISA(BD Biosciences,San Jose,CA)分析IL-6含量。以IC50或EC50计算抑制。EC50测定以星号标记。
下表列举在IRAK4抑制分析及PBMC TLR2诱发的IL-6分析中量测的本发明以下实例的IRAK4IC50值及细胞IC50或EC50值。如以下实例所例示，本发明的化合物展示小于0.06μM的IRAK IC50抑制值。
IRAK4抑制资料
制备方法
本发明的化合物可由熟习有机合成技术者熟知的多种方式来制备。本发明的化合物可使用下文所述的方法以及合成有机化学技术中已知的合成方法或其变化形式(如本领域技术人员所了解)来合成。优选方法包括(但不限于)下文所述的那些方法。本文引用的所有参考文献均以全文引用的方式并入本文中。
此部分中所述的反应及技术为在适合所采用试剂及物质的溶剂中进行且适合所进行的转变。同样，在下文所述的合成方法描述中，应了解所有建议的反应条件(包括溶剂的选择、反应氛围、反应温度、实验持续时间及处理程序)为经选择为用于该反应的标准条件，其应易于由本领域技术人员鉴别。熟习有机合成技术者应了解，分子各个部分上存在的官能基须与所建议的试剂及反应相容。对与反应条件相容的取代基的这些限制将易于为本领域技术人员显而易见且随后须使用替代方法。此有时将需要以下判断：修改合成步骤的次序或相对于另一方法流程选择一种特定方法流程以获得本发明的所需化合物。亦应认识到，此领域中设计任一合成途径的另一主要考虑事项为审慎选择用于保护本发明中所述化合物中存在的反应性官能基的保护基。向受训从业者描述多种替代的权威记述为Greene等人(Protective Groups in Organic Synthesis,第3版,Wiley及Sons(1999))。
通式(I)化合物可根据流程1中概述的方法来制备。将酯(1)水解为酸1.1，继而使用标准酰胺键形成条件与胺反应可产生二氯酰胺1.2。藉由与胺反应对C4氯化物进行选择性替代可产生单氯产物1.3。使1.3与适当亲核试剂(诸如胺)在催化剂(诸如钯)存在下反应可产生通式I化合物。
流程1
或者，可修改反应次序以改变总体合成从而允许在不同制备阶段在分子的不同位置处发生变化。举例而言，在流程2中，氯化物1可首先与胺反应以形成单氯化酯2.1。随后在金属催化剂存在下或在酸存在下在加热下与另一胺反应可形成经二取代的中间体2.2。使酯水解为酸2.3，继而酰胺键形成，可产生最终类似物2.4。
流程2
流程3中展示取代次序的另一种变化形式。首先，二氯化物与胺反应可产生化合物3.1。以碱(诸如NaOH或KOH)使酯水解可产生酸3.2。此酸可使用标准酰胺键形成反应条件(诸如HOBt、EDC及DIPEA)在适当溶剂中与胺反应以形成酰胺3.3，类似于流程1中的酰胺1.3。随后在金属催化剂(诸如钯)存在下进行芳基胺或杂芳基胺偶合可产生最终化合物3.4。
流程3
另一种变化形式包含合成经差异卤化的吡啶核心以允许HNR3R4取代基在合成的最后阶段的变化。6-溴-4-氯烟酸可与诸如乙二酰氯的卤化试剂反应以产生酰基氯4.1。此可进一步在诸如DIPEA或TEA的碱存在下在诸如DCM的适当溶剂中与胺反应以产生酰胺4.2。酰胺4.2可在诸如Cs2CO3或K2CO3的碱及诸如Pd的金属催化剂存在下在溶剂中与另一胺反应以产生化合物4.3。最后，化合物4.3可在高温下在碱存在下与胺反应以产生化合物4.4。
流程4
亦应注意且为本领域技术人员显而易见，对并入的R1、R2、R3、R4及R5基团进行合成操作为可能的。流程5中展示一种说明性实例。化合物5.1中并入的丁基酯可在诸如DCM的适当溶剂中经诸如TFA的酸处理而转化为酸5.2。5.2与胺在酰胺键形成试剂存在下进一步反应可产生诸如5.3的化合物。本领域技术人员应显而易见，可存在除羧酸酯基以外的其他官能基以供后续官能化。举例而言，硝基可易于转化为胺且随后经官能化，且卤素可易于转化为芳基胺或腈。
流程5
流程6中概述流程5中的化学方法的另一变化形式。烷基可经官能化(如在醇6.1中)，随后经由标准化学操作后续转变为诸如氟类似物6.2的化合物。酯后续转化为酸，随后在剩余吡啶氯化物处进行酰胺及胺偶合可产生诸如6.3的类似物。本领域技术人员应显而易见，这些转变不限于所示实例且可适用于各种化学底物以产生所需化合物。
流程6
另外，R1基团可在并入至吡啶骨架上之后经由官能化进行变化。举例而言，在流程7中，使适当经保护的胺经由标准酰胺键形成条件与吡啶酸偶合以形成7.2。化合物7.2可脱除保护基以产生胺7.3，其可与各种试剂(酸、酰基氯、磺酰氯、异氰酸酯、醛等)反应以形成通式7.4的化合物。
流程7
类似地，经取代的氨基酯可与吡啶酸核心偶合以产生酯8.1，其可经皂化为酸8.2。随后在酰胺键形成反应条件下与胺反应可形成化合物8.3。
流程8
R2或R5处的取代可经由流程9中概述的方法来实现。制备经适当官能化的前驱体(诸如化合物9.1)且与各种试剂(诸如胺、芳基交叉偶合搭配物及氰化物)反应可形成式9.2的化合物。
流程9
实例
可使用以下实例及相关程序中所示的程序来制备式(I)化合物及在制备式(I)化合物中所用的中间体。这些实例中所用的方法及条件以及这些实例中制备的实际化合物不意谓具限制性，而意谓示范可如何制备式(I)化合物。这些实例中所用的起始物质及试剂在并非由本文所述的程序制备时一般可购得或在化学文献中报导，或可藉由使用化学文献中所述的程序来制备。
在给定实例中，短语“经干燥且浓缩”一般是指在有机溶剂中溶液经硫酸钠或硫酸镁干燥，继而自滤液过滤且移除溶剂(一般在减压下且在适合所制备物质稳定性的温度下)。使用Isco中压层析装置(Teledyne Corporation)，以所示溶剂或溶剂混合物洗脱，藉由预填充硅胶滤筒进行管柱层析。使用具有适合所分离物质的量的尺寸的逆相管柱(Waters Sunfire C18、Waters Xbridge C18、Axia C18、YMC S5ODS或其类似物)，一般以在水中递增浓度的甲醇或乙腈的梯度(亦含有0.05％或0.1％三氟乙酸或10mM乙酸铵)、以适合管柱尺寸及欲达成的分离的洗脱速率洗脱，进行制备型高效液相层析(high performance liquid chromatography，HPLC)。使用9.0.5版ChemDraw Ultra(CambridgeSoft)确定化学名称。使用以下缩写：
ACN＝乙腈
盐水＝饱和氯化钠水溶液
DAST＝三氟化(二乙氨基)硫
DCM＝二氯甲烷
DEA＝二乙胺
DIEA＝N,N-二异丙基乙胺
DIPEA＝N,N-二异丙基乙胺
DIPT＝
DMA＝
DMAP＝4-(N,N-二甲氨基)吡啶
DMF＝N,N-二甲基甲酰胺
DMSO＝二甲亚砜
DPPF＝1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁
EDC＝N-(3-二甲氨基丙基)-N'-乙基碳化二亚胺盐酸盐
EtOAc＝乙酸乙酯
h＝小时
HATU＝六氟磷酸O-(7-氮杂苯并***-1-基)-N,N,N',N'-四甲基
HOAT＝1-羟基-7-氮杂苯并***
HOBT＝1-羟基苯并***水合物
LCMS＝液相层析-质谱分析
MeOH＝甲醇
MTBE＝甲基叔丁基醚
NaHCO3(aq)＝饱和碳酸氢钠水溶液
n-BuLi＝正丁基锂
NH4OAc＝乙酸铵
Pd2(dba)3＝三-(二亚苄基丙酮)二钯
PdCl2(dppf)·CH2Cl2＝二氯[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]钯(II)二氯甲烷加合物
PyBrOP＝六氟磷酸溴三吡咯烷基鏻
rt＝周围室温(一般为约20-25℃)
TBAF＝四丁基氟化铵
TEA＝三乙胺
TFA＝三氟乙酸
THF＝四氢呋喃
HPLC条件：
A：XBridge Phenyl(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFApH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经15分钟；流动速率：1.0μl/min。
B：Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经30分钟。
C：Eclipse XDB C18(150×4.6mm)，5微米；溶剂A＝含20mM NH4OAc的水；溶剂B＝ACN；梯度0-100％B经20分钟；流动速率＝1.0mL/min
D：SB C18，4.6×50mm，5μm；溶剂A＝10％MeOH:90％H2O:0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH:10％H2O:0.1％TFA；历经2分钟的梯度0-100％B。
E：Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经15分钟。
F：Ascentis Express C18(4.6×50)mm，2.7μm；溶剂A＝5％ACN:95％水:10mMNH4OAc；溶剂B＝95％ACN:5％水:10mM NH4Oac；梯度0-100％B经4分钟；流动速率＝4mL/min.；管柱温度＝45℃。
G：BEH C18(2.1×50)mm，1.7μm；溶剂A＝5％ACN:95％水:10mM NH4OAc；溶剂B＝95％ACN:5％水:10mM NH4OAc；梯度0-100％B经4分钟；流动速率＝1.1mL/min.；管柱温度＝45-50℃。
H：-OJ-H(250×4.6×5.0μ)，CO2-3.0g(70％)，共溶剂-30％(含0.5％DEA的甲醇)。
I：Chiral-OD-H(250×4.6)mm，5微米，移动相A：0.2DEA于正己烷(85)中；移动相B：乙醇(15)；流速：1.0ml/min。
J：X-Bridge Phenyl(4.6×150mm)3.5u；移动相A：10mM NH4HCO3，pH 9.5，使用稀NH3调节；移动相B：甲醇；流动速率：1ml/min。
K：Sunfire C18(4.6×150)mm，3.5微米；移动相A：含0.05％TFA的水:乙腈95:05；移动相B：乙腈：含0.05％TFA的水:95:05；流速：每分钟时间1ml；梯度0-100％B经18分钟。
L：XBridge(150×4.6mm)，3.5微米SC/749；缓冲剂：含0.05％TFA的水；pH 2.5；移动相A：缓冲液:乙腈(95:5)；移动相B：乙腈:缓冲液(95:5)；流速：1.0ml/min；100％B时间(分钟)15。
M：Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；缓冲液：含0.05％TFA的水，pH经使用稀氨调节为2.5；溶剂A：缓冲液:乙腈(95:5)，溶剂B：乙腈:缓冲液(95:5)。
N：-1A(250×4.6mm)，5微米；CO2-3.0g(70％)、共溶剂-30％；移动相A：含0.5％DEA的甲醇。
O：Waters Acquity UPLC BEH C18，2.1×50mm：移动相A：5:95乙腈:含0.05％TFA的水；移动相B：95:5乙腈:含0.05％TFA的水；梯度：0-100％B经3分钟，随后在100％B下保持0.75分钟；流速：1.11mL/min。
实例1
步骤1：合成4,6-二氯烟酸：将4,6-二氯烟酸乙酯于乙醇(20mL)及水(10mL)中在周围温度下搅拌。向反应混合物中添加氢氧化锂且在室温下搅拌4小时。在减压下浓缩溶剂，以EtOAc及添加的水稀释。收集水层且使用柠檬酸酸化至pH 3-4。使混合物在冰浴中搅拌10分钟，过滤沉淀产物且在真空下干燥以产生化合物。
步骤2：合成4,6-二氯-N-甲基烟酰胺：在0℃下向4,6-二氯烟酸(2)(10g，1当量)于DCM(100mL)中的搅拌溶液中添加DMF(催化量)。向反应混合物中添加乙二酰氯(14mL，3当量)。使反应物升温至周围温度且搅拌30分钟并随后在回流下加热2小时。浓缩反应混合物以移除过量乙二酰氯且再溶解于DCM(50mL)中并冷却至-20℃。向反应混合物中分部分添加甲胺且在室温下搅拌3小时。将反应物先后以水及NaHCO3溶液淬灭。分离各层且将有机层经无水硫酸钠干燥、过滤且浓缩以获得所需化合物6-氯-4-(异丙基氨基)烟酰胺。LC/MS：SB C18，4.6×50mm，5μm；溶剂A＝10％MeOH:90％H2O:0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH:10％H2O:0.1％TFA；历经2分钟的梯度0-100％B(3分钟操作时间)；保留时间：0.874min；LCMS(ES-API),m/z 205(M+H)。
步骤3：合成6-氯-4-(环戊氨基)-N-甲基烟酰胺：将搅拌的4,6-二氯-N-甲基烟酰胺(0.2g，1当量)、环戊胺(0.17g，1.1当量)及N,N-二异丙基乙胺(0.7mL，4当量)于DMA(2mL)中的溶液在封闭条件下在120℃下加热3小时。将反应混合物浓缩至干以自反应物质移除过量DMA。藉由管柱层析，经由硅胶且以EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化所获得的粗物质以获得标题化合物。LC/MS：Ascentis Express C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：1.776min；LCMS(ES-API),m/z 252.2(M-H)。
步骤4：合成4-(环戊氨基)-6-(3,3-二氟-2-氧代吲哚啉-5-基氨基)-N-甲基烟酰胺：将6-氯-4-(环戊氨基)-N-甲基烟酰胺(50mg，1当量)及5-氨基-3,3-二氟吲哚啉-2-酮(40mg，1.2当量)装入密封管中且在封闭条件下在150℃下加热2小时。藉由管柱层析，经由硅胶且以MeOH:CHCl3作为洗脱剂来纯化粗物质以获得4-(环戊氨基)-6-(3,3-二氟-2-氧代吲哚啉-5-基氨基)-N-甲基烟酰胺。1H NMR:400MHz,CD3OD:δ1.67-1.82(m,6H),2.02-2.10(m,2H),2.87(s,3H),3.83-3.89(m,1H),5.95(s,1H),7.12(d,J＝8.40Hz,1H),7.46-7.49(m,1H),7.61(d,J＝2.00Hz,1H),8.00(s,1H)。LC/MS：Ascentis Express C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：1.76min；LCMS(ES-API),m/z 402.4(M+H)。HPLC：XBridgePhenyl(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经15分钟(23分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：7.43min。
合成3,3-二氟-5-硝基吲哚啉-2-酮：将5-硝基吲哚啉-2,3-二酮(i)(1g，1当量)于DCM(10mL)中的溶液冷却至0℃。向反应混合物中添加DAST(1.7mL，2.5当量)且在周围温度下搅拌16小时。将反应物以10％NaHCO3溶液淬灭且萃取至DCM中(两次)。收集有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由急骤管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚来纯化粗产物以获得所需产物。LC/MS：Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.495min；LCMS(ES-API),m/z 213(M-H)。
合成5-氨基-3,3-二氟吲哚啉-2-酮：将3,3-二氟-5-硝基吲哚啉-2-酮(50mg，1当量)于EtOAC:THF:DIPEA(16mL:4mL:0.1mL)中的溶液以N2脱气5分钟。向微小高压釜中的反应混合物中添加Pd/C(10％w/w)(50mg)。施加H2压力(42psi)且在室温下搅拌2小时。使反应混合物经床过滤且在减压下浓缩。藉由急骤管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚来纯化粗产物以获得所需产物。1H NMR 400MHz,CD3OD:δ6.74(d,J＝8.40Hz,1H),6.83(d,J＝8.40Hz,1H),6.94(d,J＝2.00Hz,1H)。
实例2
经由关于实例1步骤4概述的方法使用6-氯-4-(环戊氨基)-N-甲基烟酰胺及6-氨基苯并噻唑来制备实例2。LCMS m/z 368.21(M+H)+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.45(br s,1H),9.22(s,1H),8.56(br s,2H),8.36(br s,1H),8.29(s,1H),8.10-7.90(m,1H),7.57(dd,J＝8.9,2.1Hz,1H),6.05(s,1H),3.85-3.67(m,1H),2.82-2.66(m,3H),2.01(dq,J＝12.2,6.2Hz,2H),1.84-1.56(m,4H),1.50(dt,J＝12.1,5.9Hz,2H)。
实例3
步骤1：合成7-硝基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-甲酸乙酯：将6-硝基苯并[d]噻唑-2-胺(3g，1当量)于DMF(60mL)中的溶液以溴丙酮酸乙酯(3.3g，1.1当量)处理。将反应混合物在150℃下加热24小时。将反应混合物冷却且以水稀释并由氨水制成碱性。产物逐渐沉淀出来，经过滤且干燥。藉由管柱层析来纯化粗物质以获得7-硝基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-甲酸乙酯。
步骤2：合成7-氨基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-甲酸乙酯：向7-硝基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-甲酸乙酯(2g，1当量)于乙醇:水2:1(30mL)中的溶液中添加氯化铵(3.6g，10当量)及铁粉(1.5g，4当量)且在80℃下回流2小时。2小时之后，反应混合物经床过滤。将滤液浓缩为粗产物，将其藉由急骤管柱层析，使用硅胶且以EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化以产生7-氨基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-甲酸乙酯。LC/MS：Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.273min；LCMS(ES-API),m/z 2.62.2(M+H)。
步骤3：合成实例3：使用关于实例1概述的方法，使用6-氯-4-(环戊氨基)-N-甲基烟酰胺及7-氨基苯并[d]咪唑并[2,1-b]噻唑-2-甲酸乙酯来制备实例3。1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ1.33(t,J＝6.80Hz,3H),1.49-1.71(m,6H),1.95-2.00(m,2H),2.75(d,J＝4.40Hz,3H),3.80-3.84(m,1H),4.32(q,J＝7.20Hz,2H),6.06(s,1H),7.56(d,J＝8.40Hz,1H),8.16-8.23(m,3H),8.65(bs,1H),9.06(s,1H),9.16(bs,1H),9.99(bs,1H)。LC/MS：Ascentis Express C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：1.826min；LCMS(ES-API),m/z 479.2(M+H)。HPLC：XBridge Phenyl(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经15分钟(23分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：7.85min。
实例4
步骤1：合成5-氯噻唑并[5,4-b]吡啶-2-胺：在0℃下向搅拌的6-氯吡啶-3-胺(7.5g，1当量)于乙酸(35mL)中的溶液中添加硫氰酸钾(46g，8.1当量)，继而逐滴添加含Br2(5mL，1.6当量)的乙酸(15mL)。使反应混合物在0℃下搅拌2小时。随后将反应混合物温至室温，保持14小时。将反应物以氨溶液淬灭，产生固体沉淀。过滤沉淀且在真空下干燥以产生纯5-氯噻唑并[5,4-b]吡啶-2-胺。1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ7.31(d,J＝8.40Hz,1H),7.66(d,J＝8.00Hz,1H),7.92(s,2H)。
步骤2：合成6-(5-氯噻唑并[5,4-b]吡啶-2-基氨基)-4-(异丙基氨基)-N-甲基烟酰胺：使用关于实例1概述的方法，使用6-氯-4-(环戊氨基)-N-甲基烟酰胺及5-氯噻唑并[5,4-b]吡啶-2-胺来制备实例4。1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ1.31-1.32(m,6H),2.89(s,3H),3.70-3.77(m,1H),6.32(s,1H),7.39-7.41(m,1H),7.88-7.90(m,1H),8.38(s,1H)。LC/MS:Ascentis Express C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：2.38min；LCMS(ES-API),m/z 375.0(M-H)。HPLC:Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经30分钟(36分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：12.84min。
合成2-(二苄氨基)-3-羟基丙酸甲酯：向K2CO3(34.8g，2当量)于DMF(280mL)中的溶液中添加L-丝氨酸甲酯盐酸盐(1当量)、碘化钾(10.8g，0.5当量)及苄基溴(38mL，2.5当量)。将混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物在减压下浓缩以移除过量DMF且随后以EtOAc稀释。以盐水及水洗涤有机层。将有机层分离，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由管柱层析经由硅胶(EtOAC:石油醚作为洗脱剂)来纯化粗物质以产生2-(二苄氨基)-3-羟基丙酸甲酯。1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ2.49(s,1H),3.58-3.59(m,1H),3.67-3.70(m,2H),3.73-3.75(m,2H),3.77-3.80(m,3H),3.90-3.94(m,2H),7.24-7.38(m,10H)。
合成(R)-3-(二苄氨基)-2-氟丙酸甲酯：在N2氛围下向2-(二苄氨基)-3-羟基丙酸甲酯(15g，1当量)于THF(95mL)中的冰***液中逐滴添加DAST(13.1mL，1.23当量)且将反应混合物在室温下搅拌14小时。将反应混合物在0℃下以10％NaHCO3水溶液淬灭且萃取至乙酸乙酯中(两次)。收集有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由急骤管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚来纯化粗产物以产生(R)-3-(二苄氨基)-2-氟丙酸甲酯。1H NMR:400MHz,CDCl3:δ2.93-3.11(m,2H),3.51-3.55(m,2H),3.70(s,3H),3.82-3.85(m,2H),4.98-5.13(m,1H),7.22-7.34(m,10H)。
合成(S)-3-(二苄氨基)-2-氟丙-1-醇：在N2氛围下向搅拌的LiBH4(34.5mL，1.4当量)于THF(300mL)中的溶液中逐滴添加含(R)-3-(二苄氨基)-2-氟丙酸甲酯(15g，1当量)的THF(150mL)。将反应混合物在室温下搅拌16小时。在0℃下将反应混合物以氯化铵饱和溶液淬灭且萃取至乙酸乙酯中(两次)。将有机层收集在一起，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由急骤管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚来纯化粗产物以产生(R)-3-(二苄氨基)-2-氟丙-1-醇。
合成(R)-3-氨基-2-氟丙-1-醇：向(R)-3-(二苄氨基)-2-氟丙-1-醇(2g，1当量)于乙醇(50mL)中的脱气溶液中添加10％Pd/C(0.2当量)及Pd(OH)2(0.2当量)且将反应混合物于高压釜中在60℃下在10Kg(140psi)压力下氢化14小时。经过滤反应混合物且浓缩滤液以产生(R)-3-氨基-2-氟丙-1-醇。
合成(R)-3-(二苄氨基)-2-氟丙酸乙酯：根据如关于合成(R)-3-(二苄氨基)-2-氟丙酸甲酯所述的方法来制备。
合成(R)-4-(二苄氨基)-3-氟-2-甲基丁-2-醇：在0℃下在N2氛围下向(R)-3-(二苄氨基)-2-氟丙酸乙酯(15g，1当量)于THF(150mL)中的溶液中逐滴添加溴化甲基镁(3M***溶液)(15mL，2.5当量)。使反应混合物缓慢达至室温且搅拌1小时。在0℃下将反应混合物以饱和氯化铵水溶液淬灭且萃取至乙酸乙酯中(两次)。收集有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由急骤管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚来纯化粗产物以产生(R)-4-(二苄氨基)-3-氟-2-甲基丁-2-醇。1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ0.92-0.92(m,3H),0.98-0.98(m,3H),2.53-2.94(m,2H),3.51-3.81(m,4H),4.34-4.46(m,1H),4.80(s,1H),7.22-7.40(m,10H)。
合成(R)-4-氨基-3-氟-2-甲基丁-2-醇：使用关于合成(R)-3-氨基-2-氟丙-1-醇概述的程序使(R)-4-(二苄氨基)-3-氟-2-甲基丁-2-醇脱除保护基。
合成(R)-3-(二苄氨基)-2-氟丙酸：向(R)-3-(二苄氨基)-2-氟丙酸乙酯(5.5g，1当量)于EtOH(30mL)中的溶液中添加溶解于水(30mL)中的LiOH(5当量)。将反应混合物在室温下搅拌12小时。浓缩反应混合物且将所获得的残余物溶解于最小量的水中且以6N HCl中和，产生白色固体。过滤沉淀且在真空下干燥以产生(R)-3-(二苄氨基)-2-氟丙酸。LC/MS：Acquity BEH C18 2.1×50mm，1.8微米；溶剂A＝含0.1％TFA的水；溶剂B＝含0.1％TFA的ACN；历经2分钟的梯度0-100％B；保留时间：0.64min；LCMS(ES-API),m/z 288.8(M+H)。
合成(R)-3-(二苄氨基)-2-氟-N-甲氧基-N-甲基丙酰胺：向(R)-3-(二苄氨基)-2-氟丙酸(1.4g，1当量)于DMF(5mL)中的溶液中添加N,O-二甲基羟基胺.HCl(0.7g，1.5当量)、EDC.HCl(1.8g，2当量)及DIPEA(4.5mL，5当量)，继而添加HOBT(0.65g，1当量)。在室温下搅拌反应混合物。在减压下浓缩反应混合物，以移除过量DMF，且将所获得的残余物以乙酸乙酯稀释，并先后以盐水溶液及水洗涤。收集有机层且经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由急骤层析，经由硅胶且以EtOAC:石油醚作为洗脱剂来纯化粗物质，以产生(R)-3-(二苄氨基)-2-氟-N-甲氧基-N-甲基丙酰胺。LC/MS：Acquity BEH C18 2.1×50mm，1.8微米；溶剂A＝含0.1％TFA的水；溶剂B＝含0.1％TFA的ACN；历经2分钟的梯度0-100％B；保留时间：0.71min；LCMS(ES-API),m/z 331.8(M+H)。
合成(R)-4-(二苄氨基)-3-氟丁-2-酮：将(R)-3-(二苄氨基)-2-氟-N-甲氧基-N-甲基丙酰胺(0.9g，1当量)于THF(10mL)中的溶液冷却至0℃。向反应混合物中添加溴化甲基镁(3当量，3M***溶液)。添加结束之后，使反应物升温至室温且搅拌1小时。使用饱和氯化铵溶液淬灭反应物且以乙酸乙酯萃取。收集有机层且经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩，以产生标题化合物(R)-4-(二苄氨基)-3-氟丁-2-酮。LC/MS:Acquity BEH C18 2.1×50mm，1.8微米；溶剂A＝含0.1％TFA的水；溶剂B＝含0.1％TFA的ACN；历经2分钟的梯度0-100％B；保留时间：0.73min；LCMS(ES-API),m/z 286.8(M+H)。
合成(R)-1-(二苄氨基)-2-氟-4-甲基戊-3-酮及(R)-1-环丙基-3-(二苄氨基)-2-氟丙-1-酮：使用关于合成(R)-4-(二苄氨基)-3-氟丁-2-酮所述的方法，分别使用异丙基或环丙基格林纳试剂(Grignard reagent)来制备这些化合物。
合成(R)-4-(二苄氨基)-1,1,1,3-四氟-2-甲基丁-2-醇：向(R)-4-(二苄氨基)-3-氟丁-2-酮(1.2g，1当量)于THF(15mL)中的溶液中添加CF3TMS(3g，5当量)且搅拌30分钟。将反应混合物冷却至0℃且向反应混合物中逐滴添加TBAF(1M THF溶液，21mL，5当量)。使反应混合物在室温下搅拌16小时且以2M HCl淬灭。将产物萃取至MTBE中且收集有机层并经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由急骤层析，经由硅胶且以EtOAC:石油醚作为洗脱剂来纯化粗物质以产生呈非对映异构体混合物形式的标题化合物(R)-4-(二苄氨基)-1,1,1,3-四氟-2-甲基丁-2-醇。LC/MS：Acquity BEH C18 2.1×50mm，1.8微米；溶剂A＝含0.1％TFA的水；溶剂B＝含0.1％TFA的ACN；历经2分钟的梯度0-100％B；保留时间：0.77min；LCMS(ES-API),m/z 356.8(M+H)。
合成(2R)-1-(二苄氨基)-2-氟-4-甲基戊-3-醇：在0℃下向含(R)-1-(二苄氨基)-2-氟-4-甲基戊-3-酮(0.9g，1当量)的THF:MeOH(2:1)(10mL)中分部分添加NaBH4(0.2g，2当量)且使其搅拌1小时。将反应物在周围温度下以饱和NH4Cl溶液淬灭且在减压下浓缩以移除过量溶剂。将所获得的残余物以乙酸乙酯稀释且以水洗涤。收集有机层且经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。将所获得的物质以***洗涤且在真空下干燥以产生呈非对映异构体混合物形式的(2R)-1-(二苄氨基)-2-氟-4-甲基戊-3-醇。LC/MS：Acquity BEH C18 2.1×50mm，1.8微米；溶剂A＝含0.1％TFA的水；溶剂B＝含0.1％TFA的ACN；历经2分钟的梯度0-100％B；保留时间：0.76min；LCMS(ES-API),m/z 316.8(M+H)。
合成(2R)-1-环丙基-3-(二苄氨基)-2-氟丙-1-醇及(3R)-4-(二苄氨基)-3-氟丁-2-醇：使用关于合成(2R)-1-(二苄氨基)-2-氟-4-甲基戊-3-醇所述的方法，以(R)-1-环丙基-3-(二苄氨基)-2-氟丙-1-酮及(R)-4-(二苄氨基)-3-氟丁-2-酮为起始物质来制备这些化合物。
合成(3R)-2-环丙基-4-(二苄氨基)-1,1,1,3-四氟丁-2-醇：使用关于合成化合物编号(R)-4-(二苄氨基)-1,1,1,3-四氟-2-甲基丁-2-醇所述的方法，以(R)-1-环丙基-3-(二苄氨基)-2-氟丙-1-酮为起始物质来制备此化合物。
合成(3R)-4-氨基-1,1,1,3-四氟-2-甲基丁-2-醇、(2R)-1-氨基-2-氟-4-甲基戊-3-醇、(2R)-3-氨基-1-环丙基-2-氟丙-1-醇、(3R)-4-氨基-3-氟丁-2-醇、(3R)-4-氨基-2-环丙基-1,1,1,3-四氟丁-2-醇：使用关于合成(R)-3-氨基-2-氟丙-1-醇所述的苄基脱除保护基方法来制备这些化合物。
(3R)-4-氨基-1,1,1,3-四氟-2-甲基丁-2-醇：LC/MS：ELSD方法。保留时间：1.804min；LCMS(ES-API),m/z 175.6(M-H)。
实例5
步骤1：合成6-氯-4-(异丙基氨基)烟酸乙酯：向4,6-二氯烟酸乙酯(1g，1当量)于DMA(5mL)中的溶液中添加DIPEA(3.97mL，5当量)及丙-2-胺(0.5g，2当量)。将混合物在50℃下加热12小时。在减压下浓缩反应混合物以移除过量溶剂。将残余物溶解于乙酸乙酯中且先后以水及盐水洗涤。收集有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到粗产物。藉由急骤层析，经由硅胶(以EtOAC:石油醚作为洗脱剂)来纯化产物以产生6-氯-4-(异丙基氨基)烟酸乙酯。LC/MS：Acquity BEH C18 2.1×50mm，1.8微米；溶剂A＝含0.1％TFA的水；溶剂B＝含0.1％TFA的ACN；历经2分钟的梯度0-100％B；保留时间：0.90min；LCMS(ES-API),m/z 243.7(M+H)。
步骤2：合成6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)烟酸乙酯：向6-氯-4-(异丙基氨基)烟酸乙酯(5g，20.66mmol)于二噁烷(30mL)及H2O(5mL)中的溶液中添加6-氨基苯并噻唑(1当量)、xanthphos(0.4当量)及Na2CO3(4当量)，继而向反应混合物中添加Pd2(dba)3(0.4当量)且在115℃下加热12小时。将反应物质冷却且过滤。浓缩所获得的滤液以提供粗物质。藉由管柱层析，经由硅胶(以EtOAc:石油醚作为洗脱剂)来纯化粗物质以产生6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)烟酸乙酯(5g，68％产率)。LC/MS：AcquityBEH C18 2.1×50mm，1.8微米；溶剂A＝含0.1％TFA的水；溶剂B＝含0.1％TFA的ACN；历经2分钟的梯度0-100％B；保留时间：0.78min；LCMS(ES-API),m/z 357.8(M+H)。1H NMR(400MHzCD3OD)δ1.20-1.32(m,6H),1.34-1.41(m,3H),4.27-4.36(m,2H),6.02(s,1H),7.51(dd,J＝2.80,11.60Hz,1H),7.95-7.98(m,1H),8.33(d,J＝2.40Hz,1H),8.57(s,1H),9.08(s,1H)。
步骤3：合成6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)烟酸：向6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)烟酸乙酯(1g，1当量)于乙醇:水(2:1)(10mL)中的溶液中添加氢氧化锂(5当量)且在室温下搅拌12小时。将反应混合物浓缩，以EtOAc稀释且添加水。收集水层且于冰中使用柠檬酸酸化至pH 3-4。酸产物沉淀且过滤且在真空下干燥以产生6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)烟酸。LC/MS：Acquity BEH C18 2.1×50mm，1.8微米；溶剂A＝含0.1％TFA的水；溶剂B＝含0.1％TFA的ACN；历经2分钟的梯度0-100％B；保留时间：0.65min；LCMS(ES-API),m/z 329.8(M+H)。
步骤4：合成(R)-6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-N-(2-氟-3-羟丙基)-4-(异丙基氨基)烟酰胺：向搅拌的6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)烟酸(0.2g，1当量)及(R)-3-氨基-2-氟丙-1-醇(1.2当量)于DMF(5mL)中的溶液中相继添加DIPEA(4当量)及HATU(1当量)且搅拌4小时。将反应混合物在减压下浓缩以移除过量DMF。将所获得的残余物分配于水与EtOAc的间。分离有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由管柱层析，经由硅胶且以MeOH:CHCl3作为洗脱剂来纯化产物以产生实例5。1H NMR:400MHz,CD3OD:δ1.28(d,J＝6.40Hz,6H),1.99(s,2H),3.54-3.84(m,5H),4.60-4.75(m,1H),6.05(s,1H),7.52(dd,J＝2.40,8.80Hz,1H),7.97(d,J＝8.80Hz,1H),8.26(s,1H),8.36(d,J＝2.40Hz,1H),9.08(s,1H)。LC/MS：Ascentis Express C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mMNH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：1.613min；LCMS(ES-API),m/z 404.2(M+H)。HPLC：Eclipse XDB C18(150×4.6mm)5微米；溶剂A＝含20mM NH4OAc的水；溶剂B＝ACN；梯度0-100％B经20分钟；流动速率＝1.0mL/min；保留时间：7.39min。
使用关于实例5概述的方法，使用适当起始物质及胺来制备表1中突出的实例。
表1
使用关于实例5概述的方法，使用适当起始物质及胺来制备表2中突出的实例。
表2
实例33
步骤1：6-氯-4-(环戊氨基)烟酸甲酯：使用关于合成6-氯-4-(异丙基氨基)烟酸乙酯所述的方法，以4,6-二氯烟酸甲酯为起始物质来制备此化合物。
步骤2：6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(环戊氨基)烟酸甲酯：使用关于合成6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)烟酸乙酯所述的方法，以6-氯-4-(环戊氨基)烟酸甲酯为起始物质来制备此化合物。
步骤3：6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(环戊氨基)烟酸：使用关于合成6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)烟酸所述的方法(实例5中所述)来制备此化合物。
步骤4：合成(R)-6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(环戊氨基)-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)烟酰胺：使用关于制备实例5概述的偶合程序，自6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(环戊氨基)烟酸及(R)-4-氨基-3-氟-2-甲基丁-2-醇(15)来制备实例33：1H NMR:400MHz,CD3OD:δ1.24-1.31(m,6H),1.57-1.62(m,2H),1.67-1.82(m,4H),2.03-2.08(m,2H),3.44-3.50(m,1H),3.78-3.87(m,2H),4.33-4.47(m,1H),6.07(s,1H),7.52(dd,J＝2.00,8.80Hz,1H),7.97(d,J＝8.80Hz,1H),8.25(s,1H),8.36(d,J＝2.00Hz,1H),9.07(s,1H)。LC/MS：Ascentis Express C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：1.809min；LCMS(ES-API),m/z 458.0(M+H)。HPLC：Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经15分钟(23分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：6.25min。
根据关于实例33概述的方法，适当时用替代胺取代以适当制备所需实例来制备下表3中突出的实例。
表3
实例143
根据关于实例1及5概述的通用方法，以(2S,3S)-3-氨基-3-苯基丙-1,2-二醇为起始物质来制备。LCMS 450.12；HPLC RT 8.82min，XBridge C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝10％MeOH:90％H2O:0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH:10％H2O:0.0％TFA；梯度0-100％B经15分钟；流动速率：1.0mL/min。
实例144
根据关于实例1及5概述的通用方法，以(2S,3S)-3-氨基-3-苯基丙-1,2-二醇为起始物质来制备。LCMS：464.17；HPLC rt 9.39min，XBridge C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝10％MeOH:90％H2O:0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH:10％H2O:0.0％TFA；梯度0-100％B经15分钟；流动速率：1.0mL/min。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.43-9.29(m,1H),8.16-8.01(m,2H),7.81(d,J＝2.0Hz,1H),7.41-7.17(m,7H),5.96-5.72(m,1H),4.62(d,J＝4.3Hz,1H),4.06-3.81(m,1H),3.58-3.35(m,3H),1.27(t,J＝7.3Hz,3H)。
实例145
根据关于实例1及5概述的通用方法，以(S)-2-氨基-2-苯基乙醇为起始物质来制备。LCMS 420.14；HPLC rt 9.71min，XBridge C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝10％MeOH:90％H2O:0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH:10％H2O:0.0％TFA；梯度0-100％B经15分钟；流动速率：1.0mL/min。
实例147
根据关于实例1及5概述的通用方法，以(±)-4-氨基金刚烷-1-醇为起始物质来制备，在手性HPLC之后产生实例146(异构体B)。LCMS：450.15；HPLC rt 10.44min；XBridgeC18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝10％MeOH:90％H2O:0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH:10％H2O:0.0％TFA；梯度0-100％B经15分钟；流动速率：1.0mL/min。
实例148
根据关于实例1及5概述的通用方法，以(±)-4-氨基金刚烷-1-醇为起始物质来制备，在手性HPLC之后产生实例147(异构体A)。LCMS 450.22；HPLC rt 9.81min；XBridge C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝10％MeOH:90％H2O:0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH:10％H2O:0.0％TFA；梯度0-100％B经15分钟；流动速率：1.0mL/min。
实例149
使用实例5步骤4中概述的程序，自6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(环戊氨基)烟酸及2-(1-甲基吡咯烷-2-基)乙胺来制备实例149。
根据上文提及的程序来制备表4中实例150至158的合成。
表4
实例159
步骤1：将2,2,6,6-四甲基哌啶(23.5g，160mmol)于THF(250mL)中的溶液在氮气氛围下冷却至-78℃。逐滴添加丁基锂(9.7g，151mmol)且随后使其在0℃下搅拌45分钟。随后将LTMP溶液冷却至-78℃且以2-溴-4-氟-3-(三甲基硅烷基)吡啶(20g，76mmol)于THF(50mL)中的溶液逐滴处理。将反应混合物在-78℃下搅拌3.5小时且随后在氮气氛围下以干冰淬灭。以5％H2SO4溶液酸化反应混合物且将水层以EtOAc萃取两次。干燥经分离的有机层(Na2SO4)且浓缩以产生呈棕色油状的粗产物(6-氯-4-氟-5-(三甲基硅烷基)烟酸(18.7g，80％产率)。此粗产物直接用于下一步骤中。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.66(s,1H),0.59(s,9H)。
步骤2：向6-氯-4-溴-5-(三甲基硅烷基)烟酸(4g，13mmol)于MeOH(100mL)中的溶液中添加K2CO3(4g，29mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物缓慢添加至冰中，随后以10％H2SO4酸化。将水层以EtOAc(50mL)萃取两次。干燥经分离的有机层(Na2SO4)且浓缩以产生粗产物6-氯-4-溴烟酸(2.3g，75％产率)。LCMS m/z 233.9(M)+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.05(br s,1H),8.77(s,1H),8.06(s,1H)。
步骤3：将6-溴-4-氯烟酸(5g，21.15mmol)于DCM(75mL)中的悬浮液冷却至0℃。添加乙二酰氯(3.70mL，42.3mmol)且将反应混合物在50℃下加热1小时。将反应混合物冷却至室温且藉由蒸馏移除过量乙二酰氯及DCM以获得呈棕色油状的酰基氯，其直接用于下一步骤中。
步骤4：在0℃下向含(R)-4-氨基-3-氟-2-甲基丁-2-醇(2.82g，23.26mmol)的DCM(25mL)中添加TEA(8.84mL，63.4mmol)。将上文制备的酰基氯溶解于DCM(75mL)中且在0℃下逐滴添加至胺溶液中。将反应混合物搅拌30分钟且使其温至室温，保持30分钟。将反应混合物以DCM(150mL)稀释且以水及盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩以产生呈棕色油状的(R)-6-溴-4-氯-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)烟酰胺(2.7g，7.95mmol，37.6％产率)。经由管柱层析(石油醚:EA，15-20％)纯化残余物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.90(t,J＝5.6Hz,1H),8.47(s,1H),7.91(s,1H),4.84(s,1H),4.31(ddd,J＝49.6,8.4,2.0Hz,1H),3.77(ddd,J＝38.4,14.8,6.0Hz,1H),3.69(m,1H),1.17(s,sH),1.15(s,3H)。
步骤5：将(R)-6-溴-4-氯-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)烟酰胺(3.2g，9.42mmol)、苯并[d]噻唑-6-胺(1.84g，12.25mmol)、二噁烷(20mL)及Cs2CO3(6.14g，18.85mmol)馈入80mL微波小瓶中且以氩气脱气5分钟。添加DPPF(0.522g，0.942mmol)且再次使其脱气5分钟，继而添加PdCl2(dppf)(0.689g，0.942mmol)且进一步脱气15分钟。将小瓶在微波中在100℃下加热3小时。将反应物以EA稀释且以水及盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，浓缩，藉由使用80％EA以管柱纯化粗残余物以产生(R)-6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-氯-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)烟酰胺(1.1g，28％产率)。LCMS m/z 409.0(M+H)+；1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.72(s,1H),9.21(s,1H),8.67(d,J＝2.0Hz,1H),8.58(t,J＝5.6Hz,1H),8.29(s,1H),8.01(d,J＝8.8Hz,1H),7.61(dd,J＝8.8,6.8Hz,1H),6.96(s,1H),4.82(s,1H),4.32(dd,J＝49.2,9.2Hz,1H),3.69(m,1H),1.17(m,6H)。
步骤6：通用程序：在一微波小瓶中，将(R)-6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-氯-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)烟酰胺(20mg，0.05mmol)、丁基胺(0.1mmol)、K2CO3(20mg，0.15mmol)及DMF(0.5mL)在120℃下搅拌12小时。冷却反应且直接经由逆相制备型HPLC使用以下条件来纯化产物：管柱：X-bridge制备型OBD C18，19×100mm，5μm，移动相：A＝含10mM乙酸铵的水，B＝乙腈，15mL/min流速，20分钟梯度。因此，分离5.7mg(29％产率)实例159。
根据关于实例159概述的方法来制备表5中描述的实例。
表5
实例169
步骤1：向4,6-二氯烟酸乙酯(50g，227mmol)于DMA(500mL)中的溶液中添加DIPEA(39.7mL，227mmol)及环丙胺(17.6mL，250mmol)。随后将混合物在90℃下加热5小时。将反应混合物伴随搅拌于碎冰中淬灭。搅拌所得浆状物且过滤以产生粗产物(42g，91％产率)，其不经进一步纯化即使用。LCMS m/z 241.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(s,1H),8.09(s,1H),7.03(s,1H),4.29(q,J＝7.2Hz,2H),2.61(m,1H),1.31(t,J＝7.2Hz,3H),0.86(m,2H),0.58(m,2H)。
步骤2：向6-氯-4-(环丙氨基)烟酸乙酯(2g，8.31mmol)于EtOH(14mL)中的溶液中添加LiOH.H2O(1.02g，25mmol)及水(6mL，8.31mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。在真空下移除溶剂且以1.5N HCl将pH值调节至3-4。过滤所得固体且干燥以产生呈白色固体状的6-氯-4-(环丙氨基)烟酸(1.5g，82％产率)。LCMS m/z 213.2(M+H)+。
步骤3：向搅拌的6-氯-4-(环丙氨基)烟酸(0.30g，1.4mmol)于DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(0.644g，1.7mmol)、DIPEA(0.74mL，4.23mmol)及(1R,4R)-4-氨基-1-甲基环己醇(0.219g，1.693mmol)。将混合物在室温下搅拌3小时。自反应混合物蒸发DMF且将残余物分配于水与EtOAc的间。以冷水洗涤有机层(3次)。有机层经Na2SO4干燥且在真空下浓缩以产生粗化合物，随后将其藉由急骤管柱层析(10％MeOH/DCM)来纯化以产生6-氯-4-(环丙氨基)-N-(4-羟基-4-甲基环己基)烟酰胺(310mg，63％产率)。LCMS m/z 324.2(M+H)+。
步骤4：向6-氯-4-(环丙氨基)-N-(4-羟基-4-甲基环己基)烟酰胺(0.100g，0.309mmol)于二噁烷(10mL)中的溶液中添加苯并[d]噻唑-6-胺(0.056g，0.37mmol)、xantphos(0.071g，0.124mmol)及碳酸钠(0.131g，1.24mmol)。将溶液以N2净化10分钟。添加参(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.113g，0.124mmol)且将混合物以N2再净化10分钟。将反应混合物在110℃下加热18小时。将混合物冷却至室温且以EtOAc稀释。混合物经过滤且浓缩成残余物，将其经由制备型HPLC来纯化以产生6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(环丙氨基)-N-(4-羟基-4-甲基环己基)烟酰胺(7mg，5％产率)。
以与实例169类似的方式，适当时在合成序列中用替代胺取代来制备下表中的实例。另外，可采用关于实例5概述的方法，适当时在合成序列中用替代胺取代来制备此表中的实例。
表6
实例318
将4-(异丙基氨基)-6-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基氨基)烟酸(10mg，0.032mmol)、PYBOP(16.66mg，0.032mmol)、DIPEA(0.017mL，0.096mmol)及双环[2.2.2]辛烷-1,4-二胺(4.49mg，0.032mmol)于DMF(1mL)中的溶液在25℃下搅拌1小时。添加另一批双环[2.2.2]辛烷-1,4-二胺(4.49mg，0.032mmol)且将反应物搅拌1小时。直接经由制备型HPLC分离产物以产生N-(4-氨基双环[2.2.2]辛-1-基)-4-(异丙基氨基)-6-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基氨基)烟酰胺(3.1mg，21％产率)。LCMS m/z 435.2(M+)+；HPLC rt 1.11，条件G。
实例319
步骤1：合成4-(4-(叔丁氧羰基)苯基氨基)-6-氯烟酸乙酯：根据关于合成实例5步骤1概述的相同方法，使用4,6-二氯烟酸乙酯及4-氨基苯甲酸叔丁酯。LC/MS:Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：2.525min；LCMS(ES-API),m/z 377.0(M+H)。
步骤2：合成6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(4-(叔丁氧羰基)苯基氨基)烟酸乙酯：根据关于合成实例5步骤2概述的相同方法，使用4-(4-(叔丁氧羰基)苯基氨基)-6-氯烟酸乙酯及苯并[d]噻唑-6-胺。
步骤3：合成6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(4-(叔丁氧羰基)苯基氨基)烟酸：根据关于合成实例5步骤3所提及的相同方法，使用6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(4-(叔丁氧羰基)苯基氨基)烟酸乙酯。
步骤4：合成4-(2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基氨基甲酰基)吡啶-4-基氨基)苯甲酸叔丁酯：向搅拌的6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-((4-(叔丁氧羰基)苯基)氨基)烟酸(0.4g，0.865mmol)、DIPEA(0.76mL，4.3mmol)、HATU(0.33g，0.87mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加(R)-4-氨基-3-氟-2-甲基丁-2-醇(0.105g，0.87mmol)。将反应物在室温下搅拌4小时。浓缩混合物且将粗产物溶解于乙酸乙酯(30mL)中，以水(15mL)、盐水(15mL)洗涤，干燥且浓缩。藉由管柱层析(12g管柱)，以氯仿/甲醇(0-10％)洗脱来纯化产物以产生呈棕色固体状的4-((2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-((2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)氨基甲酰基)吡啶-4-基)氨基)苯甲酸叔丁酯(0.3g，61.3％产率)。LCMS(ES-API),m/z 566.0(M+H)。
步骤5：合成4-(2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基氨基甲酰基)吡啶-4-基氨基)苯甲酸：将4-(2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基氨基甲酰基)吡啶-4-基氨基)苯甲酸叔丁酯(200mg)于DCM(10mL)中的溶液冷却至0℃。向反应混合物中逐滴添加TFA(5mL)且升温至周围温度。随后将反应混合物在50℃下加热4小时。4小时结束之后，将反应混合物逆相纯化(60:40的ACN/NH4OAc)以产生标题化合物。LC/MS：Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mMNH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.117min；LCMS(ES-API),m/z 510.2(M+H)。
步骤6：合成(R)-6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)-4-(4-(甲基氨基甲酰基)苯基氨基)烟酰胺：根据关于合成实例5步骤4(酰胺偶合)所提及的相同方法，使用4-(2-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-5-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基氨基甲酰基)吡啶-4-基氨基)苯甲酸及甲胺。1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ1.18-1.19(m,6H),2.80(d,J＝4.40Hz,3H),3.39-3.46(m,1H),3.67-3.83(m,1H),4.31-4.46(m,1H),4.84(s,1H),6.73(s,1H),7.35-7.37(m,2H),7.57(dd,J＝2.00,8.80Hz,1H),7.88-7.91(m,2H),7.96-7.98(m,1H),8.37-8.38(m,1H),8.57(s,1H),8.65(d,J＝2.00Hz,1H),8.71(t,J＝5.60Hz,1H),9.18(s,1H),9.42(s,1H),10.49(s,1H)。LC/MS:Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.346min；LCMS(ES-API),m/z 523.2(M+H)。HPLC：Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经15分钟(23分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：5.02min。
以与实例319类似的方式，适当时在合成序列中用替代胺取代来制备下表中的实例。
表6
实例327
步骤1：合成6-氯-4-(3-羟基环己基氨基)烟酸乙酯：根据关于合成实例5步骤1概述的相同方法，使用4,6-二氯烟酸乙酯及(3S)-3-氨基环己醇。LC/MS：SBC18，4.6×50mm，5μm；溶剂A＝10％MeOH:90％H2O:0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH:10％H2O:0.1％TFA；历经2分钟的梯度0-100％B(3分钟操作时间)；保留时间：1.65min；LCMS(ES-API),m/z 299.0(M+H)。
步骤2：合成6-氯-4-((1S)-3-羟基环己基氨基)烟酸：根据关于合成实例5步骤3所述的相同方法，使用6-氯-4-(3-羟基环己基氨基)烟酸酯。LC/MS：SB C18，4.6×50mm，5μm；溶剂A＝10％MeOH:90％H2O:0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH:10％H2O:0.1％TFA；历经2分钟的梯度0-100％B(3分钟操作时间)；保留时间：1.095min；LCMS(ES-API),m/z271.0(M+H)。
步骤3：合成6-氯-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)-4-((1S)-3-羟基环己基氨基)烟酰胺：根据关于合成实例5步骤4所述的方法，使用(R)-4-氨基-3-氟-2-甲基丁-2-醇及6-氯-4-((1S)-3-羟基环己基氨基)烟酸。
步骤4：合成6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-N-((R)-2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)-4-(3-羟基环己基氨基)烟酰胺：根据关于合成实例5步骤2所述的方法，使用6-氯-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)-4-((1S)-3-羟基环己基氨基)烟酰胺及苯并[d]噻唑-6-胺。1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ1.01-1.82(m,9H),1.72-1.77(m,1H),1.83-1.86(m,1H),1.94-1.99(m,1H),2.20-2.23(m,1H),2.90-2.91(m,1H),3.34(1H,与水峰合并),3.48-3.54(m,1H),3.60-3.73(m,1H),4.26-4.41(m,1H),4.67(d,J＝4.80Hz,1H),4.79(s,1H),6.05(s,1H),7.57(dd,J＝2.00,9.00Hz,1H),7.93-7.95(m,1H),8.29(d,J＝7.60Hz,1H),8.37-8.40(m,2H),8.65(d,J＝2.00Hz,1H),9.14(s,1H),9.22(s,1H)。LC/MS:SB C18，4.6×50mm，5μm；溶剂A＝10％MeOH:90％H2O:0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH:10％H2O:0.1％TFA；历经2分钟的梯度0-100％B(3分钟操作时间)；保留时间：1.412min；LCMS(ES-API),m/z 488.2(M+H)。HPLC：XBridge Phenyl(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经15分钟(23分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：5.69min。
实例328
分离另一醇非对映异构体作为实例328：1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ1.01-1.82(m,8H),1.72-1.77(m,1H),1.83-1.86(m,1H),1.94-1.99(m,1H),2.20-2.23(m,1H),2.90-2.91(m,1H),3.48-3.54(m,1H),3.60-3.64(m,1H),3.69-3.73(m,1H),4.26-4.41(m,1H),4.67(d,J＝4.80Hz,1H),4.79(s,1H),6.05(s,1H),7.57(dd,J＝2.00,9.00Hz,1H),7.93-7.95(m,1H),8.29(d,J＝7.60Hz,1H),8.37-8.40(m,2H),8.65(d,J＝2.00Hz,1H),9.14(s,1H),9.22(s,1H)。LC/MS：SB C18，4.6×50mm，5μm；溶剂A＝10％MeOH:90％H2O:0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH:10％H2O:0.1％TFA；历经2分钟的梯度0-100％B(3分钟操作时间)；保留时间：1.403min；LCMS(ES-API),m/z 488.2(M+H)。HPLC：XBridge Phenyl(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经15分钟(23分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：6.06min。
实例329
步骤1：合成6-氯-4-((1S)-3-氟环己基氨基)烟酸乙酯：将6-氯-4-((3-羟基环己基)氨基)烟酸乙酯(0.3g，1当量)于DCM(10mL)中的溶液冷却至-78℃且搅拌5分钟。向反应混合物中添加Xtal-Fluoro-E(1.2当量)。添加结束之后，将反应物搅拌5分钟。在-78℃下以NH4Cl饱和溶液淬灭反应混合物且以DCM萃取(两次)。将有机层收集在一起，经无水硫酸钠干燥且浓缩。经由管柱层析(EtOAc:石油醚)来纯化所获得的粗物质以产生6-氯-4-((1S)-3-氟环己基氨基)烟酸乙酯。LC/MS：SB C18，4.6×50mm，5μm；溶剂A＝10％MeOH:90％H2O:0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH:10％H2O:0.1％TFA；历经2分钟的梯度0-100％B(3分钟操作时间)；保留时间：1.981min；LCMS(ES-API),m/z 301(M+H)。
步骤2：合成6-氯-4-((1S)-3-氟环己基氨基)烟酸：根据关于合成实例5步骤3所述的相同方法，使用6-氯-4-((1S)-3-氟环己基氨基)烟酸酯。LC/MS：SB C18，4.6×50mm，5μm；溶剂A＝10％MeOH:90％H2O:0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH:10％H2O:0.1％TFA；历经2分钟的梯度0-100％B(3分钟操作时间)；保留时间：1.393min；LCMS(ES-API),m/z273.0(M+H)。
步骤3：合成6-氯-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)-4-((1S)-3-氟环己基氨基)烟酰胺：根据关于合成实例5步骤4所述的方法，使用(R)-4-氨基-3-氟-2-甲基丁-2-醇及6-氯-4-((1S)-3-氟环己基氨基)烟酸。
步骤4：合成6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)-4-(3-氟环己基氨基)烟酰胺：根据关于合成实例5步骤2所述的方法，使用6-氯-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)-4-((1S)-3-氟环己基氨基)烟酰胺及苯并[d]噻唑-6-胺。1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ1.16-1.17(m,6H),1.55-1.91(m,9H),3.36-3.40(m,2H),3.61-3.73(m,1H),4.26-4.41(m,1H),4.76-4.88(m,2H),6.07(s,1H),7.55-7.58(m,1H),7.93-7.96(m,1H),8.42-8.45(m,3H),8.64-8.66(m,1H),9.15(s,1H),9.23(s,1H)。LC/MS：Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mMNH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.658min；LCMS(ES-API),m/z 490.2(M+H)。HPLC：Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经30分钟(36分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：6.395min。
实例330
步骤1：合成6-氯-4-((1R,2R)-2-羟基环戊氨基)烟酸乙酯：根据关于合成实例5步骤1概述的相同方法，使用4,6-二氯烟酸乙酯及(1R,2R)-2-氨基环戊醇。LC/MS：AscentisExpress C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：1.786min；LCMS(ES-API),m/z285.2(M+H)。
步骤2：向含6-氯-4-(((1R,2R)-2-羟基环戊基)氨基)烟酸乙酯(1.3g，4.57mmol)的THF(10mL)、MeOH(4mL)及水(2mL)中添加LiOH(0.328g，13.7mmol)且在室温下搅拌18小时。蒸发有机层且以1.5N HCl将粗混合物的pH值调节至6以沉淀粗酸。过滤固体且在真空下干燥，产生6-氯-4-(((1R,2R)-2-羟基环戊基)氨基)烟酸(0.95mg，81％产率)。LCMS(ES-API),m/z 257.4(M+H)。
步骤3：向6-氯-4-(((1R,2R)-2-羟基环戊基)氨基)烟酸(900mg，3.51mmol)及(R)-4-氨基-3-氟-2-甲基丁-2-醇(425mg，3.51mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(1333mg，3.51mmol)及DIPEA(0.612mL，3.51mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。在真空下移除DMF且以水稀释粗物质且以乙酸乙酯萃取。以NaHCO3洗涤乙酸乙酯层，随后干燥且浓缩以产生1.4g粗物质，将其藉由管柱层析(CHCl3:MeOH：9.5/0.5)来纯化以提供产物。LCMS m/z 360.5(M+H)。
步骤4：根据关于合成实例5步骤2所述的方法，使用6-氯-N-((R)-2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)-4-(((1R,2R)-2-羟基环戊基)氨基)烟酰胺及喹唑啉-6-胺。1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ1.16-1.17(m,6H),1.39-1.44(m,1H),1.54-1.87(m,5H),2.17-2.21(m,1H),3.35-3.39(m,1H),3.50-3.52(m,1H),3.55-3.65(m,1H),3.91-3.94(m,1H),4.27-4.42(m,1H),4.81(d,J＝0.80Hz,1H),4.97-4.98(m,1H),6.24(s,1H),7.90-7.92(m,1H),8.03-8.05(m,1H),8.40-8.42(m,1H),8.48-8.50(m,2H),8.62(d,J＝2.40Hz,1H),9.09(s,1H),9.39(s,1H),9.57(s,1H)。LC/MS：Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.658min；LCMS(ES-API),m/z 469.2(M+H)。HPLC：Eclipse XDB C18(150×4.6mm)5微米；溶剂A＝含20mM NH4OAc的水；溶剂B＝ACN；梯度0-100％B经20分钟；流动速率＝1.0ml/min；保留时间：7.946min。
根据关于上文制备实例330概述的通用方法来制备表7中的实例。
表7
合成6-氯-4-((1R)-2-氟环戊氨基)烟酸乙酯：将6-氯-4-(((2S)-2-羟基环戊基)氨基)烟酸乙酯(1.0g，1当量)于DCM(15mL)中的溶液冷却至0℃。逐滴添加DAST(0.7mL，1.5当量)。将反应混合物在室温下搅拌隔夜。再次将反应混合物冷却至0℃且以10％NaHCO3溶液淬灭。将产物萃取于DCM中。将水层以DCM洗涤(两次)。合并有机萃取物，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由急骤管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚来纯化粗产物以获得所需产物。LC/MS：Ascentis Express C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mMNH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：2.013min；LCMS(ES-API),m/z 287.2(M+H)。
合成(R)-6-氯-4-(2-氧代环戊氨基)烟酸乙酯：向6-氯-4-(((2S)-2-羟基环戊基)氨基)烟酸乙酯(0.5g，1当量)于DCM(20mL)中的溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(Dess-MartinPeriodinane)(2.98g，4当量)且将反应混合物在室温下搅拌10分钟。浓缩反应混合物且将残余物溶解于乙酸乙酯中且经床过滤。浓缩滤液。藉由急骤管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚来纯化粗产物以获得所需产物。LC/MS：Ascentis Express C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：1.863min；LCMS(ES-API),m/z 283.2(M+H)。
合成(R)-6-氯-4-(2,2-二氟环戊氨基)烟酸乙酯：将含6-氯-4-((2-氧代环戊基)氨基)烟酸乙酯(0.57g，1当量)的DCM(10mL)冷却至0℃。向反应混合物中逐滴添加DAST(0.67mL，2.5当量)且使其在室温下隔夜。将反应混合物在0℃下以DCM稀释，以10％NaHCO3淬灭。收集有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由急骤管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚来纯化粗产物以获得所需产物。LC/MS：Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：2.017min；LCMS(ES-API),m/z 305(M+H)。
如表8中突出的含有氟-环戊基取代的实例可使用前文所述方法的变化形式，由6-氯-4-((1R)-2-氟环戊氨基)烟酸乙酯或(R)-6-氯-4-(2,2-二氟环戊氨基)烟酸乙酯来制备。个别立体异构体可独立制备或随后在合成序列中经由手性层析分离。
表8
实例339
1H NMR:400MHz,CD3OD:δ1.27-1.33(m,4H),1.42-1.45(m,4H),1.61-1.66(m,2H),1.87-2.01(m,5H),2.33-2.35(m,1H),3.55-3.61(m,2H),3.85-3.98(m,2H),4.83-4.85(m,1H),4.99-0.00(m,1H),6.22(s,1H),7.53-7.55(m,1H),7.92-7.97(m,1H),8.31(s,1H),8.39(d,J＝2.00Hz,1H),9.08(s,1H)。LC/MS：Ascentis Express C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：2.38min；LCMS(ES-API),m/z 530.2(M+H)。HPLC：Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经30分钟(36分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：6.878min。
实例340
1H NMR:400MHz,CD3OD:δ1.27-1.34(m,7H),1.42-1.45(m,3H),1.61-1.66(m,2H),1.86-2.03(m,2H),2.32-2.37(m,1H),3.50-3.90(m,2H),3.90-3.95(m,1H),4.62-4.99(m,1H),5.02-0.00(m,1H),6.22(s,1H),7.53-7.55(m,1H),7.92-7.98(m,1H),8.31(s,1H),8.38(d,J＝2.00Hz,1H),9.09(s,1H)。LC/MS：Ascentis Express C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：2.38min；LCMS(ES-API),m/z 530.2(M+H)。HPLC：Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经30分钟(36分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：6.759min。
实例341
1H NMR:400MHz,CD3OD:δ1.45-1.45(m,3H),1.61-1.66(m,1H),1.83-2.03(m,5H),2.33-2.35(m,1H),3.55-3.61(m,1H),3.85-3.98(m,2H),4.70-4.85(m,1H),5.00-5.01(m,1H),6.22(s,1H),7.53-7.55(m,1H),7.96-7.98(m,1H),8.30(s,1H),8.38(d,J＝2.00Hz,1H),9.09(s,1H)。LC/MS：Ascentis Express C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：2.38min；LCMS(ES-API),m/z 530.2(M+H)。HPLC：Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经30分钟(36分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：6.87min。
实例342
1H NMR:400MHz,CD3OD:δ1.42-1.45(m,3H),1.61-1.66(m,1H),1.86-2.04(m,5H),2.32-2.37(m,1H),3.48-3.69(m,2H),3.90-3.95(m,3H),4.62-4.89(m,1H),4.99-5.00(m,1H),6.22(s,1H),7.53-7.55(m,1H),7.97-7.99(m,1H),8.30(s,1H),8.37(d,J＝2.00Hz,1H),9.10(s,1H)。LC/MS：Ascentis Express C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：2.38min；LCMS(ES-API),m/z 530.2(M+H)。HPLC：Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经30分钟(36分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：6.752min。
实例358
1H NMR:400MHz,CD3OD:δ1.30(d,J＝1.60Hz,6H),1.68-1.73(m,1H),1.81-1.97(m,2H),2.16-2.26(m,2H),2.35-2.39(m,1H),3.46-3.50(m,1H),3.84-3.92(m,1H),3.95-4.05(m,1H),4.34-4.94(m,1H),6.19(s,1H),7.52(dd,J＝2.00,8.80Hz,1H),7.97(d,J＝8.80Hz,1H),8.31(s,1H),8.37-8.37(m,1H),9.09(s,1H)。LC/MS:StarRP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.604min；LCMS(ES-API),m/z 494.2(M+H)。HPLC：Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经15分钟(23分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：9.10min。
实例359
1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ1.30-1.31(m,6H),1.68-1.99(m,4H),2.18-2.28(m,2H),2.39-2.43(m,1H),3.42-3.52(m,1H),3.81-3.83(m,1H),4.02-4.13(m,1H),4.30-4.50(m,1H),6.30(s,1H),7.90-7.90(m,2H),8.36-8.42(m,1H),8.55-8.56(m,1H),8.68(d,J＝2.00Hz,1H),8.76(d,J＝2.00Hz,1H)。LC/MS：Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.658min；LCMS(ES-API),m/z 489.2(M+H)。HPLC：Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经30分钟(36分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：5.831min。
实例360
1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ1.31-1.31(m,6H),1.70-1.95(m,3H),2.01-2.10(m,1H),2.18-2.41(m,3H),3.44-3.52(m,1H),3.81-3.90(m,1H),4.03-4.07(m,1H),4.36-4.48(m,1H),6.28(s,1H),7.47-7.50(m,1H),7.79-7.82(m,1H),7.94-7.96(m,1H),8.18-8.24(m,2H),8.36(s,1H),8.68-8.69(m,1H)。LC/MS：Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.658min；LCMS(ES-API),m/z 488.2(M+H)。HPLC：Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经30分钟(36分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：5.165min。
实例361
步骤1：合成6-氯-4-(3-甲酰基环丁氨基)烟酸乙酯：在0℃下向6-氯-4-((3-(羟基甲基)环丁基)氨基)烟酸乙酯(0.6g，1当量)于DCM(35mL)中的溶液中添加戴斯-马丁高碘烷(3.57g，4当量)且将反应物在室温下搅拌30分钟。浓缩反应混合物。将残余物溶解于乙酸乙酯中，经床过滤且以乙酸乙酯洗涤。收集滤液且以10％NaHCO3溶液洗涤。收集有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由急骤层析，使用EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化粗物质以产生6-氯-4-(3-甲酰基环丁氨基)烟酸乙酯。LC/MS：StarRP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.54min；LCMS(ES-API),m/z 281.2(M-H)。
步骤2：合成6-氯-4-(3-(二氟甲基)环丁氨基)烟酸乙酯：将6-氯-4-((3-甲酰基环丁基)氨基)烟酸乙酯(0.11g，0.389mmol)于DCM(5mL)中的溶液冷却至-10℃。向反应混合物中逐滴添加DAST(0.103mL，0.78mmol)且在室温下搅拌5小时。在0℃下以饱和NaHCO3溶液淬灭反应混合物。将产物萃取至DCM中且收集有机萃取物，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由急骤层析，使用EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化粗物质以产生6-氯-4-(3-(二氟甲基)环丁氨基)烟酸乙酯。LC/MS:Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.975min；LCMS(ES-API),m/z 305.0(M+H)。
步骤3：合成4-(3-(二氟甲基)环丁氨基)-6-(3a,27a-二氢苯并[d]噻唑-6-基氨基)-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)烟酰胺：根据关于合成实例5步骤2至4概述的通用方法，使用苯并[d]噻唑-6-胺及(R)-3-氨基-2-氟丙-1-醇来制备此实例。1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ1.30-1.30(m,6H),1.97-2.08(m,4H),2.55-2.61(m,4H),3.21-3.25(m,2H),3.38-3.41(m,1H),3.80-3.94(m,3H),4.34-4.49(m,1H),5.88(s,1H),5.95(s,1H),7.51-7.53(m,1H),7.96-7.98(m,1H),8.28(s,1H),8.38(d,J＝2.00Hz,1H),9.08(s,1H)。LC/MS：AscentisExpress C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：2.38min；LCMS(ES-API),m/z492.0(M-H)。HPLC：Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经15分钟(23分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：6.291min。
实例362
步骤1：合成6-氯-4-((1S)-3-羟基环戊氨基)烟酸乙酯：根据实例5中概述的标准程序，由3-氨基环戊醇及4,6-二氯烟酸乙酯来制备此中间体。LC/MS：Acquity BEH C18 2.1×50mm，1.8微米；溶剂A＝含0.1％TFA的水；溶剂B＝含0.1％TFA的ACN；历经2分钟的梯度0-100％B；保留时间：0.70min；LCMS(ES-API),m/z 285.1(M+H)。
步骤2：合成6-氯-4-((1S)-3-氟环戊氨基)烟酸乙酯：根据关于制备6-氯-4-((1R)-2-氟环戊氨基)烟酸乙酯概述的方法，由6-氯-4-(3-羟基环戊氨基)烟酸乙酯与DAST反应来制备此中间体。LC/MS：XBridge Phe 8，4.6×30mm，3.5μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.165min；LCMS(ES-API),m/z 287.0(M+H)。
步骤3：合成6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)-4-(3-氟环戊氨基)烟酰胺(非对映异构体1)：根据关于合成实例5步骤2至4概述的通用方法，使用苯并[d]噻唑-6-胺及(R)-3-氨基-2-氟丙-1-醇来制备此实例。经由制备型手性HPLC分离个别非对映异构体。1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ1.29-1.33(m,6H),1.61(s,2H),1.84-1.92(m,1H),1.94-1.98(m,1H),2.17-2.22(m,3H),3.05-3.14(m,1H),3.43-3.51(m,2H),3.73-3.90(m,3H),4.30-4.50(m,1H),5.10-5.35(m,1H),6.05(s,1H),7.52(dd,J＝2.00,8.80Hz,1H),7.96-7.98(m,1H),8.26(s,1H),8.38(d,J＝2.00Hz,1H),9.07(s,1H)。LC/MS：Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.658min；LCMS(ES-API),m/z 476.2(M+H)。HPLC：Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经15分钟(23分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：5.904min。
实例363
合成6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)-4-(3-氟环戊氨基)烟酰胺(非对映异构体2)：1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ1.29-1.34(m,6H),1.83-1.98(m,2H),2.17-2.22(m,2H),3.06(q,J＝21.60Hz,2H),3.40-3.45(m,1H),3.79-3.90(m,3H),4.30-4.50(m,1H),5.10-5.35(m,1H),6.05(s,1H),7.52(dd,J＝2.40,8.60Hz,1H),7.96-7.98(m,1H),8.26(s,1H),8.37(d,J＝2.00Hz,1H),9.08(s,1H)。LC/MS：Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.658min；LCMS(ES-API),m/z 476.2(M+H)。HPLC：Sunfire C18(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经15分钟(23分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：5.906min。
实例364
合成6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)-4-(3-氟环戊氨基)烟酰胺(非对映异构体3)：1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ1.29-1.34(m,6H),1.62-2.00(m,3H),2.17-2.30(m,1H),2.31-2.33(m,2H),2.35-2.55(m,2H),3.44-3.50(m,1H),3.78-3.87(m,1H),4.05-4.09(m,1H),4.33-4.48(m,1H),5.13-5.35(m,1H),6.09(s,1H),7.52-7.55(m,1H),7.96-7.99(m,1H),8.40(d,J＝2.00Hz,1H),9.08(s,1H)。LC/MS：Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.658min；LCMS(ES-API),m/z 476.2(M+H)。HPLC：XBridge(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经15分钟(23分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：7.099min。
实例365
合成6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)-4-(3-氟环戊氨基)烟酰胺(非对映异构体4)：1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ1.24-1.29(m,6H),1.30-1.40(m,3H),1.64-1.90(m,1H),1.97-2.26(m,2H),2.28-2.47(m,1H),2.49-2.54(m,1H),3.03-3.09(m,2H),3.40-3.50(m,1H),3.65-3.95(m,1H),4.01-4.12(m,1H),4.30-4.50(m,1H),5.15-5.35(m,1H),6.10(s,1H),6.75(s,1H),7.52-7.55(m,1H),8.03-8.05(m,1H),8.32(d,J＝2.00Hz,1H),9.15(s,1H)。LC/MS：Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.658min；LCMS(ES-API),m/z 476.2(M+H)。HPLC：XBridge(150×4.6mm)，3.5微米；溶剂A＝5％ACN:95％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；溶剂B＝95％ACN:5％H2O:0.05％TFA pH＝2.5；梯度0-100％B经15分钟(23分钟操作时间)；流动速率：1.0μl/min；保留时间：7.119min。
实例366
向(S)-6-氯-4-(环丙氨基)-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)烟酰胺(110mg，0.348mmol)于二噁烷(11mL)中的溶液中添加苯并[d]噻唑-6-胺(62.8mg，0.418mmol)及水(2mL)。将混合物以氮气净化，随后添加xantphos(81mg，0.4mmol)、碳酸钠(148mg，1.4mmol)且再次以氮气净化。添加Pd2(dba)3(128mg，0.139mmol)且随后以氮气净化5分钟。密封反应且在110℃下加热18小时。冷却之后，将混合物浓缩，溶解于10％MeOH/CHCl3中，经床过滤且浓缩以获得棕色固体。经由制备型TLC纯化产物以产生(S)-6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(环丙氨基)-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)烟酰胺(22mg，15％产率)。LCMS(ES-API),m/z 430.3(M+H)；1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ9.35(s,1H),9.16(s,1H),8.66(d,J＝2.0Hz,1H),8.41(m,1H),8.33(m,1H),7.95(d,J＝8.8Hz,1H),7.61(dd,J＝9.2,2.4Hz,1H),6.42(s,1H),4.80(s,1H),4.26(dd,J＝8.8,2.0Hz,1H),3.63(m,1H),3.36(m,1H),1.67(2s,6H),0.78(m,2H),0.56(m,2H)；HPLC：保留时间：5.70min.，条件B。
实例367
向(R)-6-氯-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)-4-(异丙基氨基)烟酰胺(2g，6.29mmol)于1,4-二噁烷(50mL)中的溶液中添加6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(0.957g，6.29mmol)及xantphos(1.457g，2.52mmol)且脱气10分钟。添加碳酸铯(8.20g，25.2mmol)且脱气10分钟，随后添加Pd2(dba)3(2.305g，2.52mmol)且脱气15分钟，随后密封且在150℃下加热16小时。冷却反应物且经过滤。在真空下移除溶剂。藉由管柱层析(甲醇4％/氯仿)来纯化残余物且收集产物级分并浓缩。经由制备型HPLC进一步纯化，产生呈灰白色固体状的(R)-N-(2-氟-3-羟基-3-甲基丁基)-6-((6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)氨基)-4-(异丙基氨基)烟酰胺(1.2g，44％产率)。LCMS(ES-API),m/z 434.2(M+H)；1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ9.56(s,1H),9.27(d,J＝6.0Hz,1H),8.57(t,J＝5.2Hz,1H),8.50(d,J＝6.8Hz,1H),8.47(s,1H),8.00(d,J＝2.4Hz,1H),7.81(s,1H),6.31(d,J＝2.0Hz,1H),4.81(s,1H),4.35(dd,J＝2.0,49Hz,1H),3.70(m,2H),3.38(m,1H),1.29(d,J＝6.0Hz,2H),1.16(m,2H)；HPLC：保留时间：11.24min.，条件B。
表8
根据前文所述的多种程序，适当时用各种胺取代以提供所述实例来制备表9中的实例。
表9
合成各种中间体：
步骤1：合成((2S,3S)-3-苯基环氧乙烷-2-基)甲醇：将(-)-DIPT(0.524g，0.075当量)溶解于DCM(250mL)中且冷却至-30℃。相继添加分子筛(1.6g)、异丙醇钛(IV)(0.437mL，0.05当量)及氢过氧化叔丁基(TBHP于癸烷中)(5.78mL，2当量)。使混合物搅拌1小时，向反应混合物中添加含(E)-3-苯基丙-2-烯-1-醇(4g，1当量)的DCM(10mL)且在-30℃下搅拌3小时。将反应物先后以8mL 10％NaOH水溶液及盐水溶液淬灭。使反应物升温至10℃且在10℃下搅拌10分钟。向反应混合物中添加无水硫酸钠(2g)及(2g)且再搅拌50分钟。随后经垫过滤反应混合物。以***洗涤残余物且浓缩滤液。藉由急骤管柱层析，使用乙酸乙酯:石油醚作为洗脱剂来纯化粗产物以产生((2S,3S)-3-苯基环氧乙烷-2-基)甲醇。1H NMR:400MHz,CDCl3:δ1.19-1.29(m,1H),4.33(t,J＝4.80Hz,2H),6.34-6.41(m,1H),6.61-6.65(m,1H),7.23-7.27(m,1H),7.30-7.38(m,4H)。
步骤2：合成(2R,3R)-3-氨基-3-苯基丙-1,2-二醇：向((2S,3S)-3-苯基环氧乙烷-2-基)甲醇(0.5g，1当量)于2-丙醇(5mL)中的溶液中添加NH4OH水溶液(10mL)。将反应混合物在84℃下加热12小时。浓缩反应混合物且使粗物质与甲苯(3×30mL)共沸以产生(2R,3R)-3-氨基-3-苯基丙-1,2-二醇。化合物不经纯化即用于下一步骤。
合成3-(二苄氨基)环丁烷甲酸乙酯：将3-氧代环丁烷甲酸乙酯(5.0g，1当量)溶解于10％乙酸水溶液(25mL)与THF(25mL)的混合物中。相继添加三乙酰氧基硼氢化钠(14.9g，2当量)及二苄基胺(6.94g，1当量)。将反应混合物在室温下搅拌14小时。随后浓缩反应混合物以移除过量溶剂且将残余物溶解于DCM中，先后以水以及10％NaHCO3水溶液及盐水溶液洗涤。收集有机层且经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由急骤层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化粗产物以获得所需产物。1H NMR 400MHz,CD3OD:δ1.22-1.26(m,3H),2.03-2.12(m,2H),2.19-2.26(m,2H),2.69-2.71(m,1H),3.11-3.15(m,1H),3.51(d,J＝2.40Hz,4H),4.11(q,J＝7.20Hz,2H),7.22-7.34(m,10H)。
合成3-氨基环丁烷甲酸乙酯：将溶解于乙醇(48mL)、水(3mL)及乙酸(0.2mL)的混合物中的3-(二苄氨基)环丁烷甲酸乙酯(1.0g，1当量)以N2脱气。在惰性条件下向反应混合物中添加10％Pd/C(0.5g，1.1当量)。将反应混合物于高压釜中在42psi下在室温下氢化18小时。经过滤反应混合物且浓缩以获得3-氨基环丁烷甲酸乙酯。1H NMR400MHz,CD3OD:δ1.29-1.30(m,3H),2.23-2.29(m,2H),2.56-2.63(m,2H),2.96-3.01(m,1H),3.63-3.67(m,1H),4.16(q,J＝7.20Hz,2H)。
合成(3-(二苄氨基)环丁基)甲醇：将3-(二苄氨基)环丁烷甲酸乙酯(4.0g，1当量)于THF(50mL)中的溶液冷却至-10℃。向反应混合物中分部分添加硼氢化锂(0.404g，1.5当量)。添加结束之后，使反应物升温至室温且搅拌18小时。反应混合物以乙酸乙酯稀释，冷却至0℃且使用NH4Cl饱和溶液淬灭。收集有机层且经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由急骤层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化粗产物以获得所需产物(3-(二苄氨基)环丁基)甲醇。LC/MS：Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mM NH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.955min；LCMS(ES-API),m/z 282.2(M+H)。
合成(3-氨基环丁基)甲醇：使用关于制备3-氨基环丁烷甲酸乙酯所述的反应程序，自(3-(二苄氨基)环丁基)甲醇获得(3-氨基环丁基)甲醇。1H NMR 400MHz,CD3OD:δ3.61-3.66(m,1H),3.55(d,J＝5.20Hz,2H),3.33-3.34(m,2H),2.40-2.47(m,2H),2.22-2.38(m,2H),1.92-1.98(m,3H)。
合成2-(3-(二苄氨基)环丁基)丙-2-醇：将3-(二苄氨基)环丁烷甲酸乙酯(1.5g，4.6mmol)溶解于THF(30mL)中且冷却至-50℃。逐滴添加溴化甲基镁(1.6mL，13.9mmol)且将混合物在室温下搅拌20小时。TLC指示部分转化。再次将反应混合物冷却至-15℃且另外添加3当量溴化甲基镁(1.603mL，13.91mmol)且将反应混合物在室温下搅拌3小时。将反应混合物冷却至0℃且以饱和NH4Cl溶液淬灭。以乙酸乙酯萃取水层(3次)且将经合并的有机萃取物经Na2SO4干燥，过滤且浓缩以获得呈液体状的粗产物。藉由管柱层析(EA/石油醚15％)纯化粗产物以获得呈无色液体状的2-(3-(二苄氨基)环丁基)丙-2-醇(1.4g，88％产率)。LC/MS：Star RP-18，4×55mm，3μm；溶剂A＝10％ACN:90％H2O:20mMNH4OAc；溶剂B＝90％ACN:10％H2O:20mM NH4COOAc；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：2.201min；LCMS(ES-API),m/z 310.2(M+H)。
合成2-(3-氨基环丁基)丙-2-醇：将2-(3-(二苄氨基)环丁基)丙-2-醇(1.6g，5.17mmol)溶解于乙醇(45mL)中且添加10％Pd-C(0.8g，7.52mmol)、AcOH(4.8mL)且添加水(0.32mL)。随后将反应混合物在高压釜中在3kg psi下氢化18小时。反应混合物经过滤，以MeOH洗涤且浓缩以获得呈无色液体状的产物(0.63g，94％产率)。LCMSm/z 130.1(M+H)；1H NMR 400MHz,CD3OD:δ3.53-3.57(m,1H),2.29-2.35(m,2H),2.13-2.20(m,1H),2.02-2.07(m，2H)1.12-1.18(m，6H)。
合成6-硝基苯并[d]噁唑：向搅拌的2-氨基-5-硝基苯酚(0.5g，1当量)于原甲酸三乙酯(2.7mL，5当量)中的溶液中添加对甲苯磺酸单水合物(0.031g，0.5当量)。将混合物在80℃下加热1小时。随后将反应混合物冷却至0℃且过滤所形成的沉淀且以冰冷***及水洗涤。将固体物质在真空下干燥以产生6-硝基苯并[d]噁唑(0.38g，72％产率)。1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ9.12(s,1H),8.79(s,1H),8.34(d,J＝8.40Hz,1H),8.07(d,J＝8.80Hz,1H)。
合成苯并[d]噁唑-6-胺：将6-硝基苯并[d]噁唑(0.5g，1当量)于甲苯(10mL)中的溶液以N2脱气5分钟。向反应混合物中添加Pd/C(10％w/w)(0.324g，1当量)且在H2氛围下在室温下搅拌14小时。在起始物质完全消耗之后，经过滤反应混合物且以1:1的EtOAc:MeOH洗涤。在真空下蒸发滤液以产生苯并[d]噁唑-6-胺(0.31g，77％产率)。1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ8.32(s,1H),7.39(d,J＝8.80Hz,1H),6.79(d,J＝2.00Hz,1H),6.64(dd,J＝2.00,8.40Hz,1H),5.35(s,2H)。
合成苯并[d]噻唑-2(3H)-酮：在0℃下向搅拌的CDI(2.59g，1当量)于THF(8mL)中的溶液中逐滴添加含2-氨基苯硫醇(2g，1当量)的THF(8mL)。使反应混合物在室温下搅拌12小时。随后以乙酸乙酯稀释反应混合物且先后以1.5N HCl以及10％NaHCO3溶液及盐水洗涤。收集有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化所获得的粗物质以产生苯并[d]噻唑-2(3H)-酮。LC/MS：XBridge Phe 8,4.6×30mm，3.5μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mMNH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.329min；LCMS(ES-API),m/z 150.0(M-H)。
合成6-硝基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮：在-10℃下向搅拌的苯并[d]噻唑-2(3H)-酮(0.150g，1当量)于乙酸(1mL)中的溶液中添加HNO3(0.1mL)且搅拌1小时。使反应混合物温至室温，此时产物沉淀。过滤产物且在真空下干燥以产生6-硝基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮。1HNMR 400MHz,DMSO-d6:δ8.66(d,J＝2.40Hz,1H),8.20(dd,J＝2.40,8.80Hz,1H),7.30(d,J＝8.80Hz,1H)。
合成6-氨基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮：向6-硝基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮(0.13g，1当量)于乙醇(6mL):水(3mL)中的溶液中添加氯化铵(0.36g，10当量)及铁粉(0.15g，4当量)。将反应混合物在80℃下加热2小时。冷却之后，经床过滤反应混合物。浓缩滤液且藉由急骤管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化粗产物以产生6-氨基苯并[d]噻唑-2(3H)-酮。LC/MS：XBridge Phe 8，4.6×30mm，3.5μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟(3.2分钟操作时间)；保留时间：1.052min；LCMS(ES-API),m/z 165.0(M-H)。
合成3-叠氮基环戊酮：在0℃下向环戊-2-烯酮(10g，1当量)于DCM(100mL)及AcOH(35mL，5当量)中的溶液中添加叠氮三甲基硅烷(81mL，5当量)，继而添加TEA(3.4mL，0.2当量)。使反应混合物在室温下搅拌隔夜。起始物质完全消耗之后，藉由添加水淬灭反应物。将产物萃取至DCM中(两次)且收集有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩以产生粗3-叠氮基环戊酮。GCMS:125(M):保留时间：4.445min。
合成3-氧代环戊基氨基甲酸叔丁酯：向3-叠氮基环戊酮(10g，1当量)于EtOAc(80mL)中的溶液中添加Boc2O(22.3mL，1.2当量)。以N2使溶液脱气，继而添加Pd/C(0.850g，0.1当量)。将反应混合物在周围温度下在H2氛围(14psi)下搅拌隔夜。经过滤反应混合物且以乙酸乙酯充分洗涤床。浓缩滤液。将残余物以***:己烷1:1湿磨，过滤且干燥以产生(3-氧代环戊基)氨基甲酸叔丁酯。LC/MS：Ascentis Express C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mMNH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：1.6min；LCMS(ES-API),m/z 200.9(M+H)。
合成3-羟基环戊基氨基甲酸叔丁酯：在0℃下向(3-氧代环戊基)氨基甲酸叔丁酯(2.0g，1当量)于MeOH(20mL)中的溶液中添加NaBH4(0.760g，2当量)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。在减压下移除甲醇且将残余物以饱和NH4Cl淬灭并以EtOAc萃取(两次)。以水及盐水洗涤有机层，经无水硫酸钠干燥且浓缩。藉由管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化所获得的粗物质以产生3-羟基环戊基氨基甲酸叔丁酯。LC/MS：AscentisExpress C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mM NH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：1.6min；LCMS(ES-API),m/z201.9(M+H)。
合成3-氨基环戊醇)：将(3-羟基环戊基)氨基甲酸叔丁酯(1.6g，1当量)于DCM(2mL)中的溶液冷却至0℃。向反应混合物中添加4M HCl的二噁烷溶液(6mL)且搅拌1小时。在真空下移除二噁烷以产生3-氨基环戊醇盐酸盐。1H NMR 400MHz,DMSO-d6:δ8.02-8.19(m,1H),4.12-4.23(m,2H),3.43-3.58(m,1H),2.04-2.10(m,1H),1.88-1.94(m,2H),1.66-1.75(m,2H),1.49-1.60(m,1H)。
合成3-羟基-3-甲基环戊基氨基甲酸叔丁酯：将(3-氧代环戊基)氨基甲酸叔丁酯(0.25g，1当量)于THF(10mL)中的溶液冷却至0℃。添加溴化甲基镁(3M于THF中)(0.449g，3当量)且在室温下搅拌4小时。4小时结束之后，在0℃下使用饱和NH4Cl溶液(20mL)淬灭反应混合物且在室温下搅拌10分钟。将产物萃取至乙酸乙酯中(两次)且使经合并的有机层经无水硫酸钠干燥且浓缩。藉由急骤管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚来纯化粗产物以产生(3-羟基-3-甲基环戊基)氨基甲酸叔丁酯。1H NMR:400MHz,DMSO-d6:δ7.19(bs,1H),4.42(s,1H),3.72-3.85(m,1H),2.08-2.16(m,2H),1.77-1.99(m,2H),1.50-1.66(m,2H),1.33-1.45(m,9H),1.16-1.21(m,3H)。
合成3-氨基-1-甲基环戊醇：在0℃下以甲醇盐酸盐(10mL)处理(3-羟基-3-甲基环戊基)氨基甲酸叔丁酯(0.12g)于DCM(10mL)中的溶液。将反应混合物在室温下搅拌4小时。起始物质完全消耗之后，浓缩反应混合物。使所获得的物质与MeOH共沸(两次)且在减压下浓缩以提供3-氨基-1-甲基环戊醇。
合成2-(3-(叔丁氧羰基氨基)亚环戊基)乙酸乙酯：在0℃下向搅拌的NaH(72.3mg，1.2当量)于THF(10mL)中的悬浮液中添加含膦酰基乙酸三乙酯(0.55mL，1.1当量)的THF(5mL)且使其搅拌30分钟。在0℃下向反应混合物中添加含(3-氧代环戊基)氨基甲酸叔丁酯(500mg，1当量)的THF(5mL)。使反应缓慢温至室温且搅拌12小时。随后浓缩反应混合物且将残余物以EtOAc稀释并以盐水溶液及水洗涤。分离有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由管柱层析，经由硅胶且以EtOAC:石油醚作为洗脱剂来纯化粗物质以产生2-(3-(叔丁氧羰基氨基)亚环戊基)乙酸乙酯。GCMS:269(M)；保留时间：9.051min。
合成2-(3-(叔丁氧羰基氨基)环戊基)乙酸乙酯：将2-(3-(叔丁氧羰基氨基)亚环戊基)乙酸乙酯(500mg，1当量)于MeOH(15mL)中的溶液以N2脱气，继而添加PdOH2(261mg，1当量)。使反应混合物在H2氛围下在周围温度下搅拌12小时。经过滤反应混合物。浓缩所获得的滤液以产生2-(3-(叔丁氧羰基氨基)环戊基)乙酸乙酯。1H NMR:400MHz,CDCl3:δ4.12(q,J＝6.80Hz,2H),3.66(s,1H),2.25-2.41(m,4H),1.85-1.99(m,3H),1.72-1.78(m,1H),1.61-1.65(m,1H),1.44(s,9H),1.22(t,J＝4.40Hz,3H)。
合成3-(2-羟基乙基)环戊基氨基甲酸叔丁酯：向冰冷的2-(3-(叔丁氧羰基氨基)环戊基)乙酸乙酯(400mg，1当量)于THF中的溶液中添加LAH(112mg，2当量)且将反应混合物在0℃下搅拌1小时。1小时结束之后，以硫酸钠饱和溶液淬灭反应物且过滤悬浮液。浓缩滤液以提供3-(2-羟基乙基)环戊基氨基甲酸叔丁酯。1H NMR:400MHz,CDCl3:δ3.64-3.61.89-1.99(m,2H),5(m,2H),2.24-2.31(m,1H),2.01-2.10(m,1H),1.60-1.67(m,3H),1.54-1.59(m,1H),1.41(s,9H),1.45-1.32(m,3H)。
合成2-(3-氨基环戊基)乙醇：在0℃下以4M HCl的二噁烷溶液处理3-(2-羟基乙基)环戊基氨基甲酸叔丁酯。将反应混合物搅拌1小时，随后浓缩至干以产生2-(3-氨基环戊基)乙醇。
合成N,N'-(4-氟-1,2-伸苯基)双(4-甲基苯磺酰胺)：将4-氟苯-1,2-二胺(4g，1当量)于吡啶(40mL)中的溶液冷却至0℃。缓慢添加甲苯磺酰氯(15g，2.5当量)。随后将反应混合物在室温下搅拌4小时且随后以1.5N HCl溶液淬灭。将产物于乙酸乙酯中萃取(两次)。收集有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由急骤管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化粗物质以产生N,N'-(4-氟-1,2-伸苯基)双(4-甲基苯磺酰胺)。1H NMR400MHz,DMSO-d6:δ9.34-9.38(m,2H),7.66-7.68(m,2H),7.53-7.55(m,2H),7.35-7.39(m,4H),6.80-6.90(m,3H),2.37(s,6H)。
合成N,N'-(4-氟-5-硝基-1,2-伸苯基)双(4-甲基苯磺酰胺)：将含N,N'-(4-氟-1,2-伸苯基)双(4-甲基苯磺酰胺)(4g，1当量)的乙酸(40mL)冷却至0℃。缓慢添加发烟HNO3(0.96mL，2.5当量)。随后使反应混合物在室温下搅拌4小时。4小时结束之后，将反应混合物倾入冰冷水中。产物沉淀且搅拌5分钟并过滤以产生N,N'-(4-氟-5-硝基-1,2-伸苯基)双(4-甲基苯磺酰胺)。
合成4-氟-5-硝基苯-1,2-二胺：向N,N'-(4-氟-5-硝基-1,2-伸苯基)双(4-甲基苯磺酰胺)(0.4g，0.83mmol)于水(0.5mL)中的溶液中添加H2SO4(1mL，37.5mmol)。将反应混合物在80℃下加热1小时。将反应混合物冷却至室温，随后添加水以溶解固体。添加氨水以中和反应物且形成红色溶液。以乙酸乙酯萃取混合物(3×)且将经合并的有机萃取物以水洗涤，干燥且浓缩以产生4-氟-5-硝基苯-1,2-二胺(0.12g，84％产率)。LCMS m/z 170.0(M-H)。
合成5-氟-6-硝基苯并[c][1,2,5]噻二唑：以三乙胺(2.3mL，4当量)处理4-氟-5-硝基苯-1,2-二胺(2g，1当量)于DCM(40mL)中的溶液且冷却至0℃。向反应混合物中添加亚硫酰氯(0.6mL，2当量)且在室温下搅拌6小时。浓缩反应混合物且藉由急骤管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化粗物质以提供5-氟-6-硝基苯并[c][1,2,5]噻二唑。
合成6-氟苯并[c][1,2,5]噻二唑-5-胺：向5-氟-6-硝基苯并[c][1,2,5]噻二唑(0.6g，1当量)于乙醇(10mL):水(2mL)中的溶液中添加氯化铵(2.2g，5当量)及铁粉(2.3g，5当量)。使反应混合物在80℃下回流2小时。2小时结束之后，经床过滤反应混合物。浓缩滤液以得到粗产物，将其藉由急骤管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化以产生6-氟苯并[c][1,2,5]噻二唑-5-胺。LC/MS：SB C18，4.6×50mm，5μm；溶剂A＝10％MeOH:90％H2O:0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH:10％H2O:0.1％TFA；历经2分钟的梯度0-100％B(3分钟操作时间)；保留时间：1.197min；LCMS(ES-API),m/z 170.0(M+H)。
合成5-溴苯并[c][1,2,5]噁二唑1-氧化物：向搅拌的4-溴-2-硝基苯胺(50g，230mmol)于乙醇(500mL)中的溶液中添加(38.8g，691mmol)。反应物变成红棕色且在60℃下加热2小时。冷却至0℃之后，经5至10分钟时间添加次氯酸钠溶液(501mL，8110mmol)且随后搅拌20分钟。在保持冷却同时过滤固体且以冷水(500mL)洗涤。获得浅微绿黄色固体且在真空下干燥以产生5-溴苯并[c][1,2,5]噁二唑1-氧化物(42g，83％产率)。GCMS：214(M)；保留时间：7.143min；1H NMR 400MHz,CDCl3:δ7.76(br s,1H),7.36(br s,2H)。
合成5-溴苯并[c][1,2,5]噁二唑：向搅拌的5-溴苯并[c][1,2,5]噁二唑1-氧化物(42g，195mmol)于乙醇(420mL)中的浆状物中添加亚磷酸三乙酯溶液(35.2mL，201mmol)。添加亚磷酸三乙酯之后，反应物质变成深棕色。将反应物加热至60℃，保持1小时。将混合物冷却至0℃且添加石油醚(200mL)并搅拌10分钟。浓缩反应物质以产生棕色液体。经由管柱层析(1％EA/PE)来纯化粗产物以产生呈浅橙色松软固体状的5-溴苯并[c][1,2,5]噁二唑(26g，66％产率)。GCMS：198(M)；保留时间：5.797min；1H NMR 400MHz,CDCl3:δ8.09(s,1H),7.76(dd,J＝0.8,9.2Hz,1H),7.48(dd,J＝1.6,9.6Hz,1H)。
合成苯并[c][1,2,5]噁二唑-5-胺：向搅拌的5-溴苯并[c][1,2,5]噁二唑(25g，126mmol)于NMP(28mL)中的溶液中添加氨溶液(300mL)及铜粉(1.63g，26mmol)。将反应混合物在60℃下加热14小时。经过滤反应物质且以乙酸乙酯(500mL)充分洗涤。亦以水(500mL)及氨溶液(250mL)洗涤滤液。以盐水溶液(200mL)洗涤乙酸乙酯层。分离有机层，经Na2SO4干燥且浓缩以产生黄色固体，将其经由管柱层析(20％EA/PE)来纯化以产生呈微绿黄色松软固体状的苯并[c][1,2,5]噁二唑-5-胺(13.5g，79％产率)。1H NMR 400MHz,DMSO-d6:δ7.75(dd,J＝0.4,9.6Hz,1H),7.14(dd,J＝2.0,9.6Hz,1H),6.42(br s,2H),6.35(s,1H)。
合成5-硝基苯并[c]异噻唑：将5-硝基苯并[c]异噻唑-3-胺(4.0g，1当量)于1,4-二噁烷(120mL)中的溶液冷却至0℃。向反应混合物中添加亚硝酸异戊酯(11.56mL，4.2当量)。使反应混合物缓慢达至室温且搅拌隔夜。浓缩反应混合物以移除过量溶剂。藉由急骤管柱层析，使用二氧化硅及EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化粗产物以获得5-硝基苯并[c]异噻唑(3.5g，80％产率)。GCMS：180(M)；保留时间：8.191min。
合成苯并[c]异噻唑-5-胺：在0℃下向5-硝基苯并[c]异噻唑(4.0g，1当量)于乙醇(24mL)及水(6mL)中的溶液中添加浓HCl(0.3mL，9.87mmol)及铁粉(0.5g，0.4当量)。使反应混合物回流2小时。2小时结束之后，经过滤反应混合物且以DCM充分洗涤床。浓缩滤液以获得苯并[c]异噻唑-5-胺(3.1g，74％产率)。LC/MS：Ascentis Express C18，5×2.1mm，2.7μm；溶剂A＝2％ACN:98％H2O:10mM NH4COOH；溶剂B＝98％ACN:2％H2O:10mMNH4COOH；梯度0-100％B经1.5分钟；保留时间：1.0min；LCMS(ES-API),m/z 10.4(M+H)。
合成6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪：向6-氯哒嗪-3-胺(2g，15.4mmol)于正丁醇(15mL)中的溶液中添加2-氯乙醛(1.2g，15.4mmol)。将反应混合物在回流下加热14小时。将反应混合物在冰浴中冷却，此导致产物沉淀。过滤所获得的固体，以冷正丁醇及***洗涤。将固体物质溶解于最小量水中且缓慢添加1N NaOH溶液。将产物萃取至乙酸乙酯中。有机层以10％NaHCO3溶液洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩以产生6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪(2.1g，86％产率)。LCMS m/z 154.5(M+H)；1H NMR 400MHz,DMSO-d6:δ8.35(s,1H),8.23(d,J＝9.60Hz,1H),7.86(d,J＝1.20Hz,1H),7.37(d,J＝9.20Hz,1H)。
合成咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺：将6-氯咪唑并[1,2-b]哒嗪(0.5g，3.26mmol)与氨(8mL，3.26mmol)的混合物加热至180℃，保持16小时。浓缩反应物且藉由制备型HPLC纯化以产生咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺(120mg，27％产率)。LC/MS：SB C18，4.6×50mm，5μm；溶剂A＝10％MeOH:90％H2O:0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH:10％H2O:0.1％TFA；历经2分钟的梯度0-100％B(3分钟操作时间)；保留时间：0.136min；LCMS(ES-API),m/z 135.2(M+H)；1H NMR 400MHz,CD3OD:δ7.61(m,2H),7.41(s,1H),6.72(m,1H)。
合成6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪：向搅拌的6-氯哒嗪-3-胺(1g，7.72mmol)于EtOH(20mL)中的溶液中添加2-氯丙醛(0.857g，9.26mmol)。将混合物在回流下加热18小时，随后浓缩。将粗残余物溶解于水中且以固体碳酸氢钠中和(pH＝7)。过滤所形成的沉淀且以水洗涤以产生6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(0.920g，69％产率)。1H NMR 400MHz,DMSO-d6:δ8.19(d,J＝9.6Hz,1H),7.71(d,J＝0.4Hz,1H),7.32(d,J＝9.60Hz,1H)。
合成N-(4-甲氧基苄基)-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺：向6-氯-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(0.900g，5.37mmol)于DMSO(3.00mL)中的溶液中添加(4-甲氧基苯基)甲胺(3.68g，26.9mmol)且将混合物加热至150℃，保持5小时。藉由添加水使化合物自反应沉淀且藉由过滤分离沉淀并以***连续洗涤以产生N-(4-甲氧基苄基)-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺(0.910g，63％产率)。
合成3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺：将N-(4-甲氧基苄基)-3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺(0.8g，2.98mmol)与TFA(5mL)的混合物在65℃下加热2小时。移除TFA且将残余物溶解于EtOAc中并以2N NaOH水溶液洗涤。中和期间，反应产物自EtOAc溶液沉淀。藉由过滤分离产物且以***洗涤以产生3-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺(0.27g，53％产率)。LCMSm/z 149.2(M+H)。
合成6-氯-2-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪：向搅拌的6-氯哒嗪-3-胺(0.5g，3.86mmol)于EtOH(5mL)中的溶液中添加1-氯丙-2-酮(0.429g，4.63mmol)且混合物在回流下加热18小时。冷却混合物且移除溶剂以提供粗残余物，将其溶解于水中且以固体碳酸氢钠中和(pH＝7)。过滤所形成的沉淀且以水洗涤以产生6-氯-2-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(0.516g，80％产率)。1H NMR 400MHz,DMSO-d6:δ8.12(s,1H),8.08(d,J＝8.8Hz,1H),7.29(d,J＝9.6Hz,1H),2.40(s,3H)。
合成N-(4-甲氧基苄基)-2-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺：将(4-甲氧基苯基)甲胺(2.046g，14.9mmol)添加至6-氯-2-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪(0.5g，2.98mmol)于DMSO(2mL)中的溶液中且混合物加热至150℃，保持5小时。藉由添加水使化合物自反应沉淀。藉由过滤分离沉淀且以***连续洗涤以产生呈黄色固体状的N-(4-甲氧基苄基)-2-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺(0.648g，65％产率)。LCMS m/z 269.2(M+)。
合成2-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺：将N-(4-甲氧基苄基)-2-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺(0.6g，2.24mmol)与TFA(3mL)混合且在65℃下加热2小时。在真空下蒸发溶剂。将残余物溶解于EtOAc中且以2N NaOH水溶液洗涤。中和期间，反应产物自EtOAc溶液沉淀。藉由过滤分离产物且以***洗涤以产生2-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺(0.21g，60％产率)。LCMS m/z 149.2(M+H)。
合成5-(叔丁氧羰基氨基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸乙酯：将吡啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(10g，1当量)及O-(2,4-二硝基苯基)羟基胺(11.28g，1.1当量)于THF(100mL)及水(100mL)中的溶液在密封管中在封闭条件下在45℃下加热12小时。在减压下浓缩反应混合物且将粗产物溶解于DMF(200mL)中。向反应混合物中添加K2CO3(14.23g，2当量)及丙酸乙酯(6.06g，1.2当量)且在室温下搅拌24小时。在减压下浓缩反应混合物以移除过量DMF。将粗物质以水稀释且于乙酸乙酯中萃取(两次)。使经合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由急骤管柱层析，使用二氧化硅及EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化粗产物以获得5-(叔丁氧羰基氨基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸乙酯(7g，45％产率)。LC/MS：Acquity BEHC18 2.1×50mm，1.8微米；溶剂A＝含0.1％TFA的水；溶剂B＝含0.1％TFA的ACN；历经2分钟的梯度0-100％B；保留时间：0.96min；LCMS(ES-API),m/z 306.17(M+H)。1H NMR 400MHz,MeOD4:δ8.51(d,J＝6.8Hz,1H),8.34(s,1H),8.29(s,1H),7.17(dd,J＝7.2,2.4Hz,1H),4.37(q,J＝7.2Hz,2H),1.57(s,9H),1.43(t,J＝7.2Hz,3H)。
合成吡唑并[1,5-a]吡啶-5-胺：将5-((叔丁氧羰基)氨基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸乙酯(4g，1当量)溶解于40％H2SO4(40mL)中且在回流下加热6小时。浓缩反应混合物且将粗产物以饱和氢氧化钠溶液碱化且以乙酸乙酯萃取(两次)。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩以产生吡唑并[1,5-a]吡啶-5-胺(1.3g，75％产率)。LC/MS：SBC18，4.6×50mm，5μm；溶剂A＝10％MeOH:90％H2O:0.1％TFA；溶剂B＝90％MeOH:10％H2O:0.1％TFA；历经2分钟的梯度0-100％B(3分钟操作时间)；保留时间：0.27min；LCMS(ES-API),m/z 134.2(M+H)；1H NMR 400MHz,DMSO-d6:δ7.76(d,J＝7.6Hz,1H),7.65(d,J＝2.0Hz,1H),6.41(m,1H),6.31(dd,J＝2.4,7.6Hz,1H),5.99(m,1H),5.55(br s,2H)。
合成2,2,2-三氟-N-(吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)乙酰胺：在0℃下将TFAA(0.636mL，1.2当量)添加至吡唑并[1,5-a]吡啶-5-胺(0.5g，1当量)及TEA(0.680mL，1.3当量)于DCM(10mL)中的溶液中。1小时之后，移除溶剂且将残余物于水中湿磨，搅拌5分钟且随后过滤且干燥以产生呈棕色固体状的2,2,2-三氟-N-(吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)乙酰胺(0.42g，49％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.50(s,1H),8.71(d,J＝7.6Hz,1H),8.15(d,J＝2Hz,1H),8.00(d,J＝2Hz,1H),7.10(dd,J＝2.4,7.6Hz,1H),6.64(dd,J＝0.4,2.2Hz,1H)。
合成2,2,2-三氟-N-(3-氟吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)乙酰胺：在室温下向2,2,2-三氟-N-(吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)乙酰胺(0.2g，1当量)于乙腈(5mL)中的溶液中添加1-氟-4-羟基-1,4-二氮鎓双环[2,2,2]辛烷双(四氟硼酸盐)(0.304g，1当量)且搅拌16小时。浓缩反应混合物且于EtOAc(25mL)中稀释并先后以饱和NaHCO3溶液及盐水洗涤。收集有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。藉由硅胶管柱层析，以EtOAc:石油醚(3:7)作为洗脱剂来纯化粗产物以产生呈灰白色固体状的2,2,2-三氟-N-(3-氟吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)乙酰胺(0.08 g，37％产率)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ11.49-11.58(m,1H),8.60-8.72(m,1H),8.12-8.14(m,1H),7.99-8.07(m,1H),7.08-7.12(m,1H)。
合成3-氟吡唑并[1,5-a]吡啶-5-胺：向2,2,2-三氟-N-(3-氟吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)乙酰胺(0.2g，0.81mmol)于甲醇(2mL):水(2mL)中的溶液中添加K2CO3(0.224g，1.62mmol)且将混合物在室温下搅拌6小时。浓缩混合物且将粗产物溶解于EtOAc(25mL)中，以饱和钠NaHCO3溶液、盐水洗涤且经硫酸钠干燥且浓缩以产生呈灰白色固体状的3-氟吡唑并[1,5-a]吡啶-5-胺(80mg，65％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.16-8.28(m,1H),7.65-7.76(m,1H),6.29-6.42(m,2H),5.56-5.75(m,2H)。
合成N-(3-氯吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2,2,2-三氟乙酰胺：向2,2,2-三氟-N-(吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)乙酰胺(0.2g，0.87mmol)于乙腈(5mL)中的溶液中添加NCS(0.117g，0.87mmol)且在室温下搅拌6小时。浓缩反应混合物且将粗产物溶解于EtOAc(25mL)中，以饱和钠NaHCO3溶液、盐水洗涤且经硫酸钠干燥且浓缩以产生呈棕色固体状的N-(3-氯吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2,2,2-三氟乙酰胺(0.18g，78％产率)。LCMS 263.1(M+)。
合成3-氯吡唑并[1,5-a]吡啶-5-胺：向N-(3-氯吡唑并[1,5-a]吡啶-5-基)-2,2,2-三氟乙酰胺(0.2g，0.76mmol)于甲醇(4mL)及水(4mL)中的溶液中添加K2CO3(0.210g，1.52mmol)且将混合物在室温下搅拌16小时。浓缩反应混合物且将粗产物溶解于EtOAc(25mL)中，以饱和钠NaHCO3溶液、盐水洗涤且经硫酸钠干燥且浓缩以产生呈棕色固体状的3-氯吡唑并[1,5-a]吡啶-5-胺(0.1g，71％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ5.92(s,2H),6.31(dd,J＝0.40,2.60Hz,1H),6.41(dd,J＝2.00,7.40Hz,1H),7.78(s,1H),8.29(d,J＝7.60Hz,1H)。
以与5-((叔丁氧羰基)氨基)吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸乙酯相同的方式，藉由以丁酸乙酯替代丙酸乙酯作为起始物质之一来制备5-((叔丁氧羰基)氨基)-2-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸乙酯。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.97(s,1H),8.59(dd,J＝0.4,7.6Hz,1H),8.28(d,J＝2.4Hz,1H),7.09(dd,J＝2.4,7.2Hz,1H),4.26(q,J＝7.2Hz,2H),1.52(s,9H),1.34-1.39(m,3H)。
合成2-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-胺：将5-((叔丁氧羰基)氨基)-2-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-3-甲酸乙酯(1g，3.13mmol)溶于40％H2SO4(40mL，750mmol)中且加热至回流，保持6小时。浓缩反应物且以饱和氢氧化钠溶液碱化并以乙酸乙酯(3×25mL)萃取。有机层经硫酸钠干燥且蒸发以产生呈棕色固体状的2-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-5-胺(0.28g，61％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.13(d,J＝7.2Hz,1H),6.30(d,J＝1.6Hz,1H),6.22(dd,J＝2.4,7.60Hz,1H),5.78(s,1H),5.49(s,2H),2.23(s,3H)。
合成N-(2,5-二氟苯基)乙酰胺：在0℃下向2,5-二氟苯胺(3.5g，1当量)于DCM(30mL)中的溶液中添加吡啶(3.3mL，1.5当量)。将反应混合物搅拌5分钟且添加乙酰氯(2.9mL，1.5当量)并搅拌1小时。1小时结束之后，以1.5N HCl淬灭反应物。将产物萃取至DCM中(两次)。收集有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。以***洗涤所获得的物质且干燥以产生N-(2,5-二氟苯基)乙酰胺。LC/MS：Acquity BEH C18 2.1×50mm，1.8微米；溶剂A＝含0.1％TFA的水；溶剂B＝含0.1％TFA的ACN；历经2分钟的梯度0-100％B；保留时间：0.68min；LCMS(ES-API),m/z 172.6(M+H)。
合成N-(2,5-二氟苯基)乙烷硫酰胺：向N-(2,5-二氟苯基)乙酰胺(2.6g，1当量)于苯(15mL)中的溶液中添加P2S5(6.7g，1当量)且在85℃下加热2小时。将反应混合物冷却至室温且以乙酸乙酯稀释。以10％NaOH溶液淬灭反应混合物。收集有机层，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由急骤管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化所获得的粗物质以产生N-(2,5-二氟苯基)乙烷硫酰胺。GCMS:187(M)；保留时间：7.065min。
合成5-氟-2-甲基苯并[d]噻唑：向搅拌的N-(2,5-二氟苯基)乙烷硫酰胺(0.5g，1当量)于二甲苯(10mL)中的溶液中添加碳酸铯(1.74g，2当量)且在150℃下加热24小时。将反应混合物冷却至室温且以水淬灭。将产物萃取至乙酸乙酯中，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。藉由急骤管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化所获得的粗物质以产生5-氟-2-甲基苯并[d]噻唑。GCMS：167(M)；保留时间：6.181min。
合成5-氟-2-甲基-6-硝基苯并[d]噻唑：将5-氟-2-甲基苯并[d]噻唑(0.1g，1当量)溶于H2SO4(5mL)中且冷却至0℃。向反应混合物中添加KNO3(0.12g，2当量)且搅拌4小时。以10％NaOH溶液淬灭反应物且于乙酸乙酯中萃取。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩以产生5-氟-2-甲基-6-硝基苯并[d]噻唑。GCMS：212(M)；保留时间：8.4min。
合成5-氟-2-甲基苯并[d]噻唑-6-胺：向5-氟-2-甲基-6-硝基苯并[d]噻唑(0.2g，1当量)于80％EtOH(10mL)中的溶液中先后添加浓HCl(0.5mL)及铁粉(0.23g，4.5当量)。将反应混合物在90℃下加热30分钟。以乙醇稀释反应混合物且冷却至室温。经床过滤反应混合物。浓缩滤液且将所获得的残余物分配于乙酸乙酯与10％Na2CO3的间。将产物萃取至乙酸乙酯中，经无水硫酸钠干燥，过滤且浓缩。粗物质含有所需产物以及其其他异构体(位置异构体)。藉由急骤管柱层析，使用硅胶及EtOAc:石油醚作为洗脱剂来纯化粗物质以产生所需化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ7.54(d,J＝12.00Hz,1H),7.22(d,J＝8.40Hz,1H),5.33(s,2H),2.68(s,3H)。
合成2-甲基-6-硝基苯并[d]噻唑：在0℃下向2-甲基苯并[d]噻唑(2g，1当量)中添加H2SO4且搅拌5分钟。向反应混合物中添加硝化剂(HNO3:H2SO42:1)且剧烈搅拌15分钟。随后使反应物缓慢温至周围温度且搅拌1小时。藉由倾入冰冷水中淬灭反应混合物。化合物沉淀出来，经过滤且在真空下干燥以提供2-甲基-6-硝基苯并[d]噻唑。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.78(d,J＝2.4Hz,1H),8.34(dd,J＝2.0,9.0Hz,1H),8.04(d,J＝8.8Hz,1H),2.92(s,3H)。
合成2-甲基苯并[d]噻唑-6-胺：向2-甲基-6-硝基苯并[d]噻唑(1g，5.15mmol)于EtOH/水(8:1，45mL)中的溶液中添加铁(0.86g，15.5mmol)及HCl(0.47mL)。将混合物在回流下加热2小时，冷却且经过滤。在真空下移除EtOH且将混合物分配于水与EtOAc的间。分离各层且将有机层以10％NaHCO3洗涤。干燥(Na2SO4)有机层，过滤且浓缩。经由管柱层析(5％MeOH/CHCl3)分离产物以产生2-甲基苯并[d]噻唑-6-胺(0.8g，95％产率)。LCMS165.3(M+H)。
合成吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-醇：伴随机械搅拌将1H-吡唑-5-胺(80g，963mmol)添加至装配有回流冷凝器及N2出口的1L多颈圆底烧瓶中。添加DMF(1L)及3-乙氧基丙烯酸乙酯(153g，1059mmol)，继而添加碳酸铯(471g，1444mmol)且伴随搅拌将混合物在110℃下加热18-24小时。浓缩混合物以移除DMF且随后添加水(200mL)。以EtOAc(700ml×3)及CHCl3(500mL×2)萃取混合物。使经合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤且蒸发以产生粗所需产物，将其以EtOAc(3体积)湿磨且过滤以获得呈黄色固体状的吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-醇(60g，46％产率)。LCMS m/z 136.2(M+H)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.08(s,1H),8.47(dd,J＝8.0,0.8Hz,1H),7.75(d,J＝2.0Hz,1H),5.94(d,J＝8.0Hz,1H),5.81(dd,J＝2.0,0.8Hz,1H)。
合成5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶：向装配有回流冷凝器、具有N2出口在磁力搅拌下的1L单颈圆底烧瓶中的吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-醇(60g，444mmol)于乙腈(180mL)中的混合物中添加POCl3(112mL，1202mmol)且随后在80℃下加热3小时。将混合物在冰冷的饱和NaHCO3溶液中缓慢淬灭直至pH＝7-8，且随后于EtOAC(700mL)中萃取。分离有机层且随后先后以NaHCO3溶液及盐水洗涤。以10％NaHCO3溶液(150mL)洗涤所获得的有机层，经Na2SO4干燥，过滤且蒸发以产生呈黄色固体状的5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶(65g，95％产率)。LCMS m/z154.0(M+H)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ9.18(dd,J＝7.2,0.8Hz,1H),8.29(d,J＝2.4Hz,1H),7.13(d,J＝7.2Hz,1H),6.73(dd,J＝2.4,0.8Hz,1H)。
合成吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺：向1L高压釜中的5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶(65g，423mmol)中添加NH4OH水溶液且随后在100℃下加热18-24小时。过滤经冷却的反应混合物且随后于EtOAC(250mL×4)中萃取。有机层经Na2SO4干燥且随后过滤且浓缩以产生呈黄色固体状的吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(50g，88％产率)。LCMS m/z 135.2(M+H)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.46(d,J＝7.6Hz,1H),7.76(d,J＝2.0Hz,1H),6.75(s,2H),6.20(d,J＝7.6Hz,1H),5.87(s,1H)。
合成3-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺：向搅拌的吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(0.3g，2.24mmol)于THF(15mL)中的悬浮液中添加1-氟-4-羟基-1,4-二氮鎓双环[2,2,2]辛烷双四氟硼酸盐(1.17g，3.35mmol)且将反应物搅拌16小时。浓缩混合物以获得灰白色固体及粗产物，将其藉由制备型TLC(100％EtOAc)纯化以产生呈白色固体状的3-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(70mg，20％产率)。LCMS m/z 153.0(M+H)+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(dd,J＝1.60,7.60Hz,1H),7.89(d,J＝3.60Hz,1H),6.99(bs,2H),6.22(d,J＝7.60Hz,1H)。
合成3-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺：在-78℃下向搅拌的吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(200mg，1.5mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加NCS(200mg，1.5mmol)且使反应物升温至室温并搅拌16小时。浓缩反应物，添加水且过滤固体沉淀且干燥以产生3-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(140mg，54％产率)。LCMS m/z 169.0(M+H)+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(d,J＝7.20Hz,1H),7.16(bs,2H),7.89(s,1H),6.27(d,J＝7.20Hz,1H)。
合成2-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-醇：向搅拌的3-甲基-1H-吡唑-5-胺(5.0g，51.5mmol)于DMF(50mL)中的溶液中添加Cs2CO3(33.5g，103mmol)及(E)-3-乙氧基丙烯酸乙酯(8.91g，61.8mmol)。将混合物在110℃下加热16小时。将混合物冷却至室温，添加乙酸(50mL)且在室温下搅拌30分钟。将粗固体分配于水与EtOAc的间。有机层以盐水洗涤，经Na2SO4干燥且浓缩。以EtOAc处理固体以获得呈浅黄色固体状的2-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-醇(2.5g，30％产率)。LCMS m/z 148.2(M-H)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.92(bs,1H),8.33(d,J＝8.00Hz,1H),5.82(d,J＝7.60Hz,1H),5.64(s,1H),2.21(s,3H)。
合成5-溴-2-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶：在室温下向含2-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-醇(2.0g，13.4mmol)的DCE(40mL)中添加POBr3(11.53g，40.2mmol)且随后加热至100℃，保持5小时。将反应混合物冷却至室温，浓缩且在冰水中淬灭。将混合物以Na2CO3碱化，以EtOAc萃取且以盐水洗涤经合并的有机层。将有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩以获得呈黄色固体状的粗产物。经由管柱层析(20％EtOAc:石油醚)纯化此物质以产生呈浅黄色固体状的5-溴-2-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶(1.6g，51％产率)。LCMS m/z 212.2(M+H)+；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45(dd,J＝0.40,7.00Hz,1H),6.70(d,J＝7.20Hz,1H),6.40(s,1H),2.50(s,3H)。
合成2-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺：将5-氯-2-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶(1.6g，7.55mmol)于甲醇氨(32mL，224mmol)中且在100℃下加热16小时。浓缩反应物且经由管柱层析(5％MeOH:CHCl3)纯化产物以产生2-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(1.0g，83％产率)。LCMS m/z 149.2(M+H)+；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.33(d,J＝7.60Hz,1H),6.65(bs,2H),6.10(d,J＝7.20Hz,1H),5.68(s,1H),2.23(s,3H)。
步骤1：合成6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7-二醇：向搅拌的1H-吡唑-5-胺(1g，12mmol)于EtOH(10mL)中的溶液中添加2-氟丙二酸二乙酯(3.22g，18mmol)及乙醇钠(7.8g，24mmol，9mL的21％溶液)。将混合物在回流下加热18小时。将混合物冷却至室温且浓缩。添加水且将pH值调节至3。过滤所得沉淀且干燥以产生呈白色固体状的6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7-二醇(0.8g，39％产率)。LCMS m/z 168.2(M-)。
步骤2[参见前文]：向6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7-二醇(1g，5.91mmol)中添加POCl3(2.76mL，29.6mmol)且在回流下加热16小时。浓缩反应混合物且将粗物质溶解于NaHCO3溶液中并以乙酸乙酯萃取。分离有机层，经Na2SO4干燥且浓缩。藉由管柱层析(20％EtOAc:己烷)来纯化粗物质以产生呈白色固体状的5,7-二氯-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶(0.35g，36％产率)。LCMS m/z 206.0(M+)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.23(d,J＝2.4Hz,1H),6.79(d,J＝2.4Hz,1H)。
步骤3：向密封管中的5,7-二氯-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶(0.8g，3.88mmol)中添加NH4OH(5mL，128mmol)且在80℃下搅拌12小时。将混合物冷却至室温，浓缩且粗产物5-氯-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(0.7g，97％产率)不经进一步纯化即使用。LCMS m/z 187.1(M+H)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.17(d,J＝2.4Hz,1H),7.14(br s,2H),6.44(d,J＝2.4Hz,1H)。
步骤4：向5-氯-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(0.7g，3.75mmol)于二噁烷(10mL)中的溶液中添加亚硝酸异戊酯(1.01mL，7.50mmol)且在110℃下回流2小时。浓缩反应混合物且以水洗涤粗物质。分离有机层，经Na2SO4干燥且浓缩。藉由管柱层析(EtOAc:石油醚，22％)分离产物以产生呈灰白色固体状的5-氯-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶(0.6g，93％)。
步骤5：在-20℃下将密封管中5-氯-6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶(0.6g，3.50mmol)于MeOH(10mL)中的溶液以氨气净化5分钟。密封容器且在75℃下加热3小时。浓缩混合物且粗产物6-氟吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(0.5g，94％产率)直接用于后续转变中。LCMS m/z152.5(M+)。(M+H)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.98(dd,J＝0.8,8.4Hz,1H),7.81(d,J＝2.8Hz,1H),7.20(br s,2H),5.97(dd,J＝1.2,3.2Hz,1H)。
合成2-氘苯并噻唑：将搅拌的苯并[d]噻唑(1.5g，11.10mmol)于THF(20mL)中的溶液冷却至-78℃且逐滴添加n-BuLi(1.78g，27.7mmol)。在添加即将完成时，阴离子溶液产生澄清且橙色溶液。此时向反应混合物中添加D2O且再搅拌半小时。以NH4Cl溶液淬灭反应混合物且以DCM(50mL×3)萃取。使经合并的有机层经Na2SO4干燥且蒸发以得到粗化合物，将其经由管柱层析，使用EtOAc及己烷(2:3)来纯化以产生2-氘苯并噻唑(1.14g，75％产率)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.09-8.19(m,2H),7.46-7.58(m,2H)。
合成2-氘-6-硝基苯并噻唑：在-25℃下经1小时时间向HNO3(0.82mL，18.36mmol)与H2SO4(0.98mL，18.36mmol)的混合物中添加2-氘苯并噻唑(0.50g，3.67mmol)。将所得溶液搅拌12小时且倾入冰水中以产生黄色沉淀，其经过滤且不经进一步纯化即使用。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.26(d,J＝2.40Hz,1H),8.36-8.39(m,1H),8.28-8.31(m,1H)。
合成2-氘-6-氨基苯并噻唑：向2-氘-6-硝基苯并噻唑(0.300g，1.656mmol)及浓缩HCl(0.075mL，2.484mmol)于乙醇(20.00mL)中的混合物中添加铁粉(0.370g，6.62mmol)。将反应物在回流下搅拌1小时且随后冷却至室温。藉由过滤移除氧化铁及羟基盐的沉淀。移除溶剂且将所得固体于EtOAc(50mL×2)与10％Na2CO3水溶液(50mL)的异质混合物中萃取。干燥EtOAc萃取物且在真空下移除溶剂。藉由combiflash，使用EtOAc与己烷(2:3)***来纯化粗物质以产生2-氘-6-氨基苯并噻唑(110mg，97％产率)。LCMS m/z 152.2(M+H)。
合成6-溴-4-氟苯并[d]噻唑-2-胺：在室温下向搅拌的4-溴-2-氟苯胺(2g，10.53mmol)于乙酸(20mL)中的溶液中添加硫氰酸钾(4.09g，42.1mmol)，随后逐滴添加含Br2(1.085mL，21.05mmol)的5mL乙酸。将混合物搅拌2小时，随后浓缩至干。添加NaHCO3溶液且将产物萃取至EtOAc中。有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩以产生6-溴-4-氟苯并[d]噻唑-2-胺(2.1g，81％产率)，其不经进一步纯化即使用。LCMS m/z 248.9(M+2)。
合成6-溴-4-氟苯并[d]噻唑：在室温下向搅拌的6-溴-4-氟苯并[d]噻唑-2-胺(2g，8.09mmol)于DMF(20mL)中的溶液中添加亚硝酸异戊酯(3.27mL，24.28mmol)。将混合物在80℃下加热1小时。由LC/MS监控反应。在起始物质完全消耗之后，将反应混合物在减压下浓缩以产生粗产物。藉由combiflash，使用硅胶及EtOAc:石油醚(2:8)***来纯化粗物质以产生6-溴-4-氟苯并[d]噻唑(0.8g，42％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.97(d,J＝0.4Hz,1H),7.90(dd,J＝1.6,0.8Hz,1H),7.40(dd,J＝2.0,9.6Hz,1H)。
合成4-氟-N-(4-甲氧基苄基)苯并[d]噻唑-6-胺：将搅拌的6-溴-4-氟苯并[d]噻唑(200mg，0.862mmol)、4-甲氧基苄基胺(0.169mL，1.29mmol)、Xantphos(249mg，0.431mmol)及Cs2CO3(562mg，1.724mmol)于1,4-二噁烷(16mL)中的溶液以N2脱气5分钟，随后添加Pd2(dba)3(197mg，0.215mmol)。将混合物以N2进一步脱气5分钟，密封且在110℃下加热12小时。将混合物冷却至室温，过滤且浓缩。藉由管柱层析(10％EA:石油醚)来纯化粗化合物以产生4-氟-N-(4-甲氧基苄基)苯并[d]噻唑-6-胺(200mg，80％产率)。LCMS m/z289.1(M+H)。
合成4-氟苯并[d]噻唑-6-胺：将4-氟-N-(4-甲氧基苄基)苯并[d]噻唑-6-胺(200mg，0.694mmol)与TFA(8mL)的混合物在25℃下搅拌1小时。浓缩混合物且分配于EtOAc与水的间。使经分离的有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到粗化合物，将其藉由管柱层析(15％EA:石油醚)来纯化以产生4-氟苯并[d]噻唑-6-胺(100mg，74％产率)。LCMS m/z168.9(M+)。
合成6-溴-5-氟苯并[d]噻唑-2-胺：在室温下向搅拌的4-溴-3-氟苯胺(2g，10.53mmol)于乙酸(20mL)中的溶液中添加硫氰酸钾(4.09g，42.1mmol)，继而逐滴添加含Br2(0.542mL，10.53mmol)的5mL乙酸。将反应物搅拌2小时，随后浓缩至干。添加NaHCO3溶液且以EtOAc萃取产物。有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩以产生6-溴-5-氟苯并[d]噻唑-2-胺(2g，77％产率)，其不经进一步纯化即使用。
合成6-溴-5-氟苯并[d]噻唑：在室温下向搅拌的6-溴-5-氟苯并[d]噻唑-2-胺(2g，8.09mmol)于1,4-二噁烷(100mL)中的溶液中添加亚硝酸异戊酯(3.27mL，24.28mmol)。随后将混合物在110℃下加热3小时。由LC/MS监控反应。在起始物质完全消耗之后，在减压下浓缩反应混合物以产生粗产物。藉由combiflash，使用硅胶及EtOAc:石油醚(2:8)***来纯化粗物质以产生6-溴-5-氟苯并[d]噻唑(1g，53％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.04(s,1H),8.15(d,J＝6.40Hz,1H),7.88(d,J＝8.80Hz,1H)。
合成5-氟-N-(4-甲氧基苄基)苯并[d]噻唑-6-胺：将搅拌的6-溴-5-氟苯并[d]噻唑(1g，4.31mmol)、4-甲氧基苄基胺(0.676mL，5.17mmol)、Xantphos(1.247g，2.154mmol)及Cs2CO3(2.81g，8.6mmol)于1,4-二噁烷(100mL)中的溶液以N2脱气5分钟，随后添加Pd2(dba)3(0.99g，1.08mmol)。将混合物以N2进一步脱气5分钟，随后密封且在110℃下加热12小时。冷却至室温之后，过滤且浓缩混合物。藉由管柱层析(10％EA:石油醚)来纯化粗化合物以产生5-氟-N-(4-甲氧基苄基)苯并[d]噻唑-6-胺(0.8g，64％产率)。LCMS m/z 289.1(M+H)。
合成5-氟苯并[d]噻唑-6-胺：在室温下将含5-氟-N-(4-甲氧基苄基)苯并[d]噻唑-6-胺(0.8g，2.77mmol)的TFA(10mL)搅拌1小时。将混合物浓缩至干且在EtOAc与水的间萃取。有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。藉由管柱层析(15％EA:石油醚)来纯化粗化合物以产生5-氟苯并[d]噻唑-6-胺(0.25g，52％产率)。LCMS m/z 169.5(M+H)。
合成6-氯-2-((4-甲氧基苄基)硫基)-3-硝基吡啶：将2,6-二氯-3-硝基吡啶(0.1g，1当量)及4-甲氧基苯硫醇(0.080g，1.1当量)溶于THF(2mL)中且冷却至0℃。向反应混合物中分部分添加氢化钠(0.025g，1.2当量)且在0℃下搅拌3小时。浓缩反应混合物以移除过量THF。以EtOAc稀释反应混合物且以水洗涤。收集有机层，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到呈黄色固体状的6-氯-2-((4-甲氧基苄基)硫基)-3-硝基吡啶(0.12g，74.5％产率)。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.41(d,J＝8.4Hz,1H),7.34-7.47(m,2H),7.16(d,J＝14.0Hz,1H),6.84-6.87(m,3H),4.38(s,2H),3.80(s,3H)。
合成N-(4-甲氧基苄基)-6-((4-甲氧基苄基)硫基)-5-硝基吡啶-2-胺：将6-氯-2-((4-甲氧基苄基)硫基)-3-硝基吡啶(0.5g，1当量)及(4-甲氧基苯基)甲胺(2.207g，10当量)加入一压力管中且在封闭条件下加热至120℃，保持30分钟。30分钟之后，将反应混合物冷却至周围温度，且添加水并过滤。将所获得的黄色固体以水及石油醚洗涤，在真空下干燥。藉由combiflash，使用硅胶及乙酸乙酯:石油醚(3:7)***来纯化粗产物以产生呈黄色固体状的N-(4-甲氧基苄基)-6-((4-甲氧基苄基)硫基)-5-硝基吡啶-2-胺(0.5g，76％产率)。LC/MS：Acquity BEH C18 2.1×50mm，1.8微米；溶剂A＝含0.1％TFA的水；溶剂B＝含0.1％TFA的ACN；历经2分钟的梯度0-100％B；保留时间：1.17min；LCMS(ES-API),m/z 412.2(M+H)。
合成N2-(4-甲氧基苄基)-6-((4-甲氧基苄基)硫基)吡啶-2,5-二胺：向N-(4-甲氧基苄基)-6-((4-甲氧基苄基)硫基)-5-硝基吡啶-2-胺(0.5g，1.215mmol)于MeOH(5mL)中的溶液中相继添加氯化铵(0.650g，10当量)及锌(0.397g，5当量)，且在周围温度下搅拌1小时。经床过滤反应混合物且以甲醇洗涤。将所获得的滤液浓缩，以EtOAc稀释且以水洗涤。将水层以乙酸乙酯萃取(两次)。将有机层收集在一起，经Na2SO4干燥，过滤且浓缩以得到粗物质。藉由combiflash，使用硅胶及乙酸乙酯:石油醚(3:7)***来纯化粗产物以产生N2-(4-甲氧基苄基)-6-((4-甲氧基苄基)硫基)吡啶-2,5-二胺(0.25g，54％产率)。LC/MS：Acquity BEH C18 2.1×50mm，1.8微米；溶剂A＝含0.1％TFA的水；溶剂B＝含0.1％TFA的ACN；历经2分钟的梯度0-100％B；保留时间：0.88min；LCMS(ES-API),m/z 382.2(M+H)。
合成噻唑并[5,4-b]吡啶-5-胺：将N2-(4-甲氧基苄基)-6-((4-甲氧基苄基)硫基)吡啶-2,5-二胺(0.3g，0.786mmol)于甲酸(2mL)中的溶液加热至90℃，保持1小时。随后添加TFA(2mL)且再加热1小时。在减压下移除TFA且藉由combiflash，使用硅胶及MeOH:CHCl3(3％)***来纯化以产生呈暗色固体状的噻唑并[5,4-b]吡啶-5-胺(0.1g，84％产率)。LC/MS：Acquity BEH C18 2.1×50mm，1.8微米；溶剂A＝含0.1％TFA的水；溶剂B＝含0.1％TFA的ACN；历经2分钟的梯度0-100％B；保留时间：0.52min；LCMS(ES-API),m/z 152.14(M+H)。
合成2-氯-4-((4-甲氧基苄基)硫基)-5-硝基吡啶：在氮气下将氢化钠(3.11g，78mmol)于THF(20mL)中的悬浮液冷却至-40℃。向NaH悬浮液中逐滴添加2,4-二氯-5-硝基吡啶(15g，78mmol)及(4-甲氧基苯基)甲烷硫醇(12g，78mmol)于THF(50mL)中的溶液。使其在-40℃下搅拌10分钟，随后在室温下搅拌。反应结束之后，将混合物于冰中淬灭且以乙酸乙酯萃取(3×)。将经合并的有机层以盐水洗涤，经硫酸钠干燥且浓缩成残余物。藉由急骤管柱层析(8-10％EtOAc/石油醚)来纯化残余物以产生2-氯-4-((4-甲氧基苄基)硫基)-5-硝基吡啶(15g，61％产率)。LCMS m/z 311.2(M+H)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.14(s,1H),7.26-7.38(m,3H),6.90-6.93(m,2H),4.18(s,2H),3.82(s,3H)。
合成N-(4-甲氧基苄基)-4-((4-甲氧基苄基)硫基)-5-硝基吡啶-2-胺：将2-氯-4-((4-甲氧基苄基)硫基)-5-硝基吡啶(5g，16.1mmol)与(4-甲氧基苯基)甲胺(11g，80mmol)的混合物在100℃下加热30分钟。由LCMS证实反应结束。反应结束之后，向混合物中添加水且使其搅拌直至得到自由固体。过滤固体以产生呈黄色固体状的N-(4-甲氧基苄基)-4-((4-甲氧基苄基)硫基)-5-硝基吡啶-2-胺(5g，76％产率)。LCMS m/z 412.6(M+H)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.94(d,J＝5.20Hz,1H),8.37(bs,1H),7.24-7.37(m,4H),6.82-6.92(m,4H),4.55(bs,2H),4.11(s,2H),3.71-3.75(m,6H)。
合成N2-(4-甲氧基苄基)-4-((4-甲氧基苄基)硫基)吡啶-2,5-二胺：向含N-(4-甲氧基苄基)-4-((4-甲氧基苄基)硫基)-5-硝基吡啶-2-胺(15g，36.5mmol)的EtOH(150mL)中添加Pd/C(6g，56.4mmol)且使其在氢气下在室温下搅拌隔夜。反应结束之后，经过滤反应物且以乙醇(500mL)洗涤。将其在高真空下浓缩以产生呈棕色固体状的N2-(4-甲氧基苄基)-4-((4-甲氧基苄基)硫基)吡啶-2,5-二胺(12g，86％产率)。其不经纯化即用于下一步骤。
合成噻唑并[4,5-c]吡啶-6-胺：将N2-(4-甲氧基苄基)-4-((4-甲氧基苄基)硫基)吡啶-2,5-二胺(4g，9.33mmol)与甲酸(6mL，9.33mmol)在N2氛围下在90℃下加热1小时。由LCMS证实甲酰化结束。移除甲酸之后，添加TFA(25mL)及四氟硼酸银(800mg，4.11mmol)且加热至80℃，保持5小时。如由LCMS判断反应结束之后，移除挥发物且以水(20mL)稀释残余物。以MTBE(3×20mL)洗涤水层。以饱和碳酸氢钠溶液将水层的pH值调节至8且由乙酸乙酯(3×20mL)萃取碱性溶液。将经合并的有机层以盐水洗涤且经硫酸钠干燥。将其浓缩且在高真空下干燥以获得呈浅棕色固体状的噻唑并[4,5-c]吡啶-6-胺(1g，70％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.93(s,1H),8.70(d,J＝0.80Hz,1H),7.00(d,J＝0.80Hz,1H),6.08(s,1H)。
其他中间体制备
向4,6-二氯烟酸乙酯(50g，227mmol)于DMA(500mL)中的溶液中添加DIPEA(39.7mL，227mmol)及环丙胺(17.6mL，250mmol)。随后将混合物在90℃下加热5小时。伴随搅拌将反应混合物于碎冰中淬灭。搅拌所得浆状物且过滤以产生粗产物(42g，91％产率)，其不经进一步纯化即使用。LCMS m/z 241.1(M+H)+。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.54(s,1H),8.09(s,1H),7.03(s,1H),4.29(q,J＝7.2Hz,2H),2.61(m,1H),1.31(t,J＝7.2Hz,3H),0.86(m,2H),0.58(m,2H)。
将6-氯-4-(环丙氨基)烟酸乙酯(10g，41.5mmol)与苯并[d]噻唑-6-胺(7.49g，49.9mmol)在密封管中于150℃下加热3小时。重复此方法且将两反应的粗产物合并并直接用于下一步骤。
将6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(环丙氨基)烟酸乙酯(19.2g，54.2mmol)溶解于EtOH(50mL)、水(50mL)及THF(40ml)的混合物中。向此搅拌溶液中添加LiOH(3.9g)且将混合物在室温下搅拌18小时。在真空下浓缩反应混合物以移除挥发性溶剂。以2×200mL EtOAc萃取水相且以1.5N HCl中和经分离的水相。过滤沉淀产物且干燥以产生6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(环丙氨基)烟酸(17g，96％产率)，其不经进一步纯化即使用。LCMS m/z327.0(M+H)+。
步骤1：在25℃下向搅拌的(1r,4r)-4-((叔丁氧羰基)氨基)环己烷甲酸(250mg，1.03mmol)、PyBOP(535mg，1.03mmol)及胡宁碱(Hunig's Base)(0.538mL，3.08mmol)于DMF(5mL)中的溶液中添加甲胺HCl(104mg，1.541mmol)。2小时之后，以乙酸乙酯稀释反应混合物且以10％LiCl冲洗(3×)。有机层经Na2SO4干燥且浓缩以提供白色固体状的((1r,4r)-4-(甲基氨基甲酰基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(250mg，85％产率)作为产物。LCMS(TFA)201.1(M+H-叔丁基)+。
步骤2：在25℃下向搅拌的((1r,4r)-4-(甲基氨基甲酰基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(250mg，0.975mmol)于二噁烷(5mL)中的溶液中添加4N HCl的二噁烷溶液(2.438mL，9.75mmol)。将反应物搅拌3小时，随后自二氯甲烷浓缩(5×)以提供呈棕褐色固体状的(1r,4r)-4-氨基-N-甲基环己烷甲酰胺HCl(150mg，71.8％产率)。
向搅拌的四氟硼酸三-叔丁基鏻(99mg，0.341mmol)及乙酸钯(38.3mg，0.171mmol)于异丙苯(10g，83mmol)中的溶液中添加N-环己基-N-甲基环己胺(2666mg，13.65mmol)、2-氯-5-氟吡啶-3-胺(500mg，3.41mmol)及丙烯酸丁酯(525mg，4.09mmol)。藉由抽气使混合物脱气且以N2回填并在150℃下加热4小时。
将反应混合物冷却至室温且经烧结漏斗过滤。所获得的固体确定为具有膦杂质的产物，将其悬浮于MTBE中且以4N NaOH溶液处理。分离有机层且使用3N HCl中和水层。过滤所获得的固体且在真空下干燥以产生呈灰白色固体状的7-氟-1,5-二氮杂萘-2-醇(300mg，1.828mmol，53.6％产率)。
向搅拌的7-氟-1,5-二氮杂萘-2-醇(240mg，1.462mmol)于乙腈(5mL)中的溶液中添加POCl3(0.545mL，5.85mmol)且在100℃下加热4小时。LCMS展示产物形成[m/z:183.0(M+H)RT:0.76]。在真空下浓缩反应混合物以产生粗化合物，将其冷却至0℃、以乙酸乙酯稀释，以10％NaHCO3溶液淬灭。分离有机层且以乙酸乙酯(1×)萃取水层。经合并的有机层以NaCl溶液洗涤，经Na2SO4干燥且在真空下浓缩以产生呈灰白色固体状的2-氯-7-氟-1,5-二氮杂萘(200mg，1.095mmol，74.9％产率)。
向2-氯-7-氟-1,5-二氮杂萘(120mg，0.657mmol)于二噁烷(3mL)中的溶液中添加NH4OH(5mL，64.7mmol)且在高压釜中在80℃下加热24小时。在真空下浓缩反应混合物以产生粗产物，将其悬浮于水中，以固体NaCl饱和，以乙酸乙酯(4×)萃取。在真空下浓缩经合并的有机层以产生呈灰白色固体状的7-氟-1,5-二氮杂萘-2-胺(80mg，0.490mmol，74.6％产率)。LCMS展示产物形成[m/z:164.3；RT 0.46]
将硫酸(5mL)在氮气下冷却至0℃。接着添加4-氯-3-氟吡啶-2-胺(5g，34.1mmol)且使其在0℃下搅拌15分钟。添加硝基过氧酸钾(3.45g，34.1mmol)且使其在0℃下搅拌2小时。反应结束之后，将反应物质加热至50℃，保持30分钟。将反应物于冰中淬灭且使用氢氧化铵将其碱化至pH 7。过滤所形成的浅黄色固体4-氯-3-氟-5-硝基吡啶-2-胺(2.5g，36％产率)。
在0℃下在氮气下向氢化钠(1.253g，31.3mmol)及4-氯-3-氟-5-硝基吡啶-2-胺(3g，15.66mmol)中添加THF(30mL)。接着向氢化钠溶液中逐滴添加4-甲氧基-α-甲苯硫醇(2.62mL，18.79mmol)的THF(30mL)溶液。使其在0℃下搅拌1小时。反应结束之后，使反应混合物于冰中缓慢淬灭且以水稀释。过滤所形成的固体且干燥隔夜。使自由流动固体于MTBE中制成浆状物且过滤以产生呈绿色固体状的3-氟-4-((4-甲氧基苄基)硫基)-5-硝基吡啶-2-胺(2.52g，39％产率)。
向3-氟-4-((4-甲氧基苄基)硫基)-5-硝基吡啶-2-胺(4g，12.93mmol)于MeOH(70mL)中的溶液中添加锌(8.45g，129mmol)及NH4Cl(6.92g，129mmol)。将混合物搅拌3小时且随后与MeOH一起经硅藻土过滤。浓缩滤液且将残余物以DCM稀释并过滤以移除任何无机固体。浓缩DCM层以得到呈棕色固体状的3-氟-4-((4-甲氧基苄基)硫基)吡啶-2,5-二胺(2.6g，72.0％产率)，其不经进一步纯化即使用。
在氮气下，将3-氟-4-((4-甲氧基苄基)硫基)吡啶-2,5-二胺(2.6g，6.52mmol)与甲酸(35mL，6.52mmol)的混合物在90℃下加热1小时。反应结束之后，浓缩反应混合物且不经纯化即用于下一步骤。
向N-(6-氨基-5-氟-4-((4-甲氧基苄基)硫基)吡啶-3-基)甲酰胺(2.6g，8.46mmol)于TFA(25mL)中的溶液中添加四氟硼酸银(0.659g，3.38mmol)，且随后在80℃下加热3小时。由LCMS证实反应结束。反应结束之后，将反应物质完全蒸馏出且以水(20mL)稀释。以MTBE(3×20mL)洗涤水层。以饱和碳酸氢钠溶液将水层的pH值调节至8。将碱性溶液以乙酸乙酯萃取三次(3×20mL)。将经合并的有机层以盐水洗涤且经硫酸钠干燥。浓缩滤液且在高真空下干燥以获得呈浅棕色固体状的7-氟噻唑并[4,5-c]吡啶-6-胺(650mg，45％产率)。
在0℃下向搅拌的N-(1,5-二氮杂萘-2-基)乙酰胺(2g，10.68mmol)于CCl4(30mL)中的溶液中添加吡啶(2.59mL，32.1mmol)及Br2(0.605mL，11.75mmol)。随后将混合物在90℃下加热3小时。将反应物冷却至室温且浓缩至干。将残余物分配于EtOAc与NaHCO3溶液的间且使经分离的有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。经由管柱层析纯化产生N-(7-溴-1,5-二氮杂萘-2-基)乙酰胺(1.0g，37％产率)。
向搅拌的N-(7-溴-1,5-二氮杂萘-2-基)乙酰胺(800mg，3.01mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加锌(59.0mg，0.902mmol)及氰化锌(706mg，6.01mmol)。使混合物以N2脱气5分钟，随后添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(246mg，0.301mmol)。使混合物以N2脱气5分钟且随后在110℃下加热14小时。将反应物冷却至室温，以冷水稀释且以EtOAc(2×20mL)萃取。使有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩。经由管柱层析来分离产物以除N-(7-氰基-1,5-二氮杂萘-2-基)乙酰胺(200mg，31％产率)以外产生6-氨基-1,5-二氮杂萘-3-甲腈(250mg，49％产率)。
向搅拌的N-(7-氰基-1,5-二氮杂萘-2-基)乙酰胺(200mg，0.942mmol)于MeOH(10mL)中的溶液中添加K2CO3(391mg，2.83mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，随后浓缩且分配于EtOAc与水的间。分离各层且使有机层经Na2SO4干燥，过滤且浓缩以产生粗产物，将其经由管柱层析来纯化以产生6-氨基-1,5-二氮杂萘-3-甲酰胺(100mg，56％产率)。LCMS188.2(M+)+。
将6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-5,7-二醇(4.7g，28.5mmol)溶解于POCl3(40mL)中且在100℃下加热16小时。冷却至室温之后，在真空下移除过量POCl3且以NaHCO3水溶液处理粗残余物，随后以EtOAc萃取。有机萃取物以水及盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤且浓缩。经由管柱层析来纯化产物以产生产物(1g，17％产率)。LCMS 202.0(M+2)+。
将5,7-二氯-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶(1g，4.95mmol)加入密封管中且溶解于NH4OH(10mL)中。将反应混合物在80℃下加热2小时且随后冷却至室温。移除溶剂且产物不经进一步纯化即使用。LCMS 183.3(M+H)+。
在0℃下向搅拌的5-氯-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺(0.8g，4.38mmol)于1,4-二噁烷(15mL)中的溶液中逐滴添加硝酸异戊酯(1.180mL，8.76mmol)。随后将反应物在100℃下加热1小时。移除溶剂且经由管柱层析来分离产物以产生5-氯-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶(410mg，55％产率)。LCMS 168.0(M+H)+。
将搅拌的5-氯-6-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶(0.410g，2.446mmol)于NH4OH(10mL)中的溶液密封于管中且在80℃下加热3小时。将混合物冷却且浓缩以产生粗产物(310mg，77％产率)，其不经进一步纯化即使用。LCMS 149.4(M+H)+。
将1-甲基-1H-吡唑(1.012mL，12.18mmol)于THF(50mL)中的溶液冷却至-78℃且添加n-BuLi(4.87mL，12.18mmol)。使混合物在室温下搅拌1小时。之后添加(4-氧代环己基)氨基甲酸叔丁酯(1.299g，6.09mmol)于THF(10mL)中的溶液且将混合物在室温下搅拌隔夜。藉由以水淬灭、蒸发THF、添加EtOAc且以水洗涤产物(2×)来处理反应物。干燥(硫酸钠)有机层且在真空下移除溶剂以产生1.061g黏性黄色油状物，将其经由管柱层析来纯化以产生顺式与反式异构体的混合物(0.85g，46％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3-d)δ7.40-7.33(m,1H),6.24-6.00(m,1H),5.31(s,1H),4.48(br.s.,1H),4.12-4.00(m,3H),2.23-1.80(m,6H),1.73-1.59(m,2H),1.50-1.43(m,9H)。注意，在表示反式/顺式产物比率的3:1比例下存在两组乙烯基峰。
将(4-羟基-4-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)环己基)氨基甲酸叔丁酯(0.85g，2.88mmol)溶解于DCM(20mL)中且向此溶液中添加HCl(4N于二噁烷中)(7.19mL，28.8mmol)。在室温下搅拌内含物。反应物似乎沉淀且因此添加少量MeOH以有助于使产物更具可溶性。蒸发反应物且使残余物自二氯甲烷蒸发3次以移除痕量HCl。在室内真空下干燥由此获得的固体以产生0.75g浅黄色固体，其不经进一步纯化即使用：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31-8.14(m,3H),7.39(d,J＝2.0Hz,1H),6.14(d,J＝2.0Hz,1H),3.98(s,3H),3.08-2.95(m,1H),2.08-1.96(m,2H),1.82(br.s.,5H)。
在室温下将4-氨基-1-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)环己醇HCl(200mg，0.863mmol)、6-氯-4-(异丙基氨基)烟酸(185mg，0.863mmol)、胡宁碱(0.754mL，4.32mmol)及PyBOP(898mg，1.726mmol)混合且在DMF(3mL)中搅拌。以1N NaOH淬灭反应物且添加EtOAc。分离各层且将有机层以1N NaOH(2×)、盐水(1×)冲洗，干燥(硫酸钠)且在真空下移除溶剂以产生1.25g棕色油状固体。经由管柱层析纯化残余物以产生245mg(69％产率)4-5:1比率的反式与顺式异构体混合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.46(d,J＝7.7Hz,1H),8.42-8.25(m,2H),7.33-7.19(m,1H),6.74-6.61(m,1H),6.25-6.02(m,1H),5.22-5.08(m,1H),4.01-3.91(m,3H),3.88-3.69(m,2H),2.11-1.60(m,7H),1.20(d,J＝6.6Hz,1H),1.16(d,J＝6.4Hz,5H),1.09-1.09(m,1H)。
将3-氟吡啶-2,5-二胺(1g，7.87mmol)、3-硝基苯磺酸钠盐(3.54g，15.73mmol)、甘油(2.87mL，39.3mmol)、H2SO4(4mL，75mmol)于水(6mL)中的混合物在150℃下加热16小时。将反应混合物冷却至室温且倾入碎冰中。将pH值调节至约9且以EtOAc萃取。分离有机层且浓缩并经由管柱层析来纯化产物以产生3-氟-1,5-二氮杂萘-2-胺。LCMS 164.0(M+H)+。
步骤1.向mCPBA(0.460g，1.867mmol)于DCE中的回流溶液中添加含((反式)-4-氨基环己基)氨基甲酸叔丁酯(0.1g，0.467mmol)的DCE。使混合物回流3小时。藉由添加EtOAc、以1N NaOH(3×)及盐水(1×)洗涤来处理反应物。干燥有机层(硫酸钠)且在真空下移除溶剂以产生0.0654g呈黄色黏性油状的((反式)-4-硝基环己基)氨基甲酸叔丁酯。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ3.51(br.s.,1H),2.42-2.31(m,2H),2.24-2.15(m,2H),2.04-1.91(m,2H),1.47(s,9H),1.33-1.19(m,4H)。
将((反式)-4-硝基环己基)氨基甲酸叔丁酯(0.0654g，0.268mmol)溶解于DCM(1mL)中且向此溶液中添加HCl(0.669mL，2.68mmol)。使内含物在室温下搅拌隔夜。100％EtOAc中的TLC仅展示基线产物。在真空下移除溶剂且使残余物自二氯甲烷再蒸发(3×)以移除痕量HCl。获得0.059mg呈灰白色固体状的反-4-硝基环己胺HCl。
可使用前文中已述程序的变化形式来制备表10中所示的实例。
表10
实例523
将6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)烟酸(0.055g，0.166mmol)、反-4-硝基环己胺HCl(0.030g，0.166mmol)及胡宁碱(0.290mL，1.661mmol)溶解于DMF(2mL)中且向此混合物中添加PyBOP(0.190g，0.365mmol)。将混合物在室温搅拌下且由LCMS监控。过滤反应混合物且由制备型LC/MS纯化。合并含有所需产物的级分且经由离心蒸发干燥以产生8.3mg(11％)6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)-N-((反式)-4-硝基环己基)烟酰胺。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.85-9.18(m,1H),8.65-8.22(m,3H),8.09-7.91(m,1H),7.52(d,J＝8.8Hz,1H),6.02(s,1H),4.83-4.54(m,1H),3.98-3.55(m,1H),2.30(d,J＝11.4Hz,2H),2.00-1.69(m,4H),1.64-1.38(m,2H),1.20(d,J＝6.1Hz,6H)。HPLC rt,1.87min,分别为条件G。LCMS 455.1(M+H)+。
实例524
将4-氨基-1-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)环己醇HCl(79mg，0.339mmol)添加至6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)烟酸(111mg，0.34mmol)及胡宁碱(0.592mL，3.39mmol)于DMF(3mL)中的混合物中且向此混合物中添加PyBOP(388mg，0.746mmol)。将反应混合物在室温下搅拌且由LCMS监控。次日，藉由添加EtOAc、以1N NaOH(3×)、盐水(1×)洗涤、干燥(硫酸钠)且在真空下移除溶剂来处理反应物以产生棕色油状物。藉由制备型LC/MS纯化粗混合物，首先分离出分离物02，继而再纯化所收集的不纯分离物1。合并含有所需产物的级分且经由离心蒸发干燥以产生区域异构性异构体6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-N-(4-羟基-4-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)环己基)-4-(异丙基氨基)烟酰胺。分离物1与2的重量分别为39.0(23％)及5.6mg(3％)。1H NMR分离物1(500MHz,DMSO-d6)δ9.23(s,1H),8.70(s,1H),8.42(s,1H),8.26(d,J＝7.4Hz,1H),8.09(d,J＝7.7Hz,1H),7.95(d,J＝3.0Hz,1H),7.56(d,J＝8.8Hz,1H),7.25(s,1H),6.10(s,1H),6.00(s,1H),3.97(s,3H),3.77(br.s.,1H),3.64-3.51(m,1H),3.17(d,J＝4.7Hz,1H),2.03(d,J＝11.1Hz,2H),1.90(s,1H),1.89-1.79(m,2H),1.75-1.59(m,4H),1.20(d,J＝6.4Hz,6H)。HPLC rt分离物1,1.60min,条件G。LCMS 506.2(M+H)+。
实例525
步骤1.将6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)烟酸(0.066g，0.2mmol)、1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-胺(0.031g，0.200mmol)及胡宁碱(0.175mL，1.000mmol)溶解于DMF中。随后向此溶液中添加PyBOP(0.104g，0.200mmol)且在室温下搅拌内含物。由LCMS监控反应。2小时之后，以水淬灭反应物且添加乙酸乙酯。分离各层且将有机层以1.000N NaOH(3×)、盐水(1×)洗涤，干燥有机层(硫酸钠)且在真空下移除溶剂以产生0.158g呈棕色油状的6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)-N-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)烟酰胺。LCMS 468.3(M+H)+。
步骤2.将6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)-N-(1,4-二氧杂螺[4.5]癸-8-基)烟酰胺(0.094g，0.2mmol)溶解于乙腈(2mL)中。向此溶液中添加1N HCl(2.000mL，2.000mmol)。在室温下搅拌内含物。一小时之后，LCMS检测产物。次日，藉由先后添加2mL1.0N NaOH及EtOAc来处理反应物。分离各层且以EtOAc(2×)萃取水层。将有机层合并，干燥(硫酸钠)且在真空下移除溶剂以产生棕色油状物。藉由急骤层析，以1:1己烷/EtOAc至100％EtOAc来纯化产物。收集产物级分且在真空下移除溶剂以产生0.0784g呈棕色胶状的6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)-N-(4-氧代环己基)烟酰胺。LCMS 424.3(M+H)+。
步骤3.将6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)-N-(4-氧代环己基)烟酰胺(0.0784g，0.185mmol)于EtOH(1mL)中制成浆状物。将碳酸铵盐(0.231g，2.406mmol)(碳酸铵)及***(0.030g，0.463mmol)溶解于水(1mL)中。将两种混合物合并且在装配有磁力搅拌棒的20打兰(dram)铁氟龙(Teflon)加盖小瓶中在80℃下搅拌2.5小时。由LCMS:494.3(M+H)+监控反应。向混合物中添加水及EtOAc且过滤不溶性物质。分离各层且将有机层以水洗涤(2×)，干燥(硫酸钠)且在真空下移除溶剂以产生粉色固体。藉由制备型LC/MS纯化粗混合物(合并含有所需产物的级分且经由离心蒸发干燥以产生区域异构性分离物E-或Z-6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-N-(2,4-二氧代-1,3-二氮杂螺[4.5]癸-8-基)-4-(异丙基氨基)烟酰胺)。分离物1与2的重量分别为11.0(11％)及3.4mg(4％)。1H NMR分离物2(500MHz,1:1氯仿-d:甲醇-d4)δ9.19(s,1H),8.22-8.11(m,2H),7.98(d,J＝2.0Hz,1H),7.50(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),5.97(s,1H),4.03-3.89(m,1H),3.66-3.55(m,1H),2.15-1.91(m,4H),1.82-1.73(m,2H),1.60-1.47(m,2H),1.26(d,J＝6.4Hz,6H)。HPLC rt分离物2：1.17min,条件O。LCMS分离物2，494.2(M+H)+。
实例526
将6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)烟酸(0.318g，0.969mmol)、4-氨基环己酮HCl(0.1450g，0.969mmol)及胡宁碱(1.693mL，9.69mmol)溶解于DMF(9mL)中且向此混合物中添加PyBOP(0.555g，1.066mmol)。在室温下搅拌混合物。次日，由LCMS检测产物且藉由添加EtOAc、以1N NaOH(3×)及盐水(1×)洗涤有机混合物来处理反应物。干燥有机层(硫酸钠)且在真空下移除溶剂以产生0.557g黄色固体。经硅胶在100％EtOAc中对粗产物进行急骤层析以产生0.272g(64％)呈灰白色玻璃状的6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)-N-(4-氧代环己基)烟酰胺。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.23(s,1H),9.14(s,1H),8.70(d,J＝2.2Hz,1H),8.42(s,1H),8.20(d,J＝7.0Hz,1H),8.12(d,J＝7.5Hz,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,1H),7.57(dd,J＝9.0,2.2Hz,1H),6.02(s,1H),4.33-4.17(m,1H),3.71-3.51(m,1H),2.49-2.42(m,2H),2.38-2.28(m,2H),2.08(dd,J＝12.8,4.2Hz,2H),1.86-1.71(m,2H),1.22(d,J＝6.2Hz,6H)。LCMS 424.2(M+H)+。Rf(100％EtOAc)＝0.2。
实例527
将6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)-N-(4-氧代环己基)烟酰胺(0.020g，0.047mmol)溶解于乙腈(1mL)中且向此中添加叠氮化钠(9.21mg，0.142mmol)且最后添加四氯化硅(5.42μl，0.047mmol)。将内含物在室温下在防爆屏蔽后搅拌隔夜。次日，LCMS检测产物与起始物质及若干其他峰。由LCMS，再搅拌一天基本上产生一种产物峰。反应物溶于EtOAc中且以水洗涤(1×)。蒸发有机层，藉由制备型LC/MS纯化粗产物且合并含有所需产物的级分并经由离心蒸发干燥以产生1.5mg(7％)6-(苯并[d]噻唑-6-基氨基)-4-(异丙基氨基)-N-(6,7,8,9-四氢-5H-四唑并[1,5-a]氮杂-7-基)烟酰胺。1H NMR(500MHz,DMSO-d)δ9.25(s,1H),9.13(s,1H),8.68(d,J＝2.2Hz,1H),8.42(s,1H),8.24(d,J＝7.8Hz,1H),8.17(d,J＝6.9Hz,1H),8.02-7.85(m,2H),7.56(dd,J＝8.9,2.2Hz,1H),6.02(s,1H),4.91-4.79(m,1H),4.51-4.39(m,1H),4.32-4.23(m,1H),3.58(d,J＝6.4Hz,1H),3.04-2.95(m,1H),2.18(d,J＝9.7Hz,1H),2.08(dt,J＝6.9,3.4Hz,1H),1.81-1.67(m,1H),1.57(dd,J＝12.1,1.8Hz,1H),1.22(d,J＝6.1Hz,6H)。LCMS 464.2(M+H)+。HPLC rt 1.06min，条件O。LCMS 463.8(M+H)+。

Claims (12)

1.式(II)化合物，
或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
R1为：
(a)经0至4个R1a取代的C2-3羟烷基，其中R1a独立地选自F、Cl、-OH、-CHF2、-CN、-CF3、-OCH3及环丙基；
(b)经0至7个R1a取代的C4-8烷基，其中R1a独立地选自F、Cl、-OH、-CHF2、-CF3、-CN-OCH3及环丙基；
(c)-(CH2)2-4NHC(O)(C1-6烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(C1-6烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)O(C1-6烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1NH(C1-6烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0- 1N(C1-4烷基)2、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1(C3-6环烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1(C3-6氟环烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(C1-6羟烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)N(C1-3烷基)(苯基)或-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1R，其中R为苯基、吗啉基、吡咯烷基、***基或四氢吡喃基；
(d)经0至2个选自以下的取代基取代的环己基：-OH、-OCH3、＝O、-NH2、C1-6烷基、C1-6羟烷基、-NHS(O)2CH3、-NO2、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-3烷基)、-C(O)NH(C1-6羟烷基)、-C(O)NH(C3-6环烷基)、-C(O)NH(C3-6氰基环烷基)、-NHC(O)(C1-3烷基)、-NHC(O)(吡啶基)、-NHC(O)(吗啉基)、-NHC(O)(羟基双环[2.2.1]庚基)、-NHC(O)NH(C1-4烷基)及甲基吡唑基；或
(e)-(CH2)2(苯基)，其中所述苯基经-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-3烷基)或-S(O)2NH2取代；或
(f)
R2为苯并噁唑基、吡唑并吡啶基、吡咯并吡啶基、苯并噻唑基、噻唑并吡啶基、吡唑并嘧啶基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、喹啉基、噌啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、1,5-二氮杂萘基、吡啶并吡嗪基或吡啶并嘧啶基，每一者经0至2个独立地选自F、Cl、-CH3、-CN、-NH2、-OCH3、＝O及-C(O)NH2的取代基取代；或R2为
R3为：
(a)C2-6烷基或C2-6氟烷基；
(b)经1至2个环丙基取代的C1-3烷基；
(c)经苯基、四氢呋喃基或吗啉基取代的C1-3烷基；
(d)经0至3个选自F、苯基、氟苯基、二氟苯基及二氯苯基的取代基取代的C2-6羟烷基；
(e)经0至2个选自F、-OH、C1-3羟烷基、-CH3、-CF2H、-NH2及-C(O)OCH2CH3的取代基取代的-(CH2)0-2(C3-7环烷基)；
(f)经0至1个选自F及-CH3的取代基取代的四氢吡喃基或四氢噻喃基；
(g)-(CH2)0-2苯基，其中所述苯基经0至2个选自以下的取代基取代：F、Cl、C1-3烷基、C1-3羟烷基、-OH、-O(C1-3烷基)、-OCF3、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-3烷基)、-C(O)NH(C1-3氟烷基)、-C(O)NH(C1-3羟烷基)、-C(O)NH(C3-5环烷基)、 -C(O)N(C1-3烷基)2、-S(O)2CH3及吡唑基；
(h)经0至2个选自C1-3羟烷基的取代基取代的噻唑基；或
(i)
2.如权利要求1的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
R1为：
(a)经0至3个R1a取代的羟丙基，其中R1a独立地选自F、-CF3及环丙基；
(b)经0至5个R1a取代的C4-8烷基，其中R1a独立地选自F、Cl、-OH、-CHF2、-CF3、-CN、-OCH3及环丙基；
(c)-(CH2)2-4NHC(O)(C1-3烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(C1-3烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)O(C1-3烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1NH(C1-3烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0- 1N(C1-3烷基)2、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1(C3-6环烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1(C3-6氟环烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(C1-6羟烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)N(CH3)(苯基)或-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)0-1R，其中R为苯基、吗啉基、吡咯烷基、***基或四氢吡喃基；
(d)经0或2个选自以下的取代基取代的环己基：-OH、-OCH3、＝O、-NH2、C1-3烷基、C1-3羟烷基、-NHS(O)2CH3、-NO2、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-2烷基)、-C(O)NH(C1-4羟烷基)、-C(O)NH(C3-6环烷基)、-C(O)NH(C3-4氰基环烷基)、-NHC(O)(C1-3烷基)、-NHC(O)(吡啶基)、-NHC(O)(吗啉基)、-NHC(O)(羟基双环[2.2.1]庚基)、-NHC(O)NH(C1-4烷基)及甲基吡唑基；
(e)-(CH2)2(苯基)，其中所述苯基经-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-3烷基)或 -S(O)2NH2取代；或-CH2(苯基)；或
(f)
3.如权利要求1的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中：
R1为：-CH2CH2CH(CH3)2、-(CH2)2C(CH3)2OH、-CH2CHFCH2OH、-CH2CHFCH(CH(CH3)2)OH、-CH2CHFCH(环丙基)OH、-CH2CHFCH(CH3)OH、-CH2CHFCH(环丙基)(CF3)OH、-CH2CHFC(CH3)2OH、-CH2CHFC(CH3)(CH2CH3)OH、-CH2CHFC(CH2CH3)2OH、-CH2CHFC(CH3)(CF3)OH、-CH2CF2C(CH3)2OH、-(CH2)2NHC(O)CH3、-(CH2)3NHC(O)CH3、-(CH2)4NHC(O)CH3、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH3、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)OCH(CH3)2、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)OC(CH3)3、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH2N(CH3)2、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)NHCH(CH3)2、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(环丙基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(3-氟环戊基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(3,3-二氟环戊基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(吗啉基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(苯基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(吡咯烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH2(四氢吡喃基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH2(2,2-二氟环己基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH2(***基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)3C(CH3)2OH、 -(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)4C(CH3)2OH、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)N(CH3)(苯基)、
R2为：
且
R3为：C2-5烷基、-CH2CHF2、-CH2CF3、-CH2CHFCH3、-CH2CF2CH3、-CH(CH3)CF3、CH2CF(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH2F、-CH(CH3)(环丙基)、-CH(环丙基)2、-CH2(环丙基)、-CH2(四氢呋喃基)、-CH2CH2OH、-CH(CH3)CH2OH、-(CH2)2(环丙基)、C3-7环烷基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、-CH(CH3)CH2OH、-CH(苯基)CH2OH、-CH2CF2C(CH3)2OH、-CH(苯基)CH(OH)CH2OH、-CH(3-氟苯基)CH(OH)CH2OH、-CH(3,5-二氟苯基)CH(OH)CH2OH、-CH(2,5-二氟苯基)CH(OH)CH2OH、-CH(3,5-二氯苯基)CH(OH)CH2OH、-(CH2)2(吗啉基)、-(CH2)2(苯基)、
4.如权利要求1的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R1为-CH2CH2CH(CH3)2、-(CH2)2C(CH3)2OH、-CH2CHFCH2OH、-CH2CHFCH(CH(CH3)2)OH、-CH2CHFCH(环丙基)OH、-CH2CHFCH(CH3)OH、-CH2CHFCH(环丙基)(CF3)OH、-CH2CHFC(CH3)2OH、-CH2CHFC(CH3)(CH2CH3)OH、-CH2CHFC(CH2CH3)2OH、-CH2CHFC(CH3)(CF3)OH、-CH2CF2C(CH3)2OH、-(CH2)2NHC(O)CH3、-(CH2)3NHC(O)CH3、-(CH2)4NHC(O)CH3、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH3、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)OCH(CH3)2、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)OC(CH3)3、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH2N(CH3)2、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)NHCH(CH3)2、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(环丙基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(3-氟环戊基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(3,3-二氟环戊基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(吗啉基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(苯基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(吡咯烷基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH2(四氢吡喃基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH2(2,2-二氟环己基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)CH2(***基)、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)3C(CH3)2OH、-(CH2)2CH(CH3)NHC(O)(CH2)4C(CH3)2OH或 -(CH2)2CH(CH3)NHC(O)N(CH3)(苯基)。
5.如权利要求1的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R1为：
6.如权利要求1的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R2为：
7.如权利要求1的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R2为：
8.如权利要求1的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中R3为：
(a)C2-6烷基或C2-6氟烷基；
(b)经1至2个环丙基取代的C1-3烷基；
(c)经苯基、四氢呋喃基或吗啉基取代的C1-3烷基；
(d)经0至3个选自F、苯基、氟苯基、二氟苯基及二氯苯基的取代基取代的C2-6羟烷基；或
(e)经0至2个选自F、-OH、C1-3羟烷基、-CH3、-CF2H、-NH2及-C(O)OCH2CH3的取代基取代的-(CH2)0-2(C3-6环烷基)。
9.一种药物组合物，其包含一或多种如权利要求1至8中任一项的化合物及药学上可接受的载剂或稀释剂。
10.如权利要求1至8中任一项的化合物在制备用于治疗炎性或自身免疫疾病的药物中的用途。
11.如权利要求10的用途，其中所述疾病选自克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、哮喘、移植物抗宿主病、同种异体移植排斥反应、慢性阻塞性肺病；格雷夫斯病、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、牛皮癣；隐热蛋白相关周期性综合征、TNF受体相关周期性综合征、家族性地中海热、成人斯蒂尔病、全身性幼年型特发性关节炎、多发性硬化、神经病性疼痛、痛风及痛风性关节炎。
12.如权利要求1所述的化合物或其立体异构体或药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：
。
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