CN104694592A - Vernavosine乙基醚的生物合成方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了Vernavosine乙基醚的生物合成方法，以海南狗牙花为原料，所述的方法包括如下步骤：取晒干的海南狗牙花，加水，加热提取，过滤得滤液，滤液中加入DMEM培养基，接种大肠杆菌，在37℃培养；加入胰蛋白酶溶液消化培养液，减压浓缩得稠膏，稠膏中加入乙醇和甘露醇，搅拌，过滤得滤液，减压蒸馏浓缩，分离浓缩液得到Vernavosine乙基醚。本发明公开的Vernavosine乙基醚的生物合成方法，具有一定的工业应用价值。

Description

Vernavosine乙基醚的生物合成方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体的涉及Vernavosine的生物合成方法。

背景技术

本发明涉及的化合物Vernavosine乙基醚是从南洋马蹄茶(MalayanTabernaemontana)提取的新化合物(Choy-Eng Nge，et al.,Vernavosine andVernavosine,New Pentacyclic Indole Alkaloids Incorporating Pyrroloazepine andPyridopyrimidine Moieties Derived from a Common Yohimbine Precursor，Org.Lett.2014,16,6330-6333)，虽然在该文献中公开了如何提取Vernavosine乙基醚的方法，但是所采用的方法提取率低，本发明的目的是提供一种提取率高的Vernavosine乙基醚的生物合成方法。

本发明所采用海南狗牙花是夹竹桃科、狗牙花属灌木，药用名是单根木。

发明内容

本发明的目的在于提供一种Vernavosine乙基醚的生物合成方法，为了实现本发明的目的，拟采用如下技术方案：

本发明一方面涉及Vernavosine乙基醚的生物合成方法，其特征在于以海南狗牙花为原料，所述的Vernavosine乙基醚的结构式为:

在本发明的一个优选实施方式中，所述的方法包括如下步骤：

取晒干的海南狗牙花，加水，加热提取，过滤得滤液，滤液中加入DMEM培养基，接种大肠杆菌，在37℃培养；

加入胰蛋白酶溶液消化培养液，减压浓缩得稠膏，稠膏中加入乙醇和甘露醇，搅拌，过滤得滤液，减压蒸馏浓缩，分离浓缩液得到Vernavosine乙基醚。

在本发明的一个优选实施方式中，水的加入量分别是海南狗牙花的8-12。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的培养时间超过24小时。

在本发明的另一个优选实施方式中，乙醇和甘露醇的加入量为稠膏重量的8-12以及0.08-0.12倍。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的分离步骤为按照Choy-Eng Nge，et al.,Vernavosine and Vernavosine,New Pentacyclic Indole AlkaloidsIncorporating Pyrroloazepine and Pyridopyrimidine Moieties Derived from aCommon Yohimbine Precursor，Org.Lett.2014,16,6330-6333中所记载的方法进行分离，具体而言，参照该文献Supporting Information S3-4页Isolation ofalkaloids部分分离化合物(1)的方法进行分离。

在本发明的另一个优选实施方式中，所述的方法包括如下步骤：取晒干的海南狗牙花10g，加水100g，加热到40℃提取3个小时，过滤得滤液，滤液中加入3gDMEM培养基，接种0.1mL(10⁵/mL)大肠杆菌，在37℃培养24小时；

加入胰蛋白酶溶液消化培养液，减压浓缩得稠膏，稠膏中加入10倍重量份乙醇，并加入占稠膏10％重量的甘露醇，搅拌，待稠膏充分分散，过滤得滤液，减压蒸馏浓缩。

本发明公开了一种Vernavosine乙基醚的生物合成方法，本发明的方法具有一定的工业应用价值。

具体实施方式

若未特别说明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1：

从海南狗牙花提取Vernavosine乙基醚的方法，具体步骤为：

1、取晒干的海南狗牙花10g，加水100g，加水100g，加热到40℃提取3个小时，过滤得滤液，滤液中加入3gDMEM培养基，接种0.1mL(10⁵/mL)大肠杆菌，在37℃培养24小时；加入胰蛋白酶溶液消化培养液，减压浓缩得稠膏；

2、稠膏中加入10倍重量份乙醇，并加入占稠膏10％重量的甘露醇，搅拌，待稠膏充分分散，过滤得滤液，减压蒸馏浓缩，然后按照Choy-Eng Nge，et al.,Vernavosine and Vernavosine,New Pentacyclic Indole Alkaloids IncorporatingPyrroloazepine and Pyridopyrimidine Moieties Derived from a CommonYohimbine Precursor，Org.Lett.2014,16,6330-6333中所记载的方法进行分离，具体而言，参照该文献Supporting Information S3-4页Isolation ofalkaloids部分分离化合物(3)的方法进行分离，本申请说明书为了节约篇幅而采用引用的写法进行撰写，但应该说明的是该参考文献中的相关内容也是本申请技术方案中的一部分，申请人保留根据该参考文献对分离方法进行修改的权利。

经过分离得到0.22mg的Vernavosine乙基醚(相当于22mgVernavosine乙基醚/kg海南狗牙花)，相比于现有技术，具有较大的提高。

以上所述是本发明的优选实施例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.Vernavosine乙基醚的生物合成方法，其特征在于以海南狗牙花为原料，所述的Vernavosine乙基醚的结构式为:

2.根据权利要求1所述的方法，所述的方法包括如下步骤：

取晒干的海南狗牙花，加水，加热提取，过滤得滤液，滤液中加入DMEM培养基，接种大肠杆菌，在37℃培养；

加入胰蛋白酶溶液消化培养液，减压浓缩得稠膏，稠膏中加入乙醇和甘露醇，搅拌，过滤得滤液，减压蒸馏浓缩，分离浓缩液得到Vernavosine乙基醚。

3.根据权利要求2所述的方法，水的加入量分别是海南狗牙花的8-12。

4.根据权利要求2所述的方法，所述的培养时间超过24小时。

5.根据权利要求2所述的方法，乙醇和甘露醇的加入量为稠膏重量的8-12以及0.08-0.12倍。

6.根据权利要求2所述的方法，所述的分离步骤为按照Choy-Eng Nge，et al.,Vernavosine and Vernavosine,New Pentacyclic Indole AlkaloidsIncorporating Pyrroloazepine and Pyridopyrimidine Moieties Derived from aCommon Yohimbine Precursor，Org.Lett.2014,16,6330-6333中所记载的方法进行分离，具体而言，参照该文献Supporting Information S3-4页Isolation ofalkaloids部分分离化合物(1)的方法进行分离。

7.Vernavosine乙基醚的生物合成方法，所述的方法包括如下步骤：取晒干的海南狗牙花10g，加水100g，加热到40℃提取3个小时，过滤得滤液，滤液中加入3gDMEM培养基，接种0.1mL(10⁵/mL)大肠杆菌，在37℃培养24小时；

加入胰蛋白酶溶液消化培养液，减压浓缩得稠膏，稠膏中加入10倍重量份乙醇，并加入占稠膏10％重量的甘露醇，搅拌，待稠膏充分分散，过滤得滤液，减压蒸馏浓缩。