CN104678000B - 液相色谱串接质谱联用仪（lc-ms/ms）检测橄榄油中的叶绿素铜钠的检测方法 - Google Patents

液相色谱串接质谱联用仪（lc-ms/ms）检测橄榄油中的叶绿素铜钠的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104678000B
CN104678000B CN201310629900.8A CN201310629900A CN104678000B CN 104678000 B CN104678000 B CN 104678000B CN 201310629900 A CN201310629900 A CN 201310629900A CN 104678000 B CN104678000 B CN 104678000B
Authority
CN
China
Prior art keywords
detection
olive oil
copper sodium
detection method
methyl alcohol
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201310629900.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104678000A (zh
Inventor
周洪斌
李平
肖震
陈桐
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
COMPREHENSIVE INSPECTION AND QUARANTINE TECHNOLOGY CENTER ZHENJIANG ENTRY-EXIT INSPECTION AND QUARANTINE BUREAU
Original Assignee
COMPREHENSIVE INSPECTION AND QUARANTINE TECHNOLOGY CENTER ZHENJIANG ENTRY-EXIT INSPECTION AND QUARANTINE BUREAU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by COMPREHENSIVE INSPECTION AND QUARANTINE TECHNOLOGY CENTER ZHENJIANG ENTRY-EXIT INSPECTION AND QUARANTINE BUREAU filed Critical COMPREHENSIVE INSPECTION AND QUARANTINE TECHNOLOGY CENTER ZHENJIANG ENTRY-EXIT INSPECTION AND QUARANTINE BUREAU
Priority to CN201310629900.8A priority Critical patent/CN104678000B/zh
Publication of CN104678000A publication Critical patent/CN104678000A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104678000B publication Critical patent/CN104678000B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

一种液相色谱串接质谱联用仪（LC‑MS/MS）检测橄榄油中的叶绿素铜钠的检测方法，其包括如下步骤：1）样品前处理，2）用液相色谱‑质谱联用法定性定量检测叶绿素铜钠的色谱质谱条件：采用的流动相的水相为5‑20mmoL/L的乙酸铵水溶液，有机相为甲醇；流速250uL/min恒流进样，其中所述流动相中按体积百分比计，所述甲醇80～100%；所述乙酸铵水溶液0～20%；检测母离子613.3m/z，定量子离子465.6 m/z、碰撞能量56V，定性子离子479.9 m/z、碰撞能38V。可以更加准确、可靠、高灵敏度的定性定量检测出橄榄油中的叶绿素铜钠。

Description

液相色谱串接质谱联用仪（LC-MS/MS）检测橄榄油中的叶绿素 铜钠的检测方法
技术领域
本发明涉及食品添加剂检测领域，尤其是指用于非法添加在橄榄油中叶绿素铜钠的检测。
背景技术
叶绿素铜钠作为食品添加剂，被允许在冷冻饮品、蔬菜罐头、熟制豆类、加工坚果、糖果、烘烤食品、果蔬汁、配制酒等食品中作为着色剂使用，不得超过500ppm。但是叶绿素铜钠在油脂中是禁用的。在国内外文献和检测标准记载中，目前测定叶绿素铜钠的方法非常有限，绝大多数方法均采用分光光度法（如GB/T23749-2009）。由于叶绿素铜钠在GB2760上是允许使用的食品添加剂，其添加量比较大，最高限量500ppm，这些检测方法主要是检测其含量的多少，定量限相对比较高（比如GB/T23749-2009的定量限为5ppm），很容易被检出。近年来，由于橄榄油相对于普通油脂更具健康功效，橄榄油更易被大众接受。因此，一些商家违背法律在油脂中禁用叶绿素铜钠的禁令，违禁在大豆油中掺加叶绿素铜钠冒充橄榄油谋取暴利。这种在大豆油中添加叶绿素铜钠的假冒橄榄油，长期食用，会对人体的肝肾造成损害，或导致贫血。因此，检测油脂中的非法添加剂叶绿素铜钠迫在眉睫。添加在大豆油或其他油脂中的叶绿素铜钠其含量较低，采用目前的分光光度法比较难以检测，因此需要更加可靠、更加准确、高灵敏度的方法来定性定量检测这种物质在油脂中的存在。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种针对橄榄油脂中添加叶绿素铜钠的检测方法，该检测方法更加可靠、准确，灵敏度高，检出限低。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是一种液相色谱串接质谱联用仪（LC-MS/MS）检测橄榄油中的叶绿素铜钠的检测方法，其包括如下步骤：1）样品前处理，2）用液相色谱-质谱联用定性定量检测叶绿素铜钠的色谱质谱条件：采用的流动相的水相为5-20mmoL/L 的乙酸铵水溶液，有机相为甲醇；流速250uL/min恒流进样等度洗脱，其中甲醇体积占80～100%；乙酸铵水溶液体积占0～20%；母离子613.3 m/z，子离子465.6 m/z和子离子479.9 m/z。一种液相色谱串接质谱联用仪（LC-MS/MS）检测食用油中的叶绿素铜钠的检测方法，其包括如下步骤：1）样品前处理，2）用液相色谱-质谱联用法定性定量检测叶绿素铜钠的色谱质谱条件：采用的流动相的水相为5-20mmoL/L 的乙酸 铵水溶液，有机相为甲醇；流速250uL/min恒流进样，其中所述流动相中按体积百分比计，所述甲醇80～100%；所述乙酸铵水溶液0～20%；检测母离子613.3 m/z，定量子离子465.6 m/z、碰撞能量56V，定性子离子479.9 m/z、碰撞能量38V。
所述液相色谱-质谱联用法中，离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描模式：正离子；多反应检测（SRM）。
液相色谱-质谱联用法中，喷雾电压4000V，传输毛细管温度350℃，壳气压力20arb。
液相色谱-质谱联用法中，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。
所述流动相的水相为5-20 m mol/l 的乙酸 铵水溶液。
所述样品前处理步骤为称取食用油样品0.700g，加入甲醇水混合溶液2mL，混合均匀，；加入***2-4mL，混合均匀；20℃条件下5000rpm离心20分钟；取水相层过水相膜待用；所述甲醇水混合溶液中，体积百分比计，甲醇占60-90%。
本发明的高效液相色谱串接质谱联用仪检测橄榄油中非法添加的叶绿素铜钠的检测方法，可以更加准确、可靠、高灵敏度的定性定量检测出橄榄油中的叶绿素铜钠。由于其检测限量较低，也可以广泛的用于对橄榄油产品中的天然叶绿素铜钠含量的分析普查。
附图说明
图1，本发明中的子离子CID图谱。
图2，叶绿素铜钠标准曲线图。
图3，叶绿素铜钠标准溶液色谱图。
图4，橄榄油阴性样品的检测色谱图。
图5，橄榄油阴性样品中加标0.030 mg/kg的检测色谱图。
图6，橄榄油阴性样品中加标0.060 mg/kg的检测色谱图。
具体实施方式
针对本发明的检测方法，结合附图进行具体说明。
本发明的液相色谱串接质谱联用仪对橄榄油中非法添加的叶绿素铜钠进行定性定量检测方法中，
液相色谱串接质谱联用仪的条件：
选择美国Thermo Scientific公司生产的液相色谱串接质谱联用仪，其中，液相色谱 Finnigan Surveyor Auto sampler Plus ，TSQ Quantum Access串接四级杆质谱仪；
离子源：电喷雾离子源（ESI），扫描模式为正离子；
喷雾电压4000V；
传输毛细管温度350℃；
壳气压力 20arb；
多反应监测（SRM）；
柱温：室温
进样量： 10uL
流动相配制：有机相A为甲醇， 水相B为 5-20mmoL/L乙酸 铵溶液；恒流进样，其中，按体积百分比计，有机相A甲醇占80～100%，水相B乙酸 铵溶液占0～20%，流速250uL/min。经过大量分离试验，在上述流动相选择上，甲醇体积百分比为80～100%，乙酸 铵溶液（5~20mmoL/L）的体积百分比在0～20%时，分离效果较好。
色谱柱Agilent ZORBAX XDB-C18(3.5 um、2.1×50mm)，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；
母离子选择613.3（m/z），进行优化选择子离子；参考图1，为母离子优化后选择子离子的子离子CID图谱，
子离子选择465.6（m/z）作为定量离子，碰撞能量为56V；
子离子选择479.9（m/z）作为定性离子；碰撞能量为38V；
定量离子/定性离子的丰度比分别为100%和85%。
试验用到的试剂：叶绿素铜钠标准品、甲醇、超纯水、乙酸铵。
实施例1
标准曲线绘制
1、叶绿素铜钠标准溶液配制
称取叶绿素铜钠标准品6.4 mg于50mL棕色容量瓶中，加入甲醇水溶液，稀释定容制得叶绿素铜钠含量为128.0 mg/L的标准品储备液；再吸取该储备液1.0mL于100mL容量瓶中，加入甲醇水溶液定容，制得叶绿素铜钠含量为1.28 mg/L的叶绿素铜钠标准工作液。标准工作液置于4℃保存。
以上述制得的标准工作液为基础，用甲醇水混合溶液稀释制成至所需要的标准品溶液浓度，在本实施例中制备7个不同浓度标准品溶液：在7个试管中分别加入1.0mL的甲醇水溶液，准确吸取1.0mL叶绿素铜钠标准工作液（1.28mg/L），依次倍比稀释得到 10ug/L、20ug/L、40ug/L、80ug/L、160ug/L、320、640ug/L的标准溶液来生成标准曲线。
用上述液相色谱串接质谱联用仪条件依次对上述7个不同浓度的标准溶液进行检测，分别取10uL上述7个不同浓度的标准溶液注入色谱串接质谱联用仪中，流动相采用甲醇为有机相，其体积百分比98%，15mmol /L乙酸 铵溶液为水相，其体积百分比为2%；流速250uL/min恒流进样。以峰面积为纵坐标，以浓度为横坐标绘制标准曲线，参看图2。回归方程为：
叶绿素铜钠： Y = 4.19×103X—8.63×104 ，相关系数R2 为0.9952，检出限(LOD)15.0ug/kg;定量限（LOQ）40ug/kg；检测结果表明，叶绿素铜钠进样浓度在10.0～640ug/L的范围内呈良好的线性关系。
2、叶绿素铜钠标准溶液色谱图建立
取上述配制的叶绿素铜钠标准工作液（1.28mg/L）1.0mL ,加入1.0mL甲醇水溶液混合均匀，取10液相色谱串接质谱联用仪中进行检测，检测条件同标准曲线绘制时色谱串接质谱联用检测条件，得到叶绿素铜钠标准溶液色谱图，参看图3。
上述甲醇水溶液中，体积百分比计，甲醇90%，超纯水10%。
实施例2
样品前处理
准确称取橄榄油样品0.700g，准确加入甲醇水混合溶液2mL，其中甲醇体积百分比占80%，混合均匀。加入***3mL，混合均匀。20℃温度下5000rpm离心20分钟。取水相层过水相膜；精确吸取10uL直接进样至液相色谱串接质谱联用仪中进行检测
液相色谱串接质谱联用检测方法同上述色谱质谱检测条件：电喷雾离子源（ESI），扫描模式为正离子；喷雾电压4000V；传输毛细管温度350℃；壳气压力 20arb；多反应监测（SRM）；色谱柱：Agilent ZORBAX XDB-C18(3.5 um、2.1×50mm)；柱温：室温；进样量10uL；流动相配制：有机相A为甲醇， 水相B为 15mmoL/L乙酸 铵溶液；恒流进样；其中，按体积百分比计，甲醇占98%，水相B乙酸铵溶液占2%，流速250uL/min；母离子选择613.3（m/z），子离子选择465.6（m/z）作为定量离子，碰撞能量为56V；子离子选择479.9（m/z）作为定性离子；碰撞能量为38V。得到橄榄油阴性样品色谱图，参看图4可知，在橄榄油样品中未检出叶绿素铜钠，该橄榄油样品为阴性样品。
为了确认上述检测方式精密度，采用加标回收试验进行方法确认。
实施例3
加标实验1
准确称取上述橄榄油阴性样品0.700g，吸取上述制备的1.28mg/L叶绿素铜钠标准工作液23.4uL加入其中混合均匀，准确加入甲醇水混合溶液2.0mL，混合均匀；其中甲醇水混合溶液中，体积百分比计，甲醇占80%、水占20%；加入***4mL，混合均匀。20℃、5000rpm条件下离心20分钟。取水相层过水相膜，直接注入液相色谱质谱联用仪中进行检测。液相色谱质谱联用检测条件同上，电喷雾离子源（ESI），扫描模式为正离子；喷雾电压4000V；传输毛细管温度350℃；壳气压力 20arb；多反应监测（SRM）；色谱柱：Agilent ZORBAX XDB-C18(3.5 um、2.1×50mm)；柱温：室温；进样量10uL；流动相配制：有机相A为甲醇， 水相B为15mmoL/L乙酸铵溶液；恒流进样；其中，按体积百分比计，甲醇占98%，水相B乙酸铵溶液占2%，流速250uL/min；母离子613.3（m/z），子离子465.6（m/z）作为定量离子，碰撞能量为56V；子离子479.9（m/z）作为定性离子；碰撞能量为38V。得到橄榄油阴性样品中加标0.030 mg/kg的检测色谱图，参看图5；该加标试验重复6次。
加标试验2
准确称取上述橄榄油阴性样品0.700g，吸取上述制备的1.28mg/L叶绿素铜钠标准工作液46.8uL加入其中混合均匀，准确加入甲醇水混合溶液2.0mL，混合均匀；其中甲醇水混合溶液中，体积百分比计，甲醇占80%、水占20%；加入***4mL，混合均匀。20℃、5000rpm条件下离心20分钟。取水相层过水相膜，直接注入液相色谱质谱联用仪中进行检测。液相色谱质谱联用检测条件同上，电喷雾离子源（ESI），扫描模式为正离子；喷雾电压4000V；传输毛细管温度350℃；壳气压力 20arb；多反应监测（SRM）；色谱柱：ΑAglilent ZORBAX XDB-C18(3.5 um、2.1×50mm)；柱温：室温；进样量10uL；流动相配制：有机相A为甲醇， 水相B为15mmoL/L 乙酸 铵溶液；恒流进样；其中，按体积百分比计，甲醇占98%，水相B乙酸 铵溶液占2%，流速250uL/min；母离子613.3（m/z），子离子465.6（m/z）作为定量离子，碰撞能量为56V；子离子479.9（m/z）作为定性离子；碰撞能量为38V。得到橄榄油阴性样品中加标0.060mg/kg的检测色谱图，参看图6；该加标试验重复6次。
加标回收率和变异系数
表一
由表 一可知，加标回收率在101.5~118.7%，变异系数4.4~6.4%.。由此可知，加标回收率比较好，变异系数较低。该液相色谱质谱联用仪检测方法可以定性定量的检测出橄榄油样品，尤其是假冒橄榄油中非法添加的叶绿素铜钠。该检测方法检测限量较低，且检测可靠，灵敏度高，可以作为对不同国家、不同地区生产的橄榄油中天然叶绿素铜钠含量的普通检查。也可以应用于其他油脂中叶绿素铜钠含量的检测手段。

Claims (5)

1.一种液相色谱串接质谱联用仪（LC-MS/MS）检测橄榄油中的叶绿素铜钠的检测方法，其包括如下步骤：1）样品前处理，2）用液相色谱-质谱联用法定性定量检测叶绿素铜钠的色谱质谱条件：采用的流动相的水相为5-20mmoL/L 的乙酸铵水溶液，有机相为甲醇；流速250uL/min恒流进样，其中所述流动相中按体积百分比计，所述甲醇80～100%；所述乙酸铵水溶液0～20%；色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测母离子613.3m/z，定量子离子465.6 m/z、碰撞能量56V，定性子离子479.9 m/z、碰撞能量38V。
2.根据权利要求1所述的的检测方法，其特征在于所述液相色谱-质谱联用法中，离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描模式：正离子；多反应监测（MRM）。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于液相色谱-质谱联用法中，喷雾电压4000V，传输毛细管温度350℃，壳气压力 20arb。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述流动相的水相为15mmoL/L的乙酸铵水溶液。
5.根据权利要求1、2、3、4任一所述的检测方法，其特征在于所述样品前处理步骤为称取食用油样品0.700g，加入甲醇水混合溶液2mL，混合均匀；加入***2-4mL，混合均匀；20℃条件下5000rpm离心20分钟；取水相层过水相膜待用；所述甲醇水混合溶液中，体积百分比计，甲醇占60-90%。
CN201310629900.8A 2013-12-02 2013-12-02 液相色谱串接质谱联用仪（lc-ms/ms）检测橄榄油中的叶绿素铜钠的检测方法 Expired - Fee Related CN104678000B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310629900.8A CN104678000B (zh) 2013-12-02 2013-12-02 液相色谱串接质谱联用仪（lc-ms/ms）检测橄榄油中的叶绿素铜钠的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310629900.8A CN104678000B (zh) 2013-12-02 2013-12-02 液相色谱串接质谱联用仪（lc-ms/ms）检测橄榄油中的叶绿素铜钠的检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104678000A CN104678000A (zh) 2015-06-03
CN104678000B true CN104678000B (zh) 2016-09-07

Family

ID=53313346

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310629900.8A Expired - Fee Related CN104678000B (zh) 2013-12-02 2013-12-02 液相色谱串接质谱联用仪（lc-ms/ms）检测橄榄油中的叶绿素铜钠的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104678000B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106198414A (zh) * 2016-06-24 2016-12-07 中华人民共和国张家港出入境检验检疫局 橄榄油中叶绿素铜钠的检测方法
CN107796684B (zh) * 2017-12-14 2021-01-12 汤臣倍健股份有限公司 一种叶绿素铜钠含量的检测方法
CN110161137A (zh) * 2019-05-21 2019-08-23 华中科技大学 一种测定叶绿素铁钠盐的方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7947827B2 (en) * 2006-06-30 2011-05-24 State Of Oregon Acting By And Through The State Board Of Higher Education On Behalf Of Oregon State University Pharmaceutical formulation comprising a metaloporphyrin and method for its purification and use
CN102311441B (zh) * 2011-10-21 2014-02-26 四川通世达生物科技有限公司 一种叶绿素铜钠盐的生产方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN104678000A (zh) 2015-06-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ding et al. Rapid micropreparation procedure for the gas chromatographic–mass spectrometric determination of BHT, BHA and TBHQ in edible oils
Boyaci et al. A novel method for quantification of ethanol and methanol in distilled alcoholic beverages using Raman spectroscopy
Ma et al. Simultaneous determination of water-soluble and fat-soluble synthetic colorants in foodstuff by high-performance liquid chromatography–diode array detection–electrospray mass spectrometry
Zhao et al. Determination of pesticide residues in complex matrices using multi‐walled carbon nanotubes as reversed‐dispersive solid‐phase extraction sorbent
CN103983725B (zh) 一种香精香料中香豆素和黄樟素的快速测定方法
Malá et al. Contemporary sample stacking in analytical electrophoresis
Wu et al. Development and validation of a rapid and efficient method for simultaneous determination of mycotoxins in coix seed using one-step extraction and UHPLC-HRMS
CN104678000B (zh) 液相色谱串接质谱联用仪（lc-ms/ms）检测橄榄油中的叶绿素铜钠的检测方法
Sun et al. Determination of volatile organic acids in oriental tobacco by needle-based derivatization headspace liquid-phase microextraction coupled to gas chromatography/mass spectrometry
Zhao et al. Determination of ethyl carbamate in fermented liquids by ultra high performance liquid chromatography coupled with a Q Exactive hybrid quadrupole-orbitrap mass spectrometer
Cabañero et al. Isotope ratio mass spectrometry coupled to liquid and gas chromatography for wine ethanol characterization
CN109696499A (zh) 一种基于高分辨率质谱的水中亚硝胺高灵敏测定方法
Xu et al. Derivatization followed by gas chromatography‐mass spectrometry for quantification of ethyl carbamate in alcoholic beverages
CN105842379A (zh) 一种衍生化测定酚类***的方法
Qi et al. Qualitative screening and quantitative determination of multiclass water-soluble synthetic dyes in foodstuffs by liquid chromatography coupled to quadrupole Orbitrap mass spectrometry
Chen et al. Low‐temperature headspace‐trap gas chromatography with mass spectrometry for the determination of trace volatile compounds from the fruit of Lycium barbarum L.
Micalizzi et al. Reliable identification and quantification of anabolic androgenic steroids in dietary supplements by using gas chromatography coupled to triple quadrupole mass spectrometry
CN109187830B (zh) Gc-ms法同时快速测定食用香精香料中9种醇类化合物含量的方法
Chen et al. Parallel reaction monitoring to improve the detection performance of carcinogenic 4-methylimidazole in food by liquid chromatography-high resolution mass spectrometry coupled with dispersive micro solid-phase extraction
Zou et al. Simple and environmental friendly procedure for the gas chromatographic–mass spectrometric determination of caffeine in beverages
Zhao et al. Determination of dinitolmide and its metabolite 3-ANOT in chicken tissues via ASE-SPE-GC–MS/MS
Jiang et al. Chromatographic determination of biogenic amines in wines after treatment with ionic liquids as novel media
Chao et al. Rapid screening of basic colorants in processed vegetables through mass spectrometry using an interchangeable thermal desorption electrospray ionization source
Liu et al. Determination of Sudan dyes in chili pepper powder by online solid‐phase extraction with a butyl methacrylate monolithic column coupled to liquid chromatography with tandem mass spectrometry
Qi et al. Simultaneous qualitative and quantitative determination of 104 fat-soluble synthetic dyes in foods using disperse solid-phase extraction and UHPLC-Q-Orbitrap HRMS analysis

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20160907