CN104642746B - 一种饲用乳酸菌微丸的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，该方法是将乳酸菌培养至对数生长期中期时，向培养液中加入氯化钠继续培养至稳定生长期前期，离心，用生理盐水清洗菌泥，收集菌泥，然后将菌泥重悬于新鲜MRS培养基中，缓慢升温至45～55℃，并在该温度下保持30min后，迅速冷却至0～4℃后取菌泥与适量填充剂、海藻酸钠、乳清蛋白、低聚木糖、低聚果糖、抗性淀粉、抗氧化剂混合均匀，然后放入挤出滚丸机中制粒，制粒后干燥即得。该制备方法能有效提高微丸中乳酸菌的稳定性，耐受性，从而提高乳酸菌微丸在储存、运输及在加工过程中的乳酸菌的存活率，提高饲料中的活菌率，同时该制备方法简单易控，适用于工业化大规模生产。

Description

一种饲用乳酸菌微丸的制备方法

技术领域

本发明涉及本发明涉及一种乳酸菌制剂技术领域，特别涉及一种饲用乳酸菌微丸的制备方法。

背景技术

乳酸菌是动物肠道中的正常菌群，兼性厌氧的乳酸菌能够产生乳酸、双乙酰、过氧化氢、细菌素等物质，具有抑制病原菌和腐败菌、维持肠道微生态平衡、防治腹泻、提高免疫力、改善畜产品品质生理功效。因此，它已成为饲料工业的迫切需求。多数乳酸菌在低温条件下具有较好的储藏稳定性，但多数饲料企业并不具备冷链条件，所以乳酸菌通常会在储运过程中大量死亡；另一方面，饲料公司在制作颗粒或膨化料时，都伴随着热处理过程，乳酸菌不耐高温，在制粒的过程中损失率很高。目前，在提高乳酸菌耐温性方面，已经成为饲料工业的研究热点。将益生菌制成粉剂微胶囊被视为解决这一问题的可行途径。

微胶囊是将天然的或合成的高分子材料将固体、液体甚至是气体的微小颗粒包裹在直径为1—500μm的半透性或密封囊膜的微型胶囊内，微胶囊内的物质由于与外界环境相隔离，可以免受环境的影响，从而保持稳定，而在适当条件下，被包封物质又可以释放出来。将益生菌制成微胶囊在保护生物活性分子、组织和细胞以对抗不利环境方面取得了较好的成效。采用微胶囊技术将乳酸菌菌体进行包埋，能增强菌体对外界环境因素的抵抗能力，显著提高菌体在低温保存期和到达肠道后的存活率，使乳酸菌更好地起到有益于健康的作用。然而这种微胶囊制成后呈粉剂状，而粉剂微胶囊存在以下问题，首先是菌体贮藏稳定性不够好，再次，对热敏感，而粉剂微胶囊作为饲料添加剂时，再饲料制粒过程会受到高温、高湿，高渗透等多种破坏作用，致使乳酸菌在饲料中的存活率极低，因此粉剂益生菌微胶囊在饲料工业中是难以使用的。

授权公告号为CN102178238B的中国专利公开了名称为一种耐热型微胶囊益生菌及其制备方法和用途，该发明公开的耐热型微胶囊益生菌颗粒直径在20～400μm之间，包埋率≥90%，活菌数为109～1010cfu/g，在冷水中速溶，在80～90℃的温度下，经过3分钟，其活菌数只下降1～1.5个数量级。该发明还公开了该耐热型微胶囊益生菌的制备方法。该发明提供的产品耐热型微胶囊益生菌虽然抗逆性和稳定性有一定的提高， 但是耐热型微胶囊益生菌同样呈粉剂，存在与上述描述的粉剂益生菌微胶囊同样的问题，另外，该发明的加工方法是乳化凝胶的方法，需要将培养好的菌体加入到溶液中，进行二次包埋，且包埋条件苛刻，需要高速均质处理，包埋后还要经历冷冻干燥和流化床干燥，历时较长、加工操作非常繁琐，成本较高。

公开号为CN101338288的中国申请公开了名称为一种提高植物乳杆菌稳定性的方法，该植物乳杆菌为植物乳杆菌LP-Onlly，在发酵对数期后期添加NaCl或进行高温处理或进行低温处理，以提高植物乳杆菌细胞的稳定性能。它通过采用微生物代谢工程策略，主要是通过利用渗透和温度两种压力应激处理技术，提高植物乳杆菌稳定性能。这将为乳酸菌提高稳定性提供一个具现实意义的方法，从而以提高产品品质，提供常温益生菌产品加工可行性，延长产品货架寿命。但是在实际应用中，该方法在对数期后期采用单一的高盐或单一的高温或低温对植物乳杆菌进行短时间胁迫处理，对乳酸菌耐受性的提高并不明显，乳酸菌不能抵御后期加工的各种破坏作用，使得乳酸菌的存活率较低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，该制备方法能有效提高乳酸菌微丸中乳酸菌的稳定性，耐受性，从而提高乳酸菌微丸在储存、运输及在加工过程中的乳酸菌的存活率，提高饲料中的活菌率，同时该制备方法简单易控，适用于工业化大规模生产。

为解决上述技术问题，本发明通过以下技术方案实现。

一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，通过下述步骤制备；

（1）制备乳酸菌菌泥：将乳酸菌培养至对数生长期中期时，约10～16h，向培养液中加入一定量的氯化钠使培养液中氯化钠的终浓度控制在0.4～0.7mol/L；在该浓度下将乳酸菌继续培养至稳定生长期前期，约6～10h，在离心加速度为4600g条件下离心10min，用0.85～0.9%的生理盐水清洗菌泥两次，收集菌泥，然后将菌泥重悬与新鲜MRS培养基中，缓慢升温至45～55℃，并在该温度下保持30min后，迅速冷却至0～4℃，备用；

（2）称取填充剂200～250份、海藻酸钠25～50份、乳清蛋白25～50份、低聚木糖30～50份、低聚果糖30～50份、抗性淀粉30～50份、抗氧化剂1～3份及步骤（1）中制备的菌泥280～400份，然后将称量好的菌泥和其他成分在搅拌器中混合均匀，制成软材，

（3）将步骤（2）制得的软材，放入挤出滚丸机中制粒，制粒后干燥即得饲用乳酸菌微丸。

制备步骤（1）在乳酸菌培养至对数生长期中期加入氯化钠，此时乳酸菌数量较多，活力旺盛，加入氯化钠，有利于得到抗性较强的乳酸菌；且此时加入氯化钠，能保证足够胁迫处理时间，带来较好的效果，氯化钠加入量以使培养液中氯化钠的终浓度控制在0.4～0.7 mol/L为准，经过实验，我们发现在该浓度范围下，对于大多数乳酸菌破坏作用较小，其生长速率基本不会受到太大的抑制，同时又能有效提高乳酸菌的抗性。

步骤（3）中所述的制粒条件是在800～1000转/分钟下处理10～15分钟。

步骤（3）中所述的干燥是在40～48℃下将水分干燥至4%～7%。

所述填充剂为预制糊化淀粉、微晶纤维素，乳糖，甘露醇中的一种或一种以上的混合。

所述抗氧化剂为维生素C，维生素E中的一种或两种。

所述乳酸菌菌泥选自植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌中的一种或两种以上。

有益效果：

1、现有技术中相比，本发明具有以下优点：

本发明先采用0.4～0.7mol/L氯化钠的高盐处理乳酸菌后再采用45～55℃的高温处理乳酸菌，这种组合处理具有协同作用，能诱导交叉保护作用，提高乳酸菌耐受性和稳定性，对乳酸菌在后续制粒过程中的保护效果较好，同时本发明在将乳酸菌培养至对数生长期中期时向培养液中加入适量的氯化钠并继续培养，实现了在培养过程中较长时间的盐胁迫处理，无需离心收集来进行下一步的操作，有利于连续的操作，适合工业化大规模生产。

通过本发明的方法制备得到的乳酸菌微丸具有封闭、紧密的结构，有利于维持一个稳定的低温内部环境，从而减少外界温度波动对乳酸菌细胞的破坏作用，提高乳酸菌在贮存、运输及制粒过程中的存活率，尤其是饲料制粒时高温、高湿对乳酸菌的破坏作用远低于粉状微胶囊形式的产品，另外，微丸生产能力大，设备费用较低，且粒度分布好，流动性高，易于在饲料工业中大规模应用。

微丸的填充剂与其它成分的配比对于微丸的成型性很重要，在粘合剂水的作用下，如果配比低，呈球形差，如果配比高，其他辅料的配比就减少，不利于保持饲用乳酸菌微丸在加工、运用中的存活率及运用过程中的促生长作用，因此发明人通过长期实践，得出了本发明饲用乳酸菌微丸的特定组成成分及各成分的配比，使得微丸具有很好的成型性，在加工过程中保持乳酸菌的稳定性，提高乳酸菌在加工过程及运用过程中的存活率。

本发明采用海藻酸钠和乳清蛋白作为保护剂，海藻酸钠是一种肠溶性的食品级壁材，它能够使微丸在肠道再崩解释放，避免了乳酸菌在胃中崩解释放而被胃酸杀死的问题，提高了乳酸菌在肠道中的存活率，从而有效发挥乳酸菌的益生功效，乳清蛋白能缓冲胃酸对乳酸菌的胁迫作用，与海藻酸钠协同保护乳酸菌。

本发明采用低聚木糖、低聚果糖和抗性淀粉作为生长促进剂，他们属于益生元，在肠道中不会被有害菌利用，相反能够促进乳酸菌增殖；在饲料的制粒的过程中，它们能与海藻酸钠和乳清蛋白发挥协同保护作用，提高乳酸菌在制粒过程中的存活率；另其本身就是一种营养物质，对人体和动物均有好处。

2、本发明采用预制糊化淀粉、微晶纤维素，乳糖，甘露醇作为填充剂，使得饲用乳酸菌微丸具有很好的成型性，保持很好的球形。

3、乳酸菌是一种厌氧或者微好氧的微生物，在制粒的过程乳酸菌会暴露于空气，因此本发明采用维生素C和维生素E作为抗氧化剂，有利于提高乳酸菌的存活。

具体实施方式

下面结合具体实施例详细说明本发明。

实施例1

一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，通过下述步骤制备；

（1）制备乳酸菌菌泥：将植物乳杆菌在MRS培养液中培养至对数生长期中期时，约10～16h，向各自的培养液中加入一定量的氯化钠使培养液中氯化钠的终浓度控制在0.4mol/L；在该浓度下将植物乳杆菌继续培养至稳定生长期前期，约6～10h，在离心加速度为4600g条件下离心10min，用0.85%生理盐水清洗菌泥两次，收集菌泥，然后将菌泥重悬于新鲜MRS培养基中，缓慢升温至45℃，并在该温度下保持30min后，迅速冷却至0～4℃，备用；

（2）称取预制糊化淀粉200份、海藻酸钠25份、乳清蛋白25份、低聚木糖30份、低聚果糖30份、抗性淀粉30份、维生素C1份、及步骤（1）中制备的植物乳杆菌菌泥280份，然后将称量好的菌泥和其他成分在搅拌器中混合均匀，制成软材，此时软材的含水量约为35～42%；

（3）将步骤（2）制得的软材，放入挤出滚丸机在800转/分钟下处理10分钟制粒，制粒后在40℃下将水分干燥至4%即得饲用乳酸菌微丸。

实施例2

一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，通过下述步骤制备；

（1）制备乳酸菌菌泥：将干酪乳杆菌在MRS培养液中培养至对数生长期中期时（约10～16h），向各自的培养液中加入一定量的氯化钠使培养液中氯化钠的终浓度控制在0.5mol/L；在该浓度下将乳酸菌继续培养至稳定生长期前期（约6～10h），在离心加速度为4600g条件下离心10min，用0.85%的生理盐水清洗菌泥两次，收集菌泥，然后将菌泥重悬与新鲜MRS培养基中，缓慢升温至47℃，并在该温度下保持30min后，迅速冷却至0～4℃，备用；

（2）称取微晶纤维素220份、海藻酸钠30份、乳清蛋白30份、低聚木糖35份、低聚果糖35份、抗性淀粉35份、2份的维生素E及步骤（1）中制备的干酪乳杆菌菌泥290份，然后将称量好的菌泥和其他成分在搅拌器中混合均匀，制成软材，此时软材的含水量约为35～42%；

（3）将步骤（2）制得的软材，放入挤出滚丸机在850转/分钟下处理12分钟制粒，制粒后在42℃下将水分干燥至5%即得饲用乳酸菌微丸。

实施例3

一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，通过下述步骤制备；

（1）制备乳酸菌菌泥：将嗜酸乳杆菌在MRS培养液中培养至对数生长期中期时，约10～16h，向各自的培养液中加入一定量的氯化钠使培养液中氯化钠的终浓度控制在0.6Mmol/L；在该浓度下将乳酸菌继续培养至稳定生长期前期，约6～10h，在离心加速度为4600g条件下离心10min，用0.9%的生理盐水清洗菌泥两次，收集菌泥，然后将菌泥重悬与新鲜MRS培养基中，缓慢升温至50℃，并在该温度下保持30min后，迅速冷却至0～4℃，备用；

（2）称取乳糖230份、海藻酸钠40份、乳清蛋白40份、低聚木糖45份、低聚果糖45份、抗性淀粉40份、1份的维生素E、1份的维生素C及步骤（1）中制备的嗜酸乳杆菌菌泥300份，然后将称量好的菌泥和其他成分在搅拌器中混合均匀，制成软材，此时软材的含水量约为35～42%；

（3）将步骤（2）制得的软材，放入挤出滚丸机在900转/分钟下处理13分钟制粒，制粒后在45℃下将水分干燥至6%即得饲用乳酸菌微丸。

实施例4

一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，通过下述步骤制备；

（1）制备乳酸菌菌泥：将嗜热链球菌在MRS培养液中培养至对数生长期中期时，约10～16h，向各自的培养液中加入一定量的氯化钠使培养液中氯化钠的终浓度控制在0.7mol/L；在该浓度下将乳酸菌继续培养至稳定生长期前期，约6～10h，在离心加速度为4600g条件下离心10min，用0.9%的生理盐水清洗菌泥两次，收集菌泥，然后将菌泥重悬与新鲜MRS培养基中，缓慢升温至52℃，并在该温度下保持30min后，迅速冷却至0～4℃，备用；

（2）称取甘露醇240份、海藻酸钠45份、乳清蛋白45份、低聚木糖45份、低聚果糖45份、抗性淀粉45份、1份的维生素E、1.5份的维生素C及步骤（1）中制备的嗜热链球菌菌泥320份，然后将称量好的菌泥和其他成分在搅拌器中混合均匀，制成软材，此时软材的含水量约为35～42%；

（3）将步骤（2）制得的软材，放入挤出滚丸机在950转/分钟下处理14分钟制粒，制粒后在48℃下将水分干燥至7%即得饲用乳酸菌微丸。

实施例5

一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，通过下述步骤制备；

（1）制备乳酸菌菌泥：将嗜热链球菌在MRS培养液中培养至对数生长期中期时，约10～16h，向各自的培养液中加入一定量的氯化钠使培养液中氯化钠的终浓度控制在0.7Mmol/L；在该浓度下将乳酸菌继续培养至稳定生长期前期，约6～10h，在离心加速度为4600g条件下离心10min，用0.9%的生理盐水清洗菌泥两次，收集菌泥，然后将菌泥重悬与新鲜MRS培养基中，缓慢升温至55℃，并在该温度下保持30min后，迅速冷却至0～4℃，备用；

（2）称取微晶纤维素250份、海藻酸钠50份、乳清蛋白50份、低聚木糖50份、低聚果糖50份、抗性淀粉50份、1份的维生素E、2份的维生素C及步骤（1）中制备的嗜热链球菌菌泥340份，然后将称量好的菌泥和其他成分在搅拌器中混合均匀，制成软材，此时软材的含水量约为35～42%；

（3）将步骤（2）制得的软材，放入挤出滚丸机在1000转/分钟下处理15分钟制粒，制粒后在48℃下将水分干燥至7%即得饲用乳酸菌微丸。

实施例6

一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，通过下述步骤制备；

（1）制备乳酸菌菌泥：将植物乳杆菌、干酪乳杆菌分别在MRS培养液中培养至对数生长期中期时，约10～16h，向各自的培养液中加入一定量的氯化钠使培养液中氯化钠的终浓度控制在0.4mol/L；在该浓度下将植物乳杆菌、干酪乳杆菌继续培养至稳定生长期前期，约6～10h，在离心加速度为4600g条件下离心10min，用0.85%生理盐水清洗菌泥两次，收集菌泥，然后将菌泥重悬于新鲜MRS培养基中，缓慢升温至45℃，并在该温度下保持30min后，迅速冷却至0～4℃，备用；

（2）称取填充剂200份、海藻酸钠25份、乳清蛋白25份、低聚木糖30份、低聚果糖30份、抗性淀粉30份、维生素C1份、及步骤（1）中制备的植物乳杆菌菌泥、干酪乳杆菌菌泥共350份，然后将称量好的菌泥和其他成分在搅拌器中混合均匀，制成软材，此时软材的含水量约为35～42%；

（3）将步骤（2）制得的软材，放入挤出滚丸机在800转/分钟下处理10分钟制粒，制粒后在40℃下将水分干燥至4%即得饲用乳酸菌微丸。

本实施例的所述填充剂为预制糊化淀粉、微晶纤维素的混合。

实施例7

一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，通过下述步骤制备；

（1）制备乳酸菌菌泥：将植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌分别在MRS培养液中培养至对数生长期中期时，约10～16h，向各自培养液中加入一定量的氯化钠使培养液中氯化钠的终浓度控制在0.5mol/L；在该浓度下将植物乳杆菌、干酪乳杆菌继续培养至稳定生长期前期，约6～10h，在离心加速度为4600g条件下离心10min，用0.85%的生理盐水清洗菌泥两次，收集菌泥，然后将菌泥重悬与新鲜MRS培养基中，缓慢升温至47℃，并在该温度下保持30min后，迅速冷却至0～4℃，备用；

（2）称取填充剂220份、海藻酸钠30份、乳清蛋白30份、低聚木糖35份、低聚果糖35份、抗性淀粉35份、2份的维生素E及步骤（1）中制备的植物乳杆菌菌泥、干酪乳杆菌菌泥、嗜酸乳杆菌菌泥共360份，然后将称量好的菌泥和其他成分在搅拌器中混合均匀，制成软材，此时软材的含水量约为35～42%；

（3）将步骤（2）制得的软材，放入挤出滚丸机在850转/分钟下处理12分钟制粒，制粒后在42℃下将水分干燥至5%即得饲用乳酸菌微丸。

本实施例的所述填充剂为乳糖和甘露醇的混合。

实施例8

一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，通过下述步骤制备；

（1）制备乳酸菌菌泥：将嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌分别在MRS培养液中培养至对数生长期中期时，约10～16h，向各自的培养液中加入一定量的氯化钠使培养液中氯化钠的终浓度控制在0.6mol/L；在该浓度下将嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌继续培养至稳定生长期前期，约6～10h，在离心加速度为4600g条件下离心10min，用0.9%的生理盐水清洗菌泥两次，收集菌泥，然后将菌泥重悬与新鲜MRS培养基中，缓慢升温至50℃，并在该温度下保持30min后，迅速冷却至0～4℃，备用；

（2）称取乳糖230份、海藻酸钠40份、乳清蛋白40份、低聚木糖45份、低聚果糖45份、抗性淀粉40份、1份的维生素E、1份的维生素C及步骤（1）中制备的嗜酸乳杆菌菌泥、嗜热链球菌菌泥共370份，然后将称量好的菌泥和其他成分在搅拌器中混合均匀，制成软材，此时软材的含水量约为35～42%；

（3）将步骤（2）制得的软材，放入挤出滚丸机在900转/分钟下处理13分钟制粒，制粒后在45℃下将水分干燥至6%即得饲用乳酸菌微丸。

本实施例中所述填充剂为预制糊化淀粉、微晶纤维素及乳糖的混合

实施例9

一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，通过下述步骤制备；

（1）制备乳酸菌菌泥：将干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌分别在MRS培养液中培养至对数生长期中期时，约10～16h，向各自的培养液中加入一定量的氯化钠使培养液中氯化钠的终浓度控制在0.7mol/L；在该浓度下将干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌继续培养至稳定生长期前期，约6～10h，在离心加速度为4600g条件下离心10min，用0.9%的生理盐水清洗菌泥两次，收集菌泥，然后将菌泥重悬与新鲜MRS培养基中，缓慢升温至52℃，并在该温度下保持30min后，迅速冷却至0～4℃，备用；

（2）称取填充剂240份、海藻酸钠45份、乳清蛋白45份、低聚木糖45份、低聚果糖45份、抗性淀粉45份、1份的维生素E、1.5份的维生素C及步骤（1）中制备的干酪乳杆菌菌泥、嗜酸乳杆菌菌泥、嗜热链球菌菌泥380份，然后将称量好的菌泥和其他成分在搅拌器中混合均匀，制成软材，此时软材的含水量约为35～42%；

（3）将步骤（2）制得的软材，放入挤出滚丸机在950转/分钟下处理14分钟制粒，制粒后在48℃下将水分干燥至7%即得饲用乳酸菌微丸。

本实施例中所述的填充剂为微晶纤维素、乳糖及甘露醇的混合。

实施例10

一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，通过下述步骤制备；

（1）制备乳酸菌菌泥：将植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌在MRS培养液中培养至对数生长期中期时，约10～16h，向各自的培养液中加入一定量的氯化钠使培养液中氯化钠的终浓度控制在0.7Mmol/L；在该浓度下将植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌继续培养至稳定生长期前期，约6～10h，在离心加速度为4600g条件下离心10min，用0.9%的生理盐水清洗菌泥两次，收集菌泥，然后将菌泥重悬与新鲜MRS培养基中，缓慢升温至55℃，并在该温度下保持30min后，迅速冷却至0～4℃，备用；

（2）称取微晶纤维素250份、海藻酸钠50份、乳清蛋白50份、低聚木糖50份、低聚果糖50份、抗性淀粉50份、1份的维生素E、2份的维生素C及步骤（1）中制备的植物乳杆菌菌泥、干酪乳杆菌菌泥、嗜酸乳杆菌菌泥、嗜热链球菌菌泥共390份，然后将称量好的菌泥和其他成分在搅拌器中混合均匀，制成软材，此时软材的含水量约为35～42%；

（3）将步骤（2）制得的软材，放入挤出滚丸机在1000转/分钟下处理15分钟制粒，制粒后在48℃下将水分干燥至7%即得饲用乳酸菌微丸。

本实施例中所述的填充剂为预制糊化淀粉、微晶纤维素、乳糖及甘露醇的混合。

实施例11

本实施例提供两种微丸的制备方法，方法1和方法2，该两种方法的不同点在于乳酸菌菌泥的制备，两种方法与壁材的混合步骤、制粒步骤相同，都采用本发明的制备步骤。

方法1：:采用本发明的制备过程。

方法2：将乳酸菌在MRS培养液中培养至稳定生长期前期，然后收集菌泥重悬于新鲜MRS培养液中，于0～4℃条件下保存，然后采用本发明方法制软材、制粒。

测定方法：分别取按方法2（对照方法）制备的样品、按照方法1（本发明方法）制备的饲用乳酸菌微丸样品1g，在低温的条件下，磨成粗粉，加入到9g无菌水中，搅拌10~20min，待全部溶解后，梯度稀释，采用平板计数的方法对活菌数进行检测，平板计数的培养基是MRS培养基；乳酸菌活菌率结果如下表1

表1

实施例12

将粉剂乳酸菌微胶囊1g、按照本发明方法制备的饲用乳酸菌微丸1g，分别加入到9ml模拟胃液中（pH 2.0， 50U/mL，2h）用高速分散器对其均质，12000转/分钟~16000转/分钟处理60s后，分别采用平板计数法计数，测定饲用乳酸菌微丸，粉剂乳酸菌微胶囊在模拟胃液中的活菌率，结果如下表2：

表2

由上表2可知，在人体模拟胃液中（pH 2.0， 50U/mL，2h），微丸能够提供给乳酸菌较好的保护效果，相比于普通的粉剂乳酸菌微胶囊，本发明微丸的活菌率较高。

实施例13

将通过本发明方法制备得到的饲用乳酸菌微丸、现有技术中的粉剂乳酸菌微胶囊分别于常温（约20℃）保存30天，低温（4℃）保存30天，然后分别取两种保存条件下的饲用乳酸菌微丸各1g微丸、两种保存条件下保存的粉剂乳酸菌微胶囊各1g，在低温的条件下，磨成粗粉，加入到9g无菌水中，搅拌10~20min，待全部溶解后，梯度稀释，采用平板计数的方法对活菌数进行检测，平板计数的培养基是MRS培养基。活菌的存活结果如下表3：

表3

由上表3可知：包埋于微丸中的乳酸菌具有较好的储藏稳定性，相比于冷冻干燥和喷雾干燥得到的乳酸菌菌粉，乳酸菌的存活率分别被提高了60～80倍和7～14倍。

实施例14

本实施例将饲用乳酸菌微丸，粉剂微胶囊经过饲料制粒后测定其活菌率；

制粒工艺：将微丸或粉剂微胶囊与其他饲料原料按比例混合后，调节螺杆转速21r/min，螺孔孔径3.0mm；调节水分15~17%，制粒温度为55~65℃，调节时间40s；蒸汽压力0.3~0.35Mpa，粒料长径比为2.5:1，进行颗粒料的制粒。

测定条件：分别称取含饲用乳酸菌微丸饲料样品和含粉剂微胶囊的饲料各1g，加入装有9mL无菌水的离心管中，用高速分散器对其均质，12000转/分钟~16000转/分钟处理60s后，分别采用平板计数法计数，饲料中乳酸菌的存活率如下表4：

表4

由上表4可知，在经过饲料制粒过程后，饲用乳酸菌微丸能更好的抵御制粒过程中的各种破坏作用，对乳酸菌具有更好的保护作用，活菌率比粉剂乳酸菌微胶囊活菌率提高了100倍以上。

Claims (6)

1.一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，其特征在于：通过下述步骤制备；

（1）制备乳酸菌菌泥：将乳酸菌培养至对数生长期中期时，向培养液中加入一定量的氯化钠使培养液中氯化钠的终浓度控制在0.4～0.7mol/L；在该浓度下将乳酸菌继续培养至稳定生长期前期，离心，用生理盐水清洗菌泥，收集菌泥，然后将菌泥重悬于新鲜MRS培养基中，缓慢升温至45～55℃，并在该温度下保持30min后，迅速冷却至0～4℃，备用；

（2）称取填充剂200～250份、海藻酸钠25～50份、乳清蛋白25～50份、低聚木糖30～50份、低聚果糖30-50份、抗性淀粉30～50份、抗氧化剂1～3份及步骤（1）中制备的菌泥280～400份，然后将称量好的菌泥和其他成分在搅拌器中混合均匀，制成软材，

（3）将上述制得的软材，放入挤出滚丸机中制粒，制粒后干燥即得饲用乳酸菌微丸。

2.根据权利要求1所述的一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，其特征在于：步骤（3）中所述的制粒条件是在800～1000转/分钟下处理10～15分钟。

3.根据权利要求1或2所述的一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，其特征在于：步骤（3）中所述的干燥是在40～48℃下将水分干燥至4～7%。

4.根据权利要求1所述的一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述填充剂为预制糊化淀粉、微晶纤维素，乳糖，甘露醇中的一种或一种以上的混合。

5.根据权利要求1所述的一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述抗氧化剂为维生素C，维生素E中的一种或两种。

6.根据权利要求1所述的一种饲用乳酸菌微丸的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述乳酸菌选自植物乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌中的一种或两种以上。