CN104623649A - 一种预防金鲳鱼无乳链球菌病的疫苗 - Google Patents
一种预防金鲳鱼无乳链球菌病的疫苗 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了无乳链球菌(streptococcus agalactiae)在制备预防金鲳鱼无乳链球菌病的药物中的用途。本发明还提供了一种疫苗,它是由无乳链球菌(streptococcus agalactiae)和药学上可接受的辅料或者载体制备而成,还提供了该疫苗在制备预防金鲳鱼无乳链球菌病的药物中的用途。本发明提供的疫苗可刺激金鲳鱼产生抗金鲳鱼无乳链球菌病的免疫力,能有效的预防金鲳鱼无乳链球菌病。
Description
技术领域
本发明涉及一种鱼用疫苗,特别涉及一种预防金鲳鱼无乳链球菌病的疫苗。
背景技术
金鲳鱼学名卵形鲳鲹,地方名称黄蜡鲳,金鲳,属硬骨鱼纲,鲈形目,鲹科,鲳鲹属。其具有肉质鲜美,营养丰富等特点,深受消费者欢迎。因此,金鲳鱼作为一个主要的海水养殖品种,在我国沿海地区尤其在广东、海南得到了迅速发展,其养殖规模与养殖产量都逐年增加。
但随着养殖量和养殖规模的增加,金鲳鱼的疾病爆发也逐渐增多,尤其是近两年在海南金鲳鱼养殖区发生了一种新的疾病,该病主要有病鱼水中打转,鳍条充出血、***红肿的疾病,解剖后观察发现部分肝脏呈白色、部分肝脏充出血严重,肠道内有大量白色粘液,肠内壁充血症状明显等典型症状,具有传染性强、发病死亡快、死亡率高的特点,给养殖户带来了较大的经济损失。
由于该病的发病原因尚不清楚,目前只能采用通用的鱼病防治药物进行预防治疗,但防治效果不明显,同时还存在抗生素残留的潜在风险,且相应加大了养殖药用成本、养殖周期,随之必然带来的是养殖成本的增加。
因此,确认该疾病的发病原因,并制备一种特异性预防或治疗该疾病的药物是一个亟待解决的问题。
发明内容
为了解决上述问题,本发明提供了一种特异性预防该疾病的疫苗。
申请人通过大量研究发现,前述金鲳鱼病是由无乳链球菌引起的,可称为金鲳鱼无乳链球菌病。在本发明之前,未见无乳链球菌引起金鲳鱼疾病的报道。
根据前述研究结果,本发明提供了无乳链球菌(streptococcus agalactiae)在制备预防金鲳鱼无乳链球菌病的药物中的用途。
本发明还提供了一种疫苗,它是由无乳链球菌(streptococcus agalactiae)和药学上可接受的辅料或者载体制备而成。
其中,所述疫苗包含致免疫有效量的灭活的无乳链球菌以及药学上可接受的辅料或者载体。
优选地,所述的无乳链球菌是保藏号为ATCC 51487的无乳链球菌。
优选地,所述的无乳链球菌是保藏号为CGMCC NO.9974的无乳链球菌streptococcus agalactiae 14-48。
其中,所述的致免疫有效量为不低于2×105CFU/ml。优选地,所述的致免疫有效量为2×105-2×108CFU/ml。
其中,所述的辅料或者载体为水或吸附剂。所述的水为生理盐水或蒸馏水,所述的吸附剂是沸石或硅藻土。
本发明还提供了一种联合用药物,它包含前述的疫苗以及透皮吸收促进剂。
所述透皮吸收剂为氮酮或莨菪碱。
本发明还提供了前述疫苗在制备预防金鲳鱼无乳链球菌病的药物中的用途。所述预防金鲳鱼无乳链球菌病的药物的制剂是粉剂或水剂。
本发明还提供了一种无乳链球菌,它是由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的保藏号:CGMCC NO.9974的无乳链球菌streptococcus agalactiae 14-48。
本发明无乳链球菌streptococcus agalactiae 14-48,于2014年11月15日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC),地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号,保藏号为CGMCC NO.9974。
本发明提供的疫苗可刺激金鲳鱼产生免疫力,能有效的预防金鲳鱼无乳链球菌病,可避免农药的过度施用,是大规模水产养殖实现安全、生态的一种有效方法,可以提高金鲳鱼的品质,实现良好的经济效益。
本发明无乳链球菌streptococcus agalactiae 14-48,用其制备的疫苗,保护效果优于无乳链球菌标准菌株(ATCC 51487),应用前景良好。
显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
实施例1 菌株的分离鉴定
1、实验材料与方法
1.1 实验材料
待鉴定的细菌分离自海南临高某养殖场患病金鲳鱼,分离培养基为BHI,培养温度为37℃,编号为TW2014-48。
试剂耗材 16S rDNA通用扩增试剂盒(TAKARA)、BHI培养基、细菌生化微量鉴定管(杭州天和生物试剂有限公司)、Taq DNA聚合酶(TAKARA)、琼脂糖(TianGen)、100bp DNA maker(Tiangen)。
1.2 实验方法
1.2.1 革兰氏染色剂观察
取过夜培养的新鲜斜面一支,用接种环挑取少量菌体,涂在滴有少量无菌生理盐水的载玻片上,进行革兰氏染色,于显微镜下观察染色结果。
1.2.2 16S rDNA的扩增与分析
以提取的细菌基因组DNA作为模板,使用16S rDNA通用扩增引物扩增细菌的16S rDNA全长(PCR体系及扩增程序如下),PCR产物经DNA纯化***纯化后送生工生物工程(上海)有限公司进行序列测定。使用NCBI Blast数据库进行16S rDNA序列比对分析,得到细菌的种属。
PCR体系:
阴性对照使用1μl的16S-free H2O替代模板DNA。
PCR扩增程序:
1.2.3 细菌生化鉴定
根据16S rDNA序列比对分析结果,对分离株进行生化鉴定,鉴定方法按照生化鉴定操作步骤进行。
2、鉴定结果
2.1 培养及染色观察
TW2014-48为革兰氏阳性球菌,单个、成双、链状排列、长短不一。
2.2 16S rDNA扩增及分析
TW2014-48菌株经16S rDNA测序表明该片段有1542bp,其序列为:
GGAAATTTATCTTGGCTACGACGACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTAGAACGCTGATGTTTGGTGTTTACACTAGACTGATGAGTTGCGAACGGGTGAGTAACGCGTAGGTAACCTGCCTCATAGCGGGGGATAACTATTGGAAACGATAGCTAATACCGCATAAGAGTGATTAACACATGTTAGTTATTTAAAAGGAGCAATTGCTTCACTGTGAGATGGACCTGCGTTGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGGCGACGATACATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGACGGAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGAGAAGAACGTTGGTAGGAGTGGAAAATCTACCAAGTGACGGTAACTAACCAGAAAGGGACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTCCCGAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTCTTTAAGTCTGAAGTTAAAGGCAGTGGCTTAACCATTGTACGCTTTGGAAACTGGAGGACTTGAGTGCAGAAGGGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCGGTGGCGAAAGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTAGGCCCTTTCCGGGGCTTAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTTCTGACCGGCCTAGAGATAGGCTTTCTCTTCGGAGCAGAAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATTGTTAGTTGCCATCATTAAGTTGGGCACTCTAGCGAGACTGCCGGTAATAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTTGGTACAACGAGTCGCAAGCCGGTGACGGCAAGCTAATCTCTTAAAGCCAATCTCAGTTCGGATTGTAGGCTGCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGGAGCCAGCCGCCTAAGGTGGGATAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAACCCGTAGTCGTGACTGGAAACACACTCGTGCGCAGA
将获得的序列与Genbank中已报道的16S rDNA序列进行Blast分析,结果表明TW2014-48在***发育树上与无乳链球菌streptococcus agalactiae聚为一簇,其同源性为99%,结合形态学特征,将其鉴定为无乳链球菌streptococcusagalactiae。
结合16S rDNA及形态学特征,将TW2014-48鉴定为无乳链球菌S.agalactiae,命名为无乳链球菌streptococcus agalactiae 14-48,并于2014年11月15日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏号:CGMCC NO.9974。
实施例2 金鲳鱼无乳链球菌(TW2014-48)灭活疫苗的制备与免疫效果研究
本实验对从自然发病金鲳鱼体内分离的无乳链球菌进行了灭活全菌苗的制备与免疫效果的研究,旨在为金鲳鱼无乳链球菌病的免疫防治提供理论和试验依据。
1.材料与方法
1.1 材料
无乳链球菌(TW2014-48)分离自海南临高某养殖场患病金鲳鱼,保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏号:CGMCC NO.9974。
健康金鲳鱼购自海南某养殖场,平均体重153.2±3.5g,实验前与水族箱内驯养10天。
1.2 方法
1.2.1 疫苗的制备
在无菌条件下,将保存于-70℃的无乳链球菌接种到脑心培养基(BHI)上,37℃恒温培养24h,挑取菌落接种于BHI平板培养基上37℃恒温培养24h,用无菌生理盐水洗脱,调整菌液浓度为2×108CFU/ml,再加入0.6%的***在37℃振荡灭活36h,即为全菌灭活疫苗,4℃环境中保藏备用。
1.2.2 疫苗安全性检查
将制备的灭活全菌苗接种于绵羊鲜血BHI琼脂平板,37℃恒温培养36-48h后观察平板上是否有细菌生长以判定菌体疫苗中是否含有未灭活的病原菌;同时采用腹腔注射的方法,将制备的菌体疫苗按正常接种量的5倍与10倍剂量接种健康金鲳鱼进行人工感染实验,接种后观察21d,以检查菌体疫苗是否对健康金鲳鱼致病。
1.2.3 实验分组
将360尾健康金鲳鱼随机平均分成12组,每组30尾。采用浸泡与注射两种免疫途径对金鲳鱼进行免疫,灭活全菌苗按试验所需浓度进行稀释,同时注射生理盐水作为试验对照组(表1)。
1.3 保护性实验
免疫后3周,采用金鲳鱼无乳链球菌(TW2014-48)对免疫组与对照组的实验鱼进行人工攻毒感染,每尾实验鱼腹腔注射金鲳鱼无乳链球菌(TW2014-48)8×107CFU/ml病原菌0.2ml,观察各实验组的发病死亡情况,计算免疫保护率,评定疫苗的免疫效果。按照下列公式计算相对免疫保护率(RPS):
RPS(%)=(对照组死亡率-实验组死亡率)/对照组死亡率×100%
2 结果
2.1 疫苗的安全性
经平板计数法得出***灭活疫苗中的含菌量2×108CFU/ml。取疫苗200ul接种于绵羊鲜血BHI琼脂平板,在37℃下培养24-48h,未发现细菌生长。将制备灭活全菌疫苗对健康金鲳鱼进行攻毒感染,观察21d未发现接种鱼异常。从体内和体外实验结果表明浓度为0.6%(V/V)的***在37℃条件下对病原菌进行36h的灭活,所制备的疫苗是安全的。
2.2 疫苗的保护性
金鲳鱼注射与浸泡3周后,用无乳链球菌(TW2014-48)对免疫后的实验鱼进行人工感染实验。结果发现:制备的无乳链球菌(TW2014-48)全菌灭活疫苗经浸泡与注射免疫金鲳鱼后具有一定的免疫保护能力,注射免疫的保护能力优于浸泡免疫,注射时其浓度在2.0×108CFU/ml则较为适宜。
表1 无乳链球菌(TW2014-48)灭活疫苗免疫后的保护情况
3 结论
从自然感染发生无乳链球菌病的金鲳鱼分离到的无乳链球菌(TW2014-48)制备的全菌灭活苗具有较好的免疫原性,经浸泡和注射两种方式免疫金鲳鱼后都能产生无乳链球菌病的免疫力,其保护率在53.3%-76.7%之间,浸泡免疫中灭活疫苗的菌体浓度在2.0×108CFU/ml较为适宜,而注射时其浓度在2.0×108CFU/ml则较为适宜。
实验结果说明,采用本发明无乳链球菌streptococcus agalactiae 14-48制备的疫苗对由其因为的金鲳鱼无乳链球菌病有良好的预防作用。
实施例3 金鲳鱼无乳链球菌(TW2014-48)与无乳链球菌标准菌株(ATCC51487)制备的灭活全菌疫苗的免疫效果比较研究
本实验进行了分离无乳链球菌与标准菌株制备的灭活疫苗对金鲳鱼无乳链球菌病免疫效果的比较研究,为金鲳鱼无乳链球菌病更好的开展免疫防治提供可靠的依据。
1.材料与方法
1.1 菌种
金鲳鱼无乳链球菌病(TW2014-48)分离自患病金鲳鱼,保藏号:CGMCCNO.9974。
无乳链球菌标准菌株(ATCC 51487)由四川农业大学鱼病研究中心赠送。
1.2 实验鱼
购于海南海丰深海网箱养殖场的健康金鲳鱼(Trachinotus ovatus),平均体重252.8±3.5g,实验前于水族箱内驯养10天。
1.3 疫苗的制备
将存放于-70℃的无乳链球菌(TW2014-48)和无乳链球菌标准菌株(ATCC 51487)分别接种于BHI平板在37℃培养24h复苏,再挑取单个菌落涂布于BHI固体培养基,用生理盐水洗下作平板计数法确定细菌浓度,同时用浓度为0.6%(V/V)***,37℃灭活36h,制成全菌灭活疫苗。
1.4 疫苗安全性检查
将制备的灭活全菌苗(TW2014-48)和无乳链球菌标准菌株(ATCC51487)分别接种在绵羊鲜血BHI琼脂平板上,37℃恒温培养24-48h后观察平板上是否有细菌生长以判定制备疫苗未完全灭活;同时采用腹腔注射的方法,将制备的疫苗按正常接种量的5倍与10倍剂量接种健康金鲳鱼进行人工感染实验,接种后观察21d,检查菌体疫苗是否对健康金鲳鱼致病。
1.5 实验分组
将450尾健康金鲳鱼随机平均分成6组,每组90尾,每组设3个重复。用金鲳鱼无乳链球菌(TW2014-48)和无乳链球菌标准菌株(ATCC 51487)制备的灭活全菌疫苗分别采用浸泡与注射两种免疫途径对金鲳鱼进行免疫,同时设置生理盐水对照组。
1.6 保护性实验
免疫后3周,采用金鲳鱼无乳链球菌(TW2014-48)对免疫组与对照组的试验鱼进行人工攻毒感染,腹腔注射实验鱼8×107CFU/ml的无乳链球菌(TW2014-48),每尾0.2ml,观察各实验组的发病死亡情况,得出保护率。
1.7 数据处理
数据用“平均数±SD”表示,采用SPSS19.0软件对数据进行方差分析,并用LSD和Duncan’s法进行多重比较,P<0.05表示差异显著。
2.结果
2.1 疫苗的安全性
通过平板计数法得出制备的无乳链球菌TW2014-48株疫苗以及无乳链球菌标准菌株(ATCC 51487)的菌体浓度均为2×108CFU/ml。将该疫苗200ul接种于绵羊鲜血TSA琼脂平板上,在37℃下培养24~48h后,未发现细菌生长。进行安全性试验表明,在21d观察期间,试验鱼未出现异常。试验结果表明浓度为0.5%(V/V)的***在28℃条件下对病原菌进行36h的灭活,能将病原菌彻底灭活,制备的疫苗是安全的。
2.2 疫苗的保护性
将两种全菌灭活苗,采用注射与浸泡两种免疫途径对健康金鲳鱼进行免疫3周后,用金鲳鱼无乳链球菌(TW2014-48)对免疫后的实验鱼进行人工感染实验。同时按照如下的公式计算相对免疫保护率(RPS)。
RPS(%)=(对照组死亡率-实验组死亡率)/对照组死亡率×100%
结果发现如下表:在浸泡或注射免疫组,金鲳鱼无乳链球菌(TW2014-48)灭活疫苗保护率明显高于无乳链球菌标准菌株灭活苗,且与标准菌株灭活苗差异显著(P<0.05)(如表2、表3)。
表2 金鲳鱼无乳链球菌(TW2014-48)与无乳链球菌标准菌株(ATCC 51487)制备的疫苗的保护性比较(注射组)
注:不同小写字母表示差异显著(P<0.05),下同。
表3 金鲳鱼无乳链球菌(TW2014-48)与无乳链球菌标准菌株(ATCC 51487)制备的疫苗的保护性比较(浸泡组)
3.结论
本实验发现,从自然感染发生金鲳鱼分离到的无乳链球菌(TW2014-48)制备的全菌灭活苗经浸泡与注射两种方式免疫金鲳鱼后都能产生一定的免疫力,且其保护率均明显高于无乳链球菌标准菌株(ATCC 51487)制备的疫苗保护率。
结果表明,在制备免疫预防金鲳鱼无乳链球菌的疫苗时,本发明无乳链球菌streptococcus agalactiae 14-48比无乳链球菌标准菌株(ATCC 51487)具有更优的临床应用价值。
实施例4 灭活疫苗水剂的制备
1.无乳链球菌灭活疫苗的制备
1.1 菌种复苏
在无菌条件下,取-800℃条件下保存的无乳链球菌菌种(TW2014-48)接种于BHI平板在37℃培养24h复苏,用接种环从平板上挑取单个菌落接种到10mlBHI肉汤中,将接种后的肉汤放入水浴振荡器中,37℃,150r/min,振荡培养14h。
1.2 菌液增殖培养
①初级培养
在无菌条件下,将复苏培养的菌液10ml接种到100ml BHI肉汤中,将接种后的肉汤放入水浴振荡器中,37℃,150r/min,振荡培养16h。
②菌液次级培养
分次取2ml次级培养的BHI肉汤均匀的涂布在制备好的BHI大平板上,将涂布好的BHI平板放入37℃恒温培养箱中,培养24h(注意培养时间以细菌苔长满整个平板为度);在无菌工作室,用灭菌的生理盐水冲洗平板上生长的菌苔,将洗下的菌悬液置于灭菌的输液瓶中。
③洗脱菌液扩大培养
将从平板上洗脱的菌液按每5ml接种200ml BHI肉汤,进行菌液的扩大培养,37℃,150r/min,振荡培养24h。得到高浓度的细菌悬液。
(1)菌液的计数
对增殖培养后的菌液采用平板稀释细菌技术方法进行计数
①选取大小一致的平板清洗高压灭菌后,制备BHI平板备用;
②无菌操作将在菌苗制备过程中取的菌液进行倍比(10n)稀释备用;
③将稀释的菌液取0.1ml涂布BHI平板,37℃,恒温箱中培养16小时,计数菌落个数;
④选择平均菌落数在30-300个之间稀释度的平板,以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数,则为该菌的细菌总数。
⑤将细菌的浓度稀释确定为2.0×108CFU/ml。
(2)菌液的灭活
对扩大培养的菌液,按体积比例添加60.6%的***,放入水浴振荡器中,37℃,150r/min,振荡36h灭活。
(3)灭活效果检查
灭活后的菌悬液每次需进行灭活效果的检查,在无菌操作下用用移液枪吸取300ul制备的疫苗到绵羊鲜血BHI琼脂平板上,37℃恒温培养24-48h后观察平板上是否有细菌生长以判定制备疫苗未完全灭活,检查有无细菌生长,若有细菌生长需再进行灭活处理,若无细菌生长则进行下面的操作程序。
(4)菌苗的分装
灭活完全的疫苗,无菌操作进行分装于500ml灭菌高温瓶中,并对橡胶塞有孔隙的应采用石蜡封闭。分装好的灭活疫苗应置于4℃保存,备用。
制备成水剂时,浸泡免疫使用时可以与10mg/L的氮酮促渗剂联合应用,可同时混合使用,也可单独使用。
实施例5 灭活疫苗粉剂的制备
1 冷冻干燥法
将实施例4制备的无菌操作条件下分装好的***灭活全菌疫苗水溶液,放入真空冷冻干燥机进行预冻,待预冻达到一定温度时抽真空干燥。冻干结束后,充入干燥无菌的空气进入干燥箱,然后尽快地进行加塞封口,以防重新吸入空气中的水分。
2 低温烘干法
将实施例4制备的无菌操作条件下分装好的***灭活全菌疫苗水溶液在低温条件下进行水分蒸发烘干,加入吸附剂沸石或硅藻土低温烘干,烘干后的粉剂存放于无菌的玻璃瓶中。整个操作过程需在无菌条件下进行,烘干温度在40℃-50℃,以免影响抗原性。
干燥后加入辅料可溶性淀粉,得到全菌苗粉剂,规格:1.1×108CFU/g。
综上,本发明提供的疫苗可刺激金鲳鱼产生免疫力,能有效的预防金鲳鱼无乳链球菌病,可避免农药的过度施用,是大规模水产养殖实现安全、生态的一种有效方法,可以提高金鲳鱼的品质,实现良好的经济效益。
Claims (14)
1.无乳链球菌(streptococcus agalactiae)在制备预防金鲳鱼无乳链球菌病的药物中的用途。
2.一种疫苗,其特征在于:它是由无乳链球菌(streptococcus agalactiae)和药学上可接受的辅料或者载体制备而成。
3.根据权利要求2所述的疫苗,其特征在于:所述疫苗包含致免疫有效量的灭活的无乳链球菌以及药学上可接受的辅料或者载体。
4.根据权利要求3所述的疫苗,其特征在于:所述的无乳链球菌是保藏号为ATCC 51487的无乳链球菌。
5.根据权利要求3所述的疫苗,其特征在于:所述的无乳链球菌是保藏号为CGMCC NO.9974的无乳链球菌streptococcus agalactiae 14-48。
6.根据权利要求5所述的疫苗,其特征在于:所述的致免疫有效量为不低于2×105CFU/ml。
7.根据权利要求6所述的疫苗,其特征在于:所述的致免疫有效量为2×105-2×108CFU/ml。
8.根据权利要求3所述的疫苗,其特征在于:所述的辅料或者载体为水或吸附剂。
9.根据权利要求8所述的疫苗,其特征在于:所述的水为生理盐水或蒸馏水,所述的吸附剂是沸石或硅藻土。
10.一种联合用药物,其特征在于:它包含权利要求2-9任意一项所述的疫苗以及透皮吸收促进剂。
11.根据权利要求10所述的联合用药物,其特征在于:所述透皮吸收剂为氮酮或莨菪碱。
12.权利要求2-9任意一项所述的疫苗在制备预防金鲳鱼无乳链球菌病的药物中的用途。
13.根据权利要求12所述的用途,其特征在于:所述预防金鲳鱼无乳链球菌病的药物的制剂是粉剂或水剂。
14.一种无乳链球菌,其特征在于:它是由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的保藏号:CGMCC NO.9974的无乳链球菌streptococcus agalactiae 14-48。
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2015
- 2015-02-28 CN CN201510091866.2A patent/CN104623649A/zh active Pending
Patent Citations (3)
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