CN104606679B - 一种供注射用复合乳糖的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种供注射用复合乳糖的生产工艺，该工艺采用超滤、纳滤与重结晶相结合除去乳糖中存在的残留葡萄糖、果糖、半乳糖、氨基酸、蛋白质，制得的复合乳糖符合注射用的要求，可用于注射剂产品。本发明提供的生产工艺简单可行，收率较高，适合于工业大生产。
Description
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种供注射用复合乳糖的生产方法。
背景技术
乳糖是一种双糖，由一分子葡萄糖和一分子半乳糖所构成，在自然条件下，存在于哺乳动物的乳汁中，工业生产中，常从乳清中提取，乳糖粗品中含有少量葡萄糖、半乳糖、果糖、蛋白质、氨基酸。在医药领域，乳糖有着重要的应用，作为冻干剂支架，它较其他常用冻干剂（例如：葡萄糖、甘露醇等）最大的区别在于，后者为单糖，分子质量相对较低，冻干时的玻璃化转变温度也较低，且冻干过程也是一个结晶过程，对某些比较“脆弱”的冻干剂，这一结晶过程具有极强的破坏作用；另外玻璃化转变温度较高的乳糖在冻干过程中并无结晶产生，而是以无定型存在，对主成分或某些特殊制剂不具破坏作用，因此在这类制剂中，乳糖通常都扮演了“冻干保护剂”的角色。
由于乳糖的众多的优良特性，使得它在冻干制剂领域，尤其在新型给药***（纳米乳剂、脂质体等）的应用中具有不可替代的作用。但由于来源比较特殊，其经过传统的纯化工艺生产的乳糖，由于存在诸多杂质，在注射给药时极易引起诸如荨麻疹、咳嗽、发热、休克等一系列不良反应，这使原本性能优良的乳糖在注射剂产品中的应用受到了极大的限制。
中国专利申请201210437448.0公开的乳糖的精制方法，该方法用于生产注射用的乳糖，但在没有去除乳糖粗品中果糖、葡萄糖、半乳糖、氨基酸和蛋白质的情况下，采用50~70℃的高温溶解，容易产生美拉德反应，特别是生成的果糖基氨基酸对人体构成损害。
目前的纯化工艺尚达不到生产注射级乳糖的要求，因此迫切需要新的纯化乳糖的工艺，以制备一种安全可靠的用于注射剂的乳糖。
发明内容
为了解决目前药用乳糖纯度不高，存在残留蛋白，达不到注射剂要求这一问题，且冻干保护效能仍然不足，本发明提供了一种乳糖的纯化方法，纯化后的乳糖可用于注射剂产品。
本发明采用纳滤和重结晶相结合的方法纯化乳糖，
与专利申请201210437448.0中所述乳糖的精制方法相比，本发明采用超滤和纳滤相结合的过滤方法，去除蛋白质、病毒和细菌，截留分子量在200~1000的物质，得到纯度较高的乳糖，接着采用高温溶解，再用醇水结晶的方法进一步去除蛋白质，并且乙醇的终含量控制在70~75%之间，在冷却结晶的同时对***进行进一步的杀菌。
本发明的技术方案如下：
一种药用复合乳糖的生产方法，所述药用复合乳糖的生产工艺步骤如下：
1.取乳糖粗品适量，加入2.4~4倍重量的水，搅拌加热至30~４0℃，制成乳糖溶液；
2.将乳糖经过截流量为3000MW的超滤装置进行过滤；
3.将滤液经过纳滤装置进行过滤；
4.将滤渣收集，加入1.3~2.5倍重量的纯化水，搅拌加热至50~70℃，制成乳糖溶液；
5.将步骤4中的乳糖溶液，加入3~3.8倍体积的乙醇，搅拌降温至10℃，析出晶体，此过程保持0.1~5小时；
6.将有晶体析出的溶液离心，收集晶体；
7.将步骤（6）所得的晶体与粘稠溶液均匀混合；
8.喷雾干燥，即得。
步骤1中所述的乳糖粗品为市售的普通乳糖或药用乳糖；
所述的粘稠溶液为羟丙基甲基纤维素水溶液。
其中复合乳糖由95％－99％的乳糖和1％－5％的羟丙基甲基纤维素。
本发明通过采用超滤、纳滤和醇水重结晶的方法，对蛋白质的清除率达到99.99%以上，对果糖、葡萄糖、氨基酸的清除率达99%以上，方便后续步骤的高温溶解。本发明制得的乳糖残留蛋白含量显著减少，可减少临床使用中因异源蛋白导致的不良反应，并且在高温溶解过程中不会产生糖基氨基酸，尤其是果糖基氨基酸，减少了对人体的危害，解决了普通口服级别乳糖用于注射剂时存在的一系列不良反应的问题，并极大的提高了冻干保护效能。可用于注射剂中，为制药行业新给药注射剂型的开发提供了一种优良辅料。本发明提供的纯化工艺简单可行，收率高，成本较低，环境友好，适合于工业大生产。
具体实施方式
以下通过实施例来对本发明内容做进一步说明。
实施例1：
1.称取乳糖粗品100g，加入400ml纯化水，搅拌加热至30℃，使其完全溶解形成乳糖溶液；
2.将乳糖粗品溶液用截留分子量为3000MW的超滤柱进行过滤；
3.将经过超滤后的乳糖溶液进行纳滤；
4.将滤出的乳糖加入150ml纯化水中，搅拌加热至70℃，使其完全溶解成乳糖溶液；
5.将步骤4中的乳糖溶液中加入450ml乙醇，搅拌冷却至10℃，析出晶体，此过程保持0.5小时；
6.将有晶体析出的溶液经滤袋式离心机进行离心，收集晶体；
７、取99克晶体与100ml含有1％的羟丙基甲基纤维素溶液搅拌混匀后喷雾干燥即得。
实施例2：
1.称取乳糖粗品20Kg，加入62L纯化水，搅拌加热至40℃，使其完全溶解形成乳糖溶液；
2.将乳糖粗品溶液用截留分子量为3000MW的超滤柱进行过滤；
3.将经过超滤后的乳糖溶液进行纳滤；
4.将滤出的乳糖加入30L纯化水中，搅拌加热至70℃，使其完全溶解成乳糖溶液；
5.将步骤4中的乳糖溶液中加入100L乙醇，搅拌冷却至10℃，析出晶体，此过程保持1小时；
6.将有晶体析出的溶液经滤袋式离心机进行离心，收集晶体；
7.取９７克晶体与１００ｍｌ含有３％的羟丙基甲基纤维素溶液搅拌混匀后喷雾干燥即得。
实施例3：
1.称取乳糖粗品20Kg，加入62L纯化水，搅拌加热至３５℃，使其完全溶解形成乳糖溶液；
2.将乳糖粗品溶液用截留分子量为3000MW的超滤柱进行过滤；
3.将经过超滤后的乳糖溶液进行纳滤；
4.将滤出的乳糖加入32L纯化水中，搅拌加热至70℃，使其完全溶解成乳糖溶液；
5.将步骤4中的乳糖溶液中加入100L乙醇，搅拌冷却至10℃，析出晶体，此过程保持1小时；
6.将有晶体析出的溶液经滤袋式离心机进行离心，收集晶体；
７、取９８克晶体与１００ｍｌ含有２％的羟丙基甲基纤维素溶液搅拌混匀后喷雾干燥即得。
实施例4：
1.称取乳糖粗品25Kg，加入80L纯化水，搅拌加热至40℃，使其完全溶解形成乳糖溶液；
2.将乳糖粗品溶液用截留分子量为3000MW的超滤柱进行过滤；
3.将经过超滤后的乳糖溶液进行纳滤；
4.将滤出的乳糖加入60L纯化水中，搅拌加热至50℃，使其完全溶解成乳糖溶液；
5.将步骤4中的乳糖溶液中加入180L乙醇，搅拌冷却至10℃，析出晶体，此过程保持1小时；
6.将有晶体析出的溶液经滤袋式离心机进行离心，收集晶体；
７、取９５克晶体与１００ｍｌ含有５％的羟丙基甲基纤维素溶液搅拌混匀后喷雾干燥即得。
实验例 产品性能检测
依据中国药典2015年版二部（征求意见稿）中的乳糖（供注射用）标准，对实施例1-4产品的部分重要指标进行检测，结果如下：
从以上结果可以看出，本发明生产的乳糖能够达到中国药典的注射标准，部分指标更优于所设定的标准值。
对比实施例：依实施例１方法制备，所不同的是在制备得到晶体后溶于水直接喷雾干燥。
存活率实验：
以鼠李糖乳杆菌为例，将菌种活化后按3%接种量接种于改良MRS液体培养基中37℃下培养，每隔3 h取样测定活菌数，以培养时间为横坐标、活菌数为纵坐标绘制生长曲线，以了解该菌的生长周期。RS培养基：蛋白胨1%、牛肉膏1%、葡萄糖3%、乙酸钠0.5%、酵母膏0.5%、柠檬酸二铵0.2%、磷酸氢二钾0.2%、硫酸镁0.02%、Tween800.1%(pH6.5、121℃、30 min灭菌)。菌种的活化，从冰箱中取出一只斜面在无菌操作状态下用接种针挑取2环干酪乳杆菌接入已灭菌的液体MRS培养基，37℃培养24～48 h进行活化，按照上述相同步骤活化2次以备用。扩大培养，将活化好的种子液以3%的接种量接入MRS液体三角瓶培养基中，37℃培养18 h。菌体的收集，将培养后的发酵液称好质量后放入离心机中以在4500 r/min下离心13 min，弃去上清液。将菌泥和保护剂在无菌条件下混合后放入已灭菌的20 mL小烧杯中，在-80℃冰箱中进行预冻，2 h后将小烧杯上的保鲜膜扎孔后放入冻干机中进行冻干。
活菌计数：采用美蓝计数法样品稀释一定倍数制成菌悬液后，用5μL微量定量移管吸
取菌悬液置干净载玻片上，加5μL的0.1％美蓝染液，盖上盖玻片，注意不可有气泡，也不可将菌液溢出盖玻片以外，将美蓝浸片置显微镜目镜16×，接物镜40×下镜检，按分布选择浸片4个角和中央的10～20个视野并计算活菌体数，求出每个视野中的乳酸活菌数平均值A，视野面积为B，盖玻片面积为C，稀释倍数为D，则每毫升或每克样品中的活菌数为：C/B×A×(1000/5)×D。
保护剂分别为实施例１的复合乳糖、对比例的乳糖、麦芽糖以及海藻糖，浓度均为5％，试验结果如下：
| 冻干保护剂 | 实施例１ | 对比例 | 麦芽糖 | 海藻糖 |
| 存活率 | 74.3％ | 25.1％ | 44.1％ | 55.2％ |
Claims (3)
1.一种注射用复合乳糖的生产方法，包括以下步骤：
(1)取乳糖粗品，加入2.4～4倍重量的纯化水，搅拌加热至30～40℃，制成乳糖溶液；
(2)将乳糖溶液经过截留分子量为3000MW的超滤装置进行超滤；
(3)将超滤后的乳糖溶液经过纳滤装置进行纳滤；
(4)取截留后的乳糖滤渣，加入1.3～2.5倍重量的纯化水，搅拌加热至50～70℃，制成乳糖溶液；
(5)将步骤(4)中的乳糖溶液，加入2.3～3倍体积的乙醇，搅拌降温至10℃，析出晶体，此过程持续0.1～5小时；
(6)将有晶体析出的溶液离心，收集晶体；
(7)将步骤(6)所得的晶体与粘稠溶液均匀混合；
(8)喷雾干燥，即得；
所述的粘稠溶液为羟丙基甲基纤维素水溶液，其中复合乳糖由95％－99％的乳糖和1％－5％的羟丙基甲基纤维素制成。
2.如权利要求1所述的一种注射用复合乳糖的生产方法，其特征在于所述步骤(2)中的超滤采用的压差为0.03～0.6MPa。
3.如权利要求1所述的一种注射用复合乳糖的生产方法，其特征在于所述步骤(3)中的纳滤的压差为0.5～1.0MPa。
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