CN104593480A - 运用比较基因组学快速鉴定菜豆抗白粉病基因 - Google Patents

Abstract

本发明是快速鉴定菜豆抗白粉病基因；涉及到植物比较基因组学，遗传学和生物信息学等学科知识，属于植物生物技术科学领域。该发明主要步骤为：1)菜豆全基因组序列的下载及MLO型基因的采集；2)MLO型基因的鉴定；3)MLO型基因***发育关系；4)MLO型白粉病基因的比对。该发明有效的缩短了菜豆白粉病基因挖掘周期，有利于白粉病基因的快速鉴定；通过鉴定的候选白粉病基因开发相应的共分离功能性标记(SNP、SCAR等)，还可以快速的用于抗白粉病基因的分子标记辅助选择，准确性高；结合其它抗病基因分子标记可进行多抗性育种材料的创制，缩短育种年限，提高育种效率；为阐述菜豆抗白粉病分子机制奠定了基础。

Description

运用比较基因组学快速鉴定菜豆抗白粉病基因

技术领域

本发明是借助于菜豆测序全基因组序列，利用植物比较基因组学、遗传学、生物信息学和候选基因策略等方法快速鉴定菜豆白粉病基因，主要涉及到菜豆全基因组序列的下载，候选基因的鉴定，基因的比对，聚类等手段，进而鉴定出白粉病基因，属于植物生物技术科学领域。

背景技术

菜豆是人类主要的食用豆类作物，占全球食用豆类总产量的50％，是植物蛋白的主要来源之一。菜豆白粉病在我国各地普遍发生，是生产中的主要病害，每年造成的产量损失高达30％，严重时甚至高达80％。目前在生产中，喷洒杀菌剂和推广抗病品种是主要的防治方法，但长期使用药物会导致环境污染和病菌生理小种变异，因此推广抗病品种是最安全有效的方法。目前国内菜豆育种相对落后，生产中使用的抗病品种还主要依赖进口。菜豆属严格自交作物，其花器官的特殊构造导致一般的杂交、回交等语种手段在菜豆上很难进行，因此利用常规育种方法选育抗病品种显得非常困难。挖掘抗病基因，利用生物工程创新种质成为下一步人们研究的重点。菜豆白粉病由半知菌亚门的粉孢属(Oidium spp.)侵染所致。病菌有性阶段归子囊菌亚门的多囊丝壳属(Erysiphe spp)或单囊丝壳属(Sphaerotheca spp.)，但有关菜豆白粉病菌种分化以及其抗性遗传规律的研究资料较少，目前尚无文献报道，这严重阻碍了菜豆白粉病研究的步伐。

MLO是植物特有的一类抗病基因，是人们发现的第一个抗病基因。人类最早发现MLO基因是在大麦中，人们在研究中发现这种基因在抗白粉病品种中没有功能，将拟其沉默使其不发挥功能时，该品种能对白粉病产生抗性。MLO对植物的抗病过程起负调控作用，在一定程度上相当于植物的“感病”基因，它的突变或缺失能够发生类似非寄主的识别反应，导致植物产生对病原菌所有已知小种的广谱抗性。因此，这类基因在改善植物抗性方面具有很大的潜力和应用前景。最近，研究发现番茄，豌豆、拟南芥、蔷薇、辣椒、百脉根等很多植物的白粉病基因都是MLO型抗病基因控制。因此挖掘植物中的MLO型抗病基因对植物抗白粉病育种具有重要的意义。已有的研究表明，MLO基因在许多作物里呈家族形式，具有多个家族成员，其中拟南芥中有15个家族成员。在玉米中发现至少有9个。在水稻中有12个家族成员，由于其他植物的全基因组测序上作的滞后等因素，在大麦，小麦、莲藕、辣椒、番茄等作物上相对很少有MLO家族其它成员被发现。

目前，克隆植物抗病基因的方法主要有转座子标签法、图位克隆法等。但是由于菜豆的基础研究不够深入，因此利用这些方法很难准确地克隆这些基因。因此，如何快速鉴定菜豆中的MLO型抗病基因将成为菜豆抗白粉病育种的重要前提。最近，菜豆基因组测序的完成为我们快速挖掘菜豆白粉病基因提供了条件。本专利介绍了以菜豆全基因组序列为前提，结合遗传学、基因组学和生物信息学等知识，快速挖掘白粉病基因的方法。

MLO型抗病基因是植物特异的一类抗病基因。研究者最早发现MLO(Mildew resistancelocus o)基因对白粉病抗性是始于1937-1938年，由德国人在埃塞俄比亚采集了很多品种的大麦，其中的两个株系对白粉病菌(Blumeriagraminis f.sp.hordei)所有已知的生理小种都具有高效抗性。进一步研究表明，大麦中MLO基因的隐性突变mlo可以使大麦对几乎所有已知大麦白粉病菌的生理小种产生持久、广谱的抗性。最近，研究者发现很多植物的抗白粉病基因都是MLO型基因控制，如番茄，豌豆、拟南芥、蔷薇、辣椒、百脉根等等。因此挖掘植物中的MLO型抗病基因对植物抗白粉病育种具有重要的作用。

目前，常用挖掘抗病基因常用的方法有图位克隆，转座子标签等方法。但是由于菜豆的基础研究不够深入，因此利用这些方法不仅时间长而且很难准确地克隆这些基因。因此，如何快速鉴定菜豆中的MLO型抗病基因将成为菜豆抗白粉病育种的重要前提。

植物比较基因组学(Comparative Genomics)是基于基因组图谱和测序基础上，对已知的基因和基因组结构进行比较，来了解基因的功能、表达机理和物种进化的学科。利用模式植物基因组与其它植物基因组之间编码顺序上和结构上的同源性，克隆其他植物基因，揭示基因功能和分子机制，阐明物种进化关系及基因组的内在结构。本专利所采用的方法及思路：模式植物拟南芥基因组研究已经揭示了MLO型基因的功能，利用基因其顺序上的同源性克隆菜豆MLO型抗病基因，根据模式植物拟南芥实验***上的优越性和已知MLO型抗病基因的特点，快速“捕捉”菜豆抗白粉病基因。本专利介绍了以菜豆全基因组序列为前提，结合比较基因组学、遗传学、基因组学、生物信息学和候选基因策略等知识，快速挖掘白粉病基因。

发明内容

技术问题

本发明的目的是提供一种通过结合植物比较基因组学、植物遗传学、基因组学和生物信息学等知识，快速挖掘菜豆抗白粉病基因。其结果一方面可用于菜豆白粉病基因紧密连锁分子标记的开发，进行分子标记辅助选择育种，另一方面也为其他作物白粉病基因鉴定提供参考依据。

技术方案

主要原理：第一个植物抗白粉病基因(MLO)是从大麦中克隆的，研究发现此基因是一类特殊的抗病基因，不同于先前克隆的大多数NBS(nucleotide-binding site)类型抗病基因；随后，研究者相继从番茄、拟南芥、豌豆、辣椒、百脉根等植物中克隆了白粉病基因，研究发现这些基因编码的都是MLO型抗病基因。随后，众多研究者通过多次试验证实MLO型抗病基因已经成为植物特有的一类抗白粉病基因。进一步发现，植物MLO类型基因是一个基因家族；而且对来源于不同物种的MLO基因家族进行***发育关系分析发现，不同物种中抗白粉病基因总是聚类一起，成为一类，这一类MLO基因都具有抗白粉病基因序列的典型特征。菜豆基因组测序的完成为挖掘白粉病基因提供了一条便利途径。因此，可以借助于已经测序的菜豆全基因组中MLO基因家族和已经克隆的MLO白粉病基因的***发育关系以及对于维持白粉病基因MLO重要功能的氨基酸保守性来鉴定菜豆白粉病基因。

主要步骤如下：

1)菜豆全基因组序列的下载及其MLO型基因的采集

首先从菜豆测序基因组数据库(http：//www.phytozome.net/search.php)下载菜豆全基因组序列；使用“DNATOOLS”软件对获得的菜豆全基因组氨基酸序列数据建立数据库，然后用pfam数据库(蛋白家族数据库，http：//pfam.janelia.org/search/sequence)中的隐马尔可夫模型(HMM)对MLO结构域的氨基酸序列与已建立的菜豆全基因组氨基酸序列数据库进行Blastp(E-value=0.001)序列比对，初步筛选出候选基因序列。其次，利用已经公布的MLO型基因序列，对菜豆基因组数据库进行BLAST比对，获得候选基因序列。

2)菜豆MLO型基因家族的鉴定

将上述结果中得到的同源核苷酸序列的候选基因，通过Pfam(E-value=1.O)进行分析，去除无‘MLO’结构域的基因序列(图1)。再将候选抗病基因序列通过MEGA3.1软件提供的ClustalW工具(多序列比对程序)进行多序列比对，去除重复序列。

3)通过植物MLO型基因的***发育关系鉴定候选的菜豆MLO型白粉病基因

由于先前的研究已经证明，双子叶植物MLO型白粉病基因位于植物MLO基因***发育树同一区组，因此在***发育关系研究中，我们把拟南芥的MLO型基因家族和一些其他作物的MLO型抗白粉病基因和菜豆MLO型基因一起聚类分析，以获得候选的菜豆抗白粉病基因(图2)。

4)菜豆白粉病基因与已知的植物MLO白粉病基因的比对

利用BioXM2.6软件将菜豆候选的MLO型白粉病基因和拟南芥、番茄、豌豆、大麦的MLO白粉病基因的氨基酸序列转换成Fasta格式的文件，将这些文件导入BioEdit7.0软件，运用此软件中Clustal软件进行多序列比对，揭示候选白粉病基因重要氨基酸残基及区域的保守性。从而进一步鉴定菜豆候选的白粉病基因(图3)。

本发明的积极效果：

1)缩短了菜豆白粉病基因挖掘周期，有利于白粉病基因的快速鉴定。采用常规方法(图位克隆、转座子标签等)挖掘抗白粉病基因不仅耗时耗力、效率低，且难以成功。本发明基于植物比较基因组学、遗传学、生物信息学方法快速挖掘菜豆白粉病基因，不仅可以缩短时间，还可以提高白粉病基因鉴定效率。

2)菜豆(Phaseolus vulgaris)属于蝶形花科菜豆属，是全世界广泛种植的重要蔬菜作物之一。由于菜豆遗传基础狭窄，种质资源多样性低，因此通过常规的分子标记(RAPD、ISSR、SSR、AFLP等)鉴定菜豆白粉病基因比较困难。通过鉴定的候选白粉病基因开发相应的共分离功能性标记(SNP、SCAR等)，可以快速的用于抗病基因的分子标记辅助选择，进行多抗性育种材料的创制，可以缩短育种年限，提高育种效率。

3)为阐述菜豆抗白粉病分子机制奠定了基础。菜豆抗白粉病基因的鉴定，通过转基因技术、RNAi、病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing，VIGS)技术等研究抗白粉病的分子机制提供了基因资源，有利于快速阐述菜豆抗白粉病的作用机理。

附图说明

图1菜豆MLO基因的鉴定；

本图显示的是19个MLO型基因鉴定结果，每一个基因都含有一个‘MLO'保守结构域。

图2植物MLO基因家族的***发育关系分析及其菜豆MLO型白粉病基因的鉴定；

拟南芥是植物科学研究的模式植物，在构建***发育树中，拟南芥的15个MLO型基因(其中3个基因是白粉病基因：AtMLO02，AtMLO06和AtMLO12)、番茄抗白粉病基因(SlMLO)、大麦白粉病基因(HvMLO和HvMLO02)和豌豆的白粉病基因(PsMLO)被选择用来和菜豆MLO型基因聚类分析。共鉴定出6个菜豆候选的MLO型白粉病基因。图中红色标记的基因就是候选菜豆白粉病基因。

图3菜豆MLO型白粉病基因的比对分析；

6个菜豆白粉病基因与大麦(HvMLO)、番茄(SlMLO)、豌豆(PsMLO)、拟南芥白粉病基因(AtMLO02，AtMLO06和AtMLO12)进行比对，鉴定白粉菌侵染有重要作用的氨基酸残基和区域的保守型。图中TM1-TM7表示菜豆MLO型白粉病基因的7个转模区域；黑色圆点表示白粉菌侵染重要的氨基酸残基；CaMBD表示钙调蛋白结合区；I和II表示对白粉菌侵染重要的氨基酸区域。

具体实施方式

抗病基因的鉴定在作物抗病遗传理论研究和抗病品种选育中具有重要的作用。本方法可以快速鉴定出菜豆白粉病基因。具体实施过程如下：

1)菜豆MLO型基因的采集

为了获得菜豆全部的MLO型基因家族成员，我们首先以拟南芥的MLO型基因，番茄、豌豆、蔷薇、辣椒、百脉根的抗白粉病MLO基因序列构建HMM模型，从菜豆基因组序列中收索MLO型基因；其次以不同作物中已经发表的MLO基因序列作为靶序列(来自DFCI数据库：TC171015，TC267529，DFCI：TC327983，TC289653，TC312087，TC132500，TC133436，TC317623，TC317025，TC315947，TC325903，TC315944，TC315912，TC322759，TC322059，TC330654，TC282713，TC293173，TC281861，TC283253，TC283383，TC285032，TC290021，TC302716，TC283487，TC282866，TC283441，TC281428，TC285118，TC285090；来自GenBank数据库：AY967408，AF384145，AF384144，AY029312-AY029315，AY029317-AY029319，Z95352，AF369563-AF369565，AF369567，AF369569-AF369576，Z83834，Z95496，AY581255)，对菜豆数据库(http：//www.phytozome.net/search.php)进行BLAST比对，选择相似度最高的序列进行下载，共获得了19条候选的MLO型基因(Phvulv091011469m.g；Phvulv091024194m.g；Phvulv091024134m.g；Phvulv091023241m.g；Phvulv091008702m.g；Phvulv091000777m.g；Phvulv091000776m.g；Phvulv091019606m.g；Phvulv091019621m.g；Phvulv091019051m.g；Phvulv091001637m.g；Phvulv091001610m.g；Phvulv091018434m.g；Phvulv091009501m.g；Phvulv091009508m.g；Phvulv091010457m.g；Phvulv091024352m.g；Phvulv091024354m.g；Phvulv091030434m.g)。

2)菜豆MLO型基因保守结构域的鉴定

为了进一步验证这些MLO基因准确性，我们对这19个候选的MLO基因进行保守结构域“MLO”的鉴定。以每一个候选的MLO型基因的氨基酸序列为基准，在PFAM(http：//pfam.sanger.ae.uk/)网站上进行‘MLO'保守结构域的鉴定，结果表明，每一个MLO型基因都具有一个或者多个‘MLO’结构域(图1)。

3)菜豆MLO型基因的***发育关系分析

在先前的研究中，发现双子叶植物白粉病基因聚合成一个区组；因此，在构建***发育树中，我们选择了模式植物拟南芥的15个MLO型基因(其中3个基因是白粉病基因：AtMLO02，AtMLO06和AtMLO12)、番茄抗白粉病基因、大麦白粉病基因和豌豆的白粉病基因和菜豆MLO型基因聚类分析一起聚类分析。将菜豆MLO型基因和其他作物白粉病基因蛋白质序列进行多序列联配(采用Clustal X1.83软件进行)，并利用Genedoc软件(http：//www.nrbsc.org/gfx/genedoc/index.html)显示多序列联配的结果。将Clustal多序列联配的结果输出到MEGA4.0软件中，并利用此软件分别构建了邻接树(neighbor-joining，NJ)，利用Bootstrapping方法对这些进化树进行了评估。结果发现在双子叶植物抗白粉病基因区组内，存在6个菜豆候选的MLO型白粉病基因(见图2)。

4)菜豆MLO型抗病基因的比对

在大麦MLO型白粉病基因研究中，研究中相继发现了一些重要区域和单个氨基酸，它们对大麦白粉菌侵染有着不可替代的作用。为了鉴定6个候选的菜豆白粉病基因中，这些重要区域和氨基酸是否高度保守，我们对来自拟南芥的3个抗白粉病基因(AtMLO02、AtMLO6和AtMLO12)、番茄白粉病基因(SlMLO)、豌豆白粉病基因(PsMLO)进行了氨基酸序列比对分析。发现菜豆6个候选的白粉病基因与已知的MLO型白粉病基因7个跨膜区，30个重要的氨基酸残基，1个钙调蛋白结合区(CaMBD)和两个与白粉菌识别起重要作用的区域(I和II)高度保守(图3)。表明这六个基因就是菜豆MLO型抗白粉病基因。

Claims (2)

1.菜豆抗白粉病基因，其特征在于选自下列6个基因或其之一：

Phvulv091024194m.g

氨基酸序列：

MGGRSLEETPTWAVAVVCFVLLTISIVIDHIFHLIGKWLKKKHKRALYESLEKIKSELMLLGFISLLLTVGQSVISRICISEKVAGTFHPCTHKTDHTRRLLPELFRSDHNQNLRRILAAGGTDKCAAQGKVPFVSSEGIHQLHIFIFVLAVFHVLYCILTLALGRAKMRRWKRWEEETKTAQYQFSHDPERFRFARETSFGRRHLSFWTQHTILVWIICFFRQFVRSVPKVDYLTLRHGFMMAHLGPQSRHKFDFRQYIKRSLEEDFKVVVEISPPIWFITVLFLLFHTHGWYSYLWLPFAPLIIVLLVGTKLQVIITKMGQRIQERGEVVKGMPLVQPGDDLFWFNKPRLILYLVNFVLFQNAFQLAYFSWTAVQFGMKSCFHSQTEDVVIKISMGVFVQFLCSYVTLPLYALVTQMGSTMKPTIFNERVAMALRNWHHAAKKHVKQQNRRLQSRPTTPNHSTSQAHLLRRCHSEIDIYPTDSEAHHPYEMDLSPSSKVHDHEVEMEMGHLDHGPLEDVNELNSALAGSGVTQHEINIEHGKEFSFDNR

核苷酸序列：

ATGGGAGGAAGAAGCTTGGAGGAAACTCCTACTTGGGCTGTAGCCGTTGTTTGCTTCGTTTTGCTCACCATATCTATCGTCATCGACCACATCTTCCATCTCATAGGAAAGTGGTTGAAGAAGAAGCACAAAAGAGCACTATATGAGTCACTTGAAAAGATCAAATCAGAACTTATGTTATTGGGGTTCATATCGCTGCTTCTAACGGTAGGACAAAGTGTAATATCGAGGATATGTATATCAGAAAAGGTTGCAGGGACATTCCACCCCTGCACTCACAAAACAGACCACACCCGCAGATTACTACCGGAGCTTTTCCGTTCCGATCACAACCAAAATCTACGCCGTATTTTGGCGGCGGGAGGAACTGACAAGTGTGCGGCACAGGGTAAAGTCCCGTTTGTCTCATCAGAGGGCATTCATCAACTCCATATATTTATCTTCGTGCTGGCTGTTTTTCACGTTCTTTACTGCATTCTCACTCTGGCTCTTGGTAGAGCAAAGATGAGAAGGTGGAAACGGTGGGAAGAGGAAACAAAAACAGCACAGTATCAATTTTCACACGATCCTGAACGGTTTAGATTTGCGAGGGAGACTTCGTTTGGAAGAAGACACTTGAGTTTCTGGACTCAACACACTATCCTAGTTTGGATTATTTGTTTCTTCAGGCAGTTTGTACGCTCAGTTCCTAAAGTTGATTACTTGACCTTGAGGCATGGATTTATGATGGCGCATTTGGGACCTCAAAGTCGCCATAAATTCGACTTTAGGCAATATATCAAAAGGTCTTTGGAAGAGGACTTCAAAGTGGTCGTTGAAATCAGTCCTCCAATCTGGTTCATCACAGTGCTTTTTCTCCTGTTTCACACCCATGGCTGGTACTCTTATCTGTGGCTGCCATTTGCTCCTTTGATAATTGTTCTATTAGTGGGAACGAAGCTGCAAGTGATAATAACGAAGATGGGTCAGAGAATTCAAGAAAGAGGAGAGGTTGTAAAGGGCATGCCACTGGTGCAGCCTGGGGATGATCTCTTCTGGTTTAACAAACCTCGACTTATTCTCTACCTCGTCAATTTCGTGCTCTTTCAGAACGCTTTCCAACTTGCCTACTTTTCATGGACTGCGGTTCAGTTTGGGATGAAATCCTGTTTTCATTCGCAGACGGAGGATGTGGTGATTAAAATCTCAATGGGGGTTTTCGTTCAATTCCTTTGCAGCTACGTAACTCTTCCTCTCTATGCTCTCGTCACACAGATGGGTTCAACCATGAAACCAACCATATTCAACGAAAGAGTAGCCATGGCTCTGAGGAATTGGCACCATGCAGCCAAGAAACACGTCAAGCAACAGAACCGTAGATTACAGTCAAGGCCCACAACCCCCAATCACTCTACATCTCAGGCCCATCTCTTACGCCGCTGCCACAGTGAAATTGACATCTATCCCACTGACTCTGAGGCCCATCATCCCTATGAGATGGATTTGAGCCCATCATCCAAGGTGCATGATCACGAAGTGGAAATGGAAATGGGCCACTTGGATCATGGCCCACTAGAAGATGTGAATGAGTTGAACTCAGCCCTTGCGGGATCAGGTGTGACTCAACACGAGATTAATATTGAACACGGCAAGGAGTTTTCATTTGATAATAGATGA

Phvulv091024134m.g

氨基酸序列：

MGGNGGRNLDETPTWAVAVVCFVLLSVSIIIEYIFNLIGKWLKQKHKRALYESLEKIKSELMLLGFISLLLTVGQGLISRICISEKVAGTFHPCAHRRVKQNNTPPLEHDEYRNNRHLLALEDKCAPQGKVPFVSSEAIHQLHIFIFVLAVFHVLYCILTHALGRAKMRRWKRWEVETKTPEYQVSHDPQRFRFARETSFGRRHLSFWTQNAVLVWIICFFRQFVHSVPKVDYLTLRHGFMMAHLGPHSHQKFDFGKYIKRSLEEDFKVVVEISPPIWFITVLFLLFNTHGWYSYLWLPFAPLIIVLLVGTKLQVIITKMGQRIQERGEVVKGMPVVQPGDHLFWFNKPRLILYLINFVLFQNAFQLAFFSWAALQFMMKSCFQSQKQDVVIRISMGIFVQFLCSYVTLPLYALVTQMGSTMKATIFNEKVAMALRNWHHTAKKNVKEKRGVRSQSPLSTRPSTPQQQPKSQANLLRRYHSEMATYPSSPIRFDFEAHLPYGIHSPPSSMVNAAATSSIHRHEMEMETEIEMDQVSALTQRQIDIDIDIQDNQEFSFAKR

核苷酸序列：

ATGGGAGGAAATGGAGGAAGGAATTTAGACGAAACACCAACCTGGGCTGTGGCCGTTGTTTGCTTTGTTTTGCTCTCTGTATCTATCATCATCGAATACATCTTCAATCTAATAGGAAAGTGGTTGAAGCAGAAACACAAAAGAGCTCTGTACGAGTCACTTGAAAAGATCAAATCAGAGCTCATGTTATTAGGGTTCATATCGTTGCTCCTAACGGTAGGGCAAGGTCTAATATCGAGGATATGCATATCAGAAAAGGTTGCAGGGACATTTCACCCTTGCGCTCATAGAAGAGTGAAGCAAAACAACACTCCCCCATTAGAACACGATGAATACCGAAATAACCGCCATCTTTTAGCGTTGGAAGACAAGTGTGCACCGCAGGGTAAAGTGCCATTTGTGTCATCGGAAGCCATTCACCAGCTCCATATATTTATCTTCGTGCTGGCTGTTTTTCACGTGCTTTACTGCATTCTCACTCACGCCCTTGGTAGAGCAAAGATGAGAAGGTGGAAGCGATGGGAAGTAGAAACCAAAACACCAGAGTACCAAGTTTCACACGATCCTCAACGATTCAGATTTGCAAGAGAGACATCGTTTGGAAGAAGACACCTAAGTTTCTGGACCCAGAATGCTGTCCTGGTTTGGATTATTTGTTTCTTCAGACAGTTTGTACACTCAGTTCCTAAAGTTGATTACTTGACCTTGAGACATGGATTTATGATGGCACATTTGGGGCCTCACAGTCACCAGAAATTCGACTTTGGGAAGTACATCAAAAGATCTTTGGAAGAGGACTTCAAAGTGGTCGTTGAAATCAGTCCTCCAATCTGGTTCATCACAGTGCTTTTTCTCCTATTTAATACTCACGGCTGGTACTCTTATCTGTGGCTGCCATTTGCTCCTTTGATTATTGTTCTATTAGTGGGAACGAAGCTGCAAGTGATTATAACGAAGATGGGTCAGAGAATTCAAGAACGAGGAGAGGTTGTAAAGGGCATGCCAGTGGTGCAACCTGGGGATCACCTCTTCTGGTTTAACAAACCTCGACTTATTCTCTACCTCATTAATTTTGTGCTCTTTCAGAATGCTTTTCAGCTTGCTTTCTTTTCATGGGCTGCGCTTCAATTTATGATGAAGTCATGTTTCCAGTCCCAAAAGCAGGATGTGGTGATCAGAATCTCAATGGGGATCTTCGTTCAATTCCTTTGCAGCTACGTCACTCTTCCTCTCTATGCTCTCGTGACGCAGATGGGTTCAACAATGAAGGCAACGATTTTCAACGAAAAAGTAGCGATGGCTCTAAGAAATTGGCACCACACTGCGAAGAAGAACGTGAAAGAGAAGCGTGGAGTACGATCGCAGAGTCCTTTGTCAACTCGGCCTTCAACCCCGCAGCAGCAGCCAAAGTCGCAGGCTAATCTGCTGAGACGGTACCACAGTGAAATGGCGACTTATCCATCTTCTCCGATAAGGTTCGATTTTGAGGCACATCTTCCTTATGGGATCCATTCACCCCCCTCCTCCATGGTTAATGCTGCAGCTACTTCTTCTATTCATCGCCATGAAATGGAGATGGAAACGGAAATTGAAATGGATCAGGTCTCAGCTCTCACTCAACGCCAGATTGATATTGACATTGACATTCAAGACAATCAAGAATTTTCTTTTGCTAAAAGATAA

Phvulv091009058m.g

氨基酸序列：

MAGGGGRNLEETPTWAVSTVCFVLIFISIIIEHIIHLIGQWLKKKRKRALYESLEKIKSELMLLGFLSLLLTVGQGLVSRICISEKIASTWHPCSADDTHSEESGQGTNSRRLLAAFHGSNDVNPRRVLAGGGSDKCGEGKVPFVSSEGIHQLHIFIFVLTVFHVLYCILTMALGRAKMKRWKRWEEETKTPEYQFSHDPERFRFARETSFGRRHLSFWTKNPVLMWIVCFFRQFVRSVPKVDYLTLRHGFIMAHLAPQSHSKFDFRKYIKRSLDEDFKVVVGISPPFWLFAVLFLLLNTHGSYSYLWLPFIPLIIILLVGTKLQVIITEMGLRIQQRGEILKGVPLVQPGDYLFWFNKPGLILYLINFVLFQNAFQLAFFSWSVLQFGIKSCFHAHTEDVVIRITMGVLlQILCSYVTLPLYALVTQMGSTMKPTIFNERVAEALRNWHQTAKKQIRQNRVGPLSLSVTPMSSRPTTPSHNMSPVHLLRYYRSEIDSFPTSPRRSNVDGDHTQPWDVESPSPSYSHHEMEMGHTNDPTTNTTHHEIVPAANTREFSFDKRPTTAP

核苷酸序列：

ATGGCAGGTGGCGGAGGAAGAAACTTGGAGGAAACACCCACATGGGCCGTCTCCACTGTCTGTTTTGTTCTGATCTTTATATCTATAATCATCGAACACATCATCCACCTCATAGGACAGTGGTTGAAGAAGAAGCGCAAAAGAGCGCTGTACGAGTCACTCGAAAAGATCAAATCAGAGCTTATGTTATTGGGGTTCTTGTCGTTGCTTTTAACGGTAGGACAAGGTCTGGTATCAAGAATATGCATATCAGAAAAAATTGCATCGACATGGCACCCTTGTAGCGCCGACGACACGCATAGTGAAGAATCAGGACAGGGAACCAACAGCCGCAGGTTGTTAGCGGCGTTCCATGGTTCAAACGATGTAAATCCACGCCGTGTTTTGGCGGGAGGAGGAAGTGACAAGTGTGGCGAGGGTAAAGTCCCGTTTGTGTCATCGGAGGGAATCCATCAACTCCATATATTTATCTTTGTGCTAACTGTTTTTCATGTCCTTTACTGCATTCTCACCATGGCTCTGGGAAGAGCAAAGATGAAGAGGTGGAAACGATGGGAAGAGGAAACCAAGACACCAGAGTACCAATTTTCACACGATCCTGAACGATTTAGATTTGCGAGAGAAACATCGTTTGGAAGAAGGCATTTGAGTTTCTGGACCAAAAACCCTGTTCTCATGTGGATTGTTTGTTTCTTTAGGCAATTTGTGCGATCAGTTCCTAAAGTGGATTACTTGACCTTAAGACATGGATTTATCATGGCACATTTGGCTCCTCAAAGTCACTCCAAATTTGATTTTCGGAAATACATAAAACGATCACTGGATGAGGATTTCAAAGTCGTTGTTGGAATCAGTCCTCCATTCTGGTTGTTCGCGGTGCTGTTTCTCCTCTTGAACACTCATGGCTCGTACTCTTATCTGTGGCTGCCATTCATTCCTTTGATTATCATTCTGTTAGTTGGAACCAAGTTGCAAGTGATCATAACTGAGATGGGTCTAAGAATTCAACAAAGAGGAGAGATTCTGAAGGGAGTGCCACTGGTTCAACCAGGAGATTATTTGTTCTGGTTTAACAAACCTGGTCTTATTCTTTACCTTATTAACTTTGTGCTCTTTCAGAATGCTTTTCAGCTTGCTTTCTTCTCCTGGTCTGTGCTTCAATTTGGGATTAAATCTTGTTTCCACGCACATACAGAGGATGTAGTGATCAGAATCACAATGGGGGTTCTTATTCAAATCCTGTGCAGCTACGTTACTCTTCCTCTCTATGCCCTAGTTACACAGATGGGTTCAACAATGAAGCCAACGATATTCAACGAAAGAGTTGCTGAGGCACTGCGGAACTGGCACCAGACCGCGAAGAAGCAGATAAGACAGAACCGTGTGGGACCCTTGTCGTTGTCGGTGACACCGATGTCGAGCAGACCCACAACCCCGAGCCACAACATGTCCCCAGTGCACCTCTTGCGCTACTACCGTTCTGAAATTGACAGCTTCCCCACCTCTCCACGACGTTCGAACGTCGACGGCGACCACACCCAGCCCTGGGACGTTGAATCCCCTTCTCCTTCCTACTCGCACCACGAAATGGAAATGGGTCACACCAATGACCCCACCACTAACACAACCCACCATGAGATTGTTCCTGCTGCAAACACCAGGGAATTCTCCTTTGATAAAAGACCTACCACAGCTCCGTAG

PhVulv091023241m.g

氨基酸序列：

MGKEEVLQRKLEATPTWVVAAVCFVMLAISIIIEHVIEELGKWLKKKHKKALHEALEKIKGELMLLGFLSFLLVVFEDRIVSICIPESVASTWNPCDPSYVSKGAEGYVEKCAKKKEGTVAFMSKYGLHQLHIFVFVLAIFHILQCIMTLTLGRTKISIWRKWEDETKGLEHQFSHDPERFRFARDTTFGRRHLNSWSKSPTLLWIVSFCRQFYGSLNKADYMALRHGFVVAHLTPASEPKFDFQNYITRTLDEDFAVVVGISPTIWFFAVVILLTNTHGWYSYFWVPFIPLIIILLVGTKLQMIITDMALKIQDRGEVVKGEPVVQPGDELFWFNNPRLVLFLIHLVLFLNAFQLAFFTWSTLDNGFKINSCFHRTTADIVIRLTMGVLTQVLCSYVTLPLYALVIQMGSSMKPTIFKDNVASALKSWHHSAKKHLKHNRDSTSNTPFSSRPGTPTRGMSPVHLLHKHPRHSDSPLVSPRASDYENGQWDAEVSHSPSHHARDIDHEETMQVQPPAAAELPPAGLNPVRTQHEINIALSEFSFGRGRNPGRADEY

核苷酸序列：

ATGGGCAAAGAAGAAGTTCTACAGAGGAAGTTGGAGGCAACTCCTCATGGGTAGTTGCAGCTGTGTGCTTTGTGATGCTTGCTATTTCAATCATCATTGAACATGTTATTGAAGAACTTGGAAAGTGGTTAAAAAAGAAACACAAAAAGGCTCTTCATGAAGCGCTGGAAAAGATCAAAGGAGAGCTTATGCTGCTGGGATTCCTATCCTTTCTCTTAGTGGTGTTTGAAGATCGAATTGTTTCTATCTGCATCCCAGAAAGTGTTGCATCCACTTGGAATCCTTGTGATCCCAGTTATGTGAGTAAAGGTGCAGAAGGATATGTTGAGAAATGCGCAAAAAAAAAGGAAGGCACAGTTGCTTTTATGTCTAAATATGGGCTTCACCAGCTCCATATATTCGTCTTTGTGCTTGCTATTTTTCACATTCTACAGTGCATCATGACACTGACTTTGGGTAGAACTAAGATATCAATATGGAGGAAGTGGGAAGACGAAACAAAGGGTCTTGAACATCAGTTCTCCCATGATCCTGAGAGGTTCAGGTTTGCTAGGGATACAACGTTTGGACGAAGGCACTTGAACTCATGGAGTAAATCACCAACTTTATTATGGATAGTTAGCTTCTGCAGACAATTCTATGGATCACTTAATAAAGCTGACTATATGGCATTACGGCATGGATTCGTCGTGGCACATTTGACTCCAGCAAGTGAGCCAAAATTTGACTTCCAGAACTATATCACCAGAACACTAGATGAGGATTTTGCAGTAGTGGTGGGCATAAGTCCAACCATATGGTTCTTTGCAGTGGTAATTCTGCTCACAAATACTCACGGGTGGTATTCTTATTTTTGGGTTCCATTTATCCCACTAATTATAATCTTGTTGGTGGGAACAAAGCTACAAATGATCATAACAGATATGGCACTAAAGATTCAAGATAGGGGGGAAGTGGTCAAGGGTGAACCAGTGGTTCAGCCAGGAGATGAATTGTTCTGGTTCAATAATCCTCGCCTCGTTCTCTTTCTGATTCATCTTGTTCTGTTCCTGAATGCATTTCAATTGGCGTTTTTTACTTGGAGCACATTAGACAATGGGTTCAAAATAAACTCCTGCTTTCACCGAACTACTGCAGATATTGTCATTAGACTTACAATGGGGGTTCTCACCCAAGTTCTATGCAGCTATGTGACTTTGCCTCTTTATGCTCTAGTCATACAGATGGGTTCTAGCATGAAACCCACCATTTTCAAAGATAACGTGGCATCAGCACTAAAGAGCTGGCATCACTCTGCTAAAAAGCATCTGAAACACAACAGGGATTCAACTTCTAACACACCATTCTCAAGCAGACCAGGAACCCCAACTCGTGGCATGTCTCCAGTGCACCTGCTTCACAAGCACCCTAGACACAGTGATAGTCCACTAGTTTCTCCAAGAGCATCCGATTATGAAAATGGGCAATGGGATGCTGAAGTGTCACATTCCCCAAGCCACCATGCAAGAGATATTGATCATGAAGAGACCATGCAGGTGCAGCCTCCAGCAGCAGCAGAATTGCCTCCTGCTGGACTCAATCCTGTTCGAACTCAACATGAAATCAACATTGCTTTATCTGAATTTTCATTTGGGAGGGGACGCAACCCTGGTAGAGCAGATGAGTATTAG

Phvulv091000777m.g

氨基酸序列：

MANEVYERTLEETPTWAVAVVCFLLLAVSIAIEHLIHGIGKWFKKKQKNALFEALEKVKGELMVLGFISLLLSVLQDQISKICVSEEVAASWHPCANPKSSTATKTDEDESDDIQINSRKLLQLYDSIPRRILATKGYDKCAEKGKVAFVSAYGIHQLHIFIFVLAIFHILQCIITLGLGRTKMRKWRAWENETKTIEYQFYNDPERFRFARDTTFGRRHLNPWSQSTISLWIVSFFRQFFGSATKVDYLTLRHGFITAHLAPGSDARFDFQKYIQRSLEKDFKVVVGISPVIWFFAVLFLLTNTHGWYSSYWLPFIPFVVILLVGAKLQMIITKMGLRITDRGEVVKGAPLVEPGDDLFWFNRPRLLLFLIHLVLFQNAFQLAFFSWSTYEFSLDSCFHETTADVAIRLTMGVVIQVLCSYVTLPLYALVTQMGSTMKPTIFNQRVASALKNWHSTAKKQVKNSKQNTPFSSKPSTPTYGMSPMHLLQKHLAGRSDSAQTSPRTSNYENEQWDVEGSPSTSNHAAAEETQMQVMEPGSSSAPEFPTSSQIEIRVSSSEFSFEKRHTGASEEI

核苷酸序列：

ATGGCAAACGAAGTTTATGAGCGAACTCTGGAGGAAACACCAACATGGGCTGTTGCAGTTGTGTGTTTTTTGCTTCTTGCTGTTTCAATCGCCATAGAACATCTTATTCATGGTATTGGAAAGTGGTTCAAGAAGAAACAAAAAAATGCTCTTTTCGAAGCGTTGGAGAAGGTCAAAGGAGAGCTTATGGTGCTAGGATTCATATCCTTGCTCCTAAGTGTGTTGCAAGATCAAATTTCCAAGATCTGCGTATCAGAAGAAGTTGCAGCTTCGTGGCATCCCTGTGCCAACCCAAAGTCCTCAACTGCAACAAAAACTGATGAGGATGAATCTGATGACATTCAGATAAATTCTAGGAAACTCCTACAACTTTATGACTCCATACCAAGGCGTATTCTGGCTACAAAAGGTTACGACAAGTGTGCTGAAAAGGGAAAAGTAGCTTTTGTTTCAGCCTATGGGATTCATCAGCTGCATATATTCATCTTTGTGTTAGCAATATTTCACATCCTACAGTGCATTATAACACTGGGTTTGGGAAGAACCAAGATGAGAAAGTGGAGGGCATGGGAAAACGAAACCAAGACCATTGAATATCAATTTTATAACGATCCGGAGAGGTTCAGGTTTGCAAGGGACACAACATTTGGAAGAAGACACTTGAATCCATGGAGTCAGTCAACAATTTCGTTATGGATAGTTAGTTTCTTCCGACAATTCTTTGGATCAGCCACCAAAGTCGACTATTTGACATTACGACATGGATTCATCACGGCGCATCTGGCACCGGGAAGTGATGCAAGATTTGATTTCCAAAAGTACATCCAAAGATCACTGGAGAAGGATTTTAAAGTTGTTGTGGGAATAAGCCCAGTGATATGGTTCTTTGCTGTGCTATTCCTTCTCACAAATACTCATGGGTGGTATTCTTCTTATTGGCTTCCATTCATCCCATTTGTTGTAATCTTATTAGTGGGTGCTAAACTTCAAATGATCATAACAAAGATGGGACTGAGGATTACAGACAGAGGGGAAGTTGTCAAAGGTGCACCTCTGGTTGAGCCAGGAGATGACCTGTTCTGGTTCAATCGCCCACGTCTCCTCCTCTTTCTCATTCATCTTGTGCTTTTTCAGAATGCTTTTCAACTGGCATTTTTCTCTTGGAGTACTTATGAATTCTCCCTAGACTCTTGCTTCCATGAAACAACTGCAGATGTTGCCATAAGACTTACAATGGGGGTTGTCATACAAGTTCTATGCAGCTATGTGACATTACCTCTATATGCTCTAGTCACACAGATGGGTTCAACCATGAAGCCTACCATCTTCAATCAGAGAGTGGCATCAGCACTGAAGAACTGGCACAGCACTGCCAAAAAGCAAGTCAAAAACAGCAAGCAAAACACACCATTCTCAAGCAAGCCATCAACCCCAACATATGGTATGTCTCCAATGCATCTGTTGCAAAAACACCTTGCTGGTAGAAGTGACAGTGCACAAACATCTCCAAGGACATCAAACTATGAAAATGAACAATGGGATGTTGAAGGCTCACCTTCCACAAGCAACCATGCAGCAGCTGAAGAAACTCAAATGCAAGTCATGGAACCAGGCTCAAGCTCAGCACCAGAATTTCCTACCAGCTCTCAGATTGAAATCAGAGTTAGTTCATCAGAGTTTTCCTTTGAGAAGAGACACACTGGTGCTAGTGAGGAGATATGA

Phvulv091000776m.g

氨基酸序列：

MGEAKIHKRSLEETPTWAFAVVCFMLLAISIIIELVIHAIGKWLRKKHKSGLYESLEKVKGELMMLGFLSMLLTVFQDPLSKICISQNAASTWHPCSNPKAVSNSNATSHTIDRKLLHLDPIPRRVLAAKGYDKCADKGKVAFVSAYGIHQLHIFIFVLAIFHIIQCIVTLALGRTKMRRWKKWEDETKTIEYQFYNDSKRFRLAKDTTFGQRHLNTWSQSSISLWIVSFFRQFFGSVKKVDYFVLRHGFIMAHVSPRSDSGFDFQRYIKRSLDEDFKVVVGISPIIWFEAVLFLLTNTHGWYSNYWLPFIPLITILIVGADLQMIITKMGLRIQDRGVVMGAPVVEPGDDLFWFNRPRLLLFIIHLVLFQNAFQLAHFAWSTYEFSIESCFHKTNAENVVRLTMGVVTQVLCSYVTLPLYALVTQMGSTLKPTIFNDRMAAALKKWHHTSKKHLKHSQHSEAKKSIPFSSTSSSPIFGMSPIHLLHRHPVGRSDSAQTSPRTSLYENQQCDVQGESSVSNHPGTNETQMQVLGSPQTT

核苷酸序列：

ATGGGTGAAGCCAAAATCCATAAAAGATCACTGGAGGAAACACCAACCTGGGCGTTTGCAGTTGTTTGCTTTATGCTGCTTGCTATTTCAATCATCATTGAGCTTGTTATTCATGCTATTGGAAAGTGGTTAAGAAAGAAACACAAAAGTGGTCTTTATGAGTCGTTGGAAAAGGTCAAAGGAGAGCTTATGATGCTAGGGTTCCTATCTATGCTCCTAACTGTGTTCCAAGATCCACTTTCTAAGATCTGCATATCACAAAATGCTGCATCAACATGGCATCCTTGCTCCAACCCAAAGGCCGTGAGTAATTCTAACGCAACATCTCATACCATTGATAGGAAACTTCTCCATTTGGACCCCATTCCACGACGTGTTCTAGCTGCAAAAGGTTATGACAAATGTGCAGACAAGGGAAAAGTTGCTTTTGTTTCAGCATATGGGATTCACCAGCTCCATATATTCATCTTTGTGTTAGCAATTTTTCATATCATACAATGCATTGTAACACTAGCTTTGGGAAGAACTAAGATGAGACGCTGGAAGAAGTGGGAAGACGAAACAAAGACAATTGAATACCAATTCTATAATGATTCTAAGAGGTTCAGGCTTGCAAAGGACACAACATTTGGACAAAGGCACTTGAATACTTGGAGTCAGTCATCGATTTCCTTATGGATAGTTAGCTTCTTCAGACAATTCTTTGGATCGGTTAAGAAAGTCGACTATTTTGTTTTACGACATGGATTTATCATGGCACATGTGTCACCGAGAAGTGATTCAGGATTTGATTTCCAGAGGTATATCAAAAGATCACTTGACGAGGATTTTAAAGTTGTGGTAGGCATAAGCCCAATTATTTGGTTCTTTGCGGTTCTCTTCCTGCTGACTAATACTCATGGGTGGTATTCTAACTATTGGCTTCCATTCATCCCATTAATTACAATTTTGATAGTGGGTGCTGATCTACAAATGATCATAACAAAGATGGGACTAAGGATTCAAGACAGAGGAGTAGTTATGGGTGCACCTGTGGTTGAGCCTGGAGATGACTTGTTTTGGTTCAACCGTCCACGACTCCTTCTCTTCATCATTCATCTTGTTCTTTTTCAGAATGCCTTTCAATTAGCACATTTTGCATGGAGTACATATGAATTCTCCATAGAATCTTGCTTCCACAAAACAAATGCAGAGAATGTGGTTAGACTTACAATGGGGGTTGTAACACAAGTTCTATGCAGCTATGTGACTTTGCCTCTTTATGCTCTAGTTACACAGATGGGTTCAACCTTGAAACCAACCATTTTCAATGATAGAGTAGCAGCAGCATTGAAGAAATGGCACCATACTTCCAAAAAACATCTCAAACACAGCCAACACTCTGAGGCTAAAAAATCAATACCATTCTCCAGCACATCATCAAGCCCAATATTTGGCATGTCTCCCATTCACCTGCTGCATAGACACCCTGTTGGAAGAAGTGACAGTGCACAAACTTCTCCAAGGACCTCCCTCTATGAAAATCAACAATGTGATGTGCAAGGTGAATCTTCCGTAAGCAACCATCCAGGAACAAATGAGACCCAAATGCAAGTTTTGGGTTCTCCTCAAACAACATAA。

2.权利要求1所述快速鉴定菜豆白粉病基因的应用，包括：

1)携带有抗白粉病MLO基因的育种材料的创制或者新品种创制：利用权利1所给出的MLO基因源为亲本材料，在杂交、回交后代中，可以获得转育有MLO抗性基因的育种材料。

2)抗白粉病基础理论研究：对权利1的MLO型抗白粉病基因进行分子标记分析；对该基因进行分子作图或者基因定位；对该基因进行克隆以及基因间互作分析。

3)抗白粉病转基因研究：利用权利要求1所给出的MLO型白粉病基因进行转基因研究。