CN104541975B - 一种真姬菇液体菌种的快速制备方法及使用方法 - Google Patents

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Abstract

一种真姬菇液体菌种的快速制备方法及使用方法，包括以下步骤：（1）、配制培养基：（2）、装瓶灭菌：将配好的培养基装入培养瓶，封口后，放入高压灭菌锅中灭菌；（3）、固体菌种的液化处理：用无菌水洗涤静置，取固体菌种所得的上清液；（4）接种：灭菌完成后，等培养液温度冷却后，接入固体菌种上清液；（5）、培养：将接种好的培养瓶放到摇床中避光密闭培养，培养4天后即可得到真姬菇的液体菌种。本发明不使用发酵罐，不需要通气或者搅拌培养，可以减少投资，降低生产成本，非常适合大批量的成产和推广；制备的真姬菇液体菌种，及时使用能保证菌丝的良好活性，样品中菌丝浓度适中，培养液清澈透亮，便于观察菌丝生长状况，能及时发现和处理污染的菌种，减少因为菌种污染接种造成的不必要损失。

Description

一种真姬菇液体菌种的快速制备方法及使用方法
技术领域
本发明属于食用菌生产技术领域，具体涉及一种真姬菇液体菌种的快速制备方法及使用方法。
背景技术
目前，真姬菇的生产液体菌种的方法多是采用斜面母种-一级摇瓶种-二级摇瓶种-发酵罐培养液的方法生产，这种方法生产液体菌种周期长，成本高，易污染；而采用固体菌种液化所得上清液接入到培养液中可快速制的发酵液，同传统方法相比周期短，成本低，技术简单，成功率高。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种真姬菇液体菌种的快速制备方法及使用方法，该方法克服现有液体菌种培养过程中周期长，投资大，操作不便等不足。
本发明的技术方案包括以下步骤：
（1）、配制培养基：将洗净新鲜的马铃薯去皮，称取300g切成小块、小条或薄片，向其中加水1000 mL，煮沸20-30 min，用事先浸湿拧干的4层纱布过滤去渣，收集液汁，并向其中加入葡萄糖30 g、蛋白胨5g，消泡剂0.3g，磷酸二氢钾l g以及硫酸镁0.5 g搅拌均匀，并补足水分定容至1000ml，最后用氢氧化钠水溶液调整pH至5.0-6.0得到培养基；
（2）、装瓶灭菌：按照每瓶装入的液体量为培养瓶体积的60%，将配好的培养基装入培养瓶，封口后，放入高压灭菌锅中灭菌；所述的培养瓶为三角瓶、广口的塑料瓶或玻璃瓶；
（3）固体菌种的液化处理：在无菌超净工作台中将固体菌种捣碎放入无菌水中洗涤静置取上清液；
（4）、接种：灭菌完成后，等培养液温度冷却到22℃以下后，接入固体菌种上清液；
（5）、培养：将接种好的培养瓶放到摇床中避光密闭培养，培养4天后即可得到真姬菇的液体菌种；所述摇床温度控制在20-22℃，转速为150转/分钟，湿度保持在60-70%。
上述方案可进一步优选为：
所述步骤（2）中封口采用的是中间带透气孔的硅胶塞。
所述步骤（2）中的高压灭菌程序为121℃下保持30min。
所述步骤（3）中的固体菌种的液化处理是指用2倍体积的无菌水处理1倍体积的固体菌种静置所得上清液。
所述步骤（4）中的固体菌种上清液按培养基体积的10%接入培养瓶。
上述快速制备方法制备的真姬菇液体菌种的使用方法：用灭过菌的接种枪将菌液接入到培养基中，盖盖后用保鲜膜将瓶口再封一次；当菌丝萌发覆盖瓶口之后将保鲜膜去除。
与现有的技术相比，本发明具有以下优点：
1、本发明提供的方法不使用发酵罐，不需要通气或者搅拌培养，可以减少投资，降低生产成本，非常适合大批量的成产和推广。
2、本发明提供的方法快速制备的真姬菇液体菌种，及时使用能保证菌丝的良好活性，样品中菌丝浓度适中，培养液清澈透亮，便于观察菌丝生长状况，能及时发现和处理污染的菌种，减少因为菌种污染接种造成的不必要损失。
3、本发明提供的方法不用电，不消耗能源，对环境没有任何污染，符合国家节能环保的产业政策。
具体实施方式
实施例1
1、配制培养基：将洗净新鲜的马铃薯去皮，称取300g切成小块、小条或薄片，向其中加水1000 mL，煮沸20-30 min，用事先浸湿拧干的4层纱布过滤去渣，收集液汁，并向其中加入葡萄糖30 g、蛋白胨5g，消泡剂0.3g，磷酸二氢钾l g以及硫酸镁0.5 g搅拌均匀，并补足水分定容至1000ml，最后用氢氧化钠水溶液调整pH至5.0-6.0得到培养基；
2、装瓶灭菌：按照每瓶装入的液体量为培养瓶体积的60%，将配好的培养基装入培养瓶，封口后，放入高压灭菌锅中灭菌，在121℃下保持30min；所述的培养瓶为三角瓶、广口的塑料瓶或玻璃瓶；
3固体菌种的液化处理：在无菌超净工作台中将固体菌种捣碎放入无菌水中洗涤静置取上清液；优选用2倍体积的无菌水处理1倍体积的固体菌种静置所得上清液。
4、接种：灭菌完成后，等培养液温度冷却到22℃以下后，按体积比为10%的比例接入固体菌种滤液；
5、培养：将接种好的培养瓶放到摇床中避光密闭培养，培养4天后即可得到真姬菇的液体菌种；所述摇床温度控制在20-22℃，转速为150转/分钟，湿度保持在60-70%。
6、使用：用灭过菌的接种枪将20ml菌液接入到培养基中，盖盖后用保鲜膜将瓶口再封一次。
下面将传统制备的液体菌种与本发明制备的液体菌种做比较，结果如下表：
方法 菌种形状 菌种污染率 制种时间 发菌时间
快速方法 呈球形，转速慢球形大 <0.03% 4天 7-9天
传统方法 呈球形，转速慢球形大 >1% 10-12天 7-9天
通过以上对比可知，本发明制备的液体菌体污染率较低，同时本发明极大的缩短了培养的时间，而菌种的活性并没有降低，由表中的数据可见，发菌时间基本与现有技术一致。
上述实施例仅仅为本发明的典型实施例，本领域技术人员完全可以根据本发明的技术方案作出简单的调整，但是与本发明的实质内容相同，因此同样落入本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种真姬菇液体菌种的快速制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）、配制培养基：将洗净新鲜的马铃薯去皮，称取300g切成小块、小条或薄片，向其中加水1000 mL，煮沸20-30 min，用事先浸湿拧干的4层纱布过滤去渣，收集液汁，并向其中加入葡萄糖30 g、蛋白胨5g，消泡剂0.3g，磷酸二氢钾l g以及硫酸镁0.5 g搅拌均匀，并补足水分定容至1000ml，最后用氢氧化钠水溶液调整pH至5.0-6.0得到培养基；
（2）、装瓶灭菌：按照每瓶装入的液体量为培养瓶体积的60%，将配好的培养基装入培养瓶，封口后，放入高压灭菌锅中灭菌；所述的培养瓶为三角瓶、广口的塑料瓶或玻璃瓶；
（3）固体菌种的液化处理：在无菌超净工作台中将固体菌种捣碎放入无菌水中洗涤静置，得固体菌种的上清液；
（4）、接种：灭菌完成后，等培养基温度冷却到22℃以下后，接入固体菌种上清液；
（5）、培养：将接种好的培养瓶放到摇床中避光密闭培养，培养4天后即可得到真姬菇的液体菌种；所述摇床温度控制在20-22℃，转速为150转/分钟，湿度保持在60-70%；
所述步骤（2）中封口采用的是中间带透气孔的硅胶塞；
所述步骤（2）中的高压灭菌程序为121℃下保持30min；
所述步骤（3）中的固体菌种的液化处理是指用2倍体积的无菌水洗涤1倍体积的固体菌种静置所得上清液；
所述步骤（4）中的固体菌种上清液按培养基体积的10%接入培养瓶。
2.权利要求1所述的快速制备方法制备的真姬菇液体菌种的使用方法，其特征在于：用灭过菌的接种枪将真姬菇液体菌种接入到培养基中，盖盖后用保鲜膜将瓶口再封一次；当菌丝萌发覆盖瓶口之后将保鲜膜去除。
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