CN104447963B - 一种制备阿肽地尔的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及多肽合成技术领域，特别涉及一种制备阿肽地尔的方法。本发明的具体步骤为：A）通过液相法合成二肽片段Fmoc‑Leu‑Asn‑OH；B）采用固相合成法，以Rink Amide MBHA氨基树脂为起始树脂，按照阿肽地尔主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中23、24位和27、28位氨基酸偶联采用二肽片段Fmoc‑Leu‑Asn‑OH偶联，而第1位组氨酸偶联采用Boc‑His(Trt)‑OH；C）肽树脂裂解，纯化，冻干后得到阿肽地尔。本发明提供了一种合成效率高、成本低、同时还能避免消旋杂质D‑His1‑阿肽地尔，适合规模化生产的阿肽地尔的合成工艺。

Description

一种制备阿肽地尔的方法
技术领域
本发明属于多肽药物制备方法技术领域，特别涉及一种制备阿肽地尔的方法。
背景技术
阿肽地尔，英名为：Aviptadil。
所述阿肽地尔的肽序如下：
H-His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-Arg-Leu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Ile-Leu-Asn-NH2
阿肽地尔为Mondobiotech AG和Biogen Idec公司开发出来，是由28个氨基酸组成的线性肽。主要用于急性呼吸窘迫综合症和特发性肺纤维化治疗，其效果较好且副作用小，是一种很有市场前景的多肽药物。
目前阿肽地尔常规合成方法为逐个偶联方法，合成效率低下，偶联组氨酸容易消旋；另外CN201310100852.3报道了采用Boc-His(3-Bum)-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH假二肽片段法偶联，虽然可以一定程度上减少组氨酸消旋，提高纯度和收率，但是此假二肽价格昂贵，不适合大规模生产。
综上所述，目前阿肽地尔的制备的不足有：合成效率低下，降低组氨酸消旋的成本高，不适合大规模生产。
发明内容
本发明为解决上述技术问题从而提供一种制备阿肽地尔的方法，该方法使用Fmoc-Leu-Asn-OH二肽片段偶联23、24位和27、28位氨基酸，而第1位组氨酸偶联采用Boc-His(Trt)-OH。本发明提供了一种合成效率高、成本低、同时还能避免消旋杂质D-His1-阿肽地尔，适合规模化生产的阿肽地尔的合成工艺。
本发明的合成路线如图1所示：首先通过液相法合成二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH；然后采用固相合成法，以Rink Amide MBHA氨基树脂为起始树脂，按照阿肽地尔主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中23、24位和27、28位氨基酸偶联采用二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH偶联，而第1位组氨酸偶联采用Boc-His(Trt)-OH；最后肽树脂裂解，纯化，冻干后得到阿肽地尔。
本发明中一些常用的缩写具有以下含义；
Fmoc ：芴甲氧羰基
Fmoc-AA ：芴甲氧羰基保护的氨基酸
DIC ：N，N′-二异丙基碳化二亚胺
PyBOP ：六氟磷酸苯并***-1-基-氧基三吡咯烷基磷
HATU ：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯
HOBt ：1-羟基苯骈***
tBu ：叔丁基
Trt ：三苯甲基
Boc ：叔丁氧羰基
Pbf ：2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基
Ile ：异亮氨酸
Ser ：丝氨酸
Tyr ：酪氨酸
Lys ：赖氨酸
Val ：缬氨酸
Ala ：丙氨酸
Met ：甲硫氨酸
Gln ：谷氨酰胺
Arg ：精氨酸
Leu ：亮氨酸
Thr ：苏氨酸
Asn ：天冬酰胺
Asp ：天冬氨酸
Phe ：苯丙氨酸
His ：组氨酸
DMF ：N,N′-二甲基甲酰胺
MeOH ：甲醇
DCM ：二氯甲烷
TFE ：三氟乙醇
NMP ：N-甲基吡咯烷酮
DMSO ：二甲基亚砜
TFA ：三氟醋酸
PhSMe ：苯甲硫醚
EDT ：1,2-乙二硫醇
Piperidine ：六氢吡啶
为此本发明提供一种制备阿肽地尔的方法，其步骤如下：
步骤1，通过液相法合成二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH；
步骤2，采用固相合成法，以Rink Amide MBHA氨基树脂为起始树脂，按照阿肽地尔主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中23、24位和27、28位氨基酸偶联采用二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH偶联，而第1位氨基酸采用Boc-His(Trt)-OH；
步骤3，肽树脂裂解，纯化，冻干后得到阿肽地尔。
其中，步骤1所述的二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH的合成方法包括如下步骤：1）Fmoc-Leu-OH、HOSu和DCC偶联得到Fmoc-Leu-OSu，然后Fmoc-Leu-OSu和H-Asn-OH反应得到二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH。
其中，步骤2所述的固相合成方法，所述方法包括以下步骤：1）采用0.10~0.90mmol/g 的氨基树脂为起始树脂；2）采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除氨基树脂上的Fmoc保护基；3）在偶联剂***的存在下，氨基树脂和Fmoc-Leu-Asn-OH偶联得到Fmoc-Leu-Asn-氨基树脂；4）重复步骤2）、3），按照阿肽地尔主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中23、24位氨基酸偶联采用二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH偶联，而第1位氨基酸采用Boc-His(Trt)-OH。所述偶联剂***包括缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂选自DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA；所述反应溶剂选自DMF、DCM、NMP、DMSO或他们之间的组合。
本发明的方法是经过筛选获得的，筛选过程如下：
（1）阿肽地尔合成中组氨酸的消旋考察：
第1、2位氨基酸采用假二肽[Boc-His(3-Bum)-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH]片段法偶联；第1位氨基酸Boc-His(Trt)-OH和Fmoc-His(Trt)-OH。
为此提出了3种实验条件：
实验条件1：采用0.50mmol/g 的Rink Amide MBHA树脂为起始树脂；2）采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除氨基树脂上的Fmoc保护基；3）在偶联剂***的存在下，氨基树脂和Fmoc-Leu-Asn-OH偶联得到Fmoc-Leu-Asn-氨基树脂；4）重复步骤2）、3），按照阿肽地尔主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中23、24位氨基酸偶联采用二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH偶联，而第1、2位氨基酸采用Boc-His(3-Bum)-Ser(Psi(Me,Me)pro)-OH假二肽片段法偶联；偶联完毕肽树脂裂解，纯化，冻干后得到阿肽地尔
实验条件2：采用0.50mmol/g 的Rink Amide MBHA树脂为起始树脂；2）采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除氨基树脂上的Fmoc保护基；3）在偶联剂***的存在下，氨基树脂和Fmoc-Leu-Asn-OH偶联得到Fmoc-Leu-Asn-氨基树脂；4）重复步骤2）、3），按照阿肽地尔主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中23、24位氨基酸偶联采用二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH偶联，而第1位氨基酸采用Boc-His(Trt)-OH偶联，偶联完毕肽树脂裂解，纯化，冻干后得到阿肽地尔。
实验条件3：采用0.50mmol/g 的Rink Amide MBHA树脂为起始树脂；2）采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除氨基树脂上的Fmoc保护基；3）在偶联剂***的存在下，氨基树脂和Fmoc-Leu-Asn-OH偶联得到Fmoc-Leu-Asn-氨基树脂；4）重复步骤2）、3），按照阿肽地尔主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中23、24位氨基酸偶联采用二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH偶联，而第1位氨基酸采用Fmoc-His(Trt)-OH偶联，然后采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除Fmoc保护基，偶联完毕肽树脂裂解，纯化，冻干后得到阿肽地尔。
实验条件1-3及其实验结果如下面的表1所示：
表1
实验条件 组氨酸偶联 D-His1-阿肽地尔含量 总收率 纯度
实验条件1 假二肽 0.05 % 34% 99.40 %
实验条件2 Boc-His(Trt)-OH 0.06% 45% 99.80 %
实验条件3 Fmoc-His(Trt)-OH 0.78% 32% 98.50%
以上结果表明，实验条件1和2的结果相差不大，但是使用Boc-His(Trt)-OH比使用假二肽成本大幅降低，有明显的优势。
本发明的方法和现有技术相比，采用成本低廉Boc-His(Trt)-OH偶联，可以达到相同的结果，具有明显的优势，有关对比实验如下表2所示：
表2 对比实验结果
专利 D-His1-阿肽地尔含量 总收率 纯度
本发明技术 0.06% 45% 99.80 %
CN201310100852.3 0.05 % 34% 99.40%
本发明的有益效果是：本发明使用Fmoc-Leu-Asn-OH二肽片段偶联23、24位和27、28位氨基酸，而第1位组氨酸偶联采用Boc-His(Trt)-OH，采用此合成法可以效率高、成本低、同时还能避免消旋杂质D-His1-阿肽地尔，实现阿肽地尔规模化的大生产。
附图说明
图1：本发明阿肽地尔的合成路线；
图2：二肽片段的HPLC谱图；
图3：二肽片段的质谱谱图；
图4：阿肽地尔粗肽的HPLC谱图；
图5：阿肽地尔精肽的HPLC谱图；
图6：阿肽地尔精肽质谱谱图。
具体实施方式
以下通过实施例进一步说明本发明。
具体地，关于下面实施例中涉及的各商购氨基酸以及氨基酸片段，以及各商购树脂，其生产厂家和商品型号如下：
Fmoc保护基氨基酸原料、2-CTC树脂和王树脂均为常规的市售试剂（厂家：吉尔生化（上海）有限公司；化学纯）；二肽片段是本专利描述合成的。
有机溶剂和其它原料来源均为市售品（厂家：国药集团化学试剂有限公司；化学纯）。
另外，下面实施例中提到的“旋蒸浓缩”以及“冻干”以及测定HPLC和质谱的条件和所用设备型号及生产厂家说明如下：
旋蒸浓缩设备：旋转蒸发仪R-200/205（瑞士Buchi(布奇)公司）；
旋蒸浓缩条件：30℃下，真空（-0.1Mpa）条件下旋蒸浓缩，浓缩后体积在旋蒸前总体积75%以下。
冻干设备：冻干机FD-3（北京博医康实验仪器有限公司）；
冻干条件：将冻干盘放入冰箱冷冻室(-20℃) 中，预冻6 h。开启冻干机，打开制冷，预冷30 min以上，设置冻干曲线如下：
第一段：在-27℃运行16 h；第二段：在-5℃运行4 h；第三段：在5℃运行2 h；第四段：在30℃运行16 h。
HPLC：Dionex高效液相色谱仪；用十八烷基硅烷键合硅胶（5μm，250×4.6mm）为填充剂；以0.1%TFA溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，进行梯度洗脱；流速为每分钟1.0ml；检测波长为220nm；柱温30℃。取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。
质谱： MALDI-TOF-MS 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱；仪器型号为AUTOFLEX SPEED TOF-TOF。
实施例一
Fmoc-Leu-OSu活化酯的合成
称取353.41g Fmoc-Leu-OH（1.0mol），138.10g HOSu（1.2mol）加入2000ml THF中，冰水浴下加入247.56g DCC（1.2mol），反应1小时，升温到室温反应3小时，反应液过滤，母液旋干，加DCM溶解，过滤，饱和碳酸氢钠洗3遍，纯水2遍，反萃2遍，合并有机相，无水碳酸钠干燥，旋干，冰乙醇重结晶3次，过滤，固体油泵拉干得到400.95g Fmoc-Leu-OSu活化酯，收率89%。
实施例二
Fmoc-Leu-Asn-OH的合成
称取66.06g H-Asn-OH（0.5mol）和79.50g Na2CO3（0.75mol）加入到500ml水和500ml THF的混合溶液中溶解，称取225.25g Fmoc-Leu-OSu（0.5mol）加入到500ml THF，溶解后滴加上述混合溶液中，室温下反应过夜，用10%稀盐酸调节PH到7，旋蒸除去THF，之后调节PH到3。得到大量白色沉淀，过滤。将得到的白色沉淀用冰乙醇重结晶。固体油泵拉干得到203.38g Fmoc-Leu-Asn-OH，收率87%。其HPLC谱图如图2所示，HPLC纯度95.46%，收率89%。其质谱如图3所示，[M+Na]+：490.2075、[M+K]+：506.2078，化合物二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH的理论精确分子量为：467.2056，样品质谱结果与理论分子量相符，结构正确。
实施例三
阿肽地尔-Rink Amide MBHA树脂的合成
称取取代度为0.10mmol/g的Rink Amide MBHA树脂100g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤1次，用DCM溶胀树脂30分钟后，采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除氨基树脂上的Fmoc保护基，用DMF洗涤6次，取14.03g Fmoc-Leu-Asn-OH(30mmol)、4.05gHOBt(30mmol)用DMF溶解，冰水浴下加入3.88g DIC(30mmol)活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，室温下反应2小时后，以茚三酮法检测判断反应终点，如果树脂无色透明，则表示反应完全；树脂显色，则表示反应不完全，需要再反应1小时，此判断标准适用于后续氨基酸偶联中以茚三酮法检测判断反应终点。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照阿肽地尔主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，偶联氨基酸顺序为：Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Leu-Asn-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Boc-His(Trt)-OH；其中Fmoc-Gln(Trt)-OH偶联时溶剂换为：选用体积比为1:4的DMSO和DMF混合溶液；Fmoc-Asp(OtBu)-OH偶联时偶联试剂换为：PyBOP/HOBt/DIEA；Fmoc-Asn(Trt)-OH偶联时偶联试剂换为：HATU/HOBt/DIEA，偶联完毕，用DMF洗涤6次，MeOH洗涤3次，DCM洗涤3次，MeOH洗涤3次，抽干得到151.81g阿肽地尔-Rink Amide MBHA树脂。
实施例四
阿肽地尔-Rink Amide MBHA树脂的合成
称取取代度为0.90mmol/g的Rink Amide MBHA树脂11.11g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤1次，用DCM溶胀树脂30分钟后，采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除氨基树脂上的Fmoc保护基，用DMF洗涤6次，取14.03g Fmoc-Leu-Asn-OH(30mmol)、4.05g HOBt(30mmol)用DMF溶解，冰水浴下加入3.88g DIC(30mmol)活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，室温下反应2小时后，以茚三酮法检测判断反应终点，如果树脂无色透明，则表示反应完全；树脂显色，则表示反应不完全，需要再反应1小时，此判断标准适用于后续氨基酸偶联中以茚三酮法检测判断反应终点。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照阿肽地尔主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，偶联氨基酸顺序为：Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Leu-Asn-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Boc-His(Trt)-OH；其中Fmoc-Gln(Trt)-OH偶联时溶剂换为：选用体积比为1:4的DMSO和DMF混合溶液；Fmoc-Asp(OtBu)-OH偶联时偶联试剂换为：PyBOP/HOBt/DIEA；Fmoc-Asn(Trt)-OH偶联时偶联试剂换为：HATU/HOBt/DIEA，偶联完毕，用DMF洗涤6次，MeOH洗涤3次，DCM洗涤3次，MeOH洗涤3次，抽干得到62.93g阿肽地尔-Rink Amide MBHA树脂。
实施例五
阿肽地尔-Rink Amide MBHA树脂的合成
称取取代度为0.50mmol/g的Rink Amide MBHA树脂20g，加入到固相反应柱中，用DMF洗涤1次，用DCM溶胀树脂30分钟后，采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除氨基树脂上的Fmoc保护基，用DMF洗涤6次，取14.03g Fmoc-Leu-Asn-OH(30mmol)、4.05gHOBt(30mmol)用DMF溶解，冰水浴下加入3.88g DIC(30mmol)活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，室温下反应2小时后，以茚三酮法检测判断反应终点，如果树脂无色透明，则表示反应完全；树脂显色，则表示反应不完全，需要再反应1小时，此判断标准适用于后续氨基酸偶联中以茚三酮法检测判断反应终点。重复上述脱除Fmoc保护和加入相应氨基酸偶联的步骤，按照阿肽地尔主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，偶联氨基酸顺序为：Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Leu-Asn-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Boc-His(Trt)-OH；其中Fmoc-Gln(Trt)-OH偶联时溶剂换为：选用体积比为1:4的DMSO和DMF混合溶液；Fmoc-Asp(OtBu)-OH偶联时偶联试剂换为：PyBOP/HOBt/DIEA；Fmoc-Asn(Trt)-OH偶联时偶联试剂换为：HATU/HOBt/DIEA，偶联完毕，用DMF洗涤6次，MeOH洗涤3次，DCM洗涤3次，MeOH洗涤3次，抽干得到71.82 g阿肽地尔-Rink Amide MBHA树脂。
实施例六
阿肽地尔粗肽的制备
称取实施例五71.82g 阿肽地尔-Rink Amide MBHA树脂，加入到2000mL的三口圆底烧瓶中，采用按体积比为2.5∶5∶5∶87.5的EDT、PhSMe、H2O和TFA的配置裂解液720ml，将裂解液加入上述树脂中，室温反应2小时，浓缩，将浓缩后的液体加入到冰***中沉淀1小时，离心，无水***离心洗涤6次，真空干燥，得到25.94g阿肽地尔粗肽，其HPLC谱图如图4所示，HPLC纯度83.15%，粗肽收率78%。
实施例七
阿肽地尔精肽醋酸盐的制备
将实施例六中的25.94g阿肽地尔粗肽用2500 mL水溶解后，通过C18或C8柱2次纯化、转盐、冷冻干燥后得到目标产物。第一次纯化条件：流动相为：A相：0.1%TFA；B相：乙腈，检测波长220nm，收集目的峰馏分。第二次纯化条件：流动相为：A相：0.3%乙酸；B相：乙腈。检测波长220nm，收集目的峰馏分。转盐条件：流动相：A相：20mM乙酸铵-水溶液；B相：乙腈；检测波长220nm。收集目的峰馏分，旋蒸浓缩，冻干得到阿肽地尔精肽15.05g，其HPLC谱图如图5所示，HPLC纯度99.80 %（面积归一化法），D-His1-阿肽地尔的含量测定：0.06%，纯化总收率58%，总收率45%。其质谱如图6所示，[M]+：3324.5525，阿肽地尔的理论精确分子量为：3324.7595，样品质谱结果与理论分子量相符。
实施例八
杂质D-His1-阿肽地尔的含量测定
杂质D-His1-阿肽地尔的含量测定方法：高效液相色谱法；D-His1-阿肽地尔的含量测定：0.06%（面积归一化法）。
以上内容是结合具体的修选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (2)

1.一种制备阿肽地尔的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1，通过液相法合成二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH，合成方法包括如下步骤：1)Fmoc-Leu-OH、HOSu和DCC偶联得到Fmoc-Leu-OSu，然后Fmoc-Leu-OSu和H-Asn-OH反应得到二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH；
步骤2，采用固相合成法，所述方法包括以下步骤：1)采用0.10～0.90mmol/g的RinkAmide MBHA树脂为起始树脂；2)采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除氨基树脂上的Fmoc保护基；3)在偶联剂***的存在下，氨基树脂和Fmoc-Leu-Asn-OH偶联得到Fmoc-Leu-Asn-氨基树脂；4)重复步骤2)、3)，按照阿肽地尔主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中23、24位氨基酸偶联采用二肽片段Fmoc-Leu-Asn-OH偶联，而第1位氨基酸采用Boc-His(Trt)-OH；
步骤3，肽树脂裂解，纯化，冻干后得到阿肽地尔。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：
所述偶联剂***包括缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂选自DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA；所述反应溶剂选自DMF、DCM、NMP、DMSO或他们之间的组合。
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