CN104447778A - 一种4-羟基依卡精的制备方法 - Google Patents
一种4-羟基依卡精的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104447778A CN104447778A CN201410707741.3A CN201410707741A CN104447778A CN 104447778 A CN104447778 A CN 104447778A CN 201410707741 A CN201410707741 A CN 201410707741A CN 104447778 A CN104447778 A CN 104447778A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phase
- icajine
- hydroxyl
- ethanol
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 40
- ZMTYENXGROJCEA-LNKPQSDASA-N Vomicine Chemical compound O1CC=C([C@@H]2CC3=O)CN(C)CC[C@]43C(C=CC=C3O)=C3N3C(=O)C[C@H]1[C@H]2[C@H]34 ZMTYENXGROJCEA-LNKPQSDASA-N 0.000 title abstract 4
- WKECTJXZMZMDBI-UHFFFAOYSA-N Vomicine Natural products Oc1cccc2c1N3C4C5C(CC3=O)OCC=C6CNCCC24C(=O)CC56 WKECTJXZMZMDBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims abstract description 91
- 244000107975 Strychnos nux-vomica Species 0.000 claims abstract description 21
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 4
- RNZRHJNFQWMXHB-UHFFFAOYSA-N N-methyl-sec-pseudostrychnine Natural products O1CC=C(C2CC3=O)CN(C)CCC43C3=CC=CC=C3N3C(=O)CC1C2C34 RNZRHJNFQWMXHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 58
- ZMTRTSSBHBKGMR-UHFFFAOYSA-N Pseudostrychnin Natural products O=C1CC2OCC=C3CNCCC45C(C2C3CC4=O)N1c6ccccc56 ZMTRTSSBHBKGMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 58
- PKPARRIYUZPZFV-LBPSXOOBSA-N icajine Natural products CN1CC[C@]23[C@@H]4[C@H]5[C@@H](CC2=O)C(=CCOC5=CC(=O)N4c6ccccc36)C1 PKPARRIYUZPZFV-LBPSXOOBSA-N 0.000 claims description 58
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 52
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 claims description 28
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical group CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- QMGVPVSNSZLJIA-UHFFFAOYSA-N Nux Vomica Natural products C1C2C3C4N(C=5C6=CC=CC=5)C(=O)CC3OCC=C2CN2C1C46CC2 QMGVPVSNSZLJIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims description 16
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 16
- GCFHZZWXZLABBL-UHFFFAOYSA-N ethanol;hexane Chemical compound CCO.CCCCCC GCFHZZWXZLABBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000004780 2D liquid chromatography Methods 0.000 claims description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 8
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 8
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims description 8
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 claims description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 4
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 claims description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 5
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 abstract description 3
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 20
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 18
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 12
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 12
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 12
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 6
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 6
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 6
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 6
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 3
- 238000004262 preparative liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- -1 Alkaloid compound Chemical class 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 241000050051 Chelone glabra Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- RATDVVWRGSHGBR-WELZBQRHSA-N O=C(C[C@H]1C(CN(CC2)C3=CC=C3)=CCO[C@@H](C3)[C@H]1C14)C21c(cccc1/C=C2/C=CC2)c1N4C3=O Chemical compound O=C(C[C@H]1C(CN(CC2)C3=CC=C3)=CCO[C@@H](C3)[C@H]1C14)C21c(cccc1/C=C2/C=CC2)c1N4C3=O RATDVVWRGSHGBR-WELZBQRHSA-N 0.000 description 1
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
- C07D491/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Abstract
本发明涉及一种4-羟基依卡精的制备方法，运用二维液相色谱技术，从天然产物马钱子子实体中提取4-羟基依卡精，通过色谱柱、溶解液、流动相等的合理选择，流速、洗脱方式、收集区段等工艺条件的优化，使得整个分离纯化方法切实可行，操作简便，仪器自动化程度高，常温常压下就可进行，重复性高，得到的物质组分批次之间一致性高，可操作性好，且得到的4-羟基依卡精纯度高，可以达到99％以上，可以直接运用于工业生产。
Description
技术领域
本发明涉及化合物生产领域，尤其是一种4-羟基依卡精的制备方法。
背景技术
生物碱类化合物在中药动物药中分布广泛，其化学结构复杂多样，生物活性显著。一些结构新颖的生物碱具有引人注目的生理和药理活性，有可能是治疗一系列人类重大疾病药物的重要来源。4-羟基依卡精就是这样的一种生物碱类化合物，是广泛存在于植物体内的一种重要的天然活性成分，其结构如下：
目前发现4-羟基依卡精有如下作用：第一，其对增殖分化的细胞以及肿瘤细胞具有抑制其增殖分化和细胞毒性的作用，诱导细胞凋亡，因此，4-羟基依卡精抑制肿瘤的活性。第二，整个中枢神经***都有兴奋作用，并提高大脑皮质的感觉中枢机能。第三，镇痛作用：实验表明用小鼠腹腔注射乙酸的扭体法，小鼠肌肉注射，镇痛作用的ED50为12.68mg/Kg.小鼠热板法证明有镇痛作用。其镇痛作用与M胆碱受体有一定的联系。
到目前为止，在天然产物提取物中提取4-羟基依卡精的方法还少有见报道，而且比较繁琐，更不用说提取到高纯度或者单体4-羟基依卡精了，这在一定程度上也阻碍了4-羟基依卡精在作为中药开发方面的进展。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种4-羟基依卡精的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
一种4-羟基依卡精的制备方法，具体步骤如下：
(1)以马钱子子实体为原料，磨成粉末状后，用乙酸乙酯浸泡或者回流提取1-2h，提取1-3次，过滤，所得滤液进行旋转蒸发至干，用乙醇体积分数为20-50％的乙醇-正己烷二元混合溶剂溶解，得到马钱子浓度为50-200mg/mL的提取液；
(2)对得到的提取液进行液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其中A相是正己烷，B相是乙醇；进样量为1000-5000μL mL/针；流动相流速为50-200mL/min；检测器为紫外检测器，检测波长200-260nm；洗脱方式：B相浓度0％等度5min、B相浓度0％-64％梯度5-35min、B相浓度64％-100％梯度35-45min；根据紫外吸收光谱收集其中的峰7(保留时间28-33min)作为目的组分，旋转蒸发至干，得到一维液相组分；
(3)用乙醇体积分数为25-50％的乙醇-正己烷二元混合溶剂溶解一维液相组分，溶解至浓度为50-100mg/mL；
(4)进行二维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其中A相是正己烷，B相是乙醇；进样量为500-2000μL/针；流动相流速为10-30mL/min；；检测器为紫外检测器，检测波长200-260nm；等度洗脱方式：40％B相等度45min洗脱；根据紫外吸收光谱收集其中的5峰(保留时间31-32min)作为目的组分，旋转蒸发浓缩至干，得到目标产物4-羟基依卡精。
优选的，上述4-羟基依卡精的制备方法，所述步骤(2)中液相色谱采用的色谱柱为正相硅胶轴向加压色谱柱(Innovel silica 150×250mm，10μm， )，使用时柱温为室温或25-40℃。
优选的，上述4-羟基依卡精的制备方法，所述步骤(4)中二维液相色谱采用的色谱柱为DAISO硅胶色谱柱(DAISO Silica 20×250mm，5μm，)，使用时柱温为室温或25-40℃。
本发明的有益效果是：
上述4-羟基依卡精的制备方法，运用二维液相色谱技术，从天然产物马钱子子实体中提取4-羟基依卡精，通过色谱柱、溶解液、流动相等的合理选择，流速、洗脱方式、收集区段等工艺条件的优化，使得整个分离纯化方法切实可行，操作简便，仪器自动化程度高，常温常压下就可进行，重复性高，得到的物质组分批次之间一致性高，可操作性好，且得到的4-羟基依卡精纯度高，可以达到99％以上，可以直接运用于工业生产。
附图说明
图1为实施例2中从马钱子子实体中提取4-羟基依卡精的一维高效制备液相色谱图；
图2为实施例2中从马钱子子实体中提取4-羟基依卡精的一维高效制备液相色谱分离所得馏分7号的二维高效制备液相色谱图；
图3为实施例2中得到的目的组分的分析型高效液相色谱图；
图4为4-羟基依卡精的1HNMR谱图；
图5为4-羟基依卡精的13CNMR谱图。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案，下面结合附图及具体实施方式对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。除非另有说明，本发明使用的所有科学和技术术语具有与本发明所属技术领域人员通常理解的相同含义。
实施例1：
以马钱子子实体为原料，磨成粉末状后用乙酸乙酯提取旋蒸得到干燥的马钱子粗粉后称取5g，溶于100mL 20％的乙醇-正己烷溶液，制得马钱子提取物溶液，浓度为50mg/mL，过0.45μm微孔滤膜，进行一维液相色谱制备。一维液相色谱采用Innovel silica 150×250m，10μm，流动相采用的为有机相的混合，其中有机相A相是正己烷，B相是乙醇，洗脱方式：B相浓度0％等度5min、B相浓度0％-64％梯度5-35min、B相浓度64％-100％梯度35-45min。采用紫外检测器210nm选择吸收波长，制备温度为室温，进样量为5000μL/针，流动相流速为80mL/min，收集28-33分钟的馏分，进行旋转蒸发浓缩至干，为一维制备4-羟基依卡精粗品。用40％的乙醇-正己烷溶液溶解4-羟基依卡精粗品，浓度为80mg/mL，经微孔滤膜过滤，进行二维液相色谱制备，色谱柱为DAISO Silica 20×250mm，5μm，流动相采用的为有机相的混合，其中有机相A相是正己烷，B相是乙醇，采用40％B相等度45分钟洗脱。采用紫外检测器210nm选择吸收波长，制备温度为室温，进样量为1000μL/针，流动相流速为16mL/min，收集31-32分钟的馏分，旋转蒸发至干，得到4-羟基依卡精化合物，经液相色谱分析，纯度为98.9％，一维制备4-羟基依卡精粗品中4-羟基依卡精的含量为23％。
实施例2：
以马钱子子实体为原料，磨成粉末状后用乙酸乙酯提取旋蒸得到干燥的马钱子粗粉后称取10g，溶于100mL 30％的乙醇-正己烷溶液，制得马钱子提取物溶液，浓度为100mg/mL，过0.45μm微孔滤膜，进行一维液相色谱制备。一维液相色谱采用Innovel silica 150×250mm，10μm，流动相采用的为有机相的混合，其中有机相A相是正己烷，B相是乙醇,洗脱方式：B相浓度0％等度5min、B相浓度0％-64％梯度5-35min、B相浓度64％-100％梯度35-45min。采用紫外检测器210nm选择吸收波长，制备温度为室温，进样量为5000μL/针，流动相流速为80mL/min，收集28-33分钟的馏分，进行旋转蒸发浓缩至干，为一维制备4-羟基依卡精粗品，结果如图1所示。用50％的乙醇-正己烷溶液溶解4-羟基依卡精粗品，浓度为100mg/mL，经微孔滤膜过滤，进行二维液相色谱制备，色谱柱为DAISO Silica 20×250mm，5μm，流动相采用的为有机相的混合，其中有机相A相是正己烷，B相是乙醇，采用40％B相等度45分钟洗脱。采用紫外检测器210nm选择吸收波长，制备温度为室温，进样量为1000μL/针，流动相流速为16mL/min，收集31-32分钟的馏分，旋转蒸发至干，得到4-羟基依卡精化合物，结果如图2所示。对得到的组分进行高效液相色谱分析，结果如图3所示，纯度为99.4％，一维制备4-羟基依卡精粗品中4-羟基依卡精的含量为35％。经测定，如图4-5所示，产物为目标产物4-羟基依卡精。
实施例3：
以马钱子子实体为原料，磨成粉末状后用乙酸乙酯提取旋蒸得到干燥的马钱子粗粉后称取5g，溶于200mL 30％的乙醇-正己烷溶液，制得马钱子提取物溶液，浓度为25mg/mL，过0.45μm微孔滤膜，进行一维液相色谱制备。一维液相色谱采用Innovel silica 150×250mm，10μm，流动相采用的为有机相的混合，其中有机相A相是正己烷，B相是乙醇,洗脱方式：B相浓度0％等度5min、B相浓度0％-64％梯度5-35min、B相浓度64％-100％梯度35-45min。采用紫外检测器210nm选择吸收波长，制备温度为室温，进样量为5000μL/针，流动相流速为80mL/min，收集28-33分钟的馏分，进行旋转蒸发浓缩至干，为一维制备4-羟基依卡精粗品。用30％的乙醇-正己烷溶液溶解4-羟基依卡精粗品，浓度为100mg/mL，经微孔滤膜过滤，进行二维液相色谱制备，色谱柱为DAISO Silica 20×250mm，5μm，流动相采用的为有机相的混合，其中有机相A相是正己烷，B相是乙醇，采用40％B相等度45分钟洗脱。采用紫外检测器210nm选择吸收波长，制备温度为室温，进样量为1000μL/针，流动相流速为16mL/min，收集31-32分钟的馏分，旋转蒸发至干，得到4-羟基依卡精化合物，对得到的组分进行高效液相色谱分析，纯度为98.2％，一维制备4-羟基依卡精粗品中4-羟基依卡精的含量为18％。
实施例4：
以马钱子子实体为原料，磨成粉末状后用乙酸乙酯提取旋蒸得到干燥的马钱子粗粉后称取20g，溶于100mL 50％的乙醇-正己烷溶液，制得马钱子提取物溶液，浓度为200mg/mL，过0.45μm微孔滤膜，进行一维液相色谱制备。一维液相色谱采用Innovel silica 150×250mm，10μm，流动相采用的为有机相的混合，其中有机相A相是正己烷，B相是乙醇,洗脱方式：B相浓度0％等度5min、B相浓度0％-64％梯度5-35min、B相浓度64％-100％梯度35-45min。采用紫外检测器210nm选择吸收波长，制备温度为室温，进样量为5000μL/针，流动相流速为80mL/min，收集28-33分钟的馏分，进行旋转蒸发浓缩至干，为一维制备4-羟基依卡精粗品。用50％的乙醇-正己烷溶液溶解4-羟基依卡精粗品，浓度为100mg/mL，经微孔滤膜过滤，进行二维液相色谱制备，色谱柱为DAISO Silica20×250mm，5μm，流动相采用的为有机相的混合，其中有机相A相是正己烷，B相是乙醇，采用40％B相等度45分钟洗脱。采用紫外检测器210nm选择吸收波长，制备温度为室温，进样量为1000μL/针，流动相流速为16mL/min，收集31-32分钟的馏分，旋转蒸发至干，得到4-羟基依卡精化合物，对得到的组分进行高效液相色谱分析，纯度为99.1％，一维制备4-羟基依卡精粗品中4-羟基依卡精的含量为27％。
实施例5：
以马钱子子实体为原料，磨成粉末状后用乙酸乙酯提取旋蒸得到干燥的马钱子粗粉后称取16g，溶于200mL 40％的乙醇-正己烷溶液，制得马钱子提取物溶液，浓度为80mg/mL，过0.45μm微孔滤膜，进行一维液相色谱制备。一维液相色谱采用Innovel silica 150×250mm，10μm，流动相采用的为有机相的混合，其中有机相A相是正己烷，B相是乙醇,洗脱方式：B相浓度0％等度5min、B相浓度0％-64％梯度5-35min、B相浓度64％-100％梯度35-45min。采用紫外检测器210nm选择吸收波长，制备温度为室温，进样量为5000μL/针，流动相流速为80mL/min，收集28-33分钟的馏分，进行旋转蒸发浓缩至干，为一维制备4-羟基依卡精粗品。用40％的乙醇-正己烷溶液溶解4-羟基依卡精粗品，浓度为100mg/mL，经微孔滤膜过滤，进行二维液相色谱制备，色谱柱为DAISO Silica 20×250mm，5μm，流动相采用的为有机相的混合，其中有机相A相是正己烷，B相是乙醇，采用40％B相等度45分钟洗脱。采用紫外检测器210nm选择吸收波长，制备温度为室温，进样量为1000μL/针，流动相流速为16mL/min，收集31-32分钟的馏分，旋转蒸发至干，得到4-羟基依卡精化合物，对得到的组分进行高效液相色谱分析，纯度为98.2％，一维制备4-羟基依卡精粗品中4-羟基依卡精的含量为29％。
实施例6：
以马钱子子实体为原料，磨成粉末状后用乙酸乙酯提取旋蒸得到干燥的马钱子粗粉后称取40g，溶于1000mL 25％的乙醇-正己烷溶液，制得马钱子提取物溶液，浓度为40mg/mL，过0.45μm微孔滤膜，进行一维液相色谱制备。一维液相色谱采用Innovel silica 150×250mm，10μm，流动相采用的为有机相的混合，其中有机相A相是正己烷，B相是乙醇,洗脱方式：B相浓度0％等度5min、B相浓度0％-64％梯度5-35min、B相浓度64％-100％梯度35-45min。采用紫外检测器210nm选择吸收波长，制备温度为室温，进样量为5000μL/针，流动相流速为80mL/min，收集28-33分钟的馏分，进行旋转蒸发浓缩至干，为一维制备4-羟基依卡精粗品。用30％的乙醇-正己烷溶液溶解4-羟基依卡精粗品，浓度为100mg/mL，经微孔滤膜过滤，进行二维液相色谱制备，色谱柱为DAISO Silica20×250mm，5μm，流动相采用的为有机相的混合，其中有机相A相是正己烷，B相是乙醇，采用40％B相等度45分钟洗脱。采用紫外检测器210nm选择吸收波长，制备温度为室温，进样量为1000μL/针，流动相流速为16mL/min，收集31-32分钟的馏分，旋转蒸发至干，得到4-羟基依卡精化合物，对得到的组分进行高效液相色谱分析，纯度为98.9％，一维制备4-羟基依卡精粗品中4-羟基依卡精的含量为21％。
所属技术领域的技术人员应该悉知，本发明的技术方法不仅仅限于从马钱子中提取4-羟基依卡精，还可以应用于其它药材中4-羟基依卡精的提取。
本发明实施例涉及到的材料、试剂和实验设备，如无特别说明，均为符合医药制备领域的普通市售产品。
上述参照具体实施方式对该一种4-羟基依卡精的制备方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种4-羟基依卡精的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：
(1)以马钱子子实体为原料，磨成粉末状后，用乙酸乙酯浸泡或者回流提取1-2h，提取1-3次，过滤，所得滤液进行旋转蒸发至干，用乙醇体积分数为20-50％的乙醇-正己烷二元混合溶剂溶解，得到马钱子浓度为50-200mg/mL的提取液；
(2)对得到的提取液进行液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其中A相是正己烷，B相是乙醇；进样量为1000-5000μL mL/针；流动相流速为50-200mL/min；检测器为紫外检测器，检测波长200-260nm；洗脱方式：B相浓度0％等度5min、B相浓度0％-64％梯度5-35min、B相浓度64％-100％梯度35-45min；根据紫外吸收光谱收集其中的峰7保留时间28-33min作为目的组分，旋转蒸发至干，得到一维液相组分；
(3)用乙醇体积分数为25-50％的乙醇-正己烷二元混合溶剂溶解一维液相组分，溶解至浓度为50-100mg/mL；
(4)进行二维液相色谱分离：采用的流动相为二元混合有机相，其中A相是正己烷，B相是乙醇；进样量为500-2000μL/针；流动相流速为10-30mL/min；；检测器为紫外检测器，检测波长200-260nm；等度洗脱方式：40％B相等度45min洗脱；根据紫外吸收光谱收集其中的5峰保留时间31-32min作为目的组分，旋转蒸发浓缩至干，得到目标产物4-羟基依卡精。
2.根据权利要求1所述的4-羟基依卡精的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中液相色谱采用的色谱柱为正相硅胶轴向加压色谱柱，使用时柱温为室温或25-40℃。
3.根据权利要求1所述的4-羟基依卡精的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中二维液相色谱采用的色谱柱为DAISO硅胶色谱柱，使用时柱温为室温或25-40℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410707741.3A CN104447778B (zh) | 2014-11-28 | 2014-11-28 | 一种4-羟基依卡精的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410707741.3A CN104447778B (zh) | 2014-11-28 | 2014-11-28 | 一种4-羟基依卡精的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104447778A true CN104447778A (zh) | 2015-03-25 |
| CN104447778B CN104447778B (zh) | 2016-11-23 |
Family
ID=52894595
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410707741.3A Expired - Fee Related CN104447778B (zh) | 2014-11-28 | 2014-11-28 | 一种4-羟基依卡精的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104447778B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105395995A (zh) * | 2015-12-06 | 2016-03-16 | 正源堂（天津）生物科技有限公司 | 三棱中抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用 |
| CN105412735A (zh) * | 2015-12-06 | 2016-03-23 | 正源堂（天津）生物科技有限公司 | 从三棱中提取抗肿瘤活性组分的方法及其应用 |
| KR20180042705A (ko) * | 2016-10-18 | 2018-04-26 | 주식회사 엘지생활건강 | 보미신을 포함하는 화장료 조성물 |
-
2014
- 2014-11-28 CN CN201410707741.3A patent/CN104447778B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 何亚维等: "不同炮制方法对马钱子中4种生物碱的影响", 《中国中药杂志》, vol. 20, no. 2, 31 December 1995 (1995-12-31), pages 84 - 86 * |
| 刘艳萍: "马钱子的化学成分研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》, no. 2, 15 February 2012 (2012-02-15), pages 057 - 75 * |
| 孙丽荣等: "油炸马钱子的生物碱成分研究", 《红河学院学报》, vol. 9, no. 4, 31 August 2011 (2011-08-31), pages 5 - 8 * |
| 贺丽萍: "马钱子炮制方法新探", 《实用中医内科杂志》, vol. 22, no. 3, 31 December 2008 (2008-12-31), pages 71 - 72 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105395995A (zh) * | 2015-12-06 | 2016-03-16 | 正源堂（天津）生物科技有限公司 | 三棱中抗肿瘤活性组分的提取方法及其应用 |
| CN105412735A (zh) * | 2015-12-06 | 2016-03-23 | 正源堂（天津）生物科技有限公司 | 从三棱中提取抗肿瘤活性组分的方法及其应用 |
| KR20180042705A (ko) * | 2016-10-18 | 2018-04-26 | 주식회사 엘지생활건강 | 보미신을 포함하는 화장료 조성물 |
| KR102644107B1 (ko) | 2016-10-18 | 2024-03-07 | 주식회사 엘지생활건강 | 보미신을 포함하는 화장료 조성물 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104447778B (zh) | 2016-11-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhang et al. | Techniques for extraction and isolation of natural products: A comprehensive review | |
| Li et al. | Preparative separation of polyphenols from water-soluble fraction of Chinese propolis using macroporous absorptive resin coupled with preparative high performance liquid chromatography | |
| Bogdanov et al. | Ionic liquid-supported solid–liquid extraction of bioactive alkaloids. III. Ionic liquid regeneration and glaucine recovery from ionic liquid-aqueous crude extract of Glaucium flavum Cr.(Papaveraceae) | |
| CN102988667B (zh) | 一种调经活血片的制备方法及应用 | |
| Yu et al. | Purification of high-purity glycyrrhizin from licorice using hydrophilic interaction solid phase extraction coupled with preparative reversed-phase liquid chromatography | |
| CN105693676A (zh) | 从万寿菊中分离纯化槲皮万寿菊素的方法 | |
| CN102512453A (zh) | 中药蟾酥提取物及其制备方法 | |
| CN102988577B (zh) | 一种清脑降压片的制备方法及应用 | |
| CN106995425A (zh) | 一种川射干黄酮苷元的提取工艺及其分离纯化方法 | |
| CN104447778A (zh) | 一种4-羟基依卡精的制备方法 | |
| CN103113436A (zh) | 一种从银杏叶提取物中制备山奈酚-3-o-芸香糖苷的方法 | |
| CN104997840A (zh) | 一种异叶青兰五环三萜类组分的样品前处理方法及其应用 | |
| CN101955479A (zh) | 一种从竹叶中提取荭草苷的方法 | |
| CN104478686B (zh) | 姜黄挥发油中芳姜黄酮对照品的制备方法 | |
| CN102988489B (zh) | 一种利鼻片在制备抑制人黑色素瘤细胞m14细胞增殖药物中的应用 | |
| CN102688261A (zh) | 一种凤尾草提取物及其制备方法和用途 | |
| Zhang et al. | Selectively preparative purification of aristolochic acids and aristololactams from Aristolochia plants | |
| CN101658598B (zh) | 从泽泻中提取并富集泽泻总三萜酮醇类组分的方法 | |
| CN103880895B (zh) | 一种利用高速逆流色谱分离纯化制备哈巴俄苷和斩龙剑苷a的方法 | |
| CN105906687B (zh) | 一种从丹参中分离纯化多种丹参酮单体成分的方法 | |
| CN105693675A (zh) | 一种从万寿菊中提取黄酮类化合物组分的方法 | |
| CN103977391A (zh) | 一种小柴胡胶囊的制备方法及应用 | |
| CN101317997A (zh) | 一种姜黄有效组分的制备方法 | |
| CN104297360B (zh) | 一种复方血栓通制剂指纹图谱的检测方法 | |
| Peng et al. | A comparative study of chromatographic methods for separating chemical compounds from Spiranthes australis (R. Brown) Lindl roots |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20170509 Address after: 300450, room 4, building 19, No. 4302-4 West Ring Road, Tianjin Development Zone Patentee after: TIANJIN LANGLI PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Address before: Dongting Road 300457 in Tianjin Binhai New Area of Tianjin Development Zone No. 220 Tianjin international bio Pharmaceutical Joint Research Institute S509 Patentee before: TIANJIN YAOYU BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd. |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20161123 |