CN104418990B - 一种有机无机杂化微球颗粒及其制备和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属聚合物材料和分析技术领域，涉及一种单分散有机无机杂化核壳结构的微球颗粒及其制备和应用。以无机硅胶颗粒为核，之后通过修饰上硅烷化试剂，然后通过硫醇‑烯的点击化学技术在核表面包裹3‑丙烯酰胺基苯硼酸与多烯类交联单体，形成表面光滑且带有硼酸功能基团的有机无机杂化的核壳结构纳/微米粒子。本发明在材料表面通过硫醇‑烯方法引入苯硼酸功能基团，不仅克服了传统后修饰方法步骤繁琐、反应效率低的缺点，而且使得APBA能够更稳定聚合，提高表面硼酸的键合量以及材料的亲水性减少对蛋白的非特异性吸附。本发明的微球颗粒可用于分离或富集带有1,2‑顺式二醇结构的糖蛋白，在蛋白质组学等领域有较好的实用价值和应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及富集糖蛋白，具体地说是一种单分散有机无机杂化核壳结构微球颗粒及其制备和在糖蛋白富集中的应用。
背景技术
众所周知，蛋白质的组成在生物体内是极其复杂并且不断变化，即使在相同物种的不同细胞或是相同细胞的不同时期，蛋白质的组成都存在显著差异，因此，蛋白质组学逐渐成为大家关注的焦点。在蛋白质组学中，糖蛋白作为一类重要的翻译后修饰蛋白，在信号转导、免疫及肿瘤发生等生物学过程中发挥着重要的作用。因此，糖蛋白和糖肽的发现与鉴定在疾病的诊断和蛋白质组学领域意义重大。目前，用于N连接糖肽富集的主要方法有凝集素、酰肼、亲水作用色谱、硼酸亲和色谱等。对于具有1,2-顺式二醇化学结构的糖型，苯硼酸可以与其形成可逆的五元或者六元环的酯。此方法步骤简便快捷，避免了糖链结构的破坏，且富集产物与质谱兼容，对于研究糖蛋白糖基化位点信息及糖型结构归属较为方便。因此，苯硼酸在糖肽和糖蛋白的选择性富集领域受到了人们的关注。
目前，在利用苯硼酸功能化基团对糖蛋白富集的材料中，使用较为广泛的是氨基苯硼酸和硫基苯硼酸。目前主要是利用这些功能分子上的氨基和硫基与基质材料上的基团反应，将苯硼酸功能化基团接枝在基质材料的表面（X Zhang,X He,L Chen,Y Zhang,J.Mater.Chem.2012,22,1652016526;L Liang,Z Liu,Chem.Commun.2011,47,(8),2255-2257）。然而，这些固定化方法通常要求严格的反应条件（如无水溶剂，较高的反应温度等）制备步骤多，反应效率低，功能基团之间要求为交叉的反应。因此，需要寻找一种反应条件温和，选择性高反应条件与水环境兼容的新方法。点击化学具有反应产率高、官能基团稳定以及反应活性高的特点使其在制备功能材料的研究中受到各国学者的关注。X Zhang,XHe,L Chen,Y Zhang,J.Mater.Chem.,2012,22,16520报道了一种在磁性Fe3O4微球表面修饰苯硼酸制备方法，该方法通过“点击化学”方法将含有叠氮基团的苯硼酸固定到磁性Fe3O4微球表面，有效提高了苯硼酸的固定化率，显著提高了其对糖蛋白的富集能力，但是该技术属于金属催化的叠氮化物与炔基的反应，且该材料的制备并没有使得材料亲水性同时得到改善。
发明内容
针对以上不足，本发明提供一种硫醇-烯点击化学功能化苯硼酸和亲水性改性同时进行的制备方法，该方法具有反应条件温和，选择性高反应条件与水环境兼容的特点，得到的产物颗粒形状规整，单分散性好，表面亲水性强。利用该聚合物材料作为富集材料，对糖蛋白的分离富集以及可以兼容后续的MALDI-TOF/MS直接分析，从而解决了样品的分析困难。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
步骤一：在反应容器中加入反应溶液甲苯，加入活化后的硅胶颗粒、含有硫醇基团的硅烷化试剂等，超声1分钟，使得加入的试剂以及硅胶颗粒均匀的分散在溶剂中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6-30h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用3000-10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
步骤二：在烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂或者混合溶液，加入步骤一中得到的硅烷化修饰后的硅胶颗粒、3-丙烯酰胺基苯硼酸、多烯类功能单体、引发剂、链转移试剂等，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解均匀的分散在溶液中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至60-140℃。维持60-80℃条件下反应4-48小时，停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用3000-10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶剂洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
在步骤一中，所说的含有巯基的硅烷化试剂为(3-巯基丙基)三甲氧基硅烷，3-巯丙基三乙氧基硅烷。含有硅胶颗粒，硅烷化试剂的溶液中，硅胶颗粒占总质量的0.01-0.2wt%单体的总摩尔数浓度为0.05-1mol/L，余量为反应溶剂。修饰后的微球颗粒，其粒径为100nm-10μm。
在步骤二中，所说的多烯类交联单体是多烯类交联单体是N,N’-亚甲基双丙烯酰胺、双甲基丙烯酸乙二醇酯、三甲基丙烯酸三羟甲基丙酯、二乙烯基苯，混合物中两者的摩尔比例为1:2-8，引发剂选偶氮类引发剂。反应溶液为水、乙腈、甲醇、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺。含有单烯类功能单体，多烯类交联单体和引发剂的溶液中，单体的总摩尔数浓度为0.05-0.4mol/L，引发剂占单体总质量的0.5-10%，余量为反应溶剂。制备出来的有机无机杂化微球颗粒，其粒径为100nm-10μm。
本发明在材料表面通过硫醇-烯方法引入苯硼酸功能基团，不仅克服了传统后修饰方法步骤繁琐、反应效率低的缺点，而且使得APBA能够更稳定聚合，提高表面硼酸的键合量以及材料的亲水性减少对蛋白的非特异性吸附。本发明的微球颗粒可用于分离或富集带有1,2-顺式二醇结构的糖蛋白，在蛋白质组学等领域有较好的实用价值和应用前景。
本发明具有如下优点：
1.本发明所述制备方法，采用巯基-烯点击化学的方法，同时在制备过程中加入亲水***联剂，使得制备材料反应效率高，反应重现性高，反应条件温和，反应速度快。
2.有机无机杂化核壳结构微球颗粒外层形成采用巯基-烯点击化学方法，使得本发明核壳结构微球颗粒的表面含有大量硼酸功能基团，并具有更高的糖蛋白吸附容量，且颗粒的粒径分布较窄，粒径单分散。
3.通过本发明制备的硼酸功能化核壳结构微球；通过活性基团间的偶联，糖蛋白简便并且可逆的结合与粒子表面，实现糖蛋白的选择性富集和之后的质谱直接分析，开辟通过巯基-烯点击化学方法制备微球颗粒在蛋白质组学方面的新应用。
附图说明
图1为实施例1中制备的聚合物微球的透射电镜照片；
图2单分散核壳结构聚合物纳米粒子对糖蛋白（辣根过氧化物酶，HRP）与非糖蛋白（牛血清白蛋白，BSA）混合溶液（质量比1：5）的富集效果图。
a）原液；b）上清；c）富集产物。
具体实施方式
下面采用具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明。
实施例1
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。
在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1000mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、600mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
2.聚合物纳米粒子的表征
经过透射电镜测试，结果如图1所示。
3.聚合物微球可用于富集糖蛋白
将糖蛋白（辣根过氧化物酶，HRP）与非糖蛋白（牛血清白蛋白，BSA）按质量比1：5混合，并溶解于50mM碳酸氢铵缓冲溶液中（pH9.0），从而制得浓度为100ng/μL的蛋白混合溶液。
称取1mg在实施例1中制备的silica@(MBAAm-co-APBA)有机无机杂化核壳结构微球颗粒，分散在200μL上述蛋白溶液中，在室温条件下孵育2小时，反应结束后离心，保留上清液待质谱鉴定。50mM碳酸氢铵缓冲溶液（pH9.0）洗涤材料数遍，离心弃上清。在分离得到的材料中加入20μL乙腈：水：三氟乙酸体积比为50:49:1的混合溶液，在室温下孵育1小时，离心取去富集产物。将蛋白原液、上述步骤中的上清液和富集产物进行MALDI-TOF MS鉴定。
将1μL待分析物与1μL SA基质（SA基质为：20mg芥子酸溶于体积比是乙腈：水：三氟乙酸=60:39:1的1ml溶液中）依次点于MALDI靶板上，待样品点干燥后进行质谱鉴定。MALDI-TOF MS实验是在UltraflexⅢTOF/TOF(Bruker Daltonics,Bremen,Germany)上进行，检测时采用线性正离子模式。
如图2所示，a图为未经过材料分离富集处理的原蛋白混合溶液，b图为上清液，c图为富集产物。如图2c所示，经核壳型聚合物纳米粒子富集之后，HRP信号强度较原液（图2a）显著提高；且无BSA非特异吸附，干扰蛋白仅存在于上清之中（图2b）。表明材料具有较好的糖蛋白富集能力及良好的亲水性。
实施例2
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入5g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1000mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、600mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例3
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入4g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1000mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、600mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例4
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入7g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1000mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、600mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例5
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入8g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1000mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、600mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例6
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1000mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、400mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、900mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例7
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1000mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、500mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、900mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例8
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1000mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、600mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、900mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例9
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1000mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、700mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、900mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例10
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1000mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、800mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、900mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例11
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1000mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、100mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例12
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1000mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、200mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例13
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1000mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、450mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例14
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1000mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、300mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例15
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1000mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、750mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例16
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入200mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、600mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例17
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入400mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、600mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例18
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入600mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、600mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例19
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入800mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、600mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例20
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1200mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、600mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例21
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1200mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、600mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例22
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为5μm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1400mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、600mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
实施例23
1.单分散核壳结构聚合物纳米粒子的制备
在150mL的圆底烧瓶中，加入80mL甲苯，加入6g粒径为500nm的硅胶颗粒,3g的3-巯丙基三乙氧基硅烷，超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒均匀的分散在溶液中，在烧瓶上接冷凝管，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中，加热回流6h，之后停止反应，冷却至室温。之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复抽滤洗涤3遍洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时，得到修饰的硅烷化试剂的硅胶颗粒。在100mL的圆底烧瓶中，装上冷凝管，加入反应溶剂水-乙醇混合溶液（体积比为2:1）50mL，加入1000mg修饰硅烷化的硅胶颗粒、200mg3-丙烯酰胺基苯硼酸(APBA)、600mg N，N'-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）、100mg偶氮二异丁腈（AIBN）超声1分钟，使得加入的试剂以及颗粒溶解形成均匀分散在溶剂中，之后通氮气15分钟，加入磁力搅拌子，磁力搅拌子保持300rad/min速度。反应装置放在油浴锅中均匀缓慢加热，在30min内升温至75℃。维持75℃条件下反应12小时，停止反应，冷却至室温，得到微球颗粒silica@(MBAAm-co-APBA)之后使用高速离心机用10000rad/min的速度离心，去除上清液，加入反应溶液洗三遍，50℃真空干燥箱内真空干燥24小时。
其他同实施例1。
Claims (4)
1.一种有机无机杂化微球颗粒，其特征在于：
所述有机无机杂化核壳结构微球颗粒，首先以硅胶颗粒为核，之后通过修饰上含有巯基功能化基团的硅烷化试剂，然后通过巯基-烯（thiol-ene）的点击化学技术在核表面包裹3-丙烯酰胺基苯硼酸与多烯类交联单体，形成表面光滑且带有硼酸功能基团的核壳结构的聚合物纳米粒子；
所述的硅烷化试剂为 (3-巯基丙基)三甲氧基硅烷，或3-巯丙基三乙氧基硅烷；
多烯类交联单体是N,N’-亚甲基双丙烯酰胺、双甲基丙烯酸乙二醇酯、三甲基丙烯酸三羟甲基丙酯或二乙烯基苯；
壳的表面带有硼酸功能基团，3-丙烯酰胺基苯硼酸与多烯类交联单体的摩尔比为1:0.2至1:8；
所述硅胶颗粒与所述硅烷化试剂的质量比为1:0.05至1:1。
2.一种如权利要求1所述微球颗粒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）硅烷化修饰硅胶颗粒的过程：将活化后的硅胶颗粒分散在甲苯中，超声，加入带有巯基基团的硅烷化试剂，搅拌回流6-30 h；
之后依次使用甲苯、丙酮、甲醇、丙酮抽滤洗涤，重复滤洗涤2~5遍，在真空干燥箱中至恒重；
2）制备聚合物微粒的壳层：将得到的硅烷化修饰硅胶颗粒、3-丙烯酰胺基苯硼酸、多烯类交联单体、引发剂在反应溶剂体系中混合，在60-80℃下反应4-48小时；离心分离得到有机无机杂化的核壳结构微球，之后使用反应溶剂洗涤微球中未反应物质至清洁，重复抽滤洗涤2~5遍，在真空干燥箱中至恒重。
3. 按照权利要求2所述的制备方法，其特征在于：在权利要求2步骤2）中，体系中加入的单烯类功能单体，3-丙烯酰胺基苯硼酸与多烯类交联单体的摩尔比为1:0.2至1:8；单体总摩尔浓度为0.05-0.4 mol/L;
在权利要求2步骤2）中，权利要求2步骤1）中硅烷化修饰硅胶颗粒的加入质量与形成壳的单体总质量比为1:0.1至1:10；
在权利要求2步骤2）中，所述引发剂为偶氮类引发剂，其具体为偶氮二异丁腈、偶氮二异庚腈、偶氮二异丁脒盐酸盐、或偶氮二异丁咪唑啉盐酸盐，其加入量占形成壳的单体总质量的0.5%~10%；
在权利要求2步骤2）中，其所用的溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、甲苯、N,N-二甲基甲酰胺、水中一种或二种以上混合溶液。
4.一种使用如权利要求1所述微球颗粒从简单样品混合物或者复杂样品中分离或富集带有1,2-顺式二醇结构的化合物的应用，所述化合物具体为核酸、糖蛋白或糖肽。
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