CN104396572A - 冬虫夏草菌种孢子分离提纯复壮方法 - Google Patents

冬虫夏草菌种孢子分离提纯复壮方法 Download PDF

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Abstract

本发明一种冬虫夏草菌种孢子分离提纯复壮方法，包括如下步骤：1)配制固体培养基：先将100-140g土豆煮熟，过滤，加入葡萄糖10-14g、牛肉膏4-6g、KH2PO40.4-0.6g、MgSO40.2-0.3g、琼脂8-12g，加热煮沸让琼脂完全融化，加蒸馏水，高压蒸汽灭菌，装制斜面；2)选择孢子快成熟的冬虫夏草菌种，用0.1％升汞液消毒，无菌水清洗；3)在试管塞下端锤入一个小钩，无菌条件下切取菌种子座倒挂于小钩上，将试管塞塞入斜面试管；4)将斜面试管避光22-24℃培养3-4天，再20-22℃培养4-5天，然后18～22℃自然光照培养24小时，选择无杂菌，菌丝发达，颜色鲜黄的菌株，即得。

Description

冬虫夏草菌种孢子分离提纯复壮方法
技术领域
本发明属于生物领域，涉及一种冬虫夏草菌种孢子分离提纯复壮方法。
背景技术
冬虫夏草是麦角科虫草菌寄生于蝙蝠蛾幼虫体上的子座与幼虫体的复合物。有野生和人工培植两种。对人体发挥作用的有效成分是虫草素、虫草酸、虫草多糖、超氧化物歧化酶。有补肾益肺，止血化痰，抗癌，提高免疫力，抗疲劳，保护肺、肾、肝等多种功能。深受广大人群欢迎，称为保健品中的软黄金。
冬虫夏草野生菌的分离和人工培植虫草几代后品种容易出现退化，需进行提纯复壮，但是用子实体分离，消毒很困难，往往也将菌丝杀死或不能完全清除杂菌，用孢子分离又因孢子难以获得，很难实现。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种低成本、高产出、能够培养出高活性的冬虫夏草菌种孢子的分离提纯复壮方法。
本发明的目的是这样实现的：一种冬虫夏草菌种孢子分离提纯复壮方法，包括如下步骤：
2)配制固体培养基：配方为：土豆100-140g、葡萄糖10-14g、牛肉膏4-6g、KH2PO4 0.4-0.6g、MgSO4 0.2-0.3g、琼脂8-12g；先将土豆煮熟，过滤，加入葡萄糖、牛肉膏、KH2PO4、MgSO4、琼脂，加热煮沸让琼脂完全融化，加蒸馏水，高压蒸汽灭菌，装制斜面，待用；
2)选择孢子快成熟的冬虫夏草菌种，用0.1％升汞液对菌种虫体部进行表面消毒，然后连同子座用无菌水清洗；
3)在试管塞下端锤入一个小钩，在无菌条件下切取冬虫夏草菌种子座，在无菌条件下将子座下端倒挂于试管塞的小钩上，使子座尖端部向下，将挂好子座的试管塞塞入步骤1中待用的斜面试管；
4)将步骤3中的斜面试管避光22-24℃培养3-4天，再在20-22℃培养4-5天，去除有杂菌生长的试管，然后在18～22℃自然光照培养24小时，选择无杂菌，菌丝发达，颜色鲜黄的菌株，即得。
所述冬虫夏草菌种为野生菌种或者人工培植虫草。
所述虫夏草野生菌种在西藏那曲或者青海玉树采集。
本发明的有益效果是：提供了一种低成本、高产出、能够培养出高活性的冬虫夏草菌种孢子的分离提纯复壮方法。得到的孢子大、活力高、抗杂菌力强，可用作扩大生产菌种，成功地实现了冬虫夏草菌种孢子分离提纯复壮。
具体实施方式
实施例1对冬虫夏草野生菌种孢子分离提纯复壮
对冬虫夏草野生菌种孢子分离提纯复壮，按照如下步骤操作：
1)配制固体培养基：配方为：土豆120g、葡萄糖12g、牛肉膏5g、KH2PO40.5g、MgSO4 0.25g、琼脂10g；先将土豆煮熟，过滤，加入葡萄糖、牛肉膏、KH2PO4、MgSO4、琼脂，加热煮沸让琼脂完全融化，加蒸馏水至500ml，高压蒸汽下菌120℃，30min，搅拌均匀装制斜面，待用；
2)选择孢子快成熟的冬虫夏草野生菌种，冬虫夏草野生菌种采集应在5月左右，优选西藏那曲、青海玉树等地采集，选择子座粗壮发达，快形成孢子的新鲜野生种；用0.1％升汞液对菌种虫体部进行表面消毒，然后连同子座用无菌水清洗；
3)在试管塞子下端中央锤入一个不锈钢小鱼钩，露出小钩。在无菌条件下切取冬虫夏草菌种子座，在无菌条件下将子座下端倒挂于试管塞的小钩上，使子座尖端部向下，将挂好子座的试管塞塞入步骤1中待用的斜面试管；使子座尖端部向下，将挂好子座的塞子塞入试管或三角瓶，子座不要与玻璃接触，子座尖部对准试管里培养基斜面中部为好。
4)将步骤3中的斜面试管避光24℃培养4天，再在20℃培养4天，去除有杂菌生长的试管，然后在18～22℃自然光照培养24小时，选择无杂菌，菌丝发达，颜色鲜黄的菌株，即得。
实施例2对人工培植的冬虫夏草菌种孢子分离提纯复壮
对人工培植的冬虫夏草菌种孢子分离提纯复壮，按照如下步骤操作：
1)配制固体培养基：配方为：土豆130g、葡萄糖13g、牛肉膏6g、KH2PO40.6g、MgSO4 0.3g、琼脂11g；先将土豆煮熟，过滤，加入葡萄糖、牛肉膏、KH2PO4、MgSO4、琼脂，加热煮沸让琼脂完全融化，加蒸馏水至500ml，高压蒸汽下菌120℃，30min，搅拌均匀装制斜面，待用；
2)选择子座密集、粗壮发达、尖端快膨大，颜色鲜艳孢子快成熟的人工培植的冬虫夏草菌种，用0.1％升汞液对菌种虫体部进行表面消毒，然后连同子座用无菌水清洗；
3)在试管塞子下端中央锤入一个不锈钢小鱼钩，露出小钩。在无菌条件下切取冬虫夏草菌种子座，在无菌条件下将子座下端倒挂于试管塞的小钩上，使子座尖端部向下，将挂好子座的试管塞塞入步骤1中待用的斜面试管；使子座尖端部向下，将挂好子座的塞子塞入试管或三角瓶，子座不要与玻璃接触，子座尖部对准试管里培养基斜面中部为好。
4)将步骤3中的斜面试管避光24℃培养3天，再在22℃培养5天，去除有杂菌生长的试管，然后在18～22℃自然光照培养24小时，选择无杂菌，菌丝发达，颜色鲜黄的菌株，即得。

Claims (3)

1.一种冬虫夏草菌种孢子分离提纯复壮方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)配制固体培养基：配方为：土豆100-140g、葡萄糖10-14g、牛肉膏4-6g、KH2PO4 0.4-0.6g、MgSO4 0.2-0.3g、琼脂8-12g；先将土豆煮熟，过滤，加入葡萄糖、牛肉膏、KH2PO4、MgSO4、琼脂，加热煮沸让琼脂完全融化，加蒸馏水，高压蒸汽灭菌，装制斜面，待用；
2)选择孢子快成熟的冬虫夏草菌种，用0.1％升汞液对菌种虫体部进行表面消毒，然后连同子座用无菌水清洗；
3)在试管塞下端锤入一个小钩，在无菌条件下切取冬虫夏草菌种子座、将子座下端倒挂于试管塞的小钩上，使子座尖端部向下，将挂好子座的试管塞塞入步骤1中待用的斜面试管；
4)将步骤3中的斜面试管避光22-24℃培养3-4天，再在20-22℃培养4-5天，去除有杂菌生长的试管，然后在18～22℃自然光照培养24小时，选择无杂菌，菌丝发达，颜色鲜黄的菌株，即得。
2.如权利要求1所述的冬虫夏草菌种孢子分离提纯复壮方法，其特征在于，所述冬虫夏草菌种为野生菌种或者人工培植虫草。
3.如权利要求1所述的冬虫夏草菌种孢子分离提纯复壮方法，其特征在于，所述虫夏草野生菌种在西藏那曲或者青海玉树采集。
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