CN104395325B

CN104395325B - 带有硼酸的LIPHAGANE化合物作为PI3K-α和/或β的抑制剂

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Publication number: CN104395325B
Application number: CN201380026291.5A
Authority: CN
Inventors: R·A·维施瓦卡玛; S·D·萨万特; P·P·辛格; A·H·达尔; P·R·夏尔马; A·K·萨克斯纳; A·纳戈特拉; A·A·K·科尔卢勒; R·马杜杜德拉; A·K·卡齐; A·赫塞恩; N·查纳尤里亚
Original assignee: Council of Scientific and Industrial Research CSIR
Current assignee: Council of Scientific and Industrial Research CSIR
Priority date: 2012-03-19
Filing date: 2013-03-18
Publication date: 2016-12-07
Anticipated expiration: 2033-03-18
Also published as: US9206201B2; EP2828269B1; US20150051173A1; EP2828269A1; CA2867452C; IN2012DE00794A; WO2013140417A4; WO2013140417A1; TWI577687B; CN104395325A; CA2867452A1; JP6126197B2; JP2015514701A; TW201341391A

Abstract

本发明描述了具有独特的liphagane杂萜类骨架并在所述骨架中具有硼酸官能团的化合物(式1)，这些化合物具有作为抗癌剂的药理学潜力。提供了制备方法以及抑制磷酸肌醇‑3‑激酶(PI3K‑α和β)活性的方法。具体而言，本发明描述了抑制PI3K同工型的方法，其中所述化合物是基于具有独特的硼酸官能团的liphagane骨架的新结构。本发明在此描述了其方法和用途。所要求保护的马库什结构为：[式1]。Y可以是O、NH、NR、S；代表性的化合物是：[化合物A、B、C、D]

Description

带有硼酸的LIPHAGANE化合物作为PI3K-α和/或β的抑制剂

技术领域

本发明涉及带有硼酸的liphagane化合物。本发明具体涉及带有硼酸的基于杂萜类(meroterpenoid)liphagane骨架的化合物。所述化合物已经设计、合成并且在本发明中提供了它们通过抑制PI3K通道的抗癌活性生物学评价结果。这项工作的发明领域涉及和覆盖了开发抗癌活性的基于杂萜类liphagane骨架的新PI3K-α/β抑制剂。

背景技术

PI3K是一族相关的细胞内信号转导蛋白，能够磷酸化磷脂酰肌醇(PtdIns)的肌醇环的3位羟基。它们亦称为磷脂酰肌醇-3-激酶。所述通道，与癌基因PIK3和肿瘤抑制(PTEN)基因一起，涉及癌瘤在卡路里限制中对胰岛素和IGF1的不敏感性。3-激酶(PI3K)信号通路是新鉴定的用于发现和开发某些治疗剂的策略。在各种PI3K亚型当中，IA类PI3K-α由于它在各种人类癌症中频繁的突变和扩增，而作为有希望的治疗癌症的药物靶标已经日益获得关注。与不区分正常增殖细胞和肿瘤细胞的细胞毒素剂相比，靶向疗法主要在癌细胞中发挥它们的作用。肿瘤的启动和维持是由于特定基因座中的遗传改变所致。鉴定发生这些改变的基因已经为癌症治疗展现了新的机会。PI3K(磷酸肌醇3-激酶)通路经常在人类癌症中过度活跃并且已经发现引起这种情况的各种遗传改变。在所有情况中，PI3K抑制被认为是癌症治疗最有希望的靶向疗法之一。

由于它在炎症和癌症中的广泛活化，逐渐认识到磷酸肌醇3-激酶(PI3K)通路抑制剂的治疗潜力已经激起了对具有合适的药理特征的化合物的强烈兴趣。这些主要针对PI3K本身。然而，因为I类PI3K对一系列正常生理过程也是必要的，所以广谱PI3K抑制可能耐受差。

近年来，描述新一代PI3K抑制剂的专利已经开始出现，并且特别集中在开发具有同工型选择性提高的化合物，用作抗癌和抗炎治疗。然而，以成功的方式药理学上靶标这种酶家族的工作仍然是挑战。

选择磷酸肌醇3-激酶-α(PI3K-α/β)抑制剂的基本原理：-在细胞水平上，磷酸肌醇-3-激酶信号传导有助于许多过程，包括细胞周期进展、细胞生长、存活和迁移以及细胞内囊泡转运。PI3K表示所述脂质激酶家族可以根据结构和底物特异性分类为三个亚族，即I类、II类和III类。I类PI3K是脂类激酶当中研究最广泛的，是异二聚体蛋白质；每个包含较小的调节域和和较大的110kDa催化域，所述催化域存在四种同工型，以p110α、p110β、p110γ和p110δ区分。虽然，在文献中报告了存在抑制所述PI3-激酶的基于天然产物的小分子，IC₅₀值在纳克范围内(即，从渥曼青霉菌(Penicillium wortmanni)分离的渥曼青霉素，黄酮类槲皮素的合成类似物LY294002，等等)，但这些分子因为效力低、同工型或激酶选择性差、稳定性有限以及不可接受的药理学和药代动力学性质而没有上市。然而，具有同工型选择性和有希望的药物样性质的PI3激酶抑制剂现在已经开始出现，它们展现了治疗癌症和其他疾病指征的希望。在癌症中，有证据提示抑制1A类PI3激酶p110α和p110β看起来最适合于目标。最近，考虑到来自海洋资源的天然产物已经成为分子多样性的丰富仓库并且保持着相当有希望在药物发现中作为先导结构的丰富来源，Andersen等在筛选对抗人类PI3K-α的海洋无脊椎动物的合作项目下，在2006年报告了来自海绵Aka coralliphaga的潜在同工型选择性PI3K-α抑制剂。liphagal(Joshua J.Day，Ryan M.McFadden；The catalyticenantioselective total synthesis of(+)-liphagal；Angew.Chem.Int.Ed.2011，50，6814-6818；Enrique Alvarez-Manzaneda，RachidChahboun；Enantioselectivetotal synthesis of the selective PI3-kinase inhibitor liphagal；Org.Lett.，2010，12(20)，4450-4453页；Jonathan H.George，Jack E.Baldwin；Enantiospecificbiosynthetically inspired formal total synthesis of(+)- liphagal，Org.Lett.，2010，12(10)，2394-2397页；Alban R.Pereira，Wendy K.Strangman，Synthesis of phosphatidyl inositol 3-kinase(PI3K)inhibitory analogues of the sponge meroterpenoid liphagal；J.Med.Chem.，2010，53(24)，8523–8533页；DimaA.Sabbah，Jonathan L.Vennerstrom；Docking studies on isoform-specific inhibition of phosphoinositide-3-kinases；J.Chem.Inf.Model.，2010，50(10)，1887–1898页；Ram Vishwakarma and Sanjay Kumar；Efficient Synthesis of keyintermediate toward liphagal synthesis；Synthetic Communications；2010，41(2)，177-183页；Frederic Marion，David E.Williams,liphagal，a selective inhibitor of PI3 kinase-α isolated from the sponge Aka coralliphaga：Structure elucidationand biomimetic synthesis；Org.Lett.，2006，8(2)，321–324页；Goverdhan Mehta，Nachiket S.Likhite，C.S.Ananda Kumar A concise synthesis of the bioactivemeroterpenoid natural product(±)-liphagal，a potent PI3K inhibitor.，Tet.Lett，2009，vol.50，no.37，321-324页)对PI3K-α的效力是对PI3K-γ的～10倍。我们已经通过按照多样性定向合成方式对liphagal进行合理的修饰来合成这种分子的含硼类似物，以发现先导分子。

发明目的

本发明的主要目的是提供带有硼酸的liphagane化合物。

本发明的另一个目的提供了制备含硼酸官能团的liphagane化合物的方法。

本发明的又一个目的是通过本文提到的合成路线，提供步骤A6到A7和A7到A的制备方法。

本发明的再一个目的是评价所述基于硼酸的liphagal化合物作为抗癌剂的生物活性。

本发明的又一个目的是当研究酶特异性时按照α或β特异性鉴别这些化合物对于PI3K抑制的同工型选择性。

本发明的又一个目的是通过膜联蛋白-V或免疫荧光分析和通过细胞周期分析来研究所述带有liphagal硼酸的化合物的作用机制和生长抑制。

发明内容

因此，本发明提供了通式1的化合物，及其药学上可接受的盐，

其中，

a)′Y′＝O、S、NH或NR，其中R＝烷基部分、芳基部分、杂芳基部分、环脂族环或芳族体系；

b)其中n＝0或1；

c)其中R₁、R₂和R₃独立地选自H、OH、OR、COR、CHO、CO₂R、OCOR、NH₂、NHR、NR、NRR′、NO₂、F、Cl、Br、I、OSO₃H、SO₂R、CN、SiRR′R″、OCF₃、CF₃和R，

其中，R、R′、R″独立地选自烷基部分、芳基部分、杂芳基部分和环脂族环，

其中所述环脂族环选自环丙基、环丁基、环戊基和环己基环并且其中所述环脂族环在不同的位置具有不同的取代，

其中所述烷基部分选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基和异丁基，

并且其中芳基或杂芳基部分具有选自卤素、不同链长的烷基、硝基、氨基和磺酰基取代的取代；

d)其中R₄＝H或OR或SR或SO₂R或OSO₃R或SiRR′R″或NH₂或NHR或NRR′或烷基取代基或一至十碳链的、线性或分支的、饱和或不饱和的烷基，所述烷基任选被OH、H、＝O、＝S、OR、COR、CHO、CO₂R、OCOR、NH₂、NHR、NRR′、NO₂、F、Cl、Br、I、OSO₃H、SO₂R′、CN、SiRR′R″或R取代，

其中R、R′、R″独立地选自具有不同取代的烷基部分、芳基部分、杂芳基部分和环脂族环，所述取代具有不同取代和链长可变的可变链长环脂族环，

其中所述烷基部分选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基，

其中所述烷基取代基选自甲基、乙基、丙基和高级同系物，

其中所述高级同系物是线性、分支或脂环族取代基，

其中所述脂环族取代基选自环戊烷、环己烷、更高元环、稠环和芳基/杂芳基取代的烷基，

其中所述芳基/杂芳基取代的烷基是进一步选自肉桂基(cinnamul)、巴豆基和异戊二烯基取代基的苄型或不饱和烷基；

e)其中R₅、R₆和R₇独立地选自H、线性或分支的、在任何位置饱和或不饱和的一至十碳链、和烷基，其中所述烷基任选被OH、H、＝O、＝S、OR、COR、CHO、CO₂R、OCOR、NH₂、NHR′、NRR′、NO₂、F、Cl、Br、I、OSO₃H、SO₂R、CN、SiR′R′R″和R取代，

其中R、R′、R″独立地选自具有不同取代的烷基部分、芳基部分、杂芳基部分和环脂族环。

在本发明的另一种实施方式中，通式1的化合物由式A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T、U、V、W、X、Y、Z、AA、AB、AC、AD、AE、AF、AG、AH、AI、AJ、AK、AL、AM、AN、AO、AP、AQ、AR、AS、AT、AU、AV、AW、AX、AY和AZ的化合物表示，包括以下结构式：

在本发明的另一种实施方式中，所述化合物可用作癌症治疗中PI3K-α或β同工型的特异性抑制剂。

本发明的又一种实施方式提供了通式1的化合物及其药学上可接受的盐的制备方法

其中

a)′Y′＝O、S、NH或NR，其中R＝烷基部分、芳基部分、杂芳基部分环脂族环或芳族体系；

b)其中n＝0或1；

ci)其中R1、R2和R3独立地选自H、OH、OR、COR、CHO、CO2R、OCOR、NH2、NHR、NR、NRR′、NO2、F、Cl、Br、I、OSO3H、SO2R、CN、SiRR′R″、OCF3、CF3和R，

di)其中R₄＝H或OR或SR或SO₂R或OSO₃R或SiRR′R″或NH₂或NHR或NRR′或烷基取代基或一至十碳链的、线性或分支的、饱和或不饱和的烷基，所述烷基任选被OH、H、＝O、＝S、OR、COR、CHO、CO₂R、OCOR、NH₂、NHR、NRR′、NO₂、F、Cl、Br、I、OSO₃H、SO₂R′、CN、SiRR′R″或R取代，

其中所述烷基取代基选自甲基、乙基、丙基和高级同系物，

其中所述高级同系物是线性、分支或脂环族取代基，

其中所述芳基/杂芳基取代的烷基是进一步选自肉桂基、巴豆基和异戊二烯基取代基的苄型或不饱和烷基；

e)其中R5、R6和R7独立地选自H、线性或分支的、在任何位置饱和或不饱和的一至十碳链、和烷基，其中所述烷基任选被OH、H、＝O、＝S、OR、COR、CHO、CO₂R、OCOR、NH₂、NHR′、NRR′、NO₂、F、Cl、Br、I、OSO₃H、SO₂R、CN、SiR′R′R″和R取代，

其中所述方法包括以下步骤：

i)化合物9在醚溶剂中碱的存在下与正丁基锂或叔丁醇钾反应；

ii)向在步骤(i)中得到的上述混合物添加硼酸三乙酯或三甲酯并搅拌；

iii)用饱和氯化铵溶液淬灭步骤(ii)的反应，然后用与水不混溶的溶剂萃取以得到通式10的化合物

iv)化合物10与BI₃或DMS或AlCl₃/硫脲在醚溶剂中以摩尔计以1∶1至3∶4范围内的比例反应；

v)通过添加海波(hypo)溶液淬灭步骤(iv)的反应，然后用与水不混溶的溶剂萃取以得到通式1的化合物。

在本发明的又一种实施方式中，用于步骤(i)和(v)的所述醚溶剂选自四氢呋喃、二氯甲烷、二***、二异丙醚和异丙醚。

在本发明的又一种实施方式中，用于步骤(i)的所述碱选自四甲基乙二胺、三乙胺、三甲胺、和二异丙基乙胺。

在本发明的又一种实施方式中，步骤(i)中的反应在-78℃至35℃范围的温度下进行5至10min之间的时间。

在本发明的又一种实施方式中，步骤(ii)中的反应在0-5℃范围的温度下进行1至2h之间的时间。

在本发明的又一种实施方式中，步骤(iii)和(v)中的所述与水不混溶的溶剂选自乙酸乙酯、二氯甲烷、醚或氯仿。

在本发明的再一种实施方式中，步骤(iv)中的反应在-78℃至35℃之间的温度下进行1至3h之间的时间。

在本发明的再一种实施方式中，步骤(v)中得到的通式1的化合物转变成药学上可接受盐。

在本发明的再一种实施方式中，通式1的化合物通过下述方法转变成药学上可接受盐，所述方法包括以下步骤：将通式1的化合物与碱以比率1∶1的比例混合，其中所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾和氢氧化铵的水溶液，搅拌所述反应混合物1-2h，然后干燥以得到通式1的化合物的药学上可接受盐。

本发明的又一种实施方式提供了药物组合物，其包含有效量的式1化合物，任选与药学上可接受的载体、盐、赋形剂或稀释剂一起。

在本发明的再一种实施方式中，所述药学上可接受的载体选自水、缓冲盐水、二醇、甘油类、橄榄油和脂质体。

本发明的再一种实施方式提供了通过利用通式1的化合物进行特异性抑制人类癌细胞系中的PI3K-α或β同工型来治疗癌症的方法，

其中，

b)其中n＝0或1；

cii)其中R₁、R₂和R₃独立地选自H、OH、OR、COR、CHO、CO₂R、OCOR、NH₂、NHR、NR、NRR′、NO₂、F、Cl、Br、I、OSO₃H、SO₂R、CN、SiRR′R″、OCF₃、CF₃和R，

dii)其中R₄＝H或OR或SR或SO₂R或OSO₃R或SiRR′R″或NH₂或NHR或NRR′或烷基取代基或一至十碳链的、线性或分支的、饱和或不饱和的烷基，所述烷基任选被OH、H、＝O、＝S、OR、COR、CHO、CO₂R、OCOR、NH₂、NHR、NRR′、NO₂、F、Cl、Br、I、OSO₃H、SO₂R′、CN、SiRR′R″或R取代，

其中所述烷基取代基选自甲基、乙基、丙基和高级同系物，

其中所述高级同系物是线性、分支或脂环族取代基，

e)其中R₅、R₆和R₇独立地选自H、线性或分支的、在任何位置饱和或不饱和的一至十碳链、和烷基其中所述烷基任选被OH、H、＝O、＝S、OR、COR、CHO、CO₂R、OCOR、NH₂、NHR′、NRR′、NO₂、F、Cl、Br、I、OSO₃H、SO₂R、CN、SiR′R′R"和R取代，

其中所述方法包括：混合通式1的化合物和选自肺细胞系(A549)、白血病细胞系(THP1)、***(prostrate)细胞系(PC-3)和结肠细胞系(caco-2，colo205，HCT-115)的人类癌细胞系，和特异性抑制所述人类癌细胞系中的PI3K-α或β同工型。

在本发明的另一种实施方式中，通式1的化合物的剂量在20mg/kg至100mg/kg的范围内。

在本发明的另一种实施方式中，代表性的化合物A当用于对抗结肠和乳腺癌细胞系的体外活性时，GI50浓度在2.4μM-2.6μM范围内。

在本发明的另一种实施方式中，代表性化合物A在人类癌细胞系中在10μM浓度下表现出＞74％的最佳生长抑制。

在本发明的另一种实施方式中，代表性化合物E当用于对抗结肠癌细胞系的体外活性时，增加了sub-G1/G0群，并在结肠癌细胞系中显示出浓度依赖性的G1/G0群生长抑制和晚期凋亡。

附图和表格

图1：一些代表性的带有硼酸的liphagane化合物的基于体外细胞系的抗癌活性

图3、4和5：显示了化合物A、化合物E、liphagal和化合物AZ的结合研究

图1：显示了带有硼酸的liphagane骨架的通用结构

图2.化合物A与PI3K-α的催化结构域的结构结合(计算机模拟)研究的结果

图3.化合物E与PI3K-a的催化结构域的结构结合(计算机模拟)研究的结果

图6：显示了通式1的含硼酸化合物(化合物11)的合成的总体图式

图7：化合物A合成的典型图式

图8：化合物AZ合成的典型图式

图9：通过对caco-2细胞系的MTT检测，化合物A的IC₅₀结果

图10：通过酶水平测定，化合物A的IC₅₀结果(PI3K-α和β)

图11：通过酶水平测定，化合物A的IC₅₀结果(PI3K-α和β)。图显示了化合物AZ的PI3K-α同工型的IC₅₀值；表2：显示了化合物AZ的PI3K同工型的IC₅₀值

图12：化合物A的细胞周期分析

图13：显示了化合物E的浓度依赖性凋亡细胞群增加

图14：利用Phospho-Akt(Ser473)兔多克隆IgG(用德克萨斯红标记)对CACO-2细胞的免疫荧光显微分析。A-未处理的细胞，B和C-分别用4和3μM的liphagal和化合物E处理24hr的细胞，显示pAKT抑制。核用DAPI染成蓝色

缩写：

ACN：乙腈

Ac：乙酰基

CDCl₃：氘代氯仿

CHCl₃：氯仿

¹³CNMR：碳核磁共振

DCM或CH₂Cl₂：二氯甲烷

DIPEA：二异丙基乙胺

DMF：二甲基甲酰胺

DMSO：二甲亚砜

EtOAc：乙酸乙酯

h或hr：小时

¹HNMR：质子核磁共振

IC₅₀：50％抑制浓度

IR：红外线

J：耦合常数(Hz)

MeOH：甲醇

MHz：兆赫兹

mg：毫克

μg：微克

μL：微升

Mmol：毫摩尔

MTT：线粒体膜电位

m/z：质荷比

PI3-K：磷脂酰肌醇-3-激酶

TEA：三乙胺

TFA：三氟乙酸

THF：四氢呋喃

TLC：薄层色谱

TMA：三甲胺

TMEDA：四甲基乙二胺

具体实施方式

在本发明的实施方式中，式1表示在苯环的6位具有硼酸官能团的基于杂萜类liphagane骨架的不同化合物，其中R1至R3独立地选自H、OH、OR、COR、CHO、CO₂R、OCOR、NH₂、NHR、NRR′、NO₂、F、Cl、Br、I、OSO₃H、SO₂R、CN、SiRR′R″、OCF₃、CF₃和R。其中，R、R′、R″可以是具有不同取代的烷基、芳基、杂芳基或任何环脂族环。

在又一种实施方式中，′Y′是O、S、NH或NR，其中R-可以被烷基、芳基、杂芳基部分或任何环脂族或芳族体系取代。

在本发明的实施方式中，n和n1是选自0、1和2的碳链长度。

在另一种实施方式中，其中R₄是H或OR或SR或SO₂R或OSO₃R或SiRR′R″或NH₂或NHR或NRR′或一至十碳链的、线性或分支的、饱和或不饱和的烷基，所述烷基任选被OH、H、＝O、＝S、OR、COR、CHO、CO₂R、OCOR、NH₂、NHR、NRR′、NO₂、F、Cl、Br、I、OSO₃H、SO₂R′、CN、SiRR′R″和R取代。其中，R、R′、R″是具有可变链长取代的烷基、芳基、杂芳基或环脂族环。

在一种实施方式中，其中，取代基R₄还选自氢、烷基取代基，即甲基、乙基、丙基和线性或分支的高级同系物，包括脂环族例如环戊烷、环己烷或较高元环、稠环、芳基/杂芳基取代的烷基包括苄型或它的高级同系物，苄型或它的高级同系物可以包括不饱和烷基例如肉桂基、巴豆基和异戊二烯基取代基。

在本发明的又一种实施方式中，其中R₅、R₆和R₇是H或一至十碳链的、线性或分支的、在任何位置饱和或不饱和的烷基，所述烷基任选被OH、H、OH、＝O、＝S、OR、COR、CHO、CO₂R、OCOR、NH₂、NHR′、NR′、NR′R″、NO₂、F、Cl、Br、I、OSO₃H、SO₂R、CN、SiRR′R″和R取代。在此R、R′、R″可以是具有不同取代的烷基、芳基、杂芳基或任何环脂族环。

在本发明的实施方式中，R独立地选自H或一至十碳链的、线性或分支、饱和或不饱和的烷基，所述烷基任选被OH、H、OH、＝O、＝S、OR、COR、CHO、CO₂R、OCOR、NH₂、NHR、NRR′、NO₂、F、Cl、Br、I、OSO₃H、SO₂R、CN、SiRR′R″和R取代。在此R、R′、R″可以是具有不同取代的烷基、芳基、杂芳基或任何环脂族环。

其中，此外各位置的取代基R还选自氢、烷基取代基即甲基、乙基、丙基和线性或分支的高级同系物，包括脂环族的例如环戊烷、环己烷或较高元环、稠环、芳基/杂芳基取代的烷基包括苄型或它的高级同系物，所述苄型或它的高级同系物可以包括不饱和烷基例如肉桂基、巴豆基和异戊二烯基取代基。

在本发明的实施方式中，liphagal和其基于硼酸的化合物的计算机模拟生物信息研究使用常规方法，它如下面所述：所有的计算机研究在Schrodinger2010分子模型软件套中进行。所有分子的2D结构在maestro窗口中构建。所有分子然后利用Ligprep和Confgen模块转变成它们各自的3D结构，具有各种构象异构体、互变异构体和电离态。所述分子然后利用OPLS_2005力场最小化。在蛋白质数据库(PDB)中报告的PI3Kα的3D晶体结构用作对接研究(PDB ID：3HHM)的受体。所述蛋白质从PDB下载并准备利用蛋白质准备向导进行对接。向所述蛋白质加氢并构建缺失的环。还进行键长和键级校正来准备用于对接研究的蛋白质。利用受体网格生成(receptor grid generation)模块，基于已经共结晶的受体配位体产生活性位点网格。所述配位体利用滑动(Glide)模块通过该网格对接到所述受体上，并且对于所有构象异构体进行灵活的对接以找出这些配位体的结合模式。滑动模块超精确(XP)打分函数用于进行这些研究。

在本发明的又一种实施方式中，其中，在liphagal和它的基于硼酸的化合物的计算机模拟研究中得到的结果如下：基于对接研究，发现liphagal的硼酸类似物与PI3Kα的亲合力比liphagal更好。相互作用研究显示，硼酸(OH)与Val851和Gln859涉及强H键相互作用，而liphagal只与Gln859在一个位置涉及H键相互作用。此外，基于硼酸的化合物的对接分数为约-10，而liphagal的分数为约-8.5，这显示硼酸类似物对PI3Kα的亲合力更强。

实施例：

本发明通过参考下面的实施例进一步描述，所述实施例旨在说明而不应该解释为限制本发明的范围。

材料和方法：

化学品：

总述：溶剂根据标准程序纯化，使用的试剂是可得到的最高纯度。所有反应在火焰干燥的玻璃仪器中在氩/氮气氛下进行，除非另有说明。无水溶剂如CH₂Cl₂、Et₂O、THF、CH₃OH、CH₃CN、DMF、吡啶、Et₃N利用标准方法新鲜干燥。NMR测量(¹H和¹³C)在配备脉冲-场梯度探测器的400或500MHz分光计(Bruker)上记录，并且三甲基硅烷(TMS)或残余的氘化溶剂共振用作内标。化学位移以(δ)百万分率表示，耦合常数J以赫兹表示。质谱在ESI MS或MALDI-TOF/TOF MS/MS-MS分光光度计上在含0.01％TFA的乙腈：水中利用2，5-二羟基苯甲酸/α-氰基-4-羟基苯甲酸/芥子酸(Sigma-Aldrich)作为基质记录。旋光性在数字PerkinElmer-241旋光计上测量。分析型TLC在Merck60F₂₅₄板上进行，并且化合物通过用磷钼酸或含20％H₂SO₄的MeOH作为显影试剂喷洒和烘烤来显现。制备型TLC在购自Merck的预涂层硅胶60F₂₅₄板(20x20cm)上进行。硅胶柱层析用购自Merck的硅胶(100-200目)或快速硅胶(230-400目)进行。

实施例1：化合物A的合成：

步骤1至6(参考：Mehta，G.；Likhite，N.S.；Ananda Kumar，C.S.Tet.Lett.2009，50，5260)

化合物A的合成包括的步骤描述如下-

步骤1：合成2-羟基，4，5-二甲氧基苯甲醛(A1)：0℃下向3，4，5-三甲氧基苯甲醛(5g，25.5mmol)的CH₂Cl₂(125ml)溶液添加BBr₃(6.39g，25.5mmol)。通过TLC检查反应完成之后，所生成的深色混合物在0℃下搅拌10hr。然后添加H₂O(100mL)并将混合物搅拌10min，通过CH₂Cl₂萃取水相。有机相通过Na₂SO₄干燥，并在减压下蒸发。所生成的残余物通过硅胶(CH₂Cl₂)纯化，提供2-羟基4，5二甲氧基苯甲醛A1(4.3g)，收率为87％的分离的黄色固体：¹HNMR(500MHz，CDCl₃)δ11.33(s， 1H)，9.63(s，1H)，6.83(s，1H)，6.40(s，1H)，3.87(s，3H)，3.81(s，3H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：225.06；C₉H₁₀O₄的元素分析计算值；C：59.34，H：5.53，O：35.13；实测值C：59.14，H：5.13，O：34.90。

步骤2：合成1-(5，6二甲氧基苯并呋喃-2-基)乙酮(A2)：向2-羟基4，5-二甲氧基苯甲醛(2g，10.98mmol)的丁烷-2-酮(15ml)溶液添加K₂CO₃(6.07g，43.95mmol)，然后在0℃搅拌10min，添加溴丙酮(2.24g，16.47mmol)并在90℃回流4hr。反应完成之后，蒸馏掉丁烷-2-酮和添加水并通过乙酸乙酯萃取两次。EtOAc相通过Na₂SO₄干燥，残余物在硅胶(3：7EtOAc/己烷)上的色谱提供了收率为70％的所述酮A2，浅黄色固体： ¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ7.29(s，1H)，7.04(s，1H)，6.98(s，1H)，3.94(s，3H)，3.90(s，3H)，2.30(s，3H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：243.07；C₁₂H₁₂O₄的元素分析计算值；C：65.45，H：5.49。实测值C：65.20，H：5.25。

步骤3：合成1-(5，6-二甲氧基苯并呋喃-2-基)-5，9-二甲基癸-4，8-二烯-1-酮 (A3)：在0℃和氩气氛下向1-(5，6二甲氧基苯并呋喃-2-基)乙酮A2(1g，4.545mmol)的无水甲苯溶液添加tBuOK(0.51g，4.545mmol)，然后在相同的温度下搅拌15min，向该反应混合物逐滴添加香叶基溴。所生成的悬液在相同的温度下搅拌2hr。向所述反应混合物添加50ml水并且层分离。水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取液用盐水洗涤并通过Na₂SO₄干燥，减压下蒸发。残余物在硅胶(5％EtOAc/己烷)上的色谱提供了70％收率的酮A3(1.69g)，浅黄色液体：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ7.425(s，1H)，7.365(s，1H)，7.06(s，1H)，5.12-5.16(m，1H)，5.08-5.04(m，1H)，3.96(s，3H)，3.93(s，3H)，2.97-2.89(t，2H)，2.50-2.40(m，2H)，2.17-2.00(m，4H)，1.66(s，3H)，1.63(s，3H)，1.64(s，3H)，1.58(s，3H)，ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：379.2；C₂₂H₂₈O₄的元素分析计算值；C：74.13，H：7.92；实测值C：74.0，H：5.25。

步骤4：5，6-二甲氧基-2-((E)-6，10-二甲基十一-1，5，9-三烯-2-基)苯并呋喃 (A4)：三苯基磷碘甲烷(wittig盐，2.247g，5.6mmol)在保持在冰-盐混合物中的无水RBF中吸收，向其添加无水THF(6mL)，向所生成的混合物逐滴添加nBuLi(2.5mol，在己烷中，3.370，8.4mmol中)，直到反应混合物转变成黄色悬液。向所述反应混合物逐滴添加酮(1g，2.8mmol)的THF溶液。所生成的悬液搅拌2hr。反应完成之后，添加10％氯化铵溶液30ml并通过EtOAc萃取。残余物在硅胶(3％EtOAc/己烷)上的色谱提供了80％收率的化合物A4，无色液体：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.95(s，1H)，6.63(s，1H)，5.86(s，1H)，5.31-5.30(d，1H)，5.20-5.18(d，2H)，5.11-5.08(t，1H)，3.90(s，3H)，3.90(s，3H)，2.46-2.43(t，2H)，2.32-2.28(q，2H)，2.08-2.04(q，2H)，2.01-1.98(t，2H)，1.68(s，3H)，1.59(s，3H)，1.56(s，3H)，ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：377.22；C₂₃H₃₀O₃的元素分析计算值；C：77.93，H：8.53；实测值C：77.55，H：8.35。

步骤5：合成5，6-二甲氧基-2-((E)-1，6，10-三甲基十一-5，9-二烯-2-基)苯并呋喃(A5)：向化合物A4(0.7g，1.9mmol)的MeOH溶液添加10mol％Pd/C并将反应在40psi压力下振荡0.5hr。反应完成之后(通过TLC监测)，过滤反应混合物并完全蒸发甲醇。残余物在硅胶(3％EtOAc/己烷)上的色谱提供了90％收率的化合物A5，无色液体：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ7.04(s，1H)，6.98(s，1H)，6.294(s，1H)，5.15-5.12(m，4H)，3.940(s，6H)，2.94-2.91(m，1H)，2.10-1.98(m，4H)，1.87-1.82(m，2H)，1.74(s，3H)，1.634(s，3H)，1.59(s，3H)，1.34-1.32(d，3H)，ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：356.24；C₂₃H₃₂O₃的元素分析计算值；C：77.49，H：9.05；实测值C：77.49，H：9.05。

步骤6：合成化合物(A6)：在-85℃下向苯并呋喃A5(0.6g，1.6mmol)的2-硝基丙烷(25mL)溶液添加氯磺酸(0.977g，8.42mmol)。让所生成的混合物在-78℃搅拌30min。然后添加NaHCO₃的水溶液并用EtOAc萃取水相。EtOAc相通过Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下蒸发。残余物在硅胶(3％EtOAc/己烷)上的色谱提供了50％收率的化合物A6(0.3g)，具有消旋混合物的无色液体：¹H NMR(CDCl₃，500MHz)δ7.13(s，1H)，6.85(s，1H)，3.89(s，3H)，3.88(s，3H)，2.56(br d，J＝14.1Hz，1H)，2.15(m，1H)，1.82(m，1H)，1.71(qt，J＝13.7，3.5Hz，1H)，1.69(m，1H)，1.64-1.41(m，8H)，1.40(d，J＝7.2Hz，3H)，1.36(s，3H)，1.25(ddd，J＝13.3，13.3，3.5Hz，1H)，0.99(s，3H)，0.95(s，3H)。质量：ESI[M+Na]⁺：356.24；C₂₃H₃₂O₃的元素分析计算值；C：77.49，H：9.05；实测值C：77.49，H：9.05。

步骤7：合成化合物(A7)：为了本申请的目的，化合物A7已经可互换地称为化合物E。

在0℃下向苯并呋喃A6(0.1g，0.281mmol)的THF(1.5mL)溶液添加nBuLi(在己烷中2.5M)。在这个温度下搅拌20min之后，添加硼酸三乙酯。所述混合物在室温下搅拌1hr。添加NH₄Cl水溶液并用EtOAc萃取水相，通过Na₂SO₄干燥，并在减压下蒸发。残余物在硅胶(8％EtOAc/己烷)上的色谱提供了50％的化合物A7(0.05g)，白色固体消旋混合物： ¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，3.94(s，3H)，3.92(s，3H)，2.56-2.49(m，1H)，1.56-1.52(m，4H)，1.48(s，3H)，1.37(s，3H)，0.99(s，3H)，0.96(d，3H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：400.24；C₂₃H₃₃BO₅的元素分析计算值；C：69.01，H：8.31，B：2.70；实测值C：69.10，H：8.20，B：2.50。

步骤8：合成化合物A：在含有化合物7的DCM溶液的圆底烧瓶中，在-78℃下缓慢并逐滴添加BI₃的DCM溶液。该混合物在相同的温度下搅拌半小时，缓慢升高至室温。反应进程通过TLC监测。所述反应混合物利用硫代硫酸钾溶液中和并用DCM溶液萃取和分离有机层，通过硫酸钠干燥，真空浓缩。粗制品通过柱层析利用己烷/EtOAc作为洗脱液纯化。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，2.56-2.49(m，1H)，1.56-1.52(m，4H)，1.48(s，3H)，1.37(s，3H)，0.99(s，3H)，0.96(d，3H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：372.211；C₂₁H₂₉BO₅的元素分析计算值；C：67.75，H：7.85，B：2.90；实测值C：67.65，H：7.61，B：2.30。

式1中公开的所有化合物使用类似的方法制备，在R1、R2、R3和R4位含有不同的取代，如对于化合物A的制备所述。反应条件的详细情况在下面给出的表中描述-

化合物B：¹H NMR(500 MHz，CDCl₃)δ6.91(s，1H)，3.18(m，1H)，1.82(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(q，2H)，1.45(m，2H)，1.42(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(q，2H)，1.34(d，3H)，1.12(s，6H)，ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：531.186；C₂₃H₂₇BF₆O₇的元素分析计算值；C：54，35，H：5.31，B：2.10，F：22.44；实测值C：54.33，H：5.34，B：2.11，F：22.41。

化合物C：¹H NMR(500 MHz，CDCl₃)δ7.60(s，1H)，3.18(m，1H)，1.82(t，2H)，1.78(t，1H)，1.66(q，2H)，1.49(m，2H)1.44(s，3H)，1.48(t，2H)，1.36(m，2H)，1.34(d，3H)1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：499.215；C₂₃H₂₇BF₆O₃的元素分析计算值；C：58.01，H：5.31，F：23.97，B：2.27；实测值C：58.06，H：5.34，F：23.99，B：2.25。

化合物D：¹H NMR(500 MHz，CDCl₃)δ7.20(s，1H)，3.17(m，1H)，2.35(s，6H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.43(s，3H)，1.38(m，2H)1.34(d，3H)1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：391.215；C₂₃H₃₃BO₃的元素分析计算值；C：75.1，H：9.03，.B：2.94；实测值C：75.16，H：9.06，B：2.89。

化合物E：¹H NMR(500 MHz，CDCl₃)δ6.9(s，1H)，3.73(s，6H)，3.17(m，1H)，1.82(t，2H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.43(s，3H)，1.37(t，2H)，1.34(d，3H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：423.25；C₂₃H₃₃BO₅的元素分析计算值；C：69.01，H：8.32，B：2.74；实测值C：69.05，H：8.33，B：2.77。

化合物F：¹H NMR(500 MHz，CDCl₃)δ7.1(s，1H)，3.17(m，1H)，2.59(q，4H)，1.82(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.34(d，3H)，1.24(t，6H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：419.29；C₂₅H₃₇BO₃的元素分析计算值；C：75.75，H：9.42，B：2.65；实测值C：75.72，H：9.44， B：2.66。

化合物G：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.9(s，1H)，5.90(s，2H)，3.17(m，1H)，1.82(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.44(s，3H)，1.42(t，2H)，1.38(m，2H)，1.34(d，3H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：407.21；C₂₂H₂₉BO₅的元素分析计算值；C：68.76，H：7.63，B：2.85；实测值C：68.77，H：7.65，B：2.84。

化合物H：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.67(s，1H)，4.2(bs，2H).3.7(t，4H)，3.17(m，1H)2.9(t，4H)，1.86(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.46(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.34(d，3H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：463.28，C₂₅H₃₇BN2O₄的元素分析计算值；C：68.16，H：8.43，B：2.44，N：6.46；实测值C：68.16，H：8.44，B：2.41。

化合物I：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.4(s，1H)，4.15(bs，4H).3.17(m，1H)，1.82(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.46(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.34(d，3H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：463.28，C₂₁H₃₁BN2O₃的元素分析计算值；C：68.14，H：8.44，B：2.94，N：7.56；实测值C：68.14，H：8.42，N：7.55.

化合物J：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ7.8(s，1H)，8.01(bs，2H)，3.17(m，1H)，2.06(s，6H)，1.85(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.46(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.34(d，3H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：477.28，C₂₅H₃₅BN₂O₅的元素分析计算值；C：66.04，H：7.74，B：2.38，N：6.17；实测值C：66.02，H：7.74，B：2.36，N：6.16。

化合物K：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.4(s，1H)，4.02(bs，2H)，3.17(m，1H)，2.78(d，6H)，1.85(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.46(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.34(d，3H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺： 421.27，C₂₃H₃₅BN2O₃的元素分析计算值；C：69.50，H：8.83，B：2.75，N：7.05；实测值C：69.51，H：8.82，B：2.77，N：7.04。

化合物L：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ7.56(s，1H)，8.03(s，1H)，5.07(bs，1H)，3.17(m，1H)，1.85(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.46(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.34(d，3H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：403.23，C₂₂H₂₉BN₂O₃的元素分析计算值；C：69.47，H：7.66，B：2.83，N：7.35；实测值C：69.47，H：7.65，B：2.82，N：7.33。

化合物M：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.8(s，1H)，5.2(bs，2H)，3.17(m，1H)，1.85(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.46(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.34(d，3H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：553.16，C₂₁H₃₁BN₂O₉S₂的元素分析计算值；C：47.55，H：5.88，B：2.05，N：5.24，S：12.09；实测值C：47.54，H：5.89，B：2.04，N：5.24，S：12.08。

化合物N：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ7.3(s，1H)，3.17(m，1H)，1.85(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.46(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.34(d，3H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：555.12，C₂₁H₂₉BO₁₁S₂的元素分析计算值；C：47.45，H：5.46，B：2.05，S：12.09；实测值C：47.44，H：5.45，B：2.06，S：12.1。

化合物O：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.8(s，1H)，3.17(m，1H)，1.85(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.46(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.34(d，3H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：658.96，C₂₁H₂₇BCl₆O₅Si₂的元素分析计算值；C：39.45，H：4.25，B：1.66，Si：8.79，C1：33.29；实测值C：39.44，H：4.25，B：1.68，Si：8.78，Cl：33.30。

化合物P：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.9(s，1H)，5.89(m，2H)，5.24(m，2H)，5.23(m，2H)4.65(d，4H)，3.17(m，1H)，1.82(t，2H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.43(s，3H)，1.37(t，2H)，1.34(d，3H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：475.27；C₂₇H₃₇BO₅的元素分析计算值；C：71.69，H：8.29，B：2.34；实测值C：71.68，H：8.28，B：2.33。

化合物Q：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ8.2(s，1H)，3.18(m，1H)，1.82(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)1.44(s，3H)，1.48(t，2H)，1.36(m，2H)，1.34(d，3H)1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：453.19；C₂₁H₂₇BN₂O₇的元素分析计算值；C：58.69，H：6.31，N：6.55.B：2.57；实测值C：58.69，H：6.33，N：6.54，B：2.56。

化合物R：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ8.1(s，1H)，3.18(m，1H)，1.82(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)1.44(s，3H)，1.48(t，2H)，1.36(m，2H)，1.34(d，3H)1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：313.21；C₂₃H₂₇BN₂O₃的元素分析计算值；C：70.78H：6.92，N：7.18.B：2.77；实测值C：70.77，H：6.92，N：7.16，B：2.78。

化合物S：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ7.4(s，1H)，3.18(m，1H)，1.82(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)1.44(s，3H)，1.48(t，2H)，1.36(m，2H)，1.34(d，3H)1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：399.21；C₂₁H₂₇BF₂O₃的元素分析计算值；C：67.64H：7.23，F：10.12.B：2.83；实测值C：67.65，H：7.22，F：10.12，B：2.84。.

化合物T：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ7.2(s，1H)，3.18(m，1H)，1.82(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)1.44(s，3H)，1.48(t，2H)，1.36(m，2H)，1.34(d，3H)1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：431.143；C₂₁H₂₇BCl₂O₃的元素分析计算值；C：61.64H：6.56，Cl：17.33.B：2.65；实测值C：61.66， H：6.56，Cl：17.32，B：2.64。

化合物U：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.59(s，1H)，9.1(s，2H)，8.03(s，1H)，3.18(m，1H)，1.78(t，1H)，1.75(t，2H)，1.64(m，2H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.34(d，3H)1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：394.226；C₂₁H₃₀BNO₄的元素分析计算值；C：67.95，H：8.14，N：3.77，B：2.91；实测值C：67.98，H：8.15，N：3.76，B：2.91。

化合物V：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)6.89(s，1H)，9.1(s，2H)，8.03(s，1H)，2.94(m，1H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.34(d，3H)1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：401.188；C₂₁H₂₉BO₄S的元素分析计算值；C：64.95，H：7.65，S：8.24，B：2.73；实测值C：64.96，H：7.66，S：8.23，B：2.72。

化合物W：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.54(s，1H)，9.1(s，2H)，3.34(s，2H)，2.34(m，1H)，1.53(t，2H)，1.49(m，2H)，1.46(t，2H)，1.43(t，1H)1.41(m，2H)，1.38(m，2H)，1.26(s，3H)1.17(d，3H)1.12(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：393.236；C₂₂H₃₁BO₄的元素分析计算值；C：71.36，H：8.44，B：2.92；实测值C：71.36，H：8.43，B：2.93。

化合物X：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.59(s，1H)，9.1(s，2H)，3.62(s，3H)，2.95(m，1H)，1.78(t，1H)，1.75(t，2H)，1.64(m，2H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.34(d，3H)1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：408.242；C₂₂H₃₂BNO₄的元素分析计算值；C：68.59，H：8.34，N：3.65，B：2.81；实测值C：68.58，H：8.35，N：3.65，B：2.83。

化合物Y：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.7(s，1H)，3.73(s，6H).3.62(s，3H)，2.94(m，1H)，1.78(t，1H)，1.75(t，2H)， 1.64(m，2H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.34(d，3H)1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：436.27；C₂₄H₃₆BNO₄的元素分析计算值；C：69.73，H：8.76，N：3.38，B：2.64；实测值C：69.75，H：8.77，N：3.38，B：2.65。

化合物Z：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.9(s，1H)，2.98(m，1H)，2.21(m，1H)，1.82(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)，1.01(d，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：423.242；C₂₃H₃₃BO₅的元素分析计算值；C：69.24，H：8.31，B：2.70；实测值C：69.26，H：8.35，B：2.72。

化合物AA：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ7.3(s，1H)，3.18，(m，1H)，2.08(s，6H)，1.82(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.36(m，2H)，1.34(d，3H)1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：479.236；C₂₅H₃₃BO₇的元素分析计算值；C：65.76H：7.29，B：2.37；实测值C：65.77，H：7.30，B：2.38。

化合物AB：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ7.1(s，1H)，8.01(bs，2H)，10.1(bs，1H)，2.94(m，1H)，2.06(s，6H)，1.85(t，2H)，1.78(t，1H)，1.61(m，2H)，1.49(m，2H)，1.46(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.34(d，3H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：476.28；C₂₅H₃₆BN₃O₄的元素分析计算值；C：66.24，H：8.04，B：2.38，N：9.17；实测值C：66.25，H：8.02，B：2.39，N：9.16。

化合物AC：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.66(s，1H)，3.17(m，1H)，2.83(s，12H)，1.82(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.46(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.34(d，3H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：449.302；C₂₅H₃₉BN₂O₃的元素分析计算值；C：70.42，H：9.22，B：2.54，N：6.52；实测值C：70.43，H：9.21，B：2.55，N：6.53。

化合物AD：：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.85(s，1H)，9.1(s，2H)，2.75(t，3H)，1.83(t，2H)1.78(t，1H)，1.56(m，2H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：395.201；C₂₀H₂₅BO₆的元素分析计算值；C：64.55，H：6.83，B：2.91；实测值C：64.54，H：6.84，B：2.92.

化合物AE：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)，4.33(t，1H)，1.89(m，2H)1.83(t，2H)，1.78(t，1H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：465.51；C₂₁H₂₆BF₃O₆的元素分析计算值；C：57.05，H：5.91，B：2.39，F：12.89；实测值C：57.06，H：5.92，B：2.40，F：12.88。

化合物AF：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)，3.83(t，1H)，1.83(t，2H)，1.78(t，1H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：449.184；C₂₁H₂₆BF₃O₅的元素分析计算值；C：59.18，H：6.15，B：2.59，F：13.35；实测值C：59.16，H：6.16，B：2.58，F：13.35。

化合物AG：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)，4.13(m，1H)，2.61(bs，2H)，1.93(m，2H)，1.83(t，2H)，1.78(t，1H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：396.206；C₂₀H₂₈BNO₅的元素分析计算值；C：64.36H：7.56，B：2.9.N：3.75；实测值C：64.34，H：7.54，B：2.89，N：3.77。

化合物AH：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)，4.76(m，1H)，3.5(bs，1H)，1.87(m，2H)，1.83(t，2H)，1.78(t，1H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：397.20；C₂₀H₂₇BO₆的元素分析计算值；C：64.26H：7.26，B：2.89；实测值C：64.25，H：7.24，B：2.88。

化合物AI：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)，5.43(m，1H)，2.25(s，3H)，1.93(m，2H)，1.83(t，2H)，1.78(t，1H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：439.210；C₂₂H₂₉BO₇的元素分析计算值；C：63.26H：7.02，B：2.62；实测值C：63.26，H：7.04，B：2.63。

化合物AJ：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)，8.10(bs，1H)，5.13(m，1H)，2.15(s，3H)，1.97(m，2H)，1.83(t，2H)，1.78(t，1H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：438.214；C₂₂H₃₀BNO₆的元素分析计算值；C：63.64H：7.28，O：23.26，B：2.60，N：3.35；实测值C：63.65，H：7.30，N：3.34。

化合物AK：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)，4.13(m，1H)，3.05(m，1H)，2.45(d，3H)，1.83(m，2H)，1.82(t，2H)，1.78(t，1H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：410.21；C₂₁H₃₀BNO₅的元素分析计算值；C：65.15H：7.84，B：2.76，N：3.96；实测值C：65.14，H：7.85，B：2.76，N：3.95。

化合物AL：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)，4.13(m，1H)，3.05(m，1H)，2.25(d，6H)，1.82(t，2H)，1.80(m，2H)1.78(t，1H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：424.235；C₂₂H₃₂BNO₅的元素分析计算值；C：65.85H：8.05，B：2.68，N：3.49；实测值C：65.82，H：8.02，B：2.67，N：3.51。

化合物AM：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)，6.47(d，1H)，5.03(t，1H)，4.18(dd，1H)，4.04(dd，1H)，2.05(m，2H，1.83(t，2H)，1.78(t，1H)，1.49(m， 2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：423.26；C₂₂H₂₉BO₆的元素分析计算值；C：66.21H：7.35，B：2.69；实测值C：66.23，H：7.36，B：2.68。

化合物AN：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)，4.13(t，1H)，2.24(d，4H)，1.82(t，2H)，1.80(m，2H)1.78(t，1H)，1.50(m，6H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：464.235；C₂₅H₃₆BNO₅的元素分析计算值；C：68.05H：8.25，B：2.48，N：3.19；实测值C：68.10，H：8.22，B：2.47，N：3.21。

化合物AO：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)，4.13(t，1H)，3.65(t，4H)2.34(d，4H)，1.82(t，2H)，1.80(m，2H)1.78(t，1H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：466.35；C₂₄H₃₄BNO₆的元素分析计算值；C：65.08H：7.69，B：2.24，N：3.17；实测值C：65.09H：7.71，B：2.25，N：3.18。

化合物AP：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)，4.13(t，1H)，2.4(q，4H)，1.82(t，2H)，1.80(m，2H)1.78(t，1H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)，1.05(t，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：452.28；C₂₄H₃₆BNO₅的元素分析计算值；C：67.18H：8.49，B：2.51，N：3.28；实测值C：67.19，H：8.47，B：2.53，N：3.27。

化合物AQ：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.76(s，1H)，9.1(s，2H)3.89(t，1H)，2.08(m，2H)1.83(t，2H)，1.78(t，1H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：409.34；C₂₁H₂₇BO₆的元素分析计算值；C：65.37，H：7.08，B：2.91；实测值C：65.36，H：7.09，B：2.92。

化合物AR：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)2.93(m，1H)，1.83(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m， 2H)1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)，0.59(m，1H)，0.34(m，4H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：409.34；C₂₁H₂₇BO₆的元素分析计算值；C：65.37，H：7.08，B：2.91；实测值C；65.34，H：7.09，B：2.92。

化合物AS：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ7.3-7.5(m，5H)，6.83(s，1H)，6.59(d，1H)9.1(s，2H)2.8(m，1H)，1.83(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：484.23；C₂₇H₃₂BNO₅的元素分析计算值；C：70.81，H：6.72，B：2.31，N 3.04；实测值C：70.84，H：6.73，B：2.32，N：3.06。

化合物AT：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ7.05(dd，2H)，6.83(s，1H)，6.59(t，1H)，6.43(d，2H)9.1(s，2H)，3.48(t，2H)，3.28(m，1H)，1.83(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：486.253；C₂₇H₃₄BNO₅的元素分析计算值；C：70.01，H：7.43，B：2.32，N 3.04；实测值C：70.06，H：7.44，B：2.35，N：3.06。

化合物AU：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)，5.62(d，1H)，4.98(d，1H)，2.23(t，2H)，1.83(t，2H)，1.78(t，1H)，1.71(m，2H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.41(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：393.17；C₂₁H₂₇BO₅的元素分析计算值C：68.17，H：7.38，B：2.91；实测值C：68.16，H：7.35，B：2.94。

化合物AV：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)，10.05(bs，1H)，2.73(m，1H)，1.73(t，2H)，1.78(t，1H)，1.63(m，2H)1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)，0.59(m，1H)，0.34(m，4H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：420.24；C₂₃H₃₂BNO₄的元素分析计算值；C：69.57，H：8.18，B：2.71，N：3.56；实测值C：69.55，H：8.13，B：2.71，N：3.58。

化合物AW：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)，2.74(m，1H)，1.73(t，2H)，1.78(t，1H)，1.63(m，2H)1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)，0.59(m，1H)，0.34(m，4H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：437.02；C₂₃H₃₁BO₄S的元素分析计算值；C：66.57，H：7.58，B：2.61，S：7.78；实测值C：66.55，H：7.59，B：2.62，S：7.77。

化合物AX：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ6.83(s，1H)，9.1(s，2H)，10.1(bs，1H)，3.53(t，1H)，1.83(t，2H)，1.78(t，1H)，1.64(m，2H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：448.194；C₂₁H₂₇BF₃O₄N的元素分析计算值；C：59.38，H：6.45，B：2.59，F：13.40，N：3.29；实测值C：59.34，H：6.43，B：2.58，F：13.41，N：3.28。

化合物AY：¹H NMR(500MHz，CDCl₃)δ7.95(d，2H)，7.47(t，1H)，7.37(dd，2H)，6.83(s，1H)，9.1(bs，2H)，5.48(t，1H)，2.16(m，2H)，1.83(t，2H)，1.78(t，1H)，1.49(m，2H)，1.48(t，2H)，1.44(s，3H)，1.38(m，2H)，1.11(s，6H)ppm。质量：ESI[M+Na]⁺：501.218；C₂₇H₃₁BO₇的元素分析计算值；C：67.71，H：6.59，B：2.26；实测值C：67.74，H：6.58，B：2.26。

化合物AZ：步骤1至7参考：(Pereira A.R.；Strangman，W.K.；Marion，F.；Feldberg，L.；Roll，D.；Mallon，R.；Hollander，I.；Andersen，R.J.J.Med.Chem.2010，53，8523)

步骤1：合成化合物13(2-羟基-4，5-二甲氧基苯甲醛)：0℃下向3，4，5-三甲氧基苯甲醛(5g，25.510mmol)的CH₂Cl₂(125ml)溶液添加BBr₃(6.39g，25.510mmol)。所生成的深色混合物在室温搅拌9h。加入水(100mL)并搅拌所述混合物10min，通过CH₂Cl₂萃取水相。有机相通过Na₂SO₄干燥，并在减压下蒸发。所生成的残余物通过硅胶柱色谱利用纯二氯甲烷作为洗脱液纯化，提供分离的2-羟基-4，5-二甲氧基苯甲醛13(4.3g，87％)，为黄色固体分离。Mp105-107℃；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ11.40(br.s，1H)，9.70(s，1H)，6.91(s， 1H)，6.48(s，1H)，3.94(s，3H)，3.88(s，3H)ppm。¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)：194.0，159.3，157.3，142.9，113.3，112.9，100.1，56.4，56.3.HRMS(ESI)m/z：C₉H₁₀O₄+H⁺的[M+H]⁺计算值183.0657；实测值183.0653。

步骤2：合成化合物13(4，5-二甲氧基-2-(甲氧基甲氧基)苯甲醛)：

5(1g，5.49mmol)的无水CH₂Cl₂溶液在氮气下冷却到0℃，向它添加二异丙基乙胺(DIPEA)(1.77g，13.736mmol)和MOMCl(0.66g，8.241mmol)。反应混合物在室温下搅拌1h。反应完成之后，添加水，用二氯甲烷萃取。有机萃取液用盐水洗涤，通过无水Na₂SO₄干燥并在减压下蒸发，所生成的产物14(2.15g，98％)为无色液体，不用纯化就用于进一步的反应。¹HNMR(CDCl₃，400MHz)：δ10.34(s，1H)，7.30(s，1H)，6.77(s，1H)，5.26(s，2H)，3.95(s，3H)，3.88(s，3H)，3.54(s，3H)ppm。¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)：188.0，156.4，155.5，144.4，118.1，108.2，99.9，95.4，56.4，56.2，56.1.HRMS(ESI)m/z：C11H14O5+H⁺的[M+H]⁺计算值227.0919；实测值227.0897。

步骤3：合成化合物15(4，5-二甲氧基-2-(甲氧基甲氧基)苯基甲醇)：

化合物14(1g，4.423mmol)和氢氧化钠(0.177g，4.423mmol)的MeOH溶液放入圆底烧瓶，向它添加NaBH₄(0.25g，6.635mmol)。反应混合物在室温下搅拌半小时。反应混合物减压浓缩以除去MeOH，添加水并用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，通过无水Na₂SO₄干燥并减压蒸发，提供无色液体15(0.99g，98％)，所生成的产物不用纯化就用于进一步的反应。¹H NMR(200MHz，CDCl₃)：δ6.86(s，1H)，6.75(s，1H)，5.16(s，2H)，4.65-4.62(d，J＝5.29Hz，2H)，3.87(s，3H)，3.86(s，3H)，3.52(s，3H)ppm。¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)：149.15，149.0，144.1，122.1，112.56，101.3，96.0，60.7，56.3，56.1，55.9.HRMS(ESI)m/z：C11H16O5+Na⁺的[M+Na]⁺计算值251.0896；实测值251.0874。

步骤4：合成化合物16(2-羟基-4，5-二甲氧基苄基)三苯基鏻溴化氢盐)：取化合物15(1g，4.384mmol)在乙腈中的溶液，在室温下向其添加PPh₃HBr(1.8g，5.260mmol)并回流约2h。反应完成之后，减压除去反应溶剂并用醚洗涤，产生化合物16(1.69g，90％)，为白色无定形固体。Mp 240-242℃；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ8.62(br.s，1H，)，7.75-7.71(m，3H)，7.60-7.52(m，12H)，7.03(s，1H)，6.44-6.43(d，J＝12.8Hz，1H)，4.48-4.45(d，J＝12Hz，2H)，3.69(s，3H)，3.48(s，3H)ppm。¹³CNMR(CDCl₃，125MHz)：134.7，134.7，134.3，130.0，129.9，113.9，113.90，101.9，101.9，56.3，55.9，25.3，24.8.HRMS(ESI)m/z：calcdfor C27H26O3P的[M]⁺计算值429.1620(-HBr)；实测值429.1615(-HBr)。

步骤5：合成化合物18，起始材料3-(2，6，6-三甲基环己-1-烯基)丙酸：17g(425.001mmol)NaOH用磁性搅拌器在250ml锥形烧瓶中溶解于水，制成70ml溶液。所述碱溶液然后在冰浴中冷却并向所述溶液添加17g(106.25mmol)溴，搅拌1h之后，将含4.5g(23.19mmol)二氢-β-紫罗兰酮17的10ml二噁烷滴入所述溶液，在室温下继续搅拌4h。过量的次溴酸盐用10％亚硫酸氢钠中和并用二***萃取溶液以除去残留的杂质。在通常条件下用浓盐酸酸化所述碱性溶液并进行后处理，产生作为无色液体的18(4.1g，90.1％)。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ2.44-2.39(m，2H)，2.37-2.31(m，2H)，1.93-1.89(t，J＝8Hz，2H)，1.61(s，3H)，1.58-1.54(s，2H)，1.44-1.41(m，2H)，1.00(s，6H)。¹³CNMR(CDCl₃，100MHz)：180.3，135.4，128.5，39.7，34.9，34.7(多重融合峰)，28.4，23.5，19.6，19.4。HRMS(ESI)m/z：C12H20O2+H⁺的[M+H]⁺计算值197.1541；实测值197.1530。

步骤6：合成化合物19(5，6-二甲氧基-2-(2-(2，6，6-三甲基环己-1-烯基)乙基)苯并呋喃)：中间体16(2g，4.651mmol)与二氢-β-碘酸(ionic acid)18(0.91g，4.65mmol)一起在干燥条件下在圆底烧瓶中引入无水DCM中，并冷却到0℃。向其添加DCC(2.87g，13.953mmol)和DMAP(0.56g，4.651mmol)并在室温下搅拌18h。减压蒸发DCM，粗制的反应混合物溶解在THF中，向它添加三乙胺并回流3h。减压蒸发THF 并通过柱色谱5％乙酸乙酯：己烷纯化，提供作为无色油的19(1.42g，93％)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ6.93(s，1H)，6.85(s，1H)，6.20(d，J＝0.6Hz，1H)，3.81(d，6H)，2.70-2.66(m，2H)，2.34-2.30(m，2H)，1.87-1.85(t，J＝6.1Hz，2H)，1.58(s，3H)，1.54-1.44(m，2H)，1.51-1.49(m，2H)，0.96(s，6H)。¹³CNMR(CDCl₃，100MHz)：158.8，149.1，146.9，146.1，136.2，128.1，102.7，101.0，95.3，56.4，56.2，39.7(多重融合峰)，35.0，32.7，29.3，28.5，27.2，19.8，19.4(融合峰)。HRMS(ESI)m/z：C21H28O3+H⁺的[M+H]⁺计算值329.2117；实测值329.2099。

步骤7：合成化合物20：制备化合物19(1g，3.049mmol)在2-硝基丙烷中的溶液并冷却到-78℃，在惰性气氛下向它添加氯磺酸(1.06g，9.146mmol)。反应混合物搅拌30min。然后用NaHCO₃淬灭并通过乙酸乙酯萃取。有机层通过Na₂SO₄干燥并减压蒸发和通过柱色谱利用5％乙酸乙酯：己烷纯化，提供作为无色油的20(0.9g，90％收率)。¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ7.00(s，1H)，6.97(s，1H)，3.91(s，3H)，3.89(s，3H)，2.79-2.74(m，1H)，2.72-2.65(m，1H)，2.42(d，J＝13.0Hz，1H)，2.06-1.91(m，2H)，1.87-1.76(m，2H)，1.50-1.63(m，2H)，1.45-1.39(m，2H)，1.31(s，3H)，0.97(s，3H)，0.95(s，3H)。¹³CNMR(CDCl₃，125MHz)：151.2，149.2，146.4，145.4，124.3，118.8，102.4，95.5，56.6，56.2，52.6，41.8，37.6，35.9，33.5，33.1，24.9，21.8，21.3(融合峰)，18.8。HRMS(ESI)m/z：C21H28O3+H⁺的[M+H]⁺计算值329.2117；实测值329.2105，C21H28O3+Na⁺的[M+Na]⁺计算值351.1936；实测值351.1931。

步骤8：合成化合物21：制备化合物20(1g，3.048mmol)在无水THF中的溶液，并在干燥条件下冷却到0℃。向它添加n-BuLi(0.195g，3.048mmol)并且所述反应混合物保持搅拌20分钟，向它添加硼酸三乙酯(0.45g，3.048mmol)并在室温下继续再搅拌1h。用氯化铵溶液淬灭并通过乙酸乙酯萃取。减压浓缩并通过柱色谱利用6％乙酸乙酯：己烷纯化，提供作为无色液体的21(1.043g，92％)。¹H NMR(400MHz， CDCl₃)δ7.18(s，1H)，6.83(s，2H)，3.96(s，3H)，3.93(s，3H)，2.80-2.73(m，2H)，2.42(d，J＝12.0Hz，1H)，2.03(m，2H，融合信号)，1.89-1.76(m，2H)，1.73-1.66(m，2H)，1.45-1.40(m，2H)，1.32(s，3H)，0.99(s，3H)，0.96(s，3H)。¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)153.0，152.9，151.0，148.4，124.3，122.4，107.1，61.9，56.7，52.7，41.8，36.1，33.5，33.2(融合峰)，25.1，21.9，21.4，18.9，18.8。HRMS(ESI)m/z：C₂₁H₂₉BO₅+H⁺的[M+H]⁺计算值372.2217；实测值372.2231。

步骤9：合成化合物22：向(0.5g，4.301mmol)干燥氯化铝倒入5ml二氯甲烷，然后分小份添加(0.245g，3.225mmol)结晶硫脲并搅拌20分钟。反应混合物变成透明的油状溶液。然后用5分钟时间向其添加溶解在二氯甲烷中的化合物21(0.1g，0.268mmol)并在室温下搅拌2h。过量的AlCl₃通过用冰淬灭和通过二氯甲烷萃取而除去，然后通过柱色谱利用15％乙酸乙酯：己烷纯化，提供作为无色液体的22(0.077g，85％收率)。¹H NMR(500MHz，CDCl₃)：δ7.10(s，1H)，6.74(s，1H)，6.48(br.s，1H)，3.94(s，2H)，2.80-2.71(m，2H)，2.39(d，J＝10Hz，1H)，2.20-2.03(m，2H)，1.80-1.70(m，2H)，1.54-1.51(m，2H)，1.44-1.37(m，2H)，1.30(s，3H)，0.98(s，3H)，0.95(s，3H)。¹³C NMR(CDCl₃，125MHz)：153.4，151.1，147.9，142.9，124.3，118.1，114.1，105.1，52.6，41.8，37.7，36.0，33.5，29.5，25.0，21.9，21.4，18.9，18.8；HRMS(ESI)m/z：C₁₉H₂₅BO₅的[M⁺]计算值344.1795；实测值344.1761。

生物学：

1.细胞毒性检测

MTT检测(MTT检测(Legrier ME，Yang CP，Yan HG等Targeting proteintranslation in human non small lung cancer via combined MEK and mammaliantarget of rapamycin suppression.Cancer Res 67：11300-8(2007))可用于测量范围广泛的化合物对正常或癌细胞系体外生长的作用。所述分析设立在96-孔平底聚苯乙烯微量滴定板中。每孔在适当的生长培养基中悬浮3-5000个细胞，并且所述细胞添加到两个相同孔(三个相同是优选的)。优选所述细胞在添加药物或试验剂之前添加到所述板中要求数量的孔中。细胞添加到板中之后，将它放置在培养器上温育过夜，同时制备待测药剂。温育过夜之后，向每组的两个相同孔添加规定浓度的药物或试验化合物并在CO2培养器中温育48hr。这些化合物大多数溶解在二甲基亚砜(DMSO)中供最终添加。温育48hr之后，用等体积的组织培养基稀释MTT储液(2.5μg/ml)并用多通道移液管直接向每孔添加20μl的这种溶液。如同贴壁细胞方法那样，所述板返回所述培养器达至少4h的时间。温育4hr之后，所述板在环境温度下以1000g离心10min，然后倒转所述板并吸去多余的培养基。添加150μl工作DMSO以溶解所述MTT甲产物。使用在可见光谱内具有可调节波长的标准微型读板器。在570nm下得到的与特定浓度的试验试剂相对应的每三个相同的组的OD值转移到数据表程序中。

结果：在癌细胞系的板上利用化合物A和化合物E作为试验材料进行基于MTT的细胞毒性检测。为了测定化合物A和化合物E对细胞增殖的作用和相对IC₅₀值，用化合物A和化合物E以指定浓度(0.01，0.1，1，10μM)对MCF-7、caco-2和HCT-115处理48h。在本研究中，化合物A和化合物E产生浓度依赖性的细胞增殖抑制。从细胞增殖的基于MTT的抑制中，观察到化合物A的基于计算的细胞IC₅₀值在乳腺(MCF-7)和结肠(caco-2)细胞系中为2.6μM和2.4μM，并算得化合物E在结肠(caco-2，HCT-115)和乳腺(MCF-7)中为5.6、3.7和3.1μM。这些结果描述了化合物A和化合物E二者通过相对IC50值显示出抗结肠细胞增殖的更有效性，因此总体对于结肠癌更有效。

2.PI3K抑制检验：

PI3K抑制检验(PI3K检验(Emmanuelle M，Huang Y，Yan HG等.Targeting ProteinTranslation in Human Non-Small Cell Lung Cancer via Combined MEK andMammalian Target of Rapamycin Suppression.Cancer Res 67：(23).(2007))通过PI3激酶活性/抑制剂检测试剂盒进行，其中PI3激酶反应设置在用于抑制剂反应的谷胱甘肽涂层条/板中。激酶和抑制剂在添加PIP2底物之前预温育10分钟。每孔添加5μL的5X激酶反应缓冲液，然后再添加5μL/孔的PIP2底物。然后每孔添加蒸馏H₂O，使得补足最终容积25μL/孔。在室温进行1小时温育，然后用200μL的1XTBST/孔洗涤孔3次，然后用200μL的1XTBS/孔洗涤2次。然后每孔添加100μL的底物TMB，然后在黑暗中保持显色5-20分钟。然而，监测显现的蓝色以避免过度显色。每孔100μL终止溶液用于终止反应。记录450nm处的读数。

结果：药物的IC₅₀值度量化合物抑制生物学或生化学功能的有效性。药物分子可以根据IC₅₀值分类为低活性或高活性的。基于酶的IC₅₀值的确定有助于药物活性的早期分析和估算，以便缩减用于进一步试验性目的的候选药物。用于本研究的liphagal、化合物A和化合物E分别在变化的浓度下，即20、40、80、160、320和640nM，以剂量依赖性模式抑制PI3Kα酶活性。此外，观察到liphagal、化合物A和化合物E对PI3Kα的IC₅₀为108、140和102nM，还测得化合物A对PI3Kβ的IC₅₀为100nm(图4和5)。这种方式不仅将提高源特异性癌症药物发现过程，而且还将节省交付的时间和资源。

表2：显示化合物-AZ对PI3K同工型的IC₅₀值

3.细胞周期分析：

复制状态的细胞群分析(Cell cycle(Waxman DJ，Schwartz PS，Harnessingapoptosis for improved anti-cancer gene therapy，Cancer Res.63：8563-8572(2003))通过荧光标记悬液中细胞的核、然后分析所述群中每个细胞的荧光性质来完成。所述试验利用结肠人类癌细胞系caco-2进行。细胞以3x10⁵细胞/毫升/孔的浓度接种在6孔板中。板在 CO₂培养器中温育过夜。温育过夜之后，以预定浓度添加试样，空出阴性和阳性对照的孔并温育24hr。温育24hr之后，细胞被胰蛋白酶化并且利用微量移液器从每个孔吸取试样并分别转移到15ml离心管中。管以3000rpm离心5min。丢弃上清液并将沉淀团重悬浮在1ml过滤的PBS中并以2000rpm离心5min。5min之后，丢弃上清液并将沉淀团重悬浮在70％乙醇中。细胞在4℃固定至少1小时(细胞在PI染色和流式细胞分析之前可以在-20℃下储存在70％乙醇中)。细胞再次以2000rpm离心5分钟并通过以2000rpm离心5min在过滤的PBS中洗涤两次。丢弃上清液，管以倒转位置放在棉纸上，直至所有上清液通过所述纸排走。每个采集管在黑暗中添加1ml细胞周期试剂(CCR)。在流式细胞仪(BD Biosciences)上获取读数。

结果：细胞周期是细胞的生命周期。细胞周期的每个阶段，即G1(Gap1)、S、G2(Gap2)、和M(有丝***)具有在它们每个之中发生的独特事件。两种最流行的流式细胞应用是测量细胞的DNA含量和分析作为细胞存活的基本过程的细胞周期。在本研究中，利用结肠(caco-2)细胞系通过细胞周期阶段分布来评价化合物E对DNA含量的作用。除了测定相对细胞DNA含量之外，流式细胞术还能够鉴定细胞周期的各阶段期间的细胞分布。暴露于不同浓度的化合物E的细胞(2x10⁶/毫升/6孔板)用碘化丙啶(PI)染色以测定DNA荧光和细胞周期阶段分布。发现用1、5、7和9μM化合物E处理24h的sub-G0细胞百分比分别是62.5％、64.3％、65.6％和70.2％。在相似条件下，liphagal处理的培养物显示出在sub-G0阶段的细胞为64.9％。此外，细胞周期在G2/M阶段不受影响，表明化合物E处理不产生任何有丝***阻断或引起细胞周期延迟。总的说来，随着浓度增加的每次处理在24h处理之后都引起sub-G0增加。因此，显然化合物E以浓度依赖性方式引起早期细胞周期停滞(图6)。

4.膜联蛋白-V凋亡检测：

利用膜联蛋白-V流式细胞术分析细胞死亡状态(膜联蛋白-V凋亡检测(Annexin-Vapoptotic assay(Yunqing Li， FadilaGuessous，SherwinKwon，Manish Kumar.PTEN HasTumor-Promoting Properties in the Setting of Gain-of-Function p53Mutations，2008Cancer Res；68：(6)(2008))。所述试验利用caco-2结肠人类癌细胞系进行。细胞以2x10⁵细胞/毫升/孔的浓度接种在6孔板中。板在CO₂培养器中温育过夜。温育过夜之后，以预定浓度添加试样，空出孔用于阴性和阳性对照并温育48hr。温育48hr之后，细胞被胰蛋白酶化并分别转移到15ml离心管中。管以3000rpm离心5min。丢弃上清液并将沉淀团重悬浮在1ml过滤的PBS中并以2000rpm离心5min。5min之后，丢弃上清液并将沉淀团重悬浮在400ml的1X结合缓冲液中，制成细胞悬液。从该悬液转移出100μl细胞到离心管中，然后添加10μl碘化丙啶(PI)和5μl膜联蛋白-V抗体并在黑暗中温育30min。在黑暗中温育30min之后，通过流式细胞仪(BD Biosciences)分析凋亡。

结果：在本研究中，发现用1、5、7和9μM化合物E处理的晚期凋亡细胞的百分比分别是36.3％、34.8％、38.5％和56.8％。在相似条件下，liphagal处理的培养物显示出42.7％的细胞在晚期凋亡阶段并且相反发现在早期凋亡阶段的细胞群降低，在早期凋亡阶段的为21.9％、23.4％、21.4％和14.7％。此外，在坏死阶段的细胞群没有这么多，表明化合物E处理不产生任何早期凋亡和坏死。总的说来，晚期凋亡的细胞群存在浓度依赖性的净增加(图7)。

材料&方法：

对于免疫荧光显微分析而言，试验之前一天，在6-孔板中在18-mm盖玻片上接种4X10⁴ CACO-2细胞/毫升。细胞被血清饥饿过夜并分别用4和3μM的liphagal和化合物E处理24hr。处理之后，细胞在PBS中洗涤，然后在无水甲醇中在-20℃固定5min¹⁹。固定的细胞用含10％山羊血清的PBS在室温下封闭20min以消除第二抗体的非特异性结合。细胞用多克隆兔pAKT(丝氨酸473)第一抗体(在含0.5％BSA的PBS中1∶100；Santa Cruz Biotechnology)在保湿室中在25℃下温育1h，然后洗涤并用第二抗体温育。洗涤细胞并在25℃下用德克萨斯红结合的山羊抗兔抗体(在含0.5％BSA的PBS中1：500；Santa Cruz Biotechnology)温育45min。所述盖玻片安装在具有含4，6-二脒基-2-苯基吲哚的ProLong Gold抗褪色封固剂(Invitrogen)的载玻片上，并通过荧光显微镜(Olympus，IX81)在Olympus 60x油浸物镜下显现。也使用阴性对照，其中省略用第一抗体温育细胞。

结果：Akt的磷酸化(活化)与防止细胞凋亡有关²⁰(K.Nicholson，N.Anderson.2002.The protein kinase B/Akt signaling pathway in humanmalignancy.Cell signal 14：381-395)。在本研究中，观察到分别用4和3μM的liphagal和化合物E对CACO-2处理24hr引起pAkt(Ser 473)的抑制。Akt的抑制因此导致凋亡。未处理的细胞显示出细胞质中的pAKT(图8)。

本发明的优点

引入硼酸官能团的优点：关于IC50为66nM并对PI3K-α具有选择性的liphagal的合成类似物的新近报告(Alban R.Pereira，Wendy K.Strangman，Synthesis of phosnhatidyl inositol 3-kinase(PI3K)inhibitory analogues of the sponge meroterpenoid Liphagal；J.Med.Chem.，2010，53(24)，8523-8533页)提示，该类似物具有更高的化学结构稳定性并提供了将这种骨架发展成先导临床前候选物的机会。作为我们正在进行的开发同工型选择性PI3K抑制剂计划的一部分，我们想到利用由这种分子展现的生物学活性证据，来制备基于这种修饰结构的化合物，将是有意思的。在这个方向上，我们开始我们的工作，并计划用硼酸代替醛官能团。此外，为了达到纳摩尔效力，需要在liphagal的芳环中的14-甲酰基-15，16-二羟基取代型式。还证明了没有C-14甲酰基似乎使liphagane杂环体系不稳定，使得它更容易受到空气氧化和骨架重排，包括B环收缩。这种证据提示让收缩的B环成为六元的C-8去甲基类似物必须最终负责活性，这支持了我们的设想。因此，代替C-14处的甲酰基，我们设计了在这个位置没有甲酰基官能团但具有硼酸的收缩B环类似物，假定该类似物将为所述结构提供更多的刚性。此外，利用硼酸代替醛可以避免缔合缺点。此外，硼具有生物模拟碳的能力并与活性位点的丝氨酸或组氨酸残基形成共价加合物((a)Adams，J.A.；Behnke，M.；Chen，S.；Cruichshank，A.A.；Dick，L.R.；Grenier，L.；Klunder，J.M.；Ma，Y.T.；Plamondon，L.；Stein，R.L.Bioorg.Med.Chem.Lett.1998，98，333.(b)Paramore，A.；Frantz，S.Nat.Rev.Drug Discovery2003，2，611)。

鉴于硼的作用，带有硼酸的liphagal化合物的重要性显现为潜在的PI3K抑制剂。在这种带有硼酸的liphagal化合物PI3K的计算机模拟对接中从计算机得到的证据显示了与关键氨基酸出色的H键相互作用，所述关键氨基酸在前面还报告为在PI3K-α的p110α活性位点中参与抑制相互作用并将对接分数-8.08提高到超过1和2.12的关键氨基酸。还检查了硼酸作为PI3K抑制剂的生物学潜力，显示了化合物之一、即化合物-AZ的PI3K-α同工型选择性和出色的抑制活性(IC₅₀ 23nM)。

Claims

1.通式1的化合物，及其药学上可接受的盐，

其中，

a)Y＝O、S或NR，其中R＝甲基；

b)其中n＝0或1；

c)其中R₁选自H、CH₃、CF₃、F、Cl；R₂和R₃独立地选自OH、OR、NRR'、F、Cl、CF₃和R，

其中，R和R'独立地选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基和异丁基；

d)其中R₄＝H或CH₃；

e)其中R₅是CH₃；和

f)其中R₆和R₇独立地是甲基。

2.权利要求1所述的化合物，其中通式1的化合物由式A、C、D、E、F、S、T、V、X和Y的化合物表示：

3.通式1的化合物及其药学上可接受的盐的制备方法

其中

a)Y＝O、S或NR，其中R＝甲基；

b)其中n＝0或1；

d)其中R₄＝H或CH₃；

e)其中R₅是CH₃；和

f)其中R₆和R₇独立地是甲基；

其中所述方法包括以下步骤：

i)化合物9在醚溶剂中在碱的存在下与正丁基锂或叔丁醇钾反应；

其中

a)Y＝O、S或NR，其中R＝甲基；

b)其中n＝0或1；

c)其中R₁选自H、CH₃、CF₃、F、Cl；R₂和R₃独立地是OR，其中R选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基和异丁基；

d)其中R₄＝H；和

e)其中R₅是CH₃；

ii)向在步骤(i)中得到的上述混合物添加硼酸三乙酯或硼酸三甲酯并搅拌；

其中

a)Y＝O、S或NR，其中R＝甲基；

b)其中n＝0或1；

d)其中R₄＝H；和

e)其中R₅是CH₃；

iv)化合物10与BI₃或DMS或AlCl₃/硫脲在醚溶剂中以摩尔计1:1至3:4范围内的比例反应；

v)通过添加硫代硫酸钾淬灭步骤(iv)的反应，然后用与水不混溶的溶剂萃取以得到通式1的化合物。

4.权利要求3所述的方法，其中用于步骤(i)和(iv)的所述醚溶剂选自四氢呋喃、二***、二异丙醚和异丙醚。

5.权利要求3所述的方法，其中步骤(i)的所述碱选自四甲基乙二胺、三乙胺、三甲胺、和二异丙基乙胺。

6.权利要求3所述的方法，其中步骤(i)中的反应在-78℃至35℃范围的温度下进行5至10min之间的时间。

7.权利要求3所述的方法，其中步骤(ii)中的反应在0-5℃范围的温度下进行1至2h之间的时间。

8.权利要求3所述的方法，其中步骤(iii)和(v)中的所述与水不混溶的溶剂选自乙酸乙酯、二氯甲烷、醚或氯仿。

9.权利要求3所述的方法，其中步骤(iv)中的反应在-78℃至35℃之间的温度下进行1至3h之间的时间。

10.权利要求3所述的方法，其中将步骤(v)中得到的通式1的化合物转变成药学上可接受的盐。

11.权利要求10所述的方法，其中通式1的化合物通过下述方法转变成药学上可接受盐，所述方法包括以下步骤：通式1的化合物与碱以比率1:1的比例混合，其中所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾和氢氧化铵的水溶液，搅拌所述反应混合物1-2h，然后干燥以得到通式1的化合物的药学上可接受的盐。

12.药物组合物，其包含式1的化合物，任选与药学上可接受的载体、盐、赋形剂或稀释剂一起，

其中

a)Y＝O、S或NR，其中R＝甲基；

b)其中n＝0或1；

其中，R和R'独立地选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基和异丁基d)其中R₄＝H或CH₃；

e)其中R₅是CH₃；和

f)其中R₆和R₇独立地是甲基。

13.权利要求12所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的载体选自水、缓冲盐水、二醇、甘油类、橄榄油和脂质体。

14.通式1的化合物在制备用于通过特异性抑制人类癌细胞系中的PI3K-α或β同工型来治疗癌症的药物中的用途，

其中，

a)Y＝O、S或NR，其中R＝甲基；

b)其中n＝0或1；

d)其中R₄＝H或CH₃；

e)其中R₅是CH₃；和

f)其中R₆和R₇独立地是甲基；

其中所述人类癌细胞系选自肺细胞系、白血病细胞系、***细胞系和结肠细胞系。

15.权利要求14所述的用途，其中所述肺细胞系是A549，所述白血病细胞系是THP1，所述***细胞系是PC-3，以及所述结肠细胞系选自caco-2、colo205和HCT-115。

16.权利要求14或15所述的用途，其中通式1的化合物的剂量在20mg/kg至100mg/kg的范围内。

17.权利要求14或15所述的用途，其中式A的代表性化合物

当用于抗结肠和乳腺癌细胞系的体外活性时，GI50浓度在2.4μM–2.6μM范围内。

18.权利要求14或15所述的用途，其中式A的代表性化合物

在人类癌细胞系中在10μM浓度下表现出>74％的最佳生长抑制。

19.权利要求14或15所述的用途，其中式E的代表性化合物

当用于抗结肠癌细胞系的体外活性时，增加了sub-G1/G0群，并在结肠癌细胞系中显示出浓度依赖性的G1/G0群生长抑制和晚期凋亡。