CN104390834A - 树脂切片的番红与甲基紫混合染色法及其染色液 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种树脂切片的番红与甲基紫混合染色法及其染色液,包括以下步骤:(1)染色液配制:配制质量浓度为0.5%的番红溶液和质量浓度为1%的甲基紫溶液;(2)将上述质量浓度为0.5%的番红溶液与质量浓度为1%的甲基紫溶液分别按多种体积比混合后对树脂半薄切片进行染色,在光镜下观察显微结构。本发明的方法针对甲苯胺蓝-O染色缺点,可以满足不同的组织染色要求,且具有成本低、易保存的优点。
Description
技术领域
本发明属于生物科学与农业科学技术领域,是一种树脂半薄切片的染色方法及其染色液。
背景技术
树脂半薄切片是一种应用非常广泛的形态学研究技术,在植物学、动物学及医学领域的相关研究中更是显得尤为重要。一种好的染色方法,就会起到画龙点睛的作用,将树脂半薄切片技术的优势与特点更加完美的体现出来。甲苯胺蓝-O是一种常用的树脂半薄切片染色剂,它可以将胚乳细胞中的多种结构(如细胞壁、质膜、细胞核、蛋白体和淀粉体等)都同时显现出来。但是,甲苯胺蓝-O具有以下多种缺点:(1)价格昂贵;(2)储存要求高,固体药品也要密闭低温保存;(3)配制过程时,要加碳酸钠等弱碱试剂作为辅助;(4)溶液易沉淀变性;(5)染色时间与温度都需要较为精确的控制,否则会皱片或裂片;(6)因为易受空气中CO2的影响,对染色时间与温度要求高,所以很难保证同一种组织不同发育天数的切片染色效果一致,最终使得多图拼合图版的外观效果不好;(7)对树脂切片的干燥程度要求高,如果树脂切片受潮,那么此染色剂对切片的染色效果就会大打折扣;(8)染色较为单一,有些组织成分区别不太明显。以上这些甲苯胺蓝-O的染色缺点是我们实验室经过多年经验总结出来的。
发明内容
针对上述现有技术中甲苯胺蓝-O染色缺点,本发明的目的是提供了一种树脂切片的番红与甲基紫混合染色法,以满足不同的组织染色要求。
为实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
一种树脂切片的番红与甲基紫混合染色法,包括以下步骤:
(1)染色液配制:配制质量浓度为0.5%的番红溶液和质量浓度为1%的甲基紫溶液;
(2)将上述质量浓度为0.5%的番红溶液与质量浓度为1%的甲基紫溶液分别按多种体积比混合后对树脂半薄切片进行染色,在光镜下观察显微结构。
步骤(2)中,将质量浓度为0.5%的番红与质量浓度为1%的甲基紫分别按1:1,1:2,2:1的体积比混合后对树脂半薄切片进行染色。
步骤(1)中,质量浓度为0.5%的番红溶液的配制方法是:用电子天平称取0.5g番红,放入烧杯中;加入100mL 75%的酒精溶解;溶解后过滤,将除去杂质的滤液倒入普通试剂瓶中备用。
步骤(1)中,质量浓度为1%的甲基紫溶液的配制方法是:用电子天平称取1g甲基紫,放入烧杯中;加入100ml蒸馏水溶解;溶解后过滤,将除去杂质的滤液倒入普通试剂瓶中备用。
本发明的另一个目的是提供一种树脂切片的番红与甲基紫混合染液,其技术方案是:
一种树脂切片的番红与甲基紫混合染液,包括质量浓度为0.5%的番红溶液和质量浓度为1%的甲基紫溶液。
本发明的有益效果是:
本发明与常用的甲苯胺蓝-O染色方法相比,具有以下优点:
(1)无论国产还是进口,与甲苯胺蓝-O相比,番红与甲基紫要便宜的多,而且国产的番红与甲基紫染色效果也不错;
(2)储存要求不高,可在室温下常规保存,保存多年后任然染色效果依然良好,无需像甲苯胺蓝-O那样非常严格的密封;
(3)配制过程简便易行,不需要其它辅助试剂;
(4)溶液不易变性,普通试剂瓶内室温保存即可;
(5)染色时不易产生沉淀,没有严格的温度与时间控制;
(6)同一种组织不同发育天数的切片染色效果可以基本保持一致,大大提高了图的外观效果;
(7)对树脂切片的干燥程度要求不高,甲苯胺蓝-O无法染好的一些受潮样品切片,利用此种方法也可以染好;
(8)可以更加明显地体现出细胞的不同结构与成分。
附图说明
图1是玉米(A,B),高粱(C,D)和小麦(E,F)颖果的树脂半薄切片,以0.5%番红与1%甲基紫的混合染液染色的效果图;
图2是水稻胚乳组织的树脂半薄切片,以0.5%甲苯胺蓝-O染色的效果图;
图3是高粱胚乳组织的树脂半薄切片,以1%甲基紫单染的效果图;
图4是小麦颖果母体组织的树脂半薄切片的效果图;
图5是不同发育天数的玉米胚乳传递细胞的树脂半薄切片,以0.5%甲苯胺蓝-O染色的效果图;
图6是甲苯胺蓝-O染色失败的例子的效果图。
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
以下以玉米、小麦、高粱胚乳为材料展示本染色方法的具体操作过程:
(1)树脂样品制作与半薄切片
将颖果纵切或横切,取所要观察的部位,先用2.5%戊二醛前固定3小时,然后以pH7.2的0.1mol/L的磷酸缓冲液清洗3次,再用0.5%锇酸后固定3小时。以pH7.2的0.1mol/L的磷酸缓冲液清洗后,乙醇系列脱水,环氧丙烷置换,用低粘性的Spurr树脂浸透与包埋,最终制成样品。用Leica超薄切片机将样品切成1μm半薄切片。
(2)染色剂配制
0.5%番红溶液:用电子天平称取0.5g番红,放入烧杯中;加入100ml 75%的酒精溶解;溶解后过滤,将除去杂质的滤液倒入普通试剂瓶中备用。
1%甲基紫溶液:用电子天平称取1g甲基紫,放入烧杯中;加入100ml蒸馏水溶解;溶解后过滤,将除去杂质的滤液倒入普通试剂瓶中备用。
(3)染色
按照不同组织的染色需求,可以将0.5%番红与1%甲基紫分别按1:1,1:2,2:1等几种体积比混合,然后对树脂半薄切片进行染色。至于通常的染色需求,1:1的0.5%番红与1%甲基紫即可。
染色效果如附图所示,图1是玉米(A,B),高粱(C,D)和小麦(E,F)颖果的树脂半薄切片,以0.5%番红与1%甲基紫的混合染液染色,此图未经任何处理。图2是水稻胚乳组织的树脂半薄切片,以0.5%甲苯胺蓝-O染色,图内各图片虽然经过Photoshop软件特殊处理(科研要求,仅限于亮度/对比度、色彩平衡、色相/饱和度调节等不改变图片内容的处理,决不允许图章工具、橡皮擦及涂抹与锐化工具等的使用),但还是无法掩饰一些不好的染色效果。例如A,B染色过深,C,F染色过浅;图整体颜色单一,不如图1美观。图3是高粱胚乳组织的树脂半薄切片,以1%甲基紫单染。因为采用快染、快拍的省时方法,图片本身的清晰度要比图版1差一些,但是从染色后图版的整体美观程度而言,仍然要比图版2的好一些。图4是小麦颖果母体组织的树脂半薄切片;A,B以0.5%番红与1%甲基紫的混合液(1:1)染色,细胞核染色有点深,但细胞质与液泡明显;C,D以0.5%番红与1%甲基紫的混合液(2:1)染色,细胞核染色适当,但细胞质与液泡不太明显;也就是说,体积比1:1的0.5%番红与1%甲基紫混合染液的染色效果还是相对好一些,能兼顾到更多的细胞结构。图5是不同发育天数的玉米胚乳传递细胞的树脂半薄切片,以0.5%甲苯胺蓝-O染色;图未经任何处理,图版中各图片颜色差异太大,使得图整体不美观。图6是甲苯胺蓝-O染色失败的例子;A中存在一些杂质,是因为染液变质产生沉淀;B中箭头所指是水渍,具体原因可能与烤片时间不足有关;C中产生的小裂纹和D中细胞间的染色反常(如箭头所示),都是因为烤片时间过久导致的;因此,甲苯胺蓝-O染色法对染色的时间与温度要求都很严格,而本发明的番红与甲基紫混合染色法对时间与温度就没这么敏感。
Claims (5)
1.一种树脂切片的番红与甲基紫混合染色法,其特征在于:包括以下步骤:
(1)染色液配制:配制质量浓度为0.5%的番红溶液和质量浓度为1%的甲基紫溶液;
(2)将上述质量浓度为0.5%的番红溶液与质量浓度为1%的甲基紫溶液分别按多种体积比混合后对树脂半薄切片进行染色,在光镜下观察显微结构。
2.如权利要求1所述的树脂切片的番红与甲基紫混合染色法,其特征在于:步骤(2)中,将质量浓度为0.5%的番红与质量浓度为1%的甲基紫分别按1:1,1:2,2:1的体积比混合后对树脂半薄切片进行染色。
3.如权利要求1所述的树脂切片的番红与甲基紫混合染色法,其特征在于:步骤(1)中,质量浓度为0.5%的番红溶液的配制方法是:用电子天平称取0.5g番红,放入烧杯中;加入100mL 75%的酒精溶解;溶解后过滤,将除去杂质的滤液倒入普通试剂瓶中备用。
4.如权利要求1所述的树脂切片的番红与甲基紫混合染色法,其特征在于:步骤(1)中,质量浓度为1%的甲基紫溶液的配制方法是:用电子天平称取1g甲基紫,放入烧杯中;加入100ml蒸馏水溶解;溶解后过滤,将除去杂质的滤液倒入普通试剂瓶中备用。
5.一种树脂切片的番红与甲基紫混合染液,其特征在于:包括质量浓度为0.5%的番红溶液和质量浓度为1%的甲基紫溶液。
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