CN104370896A - 一种纯化假单孢菌素的方法 - Google Patents

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张宇
张大兵
刘根水
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    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D407/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00
    • C07D407/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings
    • C07D407/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms

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Abstract

本发明公开一种假单孢菌素的纯化方法，采用假单孢菌素发酵液为原料，优化条件得到合适的柱分离条件，进一步放大到动态轴向压缩工业制备色谱***上分离，得到高纯度的假单孢菌素。本发明的优点是，提取后粗品直接使用动态轴向压缩工业制备色谱分离即可达到较好的分离提纯效果，操作简单，周期短，效率高，纯度可达98.5%以上。

Description

一种纯化假单孢菌素的方法
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种假单孢菌素的纯化方法。
技术背景
假单孢菌素，药物名莫匹罗星，是氨酰-tRNA合成酶(AaRS)的抑制剂，适应于革兰氏阳性球菌引起的皮肤软组织的感染，如脓疱疮、疖、毛囊炎等原发性感染以及湿疹、皮炎、溃疡、外伤等皮肤病的继发感染。传统色谱法纯化假单孢菌素产品，工艺技术耗时长，同时纯度不高，本发明针对这些问题采用高压制备色谱法，达到了满意的分离效果，因此此方法可成为天然产物、合成医药研究的有效手段。
发明内容
本发明的目的在于针对目前在纯化假单孢菌素的过程中所存在的时间长以及纯度不高的问题，提供一种采用制备液相色谱***纯化高纯度假单孢菌素的新方法，该方法包括以下步骤：
a.将假单孢菌素粗品溶于水后进行过滤，一般将假单孢菌素粗品配制成饱和溶液，具体实施时，可根据实际溶解效果进行调整；
b.取配制好的假单孢菌素溶液，用填充好固定相填料的动态轴向压缩柱进行分离，收集假单孢菌素对应谱带的馏分；
c.将步骤b中收集的对应谱带洗脱液中的溶剂蒸干，即可得到色谱纯为98%的假单孢菌素单体。
本发明的有益效果是可直接采用发酵后的假单孢菌素粗品来制备，不需要大量的前处理过程，简单、易控制，工艺技术简化，适用于大规模制备。高效液相色谱测定中，纯度高于98%，完全可用于药物的开发。
具体实施方式
实施例1
1.取1g假单孢菌素发酵液处理后粗品溶于水，配制成饱和溶液，置于过滤装置中，过滤除去固体颗粒；
2.将假单孢菌素溶液泵入动态轴向压缩柱制备色谱***，柱填充尺寸为Φ50×250mm，填料为十八烷基硅胶，粒径为10~30um，上样量1g。流动相的体积比为30:70，当假单孢菌素洗脱完毕后，流动相切换成高比例乙腈，将后端杂质冲出，一个分离周期结束。采用的紫外可见光度检测器的检测波长为240nm，收集保留时间在35~49min的馏分，经HPLC分析纯度≥98.8%。
实施例2
1.取1.5g假单孢菌素发酵液处理后粗品溶于水，配制成饱和溶液，置于过滤装置中，过滤除去固体颗粒；
2.将假单孢菌素溶液泵入动态轴向压缩柱制备色谱***，柱填充尺寸为Φ50×250mm，填料为十八烷基硅胶，粒径为10~15um，上样量1.5g。流动相的体积比为26:74，当假单孢菌素洗脱完毕后，流动相切换成高比例乙腈，将后端杂质冲出，一个分离周期结束。采用的紫外可见光度检测器的检测波长为240nm，收集保留时间在31~47min的馏分，经HPLC分析纯度≥98.5%。
实施例3
1.取3g假单孢菌素发酵液处理后粗品溶于水，配制成饱和溶液，置于过滤装置中，过滤除去固体颗粒；
2.将假单孢菌素溶液泵入动态轴向压缩柱制备色谱***，柱填充尺寸为Φ150×250mm，填料为十八烷基硅胶，粒径为10um，上样量1g。流动相的体积比为22:78，当假单孢菌素洗脱完毕后，流动相切换成高比例乙腈，将后端杂质冲出，一个分离周期结束。采用的紫外可见光度检测器的检测波长为240nm，收集保留时间在42~53min的馏分，经HPLC分析纯度≥98.1%。

Claims (4)

1.一种假单孢菌素的纯化方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）将假单孢菌素发酵液前处理，浓缩，干燥作为分离粗品；
（2）将粗品溶解后通过进样泵或者进样阀注入制备色谱***；
（3）采用乙腈/缓冲液做流动相，洗脱得到假单孢菌素单体。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：所述的假单孢菌素粗品为发酵所得。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征是：所述色谱***采用动态轴向压缩柱，且所填充固定相为十八烷基硅胶填料。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征是：流动相中乙腈与缓冲液的体积比（V/V）范围为20:80~35:65。
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