CN104356099B - 高丝氨酸内酯类化合物、其制备方法及其应用 - Google Patents

高丝氨酸内酯类化合物、其制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了高丝氨酸内酯类化合物、其制备方法及其应用，涉及N-酰基高丝氨酸内酯及N-乙酰基高丝氨酸内酯两个系列化合物及其制备方法，属药物化学领域，具体涉及一类具有以下化学结构通式的新型高丝氨酸内酯类化合物：

Description

高丝氨酸内酯类化合物、其制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及药物化合物领域，具体涉及新型高丝氨酸内酯类化合物、其制备方法及其应用。
背景技术
传统的抗生素都是以干扰细菌细胞壁的合成、叶酸的合成、蛋白质的产生、DNA的合成等重要的生命过程为靶点，通过直接杀死或抑制微生物的生长来实现抗感染的目的。在这种生存压力的选择下，细菌容易突变，会产生对抗生素的耐药性。然而，基于细菌群体感应***发展的抑菌剂不会干扰细菌的正常生理活动，只是通过阻断其有害基因的表达而抑制细菌的群体感应，从而使其失去致病能力，因此被视为抗菌药物发展的新方向。
酰基高丝氨酸内酯(AHL)类化合物是基于细菌群体感应***发展的抑菌剂，目前，对于酰基高丝氨酸内酯(AHL)类化合物的活性研究方法还没有标准化，加强活性评价的标准化有助于对该类化合物的构效关系有更深入的了解。从分子水平研究该类化合物与受体间的作用方式可以更加清晰地了解群体感应调节机制，有利于进一步设计出活性更好的非天然AHL类似物。尽管对于此类化合物的合成与结构修饰已有相关文献报道，但由于其合成路线复杂或所需的手性原料不易得到等缺点限制了其进一步的深入研究。因此，新的合成方法和结构修饰以及从分子水平研究群体感应调节机制将成为今后研究的热点，群体感应信号通路将成为一个有效的药物作用靶点。
总之，群体感应抑制剂的研究具有很大的潜在价值，以细菌群体感应为靶点而开发的抗菌剂为人们提供了一个潜在的、不断发展的、更为广阔的用药空间，更有益于人们的健康。
发明内容
本发明目的在于提供新型高丝氨酸内酯类群体感应抑制剂、其制备方法，为目前临床上群体感应抑制剂的筛选提供可能。
本发明提供的高丝氨酸内酯类化合物的结构通式如下所示：
R为–H；-Cl；-Br；-Ph；-3,5-dichloriol；-2-F,4-Br；-3,4-dichlorilo；-3-OCH3；-2-Cl；-4-F；-2-Br；-4-isopropyl；-4-tertiarybutyl。
优选如下化合物：
I型：(S,E)-2-((4-(3-(4-氯苯基)丙烯酰基)苯基)胺)-N-(2-羰基四氢呋喃-3-基)乙酰胺
(S,E)-2-((4-肉桂酰苯基)氨基)-N-(2-羰基四氢呋喃-3-基)乙酰胺
(S,E)-2-((4-(3-(4-溴苯肼)丙烯酰基)苯基)氨基)-N-(2-羰基四氢呋喃-3-基)乙酰胺
(S,E)-2-((4-(3-([1,1'-联苯]-4-基)丙酰基)苯基)氨基)-N-(2-羰基四氢呋喃-3-基)乙酰胺
(S,E)-2-((4-(3-(3,5-二氯苯基)丙烯酰基)苯基)氨基)-N-(2-羰基四氢呋喃-3-基)乙酰胺
(S,E)-2-((4-(3-(4-溴-2-氟苯基)丙烯酰基)苯基)氨基)-N-(2-羰基四氢呋喃-3-基)乙酰胺
(S,E)-2-((4-(3-(3,4-二氯苯基丙烯酰基)苯基)氨基)-N-(2-羰基四氢呋喃-3-基)乙酰胺
(S,E)-2-((4-(3-(3-甲氧基苯基)丙烯酰基)苯基)氨基)-N-(2-羰基四氢呋喃-3-基)乙酰胺
(S,E)-2-((4-(3-(2-氯苯基)丙烯酰基)苯基)氨基)-N-(2-羰基四氢呋喃-3-基)乙酰胺
(S,E)-2-((4-(3-(4-氟苯基)丙烯酰基)苯基)氨基)-N-(2-羰基四氢呋喃-3-基)乙酰胺
(S,E)-2-((4-(3-(3-溴苯基)丙烯酰基)苯基)氨基)-N-(2-羰基四氢呋喃-3-基)乙酰胺
(S,E)-2-((4-(3-(4-异丙苯基)丙烯酰基)苯基)氨基)-N-(2-羰基四氢呋喃-3-基)乙酰胺
(S,E)-2-((4-(3-(4-(叔丁基)苯基)丙烯酰基)苯基)氨基)-N-(2-羰基四氢呋喃-3-基)乙酰胺
II型：(S,E)-N-(4-(3-(4-氯苯基)丙烯酰基苯基)-2-((2-羰基四氢呋喃-3-基)氨基)乙酰胺
(S,E)-N-(4-肉桂酰苯基)-2-((2-羰基四氢呋喃-3-基)氨基)乙酰胺
(S,E)-N-(4-(3-(4-溴苯基)丙烯酰基)苯基)-2-((2-羰基四氢呋喃-3-基)氨基)乙酰胺
(S,E)-N-(4-(3-([1,1'-联苯]-4-基)丙烯酰基)苯基)-2-((2-羰基四氢呋喃-3-基)氨基)乙酰胺
(S,E)-N-(4-(3-(3,5-二氯苯基)丙烯酰基)苯基)-2-((2-羰基四氢呋喃-3-基)氨基)乙酰胺
(S,E)-N-(4-(3-(4-溴-2-氟苯基)丙烯酰基)苯基)-2-((2-羰基四氢呋喃-3-基)氨基)乙酰胺
(S,E)-N-(4-(3-(3,4-二氯苯基)丙烯酰基)苯基)-2-((2-羰基四氢呋喃-3-基)氨基)乙酰胺
(S,E)-N-(4-(3-(3-甲氧基苯基)丙烯酰基)苯基)-2-((2-羰基四氢呋喃-3-基)氨基)乙酰胺
(S,E)-N-(4-(3-(2-氯苯基)丙烯酰基)苯基)-2-((2-羰基四氢呋喃-3-基)氨基)乙酰胺
(S,E)-N-(4-(3-(4-氟苯基)丙烯酰基)苯基)-2-((2-羰基四氢呋喃-3-基)氨基)乙酰胺
(S,E)-N-(4-(3-(3-溴苯基)丙烯酰基)苯基)-2-((2-羰基四氢呋喃-3-基)氨基)乙酰胺
(S,E)-N-(4-(3-(4-异丙苯基)丙烯酰基)苯基)-2-((2-羰基四氢呋喃-3-基)氨基)乙酰胺
(S,E)-N-(4-(3-(4-(叔丁基)苯基)丙烯酰基)苯基)-2-((2-羰基四氢呋喃-3-基)氨基)乙酰胺
本发明提供了上述化合物的制备方法，通过以下反应路线合成，通式I反应路线如下：
R为–H；-Cl；-Br；-Ph；-3,5-dichloriol；-2-F,4-Br；-3,4-dichlorilo；-3-OCH3；-2-Cl；-4-F；-2-Br；-4-isopropyl；-4-tertiarybutyl。
室温下，L-甲硫氨酸1与碘甲烷在甲醇的水溶液中反应，搅拌过夜，生成甲基化物2，继而在碳酸氢钠的水溶液中水解，控制体系的pH值在4-7，随后将体系转入油浴加热至回流反应，TLC跟踪至水解完全。将溶液蒸干经重结晶，得到固体化合物3。化合物3在盐酸水溶液中回流,TLC检测反应完全。将体系冷却至室温，经洗涤，减压蒸出溶剂后得粗品，粗品经重结晶，抽滤后真空干燥得到关键中间体——高丝氨酸内酯盐酸盐4。
高丝氨酸内酯盐酸盐4与氯乙酰氯在Schotten-Baumann反应条件下，即采用二氯甲烷：水作溶剂，碳酸氢钠作缚酸剂，低温下滴加氯乙酰氯，体系于室温下反应，TLC检测反应完全，分取二氯甲烷层，经干燥处理后减压蒸去溶剂，真空干燥，得到酰化产物5。
对氨基苯乙酮与一系列取代的苯甲醛采用乙醇作反应溶剂，在0℃低温条件下加入氢氧化钠固体，室温下搅拌反应过夜，发生Claisen-Schmidt反应，将反应液倒入冰水混合物中搅拌至析出固体，得到一系列的查尔酮类化合物7a-7m。
以非质子溶剂DMF作反应溶剂，加入碘化钾做催化剂，化合物5在60℃-70℃下活化，再分别加入7a-7m查尔酮化合物，随后升温至120℃-140℃反应，发生亲核取代反应。将反应液冷却至室温，经萃取，洗除去DMF，减压蒸除乙酸乙酯后，硅胶柱色谱分离，得到一系列目标化合物8a-8m。
通式II反应路线如下：
R为–H；-Cl；-Br；-Ph；-3,5-dichloriol；-2-F,4-Br；-3,4-dichlorilo；-3-OCH3；-2-Cl；-4-F；-2-Br；-4-isopropyl；-4-tertiarybutyl。
室温下，L-甲硫氨酸1与碘甲烷在甲醇的水溶液中反应，搅拌过夜，生成甲基化物2，继而在碳酸氢钠的水溶液中水解，控制体系的pH值在4-7，随后将体系转入油浴加热至回流反应，TLC跟踪至水解完全。将溶液蒸干，经重结晶，得到化合物3。化合物3在盐酸水溶液中回流,TLC检测反应完全。将体系冷却至室温，经洗涤，减压蒸出溶剂后得粗品，粗品经重结晶，抽滤后真空干燥，得到关键中间体——高丝氨酸内酯盐酸盐4。
对氨基苯乙酮与一系列取代的苯甲醛采用乙醇作反应溶剂，在0℃低温条件下加入氢氧化钠固体，室温下搅拌反应过夜，发生Claisen-Schmidt反应，将反应液倒入冰水混合物中搅拌至析出固体，得到一系列的查尔酮类化合物7a-7m。
以查尔酮系列化合物7a-7m为原料，丙酮为溶剂，碳酸钾作催化剂，低温下加入氯乙酰氯，回流搅拌反应后,将反应液倒入冰水混合物中搅拌至析出固体，抽滤、干燥处理后得α-氯代酰胺查尔酮衍生物9a-9m。
以高丝氨酸内酯盐酸盐(4)为原料，采用类似Williamson合成醚的方法，分别与不同的底物α-氯代酰胺查尔酮衍生物(9a-9m)反应，即以乙腈作溶剂，搅拌溶解后加入缚酸剂K2CO3，催化剂KI，油浴下加热至回流反应约。反应完毕后，抽滤除去K2CO3，减压蒸除乙腈后，硅胶柱色谱分离，得到N-乙酰基高丝氨酸内酯衍生物10a-10m。
本发明优点及创新点在于：1、高丝氨酸内酯母核和酰基侧链对该类化合物的活性至关重要，同时，芳香环的引入也能够改善该类化合物的群体感应抑制活性。因此，在保留了高丝氨酸内酯母核的前提下，试图在化合物的酰基侧链端引入具有大共轭基团的查尔酮类化合物，同时也因查尔酮本身是一个很好的活性基团，其具有广泛的抗菌、抗肿瘤等生物活性。2、路线制备方法简单易行，都能以L-甲硫氨酸为原料制备得关键中间体。且收率高，达70％以上。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步描述。
实施例1：
(S,E)-2-((4-(3-(4-氯苯基)丙烯酰基)苯基)胺)-N-(2-羰基四氢呋喃-3-基)乙酰胺
于200mL水和30mL甲醇的混合溶液中加入10.12g(67.7mmol)L-甲硫氨酸，混匀后，开始在密闭条件下缓慢滴加碘甲烷约5.1mL(1.2eq)，滴毕，室温下搅拌反应过夜，直至体系成澄清透明状。减压浓缩后，于体系中滴加NaHCO3水溶液(5.69g溶于80mL水)，滴毕，将体系转入油浴加热至回流反应约6小时，TLC检测反应完全后，减压蒸除溶剂，得到亮黄色的油状物，丙酮和乙醇(V:V＝1：9)重结晶得到大量白色固体。将白色固体溶于100mL盐酸(6mol·L-1)溶液中，加热回流约10h，体系呈酒红色，TLC检测反应完全。将体系冷却至室温，分别用***和二氯甲烷洗涤至水层近无色，减压蒸出溶剂后用乙醇和水重结晶，抽滤后真空干燥，得到白色固体高丝氨酸内酯盐酸盐6.89g，收率74％。
将1.40g(0.01mol)高丝氨酸内酯盐酸盐溶于15mL水和15mL二氯甲烷混合溶剂中，加2.52gNaHCO3(0.03mol)搅拌溶解至体系澄清。室温下缓慢滴加氯乙酰氯920μL(0.012mol)，反应约6h后，TLC检测反应完全，分取二氯甲烷层，无水硫酸钠干燥处理后减压蒸去溶剂，真空干燥，得到白色固体(S)-2-氯-N-(2-羰基四氢呋喃-3-基)乙酰胺1.3g，收率72％。
在100mL圆底烧瓶中加入0.27g(2mmol)对氨基苯乙酮，溶于25mL乙醇中，依次加入0.52g(2.02mmol)对氯苯甲醛和0.12g氢氧化钠，室温下搅拌过夜。次日，将反应液倒入冰水混合物中搅拌至析出大量黄色固体即(E)-1-(4-氨基苯基)-3-(4-氯苯基)丙-2-烯-1-酮0.38g，产率74％。
于25mL圆底烧瓶中加入96mg(0.54mmol)(S)-2-氯-N-(2-羰基四氢呋喃-3-基)乙酰胺和碘化钾270mg，加10mLDMF搅拌溶解，60℃油浴下反应2h。然后，于反应体系中加入139mg(0.54mmol)(E)-1-(4-氨基苯基)-3-(4-氯苯基)丙-2-烯-1-酮，加热至120℃反应约6h，将反应液冷却至室温，乙酸乙酯萃取，水洗除去DMF，减压蒸除乙酸乙酯后，硅胶柱色谱分离(洗脱剂：丙酮/石油醚＝2/3)，得到黄色固体即目标化合物157mg，产率73％。
实施例2：
(S,E)-N-(4-(3-(4-氯苯基)丙烯酰基苯基)-2-((2-羰基四氢呋喃-3-基)氨基)乙酰胺
于200mL水和30mL甲醇的混合溶液中加入10.12g(67.7mmol)L-甲硫氨酸，混匀后，开始在密闭条件下缓慢滴加碘甲烷约5.1mL(1.2eq)，滴毕，室温下搅拌反应过夜，直至体系成澄清透明状。减压浓缩后，于体系中滴加NaHCO3水溶液(5.69g溶于80mL水)，滴毕，将体系转入油浴加热至回流反应约6小时，TLC检测反应完全后，减压蒸除溶剂，得到亮黄色的油状物，丙酮和乙醇(V:V＝1：9)重结晶得到大量白色固体。将白色固体溶于100mL盐酸(6mol·L-1)溶液中，加热回流约10h，体系呈酒红色，TLC检测反应完全。将体系冷却至室温，分别用***和二氯甲烷洗涤至水层近无色，减压蒸出溶剂后用乙醇和水重结晶，抽滤后真空干燥，得到白色固体高丝氨酸内酯盐酸盐6.89g，收率74％。
在100mL圆底烧瓶中加入0.27g(2mmol)对氨基苯乙酮，溶于25mL乙醇中，依次加入0.52g(2.02mmol)对氯苯甲醛和0.12g氢氧化钠，室温下搅拌过夜。次日，将反应液倒入冰水混合物中搅拌至析出大量黄色固体即(E)-1-(4-氨基苯基-3-(4-氯苯基)丙-2-烯-1-酮0.38g，产率74％。
在50ml圆底烧瓶中加入0.51g(E)-1-(4-氨基苯基)-3-(4-氯苯基)丙-2-烯-1-酮，溶于25ml丙酮中，依次加入332mgK2CO3(1.2eq)和180μl氯乙酰氯(1.2eq)；r.t搅拌3h后,将反应液倒入冰水混合物中搅拌至析出大量固体，抽滤，水洗滤饼，真空干燥得0.53g(E)-2-氯-N-(4-(3-(4-氯苯基)丙烯酰基)苯基)乙酰胺固体，产率为70％。
于25mL圆底烧瓶中加入150mg(0.45mmol)(E)-2-氯-N-(4-(3-(4-氯苯基)丙烯酰基)苯基)乙酰胺和62mg(0.45mmol)高丝氨酸内酯盐酸盐，加10mL乙腈搅拌溶解，然后加入缚酸剂K2CO3187mg(1.35mmol)，催化剂KI15mg(0.09mmol)，油浴下加热至回流反应约6h。TLC跟踪反应完毕，抽滤除去K2CO3，减压蒸除乙腈后，硅胶柱色谱分离(洗脱剂：丙酮/石油醚＝1/2)，得到黄色固体，即目标化合物118mg，产率66％。
采用上述方法合成本发明化合物的化学结构和核磁数据如下：
化合物8a
1HNMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.61-8.59(d,J＝8.0Hz,1H,-CO-NH),8.02-8.00(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.96-7.89(t,3H,-CO-HC＝CH-andAr-H),7.64-7.61(d,J＝12.0Hz,1H,-CO-HC＝CH-),7.52-7.50(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.08-7.06(t,J＝4.0Hz,1H,Ar-NH),6.66-6.64(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),4.66-4.59(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),4.37-4.32(t,J＝8.0Hz,1H,-CH-NH),4.22-4.18(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),3.85-3.84(d,J＝4.0Hz,2H,-HN-CH 2-),2.41-2.35(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.24-2.14(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(DMSO,101MHz)δ186.42,175.64,170.15,153.30,140.72,134.95,134.55,131.36,130.76,129.34,126.49,123.53,112.01,65.75,48.39,46.33,28.52.
化合物8b
1HNMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.59-8.57(d,J＝8.0Hz,1H,-CO-NH),8.02-8.00(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.93-7.89(d,J＝16.0Hz,1H,-CO-HC＝CH-),7.87-7.85(m,2H,Ar-H),7.67-7.63(d,J＝16.0Hz,1H,-CO-HC＝CH-),7.47-7.43(m,3H,Ar-H),7.02(brs,1H,Ar-NH),6.67-6.65(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),4.66-4.59(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),4.35-4.33(t,J＝8.0Hz,1H,-CH-NH),4.22-4.19(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),3.85(s,2H,-HN-CH 2-),2.41-2.36(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.25-2.14(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(DMSO,101MHz)δ186.56,175.59,170.13,153.22,142.15,135.56,131.27,130.51,129.31,129.02,126.60,122.77,112.01,65.74,48.39,46.37,31.15,28.54.
化合物8c
1HNMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.61-8.59(d,J＝8.0Hz,1H,-CO-NH),8.02-8.00(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.98-7.94(d,J＝16.0Hz,1H,-CO-HC＝CH-),7.84-7.82(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.75-7.73(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.66-7.59(m,3H,Ar-Hand-CO-HC＝CH-),7.07(brs,1H,Ar-NH),6.66-6.64(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),6.60-6.58(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),4.64-4.57(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),4.36-4.32(t,J＝8.0Hz,1H,-CH-NH),4.22-4.18(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),3.85-3.80(m,2H,-HN-CH 2-),2.39-2.35(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.25-2.17(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(DMSO,101MHz)δ195.72,186.40,175.63,170.20,170.13,153.32,153.00,140.80,134.90,132.26,131.36,130.99,130.74,126.48,126.09,123.79,123.60,112.00,111.72,65.74,48.38,46.34,28.52,26.43.
化合物8d
1HNMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.60-8.58(d,J＝8.0Hz,1H,-CO-NH),8.04-8.02(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.98-7.95(t,3H,-CO-HC＝CH-andAr-H),7.77-7.74(m,4H,Ar-H),7.71-7.67(d,1H,J＝16.0Hz,-CO-HC＝CH-),7.52-7.48(t,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.42-7.40(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.06-7.03(t,1H,Ar-NH),6.67-6.65(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),4.67-4.60(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),4.37-4.33(t,J＝8.0Hz,1H,-CH-NH),4.25-4.19(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),3.86-3.85(d,J＝4.0Hz,2H,-HN-CH 2-),2.41-2.36(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.22-2.17(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(DMSO,101MHz)δ186.53,175.64,170.17,153.24,142.01,141.72,139.77,134.73,131.32,129.74,129.51,127.50,127.17,126.65,122.70,112.01,65.75,48.40,46.36,28.53.
化合物8e
1HNMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.60-8.58(d,J＝8.0Hz,1H,-CO-NH),8.09-8.02(m,5H,-CO-HC＝CH-andAr-H),7.93(s,1H,Ar-H),7.56-7.55(d,1H,Ar-H),7.60-7.56(d,J＝16.0Hz,1H,-CO-HC＝CH-),7.11-7.08(t,1H,Ar-NH),6.66-6.64(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),4.66-4.59(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),4.37-4.33(t,J＝8.0Hz,1H,-CH-NH),4.23-4.18(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),3.86-3.85(d,J＝4.0Hz,2H,-HN-CH 2-),2.42-2.35(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.24-2.14(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(DMSO,101MHz)δ186.17,175.60,170.09,153.47,139.41,139.06,135.03,131.56,129.33,127.45,126.34,125.81,112.01,65.74,48.40,46.32,28.54.
化合物8f
1HNMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.59-8.57(d,J＝8.0Hz,1H,-CO-NH),8.10-8.08(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),8.01-7.97(3H,CO-HC＝CH-andAr-H),7.70-7.66(2H,CO-HC＝CH-andAr-H),7.53-7.51(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.10-7.07(brs,1H,Ar-NH),6.67-6.65(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),4.66-4.59(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),4.37-4.32(t,J＝8.0Hz,1H,-CH-NH),4.25-4.19(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),3.86-3.85(d,J＝4.0Hz,2H,-HN-CH 2-),2.42-2.36(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.22-2.17(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(DMSO,101MHz)δ186.10,175.61,170.09,159.62,153.46,132.22,131.43,130.70,128.59,126.25,125.55,124.06,123.96,122.76,122.65,120.02,119.77,112.07,65.75,48.40,46.32,28.54,22.81.
化合物8g
1HNMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.59-8.57(d,J＝8.0Hz,1H,-CO-NH),8.26(s,1H,Ar-H),8.04-8.00(d,3H,CO-HC＝CH-andAr-H),7.86-7.84(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.71-6.99(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.62-7.58(d,J＝16.0Hz,1H,-CO-HC＝CH-),7.07(brs,1H,Ar-NH),6.66-6.64(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),4.66-4.59(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),4.37-4.33(t,J＝8.0Hz,1H,-CH-NH),4.25-4.18(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),3.86-3.85(d,J＝4.0Hz,2H,-HN-CH 2-),2.42-2.36(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.22-2.17(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(DMSO,101MHz)δ186.23,175.61,170.10,162.78,153.41,139.40,136.53,132.57,132.22,131.48,131.37,130.32,129.37,126.39,124.93,112.00,65.74,65.70,48.39,48.35,46.32,36.25,31.23,28.76,28.54,22.82.
化合物8h
1HNMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.59-8.57(d,J＝8.0Hz,1H,-CO-NH),8.03-8.01(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.93-7.89(d,J＝16.0Hz,1H,-CO-HC＝CH-),7.63-7.59(d,J＝16.0Hz,1H,-CO-HC＝CH-),7.45(s,1H,Ar-H),7.41-7.33(m,2H,Ar-H),7.01-6.99(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-NH),6.66-6.64(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),4.66-4.59(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),4.37-4.33(t,J＝8.0Hz,1H,-CH-NH),4.25-4.18(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),3.84(s,2H,-HN-CH 2-),3.83(s,3H,-OCH 3-),2.42-2.35(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.25-2.14(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(DMSO,101MHz)δ186.57,175.61,170.15,160.10,153.24,142.18,136.99,131.33,130.33,126.59,123.03,121.84,116.62,113.65,112.00,65.75,55.75,48.39,46.37,28.54.
化合物8i
1HNMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.60-8.58(d,J＝8.0Hz,1H,-CO-NH),8.21-8.19(d,1H,-CO-HC＝CH-),8.03-8.01(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.96(s,2H,Ar-H),7.56-7.55(d,1H,Ar-H),7.46-7.44(d,2H,-CO-HC＝CH-),7.09(brs,1H,Ar-NH),6.67-6.65(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),6.66-6.64(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),4.66-4.59(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),4.37-4.33(t,J＝8.0Hz,1H,-CH-NH),4.25-4.18(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),3.85(s,2H,-HN-CH 2-),2.42-2.35(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.25-2.14(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(DMSO,101MHz)δ186.23,175.62,170.09,153.45,136.83,134.52,133.18,131.48,130.42,128.88,128.10,126.29,125.58,112.05,65.75,48.40,46.32,31.17,28.54.
化合物8j
1HNMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.60-8.58(d,J＝8.0Hz,1H,-CO-NH),8.02-8.00(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.96-7.92(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.90-7.86(d,J＝16.0Hz,1H,-CO-HC＝CH-),7.66-7.62(d,J＝16.0Hz,1H,-CO-HC＝CH-),7.31-7.26(t,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.04(brs,1H,Ar-NH),6.66-6.64(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),4.66-4.59(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),4.37-4.32(t,J＝8.0Hz,1H,-CH-NH),4.25-4.18(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),3.85(s,2H,-HN-CH 2-),2.42-2.35(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.25-2.14(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(DMSO,101MHz)δ186.51,175.63,170.17,164.79,162.32,153.23,140.95,132.25,132.22,131.36,131.30,131.28,126.57,122.67,116.40,116.19,112.00,65.76,48.40,46.36,31.16,28.52.
化合物8k
1HNMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.60-8.58(d,J＝8.0Hz,1H,-CO-NH),8.20(s,1H,Ar-H),8.05-8.03(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),8.02-7.98(d,J＝16.0Hz,1H,-CO-HC＝CH-),7.84-7.82(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.62-7.58(m,2H,Ar-Hand-CO-HC＝CH-),7.42-7.38(t,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.09-7.07(t,J＝4.0Hz,1H,Ar-NH),6.66-6.64(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),4.66-4.59(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),4.37-4.33(t,J＝8.0Hz,1H,-CH-NH),4.23-4.18(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),3.86-3.84(d,J＝8.0Hz,2H,-HN-CH 2-),2.42-2.35(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.24-2.14(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(DMSO,101MHz)δ186.33,175.63,170.12,153.36,140.45,138.13,132.98,131.46,131.36,130.97,128.49,126.44,124.30,122.85,111.99,65.74,48.39,46.33,28.53.
化合物8l
1HNMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.59-8.57(d,J＝8.0Hz,1H,-CO-NH),8.01-7.99(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.87-7.83(d,J＝16.0Hz,1H,-CO-HC＝CH-),7.78-7.76(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.64-7.61(d,J＝16.0Hz,1H,-CO-HC＝CH-),7.33-7.31(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.02(s,1H,Ar-NH),6.67-6.65(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),4.67-4.60(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),4.37-4.33(t,J＝8.0Hz,1H,-CH-NH),4.25-4.19(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),3.85-3.84(d,J＝4.0Hz,2H,-HN-CH 2-),2.42-2.36(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.25-2.15(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),1.3(s,1H,-CH(CH3)2),1.23-1.21(d,J＝8.0Hz,6H,-CH(CH 3 ) 2)；13CNMR(DMSO,101MHz)δ186.61,175.62,170.18,153.16,151.26,142.23,133.27,131.22,129.16,127.30,126.71,121.81,112.01,65.74,48.39,46.39,33.86,31.40,31.15,28.54,24.12.
化合物8m
1HNMR(DMSO-d6,400MHz):δ8.59-8.57(d,J＝8.0Hz,1H,-CO-NH),8.01-7.99(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.87-7.83(d,J＝16.0Hz,1H,-CO-HC＝CH-),7.78-7.76(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.64-7.60(d,J＝16.0Hz,1H,-CO-HC＝CH-),7.47-7.45(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.33-7.31(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.04-7.01(t,J＝4.0Hz,1H,Ar-NH),6.67-6.64(d,J＝12.0Hz,2H,Ar-H),4.67-4.60(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),4.37-4.33(t,J＝8.0Hz,1H,-CH-NH),4.23-4.18(dd,J＝20.0Hz,J＝8.0Hz,1H,-O-CH2-),3.85-3.84(d,J＝4.0Hz,2H,-HN-CH 2-),2.42-2.35(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.25-2.14(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),1.30(s,4H,-C(CH 3 ) 3),1.23-1.21(d,J＝8.0Hz,5H,-C(CH 3 ) 3)；13CNMR(DMSO,101MHz)δ186.63,175.62,170.18,153.16,151.27,142.24,133.26,132.86,131.22,129.16,128.88,127.30,126.71,126.13,121.81,112.01,65.75,48.39,46.39,35.06,33.86,31.40,28.54,24.12.
化合物10a
1HNMR(DMSO-d6,400MHz):δ10.31(s,1H,Ar-NH),8.19-8.17(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),8.01-7.97(d,J＝16.0Hz,1H,-HC＝CH-),7.95-7.93(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.85-7.82(d,J＝12.0Hz,2H,Ar-H),7.74-7.70(d,J＝16.0Hz,1H,-HC＝CH-),7.54-7.52(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),4.37-4.32(td,1H,-O-CH2-),4.21-4.16(td,1H,-O-CH2-),3.71-3.66(t,1H,-CH-NH),3.53(s,2H,-HN-CH 2-),2.96(brs,1H,-NH-CH2),2.48-2.43(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.10-2.00(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(DMSO-d6,101MHz)δ187.88,177.97,171.08,143.67,142.36,135.43,134.23,132.73,130.97,130.45,129.40,123.71,119.00,66.04,56.98,50.94,29.97.
化合物10b
1HNMR(CDCl3,400MHz):δ9.54(s,1H,Ar-NH),8.05-8.03(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.83-7.77(m,3H,-HC＝CH-andAr-H),7.67-7.65(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.57-7.53(d,J＝16.0Hz,1H,-HC＝CH-),7.44-7.42(m,3H,Ar-H),4.47-4.42(td,1H,-O-CH2-),4.27-4.20(td,1H,-O-CH2-),3.68-3.58(m,3H,-CH-NHand-HN-CH 2-),2.66-2.59(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.38(brs,1H,-NH-CH2),2.18-2.13(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(CDCl3,101MHz)δ189.01,176.96,169.64,144.56,141.68,134.91,133.88,130.53,129.98,128.98,128.47,121.76,118.98,119.00,65.52,57.18,51.74,30.20.
化合物10c
1HNMR(CDCl3,400MHz):δ9.54(s,1H,Ar-NH),8.05-8.03(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.83-7.77(m,3H,-HC＝CH-andAr-H),7.67-7.65(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.57-7.53(d,J＝16.0Hz,1H,-HC＝CH-),7.44-7.42(m,3H,Ar-H),4.47-4.42(td,1H,-O-CH2-),4.27-4.20(td,1H,-O-CH2-),3.68-3.58(m,3H,-CH-NHand-HN-CH 2-),2.66-2.59(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.38(brs,1H,-NH-CH2),2.18-2.13(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(CDCl3,101MHz)δ189.01,176.96,169.64,144.56,141.68,134.91,133.88,130.53,129.98,128.98,128.47,121.76,118.98,119.00,65.52,57.18,51.74,30.20.
化合物10d
1HNMR(CDCl3,400MHz):δ9.53(s,1H,Ar-NH),8.09-8.07(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.90-7.78(d,J＝16.0Hz,1H,-HC＝CH),7.82-7.80(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.76-7.74(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.69-7.65(m,4H,Ar),7.62-7.58(d,J＝16.0Hz,1H,-HC＝CH),7.51-7.47(t,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.42-7.41(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),4.49-4.45(td,1H,-O-CH2-),4.29-4.22(td,1H,-O-CH2-),3.72-3.58(m,3H,-CH-NHand-HN-CH 2-),2.68-2.62(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.63(brs,1H,-NH-CH2),2.18-2.12(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(CDCl3,101MHz)δ188.01,172.16,143.53,143.35,142.43,139.71,134.42,132.96,130.26,129.99,129.51,129.36,129.31,128.46,127.54,127.21,127.02,126.88,122.39,119.40,62.49.
化合物10e
1HNMR(CDCl3,400MHz):δ9.57(s,1H,Ar-NH),8.20-8.16(d,J＝16.0Hz,1H,-HC＝CH-),8.04-8.02(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.80-7.78(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.52-7.48(d,J＝16.0Hz,1H,-HC＝CH-),7.46-7.43(m,1H,Ar-H),7.35-7.32(m,2H,Ar-H),4.47-4.43(td,1H,-O-CH2-),4.26-4.21(td,1H,-O-CH2-),3.70-3.49(3H,-CH-NHand-HN-CH 2-),2.67-2.20(brs,1H,-NH-CH2),2.19-2.18(m,2H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(CDCl3,101MHz)δ188.85,177.00,169.68,141.83,140.28,135.45,133.57,133.25,131.19,130.29,130.11,127.81,127.13,124.47,118.98,65.54,57.20,51.74,30.20.
化合物10f
1HNMR(CDCl3,400MHz):δ9.56(s,1H,Ar-NH),8.05-8.02(d,J＝12.0Hz,2H,Ar-H),7.84-7.78(3H,-HC＝CH-andAr-H),7.66-7.63(d,J＝12.0Hz,2H,-HC＝CH-),7.55-7.51(t,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.37-7.33(t,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),4.48-4.44(td,1H,-O-CH2-),4.28-4.22(td,1H,-O-CH2-),3.71-3.54(m,3H,-CH-NHand-HN-CH 2-),2.68-2.61(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.36(brs,1H,-NH-CH2),2.19-2.13(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(CDCl3,101MHz)δ188.57,176.92,169.59,162.55,159.98,141.87,135.98,133.51,130.61,130.58,130.07,128.05,128.01,124.69,124.61,124.49,122.27,122.15,120.14,119.89,118.99,65.50,57.23,51.78,30.23.
化合物10g
1HNMR(DMSO-d6,400MHz):δ10.42(s,1H,Ar-NH),8.29(1H,Ar-H),8.21-8.19(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),8.09-8.05(d,J＝16.0Hz,1H,-HC＝CH),7.89-7.84(3H,Ar-H),7.73-7.71(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),7.71-7.67(d,J＝16.0Hz,1H,-HC＝CH-),4.34-4.32(td,1H,-O-CH2-),4.21-4.14(td,1H,-O-CH2-),3.70-3.66(t,J＝8.0Hz,1H,-CH-NH),3.53(s,2H,-HN-CH 2-),2.96(brs,1H,-NH-CH2),2.48-2.45(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.10-2.02(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(CDCl3,101MHz)δ187.75,177.95,171.14,143.87,141.01,136.18,133.04,132.55,132.28,131.44,130.55,129.58,124.52,118.99,66.04,55.94,50.94,29.99.
化合物10h
1HNMR(CDCl3,400MHz):δ9.58(s,1H,Ar-NH),8.29(1H,Ar-H),8.02-8.00(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.78-7.73(3H,-HC＝CHandAr-H),7.53-7.49(d,J＝16.0Hz,1H,-HC＝CH),7.35-7.28(1H,Ar-H),7.24-7.22(d,J＝8.0Hz,1H,Ar-H)7.15(1H,Ar-H),6.97-6.94(dd,J＝8Hz,J＝4Hz,1H,Ar-H),4.43-4.39(td,1H,-O-CH2-),4.24-4.18(td,1H,-O-CH2-),3.85(s,3H,-OCH3),3.66-3.56(m,3H,-CH-NHand-HN-CH 2-),2.63-2.57(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.29(brs,1H,-NH-CH2),2.14-2.08(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(CDCl3,101MHz)δ189.00,177.12,169.81,159.92,144.45,141.79,136.26,133.75,129.96,122.03,121.10,118.99,116.29,113.45,65.58,57.11,55.37,51.65,30.14.
化合物10i
1HNMR(CDCl3,400MHz):δ9.58(s,1H,Ar-NH),8.05-8.03(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.81-7.78(d,J＝12.0Hz,2H,Ar-H),7.68-7.64(d,J＝12.0Hz,1H,-HC＝CH-),7.56-7.51(3H,-HC＝CH-andAr-H),7.39(1H,Ar-H),4.49-4.44(td,1H,-O-CH2-),4.28-4.22(td,1H,-O-CH2-),3.71-3.66(m,1H,-CH-NH)3.50(s,2H,-HN-CH 2-),2.68-2.61(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.34(brs,1H,-NH-CH2),2.17-2.14(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(CDCl3,101MHz)δ188.07,176.96,169.66,142.03,141.22,137.94,135.59,133.30,130.09,129.94,126.51,124.04,119.03,65.52,57.23,51.77,50.85,30.23
化合物10j
1HNMR(DMSO-d6,400MHz):δ10.34(s,1H,Ar-NH),8.18-8.16(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),8.00-7.96(dd,J＝8.0Hz,J＝4.0Hz,2H,Ar-H),7.95-7.91(d,J＝16.0Hz,1H,-HC＝CH-),7.85-7.83(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.75-7.71(d,J＝16.0Hz,1H,-HC＝CH-),7.33-7.29(t,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),4.34-4.32(td,1H,-O-CH2-),4.21-4.15(td,1H,-O-CH2-),3.71-3.64(m,1H,-CH-NH),3.53(s,2H,-HN-CH 2-),2.96(brs,1H,-NH-CH2),2.49-2.43(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.08-2.00(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(DMSO-d6,101MHz)δ187.91,177.96,171.09,165.05,162.58,143.64,142.60,132.80,131.97,131.93,131.67,131.59,130.40,122.34,118.99,116.49,116.28,66.04,55.96,50.94,29.98.
化合物10k
1HNMR(CDCl3,400MHz):δ9.54(s,1H,Ar-NH),8.06-8.03(dd,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.80-7.71(m,4H,-HC＝CH-andAr-H),7.57-7.52(m,3H,Ar-Hand-HC＝CH-),7.33-7.28(t,J＝8.0Hz,1H,Ar-H),4.48-4.44(td,1H,-O-CH2-),4.28-4.22(td,1H,-O-CH2-),3.71-3.55(m,3H,-CH-NHand-HN-CH 2-),2.68-2.61(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.36(brs,1H,-NH-CH2),2.22-2.14(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH)；13CNMR(CDCl3,101MHz)δ188.46,176.87,169.56,142.65,141.84,137.08,133.60,133.19,132.20,130.85,130.48,130.04,129.81,127.24,123.08,122.96,118.99,65.48,57.23,51.79,30.23.
化合物10l
1HNMR(CDCl3,400MHz):δ9.52(s,1H,Ar-NH),8.06-8.03(d,J＝12.0Hz,2H,Ar-H),7.83-7.77(m,3H,-HC＝CH-andAr-H),7.61-7.59(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.54-7.50(d,J＝16.0Hz,1H,-HC＝CH-),7.31-7.29(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),4.47-4.43(td,1H,-O-CH2-),4.25-4.21(td,1H,-O-CH2-),3.70-3.58(m,3H,-CH-NHand-HN-CH 2-),2.99-2.93(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.66-2.60(m,1H,-CH(CH3)2),2.37(brs,1H,-NH-CH2),2.22-2.07(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),1.30-1.28(d,J＝8.0Hz,6H,-CH(CH 3)2)；13CNMR(CDCl3,101MHz)δ189.13,176.90,169.56,151.96,144.68,141.54,134.07,132.57,129.94,128.62,127.11,120.86,118.95,65.50,57.20,51.76,34.14,30.22,23.79.
化合物10m
1HNMR(CDCl3,400MHz):δ9.56(s,1H,Ar-NH),8.04-8.02(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.82-7.77(m,3H,-HC＝CH-andAr-H),7.61-7.59(d,J＝8.0Hz,2H,Ar-H),7.54-7.50(d,J＝16.0Hz,1H,-HC＝CH-),7.46-7.44(m,2H,Ar-H),4.45-4.41(td,1H,-O-CH2-),4.23-4.19(td,1H,-O-CH2-),3.69-3.49(m,3H,-CH-NHand-HN-CH 2-),2.64-2.58(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),2.31(brs,1H,-NH-CH2),2.20-2.12(m,1H,-O-CH2-CH 2-CH),1.35(s,9H,-C(CH3)3)；13CNMR(CDCl3,101MHz)δ189.16,177.02,169.69,154.20,144.57,141.63,134.02,132.16,129.92,128.36,125.96,120.99,118.98,65.54,57.14,51.71,34.95,31.16,30.17.
实施例3：
本发明合成的目标化合物对人肝癌细胞HePG2和人食管癌细胞EC-109两种肿瘤细胞系进行了活性实验，实验结果显示衍生物有一定的抗肿瘤活性。
1、实验方法：
(1)1640培养液的配制：在无菌条件下，取适量的无血清RPMI1640培养基，加到10％的胎牛血清中后摇晃均匀；然后再加双抗(链霉素100μg/mL和青霉素100μg/mL)后摇晃均匀。放置冰箱中保持4℃下备用。
(2)PBS缓冲盐的配制：称取1.56gNa2HPO4，0.2gKH2PO4，0.2gKCl，8.0gNaCl，称取后溶于950mL超纯水中，用干净玻璃棒搅拌溶解，然后再加超纯水定容直至1000mL。放置于干净的输液瓶中，在瓶塞上***针头，在121℃高温高压下灭菌20min后冷却，放置于冰箱中保持4℃备用。
(3)铺板：将1640培养液、胰酶和PBS在37℃水浴锅中预热。长满细胞的培养瓶中的培养液弃去，用PBS清洗两次，加入1mL胰酶，轻轻摇晃混匀，放入培养箱2min。细胞消化完后及时加入2mL培养液，用吸管将细胞打成悬液，转移至离心管离心，弃去离心后的上清液，加入1mL1640培养液混匀，继续加至2mL，充分混匀。取少量细胞悬液至计数板进行计数，得细胞总数。根据每孔所需铺的细胞数和铺板的板数计算所需细胞数量和细胞悬液的体积。取细胞悬液，加入到96孔板中，每孔100μL，加完后轻轻晃动使细胞混匀，放入培养箱培养24h，使细胞贴壁。
(4)加药：将待测药物用DMSO配制成10mg/mL原药液，加药时取10mg/mL的原药液配成3个浓度梯度，分别为50、10、5μg/mL，浓度由高到低，每孔均加100μL，每个浓度设四个复孔；阴性对照组需加100μL培养基，加完药后放入培养箱中培养48h，之后加入5mg/mlMTT，20μL/孔，继续培养4h-6h后将孔板中的上清弃去，加入DMSO，150μL/孔，在摇床中振摇10min，在酶联免疫检测仪上测490nm时的吸光度值，计算抑制率。
(5)进一步筛选：取抑制率大于50％的样品进行半抑制率(IC50)
实验。将待测样品以64μg/mL、32μg/mL、16μg/mL、8μg/mL、4μg/mL、2μg/mL、1μg/mL浓度加入到96孔板中，方法同上，测定490nm时的吸光度值，通过SPSS统计软件计算IC50值。(二)实验数据及结果
本发明合成的化合物抗肿瘤活性数据见表1
表1系列目标化合物对两种肿瘤细胞的药理活性(IC50)
注：a为人肝癌细胞；b为人食管癌细胞
(三)结论
上述实验结果表明本发明所述化合物对人肝癌细胞HePG2没有抑制活性或活性很小,而对人食管癌细胞EC-109具有较好的体外抗肿瘤活性，具有潜在的应用价值。
实施例4：
本发明合成的目标化合物对细菌最小抑菌浓度MIC进行检测和并利用铜绿假单胞菌las***液体筛选模型PAOMWI(QSIS-lasI)(又叫pz1)测定其IC50值，实验结果显示部分衍生物有一定的群体感应抑制活性。
2、实验方法：
1.化合物对细菌最小抑菌浓度MIC的检测
(1)挑取细菌单克隆于新鲜MH培养基中，于37℃、150rpm摇床培养至生长对数期。
(2)使用LB液体培养基将菌液稀释至OD600≈0.05，分为11组，每组三个平行，按二倍稀释法分别加入化合物至不同终浓度(312.5μΜ,0.625mM,1.25mM,2.5mM,5mM,10mM,20mM,40mM,80mM，160mM)，不加样品的一组设为阳性对照组，将菌液于37℃、静置培养20h，并检测其OD600。
(3)结果分析：可以抑制菌株出现明显增长的最低药物浓度即为最小抑菌浓度MIC。
2.化合物对铜绿假单胞菌las***的活性检测(IC50)
(1)挑取铜绿假单胞菌QSIS2单克隆于LB液体培养基，于37℃。150rpm培养至对数期。
(2)用新鲜的无菌ABT培养基稀释至OD600＝0.1，取96孔板，每孔加入50μl上述菌液、50μl含蔗糖(56mg/ml)的LB培养基，终浓度为80μg/ml的庆大霉素和3-氧十二烷酰高丝氨酸内酯3-oxo-C12-HSL(20nM)。此外分别将待测样品以1μM，2μM，4μM，8μM，16μM，32μM，64μM，128μM，256μM浓度加入到96孔板中。呋喃酮C30为阳性对照,甲醇为阴性对照。
(3)在37℃培养9h,加入TTC染色，然后在600nm波长下测吸光度。所有化合物在每次试验中设12个复孔，重复三次以上。通过SPSS统计软件计算IC50值。
(二)实验数据及结果
本发明合成的化合物最小抑菌浓度的测定数据见表2
表2目标化合物的最低抑菌浓度MIC(mM)
注：a为野生型铜绿假单胞菌株；b为是rhlI及lasI双缺失(PAOMWI)、pqs***完整的铜绿假单胞菌突变菌株
本发明化合物对铜绿假单胞菌las***的活性检测数据见表3
表3目标化合物对铜绿假单胞菌las***的活性(IC50)
注：a.数据表示为：平均值±标准偏差(n＝3)；b.NS表明没有显著抑制活性；C.呋喃酮C30作为阳性对照,甲醇作为阴性对照
(三)结论
上述实验结果表明本发明所述系列II(10a-10m)的所有衍生物对群体感应***均没有明显抑制活性。而系列I(8a-8m)具有较好的群体感应抑制活性，以本系列发明化合物作为细菌群体感应抑制药物，具有潜在的应用价值。

Claims (7)

1.N-酰基高丝氨酸内酯类化合物，其特征在于，具有通式Ⅰ所示结构：
通式I
其中R为–H；-Cl；-Br；-Ph；-3,5-二氯基；-2-F；-3,4-二氯基；-3-OCH3；-4-F；-4-异丙基；-4-叔丁基。
2.N-乙酰基高丝氨酸内酯类化合物，其特征在于，具有通式II所示结构：
通式II
其中R为–H；-Cl；-Br；-Ph；-3,5-二氯基；-2-F；-3,4-二氯基；-3-OCH3；-4-F；-4-异丙基；-4-叔丁基。
3.制备如权利要求1所述的化合物的方法，其特征在于，它包括以下步骤：
（Ⅰ）
R为–H；-Cl；-Br；-Ph；-3,5-二氯基；-2-F；-3,4-二氯基；-3-OCH3；-4-F；-4-异丙基；-4-叔丁基；
室温下，L-甲硫氨酸1与碘甲烷在甲醇的水溶液中反应，搅拌过夜，生成甲基化物2，继而在碳酸氢钠的水溶液中水解，控制体系的pH值在4-7，随后将体系转入油浴加热至回流反应，TLC跟踪至水解完全；将溶液蒸干经重结晶，得到固体化合物3；化合物3在盐酸水溶液中回流,TLC检测反应完全；将体系冷却至室温，经洗涤，减压蒸出溶剂后得粗品，粗品经重结晶，抽滤后真空干燥得到关键中间体——高丝氨酸内酯盐酸盐4；
高丝氨酸内酯盐酸盐4与氯乙酰氯在Schotten-Baumann反应条件下，即采用二氯甲烷：水作溶剂，碳酸氢钠作缚酸剂，低温下滴加氯乙酰氯，体系于室温下反应，TLC检测反应完全，分取二氯甲烷层，经干燥处理后减压蒸去溶剂，真空干燥，得到酰化产物5；
对氨基苯乙酮与一系列取代的苯甲醛采用乙醇作反应溶剂，在0℃低温条件下加入氢氧化钠固体，室温下搅拌反应过夜，发生Claisen-Schmidt反应，将反应液倒入冰水混合物中搅拌至析出固体，得到一系列的查尔酮类化合物7a-7m；
以非质子溶剂DMF作反应溶剂，加入碘化钾做催化剂，化合物5在60℃-70℃下活化，再分别加入7a-7m查尔酮化合物，随后升温至120℃-140℃反应；将反应液冷却至室温，经萃取，洗除去DMF，减压蒸除乙酸乙酯后，硅胶柱色谱分离，得到一系列目标化合物8a-8m。
4.制备如权利要求2所述的化合物的方法，其特征在于，它包括以下步骤：
（Ⅱ）
R为–H；-Cl；-Br；-Ph；-3,5-二氯基；-2-F；-3,4-二氯基；-3-OCH3；-4-F；-4-异丙基；-4-叔丁基；
室温下，L-甲硫氨酸1与碘甲烷在甲醇的水溶液中反应，搅拌过夜，生成甲基化物2，继而在碳酸氢钠的水溶液中水解，控制体系的pH值在4-7，随后将体系转入油浴加热至回流反应，TLC跟踪至水解完全；将溶液蒸干，经重结晶，得到化合物3；化合物3在盐酸水溶液中回流,TLC检测反应完全；将体系冷却至室温，经洗涤，减压蒸出溶剂后得粗品，粗品经重结晶，抽滤后真空干燥，得到关键中间体——高丝氨酸内酯盐酸盐4；
对氨基苯乙酮与一系列取代的苯甲醛采用乙醇作反应溶剂，在0℃低温条件下加入氢氧化钠固体，室温下搅拌反应过夜，发生Claisen-Schmidt反应，将反应液倒入冰水混合物中搅拌至析出固体，得到一系列的查尔酮类化合物7a-7m；
以查尔酮系列化合物7a-7m为原料，丙酮为溶剂，碳酸钾作催化剂，低温下加入氯乙酰氯，回流搅拌反应后,将反应液倒入冰水混合物中搅拌至析出固体，抽滤、干燥处理后得α-氯代酰胺查尔酮衍生物9a-9m；
以高丝氨酸内酯盐酸盐4为原料，采用类似Williamson合成醚的方法，分别与不同的底物α-氯代酰胺查尔酮衍生物(9a-9m)反应，即以乙腈作溶剂，搅拌溶解后加入缚酸剂K2CO3，催化剂KI，油浴下加热至回流反应；反应完毕后，抽滤除去K2CO3，减压蒸除乙腈后，硅胶柱色谱分离，得到N-乙酰基高丝氨酸内酯衍生物10a-10m。
5.如权利要求1所述的N-酰基高丝氨酸内酯类化合物在制备药物方面的应用，其特征在于，将其用于制备抗食管癌药物。
6.如权利要求2所述的N-乙酰基高丝氨酸内酯类化合物在制备药物方面的应用，其特征在于，将其用于制备抗食管癌药物。
7.如权利要求1所述的N-酰基高丝氨酸内酯类化合物在制备药物方面的应用，其特征在于，将其用于制备抗细菌群体感应抑制药物。
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