CN104262312A - 一种万寿菊素的提取纯化方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种万寿菊素的提取纯化方法，方法步骤是：将母菊粉碎，加生物酶酶解，得酶解原料，加5-10倍量65-80%的乙醇溶液混合后，进行负压空化混悬固液萃取，得到提取液，浓缩，经过聚酰胺树脂柱吸附，醇水洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得粗品，将粗品经高速逆流色谱分离纯化，正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂***，紫外检测器检测，收集流分回收试剂，干燥即得。采用本发明方法提取纯化万寿菊素，操作简单，效率高，且产品纯度高，适合产业化制备。

Description

一种万寿菊素的提取纯化方法
技术领域
本发明属于天然物质的提取技术领域，涉及一种万寿菊素的提取纯化方法。
背景技术
母菊主产于我国新疆北部和西部。生于河谷旷野、田边。北京和上海庭园有栽培，供观赏。欧洲、亚洲北部和西部也有分布。母菊味微苦、甘香，明目、退肝火，治疗失眠，降低血压，可增强活力、提神；增强记忆力、降低胆固醇；祛痰止咳，可有效缓解支气管炎及气喘，可舒缓头痛、偏头痛或感冒引起的肌肉痛，对中和胃酸、舒缓神经有帮助；可消除感冒所引起的肌肉痠痛，能镇定精神、纾缓情绪，提升睡眠质量，还可改善过敏的皮肤；有帮助睡眠、润泽肌肤、可治长期便秘、能消除紧张、眼睛疲劳、润肺、养生，并可治疗焦虑和紧张造成的消化不良，且对失眠、神经痛及月经痛、肠胃炎都有所助益、减轻头痛。母菊富含黄酮类活性成分，该成分具有抗氧化、抗血管增生、消炎、抗变应性、和抗病毒的功效。
万寿菊素，黄色针晶，来源于菊科植物母菊Matricaria chamomilla L.。万寿菊素具有对抗氧活性，在DPPH测试中能清除自由基形成,其IC50为9.0μg/mL；在细胞色素C还原作用测试中，其IC50为10.1μg/mL(阳性对照品gallic acid的IC50分别为3.7μg/mL和3.2μg/mL。万寿菊素还具有细胞毒活性，在MTT测试中降低堆心菊素诱导的细胞毒活性。本品1μM时，提高堆心菊素对人肺癌细胞株GLC4的IC50值(由单用堆心菊素时的100%提高至134.7±7.5%)。在200μM时，对GLC4(人型肺癌细胞株)和COLO320(人型结直肠癌细胞株)抑制率达67.8%和84.4%，IC50(μM)分别为160和147。
目前，万寿菊素的纯化方法很少见，如专利（申请号201110075820.3）“一种高纯度槲皮万寿菊素制备方法”，该方法是采用有机溶剂提取和高速逆流色谱分离。如上所述，现有纯化万寿菊素的方法存在着收率低、周期长、溶剂用量大、收率低等不足。
发明内容
本发明的目的是提供一种万寿菊素的提取纯化方法。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种万寿菊素的提取纯化方法，其特征在于包括以下步骤：将母菊粉碎，加生物酶酶解1-2天，得酶解原料，加5-10倍量65-80%的乙醇溶液混合后，进行负压空化混悬固液萃取，得到提取液，浓缩，加入聚酰胺树脂干燥，装柱，醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得粗品，将粗品经高速逆流色谱分离纯化，正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂***，紫外检测器检测，收集流分回收试剂，干燥即得。
所述中生物酶可选果胶酶、纤维素酶和淀粉酶中的任一种，用量为原料重量的0.6-0.8%。
所述醇水溶液为20-80%的乙醇水溶液。
所述高速逆流色谱分离纯化，溶剂***正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水的体积比为（4-7）：（1-3）：（1-3）：（2-5）。
所述紫外检测波长为254nm。
本发明的有益效果是：（1）采用生物酶解分解物质组织结构，提高了提取率，缩短了提取时间，而且采用负压空化混悬固液萃取的方法对植物原料中的万寿菊素进行提取，时间短，效率高；（2）采用高速逆流色谱分离纯化，无产品损失，分离高效、制备量大、分离***可重复使用，对环境污染小。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式
实施例1：
将母菊粉碎过20目筛，称取3kg，加24g的果胶酶混合均匀，酶解2天，酶解原料加24L70%的乙醇溶液空化混悬50min，进行负压空化混悬固液萃取1次，得到萃取液，浓缩，加入聚酰胺树脂柱，先用4BV20%乙醇洗脱杂质，再用6BV的75%乙醇洗脱有效成分，收集有效成分减压浓缩、干燥得粗品。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比4:2.5:2.5:2混合，分层后，取上相作固定相，下相为流动相，调整转速为850rpm，泵入下相后控制流速2ml/min，取下相溶解粗品，由进样阀进样，紫外检测波长为254nm，收集万寿菊素流分，回收试剂，干燥即得万寿菊素产品，含量为97.5%。
 
实施例2：
将母菊粉碎过20目筛，称取3kg，加18g的淀粉酶混合均匀，酶解1天，酶解原料加30L75%的乙醇溶液空化混悬45min，进行负压空化混悬固液萃取2次，得到萃取液，浓缩，加入聚酰胺树脂柱，先用3BV30%乙醇洗脱杂质，再用5BV的75%乙醇洗脱有效成分，收集有效成分减压浓缩、干燥得粗品。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比5:3:3:5混合，分层后，取上相作固定相，下相为流动相，调整转速为800rpm，泵入下相后控制流速2ml/min，取下相溶解粗品，由进样阀进样，紫外检测波长为254nm，收集万寿菊素流分，回收试剂，干燥即得万寿菊素产品，含量为97.0%。
实施例3：
将母菊粉碎过20目筛，称取3kg，加24g的纤维素酶混合均匀，酶解2天，酶解原料加15L80%的乙醇溶液空化混悬50min，进行负压空化混悬固液萃取2次，得到萃取液，浓缩，加入聚酰胺树脂柱，先用4BV35%乙醇洗脱杂质，再用5BV的80%乙醇洗脱有效成分，收集有效成分减压浓缩、干燥得粗品。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比6:1:1:4混合，分层后，取上相作固定相，下相为流动相，调整转速为950rpm，泵入下相后控制流速3ml/min，取下相溶解粗品，由进样阀进样，紫外检测波长为254nm，收集万寿菊素流分，回收试剂，干燥即得万寿菊素产品，含量为97.2%。
 
实施例4：
将母菊粉碎过20目筛，称取10kg，加70g的淀粉酶混合均匀，酶解2天，酶解原料加80L65%的乙醇溶液空化混悬50min，进行负压空化混悬固液萃取2次，得到萃取液，浓缩，加入聚酰胺树脂柱，先用3BV30%乙醇洗脱杂质，再用4BV的80%乙醇洗脱有效成分，收集有效成分减压浓缩、干燥得粗品。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按体积比7:1.5:1.5:3混合，分层后，取上相作固定相，下相为流动相，调整转速为800rpm，泵入下相后控制流速2.5ml/min，取下相溶解粗品，由进样阀进样，紫外检测波长为254nm，收集万寿菊素流分，回收试剂，干燥即得万寿菊素产品，含量为96.1%。 

Claims (5)

1. 一种万寿菊素的提取纯化方法，其特征在于包括以下步骤：将母菊粉碎，加生物酶酶解1-2天，得酶解原料，加5-10倍量65-80%的乙醇溶液混合后，进行负压空化混悬固液萃取，得到提取液，浓缩，加入聚酰胺树脂干燥，装柱，醇水溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩干燥得粗品，将粗品经高速逆流色谱分离纯化，正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂***，紫外检测器检测，收集流分回收试剂，干燥即得。
2. 如权利要求1所述的一种万寿菊素的提取纯化方法，其特征在于所述中生物酶可选果胶酶、纤维素酶和淀粉酶中的任一种，用量为原料重量的0.6-0.8%。
3. 如权利要求1所述的一种万寿菊素的提取纯化方法，其特征在于所述醇水溶液为20-80%的乙醇水溶液。
4. 如权利要求1所述的一种万寿菊素的提取纯化方法，其特征在于所述高速逆流色谱分离纯化，溶剂***正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水的体积比为（4-7）：（1-3）：（1-3）：（2-5）。
5. 如权利要求1所述的一种万寿菊素的提取纯化方法，其特征在于所述紫外检测波长为254nm。
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