CN104248652A - 一种鹿瓜多肽注射制剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域，本发明公开了一种鹿瓜多肽注射制剂的制备方法，该方法采用高温水提取、酸碱调pH值、超滤等方法有机结合，制备成注射液或粉针剂，该方法得到的制剂中分子量大于10000的物质小于等于多肽重量的5％，过敏性试验和稳定性试验表明，本发明方法制备成的制剂具有更优的质量。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种鹿瓜多肽新的制备方法。
背景技术
以鹿骨和甜瓜子为原料的药物制剂，主要是鹿瓜多肽注射制剂，该制剂具有调节骨代谢、刺激成骨细胞增殖、促进新骨形成的作用，亦可调节钙鳞代谢、增加骨钙沉积、防止骨质疏松，并具有抗炎、镇痛、抗风湿等作用，已在临床广泛使用。
鹿瓜多肽注射制剂中骨诱导多肽类生物因子可有效促进机体内影响骨形成和吸收的骨源性生长因子的合成，包括骨形态发生蛋白(BNPs)、β-转化生长因子(TGF-β)和成纤维细胞生长因子(FGF)等，从而具有多种生物活性、促进细胞有丝***与分化的作用，并具有容骨活性。其中BMPs是一种高效诱导物质，是间充质细胞向骨系细胞分化的最初信号分子，能诱导血管周围游动的间充质细胞转化为不可逆性的骨系细胞，即软骨细胞和成骨细胞，从而促进骨痂形成，诱导新骨形成，促进骨折修复；还可调节细胞外基质成分的改变，通过与TGF-β和FGF相互之间地协调作用，更好地诱导新骨形成，使骨组织更成熟。TGF-β则是一族具有多种的蛋白多肽，对成骨细胞及成软骨细胞有促进分化或降低分化的双重作用，与多种因子如细胞外基质和其他分化调节生长因子一起协同参与对细胞分化的调节，也可促进细胞外基质的合成，并对其新合成的基质降解有显著抑制作用；对于成骨细胞也可促进其合成I型胶原、骨粘连素和骨桥蛋白；同时，TGF-β对淋巴细胞和巨噬细胞的作用表明，它既能缓解炎性反应的破坏性，又能协助巨噬细胞来源的某些细胞因子在组织修复中发挥作用。FGF 是一组肝素粘合多肽，可刺激细胞的趋向移动、增殖和分化，增加合成胶原细胞的数量，促进骨胶原蛋白及非胶原蛋白的合成，增加骨钙素的合成。甜瓜子提取物是从葫芦科植物甜瓜的成熟干燥种子经特殊工艺提取而成，能降低骨折局部毛细血管通透性，减少炎性渗出促进局部血运障碍的恢复；能降低全血粘度及红细胞聚集程度，改善骨痂局部的血液循环，为骨细胞提供一个良好的供血环境；还能抑制***素的释放，达到止痛效果。在促进骨折早期愈合中，甜瓜子提取物与补充的骨诱导多肽类生物因子具有协同作用，可促进骨源性生长因子的合成。鹿瓜多肽富含的多种游离氨基酸为骨细胞合成BNPs、TGF-β和FGF等骨源性生长因子提供原料，从而促进骨源性生长因子的合成。其中的有机钙、磷离子可参与钙磷代谢，维持骨容量。
临床应用表明，以鹿骨和甜瓜子为原料的注射制剂是治疗骨折不愈合、骨质疏松症、风湿、类风湿性关节炎、腕舟状骨缺血性坏死和软组织损伤等的有效药物，在骨科的应用前景广阔。
随着该制剂的临床应用越来越广泛，出现一些不良反应，虽然不良反应率比较低，但药物关系到人的生命，提高其产品质量是重中之重。
发明内容
基于上述原因，申请人采用高温水提取技术、超滤技术相结合的方法，得到鹿骨提取物和甜瓜子提取物，混合后超滤，制备成注射制剂，该方法制备得到注射制剂高分子量物质不超过5％，稳定性试验表明，该制剂具有更好的稳定性。
本发明通过下述技术方案实现的。
一种鹿瓜多肽注射制剂的制备方法，其制备方法为：鹿骨和甜瓜子的重量比为1-4∶1-4，鹿骨采用高温水提取，酸调pH值，碱调pH值，超滤，获得鹿 骨提取液；甜瓜子采用高温水提取，酸调pH值，碱调pH值，离心后超滤，获得甜瓜子提取液；将鹿骨提取液和甜瓜子提取液混合后，超滤，制备成注射液；或者将鹿骨提取液和甜瓜子提取液混合后，超滤，冷冻干燥，制备成粉针剂。
其中鹿骨提取液制备方法为：
取鹿骨去掉骨髓，粉碎，加入鹿骨重量的2-4倍的注射用水，120℃-125℃提取3次，每次3小时-5小时，合并提取液，过滤，滤液用酸调pH值为2.5-3.5，0℃-5℃静置12-24小时，过滤，滤液用碱调pH9.0-11.0，0℃-5℃静置12-24小时，过滤，滤液用酸调pH值6.5-7.5，滤液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量1-3mg/ml，得到鹿骨提取液；
其中甜瓜子制备方法为：
取甜瓜子，粉碎，加入甜瓜子重量的2-4倍的注射用水，120℃-125℃提取3次，每次3小时-5小时，合并提取液，过滤，滤液用酸调pH值为2.5-3.5，0℃-5℃静置12-24小时，过滤，滤液用碱调pH9.0-11.0，0℃-5℃静置12-24小时，过滤，滤液用酸调pH值6.5-7.5，在15000-17000r/min离心5-10分钟，取上清液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量1-3mg/ml，得到甜瓜子提取液；
其中注射液的制备方法为：
按照多肽含量重量比1-3∶0.5-1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3-6mg/ml，灌装，得到注射液；
其中粉针剂的制备方法为：
按照多肽含量重量比1-3∶0.5-1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3-6mg/ml，灌装，冷冻干燥，得到冻干粉针剂。
其中制备方法中酸为醋酸、枸橼酸、马来酸、乳酸或酒石酸。
其中制备方法中碱为枸橼酸钠、醋酸钠、二乙醇胺或乙二胺。
一、过敏性反应试验研究
试验1组：药物组合物鹿骨400g，甜瓜子100g，制备成注射液，其中分子量大于10000占多肽重量的5.5％。
(1)取鹿骨去掉骨髓，粉碎，取400g，加水1200g，于121℃提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液用盐酸调pH值为3.0，0℃静置16小时，过滤，滤液用氢氧化钠调pH10.0，0℃静置16小时，过滤，滤液用盐酸调pH值7.0，滤液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2mg/ml，得到鹿骨提取液；
(2)取甜瓜子100g，粉碎，加入甜瓜子重量的3倍的注射用水，121℃提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液用盐酸调pH值为3.0，0℃静置18小时，过滤，滤液用氢氧化钠调pH10.0，0℃静置12小时，过滤，滤液用盐酸调pH值7.0，在16000r/min离心10分钟，取上清液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2mg/ml，得到甜瓜子提取液；
(3)按照多肽含量重量比2∶1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为4mg/ml，灌装，得到注射液；
试验2组：药物组合物鹿骨400g，甜瓜子100g，制备成注射液，其中分子量大于10000占多肽重量的5.0％。
(1)取鹿骨去掉骨髓，取400g粉碎，加入鹿骨重量的2倍的注射用水，125℃提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液用枸橼酸调pH值为2.5，5℃静置12小时，过滤，滤液用枸橼酸钠调pH9.0，5℃静置12小时，过滤，滤液用枸橼酸调pH值6.5，滤液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量1.5mg/ml，得到鹿骨提取液；
(2)取甜瓜子100g，粉碎，加入甜瓜子重量的2倍的注射用水，125℃提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液用枸橼酸调pH值为3.0，5℃静置12小时，过滤，滤液用枸橼酸钠调pH9.0，5℃静置24小时，过滤，滤液用枸橼酸调pH值6.5，在15000r/min离心5分钟，取上清液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量1.5mg/ml，得到甜瓜子提取液；
(3)按照多肽含量重量比2∶1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为4mg/ml，灌装，得到注射液；
试验3组：药物组合物鹿骨400g，甜瓜子100g，制备成注射液，其中分子 量大于10000占多肽重量的4.0％。
(1)取鹿骨去掉骨髓，取400g粉碎，加入鹿骨重量的2.5倍的注射用水，122℃提取3次，每次4.5小时，合并提取液，过滤，滤液用乳酸调pH值为3.3，3℃静置20小时，过滤，滤液用醋酸钠调pH10.5，3℃静置20小时，过滤，滤液用乳酸调pH值7.3，滤液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2.5mg/ml，得到鹿骨提取液；
(2)取甜瓜子100g，粉碎，加入甜瓜子重量的2.5倍的注射用水，124℃提取3次，每次3.5小时，合并提取液，过滤，滤液用乳酸调pH值为3.0，3℃静置22小时，过滤，滤液用醋酸钠调pH10.5，3℃静置22小时，过滤，滤液用乳酸调pH值7.2，在15500r/min离心6分钟，取上清液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2.5mg/ml，得到甜瓜子提取液；
(3)按照多肽含量重量比2∶1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为4mg/ml，灌装，得到注射液；
试验4组：药物组合物鹿骨400g，甜瓜子100g，制备成注射液，其中分子量大于10000占多肽重量的2.8％。
(1)取鹿骨去掉骨髓，取400g粉碎，加入鹿骨重量的3.5倍的注射用水，121℃提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液用酒石酸调pH值为3.0，0℃静置16时，过滤，滤液用乙二胺调pH10.0，0℃静置16小时，过滤，滤液 用酒石酸调pH值7.0，滤液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2mg/ml，得到鹿骨提取液；
(2)取甜瓜子，粉碎，加入甜瓜子重量的3倍的注射用水，121℃提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液用酒石酸调pH值为3.0，0℃静置16小时，过滤，滤液用乙二胺调pH10.0，0℃静置16小时，过滤，滤液用酒石酸调pH值7.0，在16000r/min离心8分钟，取上清液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2mg/ml，得到甜瓜子提取液；
(3)按照多肽含量重量比2∶1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为4mg/ml，灌装，得到注射液；
试验5组：药物组合物鹿骨400g，甜瓜子100g，制备成注射液，其中分子量大于10000占多肽重量的0.80％。
(1)取鹿骨去掉骨髓，取400g粉碎，加入鹿骨重量的3倍的注射用水，121℃提取3次，每次4.5小时，合并提取液，过滤，滤液用枸橼酸调pH值为3.0，2℃静置20小时，过滤，滤液用枸橼酸钠调pH10.0，2℃静置20小时，过滤，滤液用枸橼酸调pH值7.0，滤液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2mg/ml，得到鹿骨提取液；
(2)取甜瓜子，粉碎，加入甜瓜子重量的3倍的注射用水，121℃提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液用枸橼酸调pH值为3.0，2℃静置22小时，过滤，滤液用枸橼酸钠调pH10.0，2℃静置22小时，过滤，滤液用枸橼酸调pH值7.0，在16000r/min离心8分钟，取上清液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量1-3mg/ml，得到甜瓜子提取液；
(3)按照多肽含量重量比2∶1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为4mg/ml，灌装，得到注射液；
试验动物：雄性BN大鼠，SPF级，体重180-200g。
试验方法：取大鼠，随机分组，对照组、试验药物1组至试验药物5组，按临床等倍剂量腹腔注射给予BN大鼠，0.8mL/kg，隔日注射1次，连续3次。对照组注射无菌生理盐水。第3次注射药物隔日，再给予药物1.6mL/kg，尾静脉注射给药，对照组给予无菌生理盐水，各组动物给药30分钟，取眼眶血，采血后将动物处死，取出肺脏和气管，取血清用于检测组胺含量。取大鼠的肺、支气管组织100mg，加入1mL匀浆液，液氮中反复冻融3次，每次10min，然后在冰浴中超声3×4s，4℃12000r/min离心30min。取上清，蛋白定量后，ELISA测组胺含量，采用试剂盒提供的方法进行测定。
试验结果：见表1。
表1对BN大鼠血清和组织中组胺含量的影响
注：与对照组比较**P＜0.01，*P＜0.05；与试验1组比较##P＜0.01，#P＜0.05。
试验结论：上述试验表明，但制剂中分子量大于10000的高分子量物质小于等于5％时，血清中的组胺显著降低(与大于5％的组别比较P＜0.05)，而当高分子量物质小于3％时，血清中组胺进一步降低，充分说明，控制鹿骨与甜瓜子为原料制备成的制剂中的高分子量物质，具有重要的意义。
【高分子量物质】照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录VD)测定。
色谱条件与***适用性试验 用凝胶色谱柱(TSKgelG2000SW)；流动相为乙腈—水—三氟乙酸(35：65：0.1)；流速为0.7ml/mim；检测波长为214nm。理论板数按核糖核酸酶A峰计算不低于2000。
标准曲线的制备 分别取核糖核酸酶A(分子量13700)、人胰岛素(分子量5808)、胸腺肽α1(分子量3108)、生长抑素(分子量1638)适量，用流动相制成每1ml中各含0.5mg的溶液作为分子量标准溶液。分别取分子量标准溶液10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，重复进样，其保留时间相对偏差不得大于2.0％。以各峰的保留时间为横坐标，分子量对数为纵坐标作标准曲线，进行线性回归，相关系数不得小于0.99。
测定法 取供试品10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以面积归一化法计算，供试品中分子量大于10000道尔顿的组分的含量。
二、稳定性试验
试验方法：将上述制剂在温度40℃±2℃，相对湿度75％±5％的条件下放置，分别检测0个月、1个月、2个月、3个月注射液的含量、pH、细菌内毒素，检 测结果见表2-表5。
表2稳定性试验结果(0个月)
表3稳定性试验结果(1个月)
表4稳定性试验结果(2个月)
表5稳定性试验结果(3个月)
试验结论：上述试验表明当制剂中分子量大于10000的物质占多肽重量大于5.0％时，在2个月时，其细菌内毒素不符合要求，在3个月时含量和内毒素 都不符合要求，而小于等于5.0％的制剂稳定性较好，充分说明控制制剂中分子量大于10000的高分子量物质，具有重要意义。
上述检测方法如下：
(1)pH值：应为5.5～7.0(中国药典2010年版二部附录VIH)。
(2)细菌内毒素：取本品，依法检查(中国药典2010年版二部附录XIE)，每1ml中含内毒素的量应小于4EU。
(3)含量测定：精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度，作为供试品溶液，照福林酚测定法测定。
福林酚测定法
试剂碱性铜试液取氢氧化钠10g，碳酸钠50g，加水400ml使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g，加水50ml使溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使溶解，将两液混合，作为乙液。
临用前，合并甲、乙两液，并加水至500ml。
操作法对照品溶液的制备取牛血清白蛋白对照品，加水制成每1ml中含0.3mg的溶液。
供试品溶液的制备照各品种项下规定的方法制备。
标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，分别置具塞试管中，各加水至1.0ml，再分别加入碱性铜试液1.0ml，摇匀，各加入福林酚试液(取福林试液中的贮备液1→16)4.0ml，立即混匀，置55℃水浴中准确反应5分钟，置冷水浴10分钟，照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版二部附录IVA)，在650nm的波长处测定吸收度；以0号管作为空白。以对照品溶液浓度与相应的吸收度计算回归方程。
测定法精密量取供试品溶液1.0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自 “加入碱性铜试液”起，依法测定，从回归方程计算多肽的含量，并乘以稀释倍数，即得。
制备实施例
实施例1
药物组合物鹿骨3000g，甜瓜子1000g
(1)取鹿骨去掉骨髓，取3000g粉碎，加入鹿骨重量的2倍的注射用水，125℃提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液用枸橼酸调pH值为2.5，5℃静置12小时，过滤，滤液用枸橼酸钠调pH9.0，5℃静置12小时，过滤，滤液用枸橼酸调pH值6.5，滤液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量1.5mg/ml，得到鹿骨提取液；
(2)取甜瓜子100g，粉碎，加入甜瓜子重量的2倍的注射用水，125℃提取3次，每次3小时，合并提取液，过滤，滤液用枸橼酸调pH值为3.0，5℃静置12小时，过滤，滤液用枸橼酸钠调pH9.0，5℃静置24小时，过滤，滤液用枸橼酸调pH值6.5，在15000r/min离心5分钟，取上清液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量1.5mg/ml，得到甜瓜子提取液；
(3)按照多肽含量重量比2∶1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3.5mg/ml，灌装，得到注射液1000支。其中注射液中分子量大于10000的物质占多肽重量的4.85％。
实施例2
药物组合物鹿骨4000g，甜瓜子2000g
(1)取鹿骨去掉骨髓，取4000g粉碎，加入鹿骨重量的2.5倍的注射用水，122℃提取3次，每次4.5小时，合并提取液，过滤，滤液用乳酸调pH值为3.3，3℃静置20小时，过滤，滤液用醋酸钠调pH10.5，3℃静置20小时，过滤，滤液用乳酸调pH值7.3，滤液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2.5mg/ml，得到鹿骨提取液；
(2)取甜瓜子2000g，粉碎，加入甜瓜子重量的2.5倍的注射用水，124℃提取3次，每次3.5小时，合并提取液，过滤，滤液用乳酸调pH值为3.0，3℃静置22小时，过滤，滤液用醋酸钠调pH10.5，3℃静置22小时，过滤，滤液用乳酸调pH值7.2，在15500r/min离心6分钟，取上清液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2.5mg/ml，得到甜瓜子提取液；
(3)按照多肽含量重量比2∶1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为5mg/ml，灌装，得到注射液1000支；其中注射液中分子量大于10000的物质占多肽重量的4.25％。
实施例3
药物组合物鹿骨1000g，甜瓜子3000g
(1)取鹿骨去掉骨髓，取1000g粉碎，加入鹿骨重量的3.5倍的注射用水， 121℃提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液用酒石酸调pH值为3.0，0℃静置16时，过滤，滤液用乙二胺调pH10.0，0℃静置16小时，过滤，滤液用酒石酸调pH值7.0，滤液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2mg/ml，得到鹿骨提取液；
(2)取甜瓜子，粉碎，加入甜瓜子重量的3倍的注射用水，121℃提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液用酒石酸调pH值为3.0，0℃静置16小时，过滤，滤液用乙二胺调pH10.0，0℃静置16小时，过滤，滤液用酒石酸调pH值7.0，在16000r/min离心8分钟，取上清液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2mg/ml，得到甜瓜子提取液；
(3)按照多肽含量重量比2∶1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3.80mg/ml，灌装，得到注射液1000支；其中注射液中分子量大于10000的物质占多肽重量的3.45％。
实施例4
药物组合物鹿骨2500g，甜瓜子1500g
(1)取鹿骨去掉骨髓，取2500g粉碎，加入鹿骨重量的3倍的注射用水，121℃提取3次，每次4.5小时，合并提取液，过滤，滤液用枸橼酸调pH值为3.0，2℃静置20小时，过滤，滤液用枸橼酸钠调pH10.0，2℃静置20小时，过滤，滤液用枸橼酸调pH值7.0，滤液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留 透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2mg/ml，得到鹿骨提取液；
(2)取甜瓜子，粉碎，加入甜瓜子重量的3倍的注射用水，121℃提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液用枸橼酸调pH值为3.0，2℃静置22小时，过滤，滤液用枸橼酸钠调pH10.0，2℃静置22小时，过滤，滤液用枸橼酸调pH值7.0，在16000r/min离心8分钟，取上清液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量1-3mg/ml，得到甜瓜子提取液；
(3)按照多肽含量重量比1∶1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3.5mg/ml，灌装，得到注射液；其中注射液中分子量大于10000的物质占多肽重量的3.0％。
实施例5
药物组合物鹿骨3000g，甜瓜子3000g
(1)取鹿骨去掉骨髓，取1000g粉碎，加入鹿骨重量的3.5倍的注射用水，121℃提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液用酒石酸调pH值为3.0，0℃静置16时，过滤，滤液用乙二胺调pH10.0，0℃静置16小时，过滤，滤液用酒石酸调pH值7.0，滤液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2mg/ml，得到鹿骨提取液：
(2)取甜瓜子，粉碎，加入甜瓜子重量的3倍的注射用水，121℃提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液用酒石酸调pH值为3.0，0℃静置16小时，过滤，滤液用乙二胺调pH10.0，0℃静置16小时，过滤，滤液用酒石酸调pH值7.0，在16000r/min离心8分钟，取上清液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2mg/ml，得到甜瓜子提取液；
(3)多肽含量重量比2.5∶0.8混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为6mg/ml，灌装，冷冻干燥，得到冻干粉针剂1000支；其中注射液中分子量大于10000的物质占多肽重量的3.10％。
实施例6
药物组合物鹿骨4000g，甜瓜子1500g
(1)取鹿骨去掉骨髓，取4000g粉碎，加入鹿骨重量的3倍的注射用水，121℃提取3次，每次4.5小时，合并提取液，过滤，滤液用枸橼酸调pH值为3.0，2℃静置20小时，过滤，滤液用枸橼酸钠调pH10.0，2℃静置20小时，过滤，滤液用枸橼酸调pH值7.0，滤液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量2mg/ml，得到鹿骨提取液；
(2)取甜瓜子，粉碎，加入甜瓜子重量的3倍的注射用水，121℃提取3次，每次4小时，合并提取液，过滤，滤液用枸橼酸调pH值为3.0，2℃静置22小时，过滤，滤液用枸橼酸钠调pH10.0，2℃静置22小时，过滤，滤液用枸橼 酸调pH值7.0，在16000r/min离心8分钟，取上清液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量1-3mg/ml，得到甜瓜子提取液；
(3)多肽含量重量比2.0∶1.0混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为6mg/ml，灌装，冷冻干燥，得到冻干粉针剂1000支；其中注射液中分子量大于10000的物质占多肽重量的0.75％。
Claims (7)
1.一种鹿瓜多肽注射制剂的制备方法，其特征在于：鹿骨和甜瓜子的重量比为1-4∶1-4，鹿骨采用高温水提取，酸调pH值，碱调pH值，超滤，获得鹿骨提取液；甜瓜子采用高温水提取，酸调pH值，碱调pH值，离心后超滤，获得甜瓜子提取液；将鹿骨提取液和甜瓜子提取液混合后，超滤，制备成注射液；或者将鹿骨提取液和甜瓜子提取液混合后，超滤，冷冻干燥，制备成粉针剂。
2.根据权利要求1所述的一种鹿瓜多肽注射制剂的制备方法，其中鹿骨提取液制备方法为：
取鹿骨去掉骨髓，粉碎，加入鹿骨重量的2-4倍的注射用水，120℃-125℃提取3次，每次3小时-5小时，合并提取液，过滤，滤液用酸调pH值为2.5-3.5，0℃-5℃静置12-24小时，过滤，滤液用碱调pH9.0-11.0，0℃-5℃静置12-24小时，过滤，滤液用酸调pH值6.5-7-5，滤液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量1-3mg/ml，得到鹿骨提取液。
3.根据权利要求1所述的一种鹿瓜多肽注射制剂的制备方法，其中甜瓜子制备方法为：
取甜瓜子，粉碎，加入甜瓜子重量的2-4倍的注射用水，120℃-125℃提取3次，每次3小时-5小时，合并提取液，过滤，滤液用酸调pH值为2.5-3.5，0℃-5℃静置12-24小时，过滤，滤液用碱调pH9.0-11.0，0℃-5℃静置12-24小时，过滤，滤液用酸调pH值6.5-7.5，在15000-17000r/min离心5-10分钟，取上清液用截取分子量为10万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为1万的超滤膜超滤，保留透过液，透过液用截取分子量为8000的超滤膜超滤，保留透过液，浓缩至含多肽含量1-3mg/ml，得到甜瓜子提取液。
4.根据权利要求1所述的一种鹿瓜多肽注射制剂的制备方法，其中注射液的制备方法为：
按照多肽含量重量比1-3∶0.5-1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3-6mg/ml，灌装，得到注射液。
5.根据权利要求1所述的一种鹿瓜多肽注射制剂的制备方法，其中粉针剂的制备方法为：
按照多肽含量重量比1-3∶0.5-1混合鹿骨提取液和甜瓜子提取液，混合完全，加入活性炭，过滤，滤液用截取分子量8000的超滤膜超滤，保留透过液，透过液经0.22μm滤芯过滤，浓缩至多肽含量为3-6mg/ml，灌装，冷冻干燥，得到冻干粉针剂。
6.根据权利要求2或3所述的一种鹿瓜多肽注射制剂的制备方法，其中制备方法中酸为醋酸、枸橼酸、马来酸、乳酸或酒石酸。
7.根据权利要求2或3所述的一种鹿瓜多肽注射制剂的制备方法，其中制备方法中碱为枸橼酸钠、醋酸钠、二乙醇胺或乙二胺。
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|---|---|---|---|---|
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1470256A (zh) * | 2002-07-26 | 2004-01-28 | 哈尔滨誉衡药业有限公司 | 促进骨折愈合和骨关节损伤修复的药物组合物 |
| CN1742778A (zh) * | 2005-10-09 | 2006-03-08 | 黑龙江迪龙制药有限公司 | 注射用鹿瓜多肽药物组合物及其制备方法 |
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1470256A (zh) * | 2002-07-26 | 2004-01-28 | 哈尔滨誉衡药业有限公司 | 促进骨折愈合和骨关节损伤修复的药物组合物 |
| CN1742778A (zh) * | 2005-10-09 | 2006-03-08 | 黑龙江迪龙制药有限公司 | 注射用鹿瓜多肽药物组合物及其制备方法 |
| CN103040910A (zh) * | 2012-12-17 | 2013-04-17 | 海南百思特医药科技有限公司 | 一种鹿瓜多肽脂质体注射剂 |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109142580A (zh) * | 2018-09-12 | 2019-01-04 | 南京康舟医药科技有限公司 | 测定醋酸阿托西班有关物质的方法 |
| CN110339335A (zh) * | 2019-07-01 | 2019-10-18 | 哈尔滨誉衡制药有限公司 | 一种鹿瓜多肽注射制剂 |
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