N-芳基取代的双胍氢溴酸盐类化合物及制备方法和应用
(一)技术领域
本发明涉及一类新的N-芳基取代的双胍氢溴酸盐类化合物及其制备方法,以及在制备治疗肝癌药物中的应用。
(二)背景技术
双胍类化合物是重要的有机合成中间体,同时具有抗高血糖活性、抗肿瘤活性、抗细菌活性等多种生物活性,逐渐引起人们的重视。其中,对N-芳基取代双胍类化合物及其制备方法报道较少,主要包括通过二氰二胺与芳香胺反应,N,N’-二氰基肼与芳香胺反应,和氰基胍与芳香胺反应合成。因此,制备新颖的N-芳基取代的双胍类化合物并研究其抗肿瘤的活性具有一定的价值。
(三)发明内容
本发明采用如下技术方案:
一种式(II)所示的N-芳基取代的双胍氢溴酸盐类化合物:
式(II)中:R1,R2各自独立为C1~C10烷基,或者R1,R2和两者之间的N组合形成含N、O的C4~C8的杂环;优选R1,R2各自独立为甲基,或者R1,R2和两者之间的N组合形成吗啉环;
R3表示苯环上的一个或两个以上取代基,选自氢、C1~C10烷基、C1~C10烷氧基或卤素,优选R3为氢、甲基、甲氧基、氟或氯。
本发明还提供了一种式(II)所示N-芳基取代的双胍氢溴酸盐类化合物的制备方法,所述的制备方法为:
将式(I)所示芳香溴代物与式(III)所示双胍盐酸盐混合加入溶剂1,4-二氧六环中,在碘化亚铜的催化作用下,以及2,2’-联吡啶和碳酸钾的存在下,于40~150℃下搅拌反应5~30小时,反应结束后,反应液后处理制得式(II)所示N-芳基取代的双胍氢溴酸盐类化合物;
所述式(I)所示芳香溴代物与式(III)所示双胍盐酸盐、碘化亚酮、2,2’-联吡啶、碳酸钾的物质的量比为1:0.7~1.3:0.05~0.15:0.1~0.3:3~9。
式(I)中:R3表示苯环上的一个或两个以上取代基,选自氢、C1~C10烷基、C1~C10烷氧基或卤素,优选R3为氢、甲基、甲氧基、氟或氯;
式(III)中:R1,R2各自独立为C1~C10烷基,或者R1,R2和两者之间的N组合形成含N、O的C4~C8的杂环;优选R1,R2各自独立为甲基,或者R1,R2和两者之间的N组合形成吗啉环。
本发明所述的制备方法中,通常所述溶剂1,4-二氧六环的体积用量以式(III)所示双胍盐酸盐的摩尔量计为10~50mL/mmol。
本发明所述制备方法中,所述后处理可采用如下方法:反应结束后,过滤,滤渣用甲醇洗涤,浓缩滤液,柱层析(二氯甲烷:甲醇=10:1,V:V),收集含目标化合物的洗脱液,减压蒸馏,干燥得到目标化合物(II)。
本发明还涉及所述N-芳基取代的双胍氢溴酸盐类化合物的抗肿瘤活性,以及在制备治疗肝癌药物中的应用。
本发明的有益效果主要体现在:(1)N-芳基取代的双胍氢溴酸盐类化合物的新的制备方法,该工艺反应条件温和,操作方便,成本低,有着广泛的工业应用前景。(2)本发明所提供的N-芳基取代的双胍氢溴酸盐类化合物显示出一定的抗肝癌活性,为新药筛选及开发奠定了基础,具有较好的实用价值。
(四)具体实施方式
下面将通过实施例对本发明作进一步的说明,但本发明的保护范围不限于此。
实施例1:化合物(II-1)的制备
在反应容器中加入二甲双胍盐酸盐(0.165g,1.0mmol),对甲氧基溴苯(0.187g,1mmol),碘化亚铜(0.0190g,0.10mmol),2,2’-联吡啶(0.0312g,0.20mmol),磷酸钾(1.27g,6.0mmol),在1,4-二氧六环(10mL)中混合,110℃油浴下搅拌反应15小时;反应结束后,过滤,滤渣用甲醇洗涤,浓缩滤液,柱层析(二氯甲烷:甲醇=10:1,V:V),收集Rf值0.25~0.30的洗脱液,减压蒸馏,干燥得到目标化合物(II-1)0.180g,收率为57%。
1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.53(s,1H),7.52(s,2H),7.27(d,J=8.9Hz,2H),6.87(d,J=8.9Hz,2H),6.83(s,1H),6.74(s,1H),3.71(s,3H),2.95(s,6H).
实施例2:
将反应温度降低到40℃,其他操作同实施例1,得到目标化合物(II-1)0.0158g,收率为5%。
实施例3:
将反应温度升高到150℃,其他操作同实施例1,得到目标化合物(II-1)0.136g,收率为43%。
实施例4:
将反应时间缩短至5小时,其他操作同实施例1,得到目标化合物(II-1)0.032g,收率为10%。
实施例5:
将反应时间延长至30小时,其他操作同实施例1,得到目标化合物(II-1)0.158g,收率为50%。
实施例6:
将二甲双胍盐酸盐的量改为0.215g,1.3mmol,其他操作同实施例1,得到目标化合物(II-1)0.152g,收率为48%。
实施例7:
将二甲双胍盐酸盐的量改为0.116g,0.7mmol,其他操作同实施例1,得到目标化合物(II-1)0.095g,收率为30%。
实施例8:
将碘化亚铜的量改为0.010g,0.05mmol,其他操作同实施例1,得到目标化合物(II-1)0.120g,收率为38%。
实施例9:
将碘化亚铜的量改为0.029g,0.15mmol,其他操作同实施例1,得到目标化合物(II-1)0.142g,收率为45%。
实施例10:
将2,2’-联吡啶的量改为0.016g,0.1mmol,其他操作同实施例1,得到目标化合物(II-1)0.057g,收率为18%。
实施例11:
将2,2’-联吡啶的量改为0.047g,0.3mmol,其他操作同实施例1,得到目标化合物(II-1)0.066g,收率为21%。
实施例12:
将碳酸钾的量改为0.415g,3mmol,其他操作同实施例1,得到目标化合物(II-1)0.063g,收率为20%。
实施例13:
将碳酸钾的量改为1.244g,9mmol,其他操作同实施例1,得到目标化合物(II-1)0.155g,收率为49%。
实施例14:化合物(II-2)的制备
操作同实施例1,只是将对甲氧基溴苯换成对甲基溴苯(0.256g,1.5mmol),制得目标化合物(II-2)0.156g,收率为52%。
1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.33(s,1H),7.56(s,2H),7.26(d,J=8.3Hz,2H),7.10(d,J=8.3Hz,2H),6.76(s,2H),2.96(s,6H),2.25(s,3H).
实施例15:化合物(II-3)的制备
操作同实施例1,只是将对甲氧基溴苯换成溴苯(0.235g,1.5mmol),制得目标化合物(II-3)0.180g,收率为63%。
1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.46(s,1H),7.62(s,2H),6.98-7.44(m,5H),6.81(s,2H),2.97(s,6H).
实施例16:化合物(II-4)的制备
操作同实施例1,只是将对甲氧基溴苯换成3,4,5-三氟溴苯(0.316g,1.5mmol),制得目标化合物(II-4)0.170g,收率为50%。
1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.71(s,1H),7.79(s,2H),7.36(d,J=6.4Hz,1H),7.34(d,J=6.4Hz,1H),6.85(s,2H),2.98(s,6H).
实施例17:化合物(II-5)的制备
操作同实施例1,只是将对甲氧基溴苯换成对氯溴苯(0.191g,1mmol),制得目标化合物(II-5)0.109g,收率为34%。
1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.79(s,1H),7.68(s,2H),7.40-7.46(m,2H),7.30-7.36(m,2H),6.87(s,2H),2.97(s,6H).
实施例18:化合物(II-6)的制备
操作同实施例1,只是将对甲氧基溴苯换成溴苯(0.157g,1mmol),二甲双胍盐酸盐换成吗啉胍盐酸盐(0.208g,1.0mmol),制得目标化合物(II-6)0.194g,收率为59%。
1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.79(s,1H),7.68(s,2H),7.40-7.46(m,2H),7.30-7.36(m,2H),6.87(s,2H),2.97(s,6H).
实施例19:抗肝癌细胞BEL-7402生物活性测试
体外抗肝癌细胞BEL-7402活性测试方法:MTT法
A原理:细胞通过线粒体水解酶将噻唑兰(MTT)分解为不溶于水的蓝紫色结晶并沉积在细胞中,结晶物能被二甲基亚砜溶解,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,间接反映细胞的增殖情况和数量变化。
B细胞:肝癌细胞BEL-7402(购自中国科学院上海生命科学院细胞库)
C实验步骤:
1)样品的准备:对于可溶样品,每1mg用20μLDMSO溶解,取2uL用1000μL培养液稀释,使浓度为100μg/mL,再用培养液连续稀释至使用浓度。
2)细胞的培养
2.1)培养基的配制:每1000mL培养基中含80万单位青霉素,1.0g链霉素,10%灭活胎牛血清。
2.2)细胞的培养:将肿瘤细胞接种于培养基中,置37℃,5%CO2培养箱中培养,3~5d传代。
3)测定样品对肿瘤细胞生长的抑制作用
将细胞用EDTA-胰酶消化液消化,并用培养基稀释成1×105/mL,加到96孔细胞培养板中,每孔100uL,置37℃,5%CO2培养箱中培养。接种24h后,加入用培养基稀释的样品,每孔100μL,每个浓度加3孔,置37℃,5%CO2培养箱中培养,72h后在细胞培养孔中加入5mg/mL的MTT,每孔10μL,置37℃孵育4h,加入DMSO,每孔150μL,用振荡器振荡,使甲臢完全溶解,用酶标仪在570nm波长下比色。以同样条件用不含样品,含同样浓度DMSO的培养基培养的细胞作为对照,计算样品对肿瘤细胞生长的半数致死浓度(IC50),结果如表1所示。
以肝癌细胞BEL-7402为模型,以顺铂为阳性对照品,测定了实施例中制备的双胍类化合物(II-1)~(II-6)6个样品体外对肝癌细胞生长的抑制作用。结果显示,本实验所测试的样品中,化合物(II-4)和化合物(II-5)对实验所用的肝癌细胞BEL-7402有一定的抑制作用(结果详见表1)。
表1各化合物对BEL-7402的IC50(ug/mL)
测试编号 |
化合物 |
IC50 |
1 |
(II-1) |
>100 |
2 |
(II-2) |
>100 |
3 |
(II-3) |
>100 |
4 |
(II-4) |
64.32 |
5 |
(II-5) |
82.13 |
6 |
(II-6) |
>100 |
7 |
顺铂 |
7.82 |