CN104222643A - 小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂，它是小刺猴头菌株经接种、摇瓶培养、种子罐发酵；发酵液经95-100℃蒸煮，过滤，滤液浓缩成的浸膏；在饲料中添加了0.05-0.75%上述的小刺猴头发酵浸膏，能够提高肉鸡日增重，显著促进动物生长，日增重提高了8.96%，提高饲料转化率，提高动物生产性能，同时还能提升禽肉的品质，降低鸡肉胆固醇含量，肉鸡胸肌、腿肌、肝脏中胆固醇的含量分别降低30.67%、48.18%和57.04%。

Description

小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂

技术领域

本发明属饲料添加剂领域，具体地说是小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂及用于生产低胆固醇畜禽产品的饲料。 

背景技术

抗菌、抗病毒一直是困扰养殖行业的一大问题，而使用抗生素类药物的残留问题已经引起世界各国高度重视。从2006年1月1日起，欧盟国家全面禁止食品类动物使用抗生素促生长饲料添加剂。所以寻找一种绿色、高效、安全的饲料添加剂显得十分迫切。近年来，应用有益微生物进行饲料添加剂的开发和生产，为饲料添加剂提供了一条新发展途径，为食品工业、饲料工业和畜禽饲养提供了一种健康、无毒、无污染的选择。 

小刺猴头菌[Hericium caput-medusae (Bull.:Fr.) Pers.] 是一种珍稀的食药用真菌。现代药理学研究表明，小刺猴头菌具有提高机体耐缺氧能力和心血输出量，加速血液循环，清除体内自由基、提高免疫力，抑制肿瘤细胞生长等功效，尤其对胃粘膜有较好的保护作用。科研人员发现利用小刺猴头菌发酵得到的人工发酵浸膏在有效成分、药理活性和临床作用等方面与小刺猴头子实体有很大的相似性。小刺猴头发酵浸膏除含有多糖外，还有氨基酸、微量元素、维生素、酚类、萜类等物质，具有广泛的药理活性，现已广泛地将其用于治疗消化不良、胃溃疡、十二指肠溃疡、食道癌、胃癌、十二指肠癌等消化***疾病与肿瘤的治疗中。目前已有多种来源于小刺猴头发酵浸膏的药品上市。 

 目前对小刺猴头的研究都仅着眼于药品或保健食品的开发，在国内外市场上，尚未见到利用小刺猴头菌做饲料添加剂的相关产品。 

发明内容

本发明目的是提供一种促生长、提供免疫能力、降低食品类动物胆固醇含量的纯天然饲料添加剂，小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂。 

小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂，它是小刺猴头菌株经接种、摇瓶培养、种子罐发酵；发酵液经95-100℃蒸煮，过滤，滤液浓缩成的浸膏； 

所述的种子罐发酵的培养基为：0.3%葡萄糖，0.03%KH₂PO₄，0.3%蛋白胨，0.05%氯化钠，维生素B₁，消泡剂，余量为水；

所述的浸膏多糖含量不低于5%。

一种用于生产低胆固醇畜禽产品的饲料，它是在饲料中添加了0.05-0.75%上述的小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂； 

所述的添加量为0.3%。

本发明提供了小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂，它是小刺猴头菌株经接种、摇瓶培养、种子罐发酵；发酵液经95-100℃蒸煮，过滤，滤液浓缩成的浸膏；在饲料中添加了0.05-0.75%上述的小刺猴头发酵浸膏，能够提高肉鸡日增重，显著促进动物生长，日增重提高了8.96%，提高饲料转化率，提高动物生产性能，同时还能提升禽肉的品质，降低鸡肉胆固醇含量，肉鸡胸肌、腿肌、肝脏中胆固醇的含量分别降低30.67%、48.18%和57.04%。 

具体实施方式

    实施例1小刺猴头发酵浸膏的制备

（1）斜面菌种培养：

于无菌室超净台迅速将小刺猴头纯菌株接种到专用斜面培养基中，26-28℃下培养7-9天，得液体摇瓶菌种；所述专用斜面培养基配方为：马铃薯100：葡萄糖1：磷酸二氢钾1：琼脂1，pH自然；

制法：将新鲜马铃薯200 g去皮切成小块加水1000 ml煮沸25分钟，用纱布过滤取滤液，琼脂预先浸湿后加入滤液中煮沸同时不断搅拌，直至完全溶解，然后分别加入葡萄糖、磷酸二氢钾等物质搅拌均匀，趁热分装于试管中，塞好瓶塞后置于灭菌锅灭菌，蒸汽压力1.1个大气压，120℃，时间30分钟，取出后自然降温至40-45℃，铺成斜面，空白培养1天，无杂菌方可使用。

（2）摇瓶培养： 

一级摇瓶接种：于无菌室超净台将所述步骤（1）中得到的液体摇瓶菌种接入摇瓶后塞上棉塞，放摇瓶机培养；

二级摇瓶接种：于无菌室超净台迅速取下一、二级摇瓶瓶塞，将一级种子迅速倒入二级摇瓶内，塞上棉塞，盖上纱布，系上线绳，放摇瓶机培养。

培养条件：将一、二级摇瓶置于摇瓶机内于180-230转，26-28℃条件下振荡培养4-7天，4℃冰箱备用，得到可作为一级种子罐的液体种子； 

所述摇瓶种子培养基配方（一、二级摇瓶制法相同）

配方：3-4%葡萄糖，0.03%KH₂PO₄，0.3%蛋白胨，0.05%氯化钠，适量维生素B₁，少许消泡剂。

制法：将上述试剂用蒸馏水加热溶解，500 ml瓶（一级摇瓶）内装量100 ml，2000 ml瓶（二级摇瓶）内装量500 ml，塞好棉塞，装入灭菌锅于一个大气压、121℃灭菌30分钟，冷却至室温放置一天，备用； 

（3）一级种子罐发酵：扣除灭菌过程中的冷凝水，然后按配方在种子罐内加入液体培养基的原料和消泡剂，通入热蒸汽加热到120℃，0.12-0.13兆帕个大气压下，30-40分钟；灭菌冷却后将步骤（2）得到的液体种子接入培养，接种量5-10%，罐温26-28℃，通气量1：0.5（V/V·min），罐压0.05兆帕，经5-7天通气培养，菌种达到对数生长期，得到种子培养液。所用液体培养基配方为：0.3%葡萄糖，0.03%KH₂PO₄，0.3%蛋白胨，0.05%氯化钠，适量维生素B₁，少许消泡剂，其余为水。

（4）发酵罐发酵：扣除灭菌过程中的冷凝水，然后按配方在发酵罐内加入发酵用培养基原料和消泡剂，通入热蒸汽加热到 120℃，0.2兆帕个大气压下，30分钟；灭菌冷却后，从一级种子罐内将步骤（3）得到的种子液接入发酵罐，接种量5-10%，通气培养，罐温28℃，搅拌转速150r/m，通气量1:0.4-0.5（V/V·min），罐压0.05兆帕，培养时间5-7天，得到发酵液。所用发酵用培养基配方为：0.3%葡萄糖，0.03%KH₂PO₄，0.3%蛋白胨，0.05%氯化钠，适量维生素B₁，少许消泡剂，其余为水。 

（5）发酵液加温：通蒸汽给发酵罐加温，温度加到100℃后保持10分钟。 

（6）滤液过滤：将发酵液过板框过滤，不能漏料，滤液要求澄清透明，滤液流入贮料罐内贮存。化验多糖含量不低于5%。 

对发酵液中总糖的测定采用斐林试剂法：取发酵液1ml置于25ml比色管中，加入2mol/L H₂SO₄15ml，把比色管放入沸水中溶15分钟；于250ml三角瓶中加入菲林甲、乙试液各5ml；将沸溶后的中间体迅速冷却，用40%NaOH调pH6.8后置入100ml容量瓶中，反复冲洗比色管定容；取pH6.8的中间体5ml于备好的250ml三角瓶中，置1200W电炉使其沸腾，从沸腾起计时1分钟；用0.1%葡萄糖标准液滴定；记下消耗数为y；测定空白；250ml三角瓶中加入菲林甲、乙液各5ml，不加中间体，直接以0.1%葡萄糖标准液滴定，消耗数为x，然后计算。总数=（x-y）×2 

（7）滤液浓缩为浸膏：罐温控制在60~80℃之间，蒸汽压力0.04-0.06兆帕左右；真空罐真空度控制在0.06-0.09兆帕。在最上的加热管要露出来时加料，每次加料要少加勤加，约30分钟。浓缩到所有的料全部进完时，将两个缸的料合在一起，放缸前将真空度下降，罐温度提高到90℃左右。料浓缩到最上边的加热管露出取样测婆美度，然后就要勤测婆美度控制在33-38即要出料。每次取样、放料时，先停泵，真空回零后再取样测比重。出料装桶时取样测多糖，测定方法同（6）中发酵液中总糖的测定。料出完彻底清洗罐内。浓缩浸膏即得所述小刺猴头发酵物饲料添加剂。

实施例1   小刺猴头菌流浸膏的测定

本品为猴头菌属小刺猴头（Hericium caput-medusae (Bull.:Fr.) Pers.）的发酵液与菌丝提取液的浓缩浸膏。多糖含量不得低于5%（斐林试剂法）。本品显褐色、气微香、味微苦。

多糖含量：葡萄糖标准曲线制备 精密称取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品0.1g，置100ml容量瓶中，加水溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含无水葡萄糖1mg）。 

标准曲线的制备 精密量取葡萄糖标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6ml，分别置于25ml量瓶中，加水至2.0ml，分别精密加3,5-二硝基水杨酸试液1.5ml，混匀，在沸水浴中加热5分钟，取出，立即用冷水冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，用水作空白，按照分光光度法（《中华人民共和国药典》2005年版二部附录ⅣA）在520nm的波长处测定吸光度，绘制标准曲线。 

供试品溶液的制备 取本品1g，精密称定，置50ml量瓶中，加水30ml，50℃水浴加热20分钟，取出，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。 

测定法 总糖的测定 精密量取供试品溶液2ml置25ml量瓶中，加6mol/L盐酸溶液5ml，水5ml，在沸水浴中加热30分钟，冷却后加酚酞指示液1滴，用20%氢氧化钠溶液调节至微红色，加水至刻度，滤过，精密量取滤液1ml，按照标准曲线制备项下的方法，至“加水至2.0ml” 起，依法测定吸光度，从标准曲线中读出糖的浓度值，即得。 

单糖的测定 精密量取供试品溶液2ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密吸取滤液1ml，按照标准曲线制备项下的方法，至“加水至2.0ml” 起，依法测定吸光度，从标准曲线中读出糖的浓度值，即得。 

    多糖的浓度按总糖的浓度，减去单糖的浓度。 

    小刺猴头发酵浸膏产品的主要理化指标选择了饲料六大养分及有效活性成分，测定如表1。 

实施例3  小刺猴头发酵浸膏促进肉鸡生长试验

1、材料与方法

1.1试验动物与分组

选择1日龄Arbor Acres (AA)肉鸡3000只，公母比例各半，体重（36.25士0.38）。经观察6h无异常，然后将其随机分成2组，每组分3个重复，每个重复为500只。

1.2试验动物日粮组成与营养 

试验饲料原料玉米、大豆粕、磷酸氢钙符合国家卫生标准（GB/13078-2001）的要求。参照国家肉鸡的饲养标准（NY/T33-1986）和NRC（1994）家禽饲养标准设计日粮，小刺猴头发酵浸膏按照0.3%和0%（对照组）比例添加到基础日粮（日粮中不添加任何药物添加剂）中并搅拌混匀。

1.3肉鸡饲养试验日期与管理 

所有试验鸡均饲养于同一个鸡舍内，用塑料网分割成6个小区。由专人负责，地面平养，育雏期每平方米30只，育成期（4-8周龄）每平方米12只。用料桶人工饲喂，自由采食。用饮水器自由饮水。育雏第一周室温控制在31℃-32℃，以后每周降低2-3℃，四周后保持在23-25℃。第一周24h光照，以后自然光照。定期进行疫苗的免疫接种，试验期为42d。

2小刺猴头发酵浸膏对仔鸡全期增重效果及饲料转化效率的影响 

具体试验结果见表2：

由表2中结果可以看出在饲料中添加小刺猴头发酵浸膏饲喂AA肉鸡，添加0.3%能有效地提高其增重效果，试验组的日增重与空白对照组差异达到显著水平（P<0.05），比对照组日增重提高了8.96%。另外日粮中添加0.3%培养物能显著改善饲料的转化率，与对照组相比差异达到显著水平(P<0.05)。

实施例4  小刺猴头发酵浸膏对肉鸡免疫功能的影响

1、材料

试验用肉鸡是14、21、28日龄AA商品肉鸡。以添喂小刺猴头发酵浸膏的肉仔鸡组为试验组，添加量为0.3%；日粮中未添加小刺猴头发酵浸膏喂养的肉鸡组为空白对照组。随机从各组抽取公、母鸡各10羽，经放血屠宰去皮，分别取其胸腺、脾脏、法氏囊称重，计算免疫器官指数。

免疫器官指数=免疫器官质量/体重×100 

2、数据处理与分析

实验数据采用SPSS 19.0统计软件进行统计分析。

3、结果与分析 

胸腺指数、脾脏指数、法氏囊指数的分析结果见表3：

由表3的结果可知，在14日龄时，试验组肉鸡胸腺指数显著高于空白组（P<0.05）；在21日龄时，试验组脾脏指数显著高于空白组（P<0.05）；各试验组的法氏囊指数均高于空白组，虽无显著差异（P>0.05），但各试验组与空白组相比其法氏囊退化速度减慢，说明小刺猴头发酵浸膏对其延缓退化起到一定功效，小刺猴头发酵浸膏可通过提高免疫器官的重量进而来增强机体免疫功能。

实例5 小刺猴头发酵浸膏对鸡肉中胆固醇含量的影响

1、材料

试验用肉鸡是42日龄AA商品肉鸡。以添喂小刺猴头发酵浸膏的肉仔鸡组为试验组，添加量为0.3%；日粮中未添加小刺猴头发酵浸膏喂养的肉鸡组为空白对照组。随机从各组抽取公、母鸡各10羽，经放血屠宰去皮，随即取肝脏及相同部位新鲜胸肌、腿肌肉，冻存待分析。

2、检测方法 

2.1胆固醇含量

将收集的样本胸肌、腿肌、肝脏取出，用剪刀尽量剪碎，置于平皿上搅拌均匀，准确称取1g加入匀浆介质匀浆，根据中华人民共和国国家标准GB/T9695.24-2008《肉与肉制品胆固醇含量测定》中描述的方法进行胸肌、腿肌、肝脏胆固醇含量测定，因为肉与肉制品中的脂类经皂化后，胆固醇作为不皂化物质被提取出来，用气相色谱法测定，外标法定量。

2.2数据处理与分析 

实验数据采用SPSS 19.0统计软件进行统计分析。

3、结果与分析 

胸肌、腿肌、肝脏胆固醇含量的分析结果见表4：

由表4的结果可知，日粮中添加0.3%的小刺猴头发酵浸膏能显著降低肉鸡胸肌、腿肌、肝脏中胆固醇的含量（P<0，05），含量分别降低30.67%、48.18%和57.04%。

实施例6小刺猴头发酵浸膏不同添加比例对肉鸡生长的影响

1、材料与方法

1.1试验动物与分组

选择1日龄AA肉鸡3000只，公母比例各半，体重（35.72士0.41）。经观察6h无异常，然后将其随机分成6组，每组500只。

1.2试验动物日粮组成与营养 

试验饲料原料玉米、大豆粕、磷酸氢钙符合国家卫生标准（GB/13078-2001）的要求。参照国家肉鸡的饲养标准（NY/T33-1986）和NRC（1994）家禽饲养标准设计日粮，小刺猴头发酵浸膏按照0%（对照组），0.05%，0.1%，0.25%，,0.5%和0.75%的比例添加到基础日粮（日粮中不添加任何药物添加剂）中并搅拌混匀。

13肉鸡饲养试验日期与管理 

所有试验鸡均饲养于同一个鸡舍内，用塑料网分割成6个小区。由专人负责，地面平养，育雏期每平方米30只，育成期（4-8周龄）每平方米12只。用料桶人工饲喂，自由采食。用饮水器自由饮水。育雏第一周室温控制在31℃-32℃，以后每周降低2-3℃，四周后保持在23-25℃。第一周24h光照，以后自然光照。定期进行疫苗的免疫接种，试验期为42d。

2、小刺猴头发酵浸膏不同添加比例对仔鸡全期增重效果及饲料转化效率的影 

响，具体试验结果见表5：

 

表5小刺猴头发酵浸膏不同添加比例对仔鸡生长影响

从表5可以看出，基础饲料中添加0.1-0.5%的小刺猴头发酵浸膏可以显著提高仔鸡的日增重和饲料转化率，促进仔鸡的生长。而添加比例高于0.5%，不能进一步提高仔鸡的日增重。

Claims (5)

1.小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂，它是小刺猴头菌株经接种、摇瓶培养、种子罐发酵；发酵液经95-100℃蒸煮，过滤，滤液浓缩成的浸膏。

2.根据权利要求1所述的小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂，其特征在于：所述的种子罐发酵的培养基为：0.3%葡萄糖，0.03%KH₂PO₄，0.3%蛋白胨，0.05%氯化钠，维生素B₁，消泡剂，余量为水。

3.根据权利要求1所述的小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂，其特征在于：所述的浸膏多糖含量不低于5%。

4.一种用于生产低胆固醇畜禽产品的饲料，它是在饲料中添加了0.05-0.75%上述的小刺猴头发酵浸膏饲料添加剂。

5.根椐权利要求4所述的一种用于生产低胆固醇畜禽产品的饲料，其特征在于：所述的添加量为0.3%。