CN104203231A - 治疗和预防眼疾病的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了可用于通过CCR3的抑制而治疗和预防新血管AMD的组合物和方法。所述组合物和方法可用于治疗和预防包括但不限于新血管AMD的疾病和障碍。

Description

治疗和预防眼疾病的方法
技术领域
本发明大体上涉及将能够抑制CCR3或VEGF的表达和/或活性的试剂和VEGF信号抑制剂单独地或组合地用于治疗和/或预防眼疾病例如继发于干(萎缩性)黄斑变性的血管新生性老年性黄斑变性等眼疾病的方法。
背景技术
血管新生也被称为血管生成，是形成新的血管的过程。血管新生在正常发育期间发生，并且还在组织受伤之后的伤口愈合中起重要作用。然而，血管新生也被认为是许多病理学状态包括例如癌症、类风湿性关节炎、动脉硬化、银屑病和眼的疾病包括糖尿病性视网膜病、糖尿病性黄斑水肿、和血管新生AMD的重要原因。在发达国家中，与血管渗漏和/或血管新生相关的眼疾病是绝大多数视觉发病率和失明的原因(Campochiaro(2004)Expert Opin.Bioi.Ther.4:1395-402)。与眼部血管新生和血管渗透性增加相关的眼疾是视力减弱和失明的主要原因。
在发达国家中，老年性黄斑变性(AMD)是失明的主要原因。AMD有两种主要的临床表现：萎缩性(干性AMD)和湿性AMD。萎缩性AMD的特征在于视网膜色素上皮(RPE)和视神经视网膜的变性。萎缩性AMD的早期阶段与RPE细胞层下的玻璃疣的形成有关。早期萎缩性AMD可以发展成为末期疾病，其中RPE完全变性并且在黄斑区域中形成明显分界的RPE萎缩区域：“地图样萎缩”。在此疾病形式中，RPE的变性导致黄斑的光感受器的继发性死亡，并且在这些情况中导致严重的视力减弱。
患有干性或地图样萎缩AMD的AMD患者中的约10-20％发生继发的脉络膜血管新生(CNV)。此疾病形式被称为“湿AMD”且可以与一些最严重的视力减弱相联系。在湿AMD中，新的脉络膜血管(新血管)在脉络膜中增殖或可以贯穿Bruch膜并增殖进入RPE和视神经视网膜并在其下增殖(参见例如Campochiaro et al.(1999)Mol.Vis.5:34)。在典型的情况中，萎缩性AMD在湿形式发生之前就在眼中发生，然而，在罕见的偶然情况中，新血管或湿形式可以在没有发生先前的萎缩性形式的情况下发生。在该疾病的两种形式中，均由于感光细胞的死亡而发生视力减弱，但在湿性AMD中，在CNV期间形成的AMD流体渗漏和偶然发生的来自渗漏血管的内部出血(血管渗透性增加)也导致视力减弱。
对于AMD，已成功开发出新的治疗以解决湿AMD的一些方面，特别是由抑制血管内皮生长因子(VEGF)或VEGF受体信号转导途径的各种分子导致的自CNV的渗漏血管出血减少。
趋化因子为涉及白细胞的运输和募集的一大类小蛋白质(综述参见Luster,New Eng.J.Med.,338,436-445(1998))。它们由一大类细胞释放并且起吸引和活化包括嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、T和B淋巴细胞的各种细胞类型的作用。根据与趋化因子蛋白的氨基末端邻近的两个保守的半胱氨酸残基的间距分类，有两类主要的趋化因子，即CXC-(α)和CC-(β)趋化因子。
趋化因子与属于G-蛋白偶联的七种跨膜-域蛋白家族的特异性细胞表面受体结合(综述参见Luster,1998)。除其他反应以外，趋化因子受体的活化导致细胞间钙增加、细胞形状变化、细胞粘附分子的表达增加、脱粒和促进细胞迁移(趋化作用)。
迄今为止，CC趋化因子受体的9个成员已被识别(CCR-l至9)。对于本发明特别重要的是CC-趋化因子受体-3(CCR-3)，其主要在嗜酸性粒细胞上表达，并且也在嗜碱性粒细胞、肥大细胞和Th2细胞上表达(Luster,1998)。已知在CCR-3处起作用的趋化因子例如RANTES、MCP-3和MCP-4募集和活化嗜酸性粒细胞。
先前已显示人微血管内皮细胞表达CCR3(Salcedo等,2001)且在CCR3受体处活性的激动剂能够起血管内皮的趋化剂的作用。通过在鸡胚绒毛***和主动脉环两者中的血管内皮细胞上的此趋化作用，此过程能够促进血管的血管生成(Salcedo等，2001)。
这些发现随后被扩展至AMD中的研究(Takeda等，2009)，其证明抗CCR3抗体、抗CCR3激动剂抗体、或CCR3的药理学抑制剂的玻璃体内注射有效限制小鼠中激光诱导后的CNV程度。在接受激光的在CCR3或特异性CCR3激动剂基因中具有纯合基因缺陷的小鼠中确认了这些数据。其他数据还显示在CNV的激光诱导之后CCR3激动剂CCL11和CCL24被诱导(Takeda等,2009)。
将这些研究扩展至在嗜酸性粒细胞或肥大细胞(与CCR3的表达关系最密切的细胞)的产生方面有缺陷的小鼠中，证明这些小鼠保持响应激光光凝固术产生CNV的能力并且在阻断此疾病中仍然对于玻璃体内的CCR3拮抗敏感。
所述研究强烈地暗示在限制激光诱导的CNV生成中CCR3的作用机制不是通过对于体嗜酸性粒细胞或肥大细胞的作用。玻璃体内的抗CCR3治疗曾被用于控制这些模型中的疾病这一事实也支持在眼中的更多局部的作用。研究还暗示抗CCR3治疗不限制巨噬细胞或中性粒细胞募集进入激光诱导的CNV损伤(Takeda等，2009)。
目前已有若干额外的独立的研究确认了CNV AMD小鼠模型中的这些发现；特别地，在激光有道德CNV AMD模型中口服给药YM-344031是有效的(Mizutani等，2011)。然而，尽管抗VEGF治疗在此模型中是有效的，但当将CCR3拮抗剂给药至视网膜下的空间时，这样的试剂似乎不能限制由共同给药基质胶诱导的血管生成(Li等，2010)。
在其他研究中，使用抗CCR3抗体的CCR3中合作用不改变响应激光而在眼中生成的VEGF的量，暗示CCR3和VEGF在控制CNV AMD中的作用可能是独立的。相似地，中和抗VEGF mAb的玻璃体内注射对于内皮细胞上存在的CCR3的表达没有作用，进一步支持在啮齿动物中在控制CNV中的此独立作用的假设(Takeda等，2009)。
检查角膜病理性血管生成的研究也发现损伤/***素E2诱导的血管生成与VEGF无关，但与嗜酸性粒细胞趋化因子有关，再次暗示在控制血管生成中嗜酸性粒细胞趋化因子/CCR3轴可以为与VEGF无关的机制(Liclican等，2010)。
通常认为抗VEGF治疗在人类和动物模型中均通过降低已进入视网膜的新形成的脉络膜血管的血管渗透性而控制CNV，而不是直接作用于血管新生。研究也已暗示在人冠状动脉内皮细胞的培养物中，体外培养物的渗透性可以通过CCR3(嗜酸性粒细胞趋化因子)的激动剂而增加(Jamaluddin等，2009)，显示CCR3拮抗作用通常影响眼部血管的血管渗透性的可能性。
Takeda等，2009的初始研究显示CCR3在人CNV视网膜中表达但不在仅有萎缩性AMD的视网膜中表达，没有发展成为CNV疾病的临床证据。表达用脉络膜脉管***的标志物CD31(PECAM-1)共同定位，且对于CNV AMD中的血管的特异性通过在视网膜纤维化和黑素瘤两者中均不存在染色而确认(Takeda等，2009)。在手术切除的人脉络膜新血管AMD组织中，天然CCR3激动剂嗜酸性粒细胞趋化因子-1(CCL11)、嗜酸性粒细胞趋化因子-2(CCL24)和嗜酸性粒细胞趋化因子-3(CCL26)也均被发现在间质中表达并且与血管共同定位(Takeda等，2009)。在与小鼠模型相似的模型中，迄今为止没有嗜酸性粒细胞或肥大细胞与人AMD相关的证据，且实际上在人CNV AMD损伤中定位这些细胞的尝试仍未获得任何显著的发现(Takeda等，2009)。此外，嗜酸性粒细胞趋化因子被确认为人AMD的可能的血清生物标志物(Mo等，2010)，其中发现其与I型和II型AREDS患者和萎缩性AMD显著地相关(p<-0.02-p<0.005)，但有趣的是与CNV AMD无关，但相同研究中的尸体解剖人眼的检验暗示与早期AMD、萎缩性AMD和CNVAMD的关系，最强的染色与CNV AMD中的血管新生内皮相关。在获自早产患者的视网膜病变的玻璃体样品的比较中，相对于血管惰性的疾病，还发现嗜酸性粒细胞趋化因子与血管活性疾病显著相关，暗示CCR3可能参与促进视网膜循环中的血管生成(Sato等，2009)。
因此，先前已证明AMD机械地发展自两个不同的且不相关的途径：血管生成和血管渗透性。已显示AMD可以使用抗VEGF抑制剂治疗(WO2007/064752)。已显示使用CCR3拮抗剂的玻璃体内治疗可以影响CNV损伤的大小(Takeda等，2009)。
出人意料地，申请人已发现，与由异位的视网膜VEGF生成诱导的或由高压氧处理诱导的新视网膜血管不同，CCR3拮抗作用对于特异性地降低脉络膜新血管的血管渗透性和血管生成具有作用，并因此可用于特异性地治疗/预防(包括减慢疾病和/或其症状的发展)与血管新生AMD相关的脉络膜血管渗透性。
申请人还已发现，阻断疾病的血管生成途径和渗透性途径两者在体内产生功能响应。因此，用抗VEGF抑制剂和CCR3抑制剂的组合治疗对于新血管AMD是有效的组合治疗和/或预防，其中两种试剂均能独立地影响损伤生长和血管渗透性并产生额外的作用。
仍需要治疗眼部血管新生障碍特别是血管新生AMD的新方法。本发明涉及这样的方法。
发明内容
本发明涉及通过CCR3的抑制例如CCR3蛋白的表达和/或活性的抑制治疗和/或预防眼疾病和障碍的方法。在具体的实施方案中，能够通过本发明的方法治疗和/或预防的眼疾病与血管新生和血管渗透性增加有关。具体而言，这样的疾病包括例如但不限于老年性黄斑变性等。
在一个实施方案中，此处中公开的方法包括：向需要治疗和/或预防眼疾病的对象给药包含抑制CCR3的试剂例如抑制CCR3的表达和/或CCR3蛋白的活性的试剂的药物组合物。并非意图将本发明限于疾病的任何具体的阶段(例如早期或晚期)。
在一些实施方案中，本发明提供了通过阻断CCR3活化的相关的酶活性和所有的下游效应器而抑制CCR3的方法。
在一些实施方案中，脉络膜新血管渗透性的预防和/或降低导致对与新血管AMD相关的症状的预防和/或降低(即防止疾病的进展)。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗和/或预防患有AMD或具有患AMD的风险的对象中的AMD的方法，包括向对象给药包含能够抑制CCR3蛋白的活性和/或表达的试剂的药物组合物，其中CCR3蛋白的抑制降低AMD的进展或使AMD的症状停止。
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗和/或预防患有AMD或具有患AMD的风险的对象的方法，包括向对象给药包含能够抑制CCR3蛋白的活性和/或表达的试剂的药物组合物，且另外与所述试剂组合给药抗VEGF抑制剂或VEGF信号抑制剂，其中CCR3蛋白的抑制降低AMD的进展或使AMD的症状停止。
在另一个实施方案中，本发明提供了预防患有干AMD或地图样萎缩AMD的对象中的萎缩视网膜背景上的CNV损伤的发展的方法，包括向对象给药包含能够抑制CCR3蛋白的活性和/或表达的试剂的药物组合物，其中CCR3蛋白的抑制预防这样的损伤的发展，所述试剂可以单独给药或与抗VEGF抑制剂组合给药。
在另一个实施方案中，本发明提供了预防萎缩性和非血管性AMD转化/进展为新血管AMD的方法，包括向对象给药包含能够抑制CCR3蛋白的活性和/或表达的试剂的药物组合物，其中对CCR3蛋白的抑制阻止了这样的向新血管AMD的转化，所述试剂可以单独给药或与抗VEGF抑制剂组合给药。
在一些实施方案中，抑制CCR3的试剂能够抑制CCR3的表达，例如抑制CCR3RNA的翻译以产生CCR3蛋白。在可选的实施方案中，抑制CCR3的试剂能够抑制CCR3蛋白活性。对于此处所公开的方法中的应用，涵盖任何试剂。在一些实施方案中，实际可以为小分子、核酸、核酸类似物、蛋白、抗体、肽、适配体或其变体或片段。在一些实施方案中，试剂为核酸试剂例如RNAi试剂，例如siRNA、shRNA、miRNA、dsRNA或核酶或其变体。
在一些实施方案中，抑制CCR3蛋白活性的试剂为小分子，例如但不限于CCR3蛋白的小分子可逆抑制剂或不可逆抑制剂。在一些实施方案中，这样的小分子为基于吗啉-乙酰胺的化合物。在一些实施方案中，CCR3的小分子抑制剂为例如但不限于4-[[[[[[(2s)-4-[(3,4-二氯苯基)甲基]-2-吗啉基]甲基]-氨基]羰基]-氨基]甲基]苯甲酰胺或其药学上可接受的盐(CCR3抑制剂‘994)。参见美国专利第7,157,457号和第7,531,651号。
在另一个实施方案中，这样的小分子为基于吗啉脲的化合物。在一些实施方案中，CCR3的小分子抑制剂为例如但不限于N-[[(2S)-4-[(3,4-二氟苯基)甲基]-2-吗啉基]-甲基]-3-[(甲基磺酰基)氨基]-苯乙酰胺或其药学上可接受的盐(CCR3抑制剂‘575)。参见美国专利第7,101,882号。
在一些实施方案中，当对象被给药包含CCR3的抑制剂的药物组合物时，所述方法还可以包括向对象给药额外的治疗剂，例如但不限于包括AMD的眼疾病的治疗中使用的治疗剂等。应理解，用于治疗眼部疾病的治疗剂的给药可以涉及某些手术的施用，例如但不限于视网膜聚焦激光光凝固术、全视网膜光凝固术、玻璃体内给药的甾类例如去炎松、玻璃体内给药的包含氟轻松的甾类植入物、和玻璃体内给药的抗VEGF治疗剂例如帕唑帕尼、和
在一些实施方案中，如此处公开的用于新血管眼疾病或障碍的治疗和/或预防的方法可施用于对象例如哺乳动物对象。在一些实施方案中，给药抑制CCR3蛋白的活性或表达的试剂的对象为人类。
附图说明
图1显示用GW766994进行***地治疗后通过荧光血管造影获得的C57Bl6小鼠中的CNV组定量。上方的图显示每眼的平均CNV损伤大小及相应的95％置信限。下方的图显示眼底检查图像的实例，在CNV的激光诱导后1周和2周时用CCR3拮抗剂4-[[[[[[(2s)-4-[(3,4-二氯苯基)甲基]-2-吗啉基]甲基]-氨基]羰基]-氨基]甲基]苯甲酰胺(CCR3抑制剂‘994)(2-30mg/kg QD口服)和谱选择性激酶抑制剂帕唑帕尼(5-[[4-[(2,3-二甲基-2h-吲唑-6-基)甲基氨基]-2-嘧啶基]氨基]-2-甲基苯磺酰胺)(20mg/kg QD口服)治疗小鼠后通过小鼠视网膜的直接荧光血管造影测定。
图2显示C57Bl6小鼠中平均CNV组定量及相应的95％置信限，是在CNV的激光诱导后1周和2周时用CCR3抑制剂‘994(8-30mg/kg QD和8mg/kg BID口服)和谱选择性激酶抑制剂帕唑帕尼(pazopanib，20mg/kg QD口服)治疗小鼠后通过荧光血管造影测定。
图3显示JR5558小鼠中平均CNV组定量，是在用CCR3抑制剂‘994进行***地治疗后通过荧光血管造影测定。上方的图显示每眼的平均总CNV损伤面积及相应的95％置信限。中间的图显示每眼的CNV损伤总数及相应的95％置信限，下方的图显示用CCR3抑制剂‘994(2-30mg/kg QD)治疗小鼠后小鼠视网膜的直接荧光血管造影。在P14和P26之间给药化合物12天。
图4显示用8mg/kg CCR3抑制剂‘994BID***性治疗后通过荧光血管造影测定的在JR5558mice小鼠中的CNV的组定量。上方的图显示每眼的平均CNV损伤总面积及相应的95％置信限。中间的图显示每眼的CNV损伤总数及相应的95％置信限，下方的图显示用CCR3抑制剂‘994(8mg/kgBID)治疗小鼠后小鼠视网膜的直接荧光血管造影。在P14和P26之间将化合物给药12天。
图5显示用CCR3抑制剂‘994(8-30mg/kg QD)治疗小鼠之后JR5558的脉络膜(移除视网膜)中血管CNV的组织化学检测，使用同工凝集素B4染色。在P14和P26之间给药化合物12天。
图6显示用CCR3抑制剂‘994(8-30mg/kg QD)治疗小鼠之后JR5558的脉络膜(移除视网膜)中血管CNV的组织化学检测，使用同工凝集素B4染色。在P14和P26之间将化合物给药12天。
图7显示使用5ul 1-10mg/ml CCR3抑制剂‘994BID给药至双眼进行局部治疗，通过荧光血管造影测定的JR5558小鼠中的CNV的组定量，并与***性给药8mg/kg CCR3抑制剂‘994腹腔注射BID相比较。上方的图显示每眼的平均CNV损伤总面积及相应的95％置信限。下方的图显示用CCR3抑制剂‘994局部施用或***性施用(8mg/kg腹腔注射BID)治疗小鼠之后每视网膜的CNV损伤总数及相应的95％置信限。在P14和P26之间将化合物给药12天。
图8显示在用运载体、100ug抗-VEGFR2腹腔注射QD、30mg/kgCCR3抑制剂‘994腹腔注射QD、100ug抗-VEGFR2腹腔注射QD加30mg/kg CCR3抑制剂‘994腹腔注射QD和50ug抗-VEGFR2腹腔注射QD加30mg/kg CCR3抑制剂‘994腹腔注射QD的任一种***性给药之后通过荧光血管造影测定的JR5558小鼠中的CNV的组定量。上方的图显示每视网膜的CNV损伤总面积及相应的95％置信限。下方的图显示每视网膜的CNV损伤总数及相应的95％置信限。在P14和P26之间给药CCR3抑制剂‘994，持续12天。自P14起给药抗-VEGFR2，持续6天，且自P19起再给药5天。
图9显示在用运载体、100ug抗-VEGFR2腹腔注射QD、30mg/kgCCR3抑制剂‘994腹腔注射QD、或100ug抗-VEGFR2腹腔注射QD加30mg/kg GW766994腹腔注射QD任一种***性给药之后通过荧光血管造影测定的JR5558小鼠中单个CNV损伤的血管渗透性的组定量。在P24和P26之间将CCR3抑制剂‘994和抗-VEGR2以及各种组合给药2天。
图10显示在通过激光光凝固术诱导CNV之后猕猴个体的右眼和左眼中IV级损伤的分析，在激光前1天顺序地给药运载体，20mg/kgGW782415X((S)-1-((4-(3,4-二氯苄基)吗啉-2-基)甲基)-3-((2-甲基-2H-四唑-5-基)甲基)脲)(以下称为“‘415化合物”)口服TID或3mg/kg TID口服，持续16、24、或30天。
图11显示猕猴全血中嗜酸性粒细胞趋化因子-1对嗜酸性粒细胞形状变化的浓度响应曲线，10nM和100nM‘415化合物的预温育的作用示于附录1中。Schild分析确定‘415化合物对于猕猴全血中嗜酸性粒细胞趋化因子-1刺激的嗜酸性粒细胞形状变化的平均pA2值为7.8。
图12显示将C57Bl6小鼠暴露于高压氧(氧诱导的视网膜病变模型)之后，视网膜血管生成(血管新生)的组定量的作用和8mg/kg腹腔注射BID的作用。
图13显示将C57Bl6小鼠暴露于高压氧(氧诱导的视网膜病变模型)之后，视网膜血管生成(血管新生)的组定量的作用，以及10mg/ml局部给药和SU4312(5ug每5天，眼周)给药至一只眼BID的作用。
具体实施方式
发明人已发现CCR3抑制剂可以被用于眼部疾病特别是与新血管AMD相关的血管渗透性的治疗和/或预防，包括进展。
发明人已发现CCR3抑制剂可以与抗VEGF治疗剂和VEGF信号抑制剂组合使用用于眼部疾病特别是与AMD相关的血管渗透性的治疗和/或预防，包括进展。
发明人还已发现CCR3抑制剂与抗VEGF抑制剂的组合可以特别地用于眼部疾病特别是与AMD相关的脉络膜血管新生的治疗和/或预防，包括进展。由于CCR3抑制剂的相似的作用在经历暴露于高压氧之后的血管新生(氧诱导的视网膜病变)的视网膜血管上不能被证明，因此这些作用看起来是对脉络膜特异性的。
发明人已发现CCR3抑制剂可以用于萎缩视网膜背景例如患有与干萎缩或地图样萎缩相关的AMD的患者中的眼部疾病特别是脉络膜血管新生的治疗和/或预防，包括进展。
发明人已发现CCR3抑制剂可以与抗VEGF治疗剂和VEGF信号抑制剂组合用于萎缩视网膜背景例如患有与干萎缩或地图样萎缩相关的AMD的患者中的眼部疾病特别是脉络膜血管新生的治疗和/或预防，包括进展。
定义
为了方便起见，此处收集整个申请(包括说明书、实施例、和所附的权利要求)中使用的某些术语。除非另有定义，否则此处使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。
术语“疾病”或“障碍”此处可以互换地使用，指身体或一些器官的状态的任何变化，打断或扰乱功能的执行和/或导致患病的人或与之接触者诸如不适、机能障碍、痛苦或甚至死亡等症状。疾病或障碍也可以涉及犬瘟热(distemper)、生病(ailing)、微恙(ailment)、重疾(malady)、障碍(disorder)、疾恙(sickness)、病痛(illness)、病(complaint)、或感染(affectation)。
术语“脉络膜血管渗透性”或“可渗透的血管”通常被本领域技术人员称为“渗漏血管”。所述术语在此处中互换地使用以指脉络膜脉管***受损和血管渗透性增加。
术语“试剂”指通常不存在于细胞中或不以给药的水平存在于细胞中的任何实体。试剂可以选自包含以下的组：化学品；小分子；核酸序列；核酸类似物；蛋白；肽；适配体；抗体；或其片段。核酸序列可以为RNA或DNA，并且可以为单链的或双链的，并且可以选地包含以下的组：编码感兴趣的蛋白的核酸、寡核苷酸、核酸类似物例如肽-核酸(PNA)、假互补PNA(pc-PNA)、锁核酸(LNA)等。这样的核酸序列包括例如但不限于编码蛋白的核酸序列例如起转录抑制因子、反义分子、核酶、小抑制性核酸序列例如但不限于RNAi、shRNAi、siRNA、微RNAi(mRNAi)、反义寡核苷酸等的那些。蛋白和/或肽或其片段可以为任何感兴趣的蛋白，例如但不限于：突变蛋白；治疗性蛋白和截短蛋白，其中所述蛋白通常不存在于细胞中或在细胞中以较低的水平表达。蛋白也可以选自包含以下的组：突变蛋白、基因工程蛋白、肽、合成肽、重组体蛋白、嵌合蛋白、抗体、中型抗体、微型抗体、三链抗体、人源化蛋白、人源化抗体、嵌合抗体、修饰蛋白及其片段。可选地，由于将核酸序列引入细胞中及其导致在细胞中产生CCR3的核酸和/或蛋白抑制剂的转录，所述试剂在细胞中可以为细胞内的。在一些实施方案中，所述试剂为任何化学品、实体或部分，包括但不限于合成的和天然存在的非蛋白质的实体。在某些实施方案中，所述试剂为具有化学部分的小分子。例如，包括未取代的或取代的烷基、芳香的、或杂环基部分的化学部分，包括大环内酯、轻肌蛋白及其相关的天然产物或类似物。可以已知试剂具有期望的活性和/或性质，或可以选自一类不同的化合物。
此处使用的术语“抑制”指CCR3蛋白或其变体或同源物的表达或活性被降低至足以产生期望的作用的一定程度和/或一段时间，例如其中CCR3蛋白的抑制降低或停止血管渗透性和/或脉络膜血管新生等的症状。活性的降低可以是由于影响CCR3的一个或多个特征，包括降低其催化活性或通过抑制CCR3的辅因子或通过与CCR3结合，活性的程度使得结果是治疗或预防眼部障碍。具体而言，CCR3的抑制可以使用用于CCR3抑制的分析测定，例如但不限于通过使用如此处所公开的用于CCR3蛋白的生物学分析。
术语“患者”、“对象”和“个体”在此处可以互换地使用，并且指被提供治疗(包括预防性治疗)的动物，特别是人。此处使用的术语“对象”指人和非人动物。术语“非人动物”和“非人哺乳动物”在此处可以互换地使用，包括脊椎动物例如哺乳动物例如非人灵长类(特别是高级灵长类)、绵羊、狗、啮齿动物(例如小鼠或大鼠)、豚鼠、山羊、猪、猫、兔、奶牛，和非哺乳动物例如鸡、两栖动物、爬行动物等。在一个实施方案中，对象为人。在另一个实施方案中，对象为实验动物或作为疾病模型的动物替代物。
此处使用的术语“治疗”包括降低、缓解或预防(包括预防进展)与AMD相关的病症、疾病或障碍的至少一种不利作用或症状。预防与AMD相关的病症、疾病或障碍的至少一种不利作用或症状的进展包括但不限于预防具有发展脉络膜血管新生和/或随后的脉络膜血管渗透性增加的对象中的萎缩视网膜背景上的CNV损伤的发展；和/或预防萎缩性和非血管AMD转化成为新血管AMD。用于测量治疗的几集结果的方法包括但不限于通过光学相干层析成像测量的视网膜下的水肿的减少或保持、视力减弱的减少或保持、或通过最佳矫正视敏度评价的视力获得。血管渗透性增加和脉络膜血管新生也通过荧光眼底血管造影测定。
此处使用的术语“有效量”指降低、停止或预防至少一种疾病的症状或障碍例如AMD的症状或障碍的药物组合物的治疗剂的量。例如，使用此处公开的方法的有效量应被认为是足以降低或预防疾病或障碍的症状的量，例如AMD的完全或部分解决和/或保持(通过OCT测量)或大于5个字母的最佳矫正视敏度的增加和/或保持(通过EDTRS视力表评价)、或新血管的大小或血管渗透性降低(通过荧光眼底血管造影测定)。此处使用的有效量还应包括足以预防或延迟黄斑水肿的发展、渗透性增强、CNV损伤的大小和相关的视力减弱的量。此处使用的有效量还应包括足以预防或延迟疾病的症状的发展、改变疾病症状的过程(例如但不限于减缓疾病的症状的进展)、或逆转疾病的症状的量。
此处使用的术语预防或防止具有发展脉络膜血管新生和/或随后的脉络膜血管渗透性增加的“风险的对象”中的CNV损伤的发展指例如患有干或地图样萎缩AMD的患者。
此处使用的术语“给药”和“引入”互换地使用，指通过导致试剂在期望的位点至少部分定位的方法或途经将如此处公开的抑制CCR3的试剂置于对象中。本发明的化合物可以通过在对象中导致有效治疗的任何适合的途径给药。
此处使用的冠词“一”指一个或指多于一个(即至少一个)冠词的语法上的主语。以举例的方式，“一元素”指一个元素或多于一个元素。
抑制CCR3的试剂
在一些实施方案中，本发明涉及CCR3的抑制。在一些实施方案中，抑制为对编码CCR3的核酸转录物的抑制，例如对信使RNA(mRNA)的抑制。在可选的实施方案中，CCR3的抑制为对CCR3的基因产物例如CCR3的多肽或蛋白或其同工型的表达的抑制和/或活性的抑制。此处使用的术语“基因产物”指由基因转录的RNA或由基因编码或由RNA翻译的多肽。
在一些实施方案中，通过试剂抑制CCR3。人们可以使用任何试剂，例如但不限于核酸、核酸类似物、肽、噬菌体、噬粒、多肽、类肽物、核糖体、适配体、抗体、小的或大的有机或无机分子，或其任意组合。在一些实施方案中，可用于本发明的方法中的试剂包括起CCR3表达的抑制剂作用的试剂，例如编码CCR3的mRNA的抑制剂。
可用于此处公开的方法中作为CCR3抑制剂的其他试剂可以为化学品、小分子、大分子、或实体或部分，包括但不限于合成的和天然存在的非蛋白实体。在某些实施方案中，试剂为具有如此处公开的化学部分的小分子。
小分子
在一些实施方案中，抑制CCR3的试剂为小分子。在本发明的方法中可以使用CCR3的不可逆抑制剂或可逆抑制剂。
在人类中有效的CCR3抑制剂为本领域技术人员公知的，并且包括经历评价的那些，例如经历临床前评价和临床评价，包括第二阶段临床测试。SmithKline Beecham及其继任者GlaxoSmithKline已提交和公开了若干申请。CCR3的不可逆抑制剂已于WO 2002/26723A1、WO03/082293、美国申请第7,101,882号、第7,157,457号、第7,531,651号和第7,560,548号中公开，其全文具体地援引加入本文，并且其中公开了为CCR3抑制剂的不同系列的吗啉-乙酰胺和吗啉脲化合物。
在人类中有效的VEGF治疗剂为本领域技术人员公知的，并且包括经历评价的那些，例如经历临床前评价和临床评价，包括第二阶段临床测试，和/或在售的那些，包括帕唑帕尼、和
化合物4-[[[[[[(2s)-4-[(3,4-二氯苯基)甲基]-2-吗啉基]甲基]-氨基]羰基]-氨基]甲基]苯甲酰胺(CCR3抑制剂‘994)或其药学上可接受的盐或溶剂合物为特别有效的CCR3抑制剂，且可特别地用于此发明。
化合物N-[[(2S)-4-[(3,4-二氟苯基)甲基]-2-吗啉基]-甲基]-3-[(甲基磺酰基)氨基]-苯乙酰胺(CCR3抑制剂‘575)或其药学上可接受的盐或溶剂合物为特别有效的CCR3抑制剂，且可特别地用于此发明。
可用于此处公开的方法中的其它CCR3抑制剂描述于已公开的专利和申请WO 2002/26723A1、WO03/082293、美国专利第7,101,882号、第7,157,457号、第7,531,651号和第7,560,548号中，并且可以使用此处公开的CCR3抑制分析发现。
上述段落中列举的所有申请都援引加入本文。相信这些文献中公开的任何或所有化合物都可用于AMD的预防或治疗。如实施例中列举的此处描述的模型可被本领域技术人员使用以确定何种所公开的化合物或CCR3的其他抑制剂例如抗体或RNAi可有效地治疗和预防此处主张的眼部疾病或障碍。
实施例
此处所示的实施例涉及通过CCR3抑制用于眼部新血管障碍等的预防和/或治疗的方法和组合物。在整个此申请中引用了多个公开。全部这些公开和这些公开中引用的那些参考文献的公开全文援引加入本文，以更完全地描述本发明所述的技术领域的状态。以下实施例并非意图将权利要求的范围限于本发明，而是意图例举某些实施方案。本领域技术人员想到的示例的方法的任何变体都意图落入本发明的范围内。
在一些实施方案中，可以在此处公开的动物模型中评价抑制CCR3的试剂在降低激光诱导的CNV中的作用。
在一些实施方案中，可以在此处公开的动物模型中评价抑制CCR3的试剂，例如猕猴中的激光诱导的脉络膜新血管AMD研究。
在一些实施方案中，可以在动物模型中评价单独的抑制CCR3的试剂或其与抗VEGF抑制剂的组合，例如在CNV AMD的JR5558猕猴模型中限制CNV的发展。
实施例1
方法
C57/BL6小鼠中激光诱导的CNV
将成年的12周龄雌性C57BL/6小鼠用于产生激光诱导的CNV模型。通过腹膜内盐酸***(25mg/kg)和赛拉嗪(10mg/kg)将小鼠麻醉，并通过局部托吡卡胺(1％)使其瞳孔扩张。在直视下使用二极管激光器(680nm；210mW功率、100ms持续时间、100m光斑直径)进行激光光凝固术，使用手持盖玻片作为接触镜并定位至双眼中的视网膜的后极的2点、10点和6点钟位置。这些激光设置持续地产生视网膜下的气泡，其与Bruch膜的激光诱导的破裂和CNV的成功诱导密切相关。仅将其中形成气泡的损伤包括入分析中。在诱导CNV后1周和2周时使用Kowa Genesis小动物眼底照相机进行荧光素血管造影。通过数字图像分析早期(荧光素注射后90秒)期间每损伤的强荧光的平均面积来对CNV损伤的大小进行定量。通过局部托吡卡胺1％使瞳孔扩张，通过腹膜内注射给药0.2ml荧光素钠(2％)。如果眼有能够影响激光能量输送或血管造影的显著的白内障或角膜病变，则将其排除在外。
JR5558CNV和分析
JR5558小鼠自发产生CNV(在萎缩背景中)，在出生后约12天时CNV损伤第一次出现。由P14开始，用不同量的大鼠抗小鼠VEGF受体(VEGFR)-2阻断抗体(MAB4431；R&D***)或纯化的大鼠未免疫同型匹配对照IgG2α抗体(R&D***)腹膜内处理JR5558小鼠，在11天内总计10次给药，并于P25进行最后一次给药之24小时后通过荧光素血管造影术(FA)分析CNV进展。对于用CCR3抑制剂‘994处理的小鼠，自P14开始，通过腹膜内或通过滴眼剂对其给药不同浓度的所述药物，持续总计12天，并且在P26时最后一次给药之24小时后，通过FA分析CNV进展。为了研究抗-VEGFR2抗体和CCR3抑制剂‘994的组合作用，自P14起，用各物质单独地或组合地腹膜内处理小鼠，在11天内总计10次给药，于P25进行最后一次给药的24小时后通过FA分析CNV进展。进行多个实验来研究VEGF-A和CCR3拮抗剂对现有CNV损伤所致的血管渗透性的影响，所用的JR5558小鼠在发生CNV损伤后仅给药两天，并且是用不同量的VEGFR-2抗体或CCR3抑制剂‘994或其组合在P24和P25时处理。在P26进行荧光素血管造影术(FA)。
荧光素血管造影术(FA)和图像分析
使用2.5％托吡卡胺(Bausch&Lomb,Rochester,NY)使小鼠的瞳孔扩张并通过腹膜内注射给药0.2ml于水中稀释的荧光素钠(Bausch&Lomb)。Kowa Genesis-Df眼底照相机(Kowa,Tokyo,Japan)用于获得染料运输的早期(荧光素注射后90秒)和晚期(7分钟)时的荧光素血管造影图。在早期时，CNV组织的脉管***明显地由血管内的荧光素染料界定。在晚期时，明显有高荧光斑点形式的血管外荧光素。为了定量CNV面积，使用早期FA图像经Image J程序确定各眼中各个高荧光CNV的大小。用Image J从晚期(荧光素注射后7分钟)FA图像的高荧光面积减去早期(荧光素注射后90秒)FA图像的高荧光面积，来确定各CNV的渗透性。
CNV损伤的视网膜全封固染色
FA后24小时时摘除眼球，并在4℃下用4％多聚甲醛(PFA)在PBS中的溶液固定3小时。将移除了视网膜或未移除视网膜的眼杯解剖，在室温下在含0.3％Triton X-100和5％FBS的PBS缓冲液(封闭缓冲液)中封闭1小时，并在4℃下用在封闭缓冲液中1:200稀释的0.5％荧光素异硫氰酸酯(FITC)-同工凝集素B4(Vector,Burlingame,CA)温育整夜。洗涤5次之后，用含DAPI的介质将样本封固，并使用落射荧光显微镜观察。
猕猴中的激光诱导的脉络膜新血管AMD研究
如表A中所示对猕猴给药运载体或CCR3拮抗剂工具化合物’415化合物，持续29天，在激光光凝固术之1天后出现激光。在激光后14、21和28天时进行荧光血管造影术分析。
a在给药期的第1-30天，以5ml/kg/剂的体积、约8小时的间隔，每天向动物给药3次。
b给药浓度按母体化合物来表示，且以GW782415X的校正系数为1.015来校正盐含量。
c第1组仅接受运载体对照物。
表A:激光诱导的猕猴CNV研究中所用‘415化合物的剂量和给药方案
使用狭缝灯递送***和Kaufman-Wallow(Ocular Instruments Inc,Bellevue,Washington)平光眼底接触镜，使用532nm二极管绿色激光器灼烧(OcuLight GL,IRIDEX Corp Inc,Mountain View,California)使各眼的黄斑经历激光处理。动物麻醉，9个区域对称地置于各眼的黄斑中。激光参数包括75微米光斑大小和0.1秒持续时间。所用的电源设置通过产生气泡和小出血的能力来评价。除非在第一次激光处理时观察到出血，否则将根据相同的激光步骤(除了功率将被调节以外)将第二激光斑置于第一激光斑的附近。对于不临近小窝的区域，初始的功率设置为500mW；如果放置第二光斑，则将功率设定为650mW。对于邻近小窝的区域，功率设置为400mW(初始处理)和550mW(第二次处理)。根据视网膜外科医生的意见，基于激光时的观察调节电源设置。
在被麻醉并使用扩瞳剂将眼扩瞳之前，在荧光素血管造影术之前使动物禁食至少2小时。由于在荧光素注射之后可能发生呕吐，因此对动物进行插管。随后对动物进行荧光素静脉注射。在荧光素注射起始时和终止时成像。在荧光素注射后，迅速(约自染料出现至35秒)获取一系列右眼的后极的立体照片，随后是左眼的后极的立体对。荧光注射后约1至2和5分钟时取双眼的额外的立体对。在荧光注射后约2和5分钟之间，取各眼的两个中周部(mid-peripheral)视野(临时的和鼻的)的非立体照片。根据表B中所示的分级***，由进行图像评价的科学家进行荧光素血管造影术的分级评价。IV级损伤被认为是临床上显著的，因为它们与不同的人视网膜病(包括老年性黄斑变性)中见到的经典的脉络膜血管新生的活性形式最为相似。评价各组间IV级损伤的发生率的比较。
表B:猕猴中激光诱导的CNV的损伤分级
猕猴全血嗜酸性粒细胞趋化因子-刺激的嗜酸性粒细胞形状变化分析
自猕猴取血(10mL)并添加1.1ml的3.8％柠檬酸钠溶液。等分试样(90μl)在室温下用拮抗剂温育10分钟，随后转移至包含激动剂的BSA-涂布的Micronic管(10μl人嗜酸性粒细胞趋化因子(Peprotech)，嗜酸性粒细胞趋化因子的终浓度为0-1000nM。将细胞在37℃下另外温育4分钟，随后添加250ml冰冷的固定缓冲液(1x Cellfix的1/4稀释(Becton Dickinson))。在至少2分钟后将固定的样品转移至2ml冰冷的红细胞溶胞缓冲液(155mM NH4Cl,10mM KHCO3)并在冰上温育，直至溶胞完成(～30分钟)。随后在FACScalibur流式细胞仪上测定嗜酸性粒细胞群的平均前向散射。
氧诱导的视网膜病变
在出生后(P)7天将C57BL/6小鼠置于75％O2中，并在P12使其返回室内空气，并使用化合物或运载体开始治疗。在P17，如前所述(Shen等，2007)测量视网膜的表面上的视网膜NV的面积。简而言之，向P17小鼠眼内注射1μl大鼠抗小鼠血小板内皮细胞粘附分子-1(PECAM-1)抗体(Pharmingen,San Jose,CA,USA)；12小时后，将其安乐死，并在室温下将眼固定于PBS缓冲的***中，持续5h。将视网膜解剖、洗涤，并在室温下用1:500稀释的与Alexa 488偶联的山羊抗大鼠多克隆抗体(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)温育45分钟，并进行平直封固。由不清楚哪个是治疗组的观察者通过图像分析测量每视网膜的NV面积。
观察结果
在小鼠激光CNV模型中评价CCR3抑制剂‘994
CCR3抑制剂‘994的***性CCR3拮抗作用限制小鼠中继发于激光诱 导的光凝固术的CNV进展
使用激光光凝固术和Bruch膜穿刺，将成年的12周龄雌性C57BL/6小鼠用于产生激光诱导的CNV(每个小鼠视网膜3个CNV损伤)模型。在其中在通过激光光凝固术进行CNV诱导之日口服给药CCR3抑制剂‘994的那些小鼠中进行的研究显示以下显著的趋势：在第1周以30mg po QD给药(p＝0.0525)起作用，在第2周不持续(参见图I，上图和下图和表1)。
表1:CCR3抑制剂‘994和帕唑帕尼对于C57Bl/6小鼠中激光诱导的CNV损伤大小面积的治疗作用的统计学比较，与运载体相对照，通过荧光血管造影评价
在相同剂量的第二个研究中也观察到相似的作用(p＝0.0552)(参见图2)和表2。
表2:CCR3抑制剂‘994和帕唑帕尼对于C57Bl/6小鼠中激光诱导的CNV损伤大小面积的治疗作用的统计学比较，与运载体相对照，通过荧光血管造影评价
在两个研究中，以20mg/kg po QD给药比较物帕唑帕尼(对于VEGFR1、2和3(以及PDGF受体和c-kit)具有活性的谱特异性激酶抑制剂)导致CNV损伤大小的显著降低，其与运载体和测试的所有剂量的CCR3抑制剂‘994不同。此处进行的统计学分析的严谨在于观察结果的数目与经处理的动物的数目有关，而在使用此激光诱导的模型的大多数其他研究中(在很多参考文献中进行的研究)，各损伤(每个小鼠视网膜3个CNV损伤)被认为是独立的观察结果。如果使用被认为是独立的各个CNV损伤来分析数据，则两个研究中的30mg/kg CCR3抑制剂‘994的作用将被认为是对损伤大小均有显著的作用，p值分别为0.0395和0.0392。然而，明显的是在口服给药帕唑帕尼的情况中，任一统计学方法都将产生强效，或因此在此模型中CCR3抑制剂‘994的作用看起来弱于口服给药的帕唑帕尼。
在小鼠JR5558CNV模型中评价CCR3抑制剂‘994
CCR3抑制剂‘994的***性CCR3拮抗作用限制了JR5558小鼠在 CNV AMD自发模型中的CNV进展
JR5558小鼠为具有未识别的基因缺陷的小鼠品系，所述基因缺陷导致其在可预测的时间段在两个视网膜中均发生自发性的CNV，最初的损伤在出生后约12天时开始发生。因此，CCR3抑制剂‘994的治疗在第12天开始，并持续12天，在此点处，经视网膜荧光血管造影检查动物，以定量视网膜中的CNV损伤总量和CNV损伤的总数目。当以8mg/kg QD或30mg/kg QD之一腹膜内注射给药时，CCR3抑制剂‘994处理动物导致视网膜中总损伤面积(参见图3，表3)和CNV损伤的总数(参见图3，表4)两者的抑制，但当剂量为2mg/kg QD时并非如此。统计学数值示于表3和表4中。
表3:JR8885总CNV面积的研究中GW766994的治疗作用与运载体的统计学比较，通过荧光血管造影评价。在P14和P26之间给药化合物，持续12天。
表4:JR8885总CNV数目的研究中GW766994的治疗作用与运载体的统计学比较，通过荧光血管造影评价。在P14和P26之间给药化合物，持续12天。
分离的眼杯(移除视网膜)的免疫组织化学也显示在此模型中CCR3抑制剂‘994在限制视网膜血管损伤的进展中的作用(图5)。在激光CNV模型中，尽管CCR3抑制剂‘994的8mg/kg QD剂量未显示出统计学上的强的作用，但在此模型中每天口服给药该化合物，与在JR8885幼鼠模型中使用的腹膜内注射给药相比较，使暴露降低5倍。
当通过BID而不是QD来给药CCR3抑制剂‘994时，CCR3抑制剂‘994也在限制总损伤(参见图4，表5)面积和总CNV数目(参见图4，表6)两者中产生显著作用。在此研究中，在完成荧光血管造影后立即将动物处死，并将眼移除并置于固定剂中。将眼充分洗涤，并随后通过定量免疫组织化学进行分析。这样的分析证明，此分析方法与此小鼠模型中通过荧光血管造影评价的显示8mg/kg CCR3抑制剂‘994BID治疗对于损伤量的影响的活体荧光血管造影良好相关，但与CNV损伤数目不相关(参见图6)，可能表明损伤中有一些可能更小或更易于通过荧光血管造影检测。统计学数值示于表5至8中。
表5:JR8885总CNV面积的研究中CCR3抑制剂‘994的治疗作用与运载体的统计学比较，通过荧光血管造影评价。在P14和P26之间给药化合物，持续12天。
比较 每眼平均总CNV面积的差异 p值
8mg/kg相比于运载体 -0.0214 0.0244
表6:JR8885总CNV数目的研究中CCR3抑制剂‘994的治疗作用与运载体的统计学比较，通过荧光血管造影评价。在P14和P26之间给药化合物，持续12天。
比较 每眼CNV损伤均数的差异 p值
8mg/kg相比于运载体 -4.63 0.0049
表7:JR8885总CNV面积的研究中CCR3抑制剂‘994的治疗作用与运载体的统计学比较，通过定量免疫组织化学评价。在P14和P26之间给药化合物，持续12天。
比较 每眼平均总CNV面积的差异 p值
8mg/kg相比于运载体 -76632 0.0345
表8:JR8885总CNV数目的研究中CCR3抑制剂‘994的治疗作用与运载体的统计学比较，通过定量免疫组织化学评价。在P14和P26之间给药化合物，持续12天。
比较 每眼CNV损伤均数的差异 p值
8mg/kg相比于运载体 -8.00 0.1280
在小鼠JR5558CNV模型中评价CCR3抑制剂‘994滴眼剂
在被局部施用至小鼠自发性JR5558模型之后，CCR3拮抗作用能够抑 制CNV AMD
以局部施用的5ul滴眼剂的形式将CCR3抑制剂‘994BID给药至JR5558小鼠的双眼导致J5558小鼠的总损伤量(参见图7，表9)和视网膜中存在的自发性CNV总数目(参见图7，表10)两者统计学上显著地降低。作用大小与***性给药8mg/kg BID CCR3抑制剂‘994后获得的作用大小(先前已显示其可以有效地限制该模型中的损伤量和总损伤)具有相似的量级。鉴于在先前的试验中使用2mg/kg QD(是更大药量)的***性给药在该模型中不可能证明有效性这一事实，该滴眼剂给药方案证明在此模型中CCR3抑制剂‘994对控制CNV的作用似乎是局部作用。统计学结果示于表9和表10中。
表9:JR8885总CNV面积的研究中CCR3抑制剂‘994(以5ul滴眼剂的形式给药至各眼，BID)的治疗作用，与运载体的统计学比较，通过荧光血管造影评价。作为比较物，还腹膜内给药(i.p.)8mg/kg CCR3抑制剂‘994，BID。在P14和P26之间给药化合物，持续12天。
表10:JR8885总CNV数目的研究中CCR3抑制剂‘994(以5ul滴眼剂的形式给药至各眼，BID)的治疗作用，与运载体的统计学比较，通过荧光血管造影评价。作为比较物，还腹膜内给药8mg/kg CCR3抑制剂‘994，BID。在P14和P26之间给药化合物，持续12天
在小鼠JR5558CNV模型中评价CCR3抑制剂‘994和抗-VEGF Ab
CCR3拮抗作用和对VEGF途径的抑制叠加地起限制JR5558自发性 模型中的CNV程度的作用
进行与先前公开的那些实验相似的实验，不同之处在于在此模型中使用30mg/kg QD CCR3抑制剂‘994***性治疗，结果导致CNV损伤面积和出现的CNV损伤总数与运载体相比较均显著降低(参见图8，表11和表12)。该动态与用50-100ug抗血管内皮生长因子受体-1单克隆抗体(抗-VEGFR2)进行的***性治疗匹配(参见图8，表11和表12)。50-100ug抗-VEGFR2i.p.QD加30mg CCR3抑制剂‘994i.p.QD的组合如所预期的也导致对CNV损伤面积和CNV损伤的数目两者的抑制。将这种组合作用与使用30mg/kg CCR3抑制剂‘994i.p.QD或100ug抗-VEGFR2i.p.QD单独治疗的作用比较发现，CNV损伤面积和损伤的总数目均进一步降低。这些差异尽管在95％置信限水平并非统计学上显著的，但在检查对于CNV损伤面积的作用时与单独的抗-VEGFR2QD(p＝0.06)(参见图8，表11)或30mg/kgCCR3抑制剂‘994QD(p＝0.09)(参见图8，表11)相比较时，仍显示强烈的趋势。该组合的更温和效果在检查所述组合对于CNV损伤数目的作用与单独治疗的作用相对比也是明显的(参见图8，表12)。
表11:在JR8885研究中100ug抗-VEGFR2i.p.QD、30mg/kg CCR3抑制剂‘994i.p.QD、100ug抗-VEGFR2i.p.QD加30mg/kg CCR3抑制剂‘994i.p QD和100ug抗-VEGFR2i.p.QD加30mg/kg CCR3抑制剂‘994i.p.QD相对于运载体和相对于100ug VEGFR2i.p.QD和30mg/kg CCR3抑制剂‘994i.p.QD对于每视网膜中总CNV损伤面积的治疗作用的统计学比较，通过荧光血管造影评价。在P14和P26之间给药CCR3抑制剂‘994，持续12天。自P14起给药抗-VEGFR2，持续6天，且自P19起再给药5天。
表12:在JR8885研究中100ug抗-VEGFR2i.p.QD、30mg/kg CCR3抑制剂‘994i.p.QD、50ug抗-VEGFR2i.p.QD加30mg/kg CCR3抑制剂‘994i.p.QD和50ug抗-VEGFR2i.p.QD加30mg/kg CCR3抑制剂‘994i.p.QD与运载体和与100ug VEGFR2i.p.QD和30mg/kg CCR3抑制剂‘994i.p.QD对于总CNV数目的治疗作用的统计学比较，通过荧光血管造影评价。在P14和P26之间给药CCR3抑制剂‘994，持续12天。自P14起给药抗-VEGFR2，持续6天，且自P19起再给药5天。
在小鼠JR5558CNV模型中评价CCR3抑制剂‘994对CNV损伤的渗 透性的作用
在JR5558小鼠中CCR3拮抗作用限制脉络膜新血管对荧光素钠的血管渗透性。
先前的文献报导已教导CCR3能够介导血管内皮细胞的培养物的渗透性的变化(Jamaluddin等，2009)。然而，迄今为止其尚未在脉络膜或视网膜内皮上或真正的体内被证明。CNV损伤的渗透性的变化的测定通过自早期荧光素泄露减去晚期荧光素泄露以测定泄露率而计算。随后使用这些值计算各单独的CNV损伤的渗透性。与目标为将总CNV损伤量和损伤的总数定量的实验相对照，仅在给药两天(P24-P26)后测定化合物对渗透性的作用，因此CNV损伤具有足够的时间发展并且其发展不受先前暴露于CCR3拮抗剂的抑制。CCR3抑制剂‘994(30mg/kg i.p.QD.P＝0.0351)和抗-VEGF(100ug i.p.QD,p＝0.0176)两者的给药均独立地导致统计学上强的对于降低CNV损伤对荧光素的血管渗透性的作用。抗-VEGFR2治疗与CCR3抑制剂‘994的组合导致CNV损伤血管渗透性的进一步降低，其相对于运载体是显著的(p＝0.0251，图9，表13)，但与单独给药CCR3抑制剂‘994或抗-VEGFR2mAb相比较没有显著的差异(参见图9，表13)。
表13:在JR8885研究中100ug抗-VEGFR2i.p.QD、30mg/kg CCR3抑制剂‘994i.p.QD、100ug抗-VEGFR2i.p.QD加30mg/kg CCR3抑制剂‘994与运载体和与100ug VEGFR2i.p.QD和30mg/kg CCR3抑制剂‘994i.p.QD对于CNV损伤的渗透性的治疗作用的统计学比较，通过荧光血管造影评价(对于各损伤，晚期-早期FFA)。在P24和P26之间单独地或组合地给药CCR3抑制剂‘994和抗-VEGFR2，持续2天。
在猕猴激光CNV模型中评价‘415化合物
在猕猴中口服给药CCR3拮抗剂GW782415X限制激光诱导的脉络膜 CNV
为了确定CCR3拮抗剂在高等哺乳动物中是否能抑制CNV的诱导，选择CCR3拮抗剂工具分子‘415化合物，这是由于其对猕猴CCR3具有良好的效力(pA2＝7-8，取决于实验)且在此灵长类动物中显示出合理的暴露，动物间的变异性低。当在激光后16、24和30天时通过荧光血管造影评价时，在此模型中口服给药20mg/kg‘415化合物TID 15天证明在所有时间点对于在此模型中产生IV级损伤具有统计学上强的作用(参见图10，表14)。较低计量的‘415化合物的作用在损伤数目方面显示减少，但考虑到本研究的总量，其与对照没有统计学上的差异(参见图10，表14)。然而，较低水平的9mg/kg‘415化合物TID剂量对IV级损伤的抑制，与20mg/kg‘415化合物剂量一起，足以证明，在此模型中在所研究的全部三个时间点对于IV级CNV的抑制具有统计学上显著的剂量相关性，并且其与log剂量换算或线性剂量换算假设无关(参见表15)。
表14:在猕猴中20mg/kg口服(po)TID和3mg/kg口服TID‘415与运载体对于IV级CNV损伤的治疗作用的统计学比较，在16、24和30天通过荧光血管造影评价。
表15:在猕猴中20mg/kg口服TID和3mg/kg口服TID‘415与运载体对于IV级CNV损伤的治疗作用的统计学比较，在16、24和30天通过荧光血管造影评价。
***和局部CCR3抑制剂‘994对于由高压氧诱导的视网膜血管新生 (氧诱导的视网膜病变)的作用的评价
以在脉络膜血管新生模型中有效的剂量使用CCR3抑制剂‘994局部给药(5ul 10mg/ml BID)或经过***性给药(8mg/kg BID，腹膜内)治疗C57Bl6小鼠对于使用高压氧刺激之后的视网膜血管的血管新生没有作用(参见图12和13)。在***试验中，对双眼进行检查，在CCR3抑制剂‘994和运载体处理的组之间未观察到显著的差异。在局部试验中，在CCR3抑制剂‘994和运载体组之间未注意到显著的差异，并且在CCR3抑制剂‘994治疗的组中，在经治疗的眼和对侧眼间未注意到显著地差异。值得注意的是剂量为5ug(每5天眼周给药)的受体酪氨酸激酶抑制剂SU4312为有效的抑制剂，且在SU4312和运载体处理的眼之间观察到显著地可观察的视网膜血管新生减少(p<0.003)，且实际上在经处理的眼和对侧(未处理)的眼之间观察到显著地可观察的视网膜血管新生减少(p<0.004)。因此，对于视网膜血管新生，SU4312起与可选的受体酪氨酸激酶抑制剂帕唑帕尼(其可有效地限制脉络膜血管新生)相似的作用。此数据证明受体酪氨酸激酶(例如VEGF)的阻断与视网膜和脉络膜血管新生均有关，而CCR3拮抗作用似乎仅限制脉络膜血管新生，由此强调了以下事实：CCR3拮抗作用对于脉络膜血管新生为选择性的，并因此并非可施用至所有血管床的可普遍应用的机制，即使是在眼中也是如此。
啮齿类和灵长类模型中CNV AMD的PK/PD
CCR3抑制剂‘994和JR5558小鼠模型中自发性CNV的发展
在幼小鼠中腹膜内给药8mg/kg QD CCR3抑制剂‘994以模拟在JR5558小鼠中的暴露之后，通过将PK曲线的log线性阶段投影而计算腹膜内2mg/kg、腹膜内8mg.kg和腹膜内30mg/kg的24小时时的血液浓度。随后使用CCR3抑制剂‘994的Langmuir结合等温线和pKi(在小鼠嗜酸性粒细胞趋化性测定中估算)将血药浓度用于测定相对受体占位。由于CCR3抑制剂‘994的pKi是在缓冲液中测定而不是在血液中测定，因此受体占位数值比真实值略为高估。分级CCR3受体占位大部分是由于结合至嗜酸性粒细胞，这是由于其是主要的具有CCR3的细胞群。相对受体占位的计算暗示在8小时时所有剂量都具有足以产生大于97％相对CCR3受体占位的暴露(2mg/kg＝97.95％、8mg/kg＝99.48％、30mg/kg＝99.86％)，但在24小时低谷期时间点时相对CCR3受体占位数值不同(2mg/kg＝3.1％、8mg/kg＝11.36、30mg/kg＝32.45)。由于8mg/kg和30mg/kg CCR3抑制剂‘994两者的***性给药在所述模型中均是有效的，因此似乎3.1％和11.35％之间的低谷期的***相对占位水平对于有效性而言是需要的。然而，若干观察暗示在JR5558模型中CCR3抑制剂‘994对于CNV的产生的影响不受整体相对CCR3受体占位驱动或者此模型中CCR3抑制剂‘994在介导CNV方面的***作用的驱动。首先，Takeda等，2009证明CCR3抑制剂在缓解不能通过基因产生嗜酸性粒细胞或肥大细胞(主要的具有CCR3的细胞)的动物中的激光诱导的CNV中的作用。此相同的组还通过玻璃体内注射使用极小计量的抗-CCR3抗体，以限制小鼠模型中激光诱导的CNV，且这些极小的剂量将对相对受体占位具有极有限的影响，即使其能够解除体循环。此外，以滴眼剂制剂的形式局部给药CCR3抑制剂‘994在JR5558模型中也是有效的。所有这些观察集合在一起暗示CCR3治疗剂在限制CNV疾病中的作用是经由在眼中的局部活性。然而，非常可能的是***性给药驱动CCR3拮抗剂在眼中的暴露，并且最终驱动对疾病的作用，且在眼中的暴露很可能为***暴露的复合功能，并且因此对于***药代动力学驱动有效性的理解在分析***性治疗中可能是重要的。
‘415化合物导致猕猴全血中对于人嗜酸性粒细胞趋化因子诱导的嗜酸性粒细胞形状变化的浓度依赖性的可克服的抑制。对这些数据的Schild分析得到7.8-8,4之间的‘415化合物的平均pA2。猕猴全血中嗜酸性粒细胞趋化因子-1对于嗜酸性粒细胞形状变化的浓度响应曲线和10nM和100nM‘415化合物的预温育的作用示于图11中。
对于9mg/kg/天和60mg/kg/天两者均使用‘415化合物暴露8小时时的低谷期水平(因为化合物为TID给药)，并使用在猕猴全血CCR3中的嗜酸性粒细胞趋化因子-介导的嗜酸性粒细胞形状变化分析中测定的效力值，计算低谷期的相对受体占位，为>95％。
合并考虑，在证明***性给药的或通过局部滴眼剂递送的CCR3拮抗剂对于脉络膜新血管损伤的发展的强药理学作用的三个体内模型中提供了数据。在啮齿动物模型中，给药CCR3拮抗剂的作用的数量级与***性给药抗VEGR2或口服给药帕唑帕尼的作用相似。除CNV损伤的生长的作用外，还能够证明抗-VEGFR2和CCR3拮抗剂均可有效减少荧光素钠的血管渗透性的增加，其在人类中为临床疾病的标志。先前的文献数据还支持抗-VEGF策略和CCR3拮抗剂方法两者在控制CNV发展中的局部作用(Takeda等，2009)。少量抗-CCR3mAb的局部玻璃体内递送或靶向CCR3的配体的Mabs的玻璃体内给药这一事实和在不能通过基因产生嗜酸性粒细胞或肥大细胞的小鼠中仍可能产生激光诱导的CNV这一事实强烈地证明这样的CCR3机制是局部的并且不取决于循环的嗜酸性粒细胞(Takeda等，2009)。基于使用抗-VEGF控制啮齿动物中的CNV对于眼中的具有CCR3的细胞没有影响这一发现以及在激光诱导的CNV中使用玻璃体内抗-CCR3mabs对于激光光凝固术后诱导的玻璃体VEGF水平没有影响的研究，这样的文献研究还暗示抗-VEGF和CCR3机制是独立的(Takeda等，2009)。数据证明CCR3和VEGFR2两者单独地均限制CNV损伤体积、损伤数目和CNV损伤的血管渗透性，尽管先前其已被公开用于抗-VEGF治疗，但尚未描述CCR3拮抗剂对于CNV数目和血管渗透性的特定作用。此外，此处证明抗-VEGFR2mAb和CCR3拮抗剂方法对CNV损伤体积、损伤数目和CNV损伤的血管渗透性的增强的组合作用。同样重要的是注意单独的CCR3治疗及其与VEGF治疗的组合对于自发性JR5558模型中发生的损伤的数目的作用，这是由于这些损伤发生在萎缩视网膜的背景上，这与眼中发生的具有非血管AMD和地图样萎缩AMD的CNV疾病的高发病率相似。干AMD或地图样萎缩AMD的存在使得眼具有显著的转化为新血管AMD的可能性的风险。具体而言，使用JR5558模型显示视网膜萎缩、视网膜细胞凋亡、和相关的炎症(数据未显示)，这均为人类中非血管AMD的标志。介入治疗例如玻璃体内注射不太可能被接受作为用于防止由非血管AMD转化为新血管AMD的风险的治疗，但可以设想可能保护双眼的使用***地或局部地施用的CCR3拮抗剂的口服治疗。在脉络膜血管新生和血管渗透性(两者均为CNV损伤产生中的重要机制)的控制中，CCR3拮抗剂方法代表新的和特异性的机制，且有力的证据暗示抗-CCR3治疗的作用对眼是局部的，且所述作用通过与通过VEGF介导的机制不同的作用机制介导。尽管近期的数据已证明VEGF和CCR3可以活化人脉络膜内皮细胞中相似的信号转导途径例如小GTP酶rac1，且这两种试剂的作用可以为加和的，但尚未显示CCR3和VEGF途径的同时阻断在抑制CNV中导致组合作用(Wang等，2011)。本发明也证明CCR3在抑制由高压氧诱导的视网膜血管新生中为非活性的，然而抗-VEGF治疗在此模型中极为有效，指出可能有CCR3机制的组织选择性这一事实。初始地指向CCR3在介导若干组织中的血管生成的常规作用(Salcedo等，2001)和心源内皮细胞培养物中的血管渗透性(Jamaluddin等，2009)的研究明显地不能普遍的用于所有组织，实际上，眼的所有组织特别是眼部血管生成和血管渗透性增强的部位。
在一些实施方案中，抑制CCR3的试剂的最佳剂量为降低CCR3的活性和/或表达例如降低核酸(例如由CCR3基因编码的mRNA)的表达或降低CCR3蛋白的表达或活性的剂量。在其他实施方案中，抑制CCR3的试剂的最佳剂量为在预防眼部疾病或障碍中产生最大保护作用的剂量，所述疾病或障碍包括例如但不限于新血管老年黄斑水肿和继发于干性AMD或萎缩性AMD的新血管老年黄斑水肿。
组合物的制剂
化合物，例如此处公开的抑制CCR3的试剂，可以用作药物或可以用于配制具有此处公开的一个或多个用途的药物组合物。它们可以体外给药至培养物中的细胞，体内给药至身体中的细胞，或离体给药至个体外部的细胞，其随后可以返回至相同的个体或另一个个体的身体。这样的细胞可以为解聚的或可以以固体组织的形式提供。
化合物，例如此处公开的抑制CCR3的试剂，可以用于制备药物或其它药物组合物。本领域已知另外包含药学上可接受的载体的抑制CCR3的试剂和另外包含可用于将组合物递送至个体的组分的组合物的应用。将这样的载体和其他组分添加至此处公开的试剂处于本领域技术人员的水平之内。
可以以适于通过血脑屏障或与内皮细胞直接接触的制剂的形式给药药物组合物。在一些实施方案中，可以以适于***递送的制剂的形式给药组合物。在一些实施方案中，可以以适于递送至具体的器官例如肝、骨髓的制剂的形式给药组合物或***地递送
可选地，可以将药物组合物添加至离体得得细胞培养基。除了活性化合物以外，这样的组合物还可以包含药学上可接受的载体和已知能促进给药和/或增强吸收的其他成分(例如盐水、二甲基亚砜、脂质、聚合物、基于亲和性的细胞特异型靶向***)。可以将组合物引入凝胶、海绵、或其他可渗透的基质(例如形成小球或碟的形式)并置于内皮附近以持续地、局部地释放。可以以单次剂量或在不同时间给药的多次剂量给药组合物。
药物组合物可以通过任何已知的途径给药。以实例的方式，组合物可以通过粘膜、肺、局部、或其他局部的或***的途径(例如肠内或胃肠道外)给药。此处使用的短语“胃肠道外给药”和“胃肠道外地给药”指不同于肠内给药和局部给药的给药模式，通常通过注射给药，并且包括但不限于静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、心室内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、大脑内脊柱、和胸骨内注射、灌注和其他注射或灌注技术。此处使用的短语“***性给药”、“***地给药”、“外周给药”和“外周地给药”指给药此处公开的试剂使得其进入动物的***且由此经历代谢和其他相似的过程，例如皮下给药。
此处使用的短语“药学上可接受的”指在合理的医学判断之内适于与人类和动物的组织接触而没有过度的毒性、刺激、***反应或其它问题或并发症，对应于合理的收益/风险比的那些化合物、物质、组合物和/或剂型。
此处使用的短语“药学上可接受的载体”指参与将对象试剂自一个器官或身体的一部分携带或输送至另一个器官或身体的一部分的药学上可接受的物质、组合物或运载体，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包囊物质。就与制剂的其他成分相容而言，各载体必须是“可接受的”，例如载体不会降低试剂对于治疗的影响。换言之，载体为药学上惰性的。
对于给药量和时间、制剂、和给药途径的适当的选择可以实现在具有糖尿病性眼部疾病或患其的风险的对象中获得有利的响应(即有效性)，并且避免对其的过度的毒性或其他伤害(即安全性)。因此，“有效的”指参与对病情的常规操作以获得期望的作用的选择。
每天一次在短时间内向个体给药推注制剂为方便的给药方案。可选地，为给药的目的，有效的每日剂量可以被分成多次剂量，例如每天两剂量至十二剂量。药物组合物中的活性成分的剂量水平也可以改变，以在个体中获得化合物或其衍生物的短暂的或持续的浓度，并导致期望的治疗响应或保护。但以低于获得期望的治疗作用要求的剂量的初始剂量水平给药并逐渐地增加剂量直至或的期望的作用也处于本领域技术人员的水平之内。
给药的抑制CCR3的试剂的量取决于本领域技术人员已知的因素，例如化合物生物学活性和生物利用度(例如在体内的半衰期、稳定性和代谢)；化合物的化学性质(例如分子量、疏水性和溶解度)；给药途径和方案等。还应理解的是，对于任何具体的个体，待获得的具体剂量水平可以取决于多个因素，包括年龄、性别、健康、病史、体重、与一种或多种其他药物的组合、和疾病的严重程度。
关于AMD的治疗，术语“治疗”尤其指预防疾病的发展，或改变疾病的进程(例如但不限于延缓疾病的进展)，或逆转疾病的症状或降低对象中的一个或多个症状和/或一种或多种生物化学标志物，防止一个或多个症状变坏或进展，促进恢复或改善预后，和/或预防未患病对象中的疾病，以及延缓或降低已存在的疾病的进展。对于给定的对象，症状的改善、其恶化、退化、或进展可以通过主观的或客观的量度确定。
预防性的方法(例如预防或降低复发的发病率)也是可以考虑的治疗。
在一些实施方案中，治疗也可以涉及与其他现有的治疗模式组合，例如用于糖尿病性眼部疾病的治疗的校友的试剂例如抗VEGF治疗剂例如和和甾类例如去炎松，以及包含氟轻松的甾类植入物。
因此，可以实践使用一种或多种抑制CCR3的试剂与一种或多种其他医学步骤的组合治疗。
此外，治疗还可以包括多种用于抑制CCR3表达或活性的试剂。
当使用组合治疗时，治疗剂可以一起给药或分别地给药。相同的给药工具可以用于组合治疗的多于一种治疗剂；可选地，组合治疗的不同治疗剂可以通过不同的工具给药。当分别地给药治疗剂时，它们可以同时地给药或以任何顺序顺序地给药(时间上接近和远离)。将对CCR3抑制化合物和/或其它一种或多种药学上活性的试剂例如抗-VEGF治疗剂的量和给药的相对时间进行选择，以获得期望的组合的治疗作用。
给药至对象的量优选地为不会由于其给药而诱导超过有利作用的毒性作用的量。其他目标为与已知的护理标准相比较，数量降低，减小严重性，和/或缓解由个体中的疾病的症状导致的痛苦。
根据现有规定的化合物的制备将由政府机构(例如美国食品和药品管理局)制定的良好实验室规范(GLP)和良好生产规范(GMP)规范。这要求准确的和完全的纪录保存，以及对QA/QC的监控。还预见由机构和学术委员会制定的患者协议的监督，以确保获得知情同意；分阶段研究产品的安全性、生物学活性、适合的剂量、和有效性；结果为统计学上显著的；且遵循伦理指引。要求使用动物模型以及使用毒性化学品的相似的协议的监督，并且符合法规。
旨在抑制CCR3表达和/或活性的剂量、制剂、给药体积、方案、和分析结果的方法可以变化。因此，最小和最大有效剂量更具给药方法变化。与AMD相关的临床和组织学变化的抑制可以在特定的剂量范围内发生，然而，其根据接受所述剂量的有机体、给药途径、抑制CCR3的试剂是否与其他共刺激分子联合给药、和CCR3抑制剂的具体给药方案变化。例如，通常，鼻部给药要求小于口服、肠内、直肠或***给药的剂量。
对于用于本发明的口服或肠内制剂，可以采用本领域公知的固体载体根据常规的步骤配制片剂。将用于本发明的方法的口服制剂的胶囊剂可以由任何药学上可接受的物质例如明胶和纤维素衍生物制成。还预期用于口服给药的剂型的缓释的口腔递送***和/或肠溶包衣，例如1987年11月3日授权的美国专利第4,704,295号"Enteric Film-Coating Compositions"；1985年12月3日授权的美国专利第4,556,552号"Enteric Film-CoatingCompositions"；1982年1月5日授权的美国专利第4,309,404号"SustainedRelease Pharmaceutical Compositions"；和1982年1月5日授权的美国专利第4,309,406号"Sustained Release Pharmaceutical Compositions"中描述的那些。
使用CCR3抑制剂治疗AMD也可以口服给药，以局部滴眼剂的形式给药，眼周注射(例如筋膜下)给药，经过玻璃体内注射给药，或使用离子透入(可以主动地或被动地递送药物的眼周设备)给药。也可以通过使用例如固体植入物(其可以为生物可降解的或可以不为生物可降解的)技术或生物可降解的聚合物基质(例如微粒)的技术实现药物的缓释。这些也可以眼周给药或玻璃体内给药。
适于局部给药的药物制剂也可以配制为软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、散剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油剂的形式。
对于眼或其他外部组织例如口和皮肤的治疗，制剂可以以局部软膏剂或乳膏剂的形式施用。当配制为软膏剂时，活性成分可以与石蜡基的软膏基质或与水混溶的软膏基质一起使用。可选地，可以使用水包油乳膏基质或油包水基质将活性成分配制入乳膏剂中。
适于局部给药至眼的药物组合物包括滴眼剂，其中活性成分溶于或混悬于适合的载体特别是含水溶剂中。将给药至眼的制剂应具有眼科上相容的pH和同渗质量摩尔浓度。可以将一种或多种眼科上可接受的pH调节剂和/或缓冲液包括入本发明的组合物中，其包括酸例如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和验算；碱例如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠和乳酸钠；和缓冲液例如柠檬酸盐/右旋糖、碳酸氢钠和氯化铵。包括的这样的酸、碱、和缓冲液的量可以为将组合物的pH保持在眼科上可接受的范围内所需的量。组合物中可以包括量足以使组合物的同渗质量摩尔浓度处于眼科上可接受的范围内的一种或多种眼科上可接受的盐。这样的盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯化物、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的那些。
眼部递送设备可以经设计用于以多种限定的释放速率和持续的剂量动力学和渗透性控制释放一种或多种治疗剂。可以通过引入具有能够增强药物扩散、侵蚀、溶解和渗透的聚合物分子量、聚合物结晶度、共聚物比例、加工条件、表面加工、几何形状、赋形剂添加和聚合物涂层的不同选择和性质的生物可降解的/生物可蚀的聚合物(例如聚(乙烯乙烯基)乙酸酯(EVA)、超水解的PVA)、羟基烷基纤维素(HPC)、甲基纤维素(MC)、羟基丙基甲基纤维素(HPMC)、聚己内酯、聚(乙醇)酸、聚(乳)酸、聚酸酐而设计聚合物基质，从而获得控制释放。
用于使用眼部设备的药物递送的制剂可以组合适于所示的给药途径的一种或多种活性剂和佐剂。例如，活性剂可以与任何药学上可接受的赋形剂、乳糖、蔗糖、淀粉粉末、醇酸的纤维素酯、硬脂酸、化石、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、***胶、明教、海藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮、和/或聚乙烯醇共混，压片或包囊用于常规给药。可选地，化合物可以溶于聚乙二醇、丙二醇、羧甲基纤维素胶体溶液、乙醇、玉米油、花生油、棉籽油、芝麻油、黄蓍胶和/或多种缓冲液中。化合物还可以与具有时间延迟性质的生物可降解的和生物不可降解的组合物、和载体或稀释剂混合。生物可降解的组合物的代表性的实例可以包括白蛋白、明胶、淀粉、纤维素、右旋糖、多糖、聚(D,L-丙交酯)、聚(D,L-丙交酯-共-乙交酯)、聚(乙交酯)、聚(羟基丁酸酯)、聚(烷基碳酸酯)和聚(原酸酯)及其混合物。生物不可降解的聚合物的实例可以包括EVA共聚物，硅酮树脂和聚(丙烯酸甲酯)及其混合物。
用于眼部递送的药物组合物还包括可原位胶凝的含水组合物。这样的组合物包含胶凝剂，其浓度足以在与眼或泪液接触时促进胶凝。适合的胶凝剂包括但不限于热固化的聚合物。在给药至眼时，此处使用的术语“可原位胶凝”不仅包括与眼接触或与泪液接触时形成凝胶的低粘度的液体，而且还包括更粘的液体例如显示出实质上增加的粘度或凝胶刚性的半流体的和触变的凝胶。参见例如Ludwig(2005)Adv.Drug Deliv.Rev.3；57:1595-639，由于其对于用于眼部药物递送的聚合物的实例的教导的目的，将其在此处援引加入本文。
参考文献
此处和整个申请中引用的参考文献援引加入本文。
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Claims (18)

1.治疗和/或预防对象中与血管新生相关的眼部障碍或疾病的方法，所述方法包括：
识别患有与血管新生相关的眼部疾病或障碍或具有发展与血管新生相关的眼部疾病或障碍的风险的对象，和
向有需要的对象给药包含用于抑制CCR3蛋白的活性和/或表达的试剂的药物组合物。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述眼部疾病或障碍为新血管AMD。
3.治疗和/或预防对象中与脉络膜血管渗透性增加相关的眼部障碍或疾病的方法，所述方法包括：
识别患有与脉络膜血管渗透性增加相关的新血管AMD或障碍或具有发展与脉络膜血管渗透性增加相关的新血管AMD或障碍的风险的对象，和
向需要其的对象给药包含用于抑制CCR3蛋白的活性和/或表达的试剂的药物组合物。
4.如权利要求1所述的方法，其中所述眼部疾病或障碍为干性AMD或地图样萎缩AMD。
5.治疗和/或预防患有AMD的对象或具有患AMD的风险的对象中的AMD的方法，包括向所述对象给药包含能够抑制CCR3蛋白的活性和/或表达的试剂的药物组合物。
6.如权利要求5所述的方法，其中CCR3蛋白的抑制降低AMD的症状或使AMD的症状停止。
7.治疗和/或预防患有AMD的对象或具有患AMD的风险的对象中的AMD的方法，包括向所述对象给药包含能够抑制CCR3蛋白的活性和/或表达的试剂的药物组合物，其中CCR3蛋白的抑制降低AMD的症状或使AMD的症状停止，此外，所述试剂与抗-VEGF抑制剂组合给药。
8.预防具有发展脉络膜血管新生和/或随后的脉络膜血管渗透性增加的风险的对象中的萎缩视网膜背景上的CNV损伤的发展的方法，包括向所述对象给药包含能够抑制CCR3蛋白的活性和/或表达的试剂的药物组合物，其中所述CCR3蛋白的抑制预防这样的损伤的发展，所述试剂可以单独给药或与抗-VEGF抑制剂组合给药。
9.预防萎缩性AMD和非血管AMD转化成为新血管AMD的方法，包括向对象给药包含能够抑制CCR3蛋白的活性和/或表达的试剂的药物组合物，其中所述CCR3蛋白的抑制防止这样的向新血管AMD的转化，所述试剂可以单独给药或与抗-VEGF抑制剂组合给药。
10.如权利要求1、3、5、7、8或9所述的方法，其中所述试剂为4-[[[[[[(2s)-4-[(3,4-二氯苯基)甲基]-2-吗啉基]甲基]-氨基]羰基]-氨基]甲基]苯甲酰胺，或其药学上可接受的盐。
11.如权利要求1、3、5、7、8或9所述的方法，其中所述试剂为N-[[(2S)-4-[(3,4-二氟苯基)甲基]-2-吗啉基]-甲基]-3-[(甲基磺酰基)氨基]-苯乙酰胺，或其药学上可接受的盐。
12.如权利要求1、3、5、7、8或9所述的方法，其中所述对象为哺乳动物。
13.如权利要求1、3、5、7、8或9所述的方法，其中所述对象为人类。
14.如权利要求1、3、5、7、8或9所述的方法，另外包括向对象给药额外的治疗剂。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述额外的治疗剂为选自帕唑帕尼、和的抗-VEGF抑制剂。
16.如权利要求1、3、5、7、8或9所述的方法，另外包括在给药包含能够抑制CCR3的试剂的药物组合物之后通过测量所述对象的视敏度来监控治疗。
17.能够抑制CCR3的表达和/或活性的试剂在制备用于治疗和/或预防眼部新血管障碍的药物中的用途。
18.能够抑制CCR3蛋白的表达和/或活性的试剂在制备用于治疗和/或预防AMD的药物中的用途。
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