CN104193849B - 一种依诺肝素钠的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种依诺肝素钠的生产方法,所述方法首先将肝素钠酶解后,进行HPLC分析,采用峰面积归一化法计算各个峰的含量,根据肝素钠酶解后的二糖和四糖的标准图谱,确定待测肝素钠酶解后二糖和四糖的种类,并与标准图谱的二糖和四糖的含量进行比较,选择符合标准要求的肝素钠原料进行依诺肝素钠的生产。本发明简单有效,不仅能够保证产品的安全性有效性,而且从源头控制依诺肝素钠的质量,能够避免肝素钠原料药的浪费,大大节约了成本,提高了生产效率。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域,具体地说是一种依诺肝素钠的生产方法。
背景技术
肝素是由L-艾杜糖醛酸(或葡糖醛酸)和N-乙酰葡糖胺(或D-葡糖胺)形成的二糖单元重复构成的高度硫酸化的线性多糖,具有抗凝血作用,被广泛用于治疗静脉血栓和预防凝血。低分子肝素是未分级肝素中具有较低分子量的组份或片段,是新一代肝素类抗血栓药物。肝素经过酶或化学的方式部分降解就可以获得低分子肝素。低分子肝素类产品因分子量较小,不易被第IV因子中和,抗凝效果和纤溶作用得以增强,而抗血小板、影响血小板功能、影响血液凝固性、诱发出血的作用大为减弱,加之生物利用度高达98%,量效关系明确,抗凝效果易于预测,血浆半衰期较普通肝素长2~3倍,同时具有快速和持续的抗血栓形成作用,改善血流动力学,因而国内市场以那曲肝素钙、依诺肝素钠为代表的低分子肝素类产品已逐步取代普通肝素产品。依诺肝素钠是由法国安万特公司研制开发的一种目前销售量最大的新型抗凝药物。
由于低分子肝素钠结构的多样性,因此低分子肝素钠的结构确定非常重要。FDA要求从结构上证明仿制药物与原产家药物具有生物一致性。因此,低分子肝素精细结构的分析方法很快成为学术界和制药界关注的焦点。
依诺肝素钠需要严格控制完全降解后的依诺肝素钠产生的二糖及四糖的含量,以及依诺肝素钠独有的1,6-脱氢环结构的含量,以保证产品的有效性和安全性。专利CN102792158B提供了一种用于定量分析的依诺肝素钠特征性寡糖结构的毛细管电泳方法。专利CN102323355B提供了一种酶解-HPLC法检测依诺肝素的方法。这两种方法都是依诺肝素钠的结构分析方法,是对成品的质量控制,无法从源头对依诺肝素钠的质量进行控制。
肝素原料药可直接被用于制成标准肝素制剂,或进一步加工制成低分子肝素原料药,再制成低分子肝素制剂。肝素钠是从新鲜的健康的生猪的小肠粘膜中提取制成的,由于原料的差异性,导致所制得的肝素钠结构的差异性。同样地,由于不同批次肝素钠结构差异,使得加工得到的达肝素钠批次间也存在差异。在达肝素钠的生产中,存在因肝素钠的结构不适合,致使该批达肝素钠产品的结构不符合标准的情况,不仅浪费时间、人力和物力,而且不利于生产和经济。
发明内容
本发明的目的就是针对上述现有技术的不足,提供一种依诺肝素钠的生产方法,本法包括对原料的筛选,本发明简单有效,不仅能够保证产品的安全性有效性,而且能够避免肝素钠原料的浪费,提高了生产效率。
本发明的目的可以通过以下措施达到:
一种依诺肝素钠的生产方法,其包括如下步骤:
1)肝素钠酶解:将肝素钠原料配制成水溶液,向其加入含有肝素酶Ⅰ、肝素酶Ⅱ和肝素酶Ⅲ的混合肝素酶溶液,进行酶解64~72小时,制成肝素钠酶解溶液;其中混合肝素酶溶液中各肝素酶的含量比为肝素酶Ⅰ:肝素酶Ⅱ:肝素酶Ⅲ=1:0.6:0.2;
2)分离分析:将所述肝素钠酶解溶液注入HPLC中进行检测,记录色谱图,根据肝素钠的二糖和四糖的保留时间,确定待测肝素钠中的二糖和四糖的种类,并计算待测肝素钠酶解后10个二糖和2个四糖的含量;其中检测条件为:色谱柱为季铵型强阴离子交换色谱柱,检测器为紫外检测器,检测波长为220~240nm,使用流动相A和流动相B梯度洗脱,所述流动相A为磷酸二氢钠溶液,所述流动相B为磷酸二氢钠和高氯酸钠的混合溶液;
3)原料药筛选:选取酶解后二糖和四糖的含量符合下述要求的待测肝素钠作为依诺肝素钠原料;其中二糖和四糖色谱峰的峰面积分别在1.8%~3.7%、≤1.0%、1.8%~3.6%、2.3%~4.4%、1.1%~2.1%、≤3.9%、8.4%~11.9%、4.0%~8.8%、1.1%~2.0%、≤1.0%、52.4%~66.9%、1.6%~3.4%范围内;
4)生产依诺肝素钠:以步骤3)中选取的肝素钠为原料,经过季铵盐化、酯化和氧化反应,得到依诺肝素钠。
在步骤1)中,酶解温度优选为25℃;混合肝素酶溶液中肝素酶Ⅰ的含量为1.0/3IU/mL,肝素酶Ⅱ的含量为0.6/3IU/mL,肝素酶Ⅲ的含量为0.2/3IU/mL。
在步骤2)中,流动相的配制优选为:流动相为流动相A和流动相B,所述流动相A为0.20~0.30g/L的磷酸二氢钠溶液,所述流动相B为0.20~0.30g/L的磷酸二氢钠和120~140g/L的高氯酸钠的混合溶液。在HPLC检测过程中,进样量为5~20μL,流速为0.2~1.2mL/min,柱温为50~55℃。
在步骤2)中,仪器条件:所用仪器为高效液相色谱仪(HPLC),色谱柱季铵型强阴离子交换色谱柱,所用检测器为紫外检测器,检测波长为220~240nm,进样量为5~20μL,流速为0.2~1.2mL/min,柱温为50~55℃,使用流动相A和流动相B梯度洗脱的过程优选见表1。
表1
时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 97 | 3 |
20 | 65 | 35 |
50 | 0 | 100 |
60 | 0 | 100 |
61 | 97 | 3 |
79 | 97 | 3 |
在步骤2)中,将肝素钠酶解后的溶液注入HPLC,记录色谱图,根据现有的肝素钠的标准二糖和四糖的保留时间,确定待测肝素钠中的二糖和四糖的种类,并计算待测肝素钠酶解后二糖和四糖的含量,肝素钠酶解后二糖有10个,分别是△IVA、△IVSgal、△IVS、△IIA、△IIIA、△IISgal、△IIS、△IIIS、△IA、△IS,四糖有2个,分别是△IIA-IVSglu和△IIA-IISglu,所述的肝素钠的二糖和四糖的要求见下表:
在步骤3)中,根据步骤2)所计算的待测肝素钠酶解后二糖和四糖的含量是否符合标准中含量范围要求,以此判断肝素钠原料是否适合用于生产依诺肝素钠。其中选取的依诺肝素钠原料酶解后二糖和四糖的含量要求见表2。
表2
峰号 | 峰定义 | 保留时间 | 峰面积百分比 |
1 | △IVA | 7.0~7.5min | 1.8%~3.7% |
2 | △IVSgal | 14.0~15.0min | P~≤1.0% |
3 | △IVS | 14.2~15.2min | 1.8%~3.6% |
4 | △IIA | 16.3~16.8min | 2.3%~4.4% |
5 | △IIIA | 18.0~19.0min | 1.1%~2.1% |
6 | △IISgal | 20.5~21.5min | ≤3.9% |
7 | △IIS | 21.5~23.0min | 8.4%~11.9% |
8 | △IIIS | 23.5~25.0min | 4.0%~8.8% |
9 | △IA | 26.0~28.0min | 1.1%~2.0% |
10 | △IIA-IVSglu | 29.5~31.0min | P~≤1.0% |
11 | △IS | 30.5~32.0min | 52.4%~66.9% |
12 | △IIA-IISglu | 33.0~35.0min | 1.6%~3.4% |
其中“P”表示此峰必须存在。
在步骤4)中,以肝素钠为原料生产依诺肝素钠的过程经过季铵盐化、酯化和氧化反应,以及与之相配的分离和纯化步骤,一种生产过程为:称取筛选出的肝素钠原料,加水溶解制成8%~15%的肝素钠溶液,20~30℃下缓缓加入卞索氯铵溶液,充分混匀,离心分离得到季铵盐肝素,重复进行洗涤和离心操作后干燥,向季铵盐肝素中加入二氯甲烷后搅拌溶解加入氯化苄,保持溶液温度29~31℃进行酯化反应得到酯化液,对酯化液用无水乙酸钠的甲醇液沉淀,再用水和氯化钠溶液并用甲醇沉淀后,得到酯化肝素;取酯化肝素用纯化水溶解后加入氢氧化钠溶液反应,再用酸调节溶液PH值至7.0-7.5用用甲醇沉淀,将沉淀物加入纯化水溶解溶液后加入过氧化氢,在PH值10.5-11.0、温度25-30℃下进行氧化反应,反应后调节溶液PH6.1~6.3,再用滤膜过滤并用乙醇沉淀,将沉淀物脱水干燥得到依诺肝素钠。该步骤中的一些优选条件为:卞索氯铵固体的加入量是肝素钠重量的1~5倍,优选为2~3倍,更优选为2.5倍,卞索氯铵溶液的质量含量为5~15%,所述的季铵盐肝素的干燥温度为47~53℃,干燥时间为60~70h,所述的无水乙酸钠的甲醇液的加入量为二氯甲烷与氯化苄总体积的1.2倍;季铵盐肝素与二氯甲烷的重量体积比为1:3.5(g/ml),季铵盐肝素与氯化苄的重量体积比为1:1(g/ml),酯化反应时间为24~26h;酯化肝素与氢氧化钠溶液反应时,酯化肝素与氢氧化钠的质量比为10:1。
在一种优选方案中,步骤4)的过程包括如下操作:称取筛选出的肝素钠原料,加水溶解制成8%~15%的肝素钠溶液,20~30℃下缓缓加入质量含量为10%的卞索氯铵溶液,充分混匀,离心分离得到季铵盐肝素,加入肝素钠体积35~40倍的纯化水,搅拌洗涤30min,离心,重复洗涤、离心操作3次,将离心后的季铵盐肝素放入真空干燥箱中干燥,按季铵盐肝素重量的1:3.5(w/v)加入二氯甲烷,30±1℃下搅拌至完全溶解,按季铵盐肝素重量1:1(w/v)加入氯化苄,保持溶液温度30±1℃,酯化25h±30min,得到酯化液,将10%(w/v)的无水乙酸钠的甲醇液缓缓加入酯化液中,充分混匀后,离心,离心后的物料用纯化水溶解,溶解后体积约为肝素季铵盐重量的4.5-5.0倍量(w/v),加入溶液体积8%(w/v)的氯化钠,搅拌使氯化钠溶解后,加入溶液体积2.5倍(v/v)的甲醇沉淀,静置2~4小时,弃去上清,沉淀物脱水、离心后,45±3℃,干燥30-35h,得到酯化肝素,称取酯化肝素,按1:20(w/v)加入纯化水搅拌溶解得到酯化肝素溶液,按酯化肝素重量的10%(w/w)称取氢氧化钠,按1:9(w/v)加入纯化水使氢氧化钠溶解得到氢氧化钠溶液,将氢氧化钠溶液加入酯化肝素溶液中,55-60分钟后,用1moL/L盐酸调节溶液PH7.0-7.5,加入溶液体积2.0倍的甲醇沉淀3~5小时后,加入溶液体积0.5-0.6倍甲醇脱水,得到的沉淀加入纯化水溶解成10~15%的溶液,加入溶液体积0.5%-1.0%的30%过氧化氢,维持PH10.5-11.0,温度25-30℃,氧化4小时,氧化结束,用1mol/L盐酸调节溶液PH6.1~6.3,所得溶液用0.45μm滤膜及0.2μm滤膜过滤,过滤后的溶液加入2.0倍的乙醇沉淀,然后脱水干燥得到依诺肝素钠原料药。
本发明的有益效果:本方法可以从源头上避免生产出结构不符合标准的依诺肝素钠,造成肝素钠原料药的浪费。本法对肝素钠原料药的结构进行测定,筛选出适合生产依诺肝素钠的肝素钠原料药,有效地避免了因肝素钠原料药不适导致的依诺肝素钠产品不合格,从源头控制依诺肝素钠的质量,大大节约了成本,提高了生产效率。
附图说明
图1是肝素钠酶解后的二糖和四糖的HPLC标准图谱。
图2是实施例1中符合要求的3批肝素钠原料药(50114232批、50114236批、50114238批)经酶解后的HPLC图谱。
图3是实施例1中不符合要求的3批肝素钠原料药(50114231批、50114233批、50114235批)经酶解后的HPLC图谱。
具体实施方式
实施例1:
1)肝素钠溶液配制:精密称取肝素钠20mg,置2mL的离心管中,加1mL的超纯水,涡旋溶解,摇匀,即得20mg/mL的肝素钠溶液;
2)磷酸缓冲溶液配制:精密称取磷酸二氢钾68mg,加牛血清白蛋白10mg,置50mL容量瓶中,加30mL超纯水溶解,测定pH,如有需要用1M的氢氧化钾调节pH7.0,用超纯水稀释至刻度,摇匀。每次使用前用针筒吸取一定体积,用0.45μm滤膜过滤后使用;
3)肝素酶I,II,III的混合液:根据三种肝素酶的标示量,计算各自所需的体积,分别吸取该体积溶于一定量的磷酸缓冲溶液中,配制含有肝素酶I,II,III含量分别为1.0/3IU/mL、0.6/3IU/mL、0.2/3IU/mL的肝素酶混合溶液。
4)肝素钠酶解:在20mg/mL的肝素钠的水溶液中加入混合肝素酶溶液,25℃的水浴中酶解64~72小时,制成肝素钠酶解溶液。选取8个批次的肝素钠,平行配制肝素钠酶解溶液。
5)流动相配制:流动相A:精密称取0.280g的磷酸二氢钠,加950mL超纯水溶解后用磷酸调节pH至3.0,稀释至1000mL,用0.22μm或0.45μm的微孔滤膜过滤后,超声脱气,即得。流动相B:精密称取0.280g的磷酸二氢钠和140g高氯酸钠,加950mL超纯水溶解后用磷酸调节pH至3.0,稀释至1000mL,用0.22μm或0.45μm的微孔滤膜过滤后,超声脱气,即得。
6)仪器条件:所用仪器为高效液相色谱仪(HPLC),色谱柱季铵型强阴离子交换色谱柱,所用检测器为紫外检测器,检测波长为234nm,进样量为10μL,流速为1.0mL/min,柱温为50℃,使用流动相A和流动相B梯度洗脱,梯度洗脱见表3。
表3
时间(min) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 97 | 3 |
20 | 65 | 35 |
50 | 0 | 100 |
60 | 0 | 100 |
61 | 97 | 3 |
79 | 97 | 3 |
7)分离分析:分别将6个批次的肝素钠酶解溶液注入HPLC,记录色谱图(见图2、图3)。
8)根据现有的肝素钠的标准二糖和四糖的保留时间,确定待测肝素钠酶解溶液中的二糖和四糖的种类,肝素钠的标准二糖和四糖的要求见下表4。
表4
峰号 | 峰定义 | 保留时间 | 峰面积百分比的接受标准 |
1 | △IVA | 7.0~7.5min | 1.8%~3.7% |
2 | △IVSgal | 14.0~15.0min | P~≤1.0% |
3 | △IVS | 14.2~15.2min | 1.8%~3.6% |
4 | △IIA | 16.3~16.8min | 2.3%~4.4% |
5 | △IIIA | 18.0~19.0min | 1.1%~2.1% |
6 | △IISgal | 20.5~21.5min | ≤3.9 |
7 | △IIS | 21.5~23.0min | 8.4%~11.9% |
8 | △IIIS | 23.5~25.0min | 4.0%~8.8% |
9 | △IA | 26.0~28.0min | 1.1%~2.0% |
10 | △IIA-IVSglu | 29.5~31.0min | P~≤1.0% |
11 | △IS | 30.5~32.0min | 52.4%~66.9% |
12 | △IIA-IISglu | 33.0~35.0min | 1.6%~3.4% |
其中“P”表示此峰必须存在。
9)确定待测肝素钠酶解溶液中的二糖和四糖的种类,采用峰面积归一化法计算待测肝素钠酶解后二糖和四糖的峰面积百分比含量。
10)肝素钠原料药筛选:分别选取不同批次的六批肝素钠原料(分别为50114231批、50114232批、50114233批、50114235批、50114236批、50114238批)按上述步骤1)-9)进行酶解和HPLC检测,计算酶解后二糖和四糖的峰面积百分比含量,判断待测肝素钠酶解后二糖和四糖的含量是否符合标准中含量范围要求。统计结果见表5。
表5
可见,50114232、50114236、50114238这3批肝素钠原料药符合要求,可以用于生产依诺肝素钠。而50114231、50114233、50114235这3批肝素钠原料药不符合要求,不适合用于生产依诺肝素钠。
生产依诺肝素钠:称取上述各批肝素钠原料,加水溶解制成10%的肝素钠溶液,20~30℃下缓缓加入10%(w/w)的卞索氯铵溶液,充分混匀,离心分离得到季铵盐肝素,加入肝素钠体积37倍的纯化水,搅拌洗涤30min,离心,重复洗涤、离心操作3次,将离心后的季铵盐肝素放入真空干燥箱中干燥,按季铵盐肝素重量的1:3.5(w/v,g/ml)加入二氯甲烷,30±1℃下搅拌至完全溶解,按季铵盐肝素重量1:1(w/v,g/ml)加入氯化苄,保持溶液温度30±1℃,酯化25h±30min,得到酯化液,将质量体积含量为10%(g/ml)的无水乙酸钠的甲醇液缓缓加入酯化液中,充分混匀后,离心,离心后的物料用纯化水溶解,溶解后体积约为肝素季铵盐重量的5.0倍量(w/v,g/ml),加入溶液体积8%(g/ml)的氯化钠,搅拌使氯化钠溶解后,加入溶液体积2.5倍(v/v)的甲醇沉淀,静置3小时,弃去上清,沉淀物脱水、离心后,45±3℃,干燥35h,得到酯化肝素,称取酯化肝素,按1:20(w/v,g/ml)加入纯化水搅拌溶解得到酯化肝素溶液,按酯化肝素重量的10%(w/w)称取氢氧化钠,按1:9(w/v,g/ml)加入纯化水使氢氧化钠溶解得到氢氧化钠溶液,将氢氧化钠溶液加入酯化肝素溶液中,60分钟后,用1moL/L盐酸调节溶液PH7.0,加入溶液体积2.0倍的甲醇沉淀3小时后,加入溶液体积0.6倍甲醇脱水,得到的沉淀加入纯化水溶解成10%的溶液,加入溶液体积0.8%的30%过氧化氢,维持PH10.5,温度25-30℃,氧化4小时,氧化结束,用1mol/L盐酸调节溶液PH6.3,所得溶液用0.45μm滤膜及0.2μm滤膜过滤,过滤后的溶液加入2.0倍的乙醇沉淀,然后脱水干燥得到依诺肝素钠原料药。
以这6批肝素钠为原料生产的依诺肝素钠经肝素酶酶解后,进行HPLC分析,以峰面积归一化法统计其多糖的峰面积百分比,与现有的依诺肝素钠多糖含量(峰面积百分比)标准进行比较,统计结果见表6和表7。
表6
表7
其中,以50114232、50114236、50114238这3批肝素钠为原料生产依诺肝素钠,得到的依诺肝素钠的结构都符合标准,而以50114231、50114233、50114235这3批肝素钠为原料生产依诺肝素钠,得到的依诺肝素钠的结构都不符合标准。
Claims (10)
1.一种依诺肝素钠的生产方法,其特征在于其包括如下步骤:
1)肝素钠酶解:将肝素钠原料配制成水溶液,向其加入含有肝素酶Ⅰ、肝素酶Ⅱ和肝素酶Ⅲ的混合肝素酶溶液,进行酶解64~72小时,制成肝素钠酶解溶液;其中混合肝素酶溶液中各肝素酶的含量比为肝素酶Ⅰ:肝素酶Ⅱ:肝素酶Ⅲ=1:0.6:0.2;
2)分离分析:将所述肝素钠酶解溶液注入HPLC中进行检测,记录色谱图,根据肝素钠的二糖和四糖的保留时间,确定待测肝素钠中的二糖和四糖的种类,并计算待测肝素钠酶解后10个二糖和2个四糖的含量;其中检测条件为:色谱柱为季铵型强阴离子交换色谱柱,检测器为紫外检测器,检测波长为220~240nm,使用流动相A和流动相B梯度洗脱,所述流动相A为磷酸二氢钠溶液,所述流动相B为磷酸二氢钠和高氯酸钠的混合溶液;
3)原料药筛选:选取酶解后二糖和四糖的含量符合下述要求的待测肝素钠作为依诺肝素钠原料;其中二糖分别为△IVA、△IVSgal、△IVS、△IIA、△IIIA、△IISgal、△IIS、△IIIS、△IA和△IS,二糖色谱峰的峰面积依次在1.8%~3.7%、≤1.0%、1.8%~3.6%、2.3%~4.4%、1.1%~2.1%、≤3.9%、8.4%~11.9%、4.0%~8.8%、1.1%~2.0%、52.4%~66.9%范围内;四糖分别为△IIA-IVSglu和△IIA-IISglu,四糖色谱峰的峰面积依次在≤1.0%、1.6%~3.4%范围内;
4)生产依诺肝素钠:以步骤3)中选取的肝素钠为原料,经过季铵盐化、酯化和氧化反应,得到依诺肝素钠。
2.根据权利要求1所述的依诺肝素钠的生产方法,其特征在于在步骤1)中,酶解温度为25℃;混合肝素酶溶液中肝素酶Ⅰ的含量为1.0/3IU/mL,肝素酶Ⅱ的含量为0.6/3IU/mL,肝素酶Ⅲ的含量为0.2/3IU/mL。
3.根据权利要求1所述的依诺肝素钠的生产方法,其特征在于在步骤2)中,所述流动相A为0.20~0.30g/L的磷酸二氢钠溶液,所述流动相B为磷酸二氢钠和高氯酸钠的混合溶液,流动相B中磷酸二氢钠的浓度为0.20~0.30g/L,高氯酸钠的浓度为120~140g/L。
4.根据权利要求1所述的依诺肝素钠的生产方法,其特征在于在步骤2)中,在HPLC检测过程中,进样量为5~20μL,流速为0.2~1.2mL/min,柱温为50~55℃。
5.根据权利要求1所述的依诺肝素钠的生产方法,其特征在于在步骤3)中,选取的依诺肝素钠原料酶解后二糖和四糖的含量要求为:
其中“P”表示此峰必须存在。
6.根据权利要求1所述的依诺肝素钠的生产方法,其特征在于在步骤2)中,使用流动相A和流动相B进行梯度洗脱的过程为:
。
7.根据权利要求1所述的依诺肝素钠的生产方法,其特征在于在步骤4)中,称取筛选出的肝素钠原料,加水溶解制成8%~15%的肝素钠溶液,20~30℃下缓缓加入卞索氯铵溶液,充分混匀,离心分离得到季铵盐肝素,重复进行洗涤和离心操作后干燥,向季铵盐肝素中加入二氯甲烷后搅拌溶解加入氯化苄,保持溶液温度29~31℃进行酯化反应得到酯化液,对酯化液用无水乙酸钠的甲醇液沉淀,再用水和氯化钠溶解并用甲醇沉淀后,得到酯化肝素;取酯化肝素用纯化水溶解后加入氢氧化钠溶液反应,再用酸调节溶液pH值至7.0-7.5后用甲醇沉淀,将沉淀物加入纯化水溶解溶液后加入过氧化氢,在pH值10.5-11.0、温度25-30℃下进行氧化反应,反应后调节溶液pH6.1~6.3,再用滤膜过滤并用乙醇沉淀,将沉淀物脱水干燥得到依诺肝素钠。
8.根据权利要求7所述的依诺肝素钠的生产方法,其特征在于在步骤4)中,卞索氯铵的加入量是肝素钠重量的1~5倍,所加入的卞索氯铵溶液中卞索氯铵的质量含量为5~15%,所述的季铵盐肝素的干燥温度为47~53℃,干燥时间为60~70h,所述的无水乙酸钠的甲醇液的加入量为二氯甲烷与氯化苄总体积的1.2倍;季铵盐肝素与二氯甲烷的重量体积比为1:3.5g/ml,季铵盐肝素与氯化苄的重量体积比为1:1g/ml,酯化反应时间为24~26h;酯化肝素与氢氧化钠溶液反应时,酯化肝素与氢氧化钠的质量比为10:1。
9.根据权利要求8所述的依诺肝素钠的生产方法,其特征在于在步骤4)中,卞索氯铵的加入量是肝素钠重量的2~3倍。
10.根据权利要求9所述的依诺肝素钠的生产方法,其特征在于在步骤4)中,卞索氯铵的加入量是肝素钠重量的2.5倍。
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Citations (5)
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---|---|---|---|---|
CN1934135A (zh) * | 2004-03-24 | 2007-03-21 | 艾文蒂斯药品公司 | 使用hplc定量测定具体组成肝素或低分子量肝素的方法 |
US8101733B1 (en) * | 2006-06-27 | 2012-01-24 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Methods of evaluating mixtures of polysaccharides |
CN102792158B (zh) * | 2011-01-28 | 2013-07-10 | 杭州九源基因工程有限公司 | 一种基于毛细管电泳的依诺肝素钠精细结构测定方法 |
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Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
"Chromatographic methods for product-profile analysis and isolation of oligosaccharides produced by heparinase-catalyzed depolymerization of heparin";Wei-Lien Chuang et al.;《Journal of Chromatography A》;20010930;第932卷;第65-74页 * |
"Novel reverse-phase ion pair-high performance liquid chromatography separation of heparin, heparan sulfate and low molecular weight-heparins disaccharides and oligosaccharides";Fabio Galeotti et al.;《Journal of Chromatography A》;20130211;第1284卷;第141-147页 * |
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