CN104188988A - 冬凌草甲素衍生物注射剂及其制备 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种冬凌草甲素衍生物注射剂及其制备工艺。具体地，该注射剂包括药用有效量的冬凌草甲素衍生物以及药学上可接受量的pH调节剂和赋形剂。在考察制备工艺的同时，还进一步考察了此注射剂的血管刺激性、肌肉刺激性。本发明制备工艺简单、操作容易；本注射剂刺激性低、静脉注射安全性高，可用于白血病、中晚期食管癌、肝癌等多种癌症的治疗。

Description

冬凌草甲素衍生物注射剂及其制备

技术领域：

本发明属于药物制剂领域，涉及一种抗肿瘤的注射剂及其制备方法。

背景技术：

癌症是各种恶性肿瘤的统称，它以癌细胞无限制地增生、患者体内的营养物质被大量消耗为基本特征；癌细胞在增生同时，也会释放出多种毒素，使人体产生一系列症状；癌细胞还可转移到全身各处生长繁殖，导致人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热以及严重的脏器功能受损等等。随着组织和器官的结构和功能的逐渐损坏，患者最终由于器官功能衰竭而死亡。环境污染、化学污染(化学毒素)、电离辐射、自由基毒素、微生物(细菌、真菌、病毒等)及其代谢毒素、遗传特性、内分泌失衡、免疫功能紊乱这些都是导致癌症的因素。这些因素的存在导致我国近20年来癌症呈现年轻化及发病率和死亡率“三线”走高的趋势。有资料显示，每分钟就有6人确诊为癌症，因此寻找有效的抗肿瘤的药物制剂成为一项艰巨而迫切的任务。

冬凌草甲素(Oridonin)是从唇形科(Labtea)香茶菜属(Rabdosia)植物中分离出的一种贝壳杉烯二萜类(ent-kaurene diterpenoid)天然有机化合物,也是冬凌草中抗肿瘤的主要有效成分。它在临床上曾用于食管癌和肝癌的治疗，取得了一定疗效，是一种很有前景的抗癌新药。目前国内外对冬凌草甲素抗肿瘤作用的机制研究比较广泛。研究认为，冬凌草甲素能通过降低Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白表达诱导细胞发生凋亡,抑制肿瘤细胞的生长。

冬凌草甲素作为一种有效的抗肿瘤化合物，在水相和油相中溶解度均较差，因此限制了其临床应用。目前已经有研究将冬凌草甲素先制备成包合物、脂质体等中间剂型之后，再利用这些中间剂型制备成注射剂，但是其稳定性和释药性都存在一定的缺陷；也有研究直接将冬凌草甲素利用助溶剂、增溶剂来提高溶解度从而制备成注射剂，但是这些辅料的加入所引起的血管刺激、注射疼痛等问题导致该注射液不利于长期注射。本发明中冬凌草甲素衍生物注射液，利用冬凌草的水溶性衍生物在水中溶解度好、在血液中可转化成冬凌草甲素的特点，制成载药量高、刺激性低、可长期注射的注射剂，从而解决了冬凌草甲素溶解度差、不利于制备成注射剂的问题。

发明内容：

本发明旨在提供一种冬凌草甲素衍生物注射剂的制备方法，该方法相较已有的冬凌草注射剂制备方法来说操作简单，辅料的选择和用量更合理，制剂的刺激性，长期应用更安全。

本发明的提供的冬凌草甲素注射剂的主药为冬凌草甲素衍生物，该衍生物为本公司另一专利ZL200810065505中合成的水溶性衍生物，其辅料包括赋形剂、pH调节剂。其处方组成为：冬凌草甲素衍生物80-110mg/ml，赋形剂5-220mg/ml，pH调节剂适量，调节pH5.0-7.0。

所述注射剂，其冬凌草甲素衍生物包括化合物A：冬凌草甲素-1-亚甲基磷酸酯钠；化合物B：冬凌草甲素-1-(N，N-二甲基丙胺)甲酸酯；化合物C：冬凌草甲素-1-[N-(N-甲基哌啶)-哌嗪]甲酸酯；化合物D：冬凌草甲素-1-丁二酸单酯钠。这些冬凌草甲素衍生物，相较于冬凌草甲素本身而言，具有更好的水溶性，能够在不采用任何增溶方法的情况下获得药用有效量的载药量。

所述注射剂，其pH调节剂选自盐酸缓冲液、磷酸缓冲液、醋酸缓冲液、酒石酸缓冲液、枸橼酸缓冲液、三氟乙酸缓冲液，调节pH5.0-7.0。在此pH下，制剂更稳定，更方便保存。

所述注射剂，其赋形剂选自甘露醇、乳糖、蔗糖、山梨醇、葡萄糖、氯化钠、等。在注射用粉针剂中优选甘露醇、乳糖、蔗糖和山梨醇，赋形剂的使用可以使冻干粉针剂疏松美观，溶解迅速，同时，在贮存过程中可以充当主药的稀释剂和适当的水分的吸收剂；在注射用水针剂中，优选氯化钠和葡萄糖，赋形剂可以使溶液保持适当的渗透压。

所述注射用粉针剂，其制备方法为：精密称取处方量的冬凌草甲素衍生物，加适量注射用水溶解；依次加入处方量的等渗调节剂、pH调节剂到上述溶液中，调节pH至5.0-7.0，注射用水定容；活性碳吸附热原，0.22μm钛棒过滤器过滤，0.22μm微孔滤膜过滤，定容至全量，分装，真空冷冻干燥、压塞、扎盖，检查合格后贴签包装即得冬凌草甲素衍生物注射用粉针剂。

所述注射用水针剂，其制备方法为：精密称取处方量的冬凌草甲素衍生物，加适量注射用水溶解；依次加入处方量的赋形剂、pH调节剂到上述溶液中，调节pH至5.0-7.0，注射用水定容；活性碳吸附热原，0.22μm钛棒过滤器过滤，0.22μm微孔滤膜过滤，定容至全量，分装，检查合格后贴签包装即得冬凌草甲素衍生物注射用水针剂。

本发明还进一步考察了该注射剂的血管刺激性、肌肉刺激性，以考察本注射剂长期注射的安全性。

下面将结合实施例对本发明进行详细描述，下列实施例仅用于说明本发明，而不限定本发明的范围。

具体实施方式：

实施例1

其制备工艺为：精密称取处方量的冬凌草甲素衍生物A，加适量注射用水溶解；依次加入处方量的甘露醇、乳糖、醋酸缓冲液到上述溶液中，调节pH至7.0，注射用水定容；活性碳吸附热原，0.22μm钛棒过滤器过滤，0.22μm微孔滤膜过滤，定容至全量，分装为100瓶(每瓶2ml)，真空冷冻干燥、压塞、扎盖，检查合格后贴签包装即得冬凌草甲素衍生物注射用粉针剂。

用本实验制得的冬凌草甲素衍生物A注射用粉针剂(每批100瓶)，通过动物血管刺激性、肌肉刺激性，对其临床用药安全性进行考察。

血管刺激性、肌肉刺激性实验：

血管刺激性：

选取双耳无损伤的健康家兔6只，以10mg/kg对其左侧耳缘静脉注射实施例1溶液，右耳注射等体积5％葡萄糖溶液，每天1次，连续注射7天。

注射期间，每天定时观察耳缘静脉的刺激性反应。第8天处死家兔，取双侧耳缘静脉及周围组织，用甲醛固定，在注射部位的近心端作常规组织切片，光镜下观察有无病理变化。观察指标及判断标准见表1-1。

表1-1 血管刺激性评分及判断标准

结果显示，家兔耳缘静脉注射实施例1溶液的刺激性，与5％葡萄糖溶液比较无明显差异。肉眼观察，未见血管充血、周围组织水肿等炎症反应。组织切片检查，未见血管结构异常、内皮损伤、血栓形成及其它病理变化。其肉眼和光镜观察的血管、周围组织的累计得分均小于0.5，表明无刺激性。

肌肉刺激性：

取健康家兔6只，以10mg/kg对每只家兔左侧股四头肌内注射实施例1溶液，右侧注射同体积生理盐水。注射后观察注射部位肌肉有无充血、水肿等反应，半数动物48h后(第3天)放血处死，纵向切开皮肤，肉眼观察两侧注射部位有无充血、水肿等反应，并取其组织做病理检查。然后按表1-1中的标准评价该药的刺激反应。余下动物继续观察14d，于第18天放血处死后重复上述操作，评价标准见表1-2。

表1-2 肌肉刺激反应评价标准

结果表明，家兔左侧股四头肌内注射实施例1溶液后，肉眼观察注射部位肌肉无充血、水肿等反应，病理组织检查亦未见组织变性或坏死等明显性刺激反应，与生理盐水侧相比无显著差异。

血管刺激性、肌肉刺激性实验表明，表明本发明制备的冬凌草甲素衍生物A注射用粉针剂安全性好，可供临床静脉注射与肌肉注射应用。

实施例2

其制备工艺为：精密称取处方量的冬凌草甲素衍生物A，加适量注射用水溶解；依次加入处方量的氯化钠、醋酸缓冲液到上述溶液中，调节pH至7.0，注射用水定容；活性碳吸附热原，0.22μm钛棒过滤器过滤，0.22μm微孔滤膜过滤，定容至全量，分装为100瓶(每瓶2ml)，检查合格后贴签包装即得冬凌草甲素衍生物注射用水针剂。

用本实验制得的冬凌草甲素衍生物A注射用水针剂(每批100瓶)，通过动物血管刺激性、肌肉刺激性，对其临床用药安全性进行考察。

血管刺激性、肌肉刺激性实验：

血管刺激性：

选取双耳无损伤的健康家兔6只，以10mg/kg对其左侧耳缘静脉注射实施例2溶液，右耳注射等体积5％葡萄糖溶液，每天1次，连续注射7天。

注射期间，每天定时观察耳缘静脉的刺激性反应。第8天处死家兔，取双侧耳缘静脉及周围组织，用甲醛固定，在注射部位的近心端作常规组织切片，光镜下观察有无病理变化。观察指标及判断标准见表2-1。

表2-2 血管刺激性评分及判断标准

结果显示，家兔耳缘静脉注射实施例2溶液的刺激性，与5％葡萄糖溶液比较无明显差异。肉眼观察，未见血管充血、周围组织水肿等炎症反应。组织切片检查，未见血管结构异常、内皮损伤、血栓形成及其它病理变化。其肉眼和光镜观察的血管、周围组织的累计得分均小于0.5，表明无刺激性。

肌肉刺激性：

取健康家兔6只，以10mg/kg对每只家兔左侧股四头肌内注射实施例2溶液，右侧注射同体积生理盐水。注射后观察注射部位肌肉有无充血、水肿等反应，半数动物48h后(第3天)放血处死，纵向切开皮肤，肉眼观察两侧注射部位有无充血、水肿等反应，并取其组织做病理检查。然后按表2-1中的标准评价该药的刺激反应。余下动物继续观察14d，于第18天放血处死后重复上述操作，评价标准见表2-2。

表2-2 肌肉刺激反应评价标准

结果表明，家兔左侧股四头肌内注射实施例2溶液后，肉眼观察注射部位肌肉无充血、水肿等反应，病理组织检查亦未见组织变性或坏死等明显性刺激反应，与生理盐水侧相比无显著差异。

血管刺激性、肌肉刺激性实验表明，表明本发明制备的冬凌草甲素衍生物A注射用水针剂安全性好，可供临床静脉注射与肌肉注射应用。

依照实施例1和实施例2的制备方法和检查方法，制备下述组分的注射剂，并进行检查。其组分如表3.

表3 实施例3-10处方组成

通过血管刺激性、肌肉刺激性试验，结果表明制备的这10种冬凌草甲素衍生物注射剂安全性好，可供临床静脉注射与肌肉注射应用。将上述注射剂置2-8℃下，在0、1、2、3、6个月时取样，按本领域已知的高效液相色谱法测定其稳定性，发现粉针剂比注射用溶液剂的稳定性更好；在两种类型的注射剂中，化合物A和化合物D具有更好的稳定性，同时，利用醋酸缓冲液来调节pH，其注射剂的稳定性更好。

Claims (8)

1.一种具有抗肿瘤作用的冬凌草甲素衍生物注射剂，其类型包括注射用粉针剂和注射用水针剂；其处方组成为：冬凌草甲素衍生物40-150mg/ml，赋形剂5-300mg/ml，pH调节剂适量，调节pH4-8。

2.根据权利要求1所述注射剂，其冬凌草甲素衍生物包括化合物A：冬凌草甲素-1-亚甲基磷酸酯钠；化合物B：冬凌草甲素-1-(N,N-二甲基丙胺)甲酸酯；化合物C：冬凌草甲素-1-[N-(N-甲基哌啶)-哌嗪]甲酸酯；化合物D：冬凌草甲素-1-丁二酸单酯钠，其结构式如下：

3.根据权利要求1所述注射剂，其处方组成为：冬凌草甲素衍生物60-130mg/ml，赋形剂5-260mg/ml，pH调节剂适量，调节pH5-7。

4.根据权利要求1所述注射剂，其处方组成为：冬凌草甲素衍生物80-110mg/ml，赋形剂5-220mg/ml，pH调节剂适量，调节pH5-7。

5.根据权利要求1所述注射剂，其pH调节剂选自盐酸缓冲液、磷酸缓冲液、醋酸缓冲液、酒石酸缓冲液、枸橼酸缓冲液、三氟乙酸缓冲液。

6.根据权利要求1所述注射剂，其赋形剂选自甘露醇、乳糖、蔗糖、山梨醇、葡萄糖、氯化钠，在注射用粉针剂中优选甘露醇、乳糖、蔗糖和山梨醇，在注射用水针剂中，优选氯化钠和葡萄糖。

7.根据权利要求2所述注射用粉针剂，其制备方法为：精密称取处方量的冬凌草甲素衍生物，加适量注射用水溶解；依次加入处方量的赋形剂、pH调节剂到上述溶液中，调节pH至5.0-7.0，注射用水定容；活性碳吸附热原，0.22μm钛棒过滤器过滤，0.22μm微孔滤膜过滤，定容至全量，分装，真空冷冻干燥、压塞、扎盖，检查合格后贴签包装即得冬凌草甲素衍生物注射用粉针剂。

8.根据权利要求2所述注射用水针剂，其制备方法为：精密称取处方量的冬凌草甲素衍生物，加适量注射用水溶解；依次加入处方量的赋形剂、pH调节剂到上述溶液中，调节pH至5.0-7.0，注射用水定容；活性碳吸附热原，0.22μm钛棒过滤器过滤，0.22μm微孔滤膜过滤，定容至全量，分装，检查合格后贴签包装即得冬凌草甲素衍生物注射用水针剂。