CN104155240A - 一种上清丸的质量控制方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物的控制方法技术领域,具体涉及一种上清丸的质量控制方法。本发明主要解决了现有上清丸的质量控制方法存在无法对组成药物进行化学鉴别和无法控制制剂中有效成分含量的技术问题。本发明采用的技术方案为:一种上清丸的质量控制方法,包括成分检查步骤,其中:它还包括成分鉴别和成分含量测定步骤;本发明具有能有效控制制剂质量和提高质量标准的优点。
Description
技术领域
本发明属于药物的控制方法技术领域,具体涉及一种上清丸的质量控制方法。
背景技术
上清丸系实火证类用药,具有清热散风、解毒和通便的功效,用于治疗头晕耳鸣、目赤、鼻窦炎、口舌生疮、牙龈肿痛和大便秘结。现有上清丸的质量控制方法存在无法对组成药物进行化学鉴别和无法控制制剂中有效成分含量的技术问题。
发明内容
本发明的目的是解决现有上清丸的质量控制方法存在无法对组成药物进行化学鉴别和无法控制制剂中有效成分含量的技术问题,提供一种上清丸的质量控制方法。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案为:
一种上清丸的质量控制方法,包括成分检查步骤,其中:它还包括成分鉴别和成分含量测定步骤;
所述成分鉴别步骤如下:
1)显微镜鉴别:取上清丸,置显微镜下观察:草酸钙簇晶大,直径60~140μm为大黄;纤维束鲜黄色,周围细胞含草酸钙方晶,形成晶纤维,含晶细胞壁木化增厚为黄柏;纤维淡黄色,梭形,壁厚,孔沟细为黄芩;内果皮纤维上下层纵横交错,纤维短梭形为连翘;花粉粒类圆形,直径24~34μm,外壁有刺,长3~5μm,具3个萌发孔为菊花;油管含金黄色分泌物,直径约30μm为 防风;果皮石细胞镶嵌排列成层为栀子;
2)黄柏的薄层色谱鉴别:取上清丸1.2g,剪碎,加甲醇30ml,超声处理20min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇5ml使溶解,作为供试品溶液;另取黄柏阴性样品,黄柏阴性样品由除去黄柏以外的其他同等处方量的药材制成,同法制成阴性空白溶液;再取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液2μl、阴性空白溶液2μl和对照品溶液1μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水10:7:1:1为展开剂,展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同黄绿色的荧光斑点,即为上清丸中含盐酸小檗碱;
3)大黄的薄层色谱鉴别:取上清丸1.2g,剪碎,加甲醇30ml,超声处理20min,滤过,滤液蒸干,残渣加水10ml使溶解,再加盐酸1ml,置水浴中加热30min,立即冷却,用***振摇提取2次,每次20ml,合并***液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取大黄对照药材0.1g及大黄阴性样品,大黄阴性样品由除去大黄以外的其他同等处方量的药材和蜂蜜制成,同法制成对照药材溶液与阴性空白溶液;再取大黄素对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液4μl、阴性空白溶液4μl、对照药材溶液2μl和对照品溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,在30~60℃的温度下以石油醚-甲酸乙酯-甲酸15:5:1上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,分别置日光下和波长为365nm的紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上,日光下显相同颜色的斑点;紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点,即为上清丸中含大黄素;
4)栀子薄层色谱鉴别:取上清丸7g,剪碎,加硅藻土7g,研匀,加浓度 为50%的甲醇50ml,超声处理40min,滤过,滤液蒸干,残渣加无水乙醇5ml使溶解,挥发至约0.5ml,作为供试品溶液;另取栀子药材1g与栀子阴性样品,栀子阴性样品由除去栀子以外的其他同等处方量的药材和蜂蜜制成,同法制成对照药材溶液和阴性空白溶液;再取栀子苷对照品,加无水乙醇制成每1ml含3mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl、阴性空白溶液10μl、对照药材溶液10μl、对照品溶液4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水5:5:1:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的***斑点,即为上清丸中含栀子苷;
5)黄芩的薄层色谱鉴别:取上清丸3g,剪碎,加硅藻土3g,研匀,加乙酸乙酯-甲醇3:1的混合溶液50ml,加热回流30min,自然冷却至常温,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇5ml使溶解,作为供试品溶液;另取黄芩对照药材1g与黄芩阴性样品,黄芩阴性样品由除去黄芩以外的其他同等处方量的药材和蜂蜜制成,同法制成对照药材溶液和阴性空白溶液;再取黄芩苷对照品,加甲醇制成每1ml含3mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl、阴性空白溶液10μl、对照药材溶液4μl和对照品溶液各4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水5:3:1.5:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上,显相同的棕色斑点,即为上清丸中含黄芩苷;
所述成分含量测定步骤如下:
1)色谱条件与***适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.2%磷酸溶液以48∶52为流动相;检测波长为280nm;理论板数按黄芩苷 峰计算应不低于5000;
2)对照品溶液的制备:精密称取黄芩苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含黄芩苷38μg的溶液,即得对照品溶液;
3)上清丸供试品溶液的制备:取重量差异项下的上清丸,剪碎,精密称定5g,精密加入等量硅藻土,研细,混匀,精密称定0.6g,置具塞锥形瓶中,精密加50ml浓度为70%的乙醇溶液,称定重量,在功率为100W和频率为40kHz的情况下超声处理30min,自然冷却至常温,再称定重量,用浓度为70%的乙醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取滤液,即得上清丸供试品溶液;
4)测定:分别精密吸取对照品溶液与上清丸供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得,每1g上清丸含黄芩苷不得少于5.21mg。
所述的上清丸是由菊花、薄荷、川芎、白芷、荆芥、防风、桔梗、连翘、栀子、酒炒的黄芩、酒炒的黄柏和酒炒的大黄制成,首先将各药材粉碎成细粉,然后过筛并混匀,最后向每100g粉末中加入炼蜜90~110g,即得上清丸。
为表明本发明具有良好的重复性,对上清丸进行6次含量测定试验,分别精密称取上清丸6份,按上述拟定的方法制成供试品溶液,对6份样品进行含量测定,进样量10μl,结果见表1。
表1 上清丸重复性试验结果
结果表明,本方法的RSD为0.43%,小于3%,表明本发明具有良好的重复 性。
为表明本发明具有良好的耐用性,分别考察了不同色谱柱温度(25℃、30℃、35℃)、流速(0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min)、流动相中甲醇比例(42%、44%、46%)所测得的供试品含量,结果见表2。
表2 含量测定方法耐用性结果
结论:通过改变含量测定方法中的色谱柱温度、流速、流动相中有机相比例和不同厂家和型号的色谱柱,在各种条件下,含量测定结果一致,表明本发明具有良好的耐用性。
综上所述,本发明采用以上技术方案,在现有的上清丸的质量控制方法步骤中增加了组成药物的化学鉴别和含量测定步骤,解决了现有上清丸的质量控制方法存在无法对组成药物进行化学鉴别和无法控制制剂中有效成分含量的技术问题。因此,与背景技术相比,本发明具有能有效控制制剂质量和提高质量标准的优点。
附图说明
图1是本发明上清丸中黄柏的薄层鉴别色谱图;
图2是本发明上清丸中大黄在在紫外光灯下的薄层鉴别色谱图;
图3是本发明上清丸中大黄在日光下的薄层鉴别色谱图;
图4是本发明上清丸中栀子的薄层鉴别色谱图;
图5是本发明上清丸中黄芩的薄层鉴别色谱图。
具体实施方式
本实施例中的一种上清丸的质量控制方法,包括成分检查步骤,其中:它还包括成分鉴别和成分含量测定步骤;
所述成分鉴别步骤如下:
1)显微镜鉴别:取上清丸,置显微镜下观察:草酸钙簇晶大,直径60~140μm为大黄;纤维束鲜黄色,周围细胞含草酸钙方晶,形成晶纤维,含晶细胞壁木化增厚为黄柏;纤维淡黄色,梭形,壁厚,孔沟细为黄芩;内果皮纤维上下层纵横交错,纤维短梭形为连翘;花粉粒类圆形,直径24~34μm,外壁有刺,长3~5μm,具3个萌发孔为菊花;油管含金黄色分泌物,直径约30μm为防风;果皮石细胞镶嵌排列成层为栀子;
2)黄柏的薄层色谱鉴别:取上清丸1.2g,剪碎,加甲醇30ml,超声处理20min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇5ml使溶解,作为供试品溶液;另取黄柏阴性样品,黄柏阴性样品由除去黄柏以外的其他同等处方量的药材制成,同法制成阴性空白溶液;再取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液2μl、阴性空白溶液2μl和对照品溶液1μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丙酮-甲酸- 水10:7:1:1为展开剂,展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同黄绿色的荧光斑点,即为上清丸中含盐酸小檗碱;
经三批重复试验,斑点清晰,色谱重现性良好。阴性样品干扰试验证明,处方中其他药味均无干扰,本法具鉴别黄柏的专属性(见附图1,其中:1-上清丸1、2-盐酸小檗碱对照品、3-黄柏阴性样品)。
3)大黄的薄层色谱鉴别:取上清丸1.2g,剪碎,加甲醇30ml,超声处理20min,滤过,滤液蒸干,残渣加水10ml使溶解,再加盐酸1ml,置水浴中加热30min,立即冷却,用***振摇提取2次,每次20ml,合并***液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取大黄对照药材0.1g及大黄阴性样品,大黄阴性样品由除去大黄以外的其他同等处方量的药材和蜂蜜制成,同法制成对照药材溶液与阴性空白溶液;再取大黄素对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液4μl、阴性空白溶液4μl、对照药材溶液2μl和对照品溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,在30~60℃的温度下以石油醚-甲酸乙酯-甲酸15:5:1上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,分别置日光下和波长为365nm的紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上,日光下显相同颜色的斑点;紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点,即为上清丸中含大黄素;
经三批重复试验,斑点清晰,色谱重现性良好。阴性样品干扰试验证明,处方中其他药味均无干扰,本法具鉴别大黄的专属性(见附图2,其中:1-大黄阴性样品、2-大黄素对照品、3-上清丸1、4-上清丸2、5-上清丸3、6-大黄对照药材)。
4)栀子薄层色谱鉴别:取上清丸7g,剪碎,加硅藻土7g,研匀,加浓度 为50%的甲醇50ml,超声处理40min,滤过,滤液蒸干,残渣加无水乙醇5ml使溶解,挥发至约0.5ml,作为供试品溶液;另取栀子药材1g与栀子阴性样品,栀子阴性样品由除去栀子以外的其他同等处方量的药材和蜂蜜制成,同法制成对照药材溶液和阴性空白溶液;再取栀子苷对照品,加无水乙醇制成每1ml含3mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl、阴性空白溶液10μl、对照药材溶液10μl、对照品溶液4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水5:5:1:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的***斑点,即为上清丸中含栀子苷;
经三批重复试验,斑点清晰,色谱重现性良好。阴性样品干扰试验证明,处方中其他药味均无干扰,本法具鉴别栀子的专属性(见附图3、其中:1-上清丸1、2-栀子阴性样品、3栀子苷对照品、4-栀子对照药材)。
5)黄芩的薄层色谱鉴别:取上清丸3g,剪碎,加硅藻土3g,研匀,加乙酸乙酯-甲醇3:1的混合溶液50ml,加热回流30min,自然冷却至常温,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇5ml使溶解,作为供试品溶液;另取黄芩对照药材1g与黄芩阴性样品,黄芩阴性样品由除去黄芩以外的其他同等处方量的药材和蜂蜜制成,同法制成对照药材溶液和阴性空白溶液;再取黄芩苷对照品,加甲醇制成每1ml含3mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl、阴性空白溶液10μl、对照药材溶液4μl和对照品溶液各4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水5:3:1.5:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上,显相同的棕色斑点,即为上清丸中含黄芩苷;
经三批重复试验,斑点清晰,色谱重现性良好。阴性样品干扰试验证明,处方中其他药味均无干扰,本法具鉴别黄芩的专属性(见附图4,其中:1-黄芩阴性样品、2-黄芩苷对照品、3-上清丸1、4-上清丸2、5-上清丸3、6-黄芩对照药材)。
所述检查步骤应符合中国药典2010年版一部附录I A有关规定;
所述成分含量测定步骤如下:
1)色谱条件与***适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.2%磷酸溶液以48∶52为流动相;检测波长为280nm;理论板数按黄芩苷峰计算应不低于5000;
2)对照品溶液的制备:精密称取黄芩苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含黄芩苷38μg的溶液,即得对照品溶液;
3)上清丸供试品溶液的制备:取重量差异项下的上清丸,剪碎,精密称定5g,精密加入等量硅藻土,研细,混匀,精密称定0.6g,置具塞锥形瓶中,精密加50ml浓度为70%的乙醇溶液,称定重量,在功率为100W和频率为40kHz的情况下超声处理30min,自然冷却至常温,再称定重量,用浓度为70%的乙醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取滤液,即得上清丸供试品溶液;
4)测定:分别精密吸取对照品溶液与上清丸供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得,每1g上清丸含黄芩苷不得少于5.21mg。
按照上述方法取上清丸三批样品进行成分含量测定,样品测定结果见表3。
表3 三批样品含量测定结果表
结果表明,三批样品中黄芩苷含量基本稳定,最终确定上清丸中含黄芩以黄芩苷计,每1g不得少于5.794mg×90%=5.21mg。
上述的上清丸是由菊花、薄荷、川芎、白芷、荆芥、防风、桔梗、连翘、栀子、酒炒的黄芩、酒炒的黄柏和酒炒的大黄制成,首先将各药材粉碎成细粉,然后过筛并混匀,最后向每100g粉末中加入炼蜜90~110g,即得上清丸。
Claims (2)
1.一种上清丸的质量控制方法,包括成分检查步骤,其特征在于:它还包括成分鉴别和成分含量测定步骤;
所述成分鉴别步骤如下:
1)显微镜鉴别:取上清丸,置显微镜下观察:草酸钙簇晶大,直径60~140μm为大黄;纤维束鲜黄色,周围细胞含草酸钙方晶,形成晶纤维,含晶细胞壁木化增厚为黄柏;纤维淡黄色,梭形,壁厚,孔沟细为黄芩;内果皮纤维上下层纵横交错,纤维短梭形为连翘;花粉粒类圆形,直径24~34μm,外壁有刺,长3~5μm,具3个萌发孔为菊花;油管含金黄色分泌物,直径约30μm为防风;果皮石细胞镶嵌排列成层为栀子;
2)黄柏的薄层色谱鉴别:取上清丸1.2g,剪碎,加甲醇30ml,超声处理20min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇5ml使溶解,作为供试品溶液;另取黄柏阴性样品,黄柏阴性样品由除去黄柏以外的其他同等处方量的药材制成,同法制成阴性空白溶液;再取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液2μl、阴性空白溶液2μl和对照品溶液1μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水10:7:1:1为展开剂,展开,取出,晾干,置波长为365nm的紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同黄绿色的荧光斑点,即为上清丸中含盐酸小檗碱;
3)大黄的薄层色谱鉴别:取上清丸1.2g,剪碎,加甲醇30ml,超声处理20min,滤过,滤液蒸干,残渣加水10ml使溶解,再加盐酸1ml,置水浴中加热30min,立即冷却,用***振摇提取2次,每次20ml,合并***液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;另取大黄对照药材0.1g及大黄阴性样品,大黄阴性样品由除去大黄以外的其他同等处方量的药材和蜂蜜制成,同法制成对照药材溶液与阴性空白溶液;再取大黄素对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液4μl、阴性空白溶液4μl、对照药材溶液2μl和对照品溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,在30~60℃的温度下以石油醚-甲酸乙酯-甲酸15:5:1上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,分别置日光下和波长为365nm的紫外光灯下检视;供试品色谱中,在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上,日光下显相同颜色的斑点;紫外光灯下显相同颜色的荧光斑点,即为上清丸中含大黄素;
4)栀子薄层色谱鉴别:取上清丸7g,剪碎,加硅藻土7g,研匀,加浓度为50%的甲醇50ml,超声处理40min,滤过,滤液蒸干,残渣加无水乙醇5ml使溶解,挥发至约0.5ml,作为供试品溶液;另取栀子药材1g与栀子阴性样品,栀子阴性样品由除去栀子以外的其他同等处方量的药材和蜂蜜制成,同法制成对照药材溶液和阴性空白溶液;再取栀子苷对照品,加无水乙醇制成每1ml含3mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl、阴性空白溶液10μl、对照药材溶液10μl、对照品溶液4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水5:5:1:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的***斑点,即为上清丸中含栀子苷;
5)黄芩的薄层色谱鉴别:取上清丸3g,剪碎,加硅藻土3g,研匀,加乙酸乙酯-甲醇3:1的混合溶液50ml,加热回流30min,自然冷却至常温,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇5ml使溶解,作为供试品溶液;另取黄芩对照药材1g与黄芩阴性样品,黄芩阴性样品由除去黄芩以外的其他同等处方量的药材和蜂蜜制成,同法制成对照药材溶液和阴性空白溶液;再取黄芩苷对照品,加甲醇制成每1ml含3mg的溶液,作为对照品溶液;照薄层色谱法试验,吸取供试品溶液10μl、阴性空白溶液10μl、对照药材溶液4μl和对照品溶液各4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水5:3:1.5:1为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%磷钼酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上,显相同的棕色斑点,即为上清丸中含黄芩苷;
所述成分含量测定步骤如下:
1)色谱条件与***适用性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.2%磷酸溶液以48∶52为流动相;检测波长为280nm;理论板数按黄芩苷峰计算应不低于5000;
2)对照品溶液的制备:精密称取黄芩苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含黄芩苷38μg的溶液,即得对照品溶液;
3)上清丸供试品溶液的制备:取重量差异项下的上清丸,剪碎,精密称定5g,精密加入等量硅藻土,研细,混匀,精密称定0.6g,置具塞锥形瓶中,精密加50ml浓度为70%的乙醇溶液,称定重量,在功率为100W和频率为40kHz的情况下超声处理30min,自然冷却至常温,再称定重量,用浓度为70%的乙醇溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取滤液,即得上清丸供试品溶液;
4)测定:分别精密吸取对照品溶液与上清丸供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得,每1g上清丸含黄芩苷不得少于5.21mg。
2.根据权利要求1所述的一种上清丸的质量控制方法,其特征在于:所述的上清丸是由菊花、薄荷、川芎、白芷、荆芥、防风、桔梗、连翘、栀子、酒炒的黄芩、酒炒的黄柏和酒炒的大黄制成,首先将各药材粉碎成细粉,然后过筛并混匀,最后向每100g粉末中加入炼蜜90~110g,即得上清丸。
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