CN104116023A - 天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用 - Google Patents
天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104116023A CN104116023A CN201410273706.5A CN201410273706A CN104116023A CN 104116023 A CN104116023 A CN 104116023A CN 201410273706 A CN201410273706 A CN 201410273706A CN 104116023 A CN104116023 A CN 104116023A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- colon cancer
- gastrodia elata
- functional food
- preparation
- elata polysaccharide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 62
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 62
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 62
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 40
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 40
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 39
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 title claims abstract description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 241000305492 Gastrodia Species 0.000 title abstract 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 22
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 16
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 11
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 claims abstract description 6
- 241000305491 Gastrodia elata Species 0.000 claims description 44
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 19
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 12
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 11
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 11
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- 239000000376 reactant Substances 0.000 claims description 7
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 6
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- 230000003328 fibroblastic effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 4
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 claims description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 4
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 5
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 abstract description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 7
- 102100024506 Bone morphogenetic protein 2 Human genes 0.000 description 6
- 101000762366 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 2 Proteins 0.000 description 6
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 6
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 5
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- -1 Vacuum Concentration Substances 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 2
- 238000012109 statistical procedure Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 241001269238 Data Species 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 206010044684 Trismus Diseases 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 208000002173 dizziness Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000001565 modulated differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 1
- 210000004985 myeloid-derived suppressor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 231100000862 numbness Toxicity 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000000197 pyrolysis Methods 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/30—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols, e.g. xylitol; containing starch hydrolysates, e.g. dextrin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
本发明公开了天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用，其中天麻多糖优选通过以下方法制备获得：以天麻为原料，经含沸水提取、去蛋白、透析和乙醇处理工序制备获得，所述的天麻多糖具有调节肿瘤微环境的作用，本发明中的天麻多糖可以通过抑制肿瘤新生血管生成、免疫激活及抑制结肠癌成纤维细胞生长等多途径调节肿瘤微环境，表明其具有良好的辅助抑制结肠癌肿瘤作用。
Description
技术领域
本发明属于多糖技术领域，具体涉及一种天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用。
背景技术
免疫负调控研究为肿瘤治疗提供了新策略。肿瘤微环境中，存在着大量的负调控细胞，它们相互作用，相互影响，伴随着肿瘤细胞和微环境的共进化。由于肿瘤细胞的免疫原性改变和非正常生长，刺激成纤维细胞释放炎症因子，抗原提呈细胞传递肿瘤抗原信号，共同招募免疫细胞浸润到肿瘤局部，而且肿瘤细胞的异常增殖引起对邻近细胞的压迫，导致缺血坏死等组织损伤，产生大量的炎性因子，因此肿瘤局部处于非可控性炎症状态，导致微环境免疫负调控的形成，诱导肿瘤相关成纤维细胞（CAF）和髓样抑制性细胞（MDSC）的形成，IL10、TGF-β诱导巨噬细胞由杀伤性的M1型转变为免疫抑制性的M2型；调节性T细胞在肿瘤局部显著增加。其结果是抑制细胞毒性T细胞（CTL）、自然杀伤细胞（NK）的活性，维持肿瘤局部的免疫耐受状态。以肿瘤微环境中的免疫负调控细胞为靶点，抑制其生长，诱导其分化，从而解除肿瘤微环境中的免疫负调控状态，才能维持肿瘤细胞处于休眠状态或者逆转激活状态的肿瘤细胞重新回到休眠状态，就能达到预防肿瘤发生的目的。
近年来的研究发现，多糖就具有显著地抗肿瘤活性并且对人体的毒副作用相对较小，对多糖的生物活性研究在医学领域已经成为国内外专家学者研究的热点。近年发现一些多糖及其复合物对多种疾病，如免疫紊乱、癌症、糖尿病、高血压、肝炎、血栓、肺炎、病毒等都具有显著疗效，并且参与细胞各种生命现象的调节。
天麻为多年生草本植物，分布于全国大部分地区。其干燥块茎亦称天麻，是一味常用而较名贵的中药，临床多用于头痛眩晕、肢体麻木、小儿惊风、癫痫、抽搐、破伤风等症。目前尚无以天麻为原料制备多糖组分，开发具有辅助抑制结肠癌功效应用。
发明内容
本发明的目的在于提供天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用。
其中所述的辅助抑制结肠癌功效是指通过抑制结肠癌肿瘤新生血管生成、免疫激活及抑制结肠癌成纤维细胞生长功效，调节结肠癌肿瘤微环境，从而起到辅助抑制结肠癌功效。
作为本发明的一种实施方式，本发明中的天麻多糖优选通过以下方法制备获得：以天麻为原料，经含沸水提取、去蛋白、透析和乙醇处理工序制备获得，所述的天麻多糖具有调节肿瘤微环境的作用。
作为本发明的一种优选的实施方式，本发明所述的天麻多糖具体通过以下方法制备获得：以天麻为原料，用沸水多次提取后，合并提取液，将提取液浓缩得浓缩液，在浓缩液中加入三氯乙酸水溶液进行去蛋白处理，去蛋白后将反应液进行中和、扎袋透析处理，将透析袋内反应液进行浓缩、离心处理，取上清液加入乙醇进行醇沉、干燥处理，即得天麻多糖。
本发明在天麻多糖的制备过程中，各工序的具体参数优选如下：
沸水提取时，提取次数为1 ~5 次，每次提取时沸水的用量为天麻总质量的5~20 倍，每次提取时间为1.5~5 h。
沸水提取时，沸水的用量优选为天麻总质量的5~20 倍，提取次数较佳为3 次，其中第一次提取时，沸水的用量优选为原料天麻总质量的10~20 倍，提取2~5 h；第二次提取时，沸水的用量优选为原料天麻总质量的10~20 倍，提取1.5~ 5h；第三次提取时，沸水的用量优选为原料天麻总质量的10~20倍，提取1.5~ 5 h。
将提取液优选浓缩至原提取液总体积的约1/10得浓缩液。
本发明所述的三氯乙酸水溶液的质量百分含量优选为35%，去蛋白处理时间优选为3~6 h，三氯乙酸水溶液的体积优选与浓缩液的体积相同。
中和处理时可以采用质量百分含量为10%的氢氧化钠水溶液。
扎袋透析处理时优选采用截留分子量3500Da的透析袋进行透析处理。
乙醇进行醇沉处理时优选采用体积百分含量优选为70~ 95%的乙醇水溶液。
浓缩可以采用多种现有技术中的浓缩方式，其中以真空浓缩最佳。真空浓缩时温度优选为40℃。
本发明中的天麻多糖，可以直接口服，也可以制成药剂学上所说的多种剂型，如胶囊型、片剂、粉剂、颗粒剂或口服液等，食用后具有辅助抑制结肠癌肿瘤的功效。
因此，本发明所述功能食品的剂型优选为胶囊型、片剂、粉剂、颗粒剂或口服液等。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
（1）本发明中的天麻多糖，其纯度和活性高，可以通过抑制肿瘤新生血管生成、免疫激活及抑制结肠癌成纤维细胞生长等多途径调节肿瘤微环境，其具有良好的辅助抑制结肠癌肿瘤作用；
（2）本发明中的天麻多糖的制备方法，工艺简单稳定高效，适合工业化生产，成本低；
（3）本发明中的天麻多糖，可以用于制备具有辅助抑制结肠癌肿瘤功效的功能食品。
附图说明
图1是本发明实施例4中天麻多糖可抑制BMP2诱导的带有BRE报告基因的荧光素酶的活性；
图2是本发明实施例5中天麻多糖能激活带有NF-кB报告基因的荧光素酶的活性；
图3是本发明实施例6中天麻多糖可抑制结肠癌成纤维细胞的生长。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做进一步说明，但不以任何形式限制本发明。
以下实施例中采用的各原料，如无特殊说明，均为市售产品。
实施例1
本实施例中的天麻多糖，通过以下方法制备获得：取天麻原料，采用沸水提取，第一次提取时，水的用量为原料总质量的20倍，煮沸5 h过滤 ；第二次提取时，水的用量为原料总质量的20倍，煮沸3 h过滤；第三次提取时，水的用量为原料总质量的10倍，煮沸2 h过滤，合并滤液，真空浓缩至原来体积的大约1/10，下同。将浓缩液进行三氯乙酸除蛋白处理，加入同体积（下同）的30%三氯乙酸(质量百分比)，处理时间为4 h后，用 10% NaOH（质量百分比）中和，下同，中和后将反应液置于透析袋中扎袋透析，透析时透析袋的截留分子量通常约为3500Da，下同，然后将透析袋内液浓缩，离心，取上清液加入3~4倍体积的85%乙醇水溶液（体积百分含量）进行醇沉淀处理，取沉淀物经含真空干燥（约40℃，下同）处理得天麻多糖组分。
实施例2
本实施例中的天麻多糖，通过以下方法制备获得：取天麻原料，采用沸水提取，第一次提取时，水的用量为天麻原料总质量的15倍，煮沸5 h过滤 ；第二次提取时，水的用量为天麻原料总质量的15倍，煮沸3 h过滤；第三次提取时，水的用量为天麻原料总质量的10倍，煮沸3 h过滤，合并滤液，真空浓缩。将浓缩液进行三氯乙酸除蛋白处理，加入同体积的25%三氯乙酸(质量百分比)，处理时间为3 h后，用 10% NaOH（质量百分比）中和，中和后将反应液置于透析袋中扎袋透析，然后将透析袋内液浓缩，离心，取上清液加入3~4倍体积的70%乙醇水溶液（体积百分含量）进行醇沉淀处理，取沉淀物经含真空干燥处理得天麻多糖组分。
实施例3
本实施例中的天麻多糖，通过以下方法制备获得：取天麻原料，采用沸水提取，第一次提取时，水的用量为天麻原料总质量的10倍，煮沸3 h过滤 ；第二次提取时，水的用量为天麻原料总质量的20 倍，煮沸3 过滤h；第三次提取时，水的用量为天麻原料总质量的10倍，煮沸5 h过滤，合并滤液，真空浓缩，将浓缩液进行三氯乙酸除蛋白处理，加入同体积的15%三氯乙酸(质量百分比)，处理时间为5 h后，用 10% NaOH（质量百分比）中和，中和后将反应液置于透析袋中扎袋透析，然后将透析袋内液浓缩，离心，取上清液加入3~4倍体积的95%乙醇水溶液（体积百分含量）进行醇沉淀处理，取沉淀物经含真空干燥处理得天麻多糖组分。
制成药剂学上所说的多种剂型，如胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒或口服液等。
实施例4 天麻多糖可抑制BMP2诱导的带有BRE报告基因的荧光素酶的活性
C2C12细胞株购自中科院细胞库，C2C12- pGF1-BRE细胞株由中国科学院上海药物研究所丁侃实验室构建，保存于液氮中。C2C12- pGF1-BRE细胞用含10 % Gibco胎牛血清DMEM 培养基培养，置于37℃饱和湿度、含5% CO2的恒温箱中培养，以1×104细胞/孔的密度接种于96孔板内，每孔100 μL。贴壁24 h后吸去60 μL培养基，加配置好相应浓度的样品(实施例1中的天麻多糖样品)50 μL，终浓度分别为0.5 mg/mL、0.1 mg/mL、0.02 mg/mL，10 μLBMP2调整至终浓度200 ng/mL。同时设空白组和BMP2组对照。给药16 h后吸去培养基，加20 μLReporter Lysis 1X Buffer，将溶解的细胞裂解液20 μL转移至白板，加入40 μL luciferase底物，于3分钟内读板，读取RLU值。采用SPSS 统计软件进行统计学处理。数据均以均数±标准差(.x ±s) 表示，两组间比较采用独立样本t 检验，多组间比较采用单因素方差分析。
实验结果如图1所示，天麻多糖在0.02 mg/mL低浓度下具有抑制BMP2诱导的带有BRE报告基因的荧光素酶的活性，且该活性随多糖浓度增加而显著增加，表明该多糖在该活性方面具有剂量依赖性。已知肿瘤新生血管生成在肿瘤的发生发展过程中起着关键作用，而BMP2信号通路在肿瘤新生血管生成过程中起关键作用。该多糖可显著抑制BMP2信号通路，表明该多糖具有潜在的抑制肿瘤活性。
实施例5 天麻多糖能激活带有NF-кB报告基因的荧光素酶的活性
THP-1细胞株购自中科院细胞库，THP-1/pGF1-NF-кB细胞株由中国科学院上海药物研究所丁侃实验室构建，保存于液氮中。THP-1/pGF1-NF-кB细胞用含10%胎牛血清RPMI-1640培养基培养。置于37 ℃饱和湿度、含5% CO2的恒温箱中培养，以5×104细胞/孔的密度接种于96孔板内，每孔50 μL容积。加入受试样品50 μL(实施例1中的天麻多糖样品)，终浓度分别为0.5 mg/mL、0.1 mg/mL、0.02 mg/mL，同时设立空白组和LPS对照组。加入LPS溶液10 μL，终浓度为1 μg/mL，置于37℃饱和湿度、含5% CO2的恒温箱中培养过夜。培养过夜后，每空加入100 μL Bright-GloTM Luciferase Assay System底物，于酶标仪读板，读取RLU值。
采用SPSS 统计软件进行统计学处理。数据均以均数±标准差(.x ±s) 表示，两组间比较采用独立样本t 检验，多组间比较采用单因素方差分析。
实验结果如图2所示，该多糖在0.5 mg/mL低浓度下具有较好的激活NF-кB信号通路的活性。NF-кB激活后能增强机体的免疫力，间接发挥抗肿瘤作用。
实施例6 天麻多糖可抑制结肠癌CT26-CAF的生长
结肠癌相关成纤维细胞系CT26-CAF由中国科学院生物物理研究所构建。将细胞接种于96孔板，细胞密度为1×104/孔。将实施例1中的天麻多糖溶于DMEM+/+培养基中，使其浓度为1.0 mg/mL。培养4天，采用CCK检测试剂盒（北京庄盟生物公司）测定细胞生长状态。每种多糖样本量为3。
统计学分析：计量数据多组间比较采用方差分析，首先对数据进行方差齐性检验，计算Levene统计值，若方差齐，则进行组间多重比较，方法为LSD和Dunnett，若方差不齐，则采用校正方法Dunnett t。统计软件为SPSS17.0，显著性水平为α=0.05。
实验结果如图3所示，该天麻多糖在0.5 mg/mL的浓度下可显著抑制结肠癌CT26-CAF的生长。CT26-CAF在结肠癌起着重要调控作用，可促进结肠癌细胞的生长。该多糖可通过抑制结肠癌CT26-CAF的生长，起到调节结肠癌微环境的功效。
综上实验证明该天麻多糖可通过抑制肿瘤新生血管生成、免疫激活及免疫负调节等多途径调节肿瘤微环境，并进一步发挥潜在的抗结肠癌肿瘤活性，从而可以将天麻多糖通过常规工艺，制成药剂学上所说的多种剂型，用于制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品，功能食品的剂型可以为胶囊型、片剂、粉剂、颗粒剂或口服液等。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围。
Claims (9)
1.天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用。
2.根据权利要求1所述的天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用，其特征是：所述的辅助抑制结肠癌功效是指通过抑制结肠癌肿瘤新生血管生成、免疫激活及抑制结肠癌成纤维细胞生长功效，调节结肠癌肿瘤微环境，从而起到辅助抑制结肠癌功效。
3.根据权利要求1所述的天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用，其特征是：所述的天麻多糖通过以下方法制备获得：以天麻为原料，经含沸水提取、去蛋白、透析和乙醇处理工序制备获得，所述的天麻多糖具有调节肿瘤微环境的作用。
4.根据权利要求3所述的天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用，其特征是：所述的天麻多糖具体通过以下方法制备获得：以天麻为原料，用沸水多次提取后，合并提取液，将提取液浓缩得浓缩液，在浓缩液中加入三氯乙酸水溶液进行去蛋白处理，去蛋白后将反应液进行中和、扎袋透析处理，将透析袋内反应液进行浓缩、离心处理，取上清液加入乙醇进行醇沉、干燥处理，即得天麻多糖。
5.根据权利要求4所述的天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用，其特征是：沸水提取时，提取次数为1 ~5 次，每次提取时沸水的用量为天麻总质量的5~20 倍，每次提取时间为1.5~5 h。
6.根据权利要求4所述的天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用，其特征是：去蛋白时采用三氯乙酸水溶液，所述三氯乙酸水溶液的质量百分含量为35%，处理时间为3~6 h。
7.根据权利要求4所述的天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用，其特征是：乙醇处理时采用体积百分含量为70~95% 的乙醇水溶液。
8.根据权利要求4所述的天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用，其特征是：透析时透析袋的截留分子量为3500Da。
9.根据权利要求1所述的天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用，其特征是：所述功能食品的剂型为胶囊型、片剂、粉剂、颗粒剂或口服液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410273706.5A CN104116023A (zh) | 2014-06-19 | 2014-06-19 | 天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410273706.5A CN104116023A (zh) | 2014-06-19 | 2014-06-19 | 天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104116023A true CN104116023A (zh) | 2014-10-29 |
Family
ID=51761831
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410273706.5A Pending CN104116023A (zh) | 2014-06-19 | 2014-06-19 | 天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104116023A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110423284A (zh) * | 2019-08-14 | 2019-11-08 | 浙江万寿康药业有限公司 | 灵芝孢子粉多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1203092A (zh) * | 1997-06-23 | 1998-12-30 | 高美 | 一种抗癌口服液及其配制方法 |
| CN101367879A (zh) * | 2007-08-17 | 2009-02-18 | 中国科学院上海药物研究所 | 天麻多糖或其硫酸化衍生物及其制备方法和应用 |
| CN102464725A (zh) * | 2010-11-17 | 2012-05-23 | 中国科学院上海药物研究所 | 一种天麻多糖及其降解产物,其制备方法和应用 |
-
2014
- 2014-06-19 CN CN201410273706.5A patent/CN104116023A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1203092A (zh) * | 1997-06-23 | 1998-12-30 | 高美 | 一种抗癌口服液及其配制方法 |
| CN101367879A (zh) * | 2007-08-17 | 2009-02-18 | 中国科学院上海药物研究所 | 天麻多糖或其硫酸化衍生物及其制备方法和应用 |
| CN102464725A (zh) * | 2010-11-17 | 2012-05-23 | 中国科学院上海药物研究所 | 一种天麻多糖及其降解产物,其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 杨子玉、范先基: "王三虎治疗结肠癌术后验案三则", 《山东中医杂志》 * |
| 杨子玉、范先基: "王三虎治疗结肠癌术后验案三则", 《山东中医杂志》, vol. 27, no. 3, 5 March 2008 (2008-03-05), pages 204 - 3 * |
| 王超凡等: "王瑞麟对直结肠癌放化疗反应临床传承治疗研究心得", 《第十五次全国中西医结合疡科学术交流会论文汇编》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110423284A (zh) * | 2019-08-14 | 2019-11-08 | 浙江万寿康药业有限公司 | 灵芝孢子粉多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104106763B (zh) | 黄精多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用 | |
| CN104644697B (zh) | 灵芝超微粉的制备方法及其应用 | |
| CN104013636B (zh) | 瓦草五环三萜皂苷类化合物抗肿瘤的药物用途 | |
| CN102370695B (zh) | 一种青龙衣活性提取物及其制备方法和用途 | |
| CN102106516B (zh) | 蔬菜提取物抑制黄嘌呤氧化酶的用途及在制备预防和治疗高尿酸血症或痛风食品中的应用 | |
| CN104116026B (zh) | 盐制巴戟天多糖在制备具有辅助抑制***癌功效的功能食品中的应用 | |
| CN104116024B (zh) | 肉苁蓉多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用 | |
| US9629385B2 (en) | Dietary composition containing cistanche deserticola polysaccharide with inhibitory effects on colon cancer | |
| CN104116023A (zh) | 天麻多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用 | |
| CN103272016A (zh) | 中药组合物 | |
| WO2020000828A1 (zh) | 一种具有显著降血脂活性的龙须菜多糖及其制备方法与应用 | |
| CN103893412B (zh) | 一种抗肿瘤裸花紫珠提取物及其制备方法和用途 | |
| CN102071239A (zh) | 一种抗肿瘤绿豆多肽及其制备方法和在癌症方面的用途 | |
| CN103554289A (zh) | 北苍术多糖及提取方法及在制备抗肿瘤药物中的用途 | |
| CN103263491A (zh) | 中药组合物 | |
| CN104116025B (zh) | 党参多糖在制备具有辅助抑制***癌功效的功能食品中的应用 | |
| CN102961443B (zh) | 北豆根抗肿瘤提取物、制备方法及用途 | |
| CN110423284A (zh) | 灵芝孢子粉多糖在制备具有辅助抑制结肠癌功效的功能食品中的应用 | |
| CN102552681B (zh) | 治疗病毒性心肌炎的中药有效部位复方制剂及制备方法 | |
| CN100427099C (zh) | 能够有效治疗脑癌的胡桃楸多糖制剂及其制备方法 | |
| CN106822228B (zh) | 一种山豆根多糖有效部位及其制备方法 | |
| CN104119576B (zh) | 一种具有调节肿瘤微环境功效的巴戟天和黄精复合多糖及其制备方法和应用 | |
| CN103191197B (zh) | 靶向式抗肿瘤抗癌药剂及其制备方法 | |
| CN103202886A (zh) | 中药组合物及其制备方法 | |
| CN107213176A (zh) | 一种八仙花叶提取物及其药物组合物、制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20141029 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |