CN104105696B - 5‑(吡啶‑2‑基‑氨基)‑吡嗪‑2‑腈化合物及其治疗用途 - Google Patents

Abstract

本发明总体涉及治疗性化合物领域。更具体地，本发明涉及尤其是抑制检测点激酶1(CHK1)激酶功能的某些吡啶基‑氨基‑吡嗪腈化合物。本发明还涉及包含这种化合物的药物组合物，以及这种化合物和组合物在体外和体内抑制CHK1激酶功能的应用，和可选地与另一种试剂组合来治疗由CHK1介导、通过抑制CHK1激酶功能而改善等的疾病和病症中的应用，所述另一种试剂为例如，(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂、(b)DNA损伤剂、(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂、(d)微管靶向剂、和(e)电离辐射，所述疾病和病症包括增殖性病症诸如癌症等。

Description

5-(吡啶-2-基-氨基)-吡嗪-2-腈化合物及其治疗用途

相关申请

本申请涉及于2011年11月9日提交的美国专利申请号61/557,457，其内容以其整体通过参考方式并入本文。

技术领域

本发明总体属于治疗性化合物领域。更具体地，本发明涉及尤其是抑制检测点激酶1(CHK1)激酶功能的某些吡啶基-氨基-吡嗪腈化合物。本发明还涉及包含这种化合物的药物组合物，以及这种化合物和组合物在体外和体内抑制CHK1激酶功能的应用，和可选与另一种试剂组合来治疗由CHK1介导、通过抑制CHK1激酶功能而改善等的疾病和病症的应用，所述另一种试剂为例如，(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂、(b)DNA损伤剂、(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂、(d)微管靶向剂、和(e)电离辐射，所述疾病和病症包括增殖性病症诸如癌症等。

背景技术

为了更充分地描述和公开本发明和本发明涉及的现有技术状况，本文引用了许多出版物。这些参考文献中的每一个都以其整体通过参考方式并入本文，以达到就像与每个单独的参考文献具体地、单独地表明通过参考方式并入的相同程度。

贯穿本说明书，包括所附权利要求，除非本文另有所指外，词语“包括(comprise)”及其变形诸如“包含(comprises)”和“含有(comprising)”，将被理解为暗示包含所述整体或步骤或者整体或步骤的组，但不排除任何其他整体或步骤或者整体或步骤的组。

必须指出，除非上下文另外清楚地规定，如本说明书以及在所附权利要求书中使用的，单数形式“一种/个(a/an)”、以及“该”包括复数对象。因此，例如，提及“一种药物载体”包括两种或更多种这类载体的混合物等。

本文中范围通常被表示为从“约”一个具体值和/或至“约”另一个具体值。当表示这种范围时，另一个实施方式包括从一个具体值和/或至其他具体值。类似地，当值被表示为近似值时，通过使用先行词“约”，可理解为该具体值形成另一个实施方式。

此公开内容包括在理解本发明中可以有用的信息。它并不承认本文提供的任何信息是现有技术或与目前所请求保护的发明相关，或任何明确或暗示引用的出版物是现有技术。

检测点激酶1(CHK1)

通过细胞***周期的进程是受到严格调控的过程，并在被称为细胞周期检测点的几个位置被监测(参见，例如，Weinert和Hartwell，1989；Bartek和Lukas，2003)。这些检测点被发现于细胞周期的所有四个阶段：G1、S(DNA复制)、G2和M(有丝***)，且它们确保控制DNA复制和细胞***的保真度的关键事件都正确完成。细胞周期检测点由许多刺激激活，包括由缺陷复制导致的DNA损伤和DNA错误。发生这种情况时，细胞周期便会停滞，从而留出了发生DNA修复的时间或者，如果损坏太严重的话，激活导致控制细胞死亡的细胞过程的时间。

根据定义，所有的癌症都具有某种形式的异常细胞***周期。通常，肿瘤细胞拥有一个或多个有缺陷的细胞周期检测点，或者具有在特定的DNA修复途径中的缺陷。因此，相对于非癌细胞(其中，所有检测点和DNA修复途径是完整的)，这些细胞往往更依赖于剩余的细胞周期检测点和修复途径。肿瘤细胞对DNA损伤的响应常常是它们是否继续增殖或激活细胞死亡过程以及死亡的关键决定因素。例如，包含突变形式的肿瘤抑制物p53的肿瘤细胞在G1DNA损伤检测点上是有缺陷的。因此，G2或S期检测点的抑制剂有望进一步削弱肿瘤细胞的能力，以修复受损的DNA。

许多已知的癌症疗法通过物理改变细胞的DNA或干扰可影响DNA复制和细胞***如DNA代谢、DNA合成、DNA转录和微管纺锤体形成的保真度的重要细胞过程来引起DNA损伤。这种疗法包括，例如，引起DNA链断裂的放射治疗和多种化学治疗剂，包括拓扑异构酶抑制剂、抗代谢物、DNA-烷化剂、和含铂的细胞毒性药物。显著限制这些基因毒性治疗的是耐药性。导致这种抗性的一种最重要的机制归因于细胞周期检测点的激活，从而给予肿瘤细胞修复受损DNA的时间。因此，通过消除特定的细胞周期检查点，或抑制DNA修复的特定形式，可以有可能避开肿瘤细胞对基因毒性剂的抗性并增加由DNA损伤诱导的肿瘤细胞死亡，从而提高这些癌症疗法的治疗指数。

CHK1是参与调控细胞周期检查点信号的丝氨酸/苏氨酸激酶，该细胞周期检查点信号响应于由缺陷复制引起的DNA中的DNA损伤反应和错误而被激活(参见，例如，Bartek和Lukas，2003)。CHK1通过参与包括细胞周期停滞和DNA修复的许多细胞活动的底物磷酸化作用来转换这些信号。CHK1的两个关键底物是使CDK1去磷酸化而导致其活化的Cdc25A和Cdc25C磷酸酶，这是从G2退出进入有丝***(M期)的需求(参见，例如，Sanchez等人，1997)。Cdc25C和相关的Cdc25A通过CHK1的磷酸化阻碍了它们活化CDK1的能力，从而防止细胞从G2退出进入M期。CHK1在DNA损伤诱导的G2细胞周期检查点中的作用已在许多研究中被证明，其中CHK1功能已被敲除(参见，例如，Liu等人，2000；Zhao等人，2002；Zachos等人，2003)。

DNA损伤诱导的G2检测点对CHK1的依赖提供了用于癌症治疗的治疗策略的一个实施例，涉及CHK1的靶向抑制。在DNA损伤时，p53肿瘤抑制蛋白被稳定和活化，以得到p53依赖的G1阻滞，从而导致细胞凋亡或DNA修复(Balaint和Vousden，2001)。超过一半的癌症对于p53在功能上是有缺陷的，这可使它们对遗传毒性的癌症疗法诸如电离辐射(IR)和某些形式的化学疗法性有抵抗力(参见，例如，Greenblatt等人，1994；Carson和Lois，1995)。这些p53缺陷细胞未能停滞在G1检测点或经历细胞凋亡或DNA修复，因此为了活力和复制的保真度可更依赖于G2检测点。因此，通过抑制CHK1激酶功能消除G2检查点可选择性地使p53缺陷癌细胞对基因毒性的癌症疗法敏感，且这已被证实(参见，例如，Wang等人，1996；Dixon和Norbury，2002)。

此外，CHK1也已显示出通过同源重组参与S期的细胞周期检查点和DNA修复。因此，在依赖于DNA损伤后的这些过程的那些癌症中，CHK1激酶抑制可给使用CHK1抑制剂的癌症治疗提供附加的治疗策略(参见，例如，Sorensen等人，2005)。此外，某些癌症可由于高水平的内源性DNA损伤(参见，例如，Cavalier等人，2009；Brooks等人，2012)或通过由致癌基因驱动的升高复制，例如扩增或过表达MYC基因(参见，例如，Di Micco等人，2006；Cole等人，2011；Murga等人，2011)而表现出复制胁迫(replicative stress)。这样的癌症可通过CHK1激酶表现出升高的信号发送(参见，例如，等人，2011)。在依赖于这些过程的那些癌症中，CHK1激酶的抑制可给使用CHK1抑制剂的癌症治疗提供附加的治疗策略(参见，例如，Cole等人，2011；Davies等人，2011；Ferrao等人，2011)。

使用CHK1选择性的siRNA的最近数据支持CHK1的选择性抑制作为相关的治疗方法，并表明，与某些其他检测点激酶结合的抑制没有提供额外的益处且可以是非生产性的(参见，例如，Xiao等人，2006；Guzi等人，2011)。来自不同化学类别的CHK1激酶功能的小分子选择性抑制剂已被描述(参见，例如，Tao等人，2006)。

已知化合物

Collins等人，2009a，描述了抑制检查点激酶1(CHK1)激酶功能并且在例如癌症的治疗中有用的下列结构式的某些化合物：

在Collins等人，2009a的实施例中是下列化合物：

Collins等人，2009a的实施例中只有一个具有其为除-H外的-R^B6，具体地，为-OMe，同时还具有-X＝为-N＝：

Collins等人，2009a中的一个实施例具有限定为“独立地-Me、-Et、-nPr、-iPr、-CF₃、-OH、-OMe、-OEt、-O(nPr)、-O(iPr)、-OCF₃、-CN、-NH₂、-NHMe、-NMe₂、-O-CH₂CH₂-OH、-O-CH₂CH₂-OMe、-O-CH₂CH₂-NH₂、-O-CH₂CH₂-NHMe、-O-CH₂CH₂-NMe₂、-O-CH₂CH₂CH₂-NH₂、-O-CH₂CH₂CH₂-NHMe、或-O-CH₂CH₂CH₂-NMe₂”的-R^B6(参见其中的84页，37-40行和权利要求296)。

Collins等人，2009b，描述了抑制检查点激酶1(CHK1)激酶功能并且在例如癌症的治疗中有用的下列结构式的某些化合物：

在Collins等人，2009b的实施例中是下列异喹啉化合物：

Walton等人，2010，描述了被称为SAR-020106的CHK1抑制剂的临床前研究，它具有以下结构：

Collins等人，2009b的实施例中是下列1H-咪唑并[4,5-b]吡啶化合物：

Almeida等人，2008，描述了下式的某些吡唑基-氨基-取代的吡嗪类，据称其在癌症治疗中是有用的。

Almeida等人，2008的实施例中是下列化合物：

Ioannidis等人，2009，描述了抑制Janus-相关激酶(JAK)的某些化合物。下列化合物被示于其中第6526页上的方案5中。

Lin等人，2005，描述了某些大环脲化合物，据称其作为蛋白激酶抑制剂是有用的。参见，例如，其中第1页上的段落[0004]。

Tao等人，2005，描述了某些大环脲化合物，据称其作为蛋白激酶抑制剂是有用的。参见，例如，其中第2页。

Li等人，2007年，描述了某些大环脲CHK1抑制剂的制备和测试。参见，例如，其中第6502页上的表1。

Tao等人，2007a，描述了某些大环脲CHK1抑制剂的制备和测试。参见，例如，其中第6596页上的表2。

Tao等人，2007b，描述了某些大环脲CHK1抑制剂的制备和测试。参见，例如，其中第1517页上的表3。

一个或多个本发明人已发表了最近的出版物，其中描述了许多CHK1抑制剂，包括被称为CCT244747的下列化合物。参见，Lainchbury等人，2012(显示于2012年10月19日在线公开)和Walton等人，2012(显示于2012年10月15日公开)。

发明内容

本发明的一个方面涉及如本文所述的某些吡啶基-氨基-吡嗪腈化合物(在本文中称为PAPC化合物)。

本发明的另一个方面涉及组合物(例如，药物组合物)，其包含如本文所述的PAPC化合物，以及药用载体或稀释剂。

在一个实施方式中，该组合物(例如，药物组合物)适于对受试者口服给予。

本发明的另一个方面涉及制备组合物(例如，药物组合物)的方法，其包括混合如本文所述的PAPC化合物和药用载体或稀释剂的步骤。

本发明的另一个方面涉及在体外或体内抑制细胞内CHK1激酶功能的方法，其包括使细胞与有效量的如本文所述的PAPC化合物接触。

在一个实施方式中，该方法进一步包括使细胞与一种或多种选自以下试剂的其他试剂接触：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物(抗代谢药)或胸苷酸合成酶(TS，thymidylate synthase)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射(ionisingradiation)。

本发明的另一个方面涉及在体外或体内调控(例如，抑制)细胞增殖(例如，细胞的增殖)、抑制细胞周期进程、促进细胞凋亡、或者一个或多个这些的组合的方法，其包括使细胞与有效量的如本文所述的PAPC化合物接触。

在一个实施方式中，该方法进一步包括使细胞与一种或多种选自以下试剂的其他试剂接触：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

本发明的另一个方面涉及治疗方法，其包括对需要治疗的受试者给予治疗有效量的如本文所述的PAPC化合物，优选以药物组合物的形式给予。

在一个实施方式中，所述给予是口服给予。

在一个实施方式中，该方法进一步包括对受试者给予选自以下试剂中的一种或多种其他试剂：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

本发明的另一个方面涉及用于通过疗法来对人体或动物体进行治疗的方法的如本文所述的PAPC化合物。

在一个实施方式中，该化合物由口服给予用于通过疗法来对人体或动物体进行治疗的方法。

在一个实施方式中，治疗方法包括用(i)PAPC化合物和(ii)一种或多种选自以下各项的其他试剂两者进行治疗：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

本发明的另一个方面涉及在用于治疗的药剂制备中使用如本文所述的PAPC化合物。

在一个实施方式中，该药剂是口服给予的药剂。

在一个实施方式中，治疗包括用(i)包含PAPC化合物的药剂和(ii)选自以下的一种或多种其他试剂两者来进行治疗：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

在一个实施方式中，该治疗是由CHK1介导的疾病或病症的治疗。

在一个实施方式中，该治疗是通过抑制CHK1激酶功能而改善的疾病或病症的治疗。

在一个实施方式中，该治疗是增殖性病症的治疗。

在一个实施方式中，该治疗是癌症的治疗。

在一个实施方式中，该治疗是p53缺陷癌(p53缺陷型癌症)的治疗。

在一个实施方式中，该治疗是头癌；颈癌；神经***癌；脑癌；成神经细胞瘤(neuroblastoma)；肺/纵隔癌；乳腺癌；食道癌；胃癌；肝癌；胆管癌；胰腺癌；小肠癌；大肠癌；结肠直肠癌；妇科癌；泌尿生殖癌；卵巢癌；甲状腺癌；肾上腺癌；皮肤癌；黑素瘤；骨肉瘤；软组织肉瘤；小儿恶性肿瘤(paediatric malignancy)；霍奇金氏病；非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphoma)；骨髓瘤；白血病；或来自未知原发部位的转移瘤(转移)的治疗。

在一个实施方式中，该治疗是肺癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、黑素瘤、神经胶质瘤、或成神经细胞瘤的治疗。

本发明的另一个方面涉及试剂盒，其包括(a)优选提供为药物组合物并在适合的容器中和/或具有适合的包装的如本文所述的PAPC化合物；和(b)使用说明书，例如，关于如何给予该化合物的书面说明。

在一个实施方式中，该试剂盒进一步包括选自以下的一种或多种其他试剂：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；和(d)微管靶向剂。

本发明的另一个方面涉及通过如本文所述的合成方法，或包括如本文所述的合成方法的方法可获得的PAPC化合物。

本发明的另一个方面涉及通过如本文所述的合成方法，或包括如本文所述的合成方法的方法获得的PAPC化合物。

本发明的另一个方面涉及如本文所述的新中间体，其适合于在本文所述的合成方法中使用。

本发明的另一个方面涉及在本文所述的合成方法中使用如本文所述的这种新中间体。

如将由本领域技术人员所理解的，本发明的一个方面的特征和优选实施例也将涉及本发明的其他方面。

附图说明

图1是作为下述体内研究一部分记录的MRI扫描(“转基因MYCN驱动的成神经细胞瘤模型中的PAPC-A-01”)。该图像示出了小鼠的腹部(k＝肾；t＝肿瘤；s.b.＝小肠)并记录预处理。肿瘤体积为1960mm³。

图2是作为下述体内研究一部分记录的MRI扫描(“转基因MYCN驱动的成神经细胞瘤模型中的PAPC-A-01”)。该图像示出了小鼠的腹部(k＝肾；t＝肿瘤；s.b.＝小肠)并在用PAPC-A-01处理7天后记录。肿瘤体积为417mm³。

具体实施方式

化合物

本发明的一个方面涉及某些化合物，该化合物涉及5-(吡啶-2-基-氨基)-吡嗪-2-甲腈：

所有化合物的附加特征在于邻近腈基(在吡嗪的3-位处)的取代基，其独立地为：

其中R^B3A如本文所限定。这两个结构式限定了可方便地描述为彼此的“开链”(左边)和“闭合环”(右边)类似物的基团，并共有下面以粗体标记的原子/键：

例如，当R^B3A是甲基时，该化合物涉及以下化合物：

本发明的化合物是CHK1活性的强效抑制剂(例如，具有小于100nM的CHK1IC₅₀)。本发明的化合物可附加的特征在于：(a)与CHK2相比显著的选择性(例如，CHK1相对CHK2至少100倍的选择性)和/或(b)显著的口服生物利用度(例如，至少100nM的口服生物利用度(血浆浓度，10mg/kg p.o.后1小时))。

因此，本发明的一个方面涉及下式的化合物及其药用盐、水合物和溶剂化物，其中-R^A4、-R^A5和-R^B3是如本文所限定的(为方便起见，在本文中统称为“吡啶基-氨基-吡嗪腈化合物”或“PAPC化合物“)：

本发明的一些实施方式包括下列内容：

(1)下式的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

其中：

-R^B3独立地是：

每个-R^B3A独立地是-H或饱和脂肪族C_1-3烷基；

-R^A4独立地是-NHR^A4A、-NR^A4A ₂、或-OR^A4A；

每个-R^A4A独立地是饱和脂肪族C_1-3烷基；

-R^A5独立地是-R^A5A、-R^A5B、-R^A5C、-R^A5D、-R^A5E、或-R^A5F；

-R^A5A独立地是：

-R^A5AA是饱和脂肪族C_1-3烷基；

-R^A5B是-CF₃；

-R^A5C独立地是-F、-Cl、-Br、或-I；

-R^A5D独立地是-C≡CH、-C≡C-R^A5DA、或-C≡C-R^A5DB-OH；

-R^A5DA是饱和脂肪族C_1-4烷基；

-R^A5DB是饱和脂肪族C_1-4亚烷基(alkylene)；

-R^A5E独立地是饱和C_3-6环烷基；

-R^A5F是-C(＝O)O-R^A5FA；和

-R^A5FA是饱和脂肪族C_1-3烷基。

为免生疑问，这并不意味着任何两个或更多的-R^A4、-R^A5、和-R^B3一起形成稠合到它们所附接到的环上的环。例如，这并不意味着-R^A4和-R^A5一起形成稠合到它们所附接到的环上的环。类似地，这并不意味着-R^A4和-R^B3一起形成稠合到它们所附接到的环上的环。类似地，这并不意味着-R^A5和-R^B3一起形成稠合到它们所附接到的环上的环。

基团-R^B3具有一个手性中心，用下式中的星号标记，它可独立地为(R)或(S)构型。除非另有说明，意指涵盖两种构型。

基团-R^B3

(2)根据(1)所述的化合物，其中-R^B3是：

(3)根据(1)所述的化合物，其中-R^B3是：

(4)根据(1)所述的化合物，其中-R^B3是：

(5)根据(1)所述的化合物，其中-R^B3是：

(6)根据(1)所述的化合物，其中-R^B3是：

(7)根据(1)所述的化合物，其中-R^B3是：

基团-R^B3A

(8)根据(1)到(7)中任一项所述的化合物，其中-R^B3A是饱和脂肪族C_1-3烷基。

(9)根据(1)到(7)中任一项所述的化合物，其中-R^B3A是-Me。

(10)根据(1)到(7)中任一项所述的化合物，其中-R^B3A是-H。

基团-R^A4

(11)根据(1)到(10)中任一项所述的化合物，其中-R^A4独立地是-NHR^A4A或-NR^A4A ₂。

(12)根据(1)到(10)中任一项所述的化合物，其中-R^A4是-NHR^A4A。

(13)根据(1)到(10)中任一项所述的化合物，其中-R^A4是-NR^A4A ₂。

(14)根据(1)到(10)中任一项所述的化合物，其中-R^A4是-OR^A4A。

基团-R^A4A

(15)根据(1)到(14)中任一项所述的化合物，其中每个-R^A4A独立地是-Me或-Et。

(16)根据(1)到(14)中任一项所述的化合物，其中每个-R^A4A是-Me。

基团-R^A5

(17)根据(1)到(16)中任一项所述的化合物，其中-R^A5是-R^A5A。

(18)根据(1)到(16)中任一项所述的化合物，其中-R^A5是-R^A5B。

(19)根据(1)到(16)中任一项所述的化合物，其中-R^A5是-R^A5C。

(20)根据(1)到(16)中任一项所述的化合物，其中-R^A5是-R^A5D。

(21)根据(1)到(16)中任一项所述的化合物，其中-R^A5是-R^A5E。

(22)根据(1)到(16)中任一项所述的化合物，其中-R^A5是-R^A5F。

基团-R^A5A

(23)根据(1)到(22)中任一项所述的化合物，其中-R^A5A如果存在则是：

(24)根据(1)到(22)中任一项所述的化合物，其中-R^A5A如果存在则是：

基团-R^A5AA

(25)根据(1)到(24)中任一项所述的化合物，其中每个-R^A5AA如果存在则是-Me或-Et。

(26)根据(1)到(24)中任一项所述的化合物，其中每个-R^A5AA如果存在则是-Me。

(27)根据(1)到(24)中任一项所述的化合物，其中每个-R^A5AA如果存在则是-Et。

基团-R^A5C

(28)根据(1)到(27)中任一项所述的化合物，其中-R^A5C如果存在则独立地是-F、-Cl、或-Br。

(29)根据(1)到(27)中任一项所述的化合物，其中-R^A5C如果存在则独立地是-F。

(30)根据(1)到(27)中任一项所述的化合物，其中-R^A5C如果存在则独立地是-Cl。

(31)根据(1)到(27)中任一项所述的化合物，其中-R^A5C如果存在则独立地是-Br。

(32)根据(1)到(27)中任一项所述的化合物，其中-R^A5C如果存在则独立地是-I。

基团-R^A5D

(33)根据(1)到(32)中任一项所述的化合物，其中-R^A5D如果存在则独立地是-C≡CH或-C≡C-R^A5DA。

(34)根据(1)到(32)中任一项所述的化合物，其中-R^A5D如果存在则是-C≡CH。

(35)根据(1)到(32)中任一项所述的化合物，其中-R^A5D如果存在则是-C≡C-R^A5DA。

(36)根据(1)到(32)中任一项所述的化合物，其中-R^A5D如果存在则是-C≡C-R^A5DB-OH。

基团-R^A5DA

(37)根据(1)到(36)中任一项所述的化合物，其中-R^A5DA如果存在则独立地是-Me、-Et、-CH(Me)₂、或-C(Me)₃。

(38)根据(1)到(36)中任一项所述的化合物，其中-R^A5DA如果存在则是-CH(Me)₂。

(39)根据(1)到(36)中任一项所述的化合物，其中-R^A5DA如果存在则独立地是-C(Me)₃。

基团-R^A5DB-

(40)根据(1)到(39)中任一项所述的化合物，其中-R^A5DB-如果存在则是饱和脂肪族C_1-3亚烷基。

(41)根据(1)到(39)中任一项所述的化合物，其中-R^A5DB-如果存在则独立地是-CH₂-、-CH(Me)-、或-C(Me)₂-。

(42)根据(1)到(39)中任一项所述的化合物，其中-R^A5DB-如果存在则是-C(Me)₂-。

(43)根据(1)到(39)中任一项所述的化合物，其中-R^A5DB-如果存在则是-CH(Me)-。

(44)根据(1)到(39)中任一项所述的化合物，其中-R^A5DB-如果存在则是-CH₂-。

基团-R^A5E

(45)根据(1)到(44)中任一项所述的化合物，其中-R^A5E如果存在则独立地是环丙基、环丁基、或环戊基。

(46)根据(1)到(44)中任一项所述的化合物，其中-R^A5E如果存在则独立地是环丙基或环丁基。

(47)根据(1)到(44)中任一项所述的化合物，其中-R^A5E如果存在则是环丙基。

基团-R^A5FA

(48)根据(1)到(47)中任一项所述的化合物，其中-R^A5FA如果存在则是-Me或-Et。

(49)根据(1)到(47)中任一项所述的化合物，其中-R^A5FA如果存在则是-Me。

(50)根据(1)到(47)中任一项所述的化合物，其中-R^A5FA如果存在则是-Et。

一些优选的组合

(51)根据(1)所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(52)根据(1)所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(53)根据(1)所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(54)根据(1)所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(55)根据(1)所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(56)根据(1)所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(57)根据(1)所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(58)根据(1)所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(59)根据(1)所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(60)根据(1)所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(61)根据(1)所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(62)根据(1)所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(63)根据(1)所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(64)根据(1)所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(65)根据(1)所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(66)根据(1)所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(67)根据(1)所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(68)根据(1)所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

具体化合物

(69)根据(1)所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

(70)根据(1)所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐、水合物或溶剂化物：

组合

可以理解，为清楚起见，在独立实施方式的上下文中描述的本发明的某些特征也可在单一实施方式中组合提供。反之，为简洁起见，在单一实施方式的上下文中描述的本发明的各个特征也可独立地或以任何适当的子组合的形式提供。涉及由变量表示的化学基团(例如，-R^B3、-R^B3A、-R^A4、-R^A4A、-R^A5、-R^A5A、-R^A5AA、-R^A5B、-R^A5C、-R^A5D、-R^A5DA、-R^A5DB-、-R^A5E、-R^A5F、-R^A5FA等)的实施方式的所有组合特别地被本发明包涵并在本文公开，就象单独和明确地公开了每个组合一样，在这个意义上，这样的组合包括为稳定化合物的化合物(即，可被分离、表征并测定生物学活性的化合物)。另外，在描述这些变量的实施方式中所列的化学基团的所有子组合也由本发明明确地包涵并在本文公开，就如同单独和明确地公开了化学基团的每个这样的子组合一样。

基本上纯化的形式

本发明的一个方面涉及纯化形式的PAPC化合物。

在一个实施方式中，该化合物基本上处于纯化形式和/或处于基本上没有污染物(杂质)的形式。

在一个实施方式中，该化合物处于具有按重量计至少50％，例如，按重量计至少60％，例如，按重量计至少70％，例如，按重量计至少80％，例如，按重量计至少90％，例如，按重量计至少95％，例如，按重量计至少97％，例如，按重量计至少98％，例如，按重量计至少99％的纯度的基本上纯化的形式。

除非特别说明，基本上纯化的形式是指化合物处于任何立体异构体或对映体形式。例如，在一个实施方式中，基本上纯化的形式是指立体异构体的混合物，即，相对于其他化合物是纯化的。在一个实施方式中，基本上纯化的形式指一种立体异构体，例如光学上纯的立体异构体。在一个实施方式中，基本上纯的形式是指对映体的混合物。在一个实施方式中，基本上纯化的形式是指对映体的等摩尔混合物(即，外消旋混合物，外消旋体)。在一个实施方式中，基本上纯化的形式指一种对映体，例如，光学上纯的对映体。

在一个实施方式中，该化合物处于基本上没有污染物的形式，其中该污染物表示按重量计不超过50％，例如，按重量计不超过40％，例如，按重量计不超过30％，例如，按重量计不超过20％，例如，按重量计不超过10％，例如，按重量计不超过5％，例如，按重量计不超过3％，例如，按重量计不超过2％，例如，按重量计不超过1％。

除非特别说明，该污染物指其他化合物，即除立体异构体或对映体之外的化合物。在一个实施方式中，该污染物指其他化合物和其他立体异构体。在一个实施方式中，该污染物指其他化合物和其他对映体。

在一个实施方式中，该化合物处于具有至少60％(即，以摩尔计，该化合物的60％是期望的立体异构体或对映体，而40％是不期望的立体异构体或对映体)，例如，至少70％，例如，至少80％，例如，至少90％，例如，至少95％，例如，至少97％，例如，至少98％，例如，在至少99％的光学纯度的基本上纯化的形式。

异构体

某些化合物可以一种或多种特定的以下形式存在：几何形式、光学形式、对映异构形式、非对映异构(diasteriomeric)形式、差向异构(epimeric)形式、阻转异构(atropic)形式、立体异构形式、互变异构形式、构象(conformational)形式或端基异构形式(anomeric form)，包括但不限于，顺式-和反式-形式；E-和Z-形式；c-、t-和r-形式；内(endo-)和外(exo-)形式；R-、S-和内消旋-形式；D-和L-形式；d-和l-形式；(+)和(-)形式；酮-、烯醇-和烯醇化物-形式；顺(syn)-和反-(anti-)形式；顺错-(synclinal-)和反错-(anticlinal)形式；α-和β-形式；轴(axial)和平展(equatorial)形式；船式-、椅式-、扭转-、信封式-和半椅式；及它们的组合，下文中统称为“异构体”(或“异构体形式”)。

需要注意的是，除如以下对互变异构形式讨论的之外，从如本文所用的术语“异构体”中明确排除了结构异构体(或构造异构体(constitutional isomer)(即在原子间联接方面不同，而不仅仅是原子的空间位置不同的异构体)。例如，不能将甲氧基-OCH₃解释为其结构异构体羟甲基-CH₂OH。类似地，不能将邻氯苯基解释为其结构异构体间氯苯基。然而，提到一类结构时可包括落入该类结构范围内的结构上异构形式(例如，C_1-3烷基包括正丙基和异丙基；丁基包括正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基；甲氧基苯基包括邻甲氧基苯基、间甲氧基苯基和对甲氧基苯基)。

上述例外不涉及互变异构形式，例如酮-、烯醇-和烯醇化物-形式，例如，如以下的互变异构对：酮/烯醇(如下所示)、亚胺/烯胺、酰胺/亚氨醇、脒/脒、亚硝基/肟、硫酮/烯硫醇(enethiol)、N-亚硝基/羟基偶氮和硝基/酸式硝基。

需要注意的是，明确地包括在术语“异构体”中的是具有一个或多个同位素取代的化合物。例如，H可是任何同位素形式，包括¹H、²H(D)和³H(T)；C可是任何同位素形式，包括¹²C、¹³C和¹⁴C；O可是任何同位素形式，包括¹⁶O和¹⁸O；等等。

除非另有说明，提到的具体化合物包括所有这些异构形式，包括其混合物(例如，外消旋混合物)。这些异构形式的制备方法(例如，不对称合成)和分离方法(例如，分步结晶和色谱法)是本领域已知的或是容易通过调整本文教导的方法或已知方法按照已知方式得到的。

盐

可以方便地或可以期望地制备、纯化和/或处理该化合物的相应盐，例如，药用盐。药用盐的实例如在Berge等人，1977，“Pharmaceutically Acceptable Salts,”J.Pharm.Sci.,66卷,1-19页中讨论。

例如，如果化合物是阴离子性的或具有可以是阴离子性的官能团(例如，-COOH可以为-COO-)，则盐可以用适合的阳离子形成。适合的无机阳离子的实例包括，但不限于，碱金属离子诸如Na⁺和K⁺、碱土金属阳离子诸如Ca²⁺和Mg²⁺、和其他阳离子如Al³⁺。适合的有机阳离子的实例包括，但不限于，铵离子(即，NH⁴⁺)和取代的铵离子(例如，NH₃R⁺、NH₂R₂ ⁺、NHR₃ ⁺、NR₄ ⁺)。一些适合的经取代的铵离子的实例是衍生自下列的经取代的铵离子：乙胺、二乙胺、二环己胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、苄胺、苯基苄胺、胆碱、葡甲胺和氨基丁三醇，以及氨基酸，诸如赖氨酸和精氨酸。常见的季铵离子的实例是N(CH₃)₄ ⁺。

如果该化合物为阳离子性的或具有可以是阳离子性的官能团(例如，-NH₂可以为-NH₃ ⁺)，则盐可用适合的阴离子形成。适合的无机阴离子的实例包括，但不限于，衍生自下列无机酸的无机阴离子：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、亚硫酸、硝酸、亚硝酸、磷酸和亚磷酸。

适合的有机阴离子的实例包括，但不限于，衍生自下列有机酸的有机阴离子：2-乙酰氧基苯甲酸、乙酸、抗坏血酸、天冬氨酸、苯甲酸、樟脑磺酸、肉桂酸、柠檬酸、乙二胺四乙酸(edetic)、乙二磺酸(ethanedisulfonic)、乙磺酸(ethanesulfonic)、甲酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基乙酸、羟基马来酸、羟基萘甲酸(hydroxynaphthalenecarboxylic)、羟乙磺酸、乳酸、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸、甲磺酸、粘酸、油酸、草酸、棕榈酸、扑酸(pamoic)、泛酸、苯乙酸、苯磺酸、丙酸、丙酮酸、水杨酸、硬脂酸、琥珀酸、对氨基苯磺酸、酒石酸、甲苯磺酸和戊酸(valeric)。适合的聚合有机阴离子的实例包括，但不限于，衍生自下列聚合物酸(polymeric acid)的聚合物有机阴离子：鞣酸、羧甲基纤维素。

除非另有说明，否则提到的具体化合物还包括它们的盐形式。

水合物和溶剂化物

可以方便地或可以期望地制备、纯化和/或处理该化合物的相应溶剂化物。本文所用的术语“溶剂化物”在常规意义上是指溶质(例如，化合物、化合物的盐)与溶剂的复合物。如果溶剂是水，则溶剂化物可以便利地称为水合物，例如，半水合物、一水合物、倍半水合物(sesqui-hydrate)、二水合物、三水合物等。

除非另外指明，否则提到的具体化合物也包括它们的溶剂化物和水合物形式。

化学保护形式

可以方便地或可以期望地制备、纯化和/或处理化学保护形式的该化合物。术语“化学保护形式”在本文中以常规化学意义使用并涉及这样的化合物，其中一个或多个反应性官能团被保护免于在指定条件下(例如pH、温度、辐射、溶剂等)发生不期望的化学反应。在实践中，采用熟知的化学方法可逆地赋予官能团以无反应性，否则它们在指定条件下将是反应性的。在化学保护形式中，一个或多个反应性官能团是被保护的或保护基团(也称为被掩蔽的或掩蔽基团或被封闭的或封闭基团)的形式。通过保护反应性官能团，可进行牵涉其他未保护的反应性官能团的反应，而不影响被保护的基团；通常在随后的步骤中可除去保护基团，而基本上不影响分子的其余部分。例如，参见Protective Groups in Organic Synthesis(T.Greene和P.Wuts；第4版；John Wiley和Sons，2006)。

多种这类“保护”、“封闭”或“掩蔽”方法在有机合成中广泛使用和熟知。例如，可衍生化具有两个在指定条件下将是反应性的非等价反应性官能团的化合物，以赋予一个官能团“被保护”，因此在指定条件下是无反应性的；如此保护后，该化合物可用作反应剂，其仅有效地具有一个反应性官能团。所期望的反应(牵涉另一个官能团)完成后，被保护的基团可以“去保护”，以恢复其原来的官能性。

例如，羟基可被保护为醚(-OR)或酯(-OC(＝O)R)，例如，如：叔丁基醚；苄基、二苯甲基(二苯基甲基)或三苯甲基(三苯基甲基)醚；三甲基甲硅烷基醚或叔丁基二甲基甲硅烷基醚(t-butyldimethylsilyl ether)；或乙酰基酯(-OC(＝O)CH₃，-OAc)。

例如，胺基可被保护为，例如，酰胺(-NRCO-R)或氨基甲酸乙酯(尿烷，urethane)(-NRCO-OR)，例如，甲基酰胺(-NHCO-CH₃)；苄氧基酰胺(-NHCO-OCH₂C₆H₅，-NH-Cbz)；叔丁氧基酰胺(-NHCO-OC(CH₃)₃，-NH-Boc)；2-联苯-2-丙氧基酰胺(-NHCO-OC(CH₃)₂C₆H₄C₆H₅，-NH-Bpoc)，9-芴基甲氧基酰胺(-NH-Fmoc)，6-硝基藜芦氧基酰胺(6-nitroveratryloxy amide)(-NH-Nvoc)，2-三甲基甲硅烷基乙氧基酰胺(2-trimethylsilylethyloxy amide)(-NH-Teoc)，2,2,2-三氯乙氧基酰胺(-NH-Troc)，烯丙氧基酰胺(-NH-Alloc)，2-(苯磺酰基)乙氧基酰胺(-NH-Psec)；或在适合的情况下(例如，环状胺)，氮氧自由基(nitroxide radical)(>N-O●)。

前药

可以方便地或可以期望地制备、纯化和/或处理前药形式的化合物。如本文所用的术语“前药”涉及这样的化合物，当被代谢(例如，在体内)时，该化合物产生所期望的活性化合物。通常，前药是无活性的，或比所期望的活性化合物的活性低，但可提供有利的处理、给予或代谢特性。

例如，一些前药是活性化合物的酯(例如，生理用代谢不稳定的酯)。在代谢过程中，酯基团(-C(＝O)OR)被切割以产生活性药物。可通过酯化作用来形成这样的酯，例如，母体化合物中的任何羧酸基团(-C(＝O)OH)与母体化合物中酌情预先保护的任何其他反应基团的酯化来形成这样的酯，如果需要的话，随后进行脱保护。

此外，一些前药酶促活化，以产生活性化合物，或经过进一步的化学反应产生活性化合物的化合物。例如，前药可以为糖衍生物或其他糖苷缀合物(结合物，conjugate)，或可以为氨基酸酯衍生物。

通用的化学合成

本文描述了PAPC化合物化学合成的几种方法。这些和/或其他熟知的方法可以通过已知的方式修改和/或调整以促进本文所述的其它化合物的合成。

化学合成

本文描述了本发明的吡啶基-氨基-吡嗪腈(PAPC)化合物化学合成的几种方法。这些和/或其他熟知的方法可以通过已知的方式修改和/或调整以促进本发明范围内的其它化合物的合成。

在一种方法(一般方法A)中，类型(v)的化合物通过如下列方案所示的方法来制备。市售的化合物(i)通常在加热的含水溶液中与氨源反应，得到氨基吡嗪(ii)。随后与溴化剂，诸如N-溴代琥珀酰亚胺在0℃下反应，得到溴吡嗪(iii)。随后溴吡嗪与氰化物源，通常为***，在钯介导的偶联条件(coupling condition)下反应，得到吡嗪甲腈(iv)。随后与醇，通常于如二噁烷的非质子溶剂中在如氢化钠的碱存在下，通常伴随着加热进行反应，得到所需的6-烷氧基-取代的-2-氨基吡嗪-5-腈(v)。

方案1

在另一种方法(一般方法B)中，类型(viii)的化合物通过如下列方案所示的方法来制备。市售的化合物(vi)与醛(vii)如多聚甲醛在还原性胺化作用的条件下使用例如三乙酰氧基硼氢化钠的还原剂，通常伴随着加热并在酸存在下反应，得到所需的化合物(viii)。

方案2

在另一种方法(一般方法C)中，类型(x)的化合物通过如下列方案所示的方法来制备。化合物(ix）在硫酸中与碘化剂，通常为N-碘代琥琥珀酰亚胺反应，得到所需的化合物(x)。

方案3

在另一种方法(一般方法D)中，类型(xii)的化合物通过如下列方案所示的方法来制备。化合物(xi)在乙酸中与氯化剂，通常为N-氯代琥琥。珀酰亚胺反应，得到所需的化合物(xii)。

方案4

在另一种方法(一般方法E)中，类型(xv)的化合物通过如下列方案所示的方法来制备。市售的化合物(xiii)与例如甲胺的胺(xiv)通常伴随着微波反应器中的加热进行反应，得到所需的化合物(xv)。

方案5

在另一种方法(一般方法F)中，类型(xvii)的化合物通过如下列方案所示的方法来制备。化合物(xvi)与例如二甲胺的胺(xiv)通常在乙腈中于室温或低于室温下反应，得到所需的化合物(xvii)。

方案6

在另一种方法(一般方法G)中，类型(xix)的化合物通过如下列方案所示的方法来制备。化合物(xvi)与醇盐的盐(xviii)，例如甲醇钠在非质子溶剂诸如四氢呋喃中于室温下反应，得到所需的化合物(xix)。

方案7

在另一种方法(一般方法H)中，类型(xxii)的化合物通过如下列方案所示的方法来制备。化合物(xx)与例如碘代甲烷的卤代烷(xxi)通常在非质子溶剂诸如DMF中并在诸如氢化钠的碱的存在下反应，得到所需的化合物(xxii)。

方案8

在别一种方法(一般方法I)中，类型(xxv)的化合物通过如下列方案所示的方法来制备。在钯介导的偶联条件下于溶剂诸如乙腈中，通常伴随着油浴或微波加热，并通常在金属碳酸盐碱的存在下偶联5-碘代-2-氯吡啶(viii)或(x)与硼酸或酯(xxiii)，例如1-甲基4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁环戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(1-methyl 4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole)或2-环丙基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁环戊硼烷(2-cyclopropyl-4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolane)，以提供吡啶(xxiv)。在钯介导的胺化条件下，通常伴随着微波或油浴加热并在碱诸如金属碳酸盐存在下，用吡嗪化合物(v)处理中间体(xxiv)，在除去任何保护基团后得到所需的PAPC化合物(xxv)。

方案9

在另一种方法(一般方法J)中，类型(xxvi)的化合物通过如下列方案所示的方法来制备。在钯介导的胺化条件下，通常伴随着微波或油浴加热并在碱诸如金属碳酸盐的存在下，偶联2-氯吡啶-5-羧酸酯(xvii)或(xix)与吡嗪化合物(v)，在去除任何保护基团后得到所需的PAPC化合物(xxvi)。

方案10

在另一种方法(一般方法K)中，类型(xxvii)的化合物通过如下列方案所示的方法来制备。在钯介导的胺化条件下，通常伴随着微波或油浴加热并在碱诸如金属碳酸盐存在下，偶联2,5-二氯代吡啶(xii)与吡嗪化合物(v)，以在去除任何保护基团后得到所需的PAPC化合物(xxvii)。

方案11

在另一种方法(一般方法L)中，类型(xxviii)的化合物通过如下列方案所示的方法来制备。在钯介导的胺化条件下，通常伴随着微波或油浴加热并在碱诸如金属碳酸盐存在下，偶联5-三氟甲基-2-氯吡啶(xv)与吡嗪化合物(v)，以在去除任何保护基团后得到所需的PAPC化合物(xxviii)。

方案12

在另一种方法(一般方法M)中，类型(xxxi)的化合物通过如下列方案所示的方法来制备。在钯介导的胺化条件下，在诸如DMF的溶剂中以及在例如铜(I)碘化物的铜(I)盐存在下，通常伴随着油浴或微波加热，并通常在碱存在下偶联5-碘代-2-氯吡啶(viii)或(x)与炔(xxix)，例如乙炔基三甲基硅烷或三甲基(2-甲基丁-3-炔-2-基氧基)硅烷(trimethyl(2-methylbut-3-yn-2-yloxy)silane)，以提供吡啶(xxx)。在钯介导的胺化条件下，通常伴随着微波或油浴加热并在碱诸如金属碳酸盐存在下用吡嗪化合物(v)处理中间体(xxx)，在去除任何保护基团后得到所需的PAPC化合物(xxxi)。

方案13

在另一种方法(一般方法N)中，类型(xxxii)的化合物通过如下列方案所示的方法来制备。在钯介导的胺化条件下，通常伴随着微波或油浴加热并在碱诸如金属碳酸盐存在下，偶联5-(吡唑-4-基)-2-氯吡啶(xxii)与吡嗪化合物(v)，以在去除任何保护基团后得到所需的PAPC化合物(xxxii)。

方案14

组合物

本发明的一个方面涉及组合物(例如，药物组合物)，其包含如本文所述的PAPC化合物，以及药用载体、稀释剂或赋形剂。

本发明的另一个方面涉及制备组合物(例如，药物组合物)的方法，其包括使如本文所述的PAPC化合物和药用载体、稀释剂或赋形剂混合。

在一个优选的实施方式中，该组合物(例如，药物组合物)适合于口服给予至受试者。

用途

例如，如本文所述的PAPC化合物在通过抑制如本文所述的CHK1激酶功能而改善的病症(例如，疾病)治疗中是有用的。

用于抑制CHK1的方法

本发明的一个方面涉及在体外或体内抑制CHK1激酶功能的方法，其包括使CHK1激酶与如本文所述的有效量的PAPC化合物接触。

本发明的一个方面涉及在体外或体内抑制细胞中CHK1激酶功能的方法，其包括使细胞与如本文所述的有效量的PAPC化合物接触。

在一个实施方式中，该方法进一步包括使细胞与一种或多种选自以下各项的其他试剂接触：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

用于确定CHK1激酶功能抑制的适合测定法在本文中描述和/或在本领域中已知。

在一个实施方式中，该方法在体外进行。

在一个实施方式中，该方法在体内进行。

在一个实施方式中，PAPC化合物以药用组合物形式提供。

可治疗任何类型的细胞，包括但不限于，脂肪、肺、胃肠道(包括，例如，肠、结肠)、乳腺(***)、卵巢、***、肝脏(肝)、肾脏(肾)、膀胱、胰腺、脑和皮肤。

本领域的普通技术人员能够容易地确定候选化合物是否抑制CHK1激酶功能。例如，本文描述了适合的测定法。

用于抑制细胞增殖等的方法

本文所述的PAPC化合物，例如，(a)调控(例如，抑制)细胞增殖；(b)抑制细胞周期进程；(c)促进细胞凋亡；或(d)这些的一种或多种的组合。

本发明的一个方面涉及在体外或体内调控(例如，抑制)细胞增殖(例如，细胞的增殖)、抑制细胞周期进程、促进细胞凋亡、或者一种或多种这些的组合的方法，其包括使细胞与如本文所述的有效量的PAPC化合物接触。

在一个实施方式中，该方法是在体外或体内调控(例如，抑制)细胞增殖(例如，细胞的增殖)的方法，其包括使细胞与如本文所述的有效量的PAPC化合物接触。

在一个实施方式中，该方法进一步包括使细胞与一种或多种选自以下各项的其他试剂接触：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或TS抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

在一个实施方式中，该方法在体外进行。

在一个实施方式中，该方法在体内进行。

在一个实施方式中，PAPC化合物以药用组合物形式提供。

可治疗任何类型的细胞，包括但不限于，肺、胃肠道(包括，例如，肠、结肠)、乳腺(***)、卵巢、***、肝脏(肝)、肾脏(肾)、膀胱、胰腺、脑和皮肤。

本领域的普通技术人员能够容易地确定候选化合物是否调控(例如，抑制)细胞增殖等。例如，本文描述了可方便地用于评估由特定化合物所提供的活性的测定法。

例如，细胞(例如，来自肿瘤)的样品可在体外生长，并使化合物与所述细胞接触，且观察到该化合物对那些细胞的影响。作为“影响”的一个实例，可以确定细胞的形态学状态(例如活的或死的等)。在发现该合物对细胞施加影响的情况下，这可被用作在治疗携带相同细胞类型细胞的患者的方法中该化合物功效的预后或诊断标志物。

在疗法中的应用

本发明的另一个方面涉及用于通过疗法对人体或动物体进行治疗的方法中的如本文所述的PAPC化合物。

本发明的另一个方面涉及由口服给予用于通过疗法对人体或动物体进行治疗的方法中的如本文所述的PAPC化合物。

在一个实施方式中，治疗的方法包括用(i)如本文所述的PAPC化合物和(ii)选自以下的一种或多种其他试剂两者进行治疗：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

本发明的另一个方面涉及用于通过疗法对人体或动物体进行治疗的方法中的如本文所述的(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂、(b)DNA损伤剂、(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂、或(d)微管靶向剂，其中该治疗方法包括用(i)如本文所述的PAPC化合物，以及(a)该DNA拓扑异构酶I或II抑制剂、(b)该DNA损伤剂、(c)该抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂、或(d)该微管靶向剂两者进行治疗。

在制备药剂中的应用

本发明的另一个方面涉及如本文所述的PAPC化合物在制备用于治疗的药剂中的应用。

本发明的另一个方面涉及如本文所述的PAPC化合物在制备用于通过口服给予进行治疗的药剂中的应用。

在一个实施方式中，该药剂包括PAPC化合物。

在一个实施方式中，该治疗包括用(i)包含如本文所述的PAPC化合物的药剂和(ii)选自以下的一种或多种其他试剂两者进行治疗：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

本发明的另一个方面涉及如本文所述的(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂、(b)DNA损伤剂、(c)抗代谢物或TS抑制剂、或(d)微管靶向剂在制备用于治疗的药剂中的应用，其中该治疗包括用(i)如本文所述的PAPC化合物，以及(a)该DNA拓扑异构酶I或II抑制剂、(b)该DNA损伤剂、(c)该抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂、或(d)该微管靶向剂两者进行治疗。

治疗方法

本发明的另一个方面涉及治疗方法，其包括对需要治疗的患者给予如本文所述的治疗有效量的PAPC化合物，优选以药物组合物的形式给予。

本发明的另一个方面涉及治疗方法，其包括对需要治疗的患者口服给予如本文所述的治疗有效量的PAPC化合物，优选以药物组合物的形式给予。

在一个实施方式中，该方法进一步包括对受试者给予选自以下的一种或多种其他试剂：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

治疗的病症—由CHK1介导的病症

在一个实施方式(例如，疗法应用、制备药剂应用、治疗方法的实施方式)中，该治疗是由CHK1介导的疾病或病症的治疗。

治疗的病症—通过抑制CHK1激酶功能而改善的病症

在一个实施方式(例如，疗法应用、制备药剂应用、治疗方法的实施方式)中，该治疗是：通过抑制CHK1激酶功能而改善的疾病或病症的治疗。

治疗的疾病—增殖性病症

在一个实施方式(例如，疗法应用、制备药剂应用、治疗方法的实施方式)中，该治疗是：增殖性病症的治疗。

本文所用的术语“增殖性病症”涉及不需要的或失控的过度细胞增殖或非期望的异常细胞增殖，诸如肿瘤生长或增生性生长。

在一个实施方式中，该治疗是：特征在于良性、噁化前、或恶性的细胞增殖的增殖性病症的治疗，包括例如：赘生物(neoplasm)、增生和肿瘤(tumour)(例如，组织细胞瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、骨瘤)、癌症(见下文)、银屑病、骨病、纤维增殖性疾病(例如，***疾病)、肺纤维化、动脉粥样硬化、血管中的平滑肌细胞增殖，诸如血管成形术后狭窄或再狭窄。

治疗的疾病—癌症

在一个实施方式中(例如，疗法应用、制备药剂应用、治疗方法的实施方式)中，该治疗是癌症的治疗。

在一个实施方式中，该治疗是治疗肺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、胃肠癌、胃癌、肠癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、甲状腺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、***癌、睾丸癌、肝癌、肾癌，肾细胞癌、膀胱癌、胰腺癌、脑癌、成神经细胞瘤、神经胶质瘤、肉瘤、骨肉瘤、骨癌、鼻咽癌(例如，头癌、颈癌)、皮肤癌、鳞癌(squamous cancer)、卡波西氏肉瘤(Kaposi's sarcoma)、黑素瘤、恶性黑素瘤、淋巴瘤、或白血病。

在一个实施方式中，该治疗是治疗：

癌，例如膀胱癌、乳腺癌、结肠癌(例如，结肠直肠癌诸如结肠腺癌和结肠腺瘤)、肾癌、表皮癌、肝癌、肺癌(例如，腺癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、食道癌、胆囊癌、卵巢癌、胰腺癌(例如，外分泌胰腺癌)、胃癌、***、甲状腺癌、***癌、皮肤癌(例如，鳞状细胞癌)；

淋巴系的造血肿瘤(hematopoietic tumour)，例如白血病、急性淋巴细胞性白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤或伯基特淋巴瘤(Burkett's lymphoma)；

骨髓系的造血肿瘤，例如急性和慢性骨髓性白血病、骨髓增生异常综合症(myelodysplastic syndrome)或前髓细胞白血病；

间充质起源(mesenchymal origin)的肿瘤，例如纤维肉瘤或横纹肌肉瘤；

中枢或外周神经***的肿瘤，例如星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤或神经鞘瘤；

黑素瘤；***瘤；畸胎癌；骨肉瘤；着色性干皮病；角化棘皮瘤(keratoctanthoma)；甲状腺滤泡癌；或卡波西氏肉瘤。

在一个实施方式中，该治疗是治疗实体瘤癌症(solid tumour cancer)。

在一个实施方式中，该治疗是治疗头癌；颈癌；神经***癌；脑癌；成神经细胞瘤；肺/纵隔癌；乳腺癌；食道癌；胃癌；肝癌；胆管癌；胰腺癌；小肠癌；大肠癌；结肠直肠癌；妇科癌；泌尿生殖癌；卵巢癌；甲状腺癌；肾上腺癌；皮肤癌；黑素瘤；骨肉瘤；软组织肉瘤；小儿恶性肿瘤；霍奇金氏病；非霍奇金淋巴瘤；骨髓瘤；白血病；或来自未知原发部位的转移瘤。

在一个实施方式中，该癌症的特征在于，或进一步的特征在于，为p53缺陷肿瘤。在一个实施方式中，该癌症为p53缺陷肿瘤。

在一个实施方式中，该治疗是治疗癌症转移。

在一个实施方式中，该癌症的特征在于，或进一步的特征在于，癌症干细胞。

抗癌作用可通过一种或多种机制产生，包括但不限于，调控细胞增殖、抑制细胞周期进程、抑制血管生成(新血管的形成)、抑制转移(肿瘤从其起源的扩散)、抑制细胞迁移(癌细胞向身体其他部位的扩散)、抑制入侵(肿瘤细胞扩散进入相邻的正常结构)、或促进细胞凋亡(程序性细胞死亡)。本发明的化合物可用于治疗本文所述的癌症，独立于本文所讨论的机制。

治疗

本文在治疗病症的上下文中所用的术语“治疗”通常涉及治疗人或动物(例如，在兽医应用中)的治疗，其中达到一些期望的治疗效果，例如，抑制病症进展，且包括减缓进展的速率、使进展速率停止、减轻病症的症状、改善病症、和治愈病症。还包括作为预防性措施(即，预防)的治疗。例如，用于尚未显出病症但在显出该病症的风险下的患者，被术语“治疗”包涵。

例如，治疗包括预防癌症、减少癌症的发病率、减轻癌症的症状等。

本文所用的术语“治疗有效量”涉及化合物或包含化合物的材料、组合物或剂型的量，当根据期望的治疗方案给予时，其对于产生一些期望的治疗效果是有效的、与合理的利益/风险比相当。

组合疗法

术语“治疗”包括组合治疗和疗法，其中，例如，依次地或同时地结合两种或更多治疗或疗法。例如，本文所述的化合物也可用于组合疗法，例如，连同其他试剂一起。治疗和疗法的实例包括，但不限于，化学疗法(给予活性剂，包括，例如药物、抗体(例如，作为在免疫疗法中)、前药(例如作为在光动力疗法、GDEPT、ADEPT等中)；手术；放射疗法；光动力疗法；基因疗法；和控制饮食。

本发明的一个方面涉及如本文所述的化合物，与一种或多种(例如，1、2、3、4等)另外的治疗剂，例如，经由不同的机制调控细胞生长或存活或分化的试剂或疗法结合，从而治疗癌症发展的几个特性特征。

具体的组合将由医生决定，该医生将使用他的公知常识和熟练从业者已知的剂量方案来选择剂量。

试剂(即，本文所述的化合物，加上一种或多种其他试剂)可同时或依次给予，并且可以单独地不同给予方案并经由不同的路径给予。例如，当依次给予时，该试剂可在紧密间隔的时间间隔(例如，在5-10分钟内)或在较长的时间间隔(例如，相隔1、2、3、4或更多小时，或在需要的情况下甚至相隔更长的时期)下给予，精确的给予方案与治疗剂的性质相应。

试剂(即，本文所述的化合物，加上一种或多种其他试剂)可一起配制在单一剂型中，或者，单独的试剂可分别配制并以试剂盒的形式一起呈现，可选地具有它们使用的说明书。

采用DNA损伤剂的组合疗法

如本文中所讨论的，在一些实施方式中，结合(例如，连同)一种或多种选自以下各项的其他试剂采用PAPC化合物：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

当采用PAPC化合物和一种或多种其他试剂两者时，它们可以任意顺序使用(例如，接触、给予等)。此外，它们可作为单一制剂的一部分，或分别作为单独的制剂一起使用(例如，接触、给予等)。

例如，关于采用PAPC化合物和一种或多种其他试剂治疗两者的治疗方法，用PAPC化合物治疗(例如，给予该化合物)可在用一种或多种其他试剂或其组合治疗(例如，给予该化合物)之前、与其同时、或可随后进行。

在一个实施方式中，用PAPC化合物治疗(例如，给予该化合物)与用一种或多种其他试剂治疗(例如，给予该化合物)同时或随后进行。

在一个实施方式中，该一种或多种其他试剂是DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；例如，依托泊苷(Etoposide)、拓扑替康(Topotecan)、喜树碱、伊立替康(Irinotecan)、SN-38、阿霉素(Doxorubicin)、或柔红霉素(Daunorubicin)。

在一个实施方式中，该一种或多种其他试剂是DNA损伤剂；例如，烷化剂，铂酸化剂(platinating agent)，或产生自由基的化合物；例如，替莫唑胺、顺铂(Cisplatin)、卡铂(Carboplatin)、奥沙利铂(Oxaliplatin)、丝裂霉素C、环磷酰胺(Cyclophosphamide)、BCNU、CCNU、或博来霉素(Bleomycin)。

在一个实施方式中，该一种或多种其他试剂是抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；例如，5-氟尿嘧啶、羟基脲、吉西他滨(Gemcitabine)、阿糖胞苷(Arabinosylcytosine)、氟达拉滨(Fludarabine)、雷替曲塞(Tomudex)、或ZD9331。

在一个实施方式中，该一种或多种其他药剂是微管靶向剂；例如，紫杉醇(Paclitaxel)、多西他赛(Docetaxel)、长春新碱(Vincristine)、或长春碱(Vinblastine)。

在一个实施方式中，该一种或多种其他药剂是电离辐射(例如，作为放射疗法的一部分)。

其他用途

本文所述的PAPC化合物也可用作细胞培养添加剂，以抑制CHK1激酶功能，例如，抑制细胞增殖等。

本文所述的PAPC化合物还可用作体外测定法的一部分，例如，为了确定候选宿主是否有可能从用所讨论的化合物的治疗中获益。

本文所述的PAPC化合物也可用作标准，例如，在试验中，以识别其他化合物、其他CHK1激酶功能抑制剂、其他抗增殖剂、其他抗癌剂等。

试剂盒

本发明的一个方面涉及试剂盒，其包括(a)如本文所述的PAPC化合物，或包含如本文所述的PAPC化合物的组合物，例如，优选提供在适合的容器中和/或拥有适合的包装；和(b)使用说明书，例如，对如何给予该化合物或组合物的书面说明。

在一个实施方式中，该试剂盒进一步包括一种或多种选自以下各项的其他试剂：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；和(d)微管靶向剂。

该书面说明也可包括适应症一览表，对其活性成分是适合的治疗。

给予途径

PAPC化合物或包含PAPC化合物的药物组合物可通过任何方便的给予途径，无论是全身性/外周或局部(即，在期望的作用位点处)给予给受试者。

给予途径包括，但不限于，口服(例如，通过摄入)；口腔；舌下；经皮(包括，例如，通过贴剂、硬膏剂等)；经粘膜(包括，例如，通过贴剂、硬膏剂等)；鼻内(例如，通过鼻喷雾剂)；眼部(例如，通过滴眼剂)；肺部(例如，通过吸入或使用，例如经由气雾剂，例如，通过口或鼻的吹入疗法)；直肠(例如，通过栓剂或灌肠剂)；***(例如，通过***栓剂)；不经肠的，例如，通过注射，包括皮下、皮内、肌内、静脉内、动脉内、心脏内、鞘内、脊柱内、囊内、囊下、眼眶内、腹膜内、气管内、表皮下、关节内、蛛网膜下、和胸骨内注射；通过例如，皮下或肌内地药仓或贮存器的植入。

优选地，给予途径是口服，且PAPC化合物或含有PAPC化合物的药物组合物口服地给予给受试者。

受试者/患者

受试者/患者可是脊索动物、脊椎动物、哺乳动物、胎盘哺乳动物、有袋动物(例如，袋鼠、袋熊)、啮齿动物(例如，豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)、鼠科动物(例如，小鼠)、兔类动物(例如，兔)、鸟类(例如，鸟)、犬科动物(例如，狗)、猫科动物(例如，猫)，马科动物(例如，马)、猪类(例如，猪)，绵羊科动物(例如，绵羊)、牛科动物(例如，母牛)、灵长类动物，猿猴(例如，猴子或猿)、猴子(例如，狨、狒狒)，猿(例如，大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)、或人类。

此外，受试者/患者可是其发育的任何形式，例如胎儿。

在一个优选实施方式中，受试者/患者是人类。

制剂

虽然PAPC化合物单独给予是可以的，但优选将其呈现为药物制剂(例如组合物、制剂、药剂)，其包含至少一种如本文所述的PAPC化合物，和一种或多种本领域技术人员熟知的其他药用成分，包括但不限于，药用载体、稀释剂、赋形剂、佐剂、填充剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、稳定剂、增溶剂(solubiliser)、表面活性剂(例如，湿润剂)、掩蔽剂、着色剂、调味剂和甜味剂。该制剂可进一步包括其他活性剂，例如，其他治疗剂或预防剂。

因此，本发明进一步提供了如上文所限定的药物组合物，和制备药物组合物的方法，包括使至少一种如本文所述的PAPC化合物与本领域技术人员熟知的一种或多种其他药用成分，例如，载体、稀释剂、赋形剂等混合。如果配制成离散的单位(例如，片剂等)，则每单位包含预定量(剂量)的化合物。

本文所用的术语“药用”涉及化合物、成分、材料、组合物、剂型等，其在合理的医学判断范围内适用于与所讨论的受试者(例如，人类)的组织接触而没有过度的毒性、刺激、过敏反应、或其他问题或并发症，并与合理的利益/风险比相称。每种载体、稀释剂、赋形剂等在与制剂的其他成分相容的意义上也必须是“可用的”。

适合的载体、稀释剂、赋形剂等可在标准药学文本中找到，例如Remington's Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack出版公司，Easton，宾夕法尼亚州，1990；和Handbook of Pharmaceutical Excipients，第5版，2005。

该制剂可通过药学领域熟知的任何方法来制备。这样的方法包括使化合物与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。一般而言，制剂通过使化合物与载体(例如，液体载体、精细固体载体等)均匀和紧密地结合的，然后如必要的话将产物成形来制备。

可制备制剂以提供快速或缓慢释放；即时、延时、定时、或持续释放；或其组合。

制剂可适宜地是液体、溶液(例如，水性、非水性)、混悬液(例如水性、非水性)、乳剂(例如，水包油、油包水)、酏剂、糖浆剂、药糖剂、漱口剂、滴剂、片剂(包括，例如，包衣片剂)、颗粒剂、粉剂、糖锭剂(losenge)、锭剂、胶囊剂(包括，例如，硬和软明胶胶囊剂)、扁囊剂(cachet)、丸剂、安瓿剂、大丸剂(boluse)、栓剂、***栓剂、酊剂、凝胶剂、糊剂、软膏、霜剂、洗剂、油剂、泡沫剂、喷雾剂、雾剂(mist)、或气雾剂的形式。

制剂可适宜地提供为浸有一种或多种化合物和可选的包括，例如，穿透、渗透和吸收增强剂的一种或多种其他药用成分的贴剂、橡胶膏剂、绷带、敷料等。制剂也可以药仓(depot)或贮存器(reservoir)的形式适宜地提供。

可将化合物溶解在、悬浮于一种或多种其他药用成分中，或与该一种或多种其他药用成分混合。该化合物可以脂质体或被设计为靶向该化合物，例如，到血液组分或一种或多种器官的其他微粒的形式呈现。

适于口服给予(例如，通过摄入)的制剂包括液体、溶液(例如，水性，非水性)，混悬液(例如水性、非水性)、乳剂(例如，水包油、油包水)、酏剂、糖浆剂、药糖剂、片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂、扁囊剂、丸剂、安瓿剂、大丸剂。

适于口腔给予的制剂包括漱口剂、糖锭剂、锭剂、以及贴剂、橡胶膏剂、药仓和贮存器。通常，糖锭剂在一般为蔗糖和***树胶或黄蓍胶的调味基质(flavored basis)中包含化合物。锭剂通常在惰性基质，诸如明胶和甘油，或蔗糖和***树胶中包含化合物。漱口剂通常在适合液体载体中包含化合物。

适于舌下给予的制剂包括片剂、糖锭剂、锭剂、胶囊剂和丸剂。

适于口服经粘膜给予的制剂包括液体、溶液(例如，水性、非水性)、混悬液(例如，水性、非水性)、乳剂(例如，水包油、油包水)、漱口剂、糖锭剂、锭剂，以及贴剂、橡胶膏剂、药仓和贮存器。

适于经皮给予的制剂包括凝胶剂、糊剂、软膏、霜剂、洗剂、和油剂，以及贴剂、橡胶膏剂、绷带、敷料、药仓和贮存器。

片剂可通过常规方法，例如压制或模制，可选地与一种或多种辅助成分一起来制备。压制的片剂可通过在适合的机器中压制可选地与一种或多种粘合剂(例如，聚维酮、明胶、***树胶、山梨醇、黄蓍胶、羟丙基甲基纤维素)；填充剂或稀释剂(例如，乳糖、微晶纤维素、磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石、二氧化硅)；崩解剂(例如，羟基乙酸淀粉钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠)；表面活性剂或分散剂或润湿剂(例如，十二烷基硫酸钠)；防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、山梨酸)；调味剂、增味剂(flavour enhancing agent)、和甜味剂混合的自由流动形式诸如粉末或颗粒的化合物来制备。模制片剂可通过在适合的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物的混合物来制备。该片剂可以可选地被包衣或刻划(scored)，并且可被配制以便提供化合物在其中的缓慢或控制释放，例如，使用不同比例的羟丙基甲基纤维素以提供期望的释放曲线。例如，片剂可以可选地提供有包衣以影响释放，例如提供在胃以外的肠道部分释放的肠溶包衣。

软膏通常由化合物和石蜡或水可混溶的软膏基质(water-miscible ointmentbase)制备。

霜剂通常由化合物和水包油霜剂基质制备。如果期望的话，霜剂基质的水相可包括，例如，至少约30％w/w的多元醇，即，具有两个或更多羟基的醇，诸如丙二醇、丁烷-1,3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇及其混合物。局部制剂可期望地包括能增强化合物穿过皮肤或其他受感染区域的吸收或渗透的化合物。这样的皮肤渗透增强剂的实例包括二甲基亚砜和相关的类似物。

乳剂通常由化合物和油相制备，该油相可以可选地仅包含乳化剂(另外称为利泄剂(emulgent))中，或其可包括至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油两者的混合物。优选地，亲水性乳化剂与作为稳定剂的亲脂性乳化剂包含在一起。也优选地包括脂肪和油两者。乳化剂与或不与稳定剂一起组成所谓的乳化蜡，并且该蜡与油和/或脂肪一起组成所谓的乳化软膏基质，该乳化软膏基质形成霜剂制剂的油分散相。

适合的利泄剂和乳剂稳定剂包括吐温60(Tween60)、司盘80(Span80)、鲸蜡硬脂醇(cetostearyl alcohol)、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸钠(sodium laurylsulfate)。用于制剂的适合的油或脂肪的选择基于达到期望的化妆品特性，因为化合物在可能用于药物乳剂制剂的大多数油中的溶解度可以非常低。因此，霜剂应该优选为非油脂的、非着色的且可洗涤的产品，其具有适合的稠度以避免从管或其他容器中渗漏。可使用直链或支链的一元或二元烷基酯，诸如二-异己二酸酯、硬脂酸异十六酯(isocetylstearate)、椰子脂肪酸的丙二醇二酯、肉豆蔻酸异丙酯(isopropyl myristate)、油酸癸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、棕榈酸2-乙基己酯、或被称为Crodamol CAP的支链酯的掺和物，后三种是优选的酯。这些可单独使用或根据所需的性质组合使用。或者，可使用高熔点脂类，诸如白软石蜡和/或液体石蜡或其他矿物油。

其中载体是液体的适于鼻内给予的制剂包括化合物的水性或油性溶液，包括，例如，鼻喷雾剂、滴鼻剂、或者通过雾化器(nebuliser)由气雾剂给予。

其中载体是固体的适于鼻内给予的制剂包括，例如，呈现为具有粒径，例如在约20至约500微米范围内的粗粉末的制剂，该制剂以经鼻吸入的方式给予，即，通过鼻腔从靠近鼻子的含有粉末的容器迅速吸入。

适于肺部给予(例如，通过吸入或吹入疗法)的制剂包括呈现为来自加压包装的气雾喷雾器、伴随着使用适合的推进剂，诸如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷(dichoro-tetrafluoroethane)、二氧化碳或其他适合的气体的制剂。

适于眼部给予的制剂包括滴眼剂，其中化合物溶解或悬浮于适合的载体中，尤其是化合物的水溶剂。

适于直肠给予的制剂可呈现为具有适合基质包括，例如，天然或硬化油、蜡、脂肪、半液体或液体多元醇，例如可可脂或水杨酸酯的栓剂；或为通过灌肠用于治疗的溶液或混悬液。

适于***给予的制剂可呈现为含有除该化合物之外的***栓剂、棉塞、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾制剂，如本领域已知的这些载体是适当的。

适于胃肠外给予(例如，通过注射)的制剂包括水性或非水性的、等渗、无热原的、无菌液体(例如溶液，混悬液)，其中化合物被溶解、悬浮或以其他方式提供(例如，在脂质体或其他微粒中)。此类液体可另外含有其他药用成分，诸如抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、抑菌剂、助悬剂、增稠剂、以及使制剂与预期受体的血液(或其他相关体液)等渗的溶质。赋形剂的实例包括，例如，水、醇、多元醇、甘油、植物油等。用于此类制剂的适合等渗载体的实例包括氯化钠注射液、林格氏液(Ringer's Solution)或乳酸林格氏注射液。通常，液体中的化合物的浓度为约1ng/mL至约10μg/mL，例如从约10ng/mL至约1μg/mL。该制剂可存在于单位剂量或多剂量密封容器，例如安瓿和小药瓶中，并且可在冷冻干燥(冻干)条件下储藏，仅需在临用前加入无菌液体载体例如注射用水。可从无菌粉末、颗粒和片剂当场制备注射溶液和混悬液。

剂量

本领域技术人员可以理解的是，PAPC化合物和含有该PAPC化合物的组合物的适当剂量可因患者而异。确定最佳剂量一般将牵涉平衡治疗有益作用的水平与任何风险或有害副作用。选择的剂量水平将取决于多种因素，包括但不限于，具体PAPC化合物的活性、给予途径、给予时间、该PAPC化合物的***速率、治疗的持续时间、组合使用的其他药物、化合物和/或材料、病症的严重程度，以及患者的物种、性别、年龄、体重、病情、总体康状况和既往病史。PAPC化合物的量和给予途径最终将由医师、兽医或临床医师慎重决定，但是一般而言，将选择剂量以在作用部位达到实现所期望的作用而不会造成实质性损害或有害副作用的局部浓度。

在整个治疗过程中，给予可以一个剂量、连续或间歇地(例如，以适当时间间隔给予的分剂量)来实现。确定最有效的给予手段和剂量的方法是本领域技术人员众所周知的，并且将随用于疗法的制剂、疗法目的、所治疗的(多种)靶细胞和所治疗的受试者的不同而改变。可以用治疗医师、兽医或临床医师选择的剂量水平和模式进行单次或多次给予。

一般而言，PAPC化合物的适合剂量是在每千克受试者体重每天约10μg至约250mg(更通常地约100μg至约25mg)的范围内。在该化合物是盐、酯、酰胺、前药等的情况下，给予量基于母体化合物进行计算，所以所用的实际重量成比例增加。

实施例

化学合成

提供以下实施例仅用于对本发明进行举例说明，而并不意图限制如本文所述的本发明的范围。

通用合成程序

在N₂下进行反应。使用Biotage Initiator60或CEM微波反应器进行微波反应。使用Merck硅胶60(0.025-0.04mm)进行闪式硅胶层析法。使用Isolute Flash SCX-II(酸性)或Flash NH₂(碱性)树脂盒进行离子交换色谱法。在Biotage SP1自动快速色谱纯化***上进行梯度色谱法。¹H NMR光谱在500MHz下的Bruker AMX500仪器或400MHz下的BrukerAvance仪器上使用内部氘锁(deuterium lock)记录。化学位移(δ)相对于TMS(δ＝0)和/或参照溶剂报告，在该溶剂中它们被测量。偶合常数(J)以Hz进行报告。使用以下任一方法记录组合HPLC-MS分析：

1.(LCT)使用Supelco DISCOVERY C18，50mm×4.6mm或30mm×4.6mm i.d.柱，或具有Phenomenex Gemini3μm C18(3cm×4.6mm i.d.)的Agilent6210TOF HPLC-MS进行伴随着HPLC的具有电喷雾离子化(如指示的+ve或-ve离子模式)的Waters Alliance2795分离模块和Waters/Micromass LCT质量检测器。两者均在22℃的温度下伴随着10-90％MeOH/0.1％甲酸水溶液的梯度洗脱以1mL/min的流速和如指示的3.5或4分钟的运行时间而运行。UV检测在254nm下进行，而电离通过正或负的离子电喷雾进行。分子量扫描范围为50-1000amu。

2.(ZQ)具有Phenomenex Gemini5μm,C18,30mm×4.6mm i.d.柱或Waters X-Bridge C18,2.5μm,3.0×30mm的Micromass ZQ质谱仪/Waters Alliance2795HT HPLC。两者均在35℃的温度下伴随着5-95％(在乙腈中的0.1％氨)/(在水中的0.1％氨、5％乙腈和0.063％甲酸铵)的梯度洗脱以2mL/min的流速和如指示的4或6分钟的运行时间而运行。UV检测

在220-400nm下使用Waters996光电二极管阵列UV检测器进行，而电

离通过正或负的离子电喷雾进行。分子量扫描范围为80-1000amu。

通用步骤i：

5-碘代-2-氯吡啶中间体偶联至1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁环硼戊 烷-2-基)-1H-吡唑

方案1

将适当的5-碘代-2-氯吡啶中间体I-8、或I-9(1当量)溶于乙腈(每1mmol的化合物7mL溶剂)中。加入1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁环硼戊烷-2-基)-1H-吡唑(1当量)、四-(三苯基膦)钯(0)(5mol％)和碳酸钠(1.5当量)，并将该混合物在100℃下的微波反应器中加热30分钟(中间体I-8)或15分钟(中间体I-9)。在真空中将反应混合物浓缩到硅胶上。梯度色谱法(1-5％MeOH:CH₂Cl超过15个柱体积和5-10％超过8个柱体积)得到所需的5-取代产物。

通过程序ii：

5-碘代-2-氯吡啶中间体偶联至乙炔基三甲基硅烷或三甲基((2-甲基丁-3-炔-2- 基)氧基)硅烷

方案2

将适当的5-碘代-2-氯吡啶中间体I-8、或I-9(1当量，0.365mmol)溶于DMF(每1mmol的化合物0.9mL)中。酌情加入三甲基(2-甲基丁-3-炔-2-基氧基)硅烷或乙炔基三甲基硅烷(1.3当量)。加入二氯双(三苯基膦)钯(II)(6mol％)、碘化铜(I)(6mol％)和三乙胺(18当量)。将混合物在120℃下的微波反应器中加热10分钟。将混合物冷却，并蒸发至干燥。硅胶上的闪式柱层析法，用乙酸乙酯-己烷混合物洗脱，得到所需的5-取代产物。

通用步骤iii：

2-氨基吡嗪中间体I-3、I-4或I-5偶联至2-氯吡啶中间体

方案3

将选自中间体I-10、I-12、I-13、I-14、I-15、I-16、I-17、I-18、I-19、I-20、或I-22的适当2-氯吡啶(1当量)溶于甲苯或二噁烷(每1mmol的化合物10mL的溶剂)中。加入选自中间体I-3、I-4、或I-5的适当2-氨基吡嗪(1当量)。加入4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(20mol％)、碳酸铯(2当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(10mol％)。将混合物在130℃下的微波中加热60分钟。该反应混合物用MeOH(10mL)稀释并加载到2g SCX-2酸性离子交换柱上。该柱用MeOH(4×20mL)冲洗，接着用MeOH中氨的溶液(2M；4×20mL)冲洗。在真空中浓缩该碱性洗脱液到硅胶上。梯度色谱法(1-10％MeOH:1％NH₃的CH₂Cl₂溶液超过15个柱体积)得到所需的偶联产物。如果需要进一步纯化以除去过量的吡嗪起始材料，则对该材料进行累进制备性(graduated preparative)TLC(2-10％MeOH:1％NH₃的CH₂Cl₂溶液)。

通用步骤iv：

伴随N-Boc脱保护的偶联2-氨基吡嗪中间体I-6或I-7至2-氯吡啶中间体

方案4

将选自中间体I-12、I-15、I-16、或I-21的适当2-氯吡啶(1当量)溶于甲苯或二噁烷(每1mmol的化合物10mL的溶剂)中。加入选自中间体I-6或I-7的适当2-氨基吡嗪(1当量)。加入4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(20mol％)、碳酸铯(2当量)和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(10mol％)。将混合物在130℃下的微波中加热60分钟。该反应混合物用MeOH(10mL)稀释并加载到2g SCX-2酸性离子交换柱上。该柱用MeOH(4×20mL)冲洗，接着用氨的MeOH溶液(2M；4×20mL)冲洗。在真空中浓缩该碱性洗脱液到硅胶上，并进行梯度色谱法(1-10％MeOH:CH₂Cl₂中的1％NH₃超过15个柱体积)，以得到N-Boc保护的偶联产物。将该N-Boc保护的偶联产物(1当量)溶于CH₂Cl₂(每1mmol的化合物140mL的溶剂)中。一次性加入三氟乙酸(470当量)并在室温下搅拌该溶液30分钟。在真空中浓缩该溶液到硅胶上。梯度色谱法(5％MeOH:1％CH₂Cl₂中的1％NH₃超过5个柱体积，然后5-20％超过15个柱体积)得到所需的N-脱保护产物。如果需要的话，将该产物通过累进制备性薄层层析法(2-10％MeOH:CH₂Cl₂中的1％NH₃)进一步纯化。

中间体I-1

(R)-1-(二甲基氨基)丙-2-醇

将二甲胺40％的水溶液(11.39mL，90mmol)缓慢加入到已在冰浴中冷却的(R)-环氧丙烷(5.25mL，74.9mmol)中。在用CH₂Cl₂(4×5mL)提取之前先在室温下搅拌此溶液2小时。合并的有机层经Na₂SO₄干燥并通过减压(50mbar))蒸馏将纯的(R)-1-(二甲基氨基)丙-2-醇(5.12g，49.6mmol，40％得率)分离为透明油状物。

¹H NMR(CDCl₃,500MHz)δ3.82-3.76(m,1H),3.40(brs,1H),2.27(s,6H),2.25-2.21(m,1H),2.16-2.12(m,1H),1.12(d,J＝6.0,3H)。

中间体I-2

5-氨基-3-氯吡嗪-2-甲腈

2,6-二氯吡嗪(2.89g，19.4mmol)在NH₃水溶液(28％，10mL)中搅拌并在密封管中加热至100℃，持续18小时。将反应混合物冷却，并将所得的沉淀物过滤。用水研磨，然后用***研磨，得到6-氯吡嗪-2-胺，为白色固体(2.28g，17.6mmol，91％得率)。

¹H NMR(d₆-DMSO,400MHz)δ6.9(brs,2H),7.70(d,J＝0.4,1H),7.80(d,J＝0.4,1H)；LC-MS(ZQ，6分钟)Rt＝1.05分钟；m/z(ESI+)130(M+H)。

6-氯吡嗪-2-胺(2.50g，19.3mmol)在0℃下于CH₂Cl₂(60mL)中搅拌。缓慢加入N-溴代琥珀酰亚胺(2.92g，16.4mmol)并在0℃下搅拌该反应混合物60分钟。将反应混合物通过硅藻土(celite)过滤并浓缩，得到棕色油状物。通过快速色谱纯化，用0-25％EtOAc-己烷洗脱，得到5-溴代-6-氯吡嗪-2-胺，为黄色固体(1.69g，8.16mmol，42％得率)。

¹H NMR(d₆-DMSO,400MHz)δ7.1(brs,2H),7.65(s,1H)；LC-MS(ZQ，4分钟)Rt＝1.46分钟；m/z(ESI-)205(M-H)。

将5-溴代-6-氯吡嗪-2-胺(1.00g，4.8mmol)、碘化铜(I)(914mg，4.8mmol)、18-冠醚-6(95mg，0.36mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(83mg，0.072mmol)的混合物悬浮在无水DMF(20mL)中并通入氮气流5分钟。加入***(312mg，4.8mmol)并在室温下搅拌该混合物30分钟，然后在200℃下回流3小时。将混合物冷却，用EtOAc稀释，并吸附到硅胶(10g)上。蒸发除去DMF。将产物通过快速色谱法纯化，用1:1EtOAc-己烷洗脱，得到5-氨基-3-氯吡嗪-2-甲腈，为黄色固体(607mg，3.93mmol，82％得率)。

¹H NMR(d₆DMSO,400MHz)δ7.87(s,1H),8.1(brs,2H)；LC-MS(ZQ，4分钟)Rt＝1.20分钟；m/z(ESI-)153(M-H)。

中间体I-3

(R)-5-氨基-3-((1-(二甲基氨基)丙-2-基)氧基)吡嗪-2-甲腈

将(R)-1-(二甲基氨基)丙-2-醇(0.667g,6.47mmod)逐滴加入到NaH(在油中60％；0.388g，9.71mmol)的二噁烷(16.2mL)悬浮液中，并搅拌30分钟。一次性加入5-氨基-3-氯吡嗪-2-甲腈(中间体I-2)(1.00g，6.47mmol)并将该混合物加热至90℃，持续14小时。冷却后，加入水(200mL)并用Et₂O(4×100mL)萃取该溶液，经MgSO₄干燥，并在真空下除去挥发物。梯度柱色谱法用MeOH:1％NH₃的CH₂Cl₂,溶液洗脱，得到(R)-5-氨基-3-((1-(二甲基氨基)丙-2-基)氧基)吡嗪-2-甲腈(0.558g，2.52mmol，39％得率)，为黄色固体。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.54(s,1H),5.42-5.35(m,1H),5.31(brs,2H),2.76(dd,J＝7.5,13.5,1H),2.52(dd,J＝4.0,13.5,1H),2.37(s,6H),1.35(d,J＝6.5,3H)；LC-MS(LCT，3.5分钟)Rt＝0.80分钟；m/z(ESI)222(M+H)。

中间体I-4

(R)-5-氨基-3-((1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)吡嗪-2-甲腈

按照中间体I-3的描述制备，用(R)-1-甲基吡咯烷-3-醇代替(R)-1-(二甲基氨基)内-2-醇。

¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ7.60(brs,2H),7.51(s,1H),5.36-5.28(m,1H),2.76(dd,J＝10.8,6.1,1H),2.69(ddd,J＝8.2,8.2,5.3,1H),2.62(dd,J＝10.8,2.8,1H),2.37-2.21(m,2H),2.26(s,3H),1.85-1.77(m,1H)；LC-MS(LCT，3.5分钟)Rt＝0.62分钟；m/z(ESI)220(M+H)。

中间体I-5

(S)-5-氨基-3-((1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)吡嗪-2-甲腈

按照中间体I-3的描述制备，用(S)-1-甲基吡咯烷-3-醇代替(R)-1-(二甲基氨基)丙-2-醇。

¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ7.60(brs,2H),7.51(s,1H),5.36-5.28(m,1H),2.76(dd,J＝10.8,6.1,1H),2.69(ddd,J＝8.2,8.2,5.3,1H),2.62(dd,J＝10.8,2.8,1H),2.37-2.21(m,2H),2.26(s,3H),1.85-1.77(m,1H)；LC-MS(LCT，3.5分钟)Rt＝0.62分钟；m/z(ESI)220(M+H)。

中间体I-6

(R)-3-((6-氨基-3-氰基吡嗪-2-基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯((R)-tert-Butyl3-((6-amino-3-cyanopyrazin-2-yl)oxy)pyrrolidine-1-carboxylate)

按照中间体I-3的描述制备，用(R)-3-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯((R)-tert-butyl3-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)代替(R)-1-(二甲基氨基)丙-2-醇。

分离为旋转异构体的混合物。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.61-7.58(m,1H),5.49-5.44(m,1H),5.35-5.30(m,2H),3.69-3.65(m,1H),3.63-3.50(m,3H),2.28-2.11(m,2H),1.46(s,9H)；LC-MS(LCT，3.5分钟)Rt＝2.67分钟；m/z(ESI)328(M+Na)。

中间体I-7

(S)-3-((6-氨基-3-氰基吡嗪-2-基)氧基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯((S)-tert-Butyl3-((6-amino-3-cyanopyrazin-2-yl)oxy)pyrrolidine-1-carboxylate)

按照中间体I-3的描述制备，用(S)-3-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯((S)-tert-butyl3-hydroxypyrrolidine-1-carboxylate)代替(R)-1-(二甲基氨基)丙-2-醇。

分离为旋转异构体的混合物。¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.61-7.58(m,1H),5.49-5.44(m,1H),5.35-5.30(m,2H),3.69-3.65(m,1H),3.63-3.50(m,3H),2.28-2.11(m,2H),1.46(s,9H)；LC-MS(LCT，3.5分钟)Rt＝2.67分钟；m/z(ESI)328(M+Na)。

中间体I-8

2-氯代-5-碘代-N-甲基吡啶-4-胺

将2-氯代-5碘代吡啶-4-胺(2.0g，7.86mmod)和多聚甲酫(0.472g，15.7mmol)溶于AcOH(56.1mL)中并在40℃下拌2.5小时。加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.66g，17.3mmol)并在40℃下搅拌该混合物1.5小时。加入另外的三乙酰氧基硼氢化钠(3.66g，17.3mmol)并进一步搅拌该混合物19小时。在真空中通过蒸发使该反应混合物体积减少一半。将水加入到该混合物中，随后用NaHCO₃碱化。该混合物用EtOAc(3×70mL)萃取且该合并有机层经MgSO₄干燥。加入二氧化硅并浓缩该溶液。梯度色谱法，用c-Hex中的5-10％EtOAc洗脱4个柱体积，然后用c-Hex中的10％EtOAc洗脱另外11个柱体积，得到2-氯代-5-碘代-N-甲基吡啶-4-胺(1.65g，6.14mmol，78％得率)，为白色结晶粉末。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.27(s,1H),6.41(s,1H),4.85(brs,1H),2.93(d,J＝5.0,3H)；LC-MS(LCT，3.5分钟)Rt＝1.90分钟；m/z(ESI)268(M+H)。

中间体I-9

2-氯代-5-碘代-4-甲氧基吡啶

在室温下向2-氯代-4-甲氧基吡啶(0.5g，3.48mmol)的硫酸(2.5mL)溶液中分批加入N-碘代琥珀酰亚胺(0.825g，3.48mmol)。在55℃下搅拌该混合物2小时。将反应混合物倾入冰水(10mL)中并缓慢加入8MNaOH(20mL)中的溶液，之后暗棕色溶液转变为浅黄色。含水层用CH₂Cl₂(2×20mL)萃取。将有机层用盐水(10mL)洗涤并在真空中浓缩到硅胶上。干燥快速色谱法，用25％EtOAc:c-Hex洗脱，得到2-氯代-5-碘代-4-甲氧基吡啶，为白色结晶固体(0.169g，0.760mmol，22％得率)。

¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ8.52(s,1H),7.19(s,1H),3.96(s,3H)；LC-MS(LCT，4分钟)Rt＝2.56分钟；m/z(ESI)270(M+H)。

中间体I-10

6-氯-4-(甲基氨基)烟酸甲酯(Methyl6-chloro-4-(methylamino)nicotinate)

在0℃下于5分钟内缓慢加入40％甲胺的水溶液(0.847mL，9.78mmol)至4，6-二氯烟酸甲酯(0.40g，1.94mmol)的MeCN(6mL)溶液中。在0℃下搅拌该溶液30分钟，然后在室温下搅拌2小时。在真空中将反应混合物浓缩到硅胶上。梯度色谱法，用5％EtOAc:c-Hex洗脱超过5个柱体积以及5-50％超过15个柱体积，得到6-氯-4-(甲基氨基)烟酸甲酯(278mg，1.386mmol，71.4％得率)，为白色固体。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.65(s,1H),8.10(brs,1H),6.54(s,1H),3.88(s,3H),2.92(d,J＝5.1,3H)；LC-MS(LCT，3.5分钟)Rt＝2.35分钟；m/z(ESI)201(M+H)。

中间体I-11

6-氯-4-甲氧基烟酸甲酯

在室温下将甲醇钠粉末(0.136g，2.52mmol))缓慢加入到4,6-二氯烟酸甲酯(0.40g，1.94mmol)的THF(4mL)搅拌溶液中。在室温下搅拌该反应混合物18小时，然后在真空中浓缩到硅胶上。梯度色谱法，用5％EtOAc:c-Hex洗脱超过5个柱体积以及5-50％超过15个柱体积，得到6-氯-4-甲氧基烟酸甲酯(218mg，1.08mmol，56％得率)，为白色结晶固体。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.71(s,1H),6.92(s,1H),3.97(s,3H),3.90(s,3H)；LC-MS(LCT，3.5分钟)Rt＝2.13分钟；m/z(ESI)202(M+H)。

中间体I-12

6-氯-4-(二甲基氨基)烟酸甲酯

在室温下将二甲基胺(1.23mL，9.71mmol)缓慢加入到4，6-二氯烟酸甲酯(0.40g，1.94mmol)的MeCN(6mL)搅拌溶液中。在室温下搅拌该溶液18小时，然后在真空中浓缩到硅胶上。梯度色谱法，用5％EtOAc:c-Hex洗脱超过5个柱体积以及5-50％超过15个柱体积，得到6-氯-4-(二甲基氨基)烟酸甲酯(335mg，1.56mmol，80％得率)，为白色固体。

¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ8.21(s,1H),6.85(s,1H),3.83(s,3H),2.90(s,6H)；LC-MS(LCT，3.5分钟)Rt＝2.23分钟；m/z(ESI)215(M+H)。

中间体I-13

2-氯-N-甲基-5-(三氟甲基)吡啶-4-胺

将2M甲胺的MeOH(11.6mL，23.2mmol)溶液加入到2-氯-4-碘-5-(三氟甲基)吡啶(357mg，1.16mmol)，并将该混合物在130℃下的微波反应器中加热1小时。在真空中浓缩该混合物。制备性薄层层析法，用20％EtOAc:己烷洗脱，得到2-氯-N-甲基-5-(三氟甲基)吡啶-4-胺(77mg，0.363mmol，31％得率)。

¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ8.17(s,1H),6.90(brs,1H),6.74(s,1H),2.81(d,J＝5,3H)；LC-MS(LCT，3.5分钟)Rt＝1.98分钟；m/z(ESI)211(M+H)。

中间体I-14

2,5-二氯-N-甲基吡啶-4-胺

将N-氯代琥珀酰亚胺(0.623g，4.67mmol)加入到2-氯-N-甲基-吡啶-4-胺(0.50g，3.89mmol)和乙酸钾(0.763g，7.78mmol)的AcOH(25mL)溶液中并在80℃下搅拌该混合物1.25小时。将混合物冷却并在真空中浓缩。浓缩混合物用水稀释，用NaOH水溶液中和，并用EtOAc(×3)萃取。将有机萃取物蒸发到硅胶上。梯度色谱法，用10-50％EtOAc:c-Hex洗脱，得到2,5-二氯-N-甲基吡啶-4-胺(0.114g，0.699mmol，18％得率)。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.02(s,1H),6.52(s,1H),4.95(brs,1H),2.96(d,J＝5,3H)；LC-MS(LCT，4分钟)Rt＝2.17分钟；m/z(ESI)177(M+H)。

中间体I-15

2-氯-N-甲基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-胺

由中间体I-8和1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁环硼戊戊烷-2-基)-1H-吡唑依据通用步骤i制备。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.83(s,1H),7.56(s,1H),7.45(s,1H),6.48(s,1H),4.68(brs,1H),3.96(s,3H),2.84(d,J＝5.1,3H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝1.09分钟；m/z(ESI)223(M+H)。

中间体I-16

2-氯-4-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶

由中间体I-9和1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二噁环硼戊烷-2-基)-1H-吡唑依据通用步骤i制备。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.83(s,1H),7.56(s,1H),7.45(s,1H),6.48(s,1H),4.68(brs,1H),3.96(s,3H),2.84(d,J＝5.1,3H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝1.09分钟；m/z(ESI)224(M+H)。

中间体I-17

2-氯-N,N-二甲基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-胺

在室温下将DMF(2.99mL)缓慢加入到搅拌的氢化纳(60％于油中；51mg，1.28mmol)和2-氯-N-甲基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-胺(中间体I-15)(104mg，0.467mmol)中。将该混合物加热至80℃保持10分钟，随后加入碘甲烷(0.035mL，0.560mmol)。将混合物在80℃下搅拌30分钟，然后冷却并用饱和NaHCO₃水溶液(45mL)和乙酸乙酯(70mL)稀释。搅拌10分钟后，分离有机层并用乙酸乙酯(2×70mL)萃取水层。将合并的有机层蒸发到硅胶上。梯度色谱法，用1-10％MeOH:1％NH₃的CH₂Cl₂溶液洗脱超过10个柱体积，得到2-氯-N,N-二甲基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-胺(102mg，0.431mmol，92％得率)。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.03(s,1H),7.67(s,1H),7.57(s,1H),6.77(s,1H),3.96(s,3H),2.72(s,6H)。

中间体I-18

2-氯-N-乙基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-胺

在40℃下搅拌2-氯-5-碘吡啶-4-胺(262mg，1.03mmol)、过量的多聚甲醛(618mg，21mmol)和AcOH(10.3mL)的混合物15分钟，接着加入过量的三乙酰氧基硼氢化钠(4.8g,23mmol)。搅拌2.5小时后，加入另外的多聚甲醛(236mg，7.86mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(1.83g，8.63mmol)。18小时后，将该混合物用水稀释并用NaHCO₃碱化。用EtOAc(3×30mL)萃取该混合物。将合并的有机萃取物干燥并蒸发到硅胶上。梯度色谱法，用5-10％EtOH:CH₂Cl₂洗脱超过17个柱体积，得到2-氯-N-乙基-5-碘吡啶-4-胺(291mg，1.03mmol，100％得率)。LC-MS(LCT，3.5分钟)Rt＝2.56分钟；m/z(ESI)282(M+H)。该材料与1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁环硼戊烷-2-基)-1H-吡唑依据一般方法i反应得到2-氯-N-乙基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-4-胺。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.84(s,1H),7.59(s,1H),7.47(s,1H),6.50(s,1H),4.60(brs,1H),3.99(s,3H),3.19(2H,q,J＝7.2),1.25(t,J＝7.2,3H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝1.35分钟；m/z(ESI)237(M+H)。

中间体I-19

2-氯-N-甲基-5-((三甲基硅基)乙炔基)吡啶-4-胺(2-Chloro-N-methyl-5-((trimethylsilyl)ethynyl)pyridin-4-amine)

由中间体I-8和乙炔基三甲基硅烷(ethynyltrimethylsilane)依据通用步骤ii制备。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.11(s,1H),6.47(s,1H),5.15(brs,1H),2.97(d,J＝5,3H),0.3(9H,s)；LC-MS(LCT,4分钟)Rt＝3.13分钟；m/z(ESI)239(M+H)。

中间体I-20

2-氯-N-甲基-5-(3-甲基-3-((三甲基甲硅烷基)氧基)丁-1-炔-1-基)吡啶-4-胺

由中间体I-8和三甲基(2-甲基丁-3-炔-2-基氧基)硅烷依据通用步骤ii制备。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.04(s,1H),6.46(s,1H),5.00(brs,1H),2.94(d,J＝5,3H),1.62(6H,s),0.22(s,9H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝2.81分钟；m/z(ESI)297(M+H)。

中间体I-21

2-氯-4-甲氧基-5-(3-甲基-3-((三甲基甲硅烷基)氧基)丁-1-炔-1-基)吡啶

由中间体I-9和三甲基(2-甲基丁-3-炔-2-基氧基)硅烷依据通用步骤ii制备。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.25(s,1H),6.82(s,1H),3.92(s,3H),1.60(6H,s),0.23(s,9H)；LC-MS(LCT,4分钟)Rt＝3.23分钟；m/z(ESI)298(M+H)。

中间体I-22

2-氯-5-环丙基-N-甲基吡啶-4-胺

将2-氯-5-碘-N-甲基吡啶-4-胺(中间体I-8)(30mg，0.112mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(6.5mg，5.59μmol)和0.5M碳酸钠含水溶液(290μL，0.145mmol)加入到2-环丙基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁环硼戊烷(61μL，0.335mmol)的MeCN溶液中。将该混合物在130℃下于微波反应器中加热1小时。在真空中浓缩该混合物。制备性薄层层析法，用1％NH₃，6％MeOH的CH₂Cl₂溶液洗脱，得到2-氯-5-环丙基-N-甲基吡啶-4-胺(10mg，0.055mmol，49％得率)，为白色粉末。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ7.72(s,1H),6.34(s,1H),4.82(brs,1H),2.85(s,3H),1.37-1.34(m,1H),0.85-0.82(m,2H),0.49-0.46(m,2H)；LC-MS(LCT,4分钟)Rt＝1.23分钟；m/z(ESI)183(M+H)。

化合物PAPC-A-01

(R)-3-((1-(二甲基氨基)丙-2-基)氧基)-5-((4-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)氨基)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-16和中间体I-3依据通用步骤iii制备。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃/CD₃OD)δ9.14(s,1H),8.35(s,1H),7.83(s,1H),7.76(s,1H),7.06(s,1H),5.87-5.75(m,1H),4.00(s,3H),3.94(s,3H),3.35(dd,J＝13.7,6.7,1H),3.21(d,J＝13.7,1H),2.87(s,6H),1.53(d,J＝6.4,3H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝2.11分钟；m/z(ESI)409(M+H)。

化合物PAPC-A-02

(R)-3-((1-(二甲基氨基)丙-2-基)氧基)-5-((5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)氨基)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-15和中间体I-3依据通用步骤iii制备。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.23(brs,1H),8.23(s,1H),7.85(s,1H),7.58(s,1H),7.47(s,1H),7.03(s,1H),5.48-5.37(m,1H),4.72(q,J＝5,1H),3.98(s,3H),2.90(d,J＝5,3H),2.74(dd,J＝13.4,7.2,1H),2.51(dd,J＝13.4,4.4,1H),2.31(s,6H),1.41(d,J＝6.3,3H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝1.09分钟；m/z(ESI)408(M+H)。

化合物PAPC-A-03

(R)-5-((4-(二甲基氨基)-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)氨基)-3-((1-(二甲基氨基)丙-2-基)氧基)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-17和中间体I-3依据通用步骤iii制备。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.61(brs,1H),8.23(s,1H),8.04(s,1H),7.69(s,1H),7.57(s,1H),7.29(s,1H),5.50-5.39(m,1H),3.97(s,3H),2.76(s,6H),2.73(dd,J＝13.4,7.3,1H),2.50(dd,J＝13.4,4.4,1H),2.30(s,6H),1.40(d,J＝6.3,3H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝1.59分钟；m/z(ESI)418(M+H)。

化合物PAPC-A-04

(R)-3-((1-(二甲基氨基)丙-2-基)氧基)-5-((4-(乙基氨基)-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)氨基)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-18和中间体I-3依据通用步骤iii制备。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.29(s,1H),7.86(s,1H),7.61(s,1H),7.50(s,1H),7.07(s,1H),5.50-5.47(m,1H),4.63-4.61(m,1H),4.02(s,3H),3.27-3.23(m,2H),2.84-2.80(m,1H),2.62-2.59(m,1H),2.39(s,6H),1.43(d,J＝6.3,3H),1.30(t,J＝7.3,3H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝1.22分钟；m/z(ESI)422(M+H)。

化合物PAPC-A-05

(R)-3-((1-(二甲基氨基)丙-2-基)氧基)-5-((4-(甲基氨基)-5-三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-13和中间体I-3依据通用步骤iii制备。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ8.60(s,1H),8.16(s,1H),6.98(s,1H),5.59-5.53(m,1H),2.94(s,3H),2.82(dd,J＝13.7,8,1H),2.51(dd,J＝13.7,5,1H),2.33(s,6H),1.42(d,J＝6,3H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝1.75分钟；m/z(ESI)396(M+H)。

化合物PAPC-A-06

(R)-5-((5-氯-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)氨基)-3-((1-(二甲基氨基)丙-2-基)氧)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-14和中间体I-3依据通用步骤iii制备。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.22(s,1H),8.02(brs,1H),7.98(s,1H),7.01(s,1H),5.48-5.36(m,1H),4.97(brq,J＝4.2,1H),2.98(d,J＝5.1,3H),2.74(dd,J＝13.3,7.3,1H),2.51(dd,J＝13.3,4.3,1H),2.31(s,6H),1.41(d,J＝6.3,3H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝1.77分钟；m/z(ESI)362(M+H)。

化合物PAPC-A-07

(R)-3-((1-(二甲基氨基)丙-2-基)氧基)-5-((5-乙炔基-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)氨基)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-19和中间体I-3依据通用步骤iii制备。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.28(s,1H),8.13(s,1H),7.80(brs,1H),6.94(s,1H),5.45-5.40(m,1H),5.21-5.19(m,1H),3.49(s,1H),3.00(s,3H),2.76-2.73(m,1H),2.54-2.52(m,1H),2.34(s,6H),1.43(d,J＝6,3H)；LC-MS(LCT,4分钟)Rt＝1.53分钟；m/z(ESI)352(M+H)。

化合物PAPC-A-08

(R)-3-((1-(二甲基氨基)丙-2-基)氧基)-5-((5-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)氨基)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-20和中间体I-3依据通用步骤iii制备。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ8.46(s,1H),7.95(s,1H),6.92(s,1H),5.59-5.55(m,1H),2.97(s,3H),2.85(dd,J＝13,10,1H),2.60(dd,J＝13,5,1H),2.35(s,6H),1.61(s,6H),1.43(d,J＝6,3H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝1.43分钟；m/z(ESI)410(M+H)。

化合物PAPC-A-09

(R)-5-((5-环丙基-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)氨基)-3-((1-(二甲基氨基)-丙-2-基)氧基)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-22和中间体I-3依据通用步骤iii制备。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.11(s,1H),7.71(s,1H),6.91(s,1H),5.39-5.37(m,1H),4.92(brs,1H),2.93-2.29(m,3H),2.73-2.68(m,1H),2.49(dd,J＝13.3,3.9,1H),2.27(s,6H),1.40-1.38(m,1H),1.35(d,J＝6,3H),0.86-0.84(m,2H),0.50-0.48(m,2H)；LC-MS(LCT,4分钟)Rt＝1.40分钟；m/z(ESI)368(M+H)。

化合物PAPC-A-10

(R)-6-((5-氰基-6-((1-(二甲基氨基)丙-2-基)氧基)吡嗪-2-基)氨基)-4-(甲基氨基)烟酸甲酯((R)-Methyl

6-((5-cyano-6-((1-(dimethylamino)propan-2-yl)oxy)pyrazin-2-yl)amino)-4-(m ethylamino)nicotinate)

由中间体I-10和中间体I-3依据通用步骤iii制备。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.68(s,1H),8.26(s,1H),8.15(d,J＝5,1H),7.03(s,1H),5.50-5.39(m,1H),3.88(s,3H),2.97(d,J＝5,3H),2.78(dd,J＝13.4,7.3,1H),2.55(dd,J＝13.4,4.2,1H),2.34(s,6H),1.42(d,J＝6.3,3H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝1.84分钟；m/z(ESI)386(M+H)。

化合物PAPC-B-01

(R)-5-((4-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)氨基)-3-(吡咯烷-3-基氧基)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-16和中间体I-6依据通用步骤iv制备。

¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ8.51(s,1H),8.45(s,1H),8.13(s,1H),7.93(d,J＝0.6,1H),7.60(s,1H),5.61-5.56(m,1H),3.98(s,3H),3.88(s,3H),3.23(dd,J＝12.7,5.5,1H),3.06-2.97(m,2H),2.94-2.87(m,1H),2.16-2.09(m,1H),1.99-1.92(m,1H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝2.02分钟；m/z(ESI)393(M+H)。

化合物PAPC-B-02

(R)-5-((4-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)氨基)-3-((1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-16和中间体I-4依据通用步骤iii制备。

¹H-NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.39(brs,1H),8.37(s,1H),8.32(s,1H),7.85(s,1H),7.78(s,1H),7.36(s,1H),5.51-5.47(m,1H),4.01(s,3H),3.96(s,3H),3.15(dd,J＝10.7,6.3,1H),2.73-2.62(m,3H),2.39(s,3H),2.38-2.30(m,1H),2.12-2.05(m,1H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝2.01分钟；m/z(ESI)407(M+H)。

化合物PAPC-B-03

(R)-5-((5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)氨基)-3-(吡咯烷-3-基氧基)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-15和中间体I-6依据通用步骤iv制备。

¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ10.46(brs,1H),8.50(s,1H),7.89(s,1H),7.84(s,1H),7.60(s,1H),7.04(s,1H),5.84(q,J＝4.7,1H),5.61-5.55(m,1H),3.88(s,3H),3.25(dd,J＝12.7,5.5,1H),3.07-3.00(m,2H),2.93(ddd,J＝10.9,8.1,4.7,1H),2.78(d,J＝4.8,3H),2.17-2.10(m,1H),2.01-1.93(m,1H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝1.24分钟；m/z(ESI)392(M+H)。

化合物PAPC-B-04

(S)-5-((5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)氨基)-3-(吡咯烷-3-基氧基)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-15和中间体I-7依据通用步骤iv制备。

¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ10.46(brs,1H),8.50(s,1H),7.89(s,1H),7.84(s,1H),7.60(s,1H),7.04(s,1H),5.84(q,J＝4.7,1H),5.61-5.55(m,1H),3.88(s,3H),3.25(dd,J＝12.7,5.5,1H),3.07-3.00(m,2H),2.93(ddd,J＝10.9,8.1,4.7,1H),2.78(d,J＝4.8,3H),2.17-2.10(m,1H),2.01-1.93(m,1H),LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝1.24分钟；m/z(ESI)392(M+H)。

化合物PAPC-B-05

(R)-5-((5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)氨基)-3-((1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-15和中间体I-4依据通用步骤iii制备。

¹H NMR(500MHz,CD₃OD)δ8.49(s,1H),7.82(s,1H),7.78(s,1H),7.61(s,1H),6.85(s,1H),5.62-5.60(m,1H),3.97(s,3H),3.05-3.02(m,1H),2.88(3H,s),2.87-2.85(m,2H),2.59-2.55(m,1H),2.48-2.43(m,1H),2.42(s,3H),2.10-2.08(m,1H)；LC-MS(LCT,4分钟)Rt＝1.20分钟；m/z(ESI)406(M+H)。

化合物PAPC-B-06

(S)-5-((5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)氨基)-3-((1-甲基吡咯烷-3-基)氧基)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-15和中间体I-5依据通用步骤iii制备。

¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ8.33(s,1H),7.86(s,1H),7.59(s,1H),7.50(s,1H),6.98(s,1H),5.56-5.54(m,1H),4.78-4.77(m,1H),4.00(s,3H),3.29(dd,J＝11,6.2,1H),2.92(s,3H),2.80-2.78(m,1H),2.74(dd,J＝11,3.5,1H),2.47(s,3H),2.41-2.37(m,1H),2.16-2.14(m,1H)；LC-MS(LCT,4分钟)Rt＝1.20分钟；m/z(ESI)406(M+H)。

化合物PAPC-B-07

(R)-5-((5-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-甲氧基吡啶-2-基)氨基)-3-(吡咯烷-3基氧基)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-21和中间体I-6依据通用步骤iv制备。

¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ8.51(s,1H),8.21(s,1H),7.47(s,1H),5.62(ddd,J＝5.5,5.5,2.8,1H),5.41(brs,1H),3.92(s,3H),3.38(dd,J＝13,5.3,1H),3.25(d,J＝13,1H),3.18-3.09(m,2H),2.25-2.16(m,1H),2.14-2.07(m,1H),1.47(s,6H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝1.84分钟；m/z(ESI)395(M+H)。

化合物PAPC-B-08

(R)-5-((5-(3-羟基-3-甲基丁-1-炔-1-基)-4-(甲基氨基)吡啶-2-基)氨基)-3-(吡咯烷-3-基氧基)吡嗪-2-甲腈

由中间体I-20和中间体I-6依据通用步骤iv制备。

¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ8.62(s,1H),7.96(s,1H),6.71(s,1H),5.76(brs,1H),3.49-3.48(m,2H),3.45-3.35(m,1H),2.95(s,3H),2.35-2.32(m,2H),1.60(s,6H)(2H由水模糊化(obscured by water))；LC-MS(LCT,4分钟)Rt＝1.59分钟；m/z(ESI)394(M+H)。

化合物PAPC-B-09

(R)-6-((5-氰基-6-(吡咯烷-3-基氧基)吡嗪-2-基)氨基)-4-(甲氧基)烟酸甲酯

由中间体I-11和中间体I-6依据通用步骤iv制备。

¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ8.63(s,1H),8.54(s,1H),7.56(s,1H),5.62-5.60(m,1H),3.94(s,3H),3.79(s,3H),3.18-2.98(m,4H),2.21-2.12(m,1H),2.07-1.99(m,1H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝2.04分钟；m/z(ESI)371(M+H)。

化合物PAPC-B-10

(R)-6-((5-氰基-6-(吡咯烷-3-基氧基)吡嗪-2-基)氨基)-4-(甲基氨基)烟酸甲酯

由中间体I-10和中间体I-6依据通用步骤iv制备。

¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ8.58(s,1H),8.38(s,1H),8.01(q,J＝4.7,1H),7.22(s,1H),5.62-5.51(m,1H),3.81(s,3H),3.18(dd,J＝12.6,5.5,1H),3.01-2.92(m,2H),2.90(d,J＝4.9,3H),2.85(ddd,J＝10.8,8.0,4.8,1H),2.14-2.03(m,1H),1.95-1.87(m,1H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝1.64分钟；m/z(ESI)370(M+H)。

化合物PAPC-B-11

(R)-6-((5-氰基-6-(吡咯烷-3-基氧基)吡嗪-2-基)氨基)-4-(二甲基氨基)烟酸甲酯

由中间体I-12和中间体I-6依据通用步骤iv制备。

¹H NMR(500MHz,d₆-DMSO)δ8.56(s,1H),8.35(s,1H),7.20(s,1H),5.68-5.59(m,1H),3.81(s,3H),3.39(dd,J＝13.1,5.2,1H),3.31(bs,1H),3.27(d,J＝13.1,1H),3.19-3.12(m,2H),2.91(s,6H),2.23-2.18(m,1H),2.15-2.08(m,1H)；LC-MS(LCT,3.5分钟)Rt＝1.70分钟；m/z(ESI)384(M+H)。

生物学方法

测定法1A：以DELFIA测定法形式确定对CHK1的抑制剂效力

CHK1激酶功能以测定法进行测量，以监测CDC25C肽使用特定磷酸化抗体的磷酸化。酶反应使用反应混合物(25μL)在聚丙烯平板(Greiner)中进行，该反应混合物含有酶和肽混合物(CHK1，1nM；Biotin(生物素)-KKKVSRSGLYRSPSMPENLNRPR，1μM或15μL)、ATP(30μM或5μL)和DMSO(2.5％)或稀释至得到一系列浓度(从0到100μM于2.5％DMSO中，终浓度)的测试化合物(5μL)于测定缓冲液(40mM Tris、40mM NaCl、2mM MgCl₂、1mM DTT和0.1％吐温20)中。将该反应混合物在室温下温育30分钟，然后加入含有40mMEDTA、0.05％吐温20、0.1％BSA于TBS(10×浓缩液，Sigma)中的缓冲液(125μL)停止反应。将停止的反应混合物的等分试样(100μL)转移到黑色中性亲和素涂布的(neutravidin-coated)平板(Perbio)并在振荡器(Titertek，Flow Laboratories)上于室温下温育1小时。用洗涤缓冲液(25mM Tris(pH8)、150mM NaCl、和0.1％吐温20)(WellWash4,ThermoLife Sciences)洗涤平板4次，并伴随着抗体混合物(100μL)依旧温育1小时，该抗体混合物由稀释在DELFIA测定缓冲液(PerkinElmer Life Sciences)中的抗磷酸化CDC25C(anti-phospho CDC25C)(1.25nM，#9528，Cell Signalling Technology)和铕标记的抗兔IgG(anti-rabbit IgG)(0.3μg/mL，AD0105，PerkinElmer Life Sciences)组成。在加入增强溶液(100μL/孔，PerkinElmer Life Sciences)之前用洗涤缓冲液洗涤该板另外的四次。在Victor21420多标记计数器(Perkin Elmer Life Sciences)上使用615nm下读取荧光的时间分辨测量模式读板。计算测试化合物抑制50％酶活性所需的浓度(IC₅₀)。

测定法1B：以Caliper测定法形式确定对CHK1的抑制剂效力

CHK1激酶活性以监测磷酸化产物从其底物分离的微流体测定法进行测量。该测定法使用含CR-8(500nM，#760278，Caliper LS)的分离缓冲液(#760367Caliper LS)在EZReader II(英国，朗柯恩，Caliper Life Sciences Ltd)上运行。550(LabcyteInc^TM)声学分配器(acoustic dispenser)被用来生成重复8点稀释曲线(duplicate8ptdilution curves)直接进入384聚丙烯酶联板(assay plate)(英国，格洛斯特郡，GreinerBio-One)。对于每个测试化合物，使用100％DMSO中的50μM储备液浓度。每孔分配的DMSO总量为250nL，以得到2.5％DMSO的最终测定浓度和在0.5-1000nM范围内的测试化合物浓度。加入均稀释在激酶缓冲液(HEPES50mM，NaN₃0.02％，BSA0.01％，原钒酸钠0.1mM，DTT1mM的，MgCl₂2mM，吐温200.1％)中的6μL CHK1(2nM终浓度，内部蛋白质制备)、2μL肽10(5-FAM-KKKVSRSGLYRSPSMPENLNRPR-COOH，1.5μM最终浓度，#760354Caliper LS)和2μL ATP(90μM终浓度)到此酶联板。在于室温下温育1小时之前将该板密封并离心(1分钟，1000rpm)。加入分离缓冲液(90μL)停止反应。在EZ Reader II上使用具有-1.5psi和1750ΔV仪器设置的12吸管芯片(12-sipper chip)(760137-0372R，Caliper LS)读板。自动生成产物从底物的转化百分比并计算相对于空白孔(不含酶和2.5％DMSO)和总孔(含有所有试剂和2.5％DMSO)的抑制百分比。使用具有可变斜率方程式的log(抑制剂)对响应的非线性回归拟合在GraphPad Prism5中计算IC₅₀值。

测定法2：确定抑制剂对于CHK1相对CHK2的抑制的选择性

体外CHK2激酶活性以使用特异性磷酸化抗体监测CDC25C肽的磷酸化的测定法进行测量。酶反应在96孔聚丙烯平板(Greiner)中进行。反应混合物(总体积25μL)包含酶和肽混合物(15μL)(含CHK2，在内部制备，1nM；生物素-KKKVSRSGLYRSPSMPENLNRPR，1μM)、ATP(30μM，5μL)和DMSO(2.5％)或稀释至得到一系列浓度(0-100μM于2.5％DMSO中，终浓度)的测试化合物(5μL)于测定缓冲液(40mM HEPES(pH7.4)，40mM KCl，2mM MgCl₂，10mM DTT和0.02％吐温20)中。将该反应混合物在室温下温育30分钟，并加入含有40mMEDTA、0.05％吐温20、0.1％BSA于TBS(10×浓缩液，Sigma)中的缓冲液(125μL)停止反应。将反应混合物的等分试样(100μL)转移到黑色中性亲和素包被的96孔板(Perbio)并在振荡器(Titertek，FlowLaboratories)上于室温下温育1小时。用洗涤缓冲液(25mM Tris(pH8)、150mM NaCl、和0.1％吐温20)(WellWash4，Thermo Life Sciences)洗涤该板4次，并伴随着抗体混合物(100μL)依旧温育1小时，该抗体混合物由稀释在测定缓冲液(PerkinElmer Life Sciences)中的抗磷酸化CDC25C(稀释1/4000相当于0.35nM-1.25nM，#9528，Cell Signalling Technology)和铕标记的抗兔IgG(0.3μg/mL，AD0105，PerkinElmer Life Sciences)组成。在加入增强溶液(100μL/孔，PerkinElmerLife Sciences)之前用洗涤缓冲液洗涤该板另外的四次。在Victor21420多标记计数器(Perkin Elmer Life Sciences)上使用615nm下读取荧光的时间分辨测量模式读板。计算测试化合物抑制50％酶活性所需的浓度(IC₅₀)。

对于每个测试化合物，来自CHK1激酶活性测定法的IC₅₀与来自CHK2激酶活性测定法的IC₅₀之比(即，CHK2的IC₅₀/CHK1IC₅₀)被用来定义对于CHK1相对CHK2的抑制的选择性。

测定法3：有丝***抑制测定法(MIA)

通过CHK1激酶功能抑制剂结合基因毒性剂的检测点消除使用设计成量化用基因毒性剂(以诱导G2期停滞)处理后截留在有丝***中的细胞数量的基于铕的ELISA测定法进行评估，接着通过测试化合物结合诺考达唑(nocodazole)来消除这种停滞。将HT29细胞按每孔104个细胞以160μL的体积接种于96孔板中并使其附着36小时。在培养基中将依托泊苷(etoposide)(10mM的DMSO储备液)稀释至250μM，然后加入40μL到适当的孔中，以得到50μM的终浓度，并温育1小时。这种处理先前已被优化，以诱导治疗后16小时的80％细胞的G2期停滞。基因毒性药物暴露后，除去培养基并用新鲜培养基(160μL)替换。细胞未被处理(未处理对照或依托泊苷单独预处理)，或暴露于依托泊苷预处理后的诺考达唑或单独诺考达唑(100ng/mL终浓度)，或暴露于结合诺考达唑(100ng/mL终浓度)的增加浓度的测试化合物(从200μM到0.01nM的终浓度)。对于每个剂量，使用四个复孔以40μL的等分试样加入测试化合物。21小时后曝光后，除去培养基，在4℃下将细胞固定在4％甲醛的磷酸盐缓冲盐水(PBS，pH7.4，预冷却至4℃)溶液中30分钟，接着在环境温度下用100％甲醇(预冷却至-20℃)固定10分钟。孔用PBS洗涤，并用5％奶粉(Marvel)的Tris-缓冲盐水(TBS，pH7.4)溶液在37℃下封闭30分钟。用含有0.1％吐温20的水洗涤各孔3次。加入一级抗体(MPM-2，Upstate目录号(cat#)05-368，在5％牛奶的TBS溶液中1μg/mL)到各孔中，并在4℃下伴随着振荡温育过夜。除去一级抗体并用含有0.1％吐温20的水洗涤孔。加入二级抗体(铕标记的鼠抗，Perkin-Elmer目录号AD0124，在测定缓冲液Perkin-Elmer目录号1244-111中333ng/mL)到各孔中并在37℃下温育1小时。各孔用含有0.1％吐温20的水洗涤并用增强溶液(Perkin-Elmer目录号1244-105)处理。铕排放量在Wallac，Victor2计数器(英国，Bucks，Perkin-Elmer)上计数。包括适当的对照，且结果表示为测试化合物允许50％细胞进入有丝***(MIA IC₅₀)所需的浓度。

通过有限的体内取样药代动力学评估比较口服生物利用度

雌性BALB/c小鼠(6周龄)(英国，马尔盖特，Charles River UK Ltd)被保持在具有可随意利用的食品和无菌水的受控环境中。动物在实验时称重20±2g。所有程序均按照动物实验的地方和国家指导方针进行。定量溶液(dosing solution)通过将测试化合物溶于10％DMSO和5％吐温20的85％盐水中制备。测试化合物通过经口灌胃口服(p.o.)给予。在麻醉下通过心脏穿刺进入肝素化的注射器于选定的时间点收集血液，转移到微量离心管中，并在4500×g下离心2分钟以得到血浆。定量分析通过三极四极仪器(Agilent6410)上的高效液相色谱串联质谱法使用选定转变的多反应监测伴随着用作内标物的奥罗莫星(olomoucine)进行。对比在测量基质中2nM至1000nM的浓度范围内的标准曲线进行定量分析。包括的质量对照在25、250和750nM的水平下。如果需要的话，将样品稀释在感兴趣的基质中。测试化合物的血浆浓度在口服剂量后1小时测量，并相对于10mg/kg剂量表示，以提供的口服生物利用度的程度的比较评估。

生物数据

CHK1活性

下列化合物使用测定法1A(以DELFIA测定法形式确定对CHK1的抑制剂效力)或测定法1B(以Caliper测定法形式确定对CHK1的抑制剂效力)进行测试：

PAPC-A-01、PAPC-A-02、PAPC-A-03、PAPC-A-04、PAPC-A-05、PAPC-A-06、PAPC-A-07、PAPC-A-08、PAPC-A-09、PAPC-A-10、PAPC-B-01、PAPC-B-02、PAPC-B-03、PAPC-B-04、PAPC-B-05、PAPC-B-06、PAPC-B-07、PAPC-B-08、PAPC-B-09、PAPC-B-10、PAPC-B-11。

所有化合物具有小于0.1μM(100nM)的CHK1IC₅₀。

下列化合物具有小于0.02μM(20nM)的CHK1IC₅₀：

PAPC-A-01、PAPC-A-02、PAPC-A-03、PAPC-A-08、PAPC-A-10、PAPC-B-01、PAPC-B-02、PAPC-B-03、PAPC-B-04、PAPC-B-05、PAPC-B-06、PAPC-B-08、PAPC-B-10、PAPC-B-11。

对于CHK1相对CHK2的选择性

下列化合物也使用测定法2(确定抑制剂对于CHK1相对CHK2的抑制的选择性)进行测试：

PAPC-A-01、PAPC-A-02、PAPC-A-03、PAPC-A-07、PAPC-A-08、PAPC-A-09、PAPC-B-02、PAPC-B-03、PAPC-B-04、PAPC-B-06、PAPC-B-10、PAPC-B-11。

所有化合物具有至少100倍的CHK1对CHK2选择性(即，CHK2IC₅₀/CHK1IC₅₀>100)。

MIA活性

下列化合物使用测定法3(有丝***抑制测定法(MIA))进行测试：

PAPC-A-01、PAPC-A-02、PAPC-A-03、PAPC-A-04、PAPC-A-05、PAPC-A-06、PAPC-A-07、PAPC-A-08、PAPC-A-09、PAPC-A-10、PAPC-B-01、PAPC-B-02、PAPC-B-03、PAPC-B-04、PAPC-B-05、PAPC-B-06、PAPC-B-07、PAPC-B-08、PAPC-B-09、PAPC-B-10、PAPC-B-11。

下列化合物具有小于0.5μM的MIA IC₅₀：

PAPC-A-01、PAPC-A-02、PAPC-A-03、PAPC-A-04、PAPC-A-05、PAPC-A-06、PAPC-A-07、PAPC-A-08、PAPC-A-09、PAPC-A-10、PAPC-B-01、PAPC-B-02、PAPC-B-03、PAPC-B-04、PAPC-B-05、PAPC-B-06、PAPC-B-08、PAPC-B-10、PAPC-B-11。

口服生物利用度

下列化合物使用上述方法估计口服生物利用度：

PAPC-A-01、PAPC-A-02、PAPC-A-05、PAPC-A-07、PAPC-A-09、PAPC-B-01、PAPC-B-02、PAPC-B-03、PAPC-B-04、PAPC-B-05、PAPC-B-06、PAPC-B-08、PAPC-B-10。

所有化合物具有至少2nM的口服生物利用度(血浆浓度，10mg/kgp.o.后1小时)。

下列化合物具有至少10nM的口服生物利用度(血浆浓度，10mg/kgp.o.后1小时)：

PAPC-A-01、PAPC-A-02、PAPC-A-05、PAPC-A-07、PAPC-A-09、PAPC-B-02、PAPC-B-05、PAPC-B-06、PAPC-B-08、PAPC-B-10。

下列化合物具有至少100nM的口服生物利用度(血浆浓度，10mg/kgp.o.后1小时)：

PAPC-A-01、PAPC-A-02、PAPC-A-05、PAPC-A-07、PAPC-B-02、PAPC-B-05。

下列化合物具有至少500nM的口服生物利用度(血浆浓度，10mg/kgp.o.后1小时)：

PAPC-A-01、PAPC-A-02、PAPC-A-05。

两种特别优选的化合物的数据归纳如下：

体内研究1：转基因MYCN驱动的成神经细胞瘤模型中的PAPC-A-01

转TH-MYCN基因(大鼠酪氨酸羟化酶启动子控制下的人类MYCN)的半合子小鼠中产生的自发成神经细胞瘤通过腹部触诊发现。具有很好地建立的肿瘤的连续动物(年龄30-70天)被随机分配接受测试化合物(PAPC-A-01)或载体，直到累计每组8-9只小鼠。测试化合物(PAPC-A-01)作为单一试剂按每日100mg/kg p.o.给予，连续7天经口灌胃(100μL/10g体重)，而对照接受等效体积的载体(10％DMSO，5％吐温20，85％盐水)。成神经细胞瘤的大小通过MRI并通过在治疗结束时从腹腔切开的肿瘤质量进行评估。

¹H MRI在7T Bruker水平孔显微成像***(德国，埃特林根，Bruker Instruments)上使用3cm鸟笼线圈(birdcage coil)进行。结合枸橼酸芬太尼(fentanyl citrate)(0.315mg/mL)加上氟阿尼酮(fluanisone)(10mg/mL)(英国，牛津，Hypnorm，JanssenPharmaceutical)和咪达***(midazolam)(5mg/mL)(英国，Welwyn Garden City，Roche)和水(1:1:2)诱导麻醉。动物的体温通过穿过磁铁孔的暖风机维持。

解剖T₂加权冠状和横断图像使用在3×3cm视野、36和132ms的两个回声、4.5s的TR和8个RARE因素之上编码步骤的、具有128相位的4个平均值的重新聚焦回声的快速采集(rapid acquisition with refocused echoes)(RARE)序列从穿过鼠腹部的二十个连续1mm厚的冠状切片获得。在MRI后，使小鼠在热垫上恢复24小时。肿瘤体积使用来自每个切片上绘制的感兴趣区域的分割进行测量，该绘制使用内部软件(ImageView，在IDL下工作，美国，科罗拉多州，Boulder，ITT)从含肿瘤的冠状T₂加权图像进行。预处理并在第7天的个体小鼠中的MR成像，在7天的治疗期内表现为肿瘤消退。参见图1和图2。

在研究结束时对照小鼠中的肿瘤平均重量为2.1±0.7g(平均值±SD)，而处理组中为0.3±0.2g，导致13.4％的T/C。

体内研究2：HT29人结肠癌异种移植中与吉西他滨(Gemcitabine)结合的PAPC-A- 01

在受控环境中雌性无胸腺CrTac:NCr-Foxn1nu小鼠(6-8周龄)(英国，马尔盖特，Charles River UK Ltd.)被保存于具有无菌草垫、可随意利用的食物和水的最大化笼(maximiser cage)中。在研究开始时动物称重20.3±2.0g。处理方法和所有实验程序根据UK Home Office、国家和地方的道德准则在无菌条件下于层流净化罩中进行。

来自美国模式培养物保藏所(American Type Culture Collection)的HT29结肠癌细胞(ATCC，LGC Promochem，Middesex，英国)从组织培养瓶中收获，并在小鼠的右边侧面皮下注射(每位点300万个细胞)。肿瘤一旦建立(平均直径0.55±0.05cm)，小鼠被随机分为处理组(n＝6)以接收(a)测试化合物(PAPC-A-01)(75mg/kg)，(b)吉西他滨(100mg/kg)，(c)(PAPC-A-01)(75mg/kg)和吉西他滨(100mg/kg)的组合，或(d)有关载体。

临床级盐酸吉西他滨(GEMZAR，Eli Lilly，Newmarket，英国)在无菌0.9％氯化钠中重组并分装冷冻在-20℃下。吉西他滨经由侧尾静脉在第0(肿瘤细胞植入后5天)、7和14天静脉内给予，每周一次。将测试化合物(PAPC-A-01)溶于10％DMSO中，并在5％吐温20，85％盐水中稀释出。测试化合物(PAPC-A-01)是通过经口灌胃在第1、2、8、9、15和16天给予。对照动物在指定的天通过适当的路径接收载体。该化合物以每10g体重100μL的体积给予。

每日观察动物并每周三次测量体重和肿瘤。两个垂直的肿瘤直径被用于使用以下公式来计算体积：V＝4/3π[(d1+d2)/4]³。

相对于载体对照肿瘤或单用吉西他滨处理的肿瘤计算T/C值(处理肿瘤相对于对照的体积)，表示为百分比。

在疗法开始后的弟24天，结果如下：

在接近推荐的最大耐受剂量下的单独吉西他滨抑制约20％的肿瘤生长。单独测试化合物(PAPC-A-01)未给出生长抑制。吉西他滨与测试化合物(PAPC-A-01)的组合疗法相对于对照抑制63％的肿瘤生长，而相对于单独吉西他滨则抑制54％的肿瘤生长。

前面已经描述了本发明的原理、优选实施方式和操作模式。然而，本发明不应该被解释为限于所讨论的特定实施方式。取而代之的是，上述实施方式应被视为说明性的而非限制性的，并且应当理解的是，本领域技术人员可在那些实施方式中进行变化而不脱离本发明的范围。

参考文献

本文引用了许多出版物，以便更充分地描述和公开本发明，以及本发明所涉及领域的状态。下面提供了这些参考文献的完整引文。在此这些参考文献各自通过参考方式以其整体并入本公开内容，其程度就如同将各个单独的参考文献具体地和单独地给出以参考方式并入一样。

Almeida et al.,2008,“Pyrazolyl-amino-substituted pyrazines and theiruse for the treatment of cancer”,international(PCT)patent publication numberWO2008/117050A1published02October 2008.

Balaint and Vousden,2001,“Activation and activities of the p53tumoursuppressor protein,”Br.J.Cancer,Vol.85,pp.1813-1823.

Bartek and Lukas,2003,“Chk1and Chk2kinases in checkpoint control andcancer,”Cancer Cell,Vol.3,pp.421-429.

Brooks et al.,2012,“A potent chk1inhibitor is selectively toxic inmelanomas with high levels of replicative stress,”Oncogene,doi:10.1038/onc.2012.72.

Carson and Lois,1995,“Cancer progression and p53,”Lancet,Vol.346,pp.1009-1011.

Cavelier et al.,2009,“Constitutive activation of the DNA damagesignaling pathway in acute myeloid leukemia with complex karyotype:Potentialimportance for checkpoint targeting therapy,”Cancer Res.,Vol.69,pp.8652-8661.

Cole et al.,2011“RNAi screen of the protein kinome identifiescheckpoint kinase1(chk1)as a therapeutic target in neuroblastoma,”Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,Vol.108,pp.3336-3341.

Collins et al.,2009a,“Pyrazin-2-yl-2-yl-amine and pyrazin-2-yl-pyrimidin-4-yl-amine compounds and their use”,international(PCT)patentpublication number WO2009/044162A1published09April2009.

Collins et al.,2009b,“Bicyclylaryl-aryl-amine compounds and theiruse”,international(PCT)patent publication number WO2009/103966A1published27August2009.

Davies et al.,2011,“Single-agent inhibition of chk1isantiproliferative in human cancer cell lines in vitro and inhibits tumorxenograft growth in vivo,”Oncol.Res.,Vol.19,pp.349-363.

Di Micco et al.,2006,“Oncogene-induced senescence is a DNAdamageresponse triggered by DNA hyper-replication,”Nature,Vol.444,pp.638-642.

Dixon and Norbury,2002,“Therapeutic exploitation of checkpointdefects in cancer cells lacking p53function,”Cell Cycle,Vol.1,pp.362-368.

Ferrao et al.,2011,“Efficacy of chk inhibitors as single agents inmyc-driven lymphoma cells,”Oncogene,doi:10.1038/onc.2011.358.

Greenblatt et al.,1994,“Mutations in the p53tumor suppressor gene:clues to cancer etiology and molecular pathogenesis,”Cancer Res.,Vol.54,pp.4855-4878.

Guzi et al.,2011,“Targeting the replication checkpoint using SCH900776,a potent and functionally selective CHK1inhibitor identified via highcontent screening,”Mol.Cancer Ther.,Vol.10,pp.591-602.

et al.,2011,“Therapeutic Implications for the Induced Levelsof Chk1in Myc-Expressing Cancer Cells,”Clin.Cancer Res.,Vol.17,pp.7067-7079.

Ioannidis et al.,2009,“Discovery of pyrazol-3-ylamino pyrazines asnovel JAK2inhibitors”,Bioorg.Med.Chem.Lett.,Vol.19,pp.6524-6528.

Lainchbury et al.,2012,“Discovery of3-akloxyamino-5-(pyridin-2-ylamino)pyrazine-2-carbonitriles as selective,orally bioavailableCHK1inhibitors”,J.Med.Chem.,apparently published online on19October2012,dx.doi.org/10.1021/jm3012933.

Li et al.,2007,“Synthesis and in-vitro biological activity ofmacrocyclic urea CHK1inhibitors”,Bioorg.Med.Chem.Lett.,Vol.17,pp.6499-6504.

Lin et al.,2005,“Macrocyclic kinase inhibitors”,US patent publicationnumber US2005/0215556A1published29September2005.

Liu et al.,2000,“Chk1is an essential kinase that is regulated by Atrand required for the G(2)/M DNA damage checkpoint,”GenesDev.,Vol.14,pp.1448-1459.

Murga et al.,2011,“Exploiting oncogene-induced replicative stress forthe selective killing of Myc-driven tumors,”Nat.Struct.Mol.Biol.,Vol.18,pp.1331-1335.

Sanchez et al.,1997,“Conservation of the Chk1checkpoint pathway inmammals:linkage of DNA damage to Cdk regulation through Cdc25,”Science,Vol.277,pp.1497-1501.

Sorensen et al.,2005,“Cell-cycle checkpoint kinase Chk1is requiredfor mammalian homologous recombination repair,”Nat.Cell Biol.,Vol7,pp.195-201.

Tao et al.,2005,“Macrocyclic kinase inhibitors”,international(PCT)patent publication number WO2005/047294A1published26May2005.

Tao et al.,2006,“Chk1inhibitors for novel cancer treatment,”Anti- Cancer Agents in Medicinal Chemistry,Vol.6,pp.377-388.

Tao et al.,2007a,“Macrocyclic ureas as potent and selectiveCHK1inhibitors:an improved synthesis,kinome profiling,structure-activityrelationships,and preliminary pharmacokinetics,”Bioorg.Med.Chem.Lett.,Vol.17,pp.6593-6601.

Tao et al.,2007b,“Structure-based design,synthesis,and biologicalevaluation of potent and selective macrocyclic checkpoint kinase1inhibitors,”J.Med.Chem.,Vol.50,pp.1514-1527.

Walton et al.,2010,“The preclinical pharmacology and therapeuticactivity of the novel CHK1inhibitor SAR-020106,”Mol.Cancer Ther.,Vol.9,No.1,pp.89-100.

Walton et al.,2012,“CCT244747is a novel potent and selectiveCHK1inhibitor with oral efficacy alone and in combination with genotoxicanticancer drugs”,Clin.Cancer Research,Vol.18,No.20,pp.5650-5661.

Wang et al.,1996,“UCN-01:a potent abrogator of G2checkpoint functionin cancer cells with disrupted p53,”J.Natl.Cancer Inst.,Vol.8,pp.956-965.

Weinert and Hartwell,1989,“Control of G2delay by the rad9gene ofSaccharomyces cerevisiae,”J.Cell Sci.Suppl.,Vol.12,pp.145-148.

Xiao et al.,2006,“Differential roles of checkpoint kinase1,checkpointkinase2,and mitogen-activated protein kinase-activated protein kinase2inmediating DNA damage-induced cell cycle arrest:implications for cancertherapy,”Mol.Cancer Ther.,Vol.5,pp.1935-1943.

Zachos et al.,2003,“Chk1-deficient tumour cells are viable butexhibit multiple checkpoint and survival defects,”EMBO J.,Vol.22,pp.713-723.

Zhao et al.,2002,“Disruption of the checkpoint kinase1/cell divisioncycle25A pathway abrogates ionizing radiation-induced S and G2checkpoints,”Proc.Natl.Acad.Sci.USA,Vol.99,pp.14795-14800.

Claims (68)

1.一种下式的化合物，或其药用盐：

其中：

-R^B3独立地是：

每个-R^B3A独立地是-H或饱和脂肪族C_1-3烷基；

-R^A4独立地是-NHR^A4A、-NR^A4A ₂、或-OR^A4A；

每个-R^A4A独立地是饱和脂肪族C_1-3烷基；

-R^A5独立地是-R^A5A；

-R^A5A独立地是：

并且

-R^A5AA是饱和脂肪族C_1-3烷基。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中-R^B3是：

3.根据权利要求1所述的化合物，其中-R^B3是：

4.根据权利要求1所述的化合物，其中-R^B3是：

5.根据权利要求1所述的化合物，其中-R^B3是：

6.根据权利要求1所述的化合物，其中-R^B3是：

7.根据权利要求1所述的化合物，其中-R^B3是：

8.根据权利要求1所述的化合物，其中-R^B3A是饱和脂肪族C_1-3烷基。

9.根据权利要求1所述的化合物，其中-R^B3A是-Me。

10.根据权利要求1所述的化合物，其中-R^B3A是-H。

11.根据权利要求1所述的化合物，其中-R^A4是-NHR^A4A。

12.根据权利要求1所述的化合物，其中-R^A4是-NR^A4A ₂。

13.根据权利要求1所述的化合物，其中-R^A4是-OR^A4A。

14.根据权利要求1所述的化合物，其中每个-R^A4A独立地是-Me或-Et。

15.根据权利要求11所述的化合物，其中每个-R^A4A独立地是-Me或-Et。

16.根据权利要求12所述的化合物，其中每个-R^A4A独立地是-Me或-Et。

17.根据权利要求13所述的化合物，其中每个-R^A4A独立地是-Me或-Et。

18.根据权利要求1所述的化合物，其中每个-R^A4A是-Me。

19.根据权利要求11所述的化合物，其中每个-R^A4A是-Me。

20.根据权利要求12所述的化合物，其中每个-R^A4A是-Me。

21.根据权利要求13所述的化合物，其中每个-R^A4A是-Me。

22.根据权利要求1所述的化合物，其中-R^A5A如果存在则是：

23.根据权利要求1所述的化合物，其中每个-R^A5AA如果存在则是-Me或-Et。

24.根据权利要求22所述的化合物，其中每个-R^A5AA如果存在则是-Me或-Et。

25.根据权利要求1所述的化合物，其中每个-R^A5AA如果存在则是-Me。

26.根据权利要求22所述的化合物，其中每个-R^A5AA如果存在则是-Me。

27.根据权利要求1所述的化合物，其中-R^A5A如果存在则是：

28.根据权利要求1所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐：

29.根据权利要求1所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐：

30.根据权利要求1所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐：

31.根据权利要求1所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐：

32.根据权利要求1所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐：

33.根据权利要求1所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐：

34.根据权利要求1所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐：

35.根据权利要求1所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐：

36.根据权利要求1所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐：

37.根据权利要求1所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐：

38.根据权利要求1所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐：

39.根据权利要求1所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐：

40.根据权利要求1所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐：

41.根据权利要求1所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐：

42.根据权利要求1所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐：

43.根据权利要求1所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐：

44.根据权利要求1所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐：

45.根据权利要求1所述的化合物，其为下式之一的化合物，或其药用盐：

46.根据权利要求1所述的化合物，其为下式的化合物，或其药用盐：

47.一种药物组合物，包含根据权利要求1到46中任一项所述的化合物、和药用载体或稀释剂。

48.根据权利要求47所述的药物组合物，其适于对受试者口服给予。

49.一种制备药物组合物的方法，包括混合根据权利要求1到46中任一项所述的化合物和药用载体或稀释剂的步骤。

50.根据权利要求1到46中任一项所述的化合物在制备用于治疗增殖性病症的药剂中的应用。

51.根据权利要求1到46中任一项所述的化合物在制备用于治疗癌症的药剂中的应用。

52.根据权利要求1到46中任一项所述的化合物在制备用于治疗p53缺陷癌的药剂中的应用。

53.根据权利要求1到46中任一项所述的化合物在制备用于治疗肺癌、乳腺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、黑素瘤、神经胶质瘤、或成神经细胞瘤的药剂中的应用。

54.根据权利要求50所述的应用，其中所述药剂是用于口服给予的药剂。

55.根据权利要求51所述的应用，其中所述药剂是用于口服给予的药剂。

56.根据权利要求52所述的应用，其中所述药剂是用于口服给予的药剂。

57.根据权利要求53所述的应用，其中所述药剂是用于口服给予的药剂。

58.根据权利要求50所述的应用，其中所述治疗进一步包括用一种或多种选自以下各项的其他试剂进行治疗：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

59.根据权利要求51所述的应用，其中所述治疗进一步包括用一种或多种选自以下各项的其他试剂进行治疗：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

60.根据权利要求52所述的应用，其中所述治疗进一步包括用一种或多种选自以下各项的其他试剂进行治疗：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

61.根据权利要求53所述的应用，其中所述治疗进一步包括用一种或多种选自以下各项的其他试剂进行治疗：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

62.根据权利要求54所述的应用，其中所述治疗进一步包括用一种或多种选自以下各项的其他试剂进行治疗：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

63.根据权利要求55所述的应用，其中所述治疗进一步包括用一种或多种选自以下各项的其他试剂进行治疗：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

64.根据权利要求56所述的应用，其中所述治疗进一步包括用一种或多种选自以下各项的其他试剂进行治疗：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

65.根据权利要求57所述的应用，其中所述治疗进一步包括用一种或多种选自以下各项的其他试剂进行治疗：(a)DNA拓扑异构酶I或II抑制剂；(b)DNA损伤剂；(c)抗代谢物或胸苷酸合成酶(TS)抑制剂；(d)微管靶向剂；和(e)电离辐射。

66.一种抑制CHK1激酶功能的体外方法，包括使细胞与有效量的根据权利要求1到46中任一项所述的化合物接触。

67.一种抑制细胞内CHK1激酶功能的体外方法，包括使细胞与有效量的根据权利要求1到46中任一项所述的化合物接触。

68.一种抑制细胞增殖、抑制细胞周期进程、促进细胞凋亡、或者这些中的一个或多个的组合的体外方法，包括使细胞与有效量的根据权利要求1到46中任一项所述的化合物接触。