CN104054695A - 生物组织低温保护剂及制备、使用方法 - Google Patents

生物组织低温保护剂及制备、使用方法 Download PDF

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生物组织低温保护剂及制备、使用方法。生物新鲜组织离开活体或者原来的生存环境后，生物体的内源酶开始降解遗传物质，其降解速度与内源酶含量及温度有直接关系。一种生物组织低温保护剂，其组成包括：(NH4)2SO4、NaCl、NaSO4、NaNO3、KBrO3、超纯水，所述的(NH4)2SO4的重量份数为300-400，所述的NaCl的重量份数为2-3，所述的NaSO4的重量份数为18-25，所述的NaNO3的重量份数为0.2-0.3，所述的KBrO3的重量份数为0.1-0.2，所述的超纯水的重量份数为1000。本发明用于新鲜生物标本的低温保藏。

Description

生物组织低温保护剂及制备、使用方法
技术领域
本发明涉及一种生物组织低温保护剂及制备、使用方法。
背景技术
生物新鲜组织离开活体或者原来的生存环境后，生物体的内源酶开始降解遗传物质，其降解速度与内源酶含量及温度有直接关系。目前，传统的生物技术是在液氮环境或超低温冰箱内对生物标本进行保藏。然而，低温环境中生物组织中的分解酶仍然会对组织进行溶解破坏作用，使细胞及遗传物质不断降解。
生物标本的保藏是一项长久的工作，标本的保存有的需要几十年甚至上百年。降解的生物标本既不能满足科学研究的需要也不能***恢复生物的生存属性。所以，生物遗传物质的保存是生物标本保藏的一项重要内容，只有生物的遗传信息得以完整有效的保存下来，才是对物种真正意义的保存。
目前传统的保藏生物标本遗传信息的方法是进行低温保藏，低温保护剂对标本的保藏至关重要。研制无毒无刺激性的生物组织低温保护剂对生物标本遗传信息的保藏有重要作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种能够长期保持新鲜组织不变质的生物组织低温保护剂及制备、使用方法。
上述的目的通过以下的技术方案实现：
一种生物组织低温保护剂，其组成包括：(NH4)2SO4、NaCl、NaSO4、NaNO3、KBrO3、超纯水，所述的(NH4)2SO4的重量份数为300-400 ，所述的NaCl的重量份数为2-3 ，所述的NaSO4的重量份数为18-25 ，所述的NaNO3的重量份数为0.2-0.3 ，所述的KBrO3的重量份数为0.1-0.2，所述的超纯水的重量份数为1000 。
所述的生物组织低温保护剂，所述的(NH4)2SO4的重量份数为300 ，所述的NaCl的重量份数为2，所述的NaSO4的重量份数为18 ，所述的NaNO3的重量份数为0.2 ，所述的KBrO3的重量份数为0.1 。
所述的(NH4)2SO4的重量份数为400 ，所述的NaCl的重量份数为3 ，所述的NaSO4的重量份数为25 ，所述的NaNO3的重量份数为0.3 ，所述的KBrO3的重量份数为0.2 。
所述的(NH4)2SO4的重量份数为350 ，所述的NaCl的重量份数为2.5 ，所述的NaSO4的重量份数为20，所述的NaNO3的重量份数为0.25 ，所述的KBrO3的重量份数为0.15 。
一种生物组织低温保护剂的制备方法，采用超纯水作为介质，第一步称取(NH4)2SO4的重量份数为300-400 ，加入600重量份数的超纯水中；第二步称取NaCL的重量份数为2-3 、NaSO4的重量份数为18-25 和NaNO3的重量份数为2-3 ，依次加入300重量份数的超纯水中；第三步称取KBrO3的重量份数为0.1-0.2 ，再加入100重量份数的超纯水中；将上述三步所得的三种试剂各用玻璃棒搅拌1min, 超声波超声20min；然后将第二步、第三步两种试剂依次缓慢加入第一步的试剂中，边加边用玻璃棒搅拌，最后用超声波在超声10min，倒入棕色玻璃瓶中，用4℃冰箱保存备用。
一种生物组织低温保护剂的使用方法，第一步生物标本组织切块，第二步将切好的生物标本在室温下用生物组织低温保护剂浸泡，使溶液渗入细胞制成样本，第三步将样本在温度为4℃放置6小时，第四步将样本移入-20℃或-86℃环境下进行长期保存。
有益效果：
1.本发明可迅速渗入组织进行细胞和遗传物质（DNA和RNA）的保护；保护液迅速的保护作用确保了生物标本用作科学研究的基因表达分析结果的准确性；样本能够长期保护，即使是多次反复冻融，遗传物质也不会降解；可对生物标本进行低温有效长期保藏。
2.本发明在低温环境中对标本进行保护，在细胞水平与分子水平一同来对生物标本进行保护，真正做到生物标本的有效保藏。
3.本发明采用的措施是将生物组织进行野外采集后，用生物组织低温保护剂处理；有效控制生物体的各种分解酶的作用，同时还能够不破坏组织细胞及生物遗传物质的结构和功能。
4.本发明能够与很多内源分解酶的有效生物基团（-SH或-OH等基团）发生反应，从而破坏内源酶的活性中心，起到对生物组织遗传物质的有效保护的作用。
5.本发明是对生物新鲜组织保存方法的一次创新，使生物标本的低温保存更为有效。
6.本发明在低温环境下可对标本的细胞结构和遗传物质（DNA和RNA）进行长期保存，防止降解。
7.本发明能够同时与相应的标本处理试验方法兼容，可以更为有效的对生物标本进行相应的研究及后续操作；加入生物组织低温保护剂的生物样本可在-20℃或-80℃条件下长期保存；经该产品保护的组织可用于所有关于分子生物学的后续实验，包括目的基因的克隆、RNA领域及DNA指纹技术等方面的研究。
具体实施方式：
实施例1：
一种生物组织低温保护剂，其组成包括：(NH4)2SO4、NaCl、NaSO4、NaNO3、KBrO3、超纯水，所述的(NH4)2SO4的重量份数为300-400 ，所述的NaCl的重量份数为2-3 ，所述的NaSO4的重量份数为18-25 ，所述的NaNO3的重量份数为0.2-0.3 ，所述的KBrO3的重量份数为0.1-0.2，所述的超纯水的重量份数为1000 。
实施例2：
实施例1所述的生物组织低温保护剂，所述的(NH4)2SO4的重量份数为300 ，所述的NaCl的重量份数为2，所述的NaSO4的重量份数为18 ，所述的NaNO3的重量份数为0.2 ，所述的KBrO3的重量份数为0.1 。
实施例3：
实施例1所述的生物组织低温保护剂，所述的(NH4)2SO4的重量份数为400 ，所述的NaCl的重量份数为3 ，所述的NaSO4的重量份数为25 ，所述的NaNO3的重量份数为0.3 ，所述的KBrO3的重量份数为0.2 。
实施例4：
实施例1所述的生物组织低温保护剂， 所述的(NH4)2SO4的重量份数为350 ，所述的NaCl的重量份数为2.5 ，所述的NaSO4的重量份数为20，所述的NaNO3的重量份数为0.25 ，所述的KBrO3的重量份数为0.15 。
实施例5：
一种生物组织低温保护剂的制备方法，采用超纯水作为介质，第一步称取(NH4)2SO4的重量份数为300-400 ，加入600重量份数的超纯水中；第二步称取NaCL的重量份数为2-3 、NaSO4的重量份数为18-25 和NaNO3的重量份数为2-3 ，依次加入300重量份数的超纯水中；第三步称取KBrO3的重量份数为0.1-0.2 ，再加入100重量份数的超纯水中；将上述三步所得的三种试剂各用玻璃棒搅拌1min, 超声波超声20min；然后将第二步、第三步两种试剂依次缓慢加入第一步的试剂中，边加边用玻璃棒搅拌，最后用超声波在超声10min，倒入棕色玻璃瓶中，用4℃冰箱保存备用。
实施例6：
一种生物组织低温保护剂的使用方法，第一步生物标本组织切块，第二步将切好的生物标本在室温下用生物组织低温保护剂浸泡，使溶液渗入细胞制成样本，第三步将样本在温度为4℃放置6小时，第四步将样本移入-20℃环境下进行长期保存。
实施例7：
实施例6所述的生物组织低温保护剂的使用方法，切好的生物标本组织块（各维尺寸均小于0.5cm）只需简单地在室温下浸入约5倍体积的生物组织低温保护剂（例如，0.5的样本需要约2.5低温保护试剂）中。溶液渗入细胞，稳定生物组织。然后样本在4℃放置6小时（生物组织浸入保护剂液面下），然后将组织移入-20℃（组织不会冻结）或-86℃环境下。这样生物组织可以长期保存，如果进行实验室操作，可当作刚获得的样本进行处理即可。大多数组织可直接转入裂解缓冲液进行匀浆化，先后经过低温保护剂处理和冷冻的样本，可使用研钵进行研磨，或者解冻后像新鲜组织一样处理，因为各种生物分解酶已被灭活，所以不用担心细胞破裂和分解酶的释放。
实施例8：
实施例1所述的生物组织低温保护剂，所述的(NH4)2SO4的重量份数为370，所述的NaCl的重量份数为2 ，所述的NaSO4的重量份数为22，所述的NaNO3的重量份数为0.2 ，所述的KBrO3的重量份数为0.1 。
实施例9：
实施例1所述的生物组织低温保护剂，所述的(NH4)2SO4的重量份数为330 ，所述的NaCl的重量份数为3 ，所述的NaSO4的重量份数为20 ，所述的NaNO3的重量份数为0.3 ，所述的KBrO3的重量份数为0.2 。
实施例10：
实施例6所述的生物组织低温保护剂的使用方法，第一步生物标本组织切块，第二步将切好的生物标本在室温下用生物组织低温保护剂浸泡，使溶液渗入细胞制成样本，第三步将样本在温度为4℃放置6小时，第四步将样本移入-86℃环境下进行长期保存。
实施例11：
实施例5所述的生物组织低温保护剂的制备方法， 采用超纯水作为介质，第一步称取(NH4)2SO4的重量份数为300 ，加入600重量份数的超纯水中；第二步称取NaCL的重量份数为2、NaSO4的重量份数为18和NaNO3的重量份数为2 ，依次加入300重量份数的超纯水中；第三步称取KBrO3的重量份数为0.1 ，再加入100重量份数的超纯水中；将上述三步所得的三种试剂各用玻璃棒搅拌1min, 超声波超声20min；然后将第二步、第三步两种试剂依次缓慢加入第一步的试剂中，边加边用玻璃棒搅拌，最后用超声波在超声10min，倒入棕色玻璃瓶中，用4℃冰箱保存备用。
实施例12：
实施例5所述的生物组织低温保护剂的制备方法， 采用超纯水作为介质，第一步称取(NH4)2SO4的重量份数为400 ，加入600重量份数的超纯水中；第二步称取NaCL的重量份数为3 、NaSO4的重量份数为25 和NaNO3的重量份数为3 ，依次加入300重量份数的超纯水中；第三步称取KBrO3的重量份数为0.2 ，再加入100重量份数的超纯水中；将上述三步所得的三种试剂各用玻璃棒搅拌1min, 超声波超声20min；然后将第二步、第三步两种试剂依次缓慢加入第一步的试剂中，边加边用玻璃棒搅拌，最后用超声波在超声10min，倒入棕色玻璃瓶中，用4℃冰箱保存备用。
实施例13：
实施例2所述的生物组织低温保护剂，所述的(NH4)2SO4的重量份数为300 g，所述的NaCl的重量份数为2 g，所述的NaSO4的重量份数为18 g ，所述的NaNO3的重量份数为0.2 g，所述的KBrO3的重量份数为0.1 g。

Claims (6)

1.一种生物组织低温保护剂，其组成包括：(NH4)2SO4、NaCl、NaSO4、NaNO3、KBrO3、超纯水，其特征是: 所述的(NH4)2SO4的重量份数为300-400 ，所述的NaCl的重量份数为2-3 ，所述的NaSO4的重量份数为18-25 ，所述的NaNO3的重量份数为0.2-0.3 ，所述的KBrO3的重量份数为0.1-0.2 ，所述的超纯水的重量份数为1000。
2.根据权利要求1所述的生物组织低温保护剂，其特征是: 所述的(NH4)2SO4的重量份数为300 ，所述的NaCl的重量份数为2，所述的NaSO4的重量份数为18 ，所述的NaNO3的重量份数为0.2 ，所述的KBrO3的重量份数为0.1 。
3.根据权利要求1所述的生物组织低温保护剂，其特征是: 所述的(NH4)2SO4的重量份数为400 ，所述的NaCl的重量份数为3 ，所述的NaSO4的重量份数为25 ，所述的NaNO3的重量份数为0.3 ，所述的KBrO3的重量份数为0.2 。
4.根据权利要求1所述的生物组织低温保护剂，其特征是: 所述的(NH4)2SO4的重量份数为350 ，所述的NaCl的重量份数为2.5 ，所述的NaSO4的重量份数为20，所述的NaNO3的重量份数为0.25 ，所述的KBrO3的重量份数为0.15 。
5.一种生物组织低温保护剂的制备方法，其特征是: 采用超纯水作为介质，第一步称取(NH4)2SO4的重量份数为300-400 ，加入600重量份数的超纯水中；第二步称取NaCL的重量份数为2-3 、NaSO4的重量份数为18-25 和NaNO3的重量份数为2-3 ，依次加入300重量份数的超纯水中；第三步称取KBrO3的重量份数为0.1-0.2 ，再加入100重量份数的超纯水中；将上述三步所得的三种试剂各用玻璃棒搅拌1min, 超声波超声20min；然后将第二步、第三步两种试剂依次缓慢加入第一步的试剂中，边加边用玻璃棒搅拌，最后用超声波在超声10min，倒入棕色玻璃瓶中，用4℃冰箱保存备用。
6.一种生物组织低温保护剂的使用方法，其特征是:第一步生物标本组织切块，第二步将切好的生物标本在室温下用生物组织低温保护剂浸泡，使溶液渗入细胞制成样本，第三步将样本在温度为4℃放置6小时，第四步将样本移入-20℃或-86℃环境下进行长期保存。
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