CN104046614A - 一种细胞裂解液及其制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种细胞裂解液及其制备工艺，它由Hepes钠盐、Hepes游离酸、氯化锂、乙二胺四乙酸、十二烷基硫酸锂、Proclin300、蛋白酶K组成，本发明是1.该裂解液裂解细胞过程，操作简单、方便、省时省力。2.裂解后的宫颈上皮脱落细胞样本可直接进行核酸检测，无需DNA/RNA纯化。
Description
技术领域
本发明涉及生物制剂技术领域；具体涉及一种细胞裂解液及其制备工艺。
背景技术
目前，基因组提取及蛋白质研究的一个关键步骤就是细胞裂解，不同的样品其细胞裂解方式不同，裂解液的选择也有所差异。目前常见的细胞裂解方法又CTAB法、物理方法、SDS法等。CTAB发适用于植物组织、真菌等细胞的裂解。物理方法由于对基因组的破坏力较大而不建议采用此方法。SDS法适合于血液、细胞、动物组织、细菌、酵母等，是一种强力细胞裂解方式。在实验者的实际操作过程中，需要严格要根据样品的来源和提取要求选择适当的细胞裂解方法。因此这几种方法普遍存在的问题就是：1、裂解时间长；2、裂解效果不充分等问题。
因此，本发明是在主要解决目前现有技术存在以上不足的基础上研发出来的。
发明内容
发明的目的是解决以上技术问题，特别提出一种减少裂解时间，裂解充分、结构简单、成本低廉的细胞裂解液及其制备工艺。
基于上述目的，本发明所解决的技术问题采用以下技术方案来实现：
一种细胞裂解液及其制备工艺，它由Hepes钠盐、Hepes游离酸、氯化锂、乙二胺四乙酸、十二烷基硫酸锂、Proclin300、蛋白酶K组成，按重量百分比计，其中
a.Hepes钠盐：13-25％；
b.Hepes游离酸：1.92-12％；
c.氯化锂：40.88-62％；
d.乙二胺四乙酸：2.5-5％；
e.十二烷基硫酸锂：56-65％；
f.Proclin300：0.2-2.5％；
g.蛋白酶K：1％。
进一步，所述以下重量比为：
a.Hepes钠盐：13mg/ml；
b.Hepes游离酸：11.92mg/ml；
c.氯化锂：50.88mg/ml；
d.乙二胺四乙酸：3mg/ml；
e.十二烷基硫酸锂：60mg/ml；
f.Proclin300：0.2ul/m；
g.蛋白酶K：1mg/ml。
进一步，所述上述产品重量比按以下步骤：
a.将标本转移至离心管，3000rpm离心5分钟，弃上清；
b.加入2ml裂解稀释液重悬混匀，3000rpm离心5分钟，弃上清；
c.加入300ul裂解液，再加入3ul蛋白酶K，重悬混匀；
d.放置恒温箱65℃裂解，20分钟左右震荡一次，1小时后取出，将标本恢复至室温，取上清液用于检测。
进一步，所述的蛋白酶K的浓度为20mg/ml。
本发明组分的技术原理:
Hepes：是一种非离子两性缓冲液。
氯化锂：作为一种RNA沉淀剂。
乙二胺四乙酸：变性剂，破坏细胞膜进行裂解细胞。
十二烷基硫酸锂：阴离子表面活性剂。可用于RNA、DNA离析，蛋白质增溶剂。
Proclin300：防腐剂。
蛋白酶K：抑制蛋白酶的活性，用于蛋白质的降解。
本发明的有益效果是：1.该裂解液裂解细胞过程，操作简单、方便、省时省力。2.裂解后的宫颈上皮脱落细胞样本可直接进行核酸检测，无需DNA/RNA纯化。3.裂解过程温和，有效降低了裂解过程中核酸的损伤。4.成本低廉、适于常规试验中上皮脱落细胞的研究。
具体实施方式
以下通过具体的实施方式，进一步阐述本发明。
一种细胞裂解液及其制备工艺，它由Hepes钠盐、Hepes游离酸、氯化锂、乙二胺四乙酸、十二烷基硫酸锂、Proclin300、蛋白酶K组成，按重量百分比计，其中
a.Hepes钠盐：13-25％；
b.Hepes游离酸：1.92-12％；
c.氯化锂：40.88-62％；
d.乙二胺四乙酸：2.5-5％；
e.十二烷基硫酸锂：56-65％；
f.Proclin300：0.2-2.5％；
g.蛋白酶K：1％。
实施例1，本发明的细胞裂解液配制配方为，
a.Hepes钠盐：13mg/ml；
b.Hepes游离酸：11.92mg/ml；
c.氯化锂：50.88mg/ml；
d.乙二胺四乙酸：3mg/ml；
e.十二烷基硫酸锂：60mg/ml；
f.Proclin300：0.2ul/m；
g.蛋白酶K：1mg/ml。
取自将上述产品重量比按以下步骤制备：
a.将标本转移至离心管，3000rpm离心5分钟，弃上清；
b.加入2ml裂解稀释液重悬混匀，3000rpm离心5分钟，弃上清；
c.加入300ul裂解液，再加入3ul蛋白酶K，重悬混匀；
d.放置恒温箱65℃裂解，20分钟左右震荡一次，1小时后取出，将标本恢复至室温，取上清液用于检测。
实施例2，本发明的细胞裂解液配制配方为，
a.Hepes钠盐：25mg/ml；
b.Hepes游离酸：1.92mg/ml；
c.氯化锂：62mg/ml；
d.乙二胺四乙酸：5mg/ml；
e.十二烷基硫酸锂：56mg/ml；
f.Proclin300：2.5ul/m；
按照上述方法制备即可。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不限制本发明应用领域。凡在本发明精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种细胞裂解液及其制备工艺，其特征在于，它由Hepes钠盐、Hepes游离酸、氯化锂、乙二胺四乙酸、十二烷基硫酸锂、Proclin300、蛋白酶K组成，按重量百分比计，其中
a.Hepes钠盐：13-25％；
b.Hepes游离酸：1.92-12％；
c.氯化锂：40.88-62％；
d.乙二胺四乙酸：2.5-5％；
e.十二烷基硫酸锂：56-65％；
f.Proclin300：0.2-2.5％；
g.蛋白酶K：1％。
2.根据权利要求1所述的细胞裂解液，其特征在于，所述以下重量比为：
a.Hepes钠盐：13mg/ml；
b.Hepes游离酸：11.92mg/ml；
c.氯化锂：50.88mg/ml；
d.乙二胺四乙酸：3mg/ml；
e.十二烷基硫酸锂：60mg/ml；
f.Proclin300：0.2ul/m；
g.蛋白酶K：1mg/ml。
3.根据权利要求1所述的细胞裂解液制备工艺，其特征在于，所述上述产品重量比按以下步骤：
a.将标本转移至离心管，3000rpm离心5分钟，弃上清；
b.加入2ml裂解稀释液重悬混匀，3000rpm离心5分钟，弃上清；
c.加入300ul裂解液，再加入3ul蛋白酶K，重悬混匀；
d.放置恒温箱65℃裂解，20分钟左右震荡一次，1小时后取出，将标本恢复至室温，取上清液用于检测。
4.根据权利要求1所述的细胞裂解液及其制备工艺，其特征在于，所述的蛋白酶K的浓度为20mg/ml。
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