CN104042680A - 一种红茂草提取物灌注液及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种红茂草提取物灌注液的制备方法：将红茂草提取物加水煎熬，合并滤液浓缩，得到浓缩液；之后用乙醇醇提，去乙醇后在药液中加入苯甲醇、吐温-80，加注射用水至全量，杀菌，得到本发明的红茂草提取物灌注液。本发明还提供该灌注液在制备治疗奶牛乳腺炎的药物中的应用。本发明采用红茂草提取物作为有效成分，具有很好的清热解毒、抗菌消炎及抗病毒的作用。同时由于采用纯中药制剂，不含任何化药成分，故有利于奶制品的安全。通过提取及制剂一体化生产，所生产产品性质稳定且质量可控，非常有利于工业化生产。作为一种有效治疗奶牛临床型乳腺炎药物，其效果确切，无残留及毒副作用，并在泌乳期可用，将成为抗生素良好的替代品。

Description

一种红茂草提取物灌注液及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于兽药技术领域，具体涉及一种红茂草提取物灌注液。

背景技术

红茂草,为罂粟科秃疮花属植物。在甘肃省秦岭南北、渭水流域分布广泛。红茂草无论全草入药, 还是复方配伍, 均有清热解毒、消肿止痛、杀虫等功效, 在临床使用中发现红茂草对***核、肺结核、骨结核及窦道溃疡总有效率达90%以上, 对各种外科疮疡、瘘管、顽固性口炎、外伤、带状疱疹、霉菌性***炎、化脓性中耳炎、羊口疮及疥癣等疾病有明显的治疗效果。

奶牛临床型乳腺炎是奶牛乳腺组织炎症，主要是由多种非特定的病原微生物引起的，如细菌等。其中，细菌主要是链球菌属、葡萄球菌属、棒杆菌属和肠杆菌属等；真菌有念珠菌属、毛孢子菌属和曲霉菌属等。但患乳腺炎的奶牛乳汁中以金黄色葡萄球菌的带菌率最高，其次是大肠杆菌和链球菌；由病毒引起的临床型乳腺炎多是由于继发感染。另外，环境因素和饲养管理对奶牛临床型乳腺炎的发病率也有很大影响，当奶牛生活环境卫生条件差或挤奶不当损伤乳管，都会造成***抵抗力下降，使***容易遭受病原微生物侵袭而发生临床型乳腺炎。临床型乳腺炎症状表现：奶牛患乳腺炎，轻者表现乳汁稀薄.乳量减少.含有絮状物或凝块，***红肿，食欲/体温变化不大。重者患区明显，疼痛.发硬；乳汁呈淡灰色，产奶量明显下降；体温升高，食欲下降。恶性乳腺炎患部面积肿大，坚硬如石，***皮肤呈暗紫色，疼痛极为明显；挤不出奶，只能挤出少量黄水或血水；体温升高，呼吸/脉搏加快；食欲减退或废绝。若不及时治疗可导致化脓.丧失泌乳机能甚至死亡。其危害为乳腺炎致使产奶降、奶牛废弃、病牛甚至死亡，加上医疗费开支，给养户带来严重的经济损失；同时临床型乳腺炎的病原菌还可通过牛奶而危害人体健康。长期以来我国奶牛场通过应用大剂量抗生素和磺胺类药物进行治疗，在取得较好疗效的同时也带来许多新问题,比如耐药菌的增多和药物残留问题，严重影响奶制品的使用安全。

发明内容

本发明提供了一种红茂草提取物灌注液，为此，本发明还提供了其制备方法和应用。本发明的红茂草提取物灌注液对奶牛乳腺炎具有很好的治疗效果。

本发明采用的技术方案如下：一种红茂草提取物灌注液的制备方法：将红茂草加水煎熬，合并滤液浓缩，得到浓缩液；之后用乙醇醇提，去乙醇后在药液中加入苯甲醇、吐温-80，加注射用水至全量，杀菌，得到本发明的红茂草提取物灌注液。

优选地，所述加水煎熬是加入2-6倍质量的水，煎熬1-4小时，煎熬3次。

进一步地，所述加水煎熬是加入2倍质量的水，煎熬1小时，煎熬3次。

优选地，所述乙醇醇提是首先加入1倍浓缩液质量的乙醇冷藏沉淀4天，过滤弃沉淀，在滤液中依次再加2倍、3倍浓缩液质量的乙醇，冷藏沉淀2天，弃沉淀物。

采用该醇提方法能有效的提取红茂草中的有效成分。

进一步地，所述乙醇醇提后用氢氧化钠调节pH至10。

优选地，所述在药液中加入苯甲醇、吐温-80和注射用水后，调节pH值至6-7。

优选地，所述杀菌是在100℃灭菌30分钟。

本发明的第二个目的是提供应用上述方法制备得到的红茂草提取物灌注液。

本发明的第三个目的是提供上述红茂草提取物灌注液在制备治疗奶牛乳腺炎的药物中的应用。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明采用红茂草提取物作为有效成分，具有很好的清热解毒、抗菌消炎及抗病毒的作用。同时由于采用纯中药制剂，不含任何化药成分，故有利于奶制品的安全。

2、通过提取及制剂一体化生产，所生产产品性质稳定且质量可控，非常有利于工业化生产。

3、作为一种有效治疗奶牛临床型乳腺炎药物，其效果确切，无残留及毒副作用，并在泌乳期可用，将成为抗生素良好的替代品。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。如无特殊说明，“%”为质量百分比。

实施例1

本发明的红茂草提取物灌注液的制备方法如下：

红茂草1公斤加水煎熬三次，每次加水6公斤，煎熬时间为4小时。煎煮后过滤，合并滤液、浓缩至1000毫升，放冷；加1000毫升乙醇4-5℃冷藏沉淀四天，过滤弃沉淀物, 回收乙醇；依次加入2000毫升、3000毫升乙醇, 均在4-5℃下冷藏沉淀二天，过滤弃沉淀物，回收乙醇，加氢氧化钠调节pH至10，在4-5℃下冷藏24小时过滤，滤液在水浴中加热至无醇味, 药液中加入医药级助溶剂15毫升苯甲醇与15毫升吐温-80，加注射用水至1000毫升, 调节pH至中性6-7 ,过滤，灌封，100℃、30分钟灭菌，得到红茂草提取物灌注液。本品为棕色澄明液, 红茂草提取物含量30%,每支50毫升溶液相当于生药0.5克。

实施例2

本发明的红茂草提取物灌注液的制备方法如下：

红茂草1公斤加水煎熬三次，每次加水4公斤，煎熬时间为2小时。煎煮后过滤，合并滤液、浓缩至1000毫升，放冷；加1000毫升乙醇4-5℃冷藏沉淀四天，过滤弃沉淀物, 回收乙醇；依次再加2000毫升、3000毫升乙醇, 均在4-5℃下冷藏沉淀二天，过滤弃沉淀物，回收乙醇，加氢氧化钠调节pH至10，在4-5℃下冷藏24小时过滤，滤液在水浴中加热至无醇味, 药液中加入15毫升苯甲醇、15毫升吐温-80，加注射用水至1000毫升, 调节pH至6-7 ,过滤，灌封，100℃、30分钟灭菌，得到红茂草提取物灌注液。本品为棕色澄明液, 红茂草提取物含量30%,每支50毫升溶液相当于生药0.5克。

实施例3

本发明的红茂草提取物灌注液的制备方法如下：

红茂草1公斤加水煎熬三次，每次加水2公斤，煎熬时间为1小时。煎煮后过滤，合并滤液、浓缩至1000毫升，放冷；加1000毫升乙醇4-5℃冷藏沉淀四天，过滤弃沉淀物, 回收乙醇；依次再加2000毫升、3000毫升乙醇, 均在4-5℃下冷藏沉淀二天，过滤弃沉淀物，回收乙醇，加氢氧化钠调节pH至10，在4-5℃下冷藏24小时过滤，滤液在水浴中加热至无醇味, 药液中加入15毫升苯甲醇、15毫升吐温-80，加注射用水至1000毫升, 调节pH至6-7 ,过滤，灌封，100℃、30分钟灭菌，得到红茂草提取物灌注液。本品为棕色澄明液, 红茂草提取物含量30%,每支50毫升溶液相当于生药0.5克。

实施例4 应用本发明的红茂草提取物灌注液的试验

1、体外抑菌试验

1.1菌种  金黄色葡萄球菌₈₄₁₈₄，大肠埃希氏菌C₈₃₂₁，沙门菌C₇₉₂₆:均购自中国兽药监察所；克雷伯氏菌₂₁₉，绿脓杆菌₁₀₁₄，变形杆菌₁₃₄₅:均购自北京生物药品鉴定所。

1.2培养基  金黄色葡萄球菌用牛肉膏蛋白胨培养基培养,其余菌种用普通琼脂培养基培养,pH为7.2-7.4；二倍稀释法均用肉汤培养基,pH 为7.0。

1.3方法  将实施例1-3中本发明的红茂草提取物灌注液用管碟法进行试验,并采用河北远征药业生产的双黄连注射液作为对照，抑菌圈的大小表示抑菌作用的强弱；用二倍稀释法测定红茂草提取物灌注液的最低抑菌浓度，抑菌浓度的高低表示抑菌作用的弱强。

1.4结果 

经过预实验确定实施例3的红茂草提取物灌注液抑菌效果最好。以下各试验均以实施例3得到的红茂草提取物灌注液进行试验。

试验结果表明, 本发明的红茂草提取物灌注液对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、大肠埃希氏菌、绿脓杆菌、沙门菌和克雷伯氏菌的均有抑制作用，结果见表1。

表1中药灌注液的体外抑菌效果比较

。

从红茂草提取物灌注液的体外抑菌试验和体内抗菌活性试验结果可以看出，本发明的红茂草提取物灌注液的抑菌作用较双黄连注射液强,特别是对大肠埃希氏菌，故对奶牛临床型乳腺炎有治疗作用。

1.5、抑菌作用

1.5.1抑菌实验：采用平板稀释法，将红茂草提取物灌注液用无菌蒸馏水进行倍比稀释，稀释成0.30mg/ml、0.26 mg/ml、0.22 mg/ml、0.18 mg/ml、0.14 mg/ml、0.10 mg/ml 6个浓度,另设空白对照(CK)进行测定。然后用无菌吸管将稀释液分别定量加入到无菌培养皿中, 与定量倒入的培养基充分混匀, 静置凝固制成含药液平板。按实验所需剂量, 用移液管分别吸取定量被试菌液, 涂于平板上, 置37℃恒温箱内培养1-2d, 观察菌落生长情况, 以平板菌落计数法计算菌落数, 另取一系列不加任何药液的平板作为空白对照(CK)。以肉眼观测完全没有菌落生长的最低生物碱浓度作为该药物的最小抑菌浓度(MIC), 重复实验3次。抑菌实验结果见表2。

表2不同浓度红茂草提取物灌注液的抑菌结果

。

由表2可知，大肠埃希氏杆菌的MIC为0.18mg/ml；金黄色葡萄球菌的MIC为0.14mg/ml；粪肠球菌的MIC为0.30mg/ml。

2、急性毒性试验

2.1试验药品：本发明实施例3制备的红茂草提取物灌注液。 

2.2试验动物：体重18-21g的健康小白鼠60只,雌雄各半。

2.3试验方法：将小白鼠随机分成5 个剂量组和1个健康对照组,每组10只。将本发明的红茂草提取物灌注液按等比级数配成一定剂量浓度,腹腔注射给药。给药后观察7d ,统计死亡率,计算LD₅₀。

2.4试验结果及结论：给药后观察7d ,统计死亡率,按改良寇氏法计算出本发明的红茂草提取物灌注液的LD₅₀为3234mg/kg，95%置信区间为3188.55-3299.66mg/kg。所以属于基本无毒。

3、应用本发明的红茂草提取物灌注液治疗临床型乳牛乳腺炎的具体情况如下：

3.1试验药品：本发明实施例1-3制备的红茂草提取物灌注液。对照药：双黄连注射液10ml、支，江西创导动物保健品有限公司生产。

3.2临床型乳牛乳腺炎治疗试验

3.2.1试验动物：兰州市段家滩奶牛繁殖场和伏龙坪奶牛场12例（18个乳区），临床型乳腺炎患病牛。乳腺炎的确诊: ①外观有红、肿、热、痛感,乳汁稀薄或有血丝；②LMT 现场诊断确诊：取乳腺炎乳区的乳样,37℃培养24h后再挑选可疑菌落继续纯化培养48h，不长菌者可认定无菌，如有细菌生长即做出细菌鉴定。

3.2.2试剂：乳腺炎诊断液(LMT) 由中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所生产；70g/L血琼脂平皿及牛肉汤培养基自制。

3.2.3方法：在无菌条件下将红茂草提取物灌注液灌注成每支50ml的溶液（红茂草提取物质量百分比含量为30%），将患病乳区乳汁挤干，注入红茂草提取物灌注液50ml，每日2次，3天为一疗程，对照药按照说明书方法使用。

3.2.4治愈判定标准：①临床症状消失,乳汁正常；②LMT诊断阴性。

3.2.5治疗结果：用该药治疗12头，按实例1、2、3、制备的与对照药物，各3头。其中，实施例3的红茂草提取物灌注液1个疗程全部治愈，治愈率100%；实施例1和2的红茂草提取物灌注液及对照药均治愈1例，好转1例。治疗前取患病乳牛乳样经细菌培养鉴定,结果其中细菌为链球菌和金黄色葡萄球菌。

由上述治疗结果证明，本发明的红茂草提取物灌注液对临床型乳牛乳腺炎的治愈率较高，并且具有消肿快、回奶迅速、毒性低等特点，且其中实施例3的红茂草提取物灌注液的效果最好。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种红茂草提取物灌注液的制备方法：其特征在于：将红茂草加水煎熬，合并滤液浓缩，得到浓缩液；之后用乙醇醇提，去乙醇后在药液中加入苯甲醇、吐温-80，加注射用水至全量，杀菌，得到本发明的红茂草提取物灌注液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述加水煎熬是加入2-6倍质量的水，煎熬1-4小时，煎熬3次。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述加水煎熬是加入2倍质量的水，煎熬1小时，煎熬3次。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述乙醇醇提是首先加入1倍浓缩液质量的乙醇冷藏沉淀4天，过滤弃沉淀，在滤液中依次再加2倍、3倍浓缩液质量的乙醇，冷藏沉淀2天，弃沉淀物。

5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于：所述乙醇醇提后用氢氧化钠调节pH至10。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述在药液中加入苯甲醇、吐温-80和注射用水后，调节pH值至6-7。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述杀菌是在100℃灭菌30分钟。

8.应用权利要求1-7制备的红茂草提取物灌注液。

9.权利要求1-7任一所述的红茂草提取物灌注液在制备治疗奶牛乳腺炎的药物中的应用。