CN104027816B - 一种可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体及其合成方法 - Google Patents
一种可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体及其合成方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体及其合成方法，先对端甲氧基聚乙二醇进行胱胺化改性，得到胱胺化mPEG；接着利用碳二亚胺法将RAFT聚合链转移剂键接于胱胺化聚乙二醇链端，获得大分子RAFT链转移剂；随后实施RAFT聚合，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物；最后去除保护基(叔丁氧羰基)，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚丙烯酰肼三嵌段共聚物。该合成方法原料易得，且反应条件温和，得到的载体中各段聚合物分子量和链长度易控制，载阿霉素后能够自组装成纳米粒、药效高，实现了化疗药物和基因药物的共同装载。
Description
技术领域
本发明属于生物医用材料领域，具体涉及一种可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体及其合成方法。
背景技术
化疗是临床肿瘤治疗的主要策略之一，它主要是利用循环***将细胞毒性的化学药物递送至病变部位，同时不可避免地给身体中正常细胞带来毒副作用。化疗药物的疗效和毒副作用均与施用剂量密切相关。因此，如何提高化疗药物疗效并避免其毒副作用是始终是肿瘤化疗最关心的问题。目前，开发分子靶向药物和药物递送体系就成为研究热点。其中，分子靶向药物因开发困难和临床疗效远逊于预期等问题，进展相对缓慢；而基于生物材料的药物递送体系因载药量大、适用药物种类多、生物相容性好、可生物降解等优点，成为研究重点，已开发出纳米粒、纳米凝胶、聚合物-药物偶联物、纳米胶束等载体形式。在药物递送体系开发中，普遍通过聚乙二醇修饰载体，以避免载体在血液中循环时被免疫***快速清除掉，利于载体在肿瘤区的富集。然而，聚乙二醇修饰也降低了载体与细胞相互作用，使载体经胞吞作用进入肿瘤细胞内或从内涵体内逃逸进入细胞质变得困难。可见，适时将载体上修饰的聚乙二醇去掉，将利于提高药物疗效。
阿霉素是临床上广泛应用的抗肿瘤药物，对肺癌、乳腺癌、膀胱癌等均有很好的疗效。与大多数药物一样，阿霉素水溶性和选择性均差，临床上多以其盐酸盐形式，存在生物利用度低、半衰期短、毒副作用明显等缺点，严重制约其临床疗效。因此，将其装载于各种形式的药物载体中，将可有效缓解/克服这些缺点。然而，这仍无法解决阿霉素的耐药性问题。耐药性的产生通常是因为肿瘤细胞表达某种蛋白如P-gp蛋白时将药物泵出细胞外以避免其毒性作用。近年来，基因治疗被视为提高化疗疗效和从根本上消除耐药性的有前景的方法，如siRNA法。它可以通过沉默肿瘤细胞产生的耐药性蛋白，实现化疗药物在肿瘤细胞内的聚集，发挥治疗作用。然而，基因药物的递送更是一个挑战性难题，因为它通常荷负电，极易被免疫***清除而无法发挥治疗作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体及其合成方法，该合成方法原料易得，且反应条件温和，得到的载体中各段聚合物分子量和链长度易控制，载阿霉素后能够自组装成纳米粒、药效高，实现了化疗药物和基因药物的共同装载。
为达到上述目的，本发明可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体的合成方法，包括如下步骤：
1)mPEG大分子RAFT链转移剂的合成：
将胱胺化端甲氧基聚乙二醇溶于无水有机溶剂中，然后在氮气氛保护下向其中加入带一个羧基的RAFT链转移剂、4-二甲氨基吡啶以及二环己基碳二亚胺，再在室温反应24小时～72小时，得到反应液；向反应液中加入冷***使反应液中析出固体，将反应液中的固体分离后收集，即得mPEG大分子RAFT链转移剂；其中，胱胺化端甲氧基聚乙二醇、带一个羧基的RAFT链转移剂、4-二甲氨基吡啶和二环己基碳二亚胺的摩尔比为1：(2～20)：1：(4～40)；
2)mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA的合成：
将mPEG大分子RAFT链转移剂、N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺和引发剂溶于无水无氧有机溶剂中，然后于60℃～65℃反应24小时～48小时，得到反应液；反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA；其中，mPEG大分子RAFT链转移剂和N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺的摩尔比为10：(100～600)；
3)N-叔丁氧羰基丙烯酰肼的合成：
将叔丁氧羰基肼溶于0～4℃的水中，然后在搅拌下滴加丙烯酰氯有机溶液，同时调节pH值至8～9，并在室温反应4～10小时，最后将得到的产物用二氯甲烷萃取、重结晶并真空干燥，得到N-叔丁氧羰基丙烯酰肼；其中，叔丁氧羰基肼与丙烯酰氯有机溶液中的丙烯酰氯的摩尔比为1:1.1；
4)mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA的合成：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、N-叔丁氧羰基丙烯酰肼和引发剂溶于无水无氧有机溶剂中，然后于60℃～65℃反应24小时～48小时，得到反应液；反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA与N-叔丁氧羰基丙烯酰肼的摩尔比为5：(100～500)；
5)将mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA上的叔丁氧羰基保护基脱除，即得到可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体。
所述的胱胺化端甲氧基聚乙二醇采用如下步骤合成：
a)将分子量为800～4000Da的端甲氧基聚乙二醇、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯溶于无水甲苯中，在氮气氛下于85℃反应48小时，然后用无水正己烷沉淀出固体，收集固体真空干燥，得到2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；其中，端甲氧基聚乙二醇、二月桂酸二丁基锡以及2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯的摩尔比为1：(0.02～0.08)：(3～8)；
b)将2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性mPEG溶于蒸馏水中，然后在60℃反应6小时，最后将得到的反应液经透析和冻干，得到胱胺化端甲氧基聚乙二醇。
所述的步骤1)中带一个羧基的RAFT链转移剂为S-1-十二烷基-S'-(α,α'-二甲基-α″-乙酸)三硫代碳酸酯、4-氰基-4-[(十二烷基硫烷基硫羰基)硫烷基]戊酸、4-氰基-4-(硫代苯甲酰)戊酸或4-氰基戊酸二硫代苯甲酸。
所述的步骤1)中每升无水有机溶剂中溶解5g～40g胱胺化端甲氧基聚乙二醇，步骤2)中每升无水无氧有机溶剂中溶解50g～150g的mPEG大分子RAFT链转移剂，步骤4)中每升无水无氧有机溶剂溶解50g～200g的mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA。
所述的步骤2)中N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺与引发剂的摩尔比为(100～600)：1，步骤4)中N-叔丁氧羰基丙烯酰肼与引发剂的摩尔比为(100～500)：1。
所述的步骤2)和步骤4)中无水无氧有机溶剂为无水无氧二氧六环、无水无氧四氢呋喃或无水无氧二甲基甲酰胺。
所述的步骤2)和步骤4)中引发剂为偶氮二异丁腈或4,4'-偶氮双(氰基戊酸)。
所述的步骤5)将mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA上的叔丁氧羰基保护基脱除的方法为：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA溶于无水有机溶剂中，于0℃滴加到体积比为1:1的三氟乙酸和二氯甲烷混合溶剂中，然后升至室温反应5小时；减压蒸馏去除溶剂，再向得到的固体中加入碳酸氢钠水溶液进行中和处理，接着装入截留分子量为3500Da的透析袋中对质量浓度为0.25％的氨水透析48小时，最后冻干，即得到可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA和三氟乙酸的摩尔比为1：(15～40)。
所述的步骤1)以及步骤5)中的无水有机溶剂为无水二氯甲烷、无水氯仿、无水二氧六环或无水四氢呋喃。
一种所述的方法合成的可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体，化学名称为端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚丙烯酰肼三嵌段共聚物，结构式为：
所述的步骤3)中滴加的丙烯酰氯有机溶液中的溶剂为氯仿、二氯甲烷或二氧六环。
所述的步骤a)中每100毫升无水甲苯中溶解5g～30g的端甲氧基聚乙二醇，步骤b)中每100毫升蒸馏水中溶解5g～20g的2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG。
所述的步骤5)中每升无水有机溶剂中溶解50g～200g的mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA；
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
本发明将能够实现载体隐形的聚乙二醇段通过二硫键与另外两段(侧酰肼段和阳离子段)连接在一起，该二硫键对肿瘤细胞内高谷胱甘肽浓度带来的还原性环境敏感，可响应谷胱甘肽而断裂，脱除聚乙二醇段，利于载体从内涵体向细胞质内逃逸，避免溶酶体的酶解作用，因此，本发明能够提高药物效果。而且，本发明合成的载体能够溶于水，因此，本发明载体的侧酰肼段装载阿霉素以及阳离子段装载siRNA时能够在水中进行，避免有机溶剂残留或有机溶剂对siRNA的潜在副作用。另外，本发明载体通过其侧酰肼基团和阿霉素上羰基形成腙键，键接于载体上，因阿霉素疏水性，赋予载体-阿霉素偶联物呈现两亲性性质，因此能够自组装成纳米粒；同时，键接阿霉素的腙键对肿瘤内酸性环境敏感，一旦载药体系进入肿瘤细胞，就能很快释放药物，短时间内提高药物有效浓度，从而提高药物疗效。本发明载体在装载阿霉素后由于能够自组装形成纳米粒，而位于三嵌段共聚物中间段的阳离子段能够与siRNA通过静电作用形成复合物，覆盖于内核纳米粒上，获得最外层为聚乙二醇隐形层的结构稳定的核壳结构纳米粒，实现化疗药物和基因药物的共同装载。
最后，本发明原料易得，反应温度在100℃以下，因此，反应条件温和，且各段聚合物分子量和链长度易控制。
附图说明
图1是本发明的实施例1中的可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体的合成路线示意图。
图2是实施例1制备的可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体的1H-NMR谱图。
图3是实施例1合成的可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体装载阿霉素后自组装纳米粒的粒径分布图。
图4是实施例1合成的可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体共载阿霉素和FAM标记siRNA的纳米粒进入乳腺癌细胞MCF-7内的激光共聚焦荧光照片；其中，a为DAPI染色的细胞核的荧光照片，b为细胞核处的阿霉素荧光照片，c为FAM标记的siRNA进入细胞后的荧光照片，d图为a-c的组合图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作进一步描述。
参见图1，本发明对单甲氧基聚乙二醇进行胱胺化改性后键接小分子RAFT链转移剂，获得聚乙二醇大分子RAFT链转移剂，以阳离子型单体N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺和可去除保护基叔丁氧羰基的单体N-叔丁氧羰基丙烯酰肼为原料，经两步RAFT聚合和去除保护基等过程，制得可去除聚乙二醇的端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚丙烯酰肼三嵌段共聚物。
进一步结合本发明附图及实施例对本法作进一步行详细说明，但并不限于此。
实施例1：
1)胱胺化端甲氧基聚乙二醇的合成：
将干燥的分子量为800Da的端甲氧基聚乙二醇(简写为mPEG)、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯溶于无水甲苯中，在氮气氛下于85℃下反应48小时，然后在无水正己烷中沉淀3次，得到的固体真空干燥，即得2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；其中，所加入的mPEG、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯的摩尔比为1：0.02：4，每100毫升无水甲苯中溶解10g的mPEG；
将2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG溶于蒸馏水中，然后在60℃反应6小时，最后将得到的反应液经透析和冻干，得到白色粉末状的胱胺化端甲氧基聚乙二醇(简称胱胺化mPEG)；其中，每100毫升蒸馏水中溶解5g的2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；
2)mPEG大分子RAFT链转移剂的合成：
将胱胺化mPEG溶于无水二氯甲烷中，然后在氮气氛保护下向其中加入S-1-十二烷基-S'-(α,α'-二甲基-α″-乙酸)三硫代碳酸酯(DDACT)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)和二环己基碳二亚胺(DCC)，再在室温反应48小时，得到反应液；向反应液中加入冷***使反应液中析出固体，将反应液中的固体分离后收集，得到淡黄色固体产物mPEG大分子RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-CTA)；其中，胱胺化mPEG、DDACT、DMAP以及DCC的摩尔比为1：10：1：20，每升无水二氯甲烷中溶解20g胱胺化mPEG；
3)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂的合成：
将mPEG-S-S-CTA、N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺(DMAPMA)和偶氮二异丁腈溶于无水无氧二氧六环中，然后于60℃反应48小时，得到反应液；反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA)；其中，mPEG-S-S-CTA、DMAPMA和偶氮二异丁腈的摩尔比为10：200：1，每升无水无氧二氧六环中溶解50g的mPEG-S-S-CTA；
4)N-叔丁氧羰基丙烯酰肼的合成：
将叔丁氧羰基肼溶于0℃的水中形成1mol/L的溶液，然后在搅拌下滴加5mol/L的丙烯酰氯氯仿溶液，同时用2mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH值至8～9，并在室温反应10小时，最后将得到的产物用二氯甲烷萃取、重结晶并真空干燥，得到N-叔丁氧羰基丙烯酰肼；其中，叔丁氧羰基肼与丙烯酰氯氯仿溶液中的丙烯酰氯的摩尔比为1:1.1；重结晶采用二氯甲烷溶剂；
5)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物的合成：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、N-叔丁氧羰基丙烯酰肼(BocAAH)和偶氮二异丁腈溶于无水无氧二氧六环中，然后于60℃反应48小时，得到反应液；反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA)；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、BocAAH以及偶氮二异丁腈的摩尔比为5：100：1，每升无水无氧二氧六环中溶解150g的mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA；
6)去除三嵌段共聚物上的保护基——叔丁氧羰基：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA溶于无水二氯甲烷中，于0℃滴加于体积比为1：1的无水的三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶剂中，然后升至室温反应5小时，反应结束后减压蒸馏去除溶剂，再向得到的固体中加入质量浓度为1％的碳酸氢钠水溶液进行中和处理，接着装入截留分子量为3500Da的透析袋中对质量浓度为0.25％的氨水透析48小时，最后冻干，即得到产物可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA和三氟乙酸的摩尔比为1：15，每升混合溶剂中溶解50g的mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA。
本实施例合成的可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体的化学名称为端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚丙烯酰肼三嵌段共聚物，其1H-NMR谱图见图2。从图2可以看出，各个共聚物组分质子的化学位移均得到了很好的鉴定，表明该共聚物的合成是成功的。
本实施例合成的可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体装载阿霉素后，呈现两亲性性质，在水中可自组装成为纳米粒，动态光散射法测得的粒径分布图见图3。由图3可以看出，粒径分布范围为100-300纳米，集中于200纳米，粒径分布范围窄，比较理想。
本实施例合成的可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体共装载阿霉素和绿色荧光剂FAM标记的Pgp siRNA后形成的纳米粒可经胞吞作用有效进入细胞内。其装载方法是将基因药物和装载阿霉素后的可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体混合，经涡旋振荡器混合形成复合物，实现基因药物的装载。
图4a中的B为DAPI染色的细胞核发出的荧光，图4b中的R为细胞核处的阿霉素发出的荧光，图4c中的G为FAM标记的Pgp siRNA进入细胞后的发出的荧光，将图4a-4c组合后得到图4d，由图4d可以看出，可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体共载阿霉素和FAM标记的Pgp siRNA后阿霉素和Pgp siRNA均可有效进入入乳腺癌细胞MCF-7内，分布于入乳腺癌细胞MCF-7的细胞核周围，可见合成的载体可用于阿霉素和siRNA的共同装载和递送。
实施例2：
1)胱胺化端甲氧基聚乙二醇的合成：
将干燥的分子量为2000Da的端甲氧基聚乙二醇(简写为mPEG)、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯溶于无水甲苯中，在氮气氛下于85℃氮气氛下反应48小时，然后在无水正己烷中沉淀3次，得到的固体真空干燥，即得2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；其中，所加入的mPEG、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯的摩尔比为1：0.04：4；每100毫升的无水甲苯中溶解20g的mPEG；
将2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG溶于蒸馏水中，然后在60℃反应6小时，最后将得到的反应液经透析和冻干，得到白色粉末状的胱胺化端甲氧基聚乙二醇(简称胱胺化mPEG)；其中，每100毫升蒸馏水中溶解15g的2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；
2)mPEG大分子RAFT链转移剂的合成：
将胱胺化mPEG溶于无水氯仿中，然后在氮气氛保护下向其中加入S-1-十二烷基-S'-(α,α'-二甲基-α″-乙酸)三硫代碳酸酯(DDACT)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)和二环己基碳二亚胺(DCC)，再在室温反应48小时，得到反应液；向反应液中加入冷***使反应液中析出固体，将反应液中的固体分离后收集，得到淡黄色固体产物mPEG大分子RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-CTA)；其中，胱胺化mPEG、DDACT、DMAP以及DCC的摩尔比为1：5：1：10，每升无水氯仿中溶解20g的胱胺化mPEG；
3)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂的合成：
将mPEG-S-S-CTA、N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺(DMAPMA)和4,4'-偶氮双(氰基戊酸)溶于无水无氧二氧六环中，然后于60℃反应48小时，得到反应液；反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA)；其中，mPEG-S-S-CTA、DMAPMA和4,4'-偶氮双(氰基戊酸)的摩尔比为10：300：1，每升无水无氧二氧六环中溶解150g的mPEG-S-S-CTA；
4)N-叔丁氧羰基丙烯酰肼的合成：
将叔丁氧羰基肼溶于4℃的水中形成1mol/L的溶液，然后在搅拌下滴加5mol/L的丙烯酰氯二氯甲烷溶液，同时用2mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH值至8～9，并在室温反应4小时，最后将得到的产物用二氯甲烷萃取、重结晶并真空干燥，得到N-叔丁氧羰基丙烯酰肼；其中，叔丁氧羰基肼与丙烯酰氯二氯甲烷溶液中的丙烯酰氯的摩尔比为1:1.1；重结晶采用二氯甲烷溶剂；
5)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物的合成：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、N-叔丁氧羰基丙烯酰肼(BocAAH)和4,4'-偶氮双(氰基戊酸)溶于无水无氧二氧六环中，然后于60℃反应48小时，得到反应液；反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA)；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、BocAAH以及4,4'-偶氮双(氰基戊酸)的摩尔比为5：150：1，每升无水无氧二氧六环中溶解200g的mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA；
6)去除三嵌段共聚物上的保护基——叔丁氧羰基：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA溶于无水二氧六环中，于0℃滴加体积比为1：1的无水的三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶剂中，然后升至室温反应5小时；反应结束后减压蒸馏去除溶剂，再向得到的固体中加入质量浓度为1％的碳酸氢钠水溶液进行中和处理，接着装入截留分子量为3500Da的透析袋中对质量浓度为0.25％的氨水透析48小时，最后冻干，即:4到可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA和三氟乙酸的摩尔比为1：40，每升混合溶剂中溶解50g的mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA。
实施例3：
1)胱胺化端甲氧基聚乙二醇的合成：
将干燥的分子量为2000Da的端甲氧基聚乙二醇(简写为mPEG)、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯溶于无水甲苯中，在氮气氛下于85℃氮气氛下反应48小时，然后在无水正己烷中沉淀3次，得到的固体真空干燥，即得到2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；其中，所加入的mPEG、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯的摩尔比为1：0.05：5；每100毫升无水甲苯中溶解10g的mPEG；
将2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG溶于蒸馏水中，然后在60℃反应6小时，最后将得到的反应液经透析和冻干，得到白色粉末状的胱胺化端甲氧基聚乙二醇(简称胱胺化mPEG)；其中，每100毫升蒸馏水中溶解10g的2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；
2)mPEG大分子RAFT链转移剂的合成：
将胱胺化mPEG溶于无水四氢呋喃中，然后在氮气氛保护下向其中加入S-1-十二烷基-S'-(α,α'-二甲基-α″-乙酸)三硫代碳酸酯(DDACT)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)和二环己基碳二亚胺(DCC)，再在室温反应48小时，得到反应液；向反应液中加入冷***使反应液中析出固体，将反应液中的固体分离后冻干，得到淡黄色固体产物mPEG大分子RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-CTA)；其中，mPEG、DDACT、DMAP以及DCC的摩尔比为1：15：1：30，每升无水四氢呋喃中溶解25g的胱胺化mPEG；
3)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂的合成：
将mPEG-S-S-CTA、N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺(DMAPMA)和偶氮二异丁腈溶于无水无氧四氢呋喃中，然后于60℃反应48小时，得到反应液；反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA)；其中，mPEG-S-S-CTA、DMAPMA以及偶氮二异丁腈的摩尔比为10：400：1，每升无水无氧四氢呋喃中溶解125g的mPEG-S-S-CTA；
4)N-叔丁氧羰基丙烯酰肼的合成：
将叔丁氧羰基肼溶于2℃的水中形成1mol/L的溶液，然后在搅拌下滴加5mol/L的丙烯酰氯二氧六环溶液，同时用2mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH值至8～9，并在室温反应8小时，最后将得到的产物用二氯甲烷萃取、重结晶并真空干燥，得到N-叔丁氧羰基丙烯酰肼；其中，叔丁氧羰基肼与丙烯酰氯二氧六环溶液中的丙烯酰氯的摩尔比为1:1.1；重结晶采用二氯甲烷溶剂；
5)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物的合成：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、N-叔丁氧羰基丙烯酰肼(BocAAH)和偶氮二异丁腈溶于无水无氧四氢呋喃中，然后于60℃反应48小时，得到反应液；反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA)；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、BocAAH以及偶氮二异丁腈的摩尔比为5：150：1，每升无水无氧四氢呋喃中溶解120g的mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA；
6)去除三嵌段共聚物上的保护基——叔丁氧羰基：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA溶于无水四氢呋喃中，于0℃滴加于体积比为1：1的无水的三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶剂中，然后升至室温反应5小时；反应结束后减压蒸馏去除溶剂，再向得到的固体中加入质量浓度为1％的碳酸氢钠水溶液进行中和处理，接着装入截留分子量为3500Da的透析袋中对质量浓度为0.25％的氨水透析48小时，最后冻干，即得到可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA和三氟乙酸的摩尔比为1：15，每升混合溶剂中溶解50g的mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA。
实施例4：
1)胱胺化端甲氧基聚乙二醇的合成：
将干燥的分子量为4000Da的端甲氧基聚乙二醇(简写为mPEG)、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯溶于无水甲苯中，在氮气氛下于85℃反应48小时，然后在无水正己烷中沉淀3次，得到的固体真空干燥，即得到2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；其中，所加入的mPEG、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯的摩尔比为1：0.02：4；每100毫升无水甲苯中溶解5g的mPEG；
将2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG溶于蒸馏水中，然后在60℃反应6小时，最后将得到的反应液经透析和冻干，得到白色粉末的胱胺化端甲氧基聚乙二醇(简称胱胺化mPEG)；其中，每100毫升蒸馏水中溶解10g的2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；
2)mPEG大分子RAFT链转移剂的合成：
将胱胺化mPEG溶于无水二氯甲烷中，然后在氮气氛保护下向其中加入S-1-十二烷基-S'-(α,α'-二甲基-α″-乙酸)三硫代碳酸酯(DDACT)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)和二环己基碳二亚胺(DCC)，再在室温反应48小时，得到向反应液中加入冷***使反应液中析出固体；将反应液中的固体分离后收集，得到淡黄色固体产物mPEG大分子RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-CTA)；其中，胱胺化mPEG、DDACT、DMAP以及DCC的摩尔比为1：8：1：16，每升无水二氯甲烷中溶解25g胱胺化mPEG；
3)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂的合成：
将mPEG-S-S-CTA、N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺(DMAPMA)和偶氮二异丁腈溶于无水无氧二氧六环中，然后于60℃反应48小时，得到反应液；反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA)；其中，mPEG-S-S-CTA、DMAPMA和偶氮二异丁腈的摩尔比为10：200：1，每升无水无氧二氧六环中溶解130g的mPEG-S-S-CTA；
4)N-叔丁氧羰基丙烯酰肼的合成：
将叔丁氧羰基肼溶于0℃的水中形成1mol/L的溶液，然后在搅拌下滴加5mol/L的丙烯酰氯氯仿溶液，同时用2mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH值至8～9，并在室温反应6小时，最后将得到的产物用二氯甲烷萃取、重结晶并真空干燥，得到N-叔丁氧羰基丙烯酰肼；其中，叔丁氧羰基肼与丙烯酰氯氯仿溶液中的丙烯酰氯的摩尔比为1:1.1；重结晶采用二氯甲烷溶剂；
5)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物的合成：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、N-叔丁氧羰基丙烯酰肼(BocAAH)和偶氮二异丁腈溶于无水无氧二氧六环中，然后于60℃反应48小时，得到反应液；反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA)；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、BocAAH以及偶氮二异丁腈的摩尔比为5：500：1，每升无水无氧二氧六环中溶解60g的mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA；
6)去除三嵌段共聚物上的保护基——叔丁氧羰基：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA溶于无水二氯甲烷中，于0℃滴加于体积比为1：1的无水的三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶剂中，然后升室温后反应5小时；反应结束后减压蒸馏去除溶剂，再向得到的固体中加入质量浓度为1％的碳酸氢钠水溶液进行中和处理，接着装入截留分子量为3500Da的透析袋中对质量浓度为0.25％的氨水透析48小时，最后冻干，即得到产物可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA和三氟乙酸的摩尔比为1：20，每升混合溶剂中溶解70g的mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA。
实施例5：
1)胱胺化端甲氧基聚乙二醇的合成：
将干燥的分子量为4000Da的端甲氧基聚乙二醇(简写为mPEG)、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯溶于无水甲苯中，在氮气氛下于85℃氮气氛下反应48小时，然后在无水正己烷中沉淀3次，得到的固体真空干燥，即得到2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；其中，所加入的mPEG、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯的摩尔比为1：0.03：4；每100毫升无水甲苯中溶解5g的mPEG；
将2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG溶于蒸馏水中，然后在60℃反应6小时，最后将得到的反应液经透析和冻干，得到白色粉末状的胱胺化端甲氧基聚乙二醇(简称胱胺化mPEG)；其中，每100毫升蒸馏水中溶解10g的2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；
2)mPEG大分子RAFT链转移剂的合成：
将胱胺化mPEG溶于无水氯仿中，然后在氮气氛保护下向其中加入S-1-十二烷基-S'-(α,α'-二甲基-α″-乙酸)三硫代碳酸酯(DDACT)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)和二环己基碳二亚胺(DCC)，再在室温反应48小时，得到反应液；向反应液中加入冷***使反应液中析出固体沉淀，将反应液中的固体分离后冻干，得到淡黄色固体产物mPEG大分子RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-CTA)；其中，胱胺化mPEG、DDACT、DMAP以及DCC的摩尔比为1：12：1：24，每升无水氯仿中溶解35g的胱胺化mPEG；
3)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂的合成：
将mPEG-S-S-CTA、N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺(DMAPMA)和4,4'-偶氮双(氰基戊酸)溶于无水无氧二甲基甲酰胺中，然后于60℃反应48小时，得到反应液；反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA)；其中，mPEG-S-S-CTA、DMAPMA以及4,4'-偶氮双(氰基戊酸)的摩尔比为10：600：1，每升无水无氧二甲基甲酰胺中溶解50g的mPEG-S-S-CTA；
4)N-叔丁氧羰基丙烯酰肼的合成：
将叔丁氧羰基肼溶于2℃的水中形成1mol/L的溶液，然后在搅拌下滴加5mol/L的丙烯酰氯二氧六环溶液，同时用2mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH值至8～9，并在室温反应8小时，最后将得到的产物用二氯甲烷萃取、重结晶并真空干燥，得到N-叔丁氧羰基丙烯酰肼；其中，叔丁氧羰基肼与丙烯酰氯二氧六环溶液中的丙烯酰氯的摩尔比为1:1.1；重结晶采用二氯甲烷溶剂；
5)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物的合成：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、N-叔丁氧羰基丙烯酰肼(BocAAH)和4,4'-偶氮双(氰基戊酸)溶于无水无氧二甲基甲酰胺中，然后于60℃反应48小时，得到反应液；反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA)；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、BocAAH以及4,4'-偶氮双(氰基戊酸)的摩尔比为5：400：1，每升无水无氧二甲基甲酰胺中溶解50g的mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA。
6)去除三嵌段共聚物上的保护基——叔丁氧羰基：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA溶于无水二氯甲烷中，于0℃滴加于体积比为1：1的无水的三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶剂中，然后升至室温反应5小时；反应结束后减压蒸馏去除溶剂，再向得到的固体中加入质量浓度为1％的碳酸氢钠水溶液进行中和处理，接着装入截留分子量为3500Da的透析袋中对质量浓度为0.25％的氨水透析48小时，最后冻干，即得到产物可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA和三氟乙酸的摩尔比为1：30，每升混合溶剂中溶解50g的mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA。
实施例6：
1)胱胺化端甲氧基聚乙二醇的合成：
将干燥的分子量为2000Da的端甲氧基聚乙二醇(简写为mPEG)、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯溶于无水甲苯中，在氮气氛下于85℃氮气氛下反应48小时，然后在无水正己烷中沉淀3次，得到的固体真空干燥，即得到2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；其中，所加入的mPEG、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯的摩尔比为1：0.06：4；每100毫升无水甲苯中溶解8g的mPEG；
将2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG溶于蒸馏水中，然后在60℃反应6小时，最后将得到的反应液经透析和冻干，得到白色粉末状的胱胺化端甲氧基聚乙二醇(简称胱胺化mPEG)；其中，每100毫升蒸馏水中溶解12g的2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；
2)mPEG大分子RAFT链转移剂的合成：
将胱胺化mPEG溶于无水二氧六环中，然后在氮气氛保护下向其中加入S-1-十二烷基-S'-(α,α'-二甲基-α″-乙酸)三硫代碳酸酯(DDACT)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)和二环己基碳二亚胺(DCC)，再在室温反应48小时，得到反应液；向反应液中加入冷***使反应液中析出固体，将反应液中的固体分离后收集，得到淡黄色固体产物mPEG大分子RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-CTA)；其中，胱胺化mPEG：DDACT：DMAP：DCC的摩尔比为1：15：1：30，每升无水二氧六环中溶解32g的胱胺化mPEG；
3)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂的合成：
将mPEG-S-S-CTA、N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺(DMAPMA)和4,4'-偶氮双(氰基戊酸)溶于无水无氧二甲基甲酰胺中，然后于60℃反应48小时，得到反应液，反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA)；其中，mPEG-S-S-CTA：DMAPMA：4,4'-偶氮双(氰基戊酸)的摩尔比为10：420：1，每升无水无氧二甲基甲酰胺中溶解130g的mPEG-S-S-CTA；
4)N-叔丁氧羰基丙烯酰肼的合成：
将叔丁氧羰基肼溶于0℃的水中形成1mol/L的溶液，然后在搅拌下滴加5mol/L的丙烯酰氯氯仿溶液，同时用2mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH值至8～9，并在室温反应10小时，最后将得到的产物用二氯甲烷萃取、重结晶并真空干燥，得到N-叔丁氧羰基丙烯酰肼；其中，叔丁氧羰基肼与丙烯酰氯氯仿溶液中的丙烯酰氯的摩尔比为1:1.1；重结晶采用二氯甲烷溶剂；
5)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物的合成：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、N-叔丁氧羰基丙烯酰肼(BocAAH)和4,4'-偶氮双(氰基戊酸)溶于无水无氧二甲基甲酰胺中，然后于60℃反应48小时，得到反应液。反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA)；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、BocAAH以及4,4'-偶氮双(氰基戊酸)的摩尔比为5：180：1，每升无水无氧二甲基甲酰胺中溶解145g的mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA；
6)去除三嵌段共聚物上的保护基——叔丁氧羰基：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA溶于无水四氢呋喃中，于0℃滴加于体积比为1：1的无水的三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶剂中，然后升至室温后反应5小时；反应结束后减压蒸馏去除溶剂，再向得到的固体中加入质量浓度为1％的碳酸氢钠水溶液进行中和处理，接着装入截留分子量为3500Da的透析袋中对质量浓度为0.25％的氨水透析48小时，最后冻干，即得到产物可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA和三氟乙酸的摩尔比为1：18，每升混合溶剂中溶解60g的mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA。
实施例7：
1)胱胺化端甲氧基聚乙二醇的合成：
将干燥的分子量为1200Da的端甲氧基聚乙二醇(简写为mPEG)、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯溶于无水甲苯中，在氮气氛下于85℃反应48小时，在无水正己烷中沉淀3次，得到的固体真空干燥，即得到2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；其中，所加入的mPEG、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯的摩尔比为1：0.07：6；每100毫升无水甲苯中溶解25g的mPEG；
将2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG溶于蒸馏水中，然后在60℃反应6小时，最后将得到的反应液经透析和冻干后得到白色粉末状的胱胺化端甲氧基聚乙二醇(简称胱胺化mPEG)；其中，每100毫升蒸馏水中溶解20g的2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；
2)mPEG大分子RAFT链转移剂的合成：
将胱胺化mPEG溶于无水二氯甲烷中，然后在氮气氛保护下向其中加入4-氰基-4-[(十二烷基硫烷基硫羰基)硫烷基]戊酸、4-二甲氨基吡啶(DMAP)和二环己基碳二亚胺(DCC)，再在室温反应48小，得到反应液；向反应液中加入冷***使反应液中析出固体，将反应液中的固体分离后收集，得到淡黄色固体产物mPEG大分子RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-CTA)；其中，胱胺化mPEG、4-氰基-4-[(十二烷基硫烷基硫羰基)硫烷基]戊酸、DMAP以及DCC的摩尔比为1：8：1：16，每升无水二氯甲烷中溶解28g的胱胺化mPEG；
3)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂的合成：
将mPEG-S-S-CTA、N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺(DMAPMA)和4,4'-偶氮双(氰基戊酸)溶于无水无氧二氧六环中，然后于63℃反应48小时，得到反应液，反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA)；其中，mPEG-S-S-CTA、DMAPMA以及4,4'-偶氮双(氰基戊酸)的摩尔比为10：450：1，每升无水无氧二氧六环中溶解130g的mPEG-S-S-CTA；
4)N-叔丁氧羰基丙烯酰肼的合成：
将叔丁氧羰基肼溶于0℃的水中形成1mol/L的溶液，然后在搅拌下滴加5mol/L的丙烯酰氯氯仿溶液，同时用2mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH值至8～9，并在室温反应10小时，最后将得到的产物用二氯甲烷萃取、重结晶并真空干燥，得到N-叔丁氧羰基丙烯酰肼；其中，叔丁氧羰基肼与丙烯酰氯氯仿溶液中的丙烯酰氯的摩尔比为1:1.1；重结晶采用二氯甲烷溶剂；
5)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物的合成：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、N-叔丁氧羰基丙烯酰肼(BocAAH)和4,4'-偶氮双(氰基戊酸)溶于无水无氧二氧六环中，然后于63℃反应48小时，得到反应液，反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA)；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、BocAAH以及4,4'-偶氮双(氰基戊酸)的摩尔比为5：320：1，每升无水无氧二氧六环中溶解110g的mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA；
6)去除三嵌段共聚物上的保护基——叔丁氧羰基：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA溶于无水氯仿中，于0℃滴加于体积比为1：1的无水的三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶剂中，然后升至室温后反应5小时；反应结束后减压蒸馏去除溶剂，再向得到的固体中加入质量浓度为1％的碳酸氢钠水溶液进行中和处理，接着装入截留分子量为3500Da的透析袋中对质量浓度为0.25％的氨水透析48小时，最后冻干即得到产物可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA和三氟乙酸的摩尔比为1：21，每升混合溶剂横纵溶解90g的mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA。
实施例8：
1)胱胺化端甲氧基聚乙二醇的合成：
将干燥的分子量为1200Da的端甲氧基聚乙二醇(简写为mPEG)、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯溶于无水甲苯中，在氮气氛下于85℃反应48小时，在无水正己烷中沉淀3次，得到的固体真空干燥，即得到2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；其中，所加入的mPEG、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯的摩尔比为1：0.08：6；每100毫升无水甲苯中溶解30g的mPEG；
将2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG溶于蒸馏水中，然后在60℃反应6小时，最后将得到的反应液经透析和冻干后得到白色粉末状的胱胺化端甲氧基聚乙二醇(简称胱胺化mPEG)；其中，每100毫升蒸馏水中溶解20g的2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；
2)mPEG大分子RAFT链转移剂的合成：
将胱胺化mPEG溶于无水二氯甲烷中，然后在氮气氛保护下向其中加入4-氰基-4-(硫代苯甲酰)戊酸、4-二甲氨基吡啶(DMAP)和二环己基碳二亚胺(DCC)，再在室温反应24小时，得到反应液液；向反应液中加入冷***使反应液中析出固体，将反应液中的固体分离后收集，得到淡黄色固体产物mPEG大分子RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-CTA)；其中，胱胺化mPEG、4-氰基-4-(硫代苯甲酰)戊酸、DMAP以及DCC的摩尔比为1：2：1：4，每升无水二氯甲烷中溶解5g的胱胺化mPEG；
3)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂的合成：
将mPEG-S-S-CTA、N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺(DMAPMA)和4,4'-偶氮双(氰基戊酸)溶于无水无氧二氧六环中，然后于65℃反应24小时，得到反应液，反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA)；其中，mPEG-S-S-CTA、DMAPMA以及4,4'-偶氮双(氰基戊酸)的摩尔比为10：100：1，每升无水无氧二氧六环中溶解130g的mPEG-S-S-CTA；
4)N-叔丁氧羰基丙烯酰肼的合成：
将叔丁氧羰基肼溶于2℃的水中形成1mol/L的溶液，然后在搅拌下滴加5mol/L的丙烯酰氯氯仿溶液，同时用2mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH值至8～9，并在室温反应10小时，最后将得到的产物用二氯甲烷萃取、重结晶并真空干燥，得到N-叔丁氧羰基丙烯酰肼；其中，叔丁氧羰基肼与丙烯酰氯氯仿溶液中的丙烯酰氯的摩尔比为1:1.1；重结晶采用二氯甲烷溶剂；
5)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物的合成：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、N-叔丁氧羰基丙烯酰肼(BocAAH)和4,4'-偶氮双(氰基戊酸)溶于无水无氧二氧六环中，然后于65℃反应24小时，得到反应液，反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA)；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、BocAAH以及4,4'-偶氮双(氰基戊酸)的摩尔比为5：320：1，每升无水无氧二氧六环中溶解110g的mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA；
6)去除三嵌段共聚物上的保护基——叔丁氧羰基：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA溶于无水氯仿中，于0℃滴加于体积比为1：1的无水的三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶剂中，然后升至室温后反应5小时；反应结束后减压蒸馏去除溶剂，再向得到的固体中加入质量浓度为1％的碳酸氢钠水溶液进行中和处理，接着装入截留分子量为3500Da的透析袋中对质量浓度为0.25％的氨水透析48小时，最后冻干即得到产物可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA和三氟乙酸的摩尔比为1：21，每升混合溶剂横纵溶解160g的mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA。
实施例9：
1)胱胺化端甲氧基聚乙二醇的合成：
将干燥的分子量为1200Da的端甲氧基聚乙二醇(简写为mPEG)、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯溶于无水甲苯中，在氮气氛下于85℃反应48小时，在无水正己烷中沉淀3次，得到的固体真空干燥，即得到2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；其中，所加入的mPEG、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯的摩尔比为1：0.08：6；每100毫升无水甲苯中溶解30g的mPEG；
将2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG溶于蒸馏水中，然后在60℃反应6小时，最后将得到的反应液经透析和冻干后得到白色粉末状的胱胺化端甲氧基聚乙二醇(简称胱胺化mPEG)；其中，每100毫升蒸馏水中溶解20g的2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；
2)mPEG大分子RAFT链转移剂的合成：
将胱胺化mPEG溶于无水二氯甲烷中，然后在氮气氛保护下向其中加入4-氰基戊酸二硫代苯甲酸、4-二甲氨基吡啶(DMAP)和二环己基碳二亚胺(DCC)，再在室温反应72小，得到反应液；向反应液中加入冷***使反应液中析出固体，将反应液中的固体分离后收集，得到淡黄色固体产物mPEG大分子RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-CTA)；其中，胱胺化mPEG、4-氰基戊酸二硫代苯甲酸、DMAP以及DCC的摩尔比为1：20：1：40，每升无水二氯甲烷中溶解40g的胱胺化mPEG；
3)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂的合成：
将mPEG-S-S-CTA、N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺(DMAPMA)和4,4'-偶氮双(氰基戊酸)溶于无水无氧二氧六环中，然后于63℃反应35小时，得到反应液，反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)两嵌段共聚物RAFT链转移剂(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA)；其中，mPEG-S-S-CTA、DMAPMA以及4,4'-偶氮双(氰基戊酸)的摩尔比为10：150：1，每升无水无氧二氧六环中溶解130g的mPEG-S-S-CTA；
4)N-叔丁氧羰基丙烯酰肼的合成：
将叔丁氧羰基肼溶于2℃的水中形成1mol/L的溶液，然后在搅拌下滴加5mol/L的丙烯酰氯氯仿溶液，同时用2mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH值至8～9，并在室温反应10小时，最后将得到的产物用二氯甲烷萃取、重结晶并真空干燥，得到N-叔丁氧羰基丙烯酰肼；其中，叔丁氧羰基肼与丙烯酰氯氯仿溶液中的丙烯酰氯的摩尔比为1:1.1；重结晶采用二氯甲烷溶剂；
5)端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物的合成：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、N-叔丁氧羰基丙烯酰肼(BocAAH)和4,4'-偶氮双(氰基戊酸)溶于无水无氧二氧六环中，然后于63℃反应35小时，得到反应液，反应液经浓缩后用冷***沉淀沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚(N-叔丁氧羰基丙烯酰肼)三嵌段共聚物(简称mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA)；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、BocAAH以及4,4'-偶氮双(氰基戊酸)的摩尔比为5：320：1，每升无水无氧二氧六环中溶解110g的mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA；
6)去除三嵌段共聚物上的保护基——叔丁氧羰基：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA溶于无水氯仿中，于0℃滴加于体积比为1：1的无水的三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶剂中，然后升至室温后反应5小时；反应结束后减压蒸馏去除溶剂，再向得到的固体中加入质量浓度为1％的碳酸氢钠水溶液进行中和处理，接着装入截留分子量为3500Da的透析袋中对质量浓度为0.25％的氨水透析48小时，最后冻干即得到产物可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA和三氟乙酸的摩尔比为1：21，每升混合溶剂横纵溶解200g的mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA。
上述实施例1～9中冷***温度为-20℃，冻干温度为-40℃，真空干燥温度在30℃；反应体系浓缩时，浓缩到原来体积的三分之一到二分之一。
本发明中胱胺化端甲氧基聚乙二醇即为申请号为201310229284.7的中国专利实施例4的最终产物2-氨基乙基二硫乙氨酯聚乙二醇。
本发明能够同时装载阿霉素和siRNA，使化疗药物和基因药物同时发挥疗效，提高肿瘤治疗效果和降低毒副作用。另外，本发明载体中各段聚合物分子量和链长度易控制、反应条件温和、原料易得，载药前为水溶性，载药后具有两亲性，可自组装成纳米粒。
Claims (8)
1.一种可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)mPEG大分子RAFT链转移剂的合成：
将胱胺化端甲氧基聚乙二醇溶于无水有机溶剂中，然后在氮气氛保护下向其中加入带一个羧基的RAFT链转移剂、4-二甲氨基吡啶以及二环己基碳二亚胺，再在室温反应24小时～72小时，得到反应液；向反应液中加入冷***使反应液中析出固体，将反应液中的固体分离后收集，即得mPEG大分子RAFT链转移剂；其中，胱胺化端甲氧基聚乙二醇、带一个羧基的RAFT链转移剂、4-二甲氨基吡啶和二环己基碳二亚胺的摩尔比为1：(2～20)：1：(4～40)；
所述的胱胺化端甲氧基聚乙二醇采用如下步骤合成：
a)将分子量为800～4000Da的端甲氧基聚乙二醇、二月桂酸二丁基锡和2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯溶于无水甲苯中，在氮气氛下于85℃反应48小时，然后用无水正己烷沉淀出固体，收集固体真空干燥，得到2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性的mPEG；其中，端甲氧基聚乙二醇、二月桂酸二丁基锡以及2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯的摩尔比为1：(0.02～0.08)：(3～8)；
b)将2,2'-二硫代二乙基异氰酸酯改性mPEG溶于蒸馏水中，然后在60℃反应6小时，最后将得到的反应液经透析和冻干，得到胱胺化端甲氧基聚乙二醇；
所述的带一个羧基的RAFT链转移剂为S-1-十二烷基-S'-(α,α'-二甲基-α”-乙酸)三硫代碳酸酯、4-氰基-4-[(十二烷基硫烷基硫羰基)硫烷基]戊酸、4-氰基-4-(硫代苯甲酰)戊酸或4-氰基戊酸二硫代苯甲酸；
2)mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA的合成：
将mPEG大分子RAFT链转移剂、N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺和引发剂溶于无水无氧有机溶剂中，然后于60℃～65℃反应24小时～48小时，得到反应液；反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA；其中，mPEG大分子RAFT链转移剂和N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺的摩尔比为10：(100～600)；
3)N-叔丁氧羰基丙烯酰肼的合成：
将叔丁氧羰基肼溶于0℃～4℃的水中，然后在搅拌下滴加丙烯酰氯有机溶液，同时调节pH值至8～9，并在室温反应4小时～10小时，最后将得到的产物用二氯甲烷萃取、重结晶并真空干燥，得到N-叔丁氧羰基丙烯酰肼；其中，叔丁氧羰基肼与丙烯酰氯有机溶液中的丙烯酰氯的摩尔比为1:1.1；
4)mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA的合成：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA、N-叔丁氧羰基丙烯酰肼和引发剂溶于无水无氧有机溶剂中，然后于60℃～65℃反应24小时～48小时，得到反应液；反应液经浓缩后用冷***沉淀，再将沉淀分离并真空干燥，得到mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA与N-叔丁氧羰基丙烯酰肼的摩尔比为5：(100～500)；
5)将mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA上的叔丁氧羰基保护基脱除，即得到可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体，其结构式为：
2.根据权利要求1所述的可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体的合成方法，其特征在于：所述的步骤1)中每升无水有机溶剂中溶解5g～40g胱胺化端甲氧基聚乙二醇，步骤2)中每升无水无氧有机溶剂中溶解50g～150g的mPEG大分子RAFT链转移剂，步骤4)中每升无水无氧有机溶剂溶解50g～200g的mPEG-S-S-PDMAPMA-CTA。
3.根据权利要求1所述的可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体的合成方法，其特征在于：所述的步骤2)中N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺与引发剂的摩尔比为(100～600)：1，步骤4)中N-叔丁氧羰基丙烯酰肼与引发剂的摩尔比为(100～500)：1。
4.根据权利要求1所述的可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体的合成方法，其特征在于：所述的步骤2)和步骤4)中无水无氧有机溶剂为无水无氧二氧六环、无水无氧四氢呋喃或无水无氧二甲基甲酰胺。
5.根据权利要求1所述的可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体的合成方法，其特征在于：所述的步骤2)和步骤4)中引发剂为偶氮二异丁腈或4,4'-偶氮双(氰基戊酸)。
6.根据权利要求1所述的可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体的合成方法，其特征在于，所述的步骤5)将mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA上的叔丁氧羰基保护基脱除的方法为：
将mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA溶于无水有机溶剂中，于0℃滴加到体积比为1:1的三氟乙酸和二氯甲烷混合溶剂中，然后升至室温反应5小时；减压蒸馏去除溶剂，再向得到的固体中加入碳酸氢钠水溶液进行中和处理，接着装入截留分子量为3500Da的透析袋中对质量浓度为0.25％的氨水透析48小时，最后冻干，即得到可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体；其中，mPEG-S-S-PDMAPMA-PBocAAH-CTA和三氟乙酸的摩尔比为1：(15～40)。
7.根据权利要求6所述的可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体的合成方法，其特征在于：所述的步骤1)以及步骤5)中的无水有机溶剂为无水二氯甲烷、无水氯仿、无水二氧六环或无水四氢呋喃。
8.一种如权利要求1～7中任意一项权利要求所述的方法合成的可去聚乙二醇化的共装载阿霉素和siRNA载体，其特征在于，化学名称为端甲氧基聚乙二醇-聚(N-(3-二甲胺丙基)甲基丙烯酰胺)-聚丙烯酰肼三嵌段共聚物，结构式为：
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