CN103969393A - 用于化妆品中糖苷类中草药化合物含量测试的前处理方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于化妆品中糖苷类中草药化合物含量测试的前处理方法，可适用于水剂、霜剂和乳液，糖苷类中草药化合物采用反向液相色谱法测定含量，前处理方法为：用甲醇分散含糖苷类化合物的化妆品样品，加入正己烷单级萃取，弃去包含油脂成分的部分，和/或加入沉淀剂亚铁***水溶液及乙酸锌水溶液，离心，弃去包含大分子物质的部分；旋转蒸发，定容，待测。优点是：本发明提供的提取化妆品中化合物的前处理方法，提取分离过程简便，便于进一步浓缩，成本低，回收率高，适用性好，相较于普通前处理方法，目标峰的响应值更大，可用于测定化妆品中低含量的糖苷类化合物。

Description

用于化妆品中糖苷类中草药化合物含量测试的前处理方法

技术领域

本发明涉及用于化妆品中中草药化合物含量测试前处理的方法。

背景技术

天然化妆品是未来化妆品的发展趋势，越来越多的天然化合物、中草药成分逐渐成为化妆品产品的宣称热点。对于中草药成分的检测，需要通过前处理以便提高检出率。

参考《化妆品卫生规范》（2007版）（以下简称化妆品卫生规范）中对性激素的前处理以及国标GBT24800.2-2009（以下简称国标）中对膏霜类化妆品中四十一种糖皮质激素的前处理方法，将常规的前处理方法列于表1中。

国标及化妆品卫生规范中的方法，都是使用饱和氯化钠溶液将膏霜类化妆品样品预先分散后，使用有机溶剂对目标物进行提取。

而目前，在用反相液相色谱法检测化妆品之前常用的前处理方法存在以下几个主要问题：

（1）使用流动相直接处理化妆品样品，相当于对样品的直接稀释，样品的检出限较高；

（2）使用固相萃取小柱分离化妆品中目标物，样品处理成本高，且固相小柱处理量少，导致多个样品间的结果数据存在一定的***误差。

（3）使用饱和食盐水对水包油化妆品进行破乳处理，在用有机溶剂提取目标物，导致样品检出限高，且处理过的化妆品样品不适合浓缩处理。

鉴于上述问题，现有用于化妆品检测的前处理方法亟需优化，以满足化妆品检测要求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种化妆品中糖苷类中草药化合物含量测试比较通用的前处理方法。

本发明解决上述技术问题所采取的技术方案是：一种用于化妆品中糖苷类中草药化合物含量测试的前处理方法，所述的糖苷类中草药化合物采用液相色谱法测定含量，所述的前处理方法包括下述步骤：

（1）用甲醇分散含糖苷类中草药化合物的化妆品样品，加入正己烷单级萃取，弃去包含油脂成分的部分，和/或加入沉淀剂亚铁***水溶液及乙酸锌水溶液，离心，弃去包含大分子物质的部分；

（2）旋转蒸发，定容，待测。

本发明与常规化妆品前处理方法的主要区别之一在于采用甲醇分散膏霜类化妆品样品，在去除油脂和/或大分子物质后，再馏除甲醇溶剂。

使用正己烷萃取，目的是去除脂溶性较强的油脂、脂肪酸类化合物，通过萃取后移除上层液，即可弃去包含油脂成分的部分。由于水剂中成分较单一，无脂肪酸类化合物，故无需使用正己烷萃取

加入沉淀剂，目的是为下一步旋转蒸发去除样品干扰，通过离心使大分子物质沉淀，即可弃去包含大分子物质的部分。由于油包水体系霜剂中水溶性物质干扰较少，故无需使用沉淀剂。

但并不排除各种剂型均采用正己烷萃取与沉淀剂相结合的前处理方法。

最后，与用饱和氯化钠水溶液作为分散溶剂不同的是，采用甲醇作为溶剂，便于通过旋转蒸发对样品进行浓缩处理，降低了化妆品中糖苷类化合物的检出限。

所述的化妆品基体为水剂，霜剂（油包水体系）或乳液（水包油体系）。

步骤（1）中，对于霜剂或乳液，先用少量甲醇分散样品，然后加入余量甲醇，超声波辅助破乳；对于水剂，先用少量甲醇分散样品，在加入沉淀剂之后再加入余量甲醇，超声波辅助破乳，超声时间为5～12min。

以化妆品样品质量为2～5 g计，甲醇的加入量为5～30 mL，优选10～25 mL。

以化妆品样品质量为2～5 g计，亚铁***水溶液及乙酸锌水溶液的加入量各为10～100 μL，优选20～50 μL，亚铁***水溶液的浓度为5～20 wt%，优选8～15 wt%，乙酸锌水溶液的浓度为10～30 wt%，优选15～25 wt%。

沉淀剂浓度可以根据加入量进行调节。在加入沉淀剂之前，还可加入适量水以便沉淀剂发挥作用。

以化妆品样品质量为2～5 g计，正己烷的加入量为10～30 mL，优选15～25 mL。

加入正己烷后超声波辅助萃取3～8分钟。

步骤（2）中，旋转蒸发在真空及水浴条件下进行，水浴温度为55～65℃。

旋转蒸发是将分散溶剂甲醇基本蒸干，再用反向液相色谱法测定时所用的流动相进行定容。定容后，还可经0.45μm滤膜过滤。

所述的糖苷类中草药化合物包括红景天苷，人参皂苷，芍药苷，积雪草苷，羟基积雪草苷。

本发明的有益效果是：

本发明提供的提取化妆品中化合物的前处理方法，提取分离过程简便，便于进一步浓缩，成本低，回收率高，适用性好，相较于普通前处理方法，目标峰的响应值更大，可用于测定化妆品中低含量的糖苷类化合物。

附图说明

图1红景天苷水剂样品的对比色谱图，其中，曲线1为未经前处理的样品的色谱图，曲线2为经本发明的前处理方法得到的样品的色谱图。

具体实施方式

采用甲醇溶解化妆品样品，超声波辅助破乳，正己烷单级萃取化妆品中的油脂成分，配合超声波辅助萃取，和/或大分子沉淀剂沉淀，使用配备二极管阵列检测器（Photodiode Array Detector, DAD）的高效液相色谱（HPLC）对化妆品中常用的糖苷类化合物进行含量检测，同时配置了化妆品空白基体。下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。

按表2所示重量百分比称取各组分并按常规工艺制备水剂、乳液和霜剂化妆品，并向这些剂型的化妆品中加入糖苷类化合物，按每g化妆品（三种剂型）含有100，200或300μg糖苷类化合物，共得九个样品待前处理的样品。表2中所列各组分均从市场上购得。

实施例1化妆品中红景天苷含量测定的前处理方法

糖苷类化合物为红景天苷，红景天苷标准品购自上海佰年诗丹德检测技术有限公司，纯度≥98%。结构式为：

红景天苷含量测定的前处理方法，按照三种不同的化妆品剂型分为如下三种具体处理方式：

1、水剂，采用下述方法进行前处理：

（1）称取5 g样品于10 mL具塞比色管，加入少量纯甲醇，在涡旋振荡器上分散均匀，加入50 μL 10 wt%亚铁***水溶液和50 μL 20 wt%乙酸锌水溶液，摇匀，再用纯甲醇定容至10 mL，超声10min，于12000 r/min离心5min；

（2）收集清液至25mL圆底烧瓶，使用真空旋蒸仪旋蒸（去除甲醇），水浴温度60℃，用流动相溶解烧瓶中的残余，定容至5 mL，将定容液超声混匀，于12000 r/min离心10min，经0.45μm滤膜过滤，滤液备用，待测含量。

2、乳液，采用下述方法进行前处理：

（1）称取2 g样品于50mL具塞比色管，加入少量纯甲醇，在涡旋振荡器上分散均匀后，用纯甲醇定容至25mL，超声10min，加入20 mL正己烷，混匀，超声5min，将上层液移除，加入4 mL水，再加入20 μL10 wt%亚铁***水溶液和20 μL 20 wt%乙酸锌水溶液，摇匀后，超声5min，12000 r/min离心5min；

（2）收集清液至25mL圆底烧瓶，使用真空旋蒸仪旋蒸，水浴温度60℃，用流动相溶解烧瓶中的残余，定容至5mL，将定容液超声混匀，于12000 r/min离心10min，经0.45μm滤膜过滤，滤液备用，待测含量。

3、霜剂，采用下述方法进行前处理：

（1）称取2g样品于50mL具塞比色管，加入少量纯甲醇，在涡旋振荡器上分散均匀后，用纯甲醇定容至25mL，超声10min，加入20mL正己烷，混匀，超声5min，将上层液移除；

（2）收集清液至25mL圆底烧瓶内，使用真空旋蒸仪旋蒸，水浴温度60℃，用流动相溶解烧瓶中的残余，定容至5mL，将定容液超声混匀，经0.45μm滤膜过滤，滤液备用，待测含量。

色谱条件：用配有DAD检测器，十八烷基硅烷键合硅胶柱的Agilent 1260高效液相色谱仪对样品进行含量测定，色谱条件参照《中国药典》（2010版第一部）中的色谱条件，流动相为V(水):V(甲醇)= 85:15，柱温25℃，波长225 nm，流速1.0 mL/min，进样量20 μL。

红景天苷水剂、乳液或霜剂中红景天苷的回收率见表3。

表3表明，经前处理后，样品中检测出的红景天苷含量与其实际含量比较接近，尤其对糖苷加入量为200或300μg/g的样品，回收率均接近100%。

另对未经前处理的化妆品水剂进行相同的含量测定后发现，如图1所示，未经前处理的样品（曲线1）的目标峰响应值明显低于经前处理的样品（曲线2）。

实施例2 化妆品中人参皂苷含量测定的前处理方法

糖苷类化合物为人参皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rd，人参皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rd标准品购自上海佰年诗丹德检测技术有限公司，纯度≥98%。结构式为：

本方法提供的4种人参皂苷的含量测定前处理方法的具体操作过程，与实施例1相同。

色谱条件：利用配有DAD检测器，十八烷基硅烷键合硅胶柱的Agilent 1260高效液相色谱仪对样品进行含量测定，色谱条件流动相为：V(水):V(乙腈) = 70:30，柱温25℃，波长203 nm，流速1.0 mL/min，进样量20 μL。

人参皂苷（Rb1、Rc、Rb2、Rd）水剂、乳剂或霜剂中人参皂苷的回收率（以总皂苷计）见表4。

表4表明，经前处理后，样品中检测出的人参皂苷含量与其实际含量比较接近，除糖苷加入量为100 μg/g的水剂或乳液样品外，回收率均接近100%。

实施例3 化妆品中芍药苷含量测定的前处理方法

糖苷类化合物为芍药苷，芍药苷标准品购自上海佰年诗丹德检测技术有限公司，纯度≥98%。结构式为：

本方法提供的芍药苷的含量测定前处理方法的具体操作过程，与实例1相同。

色谱条件：利用配有DAD检测器，十八烷基硅烷键合硅胶柱的Agilent 1260高效液相色谱仪对提取液进行含量测定，色谱条件流动相为：V(0.1%磷酸溶液):V(乙腈) = 86:14，柱温25℃，波长230 nm，流速1.0 mL/min，进样量10 μL。

芍药苷的水剂、乳液或霜剂中芍药苷的回收率见表5。

表5表明，经前处理后，样品中检测出的芍药苷含量与其实际含量比较接近，回收率均接近100%。

实施例4 化妆品中积雪草苷、羟基积雪草苷含量测定的前处理方法

糖苷类化合物为积雪草苷或羟基积雪草苷，积雪草苷或羟基积雪草苷标准品均购自上海佰年诗丹德检测技术有限公司，纯度≥98%。结构式为：

本方法提供的积雪草苷、羟基积雪草苷的含量测定前处理方法的具体操作过程，与实例1相同。

色谱条件：利用配有DAD检测器，十八烷基硅烷键合硅胶柱的Agilent 1260高效液相色谱仪对样品进行含量测定，色谱条件流动相为V(2 mmol/Lβ环糊精溶液)：V(乙腈) = 76:24，柱温25℃，波长205 nm，流速1.0 mL/min，进样量10 μL。

积雪草苷、羟基积雪草苷水剂、乳剂和霜剂中的积雪草苷、羟基积雪草苷回收率见表6。

表6表明，经前处理后，样品中检测出的积雪草苷或羟基积雪草苷含量与其实际含量比较接近，除积雪草苷加入量为100 μg/g的水剂或乳液样品外，回收率均接近100%。

实施例5 含红景天苷的化妆品水剂的前处理方法

（1）称取2 g样品于10 mL具塞比色管，加入少量纯甲醇，在涡旋振荡器上分散均匀，加入30 μL 15 wt%亚铁***水溶液和30 μL 25 wt%乙酸锌水溶液，摇匀，再用纯甲醇定容至10 mL，超声10 min，于12000 r/min离心5 min；

（2）收集清液至25 mL圆底烧瓶，使用真空旋蒸仪旋蒸（去除甲醇），水浴温度60℃，用流动相溶解烧瓶中的残余，定容至5 mL，将定容液超声混匀，于12000 r/min离心10 min，经0.45 μm滤膜过滤，滤液备用，待测含量。

实施例6 含红景天苷的化妆品乳液的前处理方法

（1）称取5 g样品于25 mL具塞比色管，加入少量纯甲醇，在涡旋振荡器上分散均匀后，用纯甲醇定容至20 mL，超声10 min，加入15 mL正己烷，混匀，超声5 min，将上层液移除，加入2 mL水，再加入60 μL 7.5 wt%亚铁***水溶液和60 μL 10 wt%乙酸锌水溶液，摇匀后，超声5 min，12000 r/min离心5 min；

（2）收集清液至25 mL圆底烧瓶，使用真空旋蒸仪旋蒸，水浴温度60℃，用流动相溶解烧瓶中的残余，定容至5 mL，将定容液超声混匀，于12000 r/min离心10 min，经0.45 μm滤膜过滤，滤液备用，待测含量。

实施例7 含芍药苷的化妆品霜剂的前处理方法

（1）称取3 g样品于25 mL具塞比色管，加入少量纯甲醇，在涡旋振荡器上分散均匀后，用纯甲醇定容至15 mL，超声10 min，加入15 mL正己烷，混匀，超声5 min，将上层液移除；

（2）收集清液至25 mL圆底烧瓶内，使用真空旋蒸仪旋蒸，水浴温度60℃，用流动相溶解烧瓶中的残余，定容至5 mL，将定容液超声混匀，经0.45 μm滤膜过滤，滤液备用，待测含量。

实施例8 含积雪草苷的化妆品霜剂的前处理方法

（1）称取2 g样品于25 mL具塞比色管，加入少量纯甲醇，在涡旋振荡器上分散均匀后，用纯甲醇定容至16 mL，超声10 min，加入25 mL正己烷，混匀，超声5 min，将上层液移除；

（2）收集清液至25 mL圆底烧瓶内，使用真空旋蒸仪旋蒸，水浴温度60℃，用流动相溶解烧瓶中的残余，定容至5 mL，将定容液超声混匀，经0.45 μm滤膜过滤，滤液备用，待测含量。

Claims (9)

1.一种用于化妆品中糖苷类中草药化合物含量测试的前处理方法，所述的糖苷类中草药化合物采用反向液相色谱法测定含量，其特征在于：所述的前处理方法包括下述步骤：

（1）用甲醇分散含糖苷类化合物的化妆品样品，加入正己烷单级萃取，弃去包含油脂成分的部分，和/或加入沉淀剂亚铁***水溶液及乙酸锌水溶液，离心，弃去包含大分子物质的部分；

（2）旋转蒸发，定容，待测。

2.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于：所述的化妆品样品为水剂，霜剂或乳液。

3.根据权利要求2所述的前处理方法，其特征在于：步骤（1）中，对于霜剂或乳液，先用少量甲醇分散样品，然后加入余量甲醇，超声波辅助破乳；对于水剂，先用少量甲醇分散样品，在加入沉淀剂之后再加入余量甲醇，超声波辅助破乳，超声时间为5～12min。

4.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于：以化妆品样品质量为2～5 g计，甲醇的加入量为5～30 mL。

5.根据权利要求1或3所述的前处理方法，其特征在于：以化妆品样品质量为2～5 g计，亚铁***水溶液及乙酸锌水溶液的加入量各为10～100 μL，亚铁***水溶液的浓度为5～20 wt%，乙酸锌水溶液的浓度为10～30 wt%。

6.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于：以化妆品样品质量为2～5 g计，正己烷的加入量为10～30 mL。

7.根据权利要求6所述的前处理方法，其特征在于：加入正己烷后超声波辅助萃取3～8分钟。

8.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于：步骤（2）中，旋转蒸发在真空及水浴条件下进行，水浴温度为55～65℃。

9.根据权利要求1所述的前处理方法，其特征在于：所述的糖苷类中草药化合物包括红景天苷，人参皂苷，芍药苷，积雪草苷，羟基积雪草苷。