CN1039596A - 结合逆转录病毒蛋白酶的肽的制备方法 - Google Patents

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Abstract

逆转录病毒蛋白酶聚合蛋白底物的肽模拟物与病毒蛋白酶结合，用于测定蛋白酶活性或抑制蛋白酶活性以及治疗病毒病。

Description

逆转录病毒属于逆转录病毒族系中的一种病毒，这类病毒是以核糖核酸而不是以脱氧核糖核酸来运载它们的遗传物质。已知RNA肿瘤病毒的存在是与人体和动物体内各种疾病相联系的。在病原方面它们被认为是与下列病毒感染有关的病原体，这些病毒是：劳斯氏肉瘤病毒（RSV），鼠类白血病毒（MLV），鼠类乳腺肿瘤病毒（MMTV），猫白血病毒（FeLV），牛白血病毒（BLV），梅森-菲泽猴病毒（MPMV），猿猴肉瘤病毒（SSV），猿猴获得性免疫缺陷综合症（SAIDS），人体T淋巴病毒（HTLV-Ⅰ，Ⅱ）和引起爱滋病（获得性免疫缺陷综合症）以及与爱滋病有关的各种疾病病原体的人体免疫缺陷病毒（HIV-1，HIV-2），等等。在这种种情况下，尽管已经分离到致病菌，但是仍未获得对于治疗这类感染的有效方法。在这些病毒中，HTLV和HIV的特征尤其显著。
虽然各种逆转录病毒有细微差异，但是整个结构颇为相似。胞外病毒颗粒是由布满病毒糖蛋白的外膜、结构蛋白的核心和单链核糖核酸的基因组构成。逆转录病毒基因组具有特征明显的区域结构，即5′-gag-Pol-env-3′结构，其中gag区编码核心结构蛋白，pol区编码某些临界病毒酶，如逆转录酶、整合酶和蛋白酶，env区编码被膜糖蛋白。病毒的复制仅仅发生在宿主细胞内并且取决于宿主细胞的功能。这种复制的关键在于功能病毒蛋白的产生。蛋白质的合成是通过读码转译为聚合蛋白结构来完成的，即相当于gag，pol和env的读码至少有一部分是通过病毒蛋白酶处理成功能蛋白。在处理聚合蛋白时，病毒蛋白酶所提供的蛋白水解活性不可能由宿主提供，而且对逆转录病毒的生活周期又是必不可少的。事实已经证明，缺乏蛋白酶或含有其突变形式的逆转录病毒不具有感染性。参阅Katoh        et        al.，Virology，145，280092（1985），Crawford，et        al.，J.Virol.，53，899-907（1985）和Debouk，et        al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84，8903-6（1987）。因此，抑制逆转录病毒蛋白酶是治疗逆转录病毒病的一种方法。
逆转录病毒蛋白酶的特征并不显著。从病毒颗粒中回收蛋白酶及其聚合蛋白底物的得率也很低。为了鉴定其活性，需要提供表示蛋白水解活性的底物。使用测定蛋白水解活性的天然底物时，底物及其水解产物的制备、纯化和定量化在实验上有一定的困难。为了测定蛋白水解活性，这些缺陷中有许多是可以通过使用人工合成的纯化的小肽予以克服。因此，制备可用作这些酶的底物的小肽是非常符合需要而且具有很大的优越性。
蛋白酶是一种裂解蛋白质和多肽中肽键的酶，它们存在于具有代谢和调节功能的大多数生物***中。其在代谢中的作用是将多肽水解为较小的肽以至其最小的组分氨基酸。它们在生物调节中的作用颇广，可见诸于一些刊物的介绍。例如H.Holzer和H.Tschesche合编的“Biological        Function        of        Proteinases（Springer-Verlag，Berlin-Heidelberg-New        York，1979）。
蛋白酶的调节作用之一是将多肽转译后处理形成功能性蛋白、酶和媒介物。其调节功能所必需的是它们有选择地作用于多肽的能力，这种选择性包括两个因素：①它们作用于特异性底物的能力;②它们仅水解特异性肽键的能力。就结构水平而言，这种底物特异性就在于最初的氨基酸序列、生成的底物多肽的局部构象和在切割位点上形成肽键的氨基酸。
关于聚合蛋白天然底物中公认的切割位点的序列资料可用于若干逆转录病毒的蛋白酶，但是用于逆转录病毒蛋白酶的肽底物却仍属未知。此外，由于不了解天然底物的相互结合作用，因此常常难以确定哪些长肽是可以接受的。类似的情况还由于大的多肽的构象显然不同于小的肽，因此也难以确定在小肽中哪些氨基酸序列可以获得最佳结合。
根据建议，逆转录病毒蛋白酶切割区中的某些共同的氨基酸残基的氨基酸序列可用于检查病毒蛋白，例如：Casey等（J.Virol.，55，417-23（1985））揭示了HIV-1中的P24gag蛋白的氨基末端序列为Pro-Ile-Val-Gln-Asn。表示脯氨酸残基在切割位点内;diMarzo Veronese等（Science，231，1289-90（1986））则提出了逆转录酶（Rt）的切割位点在Thr-Leu-Asn-Phe＊-Pro（用＊表示），它给出了RT的脯氨酸氨基末端。Debouck等（Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84，8903-06（1987））认为HIV-1的蛋白酶是自身催化，并且揭示了蛋白酶的氨基末端含有Pro-Gln-Ile-Thr-Leu序列。Pearl等（Nature，328，482（1987）对大量逆转录病毒的某些核心前体多肽底物进行了比较，并且认为逆转录病毒蛋白酶优先在序列的X-Pro位点上切割，其中X通常既可以是芳族氨基酸（Phe，Tyr），也可以是大的疏水氨基酸（Met，Leu）。此外，还有人认为这种序列通常都由小的疏水氨基酸在一侧相接。
初步根据由逆转录病毒蛋白酶的核苷酸结构推测出的氨基酸序列，对许多逆转录病毒蛋白酶已进行了检查。它们通常都在Pol区的5′端、gag区的3′端或两个区之间（但不是无规则的）编码。Yasunaga等（FEBS        Lett.，199，2，145-49（1986））揭示了逆转录病毒族系间具有良好的序列同源性，并且证明了在逆转录病毒的lenti病毒种和HTLV/BLV亚科的成员中存在若干非常保守的序列。
在大肠杆菌中表达逆转录病毒蛋白酶的方法已由Debouck等（Proc.Natl.Acad.Sci.USA，8903-06（1987）揭示;在HIV-1病毒方面，Graves等也作了揭示（Proc.Natl.Acad.Sci，USA，85，2449-53（1988））。
逆转录病毒蛋白酶的一些生化特征的研究已经开始着手进行，而且Katoh等（Nature，329，654-6（1987））认为某些逆转录病毒蛋白酶可能是酸性的。这是根据观测胃酶抑毒得出的看法，这种已知酸性蛋白酶抑制剂是一种与牛白血病毒、莫洛尼鼠类白血病毒和人体T细胞白血病毒有关的逆转录病毒蛋白酶弱抑制剂。
Ketter等（美国专利No.4636492和No.4644055）已经公开了制备逆转录病毒蛋白酶的蛋白酶抑制剂的方法。此外，对基本上相应于蛋白酶底物切割位点的氨基酸序列的三肽和四肽也进行了修饰，使其具有C末端囟甲基酮，卤甲基酮是活性部分，一与肽结合即与蛋白酶发生反应。
虽然与逆转录病毒蛋白酶无关，但是Umezawa等已经通过筛选微生物培养物的过滤物，分离到各蛋白酶的抑制剂。参阅Proteinase        Inhibitors：Medical        and        Biological        Aspects（Katunuma等编;pp.3-15（1983），Japan        Sci.Soc.Press，Tokyo/Springer        Verlag，Berlin）。这些肽抑制剂中有些如Bestatin，amastatin和胃酶抑素，含有非一般的氨基酸，它们不是α-氨基酸。这些抑制剂的作用被认为在易裂解的位点上具有与蛋白水解酶结合的不能水解的碳-碳键。
胃酶抑素是一种由链霉菌培养物中分离到的五肽抑制剂，能够抑制许多酸性蛋白酶，由于其能够抑制血管紧张肽原酶和胃蛋白酶而引起了人们的关注。（参阅Umezawa，H.et        al.，J.Antibiot.，Tokyo，23，259-263（1970））。胃酶抑素在五肽的两个位置上含有非一般氨基酸，即（3S，4S）-4-氨基-3-羟基-6-甲基庚酸（AHMHA），被称为Statine。这个非一般的氨基酸不是α-氨基酸，其作用被认为是一种二肽模拟物并且具有与酶相结合的碳-碳键，而不是易裂解的肽键。含有statine的肽衍生物已用于抑制人体蛋白酶即血管紧张肽原酶和胃蛋白酶。（参阅Cazaubon等，美国专利No.4481192）。
有些小组已经进行了胃酶抑素的修饰工作，使其对血管紧张肽原酶的抑制获得最佳活性。Rich等（J.Med.Chem.，23，27-33（1980））证明了结合到胃酶抑素中的Statine的手性对结合来说具有重要意义，并且进行了Statine的修饰工作，以检测结构与抑制活性之间的关系。因此，当（3S，4S）-4-氨基-3-羟基-5-苯基庚酸（AHPPA）取代statine结合到肽时，其活性与statine相似。
含有碳-碳键而不是含肽键的其他“二肽类似物”已经由一些小组进行了合成和研究。所作的这许多尝试都涉及通过修饰产生羟基的碳和邻近的碳并与statine密切相关的结构。因此，statine的氧基衍生物、二氨基衍生物、二羟基衍生物（Thaisrirons        et        al.，J.Med.Chem.，30，976082（1987））、脱羟衍生物（Rich        et        al.，J.Med.Chem.，23，27-33（1980））、含正磷衍生物（Grannousis，et        al.，J.Med.Chem.，1603-09（1987））和氟衍生物（Fearon        et        al.，J.Med.Chem.，30，1617-22（1987）和Thaisivongs        et        al.，J.Med.Chem.，20，2080-87（1986）均已合成，并且报导了它们能够抑制血管紧张肽原酶和胃蛋白酶。还报到了将取代的亚甲基插到statine羧基的α位置上的各种修饰都能抑制血管紧张肽原酶（Luly等，欧洲专利申请EP        229667，Fung等，PCT专利申请PCT/WO88/05050;Evans，美国专利4665055;Hester等，欧洲专利申请EP173481）。已经证明这些“二肽类似物”对血管紧张肽原酶和胃蛋白酶的抑制能力是可以改变的，其特异性活性也取决于引起与这些酶结合的各相邻部分。上述公开文件中所用方法都作为本文的参考文献。
为了测定蛋白酶活性和为药物应用提供逆转录病毒蛋白酶活性的抑制剂，需要与逆转录病毒蛋白酶结合的肽。这种药物应用能为上述不治之症提供治疗。
本发明包括用式（Ⅰ）表示的与逆转录病毒蛋白酶结合的肽。一方面，这些肽可用作测定蛋白酶活性的底物;另一方面，这些肽又是病毒蛋白酶的抑制剂，并可用于治疗由这些病原体感染的病症。
本发明还包括药物组合物，包括式（Ⅰ）化合物和药物上可接受的载体。
本发明也包括治疗病毒病的方法，包括给需要治疗的哺乳动物施用有效量的式（Ⅰ）化合物。
本发明又提供了测定病毒蛋白酶活性的方法。
本发明还包括式（Ⅱb）的化合物，它能用作制备式（Ⅰ）肽的中间体，使肽具有抗病毒蛋白酶引起的降解作用。
本发明如式（Ⅰ）所示的肽及其在药物上可接受的盐：
A-B-（Q）a-（C）b-（D）c-M-（W）d-（X）e-Y-Z        （Ⅰ）
式中A是BocNH，CbzNH，H，R′R″N，R″CONR′或DnsNH，或a，b和c等于0以及Y为共价键时，A是H，Boc，Cbz，R″或R″CO;
B是1个或多个D或L氨基酸，β-Ala，或是共价键：
C和D可相同，也可不同，它们是Glx，Asx，Ala，β-Ala，Arg，Gly，Ile，Leu，Lys，Ser，Thr，Val，Met或His;
Q是D或L氨基酸，表示Ser，Thr，Asp，His，Cys，Arg或Ala;
W是Pro或△3-脱氢-Pro;
X是Ala，Gly，Ile，Leu，Val，Met，Lys，Glx或Asx;
Y是1个或多个D或L氨基酸，或是共价键;
Z是CO2R′′′′，CONR′R′′′′，COR′，CH2OH，CH2NR′R′′′′或H，或d和e等于0，Y为共价键时，Z是OR′′′′或NR′R′′′′;
a，b，c，d和e各为0或1，但c和e不能同为0;
M是CHa，Phe（4′Ra）或-NHCHR1R2-;
其中R1为C1-5Alk，（CH2）nSC1-5Alk，（CH2）nOC1-5Alk，（CH2）nC3-7环烷基或（CH2）mC6H4-Ra;
Ra是卤素，OR′，NO2，NH2或H;
R2是
（CH2）n-，CHR3（CH2）mCO-，CO（CH2）mCO-，CHR3CHR3，（CH2）mCO-，CHR3CHR3，CHR1（CH2）mCO-，
CHR3CHR1CHR′（CH2）mCO-，CHR3CHR′CHR1（CH2）mCO-，
COCHR1CHR′（CH2）mCO-，COCF2CR′R″（CH2）mCO-，COCF2（CH2）mCO-，CH＝CR′CHR″（CH2）mCO-，COCH＝CR′（CH2）mCO-，
CH2S（O）pCHR′（CH2）mCO-，CH2NR′CHR″（CH2）mCO-，
P＝O（OR′）（CH2）mCO-，
R3和R3′分别为OH，H或NH2;
R4是OH，H，NH2或＝0;
m是0，1，2或3;
n是1或2;
p是0，1或2;
R′是H或C1-5Alk;
R″是H或C1-18Alk;
R′′′′是H，C1-5Alk，C3-6环烷基，（CH2）nC6H5，（CH2）nC5H4N，
（CH2）nOH，（CH2）nNH2或（CH2）nNHC（NH）NH2;
本发明还包括本发明化合物的药物上可接受的加成盐、络合物或前体药物。前体药物可以是任何共价键合的载体，它在体内释放出式（Ⅰ）的活性母药。由于与常规的表示法不同，应注意式（Ⅰ）中，A包括肽的末端氨基，Z包括肽的末端羧基。因此，当A和Z是H时，肽的末端残基分别为“脱氨”和“脱羧”氨基酸。
采用这种表示法，A包括残基的末端氨基，该残基与B连接;或B为共价键时，则与C连接;或B为共价键并且a和b均等于0时，则与D连接。当B为共价键并且a，b和c均等于0时，M的氨基由酰基或烷基取代，这是由式（Ⅰ）中A的特殊规定。类似的方法，Z包括氨基酸残基的末端羧基，该残基与Y连接;或Y为共价键，则与X连接;或Y为共价键并且d和e均等于0时，则M的末端羧基被Z取代，这是式（Ⅰ）的特殊规定。
式（Ⅰ）中下标a-c的运算表示在保持化合物有效性的同时，可以从肽的氨基末端去除残基。这种运算可以依次处理，使Y不是共价键，则a等于0;a不等于0，则b也不等于0，b等于0，则c不等于0。在羧基末端，Y不是共价键，则e不等于0。正如下面将要详细介绍的，d单独运算，当M是Cha或Phe（Ra）时，d等于1，当M是-NHCHR1R2时，d可等于1，也可等于0，最好等于0。
本领域通用的其他简称和符号也在本文中用于描述肽。
氨基酸        字母代码        字母代码        氨基酸        字母代码        字母代码
丙氨酸        Ala        A        亮氨酸        Leu        L
精氨酸        Arg        R        赖氨酸        Lys        K
天冬酰胺        Asn        N        蛋氨酸        Met        M
天冬氨酸        Asp        D        苯丙氨酸        Phe        F
半胱氨酸        Cys        C        脯氨酸        Pro        P
谷氨酰胺        Gln        Q        丝氨酸        Ser        S
谷氨酸        Glu        E        苏氨酸        Thr        T
甘氨酸        Gly        G        色氨酸        Trp        W
组氨酸        His        H        酪氨酸        Tyr        Y
异亮氨酸        Ile        I        缬氨酸        Val        V
天冬酰胺或天冬氨酸        Asx        B
谷氨酰胺或谷氨酸        Glx        Z
按常规表示法，氨基末端在左，羧基末端在右。除另专门说明外，所有手性氨基酸（AA）均假定为L型绝对构型。（4′Ra）Phe是在苯环第4位上由Ra取代的苯丙氨酸。应该理解的是Ra是氢时，残基构成苯丙氨酸;Ra是OH时，残基构成酪氨酸。β-Ala是3-氨基丙氨酸。Cha是环己基丙氨酸。Boc是叔丁氧羰基，Dns是丹酰，即1-二甲氨基萘-5-磺酰，Cbz是苄氧羰基，BrZ是邻溴苄氧羰基，ClZ是对氯苄氧羰基，Cl2Z是2，4-二氯苄酯基，Bzl是苄基，MeBzl是甲苄基，MeBzl是4-甲苄基，Ac是乙酰基，Alk或C1-5Alk是C1-5烷基，Ph是苯基，DCC是二环己基碳化二业胺，DMAP是二甲氨基吡啶，HOBT是1-羟基苯并***，NMM是N-甲基吗啉，DTT是二硫苏糖醇，EDTA是乙二胺四乙酸，DIEA是二异丙基乙胺，DBU是1，8-重氮二环〔5，4，0〕十一碳-7-烯，DMSO是二甲亚砜，DMF是二甲基甲酰胺，THF是四氢呋喃。HF是氢氟酸，TFA是三氟乙酸。本文所述的C1-5烷基包括甲基，乙基，丙基，异丙基，丁基，异丁基，仲丁基，叔丁基，戊基和异戊基。本发明化合物中所用具有羧酸侧链的ASP和Glu包括游离羧酸、C1-5烷基和苄酯侧链。C1-18Alk包括1至18个碳原子的任何直链或支链烷基。
本发明的肽以模拟天然底物的结合方式与病毒蛋白酶结合。肽一般为十二肽或较小的肽。但是较长的肽，包括式（Ⅰ）给出的本文中限定的-Q-C-D-M-W-X-残基，被认为是具有活性的，也属于本发明的范围。最靠近肽的被公认的切割位点的残基即M-W，对于结合而言是最重要的。X最好是中性或酸性的氨基酸，适合的X是Ala，Gly，Ile，Leu，Val，Met，Lys，Glx或Asx。缬氨酸尤为适宜。尽管某些亲水残基如Asp和Ser都是可以接受的，但是D最好还是中性和疏水的氨基酸。以Gln，Asn，Ala，β-Ala，Ile，Leu，Val和Met为佳，以Gln，Asn和Ala更佳。与C连接的残基可以是中性、酸性或碱性的氨基酸，适合的有Glu，Gln，Arg，Lys，Ser，Ala，β-Ala，Asn和Gly。对C而言，Gln，Asn和Ala尤其适合。残基Q以亲水残基，如D-或L-，Ser，Thr，Asp或His为佳，尤以Thr和Ser更佳。
B相当于1个或多个氨基酸，可以是亲水的，也可以是疏水的，在较短的肽中还可以是共价键。对B的本体的要求并不严格，残基的选择可考虑使整个肽具有良好的物理化学和生物化学的性质，例如水溶解度和抗肽链端解酶。当D-氨基酸位于肽的末端时，D-氨基酸的选择往往可使其具有抗肽链端解酶的特性。当B为共价键时，D-氨基酸可能对Q有利;当B不是共价键时，B最好是1个或2个选自Ala，β-Ala，Gly，Ile，Val，Leu，Met，His，Lys，Arg，Glx，Asx，Cys，Ser或Thr的D-或L-氨基酸。为了制备与逆转录病毒蛋白酶结合的本发明最小的肽，B以共价键为佳。
Y可以相当于1个或多个氨基酸或共价键。如果Y是1个或多个氨基酸，则它们可以是亲水的，也可以是疏水的，以1至3个残基为佳，但较长的链也是可以接受的。采用与B同样的方法，Y的残基也可用于使 肽具有良好的生物化学或物理化学的特性。因此，采用亲水残基可使其具有合乎需要的溶解度，或在羧酸末端上采用D-氨基酸可用于使其具有抗肽链端解酶。Y最好是1至3个选自Ala，Gly，Ile，Leu，Met，Val，Arg，Lys，Thr，Ser，Cys，Glx或Asx的氨基酸。在本发明较短的肽中，Y可以是共价键，但1个氨基酸特别适宜。以Ala，Gly，Ile，Met，Arg，Asx和Val为佳，尤以缬氨酸更佳。
M为Cha或Phe（4′Ra）和d为1的肽可以用作底物，并且水解成较小的肽。虽然底物的长度一般说来可以是任意的，但以6-9个残基为佳，它们适用于蛋白酶活性的测定。此外，它们可以与天然病毒底物竞争，从而用于抑制病毒的复制，虽然它们的代谢不稳定和作用期短，但是仍然可以抑制体内疾病的发展。一般说来，在适合的缓冲介质中，使肽经受蛋白酶的作用，则这类肽可用于测定蛋白酶的活性。活性的分析是采用检测肽的水解切割水平的方法进行的。这样一种方法构成了至少1个产物肽或其衍生物的分离和定量化。
在这种测定中，采用层析方法和常规的固体载体如硅胶，十八硅烷，Sephadex
Figure 891046992_IMG12
，离子交换树脂或吸附树脂可有效地分离肽产物。紫外光吸收或其他光谱分析方法均可有效地对产物进行检测和定量分析。另一种方法是在肽中加入或代入放射性同位素，例如将氚或标记13C加入1至多个氨基酸中，根据放射性可以提供检测和定量分析。还有一种方法是加入荧光物质，例如在肽的氨基末端上加入丹酰，即可提供荧光检测和定量分析。荧光团的方法即将骤冷剂加到肽中，例如羧基末端的3-（4-甲基-吡啶基）-丙氧基酯，除了荧光标记物外，还可用于测定蛋白酶活性。这类方法业已由Dunn等人公开（Anal.Biochem.，129，502（1983）），并且提供活性的连续测定。这类荧光团方法的优点在于直接观测水解，无需分离水解产物。
M为Cha或（4′Ra）Phe的本发明肽的蛋白酶结合活性可通过用作底物而显示出来，表Ⅰ说明这些肽的底物动力学。
表Ⅰ        与rHIV蛋白酶结合的肽的底物动力学
化合物实 Rel. KMKcat
施例编号 V0（mM） （min-1）
1        1.0        6.7        42
39        1.0        6.9        41
40        .35        8.6        16
41 neg.＊- -
42        1.34        1.9        21
43        .48        20        30
44        .48        2.2        5
45        .46        11        21
46        1.23        2.3        12
47        .36        8        15
48        1.0        6.8        35
49        .65        6.0        18.4
50        .32        5.0        1.8
51 neg.＊- -
52 neg.＊- -
53        .71        1.6        12
54        .39        .71        2.03
55        .86        6.5        23.0
56        1.45        1.2        31
57 neg.＊- -
59        .56        3.3        8.0
60        .54        8.0        18
表Ⅰ        与rHIV蛋白酶结合的肽的底物动力学（续）
化合物实 Rel. KMKcat
施例编号 V0（mM） （min-1）
61        .51        2.3        6.4
62        .05        -        -
63        .045        4.9        1.8
64        1.24        -        -
65        .11        19        14
66        1.25        11.7        183
67        .07        -        -
68        .98        -        -
69        .70        -        -
70        .56        -        -
95 neg.＊12.8 5.3
96        .34        17.7        90.4
98        .16        25        65
99        .09        6.2        1.4
100        .045        1.8        .38
101        .06        6.2        7.8
102        1.27        7.7        96
105        1.09        -        -
107        .24        -        -
108 neg.＊- -
109        1.24        -        -
110        1.29        9.8        103
111        1.33        34        374
表Ⅰ        与rHIV蛋白酶结合的肽的底物动力学（续）
化合物实 Rel. KMKcat
施例编号 V0（mM） （min-1）
112 neg.＊- -
113 neg.＊- -
115        .48        7.1        16
118 neg.＊- -
119 neg.＊30 -
121        .80        .96        16.6
＊可略量
-未测
另一方面，M为Cha或Phe（4′Ra）的这些底物肽还可用作发现那些与病毒蛋白酶结合从而抑制蛋白水解活性的氨基酸序列的指示剂。对与病毒蛋白酶结合从而使肽缓慢水解的这类肽进行修饰为有效地延长对蛋白酶活性的抑制提供了一种方法。
因此，本发明化合物的另一个亚族包括残基M为-NHCHR R-的肽，这些肽含有非天然氨基酸，但不是α-氨基酸。与底物一样，这些肽没有肽键，尽管它们的模拟天然底物结合的方式与蛋白酶结合，能抗水解。2～9个残基的肽是适合的，3～6个残基的肽则较佳。由于非天然氨基酸可以是用作二肽模拟物，所以最好M为-NHCHR1R2-，d＝0，W无。一个较佳实施例则是R1为CH2C6H4-Ra，CH2C6H11或C1-5Alk。R2为CHR3CHR3′（CH2）mCO-，CHR3CHR3′CHR1CO-，CHR3CHR1CHR′CO-，CHR3（CH2）mCO-，CO（CH2）mCO-，COCHR1CHR′（CH2）mCO-，CHR3CF2（CH2）mCO-，-COCF2（CH2）mCO-，-P＝（OR′）（CH2）mCO-，
Figure 891046992_IMG13
式中R′，R3，R3′，m和n的定义同式（Ⅰ）。在一些较佳实施例中，R1是CH2C6H4-Ra，R2是CH（OH）CH2CH2CO-。
用与处理病毒聚合蛋白的病毒编码蛋白酶有关的病毒感染或潜伏感染过的动物，在服用药物后，病毒复制受到抑制，从而减缓了疾病的发展。由于各种逆转录病毒的聚合蛋白底物似乎存在一致的序列，所以抑制剂或底物对逆转录病毒可能具有广谱活性。决定于病毒编码蛋白酶的DNA病毒（如肝炎病毒）对这种治疗也颇敏感。
下列化合物属于但不是限止本发明的范围：
2-（乙酰-丝氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰）氨基-3-苯丙基-脯氨酰缬氨酰缬氨酰胺;
2-（丝氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰）氨基-3-苯丙基-脯氨酰缬氨酰缬氨酰胺;
2-（乙酰-丝氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰）氨基-3-羟基-1-氧-5-苯戊基脯氨酰缬氨酰缬氨酰胺;
2-（乙酰-丝氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰）氨基-3-羟基-1-氧-5-苯戊基缬氨酰缬氨酰胺;
2-（丝氨酰-谷氨酰胺酰天冬酰胺酰）氨基-3（S）-羟基-1-氧-5-苯戊基缬氨酰缬氨酰胺;
2-（（2-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-氧-3-苯丙基）环戊羰基缬氨酰缬氨酸甲酯;
2-（2-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-氧-3-苯丙基）环戊基-羰基缬氨酰缬氨酸甲酯，三氟乙酸盐;
2-（2-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯丙基）环戊羰基缬氨酰缬氨酸甲酯;
2-（1-羟基-3-苯基-2-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-丙基）环戊羰基缬氨酰缬氨酸甲酯，三氟乙酸盐;
2-（（1-甲氧基-1-（2-苯基-1-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基）乙基）氧膦基）环戊羰基缬氨酰缬氨酸甲酯;
2-（（1-羟基-1-（2-苯基-1-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基）乙基）氧膦基）环戊羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
5-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
5-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟基-苯基）己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
4-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-2，2-二氟-3-羟基-1-氧-5-苯戊基-缬氨酰缬氨酸甲酯，氢氯化物;
4-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-2，2-二氟-3-羟基-1-氧-5-苯戊基-缬氨酰缬氨酸甲酯，氢氯化物;
4-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-2，2-二氟-1，3-二氧-5-苯戊基-缬氨酰缬氨酸甲酯，氢氯化物;
5-（叔丁氧羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-6-（4-羟基）苯基-1-氧-己基-缬氨酰胺;
5-（（苄酯基-D-丝氨酰）丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
5-（（D-丝氨酰）丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
5-（叔丁氧羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-6-（4-羟基）苯基-4-羟基-1-氧-己基-缬氨酰缬氨酸;
5-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-6-（4-羟基）苯基-4-羟基-1-氧 -己基-缬氨酰缬氨酸，氢氯化物;
2-（（1-羟基-2-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-3-环己基）-丙基）环戊烷羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯，氢氯化物;
2-（（2-叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-氧-3-苯丙基）环戊羰基缬氨酰缬氨酰胺;
2-（2-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-氧-3-苯丙基）环戊羰基缬氨酰缬氨酰胺，三氟乙酸盐;
2-（2-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯丙基）环戊羰基缬氨酰缬氨酰胺;
2-（1-羟基-3-苯基-2-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-丙基）-环戊羰基缬氨酰缬氨酰胺，三氟乙酸盐;
2-（（1-甲氧基-1-（2-苯基-1-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基）乙基）氧膦基）环戊羰基缬氨酰缬氨酰胺;
2-（（1-羟基-1-（2-苯基-1-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基）乙基）氧膦基）环戊羰基-缬氨酰缬氨酰胺;
5-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酰胺;
5-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟基-苯基）己基-缬氨酰缬氨酰胺;
4-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-2，2-三氟-3-羟基-1-氧-5-苯戊基-缬氨酰缬氨酰胺，氢氯化物;
4-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-2，2-二氟-3-羟基-1-氧-5-苯戊基-缬氨酰缬氨酰胺，氢氯化物;
4-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-2，2-二氟-1，3-二氧-5-苯戊基-缬氨酰缬氨酰胺，氢氯化物;
5-（（苄酯基-D-丝氨酰）丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6- 苯己基-缬氨酰缬氨酰胺;
5-（（D-丝氨酰）丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酰胺;
5-（叔丁氧羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-6-（4-羟基）苯基-4-羟基-1-氧-己基-缬氨酰缬氨酰胺;
5-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-6-（4-羟基）苯基-4-羟基-1-氧-己基-缬氨酰缬氨酰胺，氢氯化物;
2-（（1-羟基-2-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-3-环己基）丙基）环戊烷羰基-缬氨酰缬氨酰胺，氢氯化物;
（4S，5S）-5-（丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰缬氨酰胺，乙酸盐;
（4S，5S）-5-〔（苄酯基-β-丙氨酰）丙氨酰〕氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）-5-〔（β-丙氨酰）丙氨酰〕氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰缬氨酸甲酯，氢氯化物;
（4S，5S）-5-（丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-环己基-己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）-5-（丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）-5-（丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟苯基）己基缬氨酰缬氨酰胺，乙酸盐;
（4S，5S）-5-（（苄酯基-β-丙氨酰）丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰缬氨酰胺;
（4S，5S）-5-（（β-丙氨酰）丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰缬氨酰胺，氢氯化物;
（4S，5S）-5-（丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-环己基-己基-缬氨酰缬氨酰胺;
（4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酰胺;
（4S，5S）-5-（丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酰胺;
（4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）-5-（丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸，乙酸盐;
（4S，5S）-5-（叔丁氧羰基丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）-5-丙氨酰氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰缬氨酸甲酯，乙酸盐;
（4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酰胺;
（4S，5S）-5-（丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酰胺;
（4S，5S）-5-（叔丁氧羰基丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰缬氨酰胺;
（4S，5S）-5-（丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰缬氨酰胺，乙酸盐;
（4S，5S）-5-氨基-6-（4-羟基）苯基-4-羟基-1-氧-己基-缬氨酰缬氨酸苄酯，氢氯化物;
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-1-羟基-2-氨基-3-环己基）丙基）环戊烷羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯，氢氧化物;
（4S，5S）-5-氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯，氢氯化物;
（4S，5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4RS，5S）-5-氨基-6-（4-羟基）苯基-4-羟基-1-氧-己基-缬氨酰缬氨酰胺，氢氯化物;
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-1-羟基-2-氨基-3-环己基）丙基）-环戊羰基-缬氨酰缬氨酰胺，氢氯化物;
（4S，5S）-5-氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酰胺，氢氯化物;
（4S，5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酰胺;
（5S）-5-（苄酯基丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯基-己基-缬氨酸，异丁酰胺;
（5S）-5-（十四烷基）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯基-己基缬氨酸，异丁酰胺;
（5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯基-己基缬氨酸，异丁酰胺;
（5S）-5-（十八烷基）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯基-己基缬氨酸，异丁酰胺;
5-（苄酯基丙氨酰）氨基-4-羟基-2-甲基-1-氧-6-苯基-己基缬氨酰缬氨酸，甲酯;
7-甲基-5-（苄酯基丙氨酰）氨基-3，4-二羟基-2-苯基-1-氧-辛基缬氨酸，异丁酰胺;
5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基缬氨酸，异丁酰胺;
5-（苄酯基-丙氨酰丙氨酰）氨基-6-苯基-4-羟基-（1-氧）己基）-缬氨酰缬氨醇;
苄酯基-丙氨酰-（3-羟基-5-氨基-6-苯基）己酰-缬氨酰-（4-氨甲基）吡啶;
5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-6-苯基-（1-氧）己基-缬氨酸异丁酰胺;
（4S，5S）-5-（甲氧羰基）-丙氨酰丙氨酰）氨基-6-苯基-4-羟基-1-氧-己基-缬氨酰缬氨酸;
（4S，5S）-5-（苄酯基-丙氨酰丙氨酰）氨基-6-苯基-4-羟基-1-氧-己基-缬氨酰缬氨酸;
（4S，5S）-5-（丙氨酸丙氨酰）氨基-6-苯基-4-羟基-1-氧-己基-缬氨酰缬氨酸;
（4RS，5S）-5-（（叔丁氧羰基）异亮氨酰）氨基-7-甲基-4-羟基-1-氧-辛基-亮氨酰-（0-苄基）天冬氨酸甲酯;和
（4RS，5S）-5-（叔丁氧羰基）异亮氨酰）氨基-7-甲基-4-羟基-1-氧-辛基-亮氨酰-天冬氨酸甲酯。
还有一些较佳的化合物是：
（4S，5S）-5-（苄酯基-丙氨酰丙氨酰）氨基-6-苯基-4-羟基-1-氧-己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）-5-（丙氨酰丙氨酰）氨基-6-苯基-4-羟基-1-氧-己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）-5-（苄酯基-丙氨酰）氨基-6-苯基-4-羟基-1-氧-己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）-5-（丙氨酰）氨基-6-苯基-4-羟基-1-氧-己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;和
（4RS，5S）-5-（叔丁氧羰基）异亮氨酰）氨基-7-甲基-4-羟基-1-氧-辛基-亮氨酰-（0-苄基）天冬氨酸甲酯、羧酸及其羧酰胺。
本发明的肽可以通过偶合适当的氨基酸残基、任意去除任伺的保护基和任意修饰肽的氨基或羧基末端进行制备。虽然采用本领域已知的溶液法也可以成功地进行制备，但还是优先采用Merrifield（J.Am.chem.Chem.Soc.，85，2149（1964））的固相技术进行制备。溶液法或固相法与溶液法相结合都可应用于会聚合成（convergent        synthesis），其中二、三、四或五肽片段可通过固相合成或溶液合成制备，偶合成其他二、三、或四肽，或再经溶液合成法进行修饰。肽合成的方法一般采用J.M.Stewart和J.D.Young的方法（“Solid        Phase        Peptide        Synthesis”，Pierce        Chemical        Company，Rockford，Il（1984）），或者M.Bodensky，Y.A.Klauser和M.A.Ondetti方法（“Peptide        Synthesis”，John        Wiley        &        Sons，Jnc.，New        York，NY.（1976））也可用于制备本发明的肽。这两本书均作为参考文献结合在本文中。
每个氨基酸或肽都可按肽领域中的已知方法进行适当保护。例如，Boc基或苄酯基优先用于保护氨基酸，尤其在α位上。苄基或适合的取代苄基可用于保护半胱氨酸的巯基，或含有氨基酸的其他硫羟，或丝氨酸或苏氨酸的羟基。甲苯磺酰基或硝基可用于保护精氨酸的胍或组氨酸的咪唑，适合的取代苄酯基或苄基可用于保护酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸的羟基或赖氨酸的ε-氨基。苄酯基保护基或苄基保护基的适当取代是用氯、溴、硝基或甲基的邻位和/或对位取代，并且用于提高保护基的反应速度。半胱氨酸和其他含硫氨基酸也可用硫烷基或硫芳基生成二醇化物予以保护。除了Boc基团外，保护基团非常容易确定，即用温和酸处理不能除去的那些基团。这些保护基团采用本领域已知的方法，如催化氢化、溶于液氨的钠或HF处理即可除去。
如采用固相法，肽的形成依次从肽的羟基末端开始，继之形成肽的氨基末端。固相合成一般采用美国专利No.4244946所述方法，从被护氨基酸与适当的树脂的共价结合开始，所用的树脂例如有二苯甲基胺树脂（BHA），甲基二苯甲基胺树脂（MBHA）或氯甲基树脂（CMR）。虽然CMR载体也用于产生甲酰胺或酯，但如果要获得产物肽的羧基末端是羧基，则一般都采用CMR载体。
第一个被护氨基酸（AA）一旦与所需树脂偶合，即可用温和的酸处理水解氨基，并且另二个被护氨基酸的游离羧基与该氨基偶合。这个过程依次进行，直至形成所需要的肽，其间无需分离中间体。然后可以任意的次序，解封完整的肽和/或从载体树脂上切下肽。
用HF或HBr/乙酸处理CMR支持的肽即可从树脂上切下肽并且产生以羧酸形式的羧基末端氨基酸。用氨或烷基胺的醇溶液处理CMR支持的肽，即在羧基末端产生甲酰胺或烷基甲酰胺。
如需要酯，CMR树脂可用适当的醇处理，如甲醇，乙醇，丙醇，丁醇或苄醇，在三乙胺存在下从树脂上切下肽，直接产生酯。
本发明肽的酯类也可按常规方法由羧酸前体制备。具体地说，在酸性催化剂存在下，用醇处理羧酸。另一种方法可将羧酸转化为活化酰基中间体，如囟化酰基，或活化酐或酯，用醇处理，最好在碱存在下进行。
从载体树脂上切下肽的较佳方法是将树脂支持的肽在适合的阳离子清除剂存在下（如苯甲醚或二甲氧基苯）经无水HF处理。该方法除了保护硫烷基的硫之外，可同时去除所有保护基，并从树脂上切下肽。以这种方法从CMR上水解的肽是羧酸，而从BHA树脂上切下的则是甲酰胺。
肽的末端氨基的修饰通常可按本领域已知的烷基化或乙酰化来完成。这种修饰可以在结合到肽以前通过氨基酸处理;或在合成并且释放出末端氨基之后通过肽处理，但必须在除去保护基团之前。
具体言之，乙酰化是用卤化酰基、相应烷基酸的酐或活化酯，叔胺存在下通过游离氨基进行的。单烷基化极其方便，用适当的脂族醛或酮，在温和的还原剂（如氰基硼氢锂或氰基硼氢钠）存在下，通过氨基的还原烷基化进行的。二烷基化可用过量烷基囟在碱存在下处理氨基来完成。本发明的长链烷基和酰基由于它们对脂质膜的亲和性，因此被认为具有良好的特性。十四烷基化或十八烷基化也可采用。
肽的溶液合成是采用形成酰胺键的常规方法完成的。具体地说，使用适当的碳化二亚胺偶合剂（如N，N′-二环己基碳化二亚胺（DCC）），任意在催化剂（如1-羟苯并***1（HOBT）和二甲氨基吡啶（DMAP））存在下，含有游离羧基的被护Boc-氨基酸与含有游离氨基的被护氨基酸偶合。其他的方法也可采用，例如形成被护Boc-氨基酸的游离羧基的活化酯、酐或酸卤化物，任意在碱的存在下，与被护氨基酸的游离胺反应。举例来说，被护Boc-氨基酸或肽，在无水溶剂中，例如二氯甲烷或四氢呋喃（THF），在碱存在下，例如N-甲基吗啉、DMAP或三烷基胺，与氯甲酸异丁酯反应，生成“活化酐”，然后再与另一个被护氨基酸或肽的游离胺反应。采用这种方法生成的肽，采用常规方法，在氨基或羧基末端有选择地去保护，并用类似方法与其他的肽或氨基酸偶合。在形成肽后，采用上述方法，如在钯或铂催化剂存在下进行氢化，可用溶于液氨的钠、氢氟酸或碱处理去除保护基。
在溶液合成时，常采用酯来保护肽的末端羧基。在醇水溶液中，通过用碱金属氢氧化物或碳酸盐，如氢氧化钾或碳酸钠处理后，它们可以转化为羧酸。采用前面所述的活化酰基中间体，酸也可以转化其他酯。
本发明的酰胺和取代酰胺，可采用同样方法由肽的羧酸制备。因此，氨或取代胺可与活化酰基中间体反应，生成酰胺。使用偶合试剂（如DCC），由羧酸本身和适当的胺生成取代酰胺，这种方法也很方便。
另外，本发明的甲酯通过用氨或取代胺在甲醇溶液中直接处理，也可转化为酰胺。肽的甲酯的甲醇溶液用氨饱和后，在压力反应器中搅拌，生成肽的简单的甲酰胺。甲酰胺由于与酯相比，稳定性高，因此系本发明的最佳实施例。
构成肽的M残基的氨基酸，不是苯丙氨酸及其衍生物，就是以-NHCHR1R2-表示的非天然氨基酸。苯丙氨酸衍生物包括酪氨酸;（O-C1-5烷基）酪氨酸，4′-卤代苯丙氨酸，4′-硝基苯丙氨酸和4′-氨基苯丙氨酸等早已为肽领域中的专业人员所公知。
在合成本发明肽中所用的M为-NHCHR1R2的中间体由式（Ⅱa）表示：
Figure 891046992_IMG14
其中R1为C1-5Alk，（CH2）nSC1-5Alk，（CH2）nOC1-5Alk，（CH2）nC3-7环烷基或（CH2）mC6H4-Ra;
Ra是卤素，OR′，NO2，NH2或H;
R2是（CH2）n0-，CHR3（CH2）mCO-，CO（CH2）mCO-，
CHR3CHR3，（CH2）mCO-，CHR3CHR3，CHR1（CH2）mCO-，
CHR3CHR1CHR′（CH2）mCO-，CHR3CHR′CHR1（CH2）mCO-，
COCHR1CHR′（CH2）mCO-，COCF2CR′R″（CH2）mCO-，COCF2（CH2）mCO-，
CH＝CR′CHR″（CH2）mCO-，COCH＝CR′（CH2）mCO-，
CH2S（O）pCHR′（CH2）mCO-，CH2NR′CHR″（CH2）mCO-，
P＝O（OR′）（CH2）mCO-，
R3和R3′分别为OH，H或NH2;
R4是OH，H，NH2或＝0;
m是0，1，2或3;
n是1或2;
p是0，1或2;
R5是H;
R6是CH3CO，C1-5Alk，Dns，Cbz或Boc或R5和R6一起为苯二甲酰亚氨基;
X是H，卤素，OR″，OC1-5Alk，NHR′R″或OCOC1-5Alk;
R′是H或C1-5Alk;
R″是H或C1-18Alk;
这些非天然氨基酸本身就可用作制备蛋白酶抑制剂的中间体。因此，与蛋白酶结合的肽底物，用式（Ⅱa）适当的化合物在易裂解的位点上取代1个或2个氨基酸，就可转化为抑制剂。
非天然氨基酸通常不是α-氨基酸，但是由α-氨基酸衍生的。因此，R本身是通过式（Ⅲ）氨基酸的选择来确定的，其中R的选择如前所述。
Figure 891046992_IMG16
例如由Boc，乙酰基或邻苯二甲酰基对α-氨基酸氨基的保护和由酸或酯向式（Ⅳ）的醇或式（Ⅴ）的醛转化，从而为R取代基的引入和本发明式（Ⅱa）化合物的制备提供了通用的中间体。这些α-氨基酸的N-甲氧基-甲基酰胺也可用作这方面的中间体。α-氨基酸可由天然和商业两种来源获得，也可采用肽领域中许多公知的方法合成。
式（Ⅳ）的醇可由相应的被护氨基酸的乙硼烷还原获得。式（Ⅴ）的醛可通过相应的氨基酸的甲酯还原获得，例如采用二异丁基氢化铝（DIBA）。另一种方法可将式（Ⅳ）的醇用温和的氧化剂（例如Dess        Martin        Periodinane）或Swern方法（DMSO，草酰氯，三乙胺）转化为醛。
以R1是Alk为例，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸特别适用于制备手性醛。α-氨基丁酸、α-氨基异丁酸和α-氨基戊酸可从商业途径获得其外消旋物。一般说来，任何烷基α-氨基酸均可在碱（如三乙胺，DBU或其他叔胺）存在下，用适合的烷基囟对硝基乙酸酯烷基化进行合成。醇盐，如甲醇钠或乙醇钠也属适用的碱。用氢和钯或铂催化剂对α-硝基烷基酸或酯进行还原即可获得氨基酸。另外，对制备α-氨基酸普遍适用的是通过对N-次苄基甘氨酸酯，如甲酯或乙酯进行烷基化。因此，用强碱，例如氢化钠或氢化钾或二异丙基酰胺锂，处理次苄基，继之用适当的烷基氯进行烷基化，然后再酸水解次苄基，即可获得所需的氨基酸。这些方法也都适合于用环烷基溴甲烷或2-环烷基溴乙烷生成环烷基氨基酸。手性氨基酸合成的其他方法，已由Evans等人（Tet.Lett.，1123（1987））公开发表。
R1为芳基或芳烷基的大多数氨基酸可通过商业途径获得，或已为本领域所公知，例如苯丙氨酸，4′-卤和4′-硝苯基丙氨酸，酪氨酸，（0-烷基）酪氨酸，苯甘氨酸和（4′-羟基）苯甘氨酸。这些化合物的同系物均可采用氨基酸合成的常规技术制备。因此，如上所述，用1-苯基-2-溴乙烷或1-苯基-3-溴丙烷对硝基乙酸乙酯或次苄基甘氨酸进行烷基化，即可制备氨基酸同系物。
R1含氧或硫的α-氨基酸可从丝氨酸、高丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸或蛋氨酸或对这些氨基酸烷基化（蛋氨酸除外）中得到。通过相应的羟基或硫羟化合物与碱（如三乙胺，DBU或氢化钠）和适合的烷基卤（如甲基，乙基，异丙基或异丁基溴化物的反应，进行烷基化。氨基酸的二高类似物可按如上所述制备氨基酸的常规技术制备。因此，如上所述，硝基乙酸的酯与碱和丙烯醛在米歇尔反应中反应，生成的醛再由温和的还原剂（如硼氢化钠）还原，得到所需要的羟基。然后对硝基催化还原，生成α-氨基5-羟基戊酸。相应的巯基类似物可由羟基中间体合成。因此，按本领域已知方法，对氨基和羧基进行保护后，在三乙胺或另一个叔胺存在下，羟基与三溴化磷或草酰溴或草酰氯反应，或与三苯膦和四溴化碳反应，转化为卤化物。卤化物与硫化钠或硫乙酸钾反应，再用氢氧化钠皂化，生成5-巯基-2-氨基戊酸。该中间体按上述半胱氨酸或丝氨酸的同样方法，可再进一步烷基化。
如上所述，α-氨基酸可转化式（Ⅳ）和（Ⅴ）的醛和醇。这些中间体继续处理，引入取代基R2，从而形成本发明式（Ⅱa）化合物，此反应决定于R2的性质。
在R2上烃取代基的引入最好通过式（Ⅴ）的醛与有机金属烃（如格利雅试剂））或有机锂反应。R2的羧酸官能度开始是以原酸酯的被护形式或是可氧化的烯烃。在一个实施例中，有机金属是由锂或镁和烯化卤形成的烷基化镁或烷基化锂，例如烯丙基溴，1-溴-3-丁烯，1-溴-4-戊烯，或1-溴-5-己烷，或其烷基取代的衍生物。
将有机金属试剂加到式（Ⅳ）的醛，得到式（Ⅵa）或式（Ⅵb）的羟基-烯烃，其中R0是OH，R1′是H，C1-5Alk，（CH2）nOC1-5Alk，（CH2）nC3-7环烷基或（CH2）mC6H4-Ra，R1，R5，R6，R′，R″，m和n的定义同式（Ⅱa）。
另一种方法，是将有机金属亚烷基（如格利雅试剂）加到式（Ⅲ）氨基酸的N-甲氧基甲基甲酰胺中，形成R0＝0的式（Ⅵa）和（Ⅵb）的酮-烯烃。除了取代1-金属-2-丙烯基环戊烷或1-金属-2-丙烯基环己烷外，其余都用同样的方法，制备式（Ⅵc）（其中R1，R5，R6R′R″，m和n的定义同式（Ⅱa））中相应的环烷基烯烃。因此，式（Ⅶa），（Ⅶb）或（Ⅶc）（其中R1′是H，C1-5Alk，（CH2）nOC1-5Alk，（CH2）nC3-7环烷基或（CH2）mC6H4-Ra和R1，R4，R5，R6，R′，R″，X，m和n的定义同式（Ⅱa））化合物的制备方法包括：将式（Ⅵa），（Ⅵb）或（Ⅵc）的化合物氧化为式（Ⅶa），（Ⅶb）或（Ⅶc）（其中R4＝O，X是OH）的酮-羧酸，然后以任意次序将酮基还原或还原胺化，并任意地将羧酸转化为酯，酰胺，醛，酐或酰基卤。适合的是R′为氢，m＝0，并且在式（Ⅶa）化合物的一个较佳实施例中R1′是H。
Figure 891046992_IMG17
Figure 891046992_IMG18
羟基-或酮-烷烃的氧化可采用常规方法，如用高锰酸钾，或采用臭氧分解后再用二甲硫，然后用高锰酸钾或琼斯试剂继续进行氧化。本领域的专业人员显然知道，当R1含硫取代基时，不能采用该方法。其他适用于制备某些这类化合物的方法，已由Hollalday（J.Med.Chem.，30，374-83（1987），Kempf，D.（J.Org.Chem.，51，21，3921-26（1986）等人公开发表。
用常规还原剂，如硼氢化钠，还原式（Ⅶa），（Ⅶb）和（Ⅶc）（R0：＝0）的酮化合物，生成相应的醇。如果需要醇，常常通过形成二苄醚或甲硅烷醚或乙酸酯予以保护，以防止不需要的副反应，如内酯化，并提高以及结合到本发明肽的效率。醇的这种保护在导致羧酸形成的氧化步骤前后都很容易进行。采用卤化剂，如三氯化磷或三溴化磷，可使羟基进一步转化为氯化物或溴化物，然后用氢和阮内
Figure 891046992_IMG19
镍还原为亚甲基。如果需要氨基，可用氰基硼氢化钠和铵卤化物，如氯化铵或溴化铵，将酮基还原胺化。通过化学领域内已知的一般方法，可将羧酸转化为醚，酰胺，醛，酐或酰基囟。
使R2不饱和可由对应于式（Ⅶ）的氨基酸产物获得。如前所述，将羰基还原为羟基，然后除去羟基，即可提供本发明的不饱和化合物。如前所述，除去羟基可以通过转化为甲磺酸酯或卤化物，并用诸如DBU或二异丙基酰胺锂处理。除去羟基的其他方法，如用温无机酸（HCl，H2SO4）处理，都是适宜采用的。使R2不饱和的另一个方法涉及式（Ⅴ）醛的维悌希烯化。用氢和钯催化剂还原这些不饱和化合物，为有效地除去式（Ⅷ）（R0：＝0）化合物中的酮基提供了另一个综合方法。
在R2上引入氮取代基，是在还原条件下，用C1-4氨基链烷酸的酯或烷基氨基C1-4链烷酸或在饱和或不饱和的5或6元环中含有氨基部分的结构，还原式（Ⅴ）的氨基醛完成的。这类胺的实例有：甘氨酸、丙氨酸、3-氨基丙酸、4-氨基-戊酸、丁酸、脯氨酸、△3-脱氢脯氨酸和2-羧基哌啶的苄酯或甲酯。适合的还原条件包括使用氢和钯或铂催化剂或氰基硼氢化钠。因此式（Ⅷ）化合物（其中R1，R5，R6，X和n的定义同式（Ⅱa））
Figure 891046992_IMG20
的制备，其所采用的方法包括：在还原条件下，式（Ⅴ）的化合物与脯氨酸、△3-脱氢脯氨酸或2-羧基哌啶的酯或酸反应，然后按任何次序，将酯转化为羧酸、酯、醛或酰胺;或将酸转化为酯，酰胺，酐或酰基囟。
在R2上引入硫取代基是通过硫代链烷酸或酯与α-氨基酸衍生物反应完成的。因此，在碱（如三乙胺或吡啶）存在下，使用常规试剂，如三溴化磷、磷酰氯或亚硫酰氯，将式（Ⅳ）的羟基氨基酸转化成相应的囟化物，然后再在碱存在下，与硫代链烷酸或酯反应。由这种方法产生的硫化物可进一步通过与温和的氧化剂（如偏高碘酸钠）反应，氧化为亚砜，或通过与高锰酸钾反应，氧化为砜。
在R2上引入碳氟化物（其中氟在γ至氨基）是通过式（Ⅴ）的醛与二氟溴乙酸乙酯和活化锌粉反应完成的。Thaisrivongs等（J.Med，Chem.，29，2080-87（1986）发表了二氟statine型化合物化学。这类化合物的同系物可由α-酮二醚（如草酰乙酸二甲酯）制取。
现对该方法进行说明。草酰乙酸二甲酯与二乙氨基三氟化硫反应， 产生α-二氟琥珀酸二甲酯。用硼氢化钠优择还原α-二氟酯官能度，得到二氟醇，采用温和的氧化方法，如科林试剂，Dess-Tuartin periodinane或Swern法（DMSO，草酰氯，三乙胺），可将二氟醇氧化为相应的醛。α-二氟醛与式R1CH2NO2的硝基化合物，如2-硝基苯乙烷或1-硝基C1-5烷烃，在如DBU或K2CO3的碱存在下，进行缩合，然后用氢和5%Pd/C或铂黑催化剂还原硝基，得到所需要的二氟同系物。这些同系物的烷基化衍生物的制备是在编排序列之前，用碱和烷基囟对起始物α-酮二醚进行烷基化。例如，在DBU存在下，用2当量甲基碘将草酰乙酸二甲酯烷基化，得到2-酮-3，3-琥珀酸二甲酯。按上述顺序进一步转化为2，2-二甲基-3，3-二氟-4-氧-丁酸甲酯，再与2-苯基硝基乙烷缩合，并用氢和5%Pd/C还原，得到2，2-二甲基-3，3-二氟-4-羟基-5-氨基-6-苯基己酸甲酯。在这阶段可将这些化合物进一步氧化到提供氟酮，但在残基结合到肽中以后往往更为适宜。Moffatt氧化剂（DMSO，乙酐），dESS-Martin periodinane或吡啶/三氧化铬，都是适合的氧化剂。
在R2上引入氧膦基取代基是在乙酸中，通过氨基甲酸苄酯与亚磷酸三苯酯和通式R1CHO的醛（例如苯乙醛、异丁醛或2-甲基丁乙）缩合，得到式（Ⅸ）的膦酸酯。
Figure 891046992_IMG21
上述膦酸酯与醇盐进一步反应，得到相应的膦酸-烷基酯。然后与甲醇钠反应，得到膦酸-甲酯。用适当的卤化剂，如亚硫酰氯或亚硫酰溴，将该膦酸转化为膦酸卤，为侧链的进一步处理提供了适用的反应中 间体。与诸如锂或由烷基溴、溴-3-丁烯、2-（2-甲基丙烯基）氯环丙烷或2-（2-甲基丙烯基）-环己烷衍生物的格利雅试剂等有机金属试剂反应，得到由式（Ⅹa）和（Ⅹb）给出的本发明的烯基次膦酸甲酯：
Figure 891046992_IMG22
式中R1，R5，R6，R′，R″，m和n的定义同式（Ⅱa），R′′′是C1-5烷基。接着用高锰酸钾氧化或按上所述进行臭氧分解，得到本发明相应羧酸次膦酸烷基酯。因此，式（Ⅺ）化合物的制备可通过将式（Ⅹa）或（Ⅹb）化合物氧化为羧酸，任意将次膦酸烷基酯水解为次膦酸，并可任意将羧酸转化为酯，酰胺，醛，酐或酰基卤。
式中R1，R5，R6，R′，X和n的定义同式（Ⅱa）。次膦酸烷基酯水解为次膦酸可通过诸如溴化氢一类的强酸反应来完成。正如本领域专业人员所知的，当R1含有硫取代基时，该方法不能使用。适用于某些这类化合物合成的方法，Giannousis等已有报导（J.Med.Chem.，30，1603-09（1987））。
本发明的另一个方面涉及完全新的氨基酸的制备，当其完全结合到肽中时，提供了不能水解的模拟肽键。这些化合物的制备如上所述，并在实施例中予以进一步说明。它们可按本领域已知方法结合到本发明的 肽中，并在式（Ⅱb）中给出其结构式：
Figure 891046992_IMG24
式中R1是C1-5Alk，-（CH2）nSC1-5Alk，-（CH2）nOC1-5Alk，-（CH2）nC3-7环烷基或-（CH2）mC6H4-Ra;
Ra是卤素，NO2，OH，OC1-5Alk，NH2或H;
R2是（CH2）n-X，（CH2）nCO-X，CHR3CHR1CHR′（CH2）mCO-，
COCR1CHR′（CH2）mCO-X，CHR3CF2（CH2）mCO-X，
COCF2CR′R″（CH2）mCO-X，CHR3（CH2）mCO-X，CO（CH2）mCO-X，
Figure 891046992_IMG25
R3是H，NH2或OH;
R4是H，NH2，OH或＝0;
R5是H;
R6是CH3CO，C1-5Alk，Dns，Cbz或Boc，或R5和R6一起为苯二酰亚氨基;
X是H，卤素，OH，OC1-5Alk，NHR′R″或OCOC1-5Alk;
R′和R″是H或C1-5Alk;
m＝0，1，2或3;
n＝1或2;
R1是苯基亚甲基，异丁基或环己基亚甲基时，R2不能是CHR3CH2CO-X，COCH2CO-X，COCF2CO-X或CHR3CF2CO-X;R1是异丁基时，R2不能CH（OH）CH2CH2CO-X或COCH2CH2CO-X。
将式（Ⅱb）化合物结合到肽中，取代1或2个由蛋白酶，尤其是由逆转录病毒蛋白酶切割的氨基酸残基，为产生蛋白酶抑制活性提供了方法。上述合成方法以非选择性的或外消旋的手段给出手性中心被认为是适宜的。由于这种情况常存在于生物***中，所以一个手性中心的构型通常是最佳的。许多化合物都多于1个手性中心，随着手性中心的变化，使化合物呈非对映形。这些非对映体的分离通常可通过硅胶层析或在带有适当流动相的十八硅烷层析载体上层析。如用硅胶，则将乙酸乙酯和己烷、或甲醇和氯仿或二氯甲烷的混合物用于洗脱非对映体。如用十八硅烷载体，则水和甲醇或乙腈的混合物可用于纯化非对映体。在酸性或碱性化合物的情况下，则流动相可加0.02～0.5%乙酸、三氟乙酸或磷酸盐缓冲液缓冲。如果残基M只有一个手性中心，或非对映体难以分离，则将残基结合到肽中可能较好，其中其他氨基酸的手性中心变得更不对称，并使形成的非对映体在后阶段能够分离。但有时最好将非对映体分离时，并不意味着实施本发明必须将手性中心分离。
如上所述，采用肽领域中一般的方法，可将残基M的非天然氨基酸结合到本发明的肽中。
在去保护以后，如果最终的肽含有碱基，则可制备酸加成盐。肽的酸加成盐可按常规方法，在适当的溶剂中由母体化合物和过量的酸制备，这些酸例如有盐酸，氢硼酸，硫酸，磷酸，乙酸，马来酸，琥珀或甲磺酸。尤其可用乙酸盐。如最终的肽含有酸基，则可制备阳离子盐。一般说来，母体化合物与过量的含有适当阳离子的碱试剂反应，例如氢氧化物，碳酸盐或醇盐。诸如Na+，K+，Ca++和NH+4阳离子是存在于药物上可接 受的盐中的阳离子实例。某些化合物形成内盐或也可接受的两性离子。
M为-HNCHR1R2-的式（Ⅰ）化合物可用于诱发经易感染病毒感染并需要这种治疗的病人体内抗病毒活性。治疗方法包括口服、非经肠、口腔、经皮、直肠或吹入等，施用有效量的经过选择的化合物，尤以分散在药物载体中为佳。活性成分的剂量单位选用0.05～15mg/kg。这些剂量单位每天以1至10次用于急性或慢性感染。
M为-HNCHR1R2-的本发明肽的蛋白酶抑制性质通过其抑制10nM～250μM左右范围内rHIV蛋白酶水解肽底物的能力来表示。下表表示这些肽的抑制常数。
表Ⅱ        rHIV蛋白酶的抑制
化合物实施例编号        Ki（μM）
15        14
16        1
17        68
18        6.7
19        7
20        32
21        160
22        47
23        27
24        6
25        40
26        60
27        .26
28        .026
29        ≥28
30        14
31        1.2
32        220
33        3.6
34        .140
35        .110
36        10
37        3.5
38        .15
本发明肽或其衍生物的药物组合物可以配制成非经肠用的溶液或冻干粉剂。粉剂可在使用前加入适当的稀释剂或其他药物上可接受的载体。溶剂通常是等渗缓冲水溶液。适当的稀释剂的例子是常规等渗盐溶液，水中含有5%标准葡萄糖或乙酸钠或乙酸铵缓冲液。这种配制剂尤其适用于非经肠道给药，但也可以用于口服或装在有剂量刻度的吸入器或吹入用喷雾器内。可按需要加入赋形剂，例如聚乙烯吡咯酮，明胶，羟基纤维素，***树胶，聚乙二醇，甘露醇，氯化钠或柠檬酸钠。
非经肠用的较佳组合物还可含有一定量的包在脂质载体内的化合物。脂质体由肽分散在含有磷脂的水相中组成，可含或不含胆甾醇，各种技术都可用于配制，包括手摇操作，高压挤压，逆相蒸发和微流化。配制这种组合物的适宜方法在待批专利No.06/763，484中已充分公开，并且该文已作为参考文献结合在本文中。通过免疫球蛋白或蛋白质与病毒颗粒或被感染细胞的反应，使这种载体能够任意针对其他用部位。这种蛋白质的选择当然取决于感染病毒的抗原决定簇。这种蛋白的一个例子是CD4T细胞糖蛋白及其衍生物，例如sCD-4（可溶CD-4），其与人体免疫缺陷病毒（HIV）的糖蛋白外壳反应。这类蛋白质在待批专利No.07/160463中已经公开，该文作为参考文献已结合在本文中。通过本领域已知方法，能够研制出用于其他病毒的类似靶蛋白，这些都属于本发明的范围。
另外，这些肽可以制成胶囊，片剂或制备成用于口服的乳剂或糖浆。为了增强或稳定组合物，或能使组合物的制备简化，可以加药物上可接受的固体或液体的载体。液体载体包括糖浆，花生油，橄栏油，甘油，盐水和水。固体载体包括淀粉，乳糖，硫酸钙二水合物，石膏粉，硬脂酸镁或硬脂酸，滑石粉，果胶，***胶，琼脂或明胶。载体还可包括缓释材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，可以单独使用，也可与石蜡结合使用。固体载体的用量可以改变，但每个剂量单位最好在20mg～1g左右。药物制剂可按制药业的常规技术配制，包括碾磨、混合、制粒和压缩成片剂;或碾磨、混合和装填成硬明胶胶囊。使用液体载体时，制剂的形式是糖浆、酏剂、乳剂，或水或非水悬浮液。这种液剂可以直接口服或装入软明胶胶囊。
直肠用的本发明肽的粉剂可与赋形剂结合，如可可豆脂，甘油，明胶或聚乙二醇，并且模压成栓剂。粉剂也可与油制剂、凝胶、乳油或乳化剂，缓冲或非缓冲的结合，经皮给药。
下列实例可说明本发明。列举的实例无意限制本发明的范围，而是为了提供如何制备和使用本发明的化合物。
例中所有的温标均为℃。氨基酸分析是在Dionex        Autoion        100上进行的。肽组分分析是按氨基酸分析方法分析。FAB质谱是在VG        Zab质谱仪上采用快速原子轰击测定。表示用于薄板层析和逆向分布的洗脱剂组分的简写符号的含义为：B：正丁醇，A：乙酸，W：水，E：乙酸乙酯，IP：导丙醇。NMR是在250MHz处用Bruker        AM        250分光计记录的。峰数表示：S＝单峰，d＝双重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，m＝多重峰，br表示宽信号。4（S）-氨基-3（R）-羟基-5-苯基己酸〔AHPPA〕及其3（R）异构体〔3-R-AHPPA〕系按Rich等方法（J.Med.Chem.，23，27-33（1980））制备。外消旋物〔3-R，S-AHPPA〕的制备在此方法中省略了最终的层析。
重组体HIV蛋白酶的纯化
重组体HIV蛋白酶在大肠杆菌（E.coli）中表达的方法已由Debouck等作了介绍（Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84，8903-6（1987））。用于测定本发明肽的酶是按此方法制备并由下述细胞片状沉淀物中纯化的。大肠杆菌细胞片状沉淀物悬浮在缓冲液中，其含有Tris-HCl        50mM（pH7.5），DTT，EDTA和PMSF（苯甲磺酰氟）各1.0mM。细胞采用超声裂解，不溶物通过离心（1500×g        av.15分钟）去除。上清液用硫酸铵达到40%饱和。此悬浮液在室温下搅拌30分钟后，按上述条件离心。生成的沉淀物再溶解/悬浮在20mM        Tris-HCl（pH7.5），200mM        NaCl，DTT和EDTA各 0.1mM的最小容积中。样品（5ml等份）在装到Beckman        TSK        G2000SW制备HPLC凝胶过滤柱（2.1cm×60cm）前，先再离心。凝胶柱在相同缓冲液和4ml/分流速下平衡。柱的流出物控制在280nm和1分钟。收集馏份。具体地说，rHIVPRT（重组体HIV蛋白酶）洗脱45～46分钟后开始流动。在此阶段，蛋白酶达到N85～95%纯。通过免疫印迹分析，在硫酸铵步骤上有90%以上免疫反应物沉淀。经活性测定，活性的最高峰值是在45～46分钟收集的部份。RP-HPLC和SDS-PAGE的TSK柱馏份分析说明，11000Mr蛋白的绝大部份是在45～46的馏份。活性本身并不能用于获得可靠的回收数据，因其受高盐的影响，即盐份增加，得到的活性水平也高。因此，每一步纯化，其回收的活性都比开始时高。从50g大肠杆菌细胞片状沉淀物中，rHIVPRT的总量为N        1mg。
HIV蛋白酶活性的底物动力学
在pH6.0和温度37℃下，测定寡肽的起始速率数据。反应混合物（0.01～0.1mL）含有50mM        Mes（2-N-吗啉代）乙基磺酸），1mM        EDTA，1mMDTT，0.2M        NaCl，0.1%（v/v）***X-100（pH6.0），10%DMSO和肽的可变浓度。在37℃下保温几分钟后，加入经过纯化的HIV蛋白酶（0.01～2mg）开始反应。10～30分钟后，加入等体积的冰冷却的0.6N三氯乙酸或0.2%三氟乙酸，使反应骤冷。样品在1700rpm离心5分钟，通过反相HPLC将肽底物和产物分离和定量测定（峰值求积）。起始速率的测定是根据给出的底物浓度，测定底物转化为产物的百分率，用形成mM肽产物1分钟表示。具体地说，反应速率与反应的时间成线性关系，在反应终点，不到15～20%底物转化为产物。采用Cleland的Fortran程序（W.W.Cleland，Adv.Enzymol.29，1，（1967）），将起始速率数据拟合到Michaelis-Menten方程（v＝Vmax（S）/（Km+（S）），计算出动力学常数（Michaelis常数，最大速度）。得到的酶变数（Kcat）用Kcat＝Vmax/Et表示，其中假定每个HIV蛋白酶的22-KD二聚体有一个活性部位。
通过测定相对起始速度（rel        Vo），能评估底物的生存率。这个测定以同样方法运算，不同之处在于将10-20分钟后底物水解百分率与经同样保温后Ac-Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH（对照）的水解百分率作对比。这就在一个时间点上，与对照肽比较，建立了起始反应速度的对比。
HIV蛋白酶活性的抑制
一个典型测定包括10mL        MENDT缓冲液（50mM        Mes（pH6.0;2-（N-吗啉代）乙基磺酸），1mM        EDTA，1mM二硫苏糖醇，200mM        NaCl，0.1%***X-100）;2，3或6mM        N-乙酰-L-精氨酰-L-丙氨酰-L-丝氨酰-L-谷氨酰胺酰-L-天冬酰胺酰-L-酪氨酰-L-脯氨酰-L-缬氨酰-L-缬氨酰胺（Ac-Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH;Km＝7mM）以及微摩尔和次微摩尔浓度的合成化合物。在37℃下保温几分钟，加入经过纯化的HIV蛋白酶0.01-1mg开始反应。反应混合物（37℃）在10-20分钟后，加入等体积的冷却0.6N三氯乙酸，骤冷。离心除去沉淀物，用反相HPLC分析肽分解产物（Beckman        Ultrasphere        ODS，4.6mm×2.5mm;流动相：5-20%乙腈/H        O-0.1%TFA（15分钟），20%乙腈/H        O-0.1%TFA（5分钟），1.5mL/分，220Nnm处检测，Ac-Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH（17-18分钟）和Ac-Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Tyr（10-11分钟）的洗脱位置经证明与真材料一致。Ac-Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Tyr形成的起始速率是从这些峰值的求积中测定。具体地说，合成化合物的抑制特性是从1/v        vs。标图的斜截分析测定的〔抑制剂〕〔狄克松分析〕。由这种初步分析得到的Ki值，仅就对比抑制剂来说，已够精确，在用于底物的Mechaelis常数的条件下也能准确测定。
实例1
固相肽合成的一般步骤
肽酰胺的合成是以二苯甲基胺树脂（BHA）为载体，通过固相肽合成而得。从羧基端部开始，按序加上被护氨基酸，直至得到所要求的序列为止。叔丁氧基羰基（Boc）是用于保护α-氨基。侧链官能团是按如下保护：精氨酸和组氨酸用甲苯磺酰基（Tos）;半胱氨酸用对甲基苄基（MeBzl）;丝氨酸和苏氨酸用苄基醚（Bzl）;赖氨酸用对氯代苄氧羰基（Clz）;谷氨酸和天冬氨酸用苄基酯（OBzl）;酪氨酸用对溴代苄氧羰基（BrZ）。除掉Boc基是应用含50%三氟乙酸（TFA）的二氯甲烷处理。该胺-TFA盐的中和是应用含7%二异丙基乙基胺（DIEA）的二氯甲烷处理。各氨基酸向增长中肽上的偶合作用是应用含3当量Boc-氨基酸和3当量1-羟基苯并***（HOBt）的二甲基甲酰胺（DMF）溶液和含3当量二环己基碳化二亚胺的二氯甲烷溶液。通过水合茚三酮试验检验偶合反应是否完成，需要时重复进行偶合。一般规定如下：
1.用CH2Cl2洗涤 1×1分钟
2.用50TFA洗涤        1×1分钟
3.用50TFA解封闭        1×20分钟
4.用CH2Cl2洗涤 6×1分钟
5.用7%DIEA中和        3×2分钟
6.用CH2Cl2洗涤 4×1分钟
7.用DMF洗涤        2×1分钟
8.Boc-AA+HOBt在DMF中溶液 不排放液体
9.DCC在CH2Cl2中溶液 2小时
10.用DMF洗涤        2×1分钟
11.用CH2Cl2洗涤 3×1分钟
为向BHA树脂上接上第一个（C-端部）残基，合成是从第5步开始。对于其后的每种氨基酸，合成是从第1步开始。
Ac-Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2的制备
以常规方法制备被护的九肽树脂Boc-Arg（Tos）-Ala-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。在用含50%TFA的CH2Cl2溶液除掉N-端部Boc基团和用含7%DIEA的CH2Cl2溶液中和所得TFA盐之后，用2ml乙酐在30mlCH2Cl2中的溶液将该与树脂结合的肽乙酰化，反应30分钟。
在0℃，在1ml苯甲醚存在下用10ml无水液态HF处理50分钟，除掉侧链保护基，并使肽与树脂断开。真空除掉HF之后，用***洗涤树脂并风干。然后该树脂依次用2×30ml 1% HOAc/H2O和2×30ml 10%HOAc/H2O萃取。萃取物合并后冷冻干燥，得到476mg粗品肽。
应用n-BuOH/HOAc/H2O 4∶1∶5体系进行逆流分配，提纯该粗品肽。将适宜的组分汇集，蒸发至干，残余物从1% HOAc/H2O中冷冻干燥，得到294mg部分纯化的肽。取一份100mg部分纯化的肽用凝胶过滤法进一步纯化，使用2.6×70cm的G-15 Sephadex
Figure 891046992_IMG26
柱，用1%HOAc作为洗脱剂。将适宜组分汇集并冷冻干燥，得到89mg经纯化的标题化合物。
TLC：（n-BuOH/HOAc/H2O4∶1∶1），Rf＝0.49。
HPLC：（Hamilton PRP-1，CH3CN/H2O/0.1%TFA，5%至40%CH3CN，15分钟，线性梯度，1.5ml/分钟）k′＝2.6;
FAB-MS：m/z 1074（M+H+）。
实例2
（2S）-N-（2-N-叔丁氧羰基）氨基-3-苯基）丙基脯氨酸之制备
a）将L-苯丙氨酸甲酯盐酸盐（10.0g，46.4mmol）溶解于三乙胺（12.9ml，92.8mmol）和DMF（60ml）的混合液中。于室温用5分钟加入N-叔丁基二碳酸酯（16.0ml，96.6mmol，50%过量）。搅拌16小时后，过滤混合物，减压浓缩。用硅胶快速色谱提纯，用含20%EtOAc的己烷洗脱， 得到13.0g标题化合物。
TLC：（含20%EtOAc的己烷），Rf＝0.31。
NMR（CDCl3）：δ7.23（m，5H），5.16（d，1H，J＝8Hz），4.57（q，1H，J＝7Hz），3.66（s，3H），3.07（d，2H，J＝6Hz），1.40（s，9H）.
N-叔丁氧羰基-L-苯丙氨醛
b）将如上述制备的Boc-Phe-OMe（12.9g，46.4mmol）溶解于无水甲苯（50ml）并冷却至-78℃。用2分钟加入氢化二异丁基铝（在甲苯中25%混合液，77.3ml，116mmol，150%过量）。于-78℃搅拌15分钟后，慢速加入15ml甲醇，以防发生泡腾。混合物倾入Rochelle（罗谢尔）盐（1升水中含94g酒石酸钾钠，150ml）中，并与100ml***一同振摇，直至可以萃取为止。用***（3×100ml）洗涤水溶液相，将有机物相合并，用MgSO4干燥，蒸发。所得产物直接用于下一步骤。
TLC：（含20%        EtOAc的己烷溶液），Rf＝0.21。
NMR（CDCl3）：δ9.69（s，1H），7.28（m，5H），5.05（s，1H），4.43（q，1H，J＝7Hz），3.10（d，2H，J＝7Hz），1.43（s，9H）.
（2S）-N-（2-（N-叔丁氧羰基）氨基-3-苯基）丙基-L-脯氨酸苄酯
c）将上述2（b）所制的粗品醛溶解于含1%乙酸的甲醇（250ml），同时溶有L-脯氨酸苄酯盐酸盐（18.1g，75mmol）。加入氰基硼氢化钠（3.06g，48.7mmol，5%过量），混合物于室温搅拌16小时。将溶液蒸发，残余物于EtOAc及1N HCl之间分配。有机物相用1N HCl（2次）、1N NaHCO3（3次）和水（1次）洗涤。将有机物相蒸发，得13.5g本标题苄酯。粗品取一部分快速色谱纯化（硅胶，含20%EtOAc的己烷），从CHCl3和己烷中结晶得纯品。晶体经X-射线测定晶体结构（S，S），得满意结果。
mp：79-79.5℃
TLC：（含20%EtOAc的己烷）;Rf＝0.31。
NMR（CDCl3）：δ7.33（s，5H），7.20（s，5H），5.14（s，2H），4.95（d，1H，J＝9Hz），4.05（d，1H，J＝7Hz），3.17（m，2H），2.63（m，5H），1.87（m，4H），1.35（s，9H）.
MS：m/z439（M+H）+，383，365，347，339，303，231，218，91，79.
元素分析：
按C26H34N2O4计算值：C，71.21;H，7.81;N，6.39;
测定值：C，71.00;H，7.83;N，6.25;
（2S）-N-（2-（N-叔丁氧羰基）氨基-3-苯基）丙基-L-脯氨酸
d）将上述2（c）所制的被护还原二肽（0.44g，1.0mmol）溶解于100ml甲醇，加入10%Pd/C（0.50g）并于45psi H2条件下氢化1小时。过滤混合物，浓缩，得0.35g标题化合物（收率100%）。
TLC：（B∶A∶W4∶1∶1）;Rf＝0.66。
NMR（DMSO-d6）：δ7.26（s，5H），6.80（d，1H，J＝9Hz），6.00（s，2H），3.78（s，1H），2.9（m，6H），1.85（m，4H），1.30（s，9H）.
重复同上步骤，但不同之处是用哌啶-2-羧酸苄酯替代脯氨酸苄酯，得到（2S）-N-（2-（N-叔丁氧羰基）氨基-3-苯基）丙基-哌啶-2-羧酸。
进行上述步骤2（a）-2（c），不同之处是用△3-去氢脯氨酸甲酯替代脯氨酸苄酯，得到（2S）-N-（2-（N-叔丁氧羰基）氨基-3-苯基）丙基-L-脯氨酸。用5当量K2CO3在4∶1甲醇∶水中溶液皂化，得到2（S）-N-（2-（N-叔丁氧羰基）氨基-3-苯基）丙基-L-脯氨酸。
实例3
（1R，2R）-2-（（（2S）-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基-1-氧代）丙基）环戊烷羧酸之制备
6-甲氧羰基二环〔3.1.0〕己烷
a）将纯净重氮乙酸乙酯（53ml，0.50mol）用注射器用4小时注入到搅拌并浸于20-25℃水浴的乙酸铑二聚物（1.0g，0.0023mol）和环戊烯（250ml，2.5mol）的混合物。继续搅拌30分钟，用旋转蒸发除去过量环戊烯。剩余物用CH2Cl2稀释，通过Celite
Figure 891046992_IMG27
过滤并用旋转蒸发浓缩。剩余物于44-46℃/0.5mmHg蒸馏得标题化合物（46.5g，0.302mol）的乙氧羰基差向异构体的混合物，收率60%。
TLC：（80∶20混合己烷∶乙酸乙酯），Rf＝0.67。
NMR（CDCl3）：δ4.1（2H，交叠四重峰），2.0-1.5（7H，m），1.45-1.1（5H，m）.
6-（1-羟基-1-甲基乙基）二环〔3.1.0〕己烷
b）甲基锂于***中的1.4M溶液（350ml，0.50mol）在氩气氛中于-78℃迅速搅拌，同时用15分钟用注射器注入纯净的实例3（a）产物（27.67g，0.180mol）。混合物于-78℃搅拌1小时，然后用2小时升温至室温。小心加入400ml水，然后加入3N HCl（约200ml，至溶液呈中性为止）。分出***层，水层用***萃取二次。***萃取液合并后用MgSO4干燥，旋转蒸发浓缩。剩余物蒸馏（80-90°/15mmHg）得到标题产物（19.79g，0.141mol）的差向异构体混合物，收率79%。
TLC：（80∶20混合己烷∶乙酸乙酯），Rf＝0.36，0.17。
NMR（CDCl3）：δ2.0-1.6（5H，m），1.5-1.0（9H，m），0.55（1H，m）.
（±）-反式-2-（2-甲基丙烯基）氯代环戊烷
c）上述实例3（b）产物（19.6g，0.140mol）于THF（125毫升）中的溶液快速一次加入迅速搅拌并在冰浴中冷却的37%HCl水溶液（250ml）和125ml THF的混合物中。经过3.5-4.0分钟后，将混合物倾入1升冰水中，并迅速用戊烷萃取（3×250ml）。戊烷萃取液用200ml 5% NaHCO3洗涤，用MgSO4干燥，旋转蒸发浓缩（25℃/15mm）。剩余物用维格罗分馏柱蒸馏（78°-80℃/15mmHg），得标题化合物（18.65g，0.118mol），收率84%。
TLC：（混合己烷），Rf＝0.71。
NMR（CDCl3）：δ4.95（1H，dm），3.84（1H，明显四重峰），2.87（1H，明显五重峰），2.2（1H，m），2.07-1.75（4H，m），1.72（3H，d;J＝1.2Hz），1.68（3H，d;J＝1.2Hz），1.33（1H，m）.
GC-MS（异丁烷）：m/z158（M）+，123（M+H-HCl）+。
IR（薄膜法）：2980，1455，1382，838cm-1。
2-（2-甲基丙烯基）环戊基锂
d）将带有四流冷凝器的干燥50ml烧瓶用氩吹扫。加入锂粉（0.34g，49mmol），Na含量1%，于矿物油中的25%（重量）分散液），并用2×10ml无水戊烷冲洗，除掉矿物油。加入实例3（c）产物（1.58g，10.0mmol）在无水冻-融脱气戊烷（20ml）中的混合物。混合物于55℃油浴中搅拌加热回流19小时，然后静置。将所得透明黄色溶液（17.6ml）用薄荷醇滴定，用1，10-菲咯啉作指示剂，得知该黄色溶液为0.45M。所得标题化合物收率为79%。
（1R，2R）-2-（2S）-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基-1-氧代）丙基-2-甲基丙烯基环戊烷
（e）向-78℃，搅拌中的Boc-L-苯丙氨酸（1.59g，6.00mmol）于40ml***中的混合物于氩气氛中加入正丁基锂（4.00ml，在己烷中1.50M浓度，6.00mmol）。10分钟后，用10分钟期间滴加入实例3（d）产物（37ml，在戊烷中0.32M浓度，11.8mmol）。10分钟后，使溶液升温至0℃并搅拌1小时45分钟，然后在强搅拌下加入200ml水。用乙酸乙酯萃取混合物，用快速色谱纯化该粗制品3次（用95∶5混合己烷∶乙酸乙酯洗脱），得最先洗脱的异构体A（0.314g，8.46mmol，收率14%），和后洗脱的异构体B（0.356g，9.60mmol，基于Boc-L-Phe收率为16%）。
（异构体B）
（1R，2R）-2-（2S）-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基-1-氧代）丙基-2-甲基丙烯基环戊烷
TLC：（95∶5混合己烷∶乙酸乙酯），Rf＝0.19。
NMR（CDCl3）：δ7.28-7.08（5H），5.06（1H，d;J＝7.8Hz，NH），4.95（1H，d;J＝9.6Hz;乙烯基），4.61（1H，明显四重峰），3.11（1H，m），3.10（1H，dd;苄基），2.83（1H，dd;苄基），2.77（1H，m），2.05-1.25（6H），1.68（3H;甲基），1.62（3H;甲基），1.39（9H，s;Boc）.
MS（DCI/NH3）：m/z372（M+H）+，316，272.
（异构体A）
（1S，2S）-2-（（2S）-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基-1-氧代）丙基-2-甲基丙烯基环戊烷
mp：42-44℃
TLC：（95∶5混合己烷∶乙酸乙酯），Rf＝0.26。
NMR（CDCl3）：δ7.27-7.08（5H），5.18（1H，d;J＝7.7Hz;NH），5.00（1H，d;J＝9.3Hz;乙烯基），4.57（1H，明显四重峰），3.05（1H，dd;J＝13.9，6.7Hz;苄基），2.95（1H，dd;J＝13.9，5.8Hz;苄基），2.79-2.58（2H，m），1.95-1.20（6H，m），1.70（3H;甲基），1.52（3H;甲基），1.41（9H;Boc）.
MS（DCI/NH3）：m/z（M+H）+，372，316，272。
（1R，2R）-2（（（2S）-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基-1-氧代）丙基）环戊烷羧酸
f）将实例3（e）产物中异构体B（186mg，0.50mmol）在4∶1CH2Cl2/CH3OH（5ml）中的溶液于-78℃搅拌，向其中通入臭氧气流，直至蓝色稳定不褪为止（约需2分钟）。用氩吹扫此溶液，加入0.5ml（CH3）2S，使 溶液升温至20℃。2小时后，真空除掉挥发性组分。将所得粗品醛溶解于5ml丙酮，并于0℃用琼斯试剂（0.25ml，2.0M）处理，搅拌3分钟。加入0.2ml异丙醇。用水稀释混合物并用CH2Cl2萃取，浓缩萃取液。经快速色谱纯化（用80∶20混合己烷∶乙酸乙酯，然后用80∶20∶4混合己烷∶乙酸乙酯∶乙酸洗脱），得标题化合物（148mg，0.410mmol）玻璃状物，收率82%。
m.p.94.5-96℃。
TLC：（80∶20∶4混合己烷∶乙酸乙酯∶乙酸），Rf＝0.27。
NMR（CDCl3）：δ7.26-7.13（5H，m），5.12（1H，d;J＝8.0Hz），4.70（1H，明显四重峰），3.46-3.27（2H，m），3.16（1H，dd;J＝14Hz，6.2Hz），2.93（1H，dd;J＝14.0Hz，6.5Hz），2.14-1.67（6H，m），1.39（12H，s）.
MS（DCI/NH3）：m/z362（M+H）+.
重复上述步骤，不同之处是在3（a）中用环己烯替代环戊烯，得到2-（（（2S）-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基-1-氧代）丙基）环己烷羧酸。
实例4
（1S，2S）-2-（（（2S）-2-叔丁氧羰基氨基-1-氧代-3-苯基）丙基）环戊烷羧酸的制备
应用制备实例3（f）化合物的相同步骤，不同之处是用实例3（e）的异构体A（186mg，0.50mmol），得到标题化合物白色固体物（135mg，0.37mmol），收率75%。
TLC：（80∶20∶5混合己烷∶乙酸乙酯∶乙酸），Rf＝0.41。
NMR（CDCL3）：δ7.32-7.12（5H，m），5.13（1H，d;J＝8.1Hz），4.71（1H，明显四重峰），3.42（1H，明显四重峰），3.22-3.08（2H，m），2.91（1H，dd;J＝13.8，6.9Hz;苄基），2.20-1.62（6H，m），1.38（12H，s）.
MS（DCI/NH3）：m/z362（M+H）+，323（M+NH3+H-tBu）+，262，120.
实例5
（1R，2R）-2-（（（1RS，2S）-1-羟基-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基）丙基）环戊烷羧酸之制备
向实例7（f）化合物（216mg，0.598mmol）于0℃的甲醇（5ml）溶液中，加入NaBH4（25mg，0.66mmol）并搅拌。20分钟后，加入稀HCl并用CHCl萃取该混合物，得到标题化合物的差向异构体混合物（216mg，0.595mmol），收率100%，约2∶1比率。
NMR（CDCl3）：δ7.35-7.15（5H），5.05（1H;NH），3.87-3.56（2H），2.95-2.60（3H），2.38（1H），2.19-1.55（6H），1.38（9H）.
MS（DCI/NH3）：m/z 364（M+H）+，325，308（M-C（CH3）3+H）+，264（M-OCOC（CH3）3+H）+，183，160，120
将2-（（（2S）-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基-1-氧代）丙基）环己烷羧酸进行同上的还原反应，得到相应的2-（（（2S）-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基-1-羟基）丙基）环己烷羧酸。
实例6
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-1-羟基-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基）丙基）环戊烷羧酸之制备
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-2-叔丁氧羰基氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊烷羧酸甲酯
a）将实例5的差向异构体（140mg，0.386mmol）在0℃***（5ml）中溶液用过量重氮甲烷***液处理，反应约5分钟，直至得到稳定黄色为止。加入乙酸（0.1ml），旋转蒸发浓缩该溶液。用HPLC分离（硅胶，80∶20乙酸乙酯∶混合己烷），得到先洗脱的异构体A（47.0mg，0.125mmol），后洗脱的异构体B（50.6mg，0.134mmol）。
异构体A
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-2-叔丁氧羰基氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊烷羧酸甲酯
TLC：（2∶1混合己烷∶乙酸乙酯），Rf＝0.54。
NMR（CDCl3）：δ7.32-7.18（5H，m），4.85（1H，d;J＝8.7Hz;NH），3.72（1H，m），3.66（3H，s），3.52（1H，dd），2.90（2H，明显d;苄基），2.58（1H，明显四重峰），2.40（1H，m），1.92-1.50（6H，m），1.39（9H，s）.
MS（DCI/NH3）：m/z378（M+H）+，339，322（M-C（CH3）3+H）+，321，304（M-OC（CH3）3+H）+，278（M-OCOC（CH3）3+H）+，120.
其2-羟基构型是按如下规定的：异构体A用TFA处理除掉其Boc保护基，转化成为其噁唑烷二酮衍生物，然后用光气和三乙胺处理。该噁唑烷二酮环上的氢具有与反式关系相一致的NMR偶合常数（J＝5.3Hz），并由未观察到NOE得到证实，于是确定该2-羟基构型为（S）。
异构体B
（1R，2R）-2-（（（1R，2S）-2-叔丁氧羰基氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊烷羧酸甲酯
TLC：（2∶1混合己烷∶乙酸乙酯），Rf＝0.42。
NMR（CDCl3）：δ7.31-7.16（5H，m），4.92（1H，d;J＝8.7Hz），3.89（1H，m），3.72（3H，s），3.64（1H，明显d），3.41（1H，dd;J＝14.2，4.2Hz;苄基），2.72（2H，m），2.36（1H，明显五重峰），2.06-1.40（6H，m），1.32（9H，s）.
MS（DCI/NH3）：m/z378（M+H）+，322，278，120.
异构体B的2-羟基构型按异构体A的相似方式确定。
在另一种方法中，通过制备HPLC将两种差向异构体清晰地分离开（Rainin Dynamax
Figure 891046992_IMG28
1吋×25cm二氧化硅柱，20ml/分钟，75∶25∶1混合己烷∶乙酸乙酯∶甲酸），得到异构体A（收率49%）和异构体B（收率35%）。
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-1-羟基-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基）丙基）环戊烷羧酸
b）向实例6（a）的异构体A（23.7mg，63.2mmol）在2∶1∶1THF∶水∶甲醇（2ml）中的溶液加入10%NaOH（约0.2mmol）。2.5小时后，用乙酸乙酯稀释此混合物并用5%HCl洗涤。用MgSO4干燥，蒸发得到标题化合物（21.4mg，59.0mmol），收率94%。
m.p.120-122℃
TLC：（80∶20∶4混合己烷∶乙酸乙酯∶乙酸），Rf＝0.34。
NMR（CD3OD）：δ7.23（5H），3.73（1H，m），3.53（1H，m），2.85（1H，dd;苄基），2.73（1H，dd;苄基），2.55（1H，m），2.37（1H，m），1.90-1.57（6H），1.35（9H，s）.
实例7
（1R，2R）-2-（（（1R，2R）-1-羟基-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基）丙基）环戊烷羧酸之制备
按实例6（b）的方法，由实例6（a）的异构体B（20.1mg，53.6mmol）制备成本标题化合物（19.3mg，53.2mmol），收率99%。
m.p.133-135℃
TLC：（80∶20∶4混合己烷∶乙酸乙酯∶乙酸），Rf＝0.27。
NMR（CD3OD）：δ7.21（5H），3.75（1H，m），3.49（1H，dd），2.96（1H，dd;苄基），2.77-2.42（3H），1.95-1.83（3H），1.78-1.60（2H），1.50（1H，m），1.30（9H，s）.
实例8
（1S，2S）-2-（（（1RS，2S）-2-叔丁氧羰基氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊烷羧酸之制备
应用实例5的步骤，不同之处是由实例4的化合物（38mg，0.105mmol）得到1∶1比率的本标题化合物（35.5mg，0.0978mmol），为白色固体物，收率93%。
TLC：（80∶20∶5混合己烷∶乙酸乙酯∶乙酸），Rf＝0.26。
NMR（CDCl3）：δ7.32-7.14（5H，m），3.93-3.60（2H，m），3.38-3.21（1H，两个多重峰），3.05-2.70（2H，m），2.55-2.38（1H，m），2.35-1.54（7H，m），1.31-1.14（9H，两个单峰）。
实例9
缬氨酰缬氨酸甲酯盐酸盐之制备
苯甲氧羰基缬氨酰缬氨酸甲酯
a）用10分钟将氯甲酸异丁酯（1.30ml，10.0mmol）滴加到-40℃、氩气氛中的N-Cbz-L-缬氨酸（2.51g，10.0mmol）和N-甲基吗啉（1.21ml，11.0mmol）在THF（30ml）的搅拌中溶液中。1小时后，加入固态L-缬氨酸甲酯盐酸盐（1.68g，10.0mmol），随后加入另一份N-甲基吗啉（1.21ml，11.0mmol）。混合物升温至20℃并搅拌24小时，过滤，旋转蒸发浓缩得固体物。快速色谱提纯（含0-5%CH3OH的CHCl3梯度洗脱）得本标题化合物（3.44g，9.50mmol），为白色固体物，收率95%。
NMR（CDCl3）：δ7.34（5H，m），6.80（1H，d），5.62（1H，d），5.13（2H，s），4.56（1H，dd），4.17（1H，dd），3.74（3H，s），2.15（2H，m），1.00-0.88（12H，over交叠二重峰）。
缬氨酰缬氨酸甲酯盐酸盐
b）将实例9（a）化合物（535mg，1.47mmol）于乙酸（4ml）中的溶液与10%Pd/C（50mg）在H2气氛中搅拌5小时。将混合物过滤，用CH3OH稀释，用37%HCl（0.2ml）酸化，真空浓缩得胶状物。剩余物用***研制，真空干燥得本标题化合物（395mg，1.47mmol），为白色粉末。
NMR（CD3OD）：δ4.36（1H，d;J＝5.8Hz），3.81（1H，d;J＝5.7Hz），3.73（3H，s），2.21（2H，七重峰），1.09（3H，d;J＝7.0Hz），1.06（3H，d;J＝6.9Hz），0.998（6H，交叠二重峰）.
MS（FAB+VE）：m/z231（M+H）+，188，171，132，72，55.
实例10
叔丁氧羰基-（O-苯甲基）-丝氨酰丙氨酰丙氨酸之制备
叔丁氧羰基-（O-苯甲基）丝氨酰丙氨酸甲酯
a）用15分钟将氯甲酸异丁酯（2.59ml，20.0mmol）滴加至-40℃、氩气氛中、搅拌中的N-Boc-L-丝氨酸-O-苄基酯（5.90g，20.0mmol）和N-甲基吗啉（2.74ml，25.0mmol）在THF（100ml）的溶液中。45分钟后，加入N-甲基吗啉（2.75ml，25.0mmol）和固态L-丙氨酸甲酯盐酸盐（3.22g，23.0mmol）。搅拌混合物并渐升温至20℃。18小时后，用乙酸乙酯洗涤混合物并依次用5%HCl、5%NaHCO3和盐水洗涤。过滤，真空除掉溶剂，得到本标题化合物（7.54g，19.8mmol），为油状物，收率99%。
TLC：（1∶1乙酸乙酯∶混合己烷），Rf＝0.5。
NMR（CDCl3）：δ7.32（5H，m），7.11（1H，br m），5.41（1H，br m），4.65-4.53（3H，m），4.30（1H，br m），3.92（1H，dd;J＝9.2Hz，3.9Hz），3.73（3H，s），3.58（1H，dd;J＝9.2Hz，616Hz），1.45（9H，s），1.39（3H，d;J＝7.1Hz）.
叔丁氧羰基-（O-苯甲基）丝氨酰丙氨酸
b）将氢氧化钠（0.8g，20mmol）在50ml水中的溶液用2小时分数份加入到实例10（a）化合物（7.5g，19.7mmol）在2∶1甲醇∶水（225ml）的溶液中。继续搅拌1小时或更久，直至该溶液接近中性，并由TLC测知反应已完全。用旋转蒸发浓缩此溶液，用水稀释，用乙酸乙酯萃取。水层用10%HCl酸化并用乙酸乙酯萃取二次。用MgSO4干燥，真空浓缩，得本标题化合物（6.89g，18.8mmol），为玻璃状物，收率96%。
NMR（CDCl3）：δ7.32（5H，m），5.62（1H，宽峰），4.60（1H，m），4.55（2H，s），4.36（1H，宽峰），3.87（1H，dd），3.61（1H，dd），1.46-1.40（12H，m）.
c）将氯甲酸异丁酯（2.42ml，18.8mmol）用18分钟于-40℃、氩气氛中滴加到实例10（b）化合物（6.89g，18.8mmol）和N-甲基吗啉（2.74ml，25.0mmol）的THF（100ml）搅拌溶液中。20分钟后，加入N-甲基吗啉（2.74ml，25.0mmol）和固态L-丙氨酸甲酯盐酸盐（3.07g，22.0mmol）。将混合物搅拌并渐升温至20℃，历时40小时，然后用乙酸乙酯稀释，依次用5%HCl，5%NaHCO3和盐水洗涤。过滤，真空脱除溶剂，得粗制固态产物（7.69g）。从2∶1混合己烷∶乙酸乙酯中重结晶，得本标题化合物（7.55g，16.7mmol），为白色晶体，收率89%。
TLC：（1∶1乙酸乙酯∶混合己烷），Rf＝0.15。
NMR（CDCl3）：δ7.32（5H，m），7.00（1H，d），6.90（1H，d），5.44（1H，d），4.58（2H，s），4.54（2H，m），4.30（1H，宽峰），3.90（1H，dd），3.74（3H，s），3.64（1H，dd），1.44（9H，s），1.38（6H，交叠二重峰）.
叔丁氧羰基-（O-苯甲基）丝氨酰丙氨酰丙氨酸
d）将氢氧化钠（0.25g，6.2mmol）用4小时，分数份加入实例10（c）化合物（2.79g，6.19mmol）在2∶1甲醇∶水（75ml）的溶液中，加入速率应能保持pH在7-9范围。继续搅拌10小时，然后旋转蒸发浓缩该溶液。加入水，用乙酸乙酯萃取该溶液二次。用10%HCl将水层酸化，用乙酸乙酯萃取三次。用MgSO4干燥有机萃取液，真空脱除溶剂，得本标题化合物（2.58g，5.90mmol），为白色粉末，收率95%）。
NMR（CDCl3）：δ7.30（7H，m，芳族+NH），5.57（1H，宽峰），4.64-4.46（4H，m），4.38（1H，宽峰），3.86（1H，dd），3.65（1H，dd），1.44（9H，s），1.39（6H，交叠二重峰）.
MS（FAB+VE）：m/z438（M+H）+，382，338，293，249，221，203.
实例11
反式-2-（（1-甲氧基-1-（2-苯基-1-苯甲氧羰基氨基）乙基）氧膦基）环戊烷羧酸之制备
（±）-2-苯基-1-苯甲氧羰基氨基乙基膦酸单甲酯
a）按Synthesis，985（1979）所述方法制备（±）-二苯基-（2-苯基-1-苯甲氧羰基氨基）乙基膦酸酯。简述如下，将亚磷酸三苯酯（0.1mol），苯基乙醛（0.15mol，新蒸馏），氨基甲酸苄酯（0.1mol），冰乙酸（15ml）的混合物搅拌1小时，直至放热反应停止。然后将混合物加热至80-85℃，历时1小时，在沸水浴上，用旋转蒸发器减压脱除挥发性物质。将油状剩余物溶解于甲醇（180ml），并于-10℃结晶。1-3小时后，过滤收集酯晶体，并将之溶于最少量热氯仿（30-40ml）并加入4倍体积甲醇进行重结晶。
将所得膦酸二苯酯取一部分（2.44g，5.00mmol）在含甲醇钠（1.6g，30mmol）的甲醇（75ml）中搅拌2天。溶液用5%HCl（250ml）稀释，并用***萃取，***层用5%Na2CO3以及盐水萃取，然后浓缩。将该粗制膦酸二甲酯在50ml甲醇和50ml 10% NaOH的溶液中搅拌一天，用10%HCl（300ml）酸化此溶液，用CH2Cl2萃取。脱除溶剂后得到固体物，将之溶解于热CHCl3（100ml）。加入50ml己烷，将溶液于-20℃贮存过夜。过滤收集所得晶体，得本标题化合物（1.53g，4.38mmol），收率88%。
2-（2-甲基丙烯基）环戊基溴化镁
b）向搅拌中的镁屑（432mg，18mmol）在无水***（15ml）和无水苯（5ml）中的悬浮液中，在备有回流冷凝器的烧瓶中，在氩气氛下用30分钟小心滴加入纯净1，2-二溴乙烷（1.55ml，18mmol）。将所得透明MgBr2溶液取10.0ml一份（9.0mmol）加入到-78℃的2-（2-甲基丙烯基）环戊烷锂（实例3（d）化合物，8.6mmol）在20ml戊烷及20ml THF的溶液中。所得非均相混合物升温至0℃，得到相应格利雅试剂的透明橙色溶液（8.6mmol），将之再冷却至-78℃供步骤（b）使用。
反式-2-（1-甲氧基-1-（2-苯基-1-苯甲氧羰基氨基）乙基）氧膦基-2-甲基丙烯基环戊烷
c）在氩气氛中，向实例11（a）化合物（1.92g，5.50mmol）在无水CH2Cl2（15ml）的溶液中加入SOCl2（0.40ml，5.5mmol）。2.5小时后，真空脱除溶剂。加入10ml无水CH2Cl2，再蒸发，加入10ml无水THF，再蒸发，用以除掉残余的HCl。余下的胶状膦酰氯用无水THF稀释至11.0ml;取该溶液一份（8.6ml，4.3mmol）在搅拌中加入-78℃的上述步骤（a）所制备的格利雅试剂（8.6mmol）溶液中。将均相混合物于-78℃搅拌1小时，然后在-20℃搅拌1小时。加入10%HCl（50ml，水溶液），然后加入200ml水。用***萃取三次。萃取物合并后用5%NaHCO3洗涤，MgSO4干燥，浓缩得油状物（2.1g），用快速色谱纯化（CHCl3）得胶状本标题化合物（864mg，1.90mmol），收率44%，这是四种非对映异构体的混合物。
TLC：（25∶1CHCl3∶CH3OH），Rf＝0.4。
GC：（柱：CHROMACK，51mm×0.22mm内径;液相CP        sil        5CB，炉：240℃）：RT（相对面积）4.04（1.0），4.17（1.3），4.42（1.2），4.58（1.9）。
NMR（CDCl3）：δ7.35-7.03（10H，m），5.56-5.10（1H，m;NH），5.05-4.87（3H，m），4.33（1H，m），3.76-3.60（3H，m），3.29-2.69（3H，m），2.08-1.56（12H，m），1.29（1H，m），
MS（DCI/NH3）：m/z456（M+H）+，378，365，348，322，213，203，120，108，91.
反式-2-（（1-甲氧基-1-（2-苯基-1-苯甲氧羰基氨基）乙基）氧膦基）环戊烷羧酸
d）应用实例3（f）的臭氧分解步骤，由上述实例11（c）化合物（680mg，1.49mmol）制得粗品胶状本标题化合物。快速色谱提纯（25∶1CHCl3∶CH3OH，随后用25∶1∶1CHCl3∶CH3OH∶乙酸），得到胞泡沫状纯产物（365mg，0.820mmol），收率55%。
NMR（CDCl3）：δ7.32-7.12（10H，m），5.00-4.91（2H，m），4.45（1H，m），3.78-3.64（3H，m），3.35-2.68（4H，m），2.08-1.60（7H，m）.
重复同上步骤，不同之处是用4-溴-1-丁烯替代2-（2-甲基丙烯基）环戊烷锂，得到相应的2-（（1-甲氧基-1-（2-苯基-1-苯甲氧羰基氨基）乙基氧膦基）丙酸。
实例12
（5S）-4-氧代-5-（叔丁氧羰基氨基）-6-苯基己酸之制备
（6S）-7-苯基-6-（叔丁氧羰基氨基）-1-庚烯-5-酮
a）在氩气氛中，向搅拌中的镁粉（1.82g，75mmol）在无水***（10ml）中的悬浮物中加入数滴4-溴-1-丁烯。当自发回流作用一经开始，继续滴加入4-溴-1-丁烯（6.75g，50mmol），加入速率使之保持轻度回流。在加热回流条件下，将混合物继续搅拌30分钟。冷却后，将此格利雅试剂溶液加入到搅拌中的（Boc）-L-苯丙氨酸-N-甲氧基-N-甲基酰胺（1.0g，3.2mmol）于无水***（10ml）的0℃溶液中。1.5小时后，用10%HCl稀释反应混合物，用***萃取三次，有机物层依次用1M HCl、饱和NaHCO3水溶液，饱和NaCl水溶液洗涤，用MgSO4干燥，减压浓缩，得到本标题化合物白色晶体（780mg），收率81.8%。
NMR（CDCl3）：δ7.20（5H，m）;5.73（1H，m）;5.1（1H，d）;5.05（2H，m）;4.55（1H，四重峰）;3.05（2H，m）;2.48（2H，四重峰）;2.30（2H，m）;1.40（9H，s）.
MS（DP/NH3）：m/z（M+H）+304;248，204，120.
（5S）-4-氧代-5-（叔丁氧羰基氨基）-6-苯基己酸
b）于-78℃，向实例12（a）化合物（400mg，1.32mmol）在4∶1CH2Cl2∶MeOH（5ml）中的溶液通入臭氧，直至蓝色不褪为止。用氩吹扫此溶液数 次，然后加入硫化二甲酯（2ml）。混合物升温至室温，历经2小时，然后减压浓缩得油状物。油状剩余物溶解于丙酮，搅拌冷却至0℃。滴加琼斯试剂（1.32mmol，2M溶液）。5分钟后加入异丙醇。混合物用H2O稀释，用二氯甲烷萃取三次。有机物层用MgSO4干燥，过滤，浓缩得油状物。用硅胶快速色谱纯化（先用60∶40己烷∶乙酸乙酯，再用65∶35∶5己烷∶乙酸乙酯∶乙酸），得本标题化合物，为油状物（175mg），收率41%。
NMR（CDCl3）：δ7.24（5H，m）;5.1（1H，d）;4.55（1H，四重峰）;3.05（2H，m）;2.68（4H，m）;1.38（9H，s）.
MS（FAB+）：m/z322;（FAB-）：m/z320.
重复上述步骤，不同之处是用Boc-苯基甘氨酸替代Boc-（O-苄基）酪氨酸，得到4-氧代-5-（叔丁氧羰基氨基）-5-苯基戊酸。
实例13
（5S）-4-氧代-5-（叔丁氧羰基氨基）-6-（4-苄氧苯基）己酸之制备
Boc-（O-苄基）酪氨酸-N-甲氧基-N-甲基酰胺
a）向Boc-（O-苄基）酪氨酸（7.42g，30.0mmol）在无水CH2Cl2（20ml）的溶液中，加入三乙胺（3.0ml，21.5mmol）和苯并***-1-基氧三（二甲基氨基）鏻六氟磷酸盐（6.96g，20.0mmol）。10分钟后，加入三乙胺（3.0ml，21.5mmol）和O，N-二甲基羟胺（2.15g，22.0mmol）。16小时后，用乙酸乙酯稀释此溶液，然后依次用5%HCl，饱和NaHCO3水溶液，饱和NaCl水溶液洗涤。用MgSO4干燥有机物溶液，过滤，浓缩得泡沫状物。用硅胶快速色谱纯化（50∶50己烷/乙酸乙酯）得到本标题化合物（5.87g）白色粉末，收率71%。
NMR（CDCl3）：δ7.40（5H，m）;7.02（4H），dd;5.12（1H，d）;5.05（2H，s）;4.90（1H，宽峰）;3.62（3H，s）;3.15（3H，s）;2.92（2H，m）;1.38（9H，s）.
MS：m/z（M+H）+415，359，341，315
（6S）-7-（4-苄氧苯基）-6-（叔丁氧羰基氨基）-1-庚烯-5-酮
b）在氩气氛中，向镁粉（6.68g，0.275mol）在无水***（100ml）中的悬浮液中加入数滴4-溴-1-丁烯。自动回流一经开始之后，加入4-溴-1-丁烯（24.72g，0.183mol），加入速率应保持轻度回流。加毕，将混合物继续回流30分钟。制备叔丁氧羰基酪氨酸-（O-苄基）-甲氧基甲基酰胺（18.95g，0.046mol）在无水THF中的溶液，并于0℃慢速加入如上制备的格利雅试剂中。90分钟后，由TLC测知反应完成，然后用10%HCl水溶液中止反应。反应混合物用***萃取三次，有机萃取物合并后依次用1M HCl，饱和NaHCO3水溶液，饱和NaCl水溶液洗涤。溶液用MgSO4干燥，过滤减压蒸发得白色固体物。用硅胶柱色谱纯化，用含17%乙酸乙酯的混合己烷洗脱，得到本标题化合物白色固体物（18.1g），收率96%。
NMR（CDCl3）：δ7.42（5H，m）;6.96（4H，dd）;5.72（1H，m）;5.10（1H，br d））;5.06（2H，s）;4.95（2H，m）;4.48（1H，q）;2.95（2H，m）;2.5-2.0（4H，m）;1.38（9H，s）.
MS：m/z（M+H）+410，371，354，310
（5S）-4-氧代-5-（叔丁氧羰基氨基）-6-（4-苄氧苯基）己酸
c）向实例13（b）化合物（8.0g，19.6mmol）在4∶1CHCl3∶MeOH的-78℃溶液中通入臭氧，直至蓝色不褪为止。用氩气吹扫此溶液数分钟，随后加入硫化二甲酯（6ml）。混合物于室温搅拌2小时，然后蒸发。将油状剩余物溶解于丙酮（175ml）并冷却至0℃。滴加入琼斯试剂（12ml，2M溶液），将混合物搅拌10分钟，然后用异丙醇抑止反应。将此溶液倾入H2O中，用CH2Cl2萃取三次。有机萃取物合并后用MgSO4干燥，过滤，减压蒸发。油状剩余物用硅胶柱色谱纯化，先用2∶3乙酸乙酯∶混合己烷洗脱，再用5∶35∶60乙酸∶乙酸乙酯∶混合己烷，得到棕黄色固体状本标题化合物（3.39g），收率40%。
NMR（CDCl3）：δ7.40（5H，m）;7.0（4H，dd）;
NMR（CD3OD）：δ5.05（1H，模糊）;5.03（2H，s）;4.52（1H，四重峰）;3.2-2.5（7H，m）;1.40（9H，s）.
实例14
（3R，4S）-4-（N-苄氧羰基）氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯基戊酸之制备
（3R，4R）-3-（N-苄氧羰基）氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯基戊酸乙酯
a）将N-Cbz-L-苯基丙氨醇（0.77g，2.75mmol）在10ml无水CH2Cl2中的溶液以稳定慢流加入到Dess-Martin periodinane（1.28g，3.02mmol）在15ml无水CH2Cl2的溶液中。搅拌30分钟后，加入100ml由1份10%硫代硫酸钠水溶液和1份饱和NaHCO3水溶液组成的混合液，将混合物剧烈搅拌30分钟。混合物用CH2Cl2萃取三次，合并有机萃取物，用MgSO4干燥，过滤，真空浓缩，得黄色固体状N-Cbz-L-苯基丙氨醛。将锌（0.54g，8.24mmol）和CuBr（60mg，0.22mmol）在15ml无水THF中的悬浮液用二乙基氯化铝（6.04ml，6.04mmol，在混合己烷中1M溶液）处理，并冷却至-20℃。向此悬浮液中，用20分钟滴加粗制N-Cbz-L-苯基丙氨醛和溴二氟乙酸乙酯在25ml无水THF中的溶液。反应混合物搅拌45分钟，然后加入5%HCl水溶液抑止反应并升温至室温。混合物用***萃取三次，合并有机萃取物，用MgSO4干燥，过滤，浓缩。用硅胶快速色谱提纯（1.5∶1***∶混合己烷），得0.78g（收率70%）3∶2的非对映异构体混合物。非对映异构体用重复多次快速色谱分离（1∶1混合己烷∶***），得468mg（收率42%）白色固体状本标题化合物。
NMR（CDCl3）：δ7.27（10H，m）;5.02（3H，m）;4.31（2H，q;J＝7.5Hz）;4.23（1H，m）;4.09（1H，m）;3.86（1H，br d;J＝6.2Hz）;3.01（2H，m）;1.31（1H，t，J＝7.5Hz）
（3R，4S）-4-（N-苄氧羰基）氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯基戊酸
b）将实例14（a）的酯（1.0g，2.45mmol）溶解于40ml 3∶2MeOH∶THF。将此溶液加入到K2CO3（2.7g，19.6mmol）在25ml水的溶液中，混合液剧烈搅拌3小时。用***洗涤此水溶液（弃去），用HCl酸化，用***萃取一次，用CH2Cl2萃取二次。合并有机萃取物，用MgSO4干燥，过滤。真空蒸发溶剂，得白色固体状本标题的酸（0.93g），收率90%。
NMR（CDCl3）：δ7.21（10H，m）;4.91（3H，m）;4.22（3H，m）;2.97（2H，m）
MS：m/z380
实例15
2-（乙酰丝氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰）氨基-3-苯基-丙基-脯氨酰缬氨酰缬氨酰胺之制备
应用DCC（0.21g，1.0mmol）和HOBT（0.15g，1mmol）在含50% CH2Cl2的DMF中混合物使实例2（d）化合物（0.35g，1.0mmol）偶合成为Val-Val-BHA（1.0mmol），反应过夜。水合茚三酮定量试验表明有83%偶合。此肽树脂用Ac2O乙酰化（1ml在30mlCH2Cl2中），直至水合茚三酮试验得阴性结果为止。然后按实例1步骤使用该树脂的半量将此肽完成并乙酰化。该肽-树脂中间物用10ml无水HF及1ml苯甲醚进行分解，于0℃反应1小时。用冰乙酸将该肽从该树脂中萃取出来。冷冻干燥后得到150mg粗制肽（收率37%），用逆流分配法提纯该肽（正丁醇∶乙酸∶水;4∶1∶5），得到60mg。用制备HPLC进一步提纯该肽，k′＝4.00（Hamilton PRP-1，305×7mm半制备HPLC色谱柱，水-乙腈-0.1%TFA，95∶5至78∶22，13分钟;78∶22至60∶40，6.5分钟），得7.9mg产物。
TLC：Rf＝0.34（B∶A∶W        4∶1∶1），0.68（B∶E∶A∶W        1∶1∶1∶1）。
HPLC：（Hamilton        PRP-1        250×4.1mm分析用HPLC色谱柱，水-乙腈-0.1%        TFA，95∶5至60∶40，用15分钟）k′＝2.73。
FAB-MS：m/z 817（M+H）+
氨基酸分析：Ser0.57，Gln1.00，Asn        1.00，Val2.00。
重复同上的步骤，不同之处是用1∶1摩尔当量的丁酰氯替代乙酸酐，得到2-（丁酰-丝氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰）氨基-3-苯基-丙基-脯氨酰缬氨酰缬氨酰胺。
实例16
2-（丝氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰）氨基-3-苯基丙基-脯氨酰缬氨酰缬氨酰胺
用DCC（0.52g，2.5mmol）和HOBt（0.38g，2.5mmol）在30ml含50%CH2Cl2的DMF混合液使实例2（d）化合物（0.87g，2.5mmol）偶合成为Val-Val-BHA（1.2mmol），反应过夜。由水合茚三酮试验显示偶合完全。应用0.6g（0.4mmol）该树脂使肽完成。应用15ml HF与1.5ml苯甲醚于0℃反应1小时使该肽与树脂断开。该肽树脂混合物用***洗涤3次，再用HOAc洗涤4次。将该HOAc冷冻干燥，得192.5mg粗制肽（收率62%）。将该粗制肽取100mg用凝胶过滤法纯化，通过Sephadex
Figure 891046992_IMG29
G-15，使用1%HOAc。由此得33.3mg肽，将之用制备HPLC进一步纯化（Hamilton PRP-1 305×7mm半制备HPLC色谱柱，水-乙腈-0.1%TFA，85∶15至60∶40，用15分钟）得到8.10mg。
TLC∶Rf＝0.93（B∶A∶W        4∶1∶1），＝0.97（B∶E∶A∶W        1∶1∶1∶1）。
HPLC：（Hamilton        PRP-1        250×4.1mm分析用HPLC色谱柱，水-乙腈-0.1%TFA，95∶5至60∶40，用15分钟），k′＝2.87。
FAB-MS m/z 775（M+H）+
实例17
4-（乙酰-丝氨酰谷氨酰胺酰天冬酰氨酰）氨基-3（RS）-羟基-1-氧代-5-苯基戊基-脯氨酰缬氨酰缬氨酰胺
按实例1的通用方式制备尺度为1mm的载于树脂的中间产物Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asn-〔3（RS）-AHPPA〕-Pro-Val-Val-BHA。所用的Boc-AHPPA是在3位外消旋的。于0℃用10ml无水HF和1ml苯甲醚处理，反应60分钟，使该肽从该树脂上断开，并将苄基从丝氨酸羟基除掉。于0℃用真空除去HF。剩余物用***研制，用乙酸萃取肽（3×20ml），经冷冻干燥得302mg产物。逆流分配纯化（正丁醇∶乙酸∶水，4∶1∶5;200传质段）。将主组分汇集，浓缩，用乙酸稀释，冷冻干燥，得103mg本标题化合物。
TLC：（B∶E∶A∶W，1∶1∶1∶1），Rf＝0.51;
FAB-MS：m/z875（M+H）+
氨基酸分析：Asp＝1.00，Ser＝0.14，Glu＝0.94，Pro＝1.09，Val＝2.24;肽含量（以Asp为基准）＝80.8%。
实例18
4-（乙酰-丝氨酰谷氨酰胺酰天冬酰氨酰）氨基-3（RS）-羟基-1-氧代-5-苯基戊基-缬氨酰缬氨酰胺之制备
以常规方式和0.5mm尺度制备载于树脂的中间产物Ac-Ser（Bz）-Gln-Asn-〔3（RS）-AHPPA〕-Val-Val-NH2。所用的Boc-AHPPA是在3位外消旋的。于0℃在苯甲醚（1ml）存在下用无水HF（10ml）处理，反应60分钟，使该肽从该树脂断开，并除掉苄基保护基。于0℃用真空除去HF，用***研制该树脂并经过风干。用乙酸（4×20ml）从该树脂萃取肽，然后冷冻干燥得110mg产物。应用逆流分配提纯该肽（B∶A∶W 4∶1∶5;200传质段）。将主组分汇集，浓缩，用乙酸稀释，冷冻干燥得21mg本标题化合物。
TLC：（B∶E∶A∶W        1∶1∶1∶1），Rf＝0.53。
HPLC：（4.5mm×25cm        Altex        Ultraspheres        5m        ODS，乙腈-水-0.1%TFA，10-20%乙腈梯度洗脱，用20分钟），k′＝4.47，4.37。
FAB-MS：m/z 778（M+H）+;
氨基酸分析：Asp＝1.00，Ser＝0.71，Glu＝1.00，Val＝2.09;
肽含量（以Asp为基准）＝72.75%。
实例19
4-（丝氨酰谷氨酰胺天冬酰胺酰）氨基-3（R）-羟基-1-氧代-5-苯基戊基-缬氨酰缬氨酰胺之制备
按常规方式以1mm尺度制备载于树脂的中间物Boc-Ser（Bzl）-Gln-Asn-〔3（R）-AHPPA〕-Val-Val-BHA。省去乙酰化步骤，于0℃用HF（10ml）和苯甲醚（1ml）处理60分钟，将该肽从该树脂上断开并除掉苄基保护基。0℃用真空除去HF。剩余物用***研制，用乙酸（4×10ml）从剩余物中萃取肽。乙酸萃取物冷冻干燥，得85mg产物。取40mg粗制肽用制备HPLC纯化（Ultrasphere ODS，15%乙腈/H2O-0.1%TFA）。将含目的化合物的组分合并，真空浓缩，用乙酸稀释，冷冻干燥得到20mg本标题肽。
HPLC：（4.6mm×25cm        Altex        Ultrasphere        ODS，15%乙腈-水-0.10%TFA），k′＝6.33。
FAB-MS：m/z736（M+H）+
氨基酸分析：Asp        1.00，Ser        0.71，Glu        0.99，Val        1.96。
实例20
4-（丝氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰）氨基-3（S）-羟基-1-氧代-5-苯基戊基-缬氨酰缬氨酰胺之制备
按常规方式以1mm尺度制备载于树脂的肽中间物Boc-Ser（Bz）-Gln-Asn-〔3（S）-AHPPA〕-Val-Val-NH2。按实例19的相同方式将该肽从该树脂断开，解封闭和纯化，得到12mg本标题化合物。
HPLC：（4.6mm×25cm        Altex        Ultrasphere        ODS，15%乙腈-水-0.1%TFA），k′＝6.33。
FAB-MS：m/z 736（M+H）+
氨基酸分析：Asp        1.00，Ser0.71，Glu0.99，Val1.96。
实例21
（1R，2R）-2-（（（2S）-2-（叔丁氧羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-氧代-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯之制备
（1R，2R）-2-（（（2S）-2-叔丁氧羰基氨基-1-氧代-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
a）于-40℃和氩气氛中，向实例3（f）化合物（10.5mg，29.0mmol）在THF（0.4ml）的溶液中，加入N-甲基吗啉（6ml，55mmol）和异丁酰氯甲酸酯（3.8ml，29.1mmol）。20分钟后，再加入N-甲基吗啉（6ml），然后加入缬氨酰缬氨酸甲酯盐酸盐（16mg，60mmol）在THF（0.5ml）中的溶液。混合物于-40℃搅拌30分钟，然后于20℃搅拌17小时，用乙酸乙酯稀释该混合物，用5%HCl洗涤，用MgSO4干燥，浓缩。经快速色谱提纯（50∶1CHCl3∶CH3OH），得到白色固体本标题化合物（13.4mg，23mmol），收率81。
TLC：（50∶1CHCl3∶CH3OH），Rf＝0.28。
NMR（CDCl3）：δ7.26（3H，m;芳族），7.10（2H，m，芳族），6.50（1H，d;J＝8.7Hz;NH），6.35（1H，d;J＝8.6Hz;NH），5.11（1H，d;J＝7.9Hz;BocNH），4.70（1H，明显四重峰），4.52（1H，dd;J＝8.7，4.9Hz），4.26（1H，dd;J＝8.6，7.1Hz），3.73（3H，s），3.51（1H，明显四重峰），3.16（1H，dd;J＝14.1，5.5Hz;苄基），3.07（1H，明显四重峰），2.86（1H，dd;J＝14.1 6.7Hz;苄基），2.25-1.60（8H，m），1.38（9H，s），0.941-0.874（12H，交叠二重峰）.
MS（FAB+VE）：m/z574（M+H）+，518，474，443，387，343，244，229.
（1R，2R）-2-（（（2S）-2-氨基-1-氧代-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯三氟乙酸盐
b）将实例21（a）化合物（13mg，23mmol）溶解于三氟乙酸（0.5ml），2小时后，真空浓缩此溶液，剩余物与二氯甲烷合并，再次浓缩，得白色固体状本标题化合物（13mg）。
（1R，2R）-2-（（（2S）-2-（叔丁氧羰基-（O-苯甲基）丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-氧代-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
c）于-40℃和氩气氛中，向Boc-Ser（Bzl）-Ala-Ala（15.1mg，34.5mmol）在THF中的溶液加入N-甲基吗啉（7.7ml）和氯甲酸异丁酯（4.5ml，35mmol），搅拌20分钟后，再加入N-甲基吗啉（7.7ml），然后加入实例21（b）的三肽（13mg）在THF中的溶液。使混合物升温至20℃，搅拌过夜。用CH2Cl2稀释反应混合物，依次用5%HCl，5%NaHCO3和水洗涤。蒸发溶剂得粗制产物，用快速色谱纯化（梯度洗脱，50∶1至25∶1 CHCl3∶CH3OH），得白色固体状本标题化合物（17.9mg，20mmol）。
TLC：（95∶5 CHCl3∶CH3OH），Rf＝0.35。
NMR（1∶1CD3OD∶CDCl3）：δ7.35-7.20（5H，m），4.80（1H，dd;J＝8.7，4.8Hz），4.54（2H，s;PhCH2O），4.42-4.16（5H，m），3.73（3H，s），3.78-3.62（2H，m;BnOCH2），3.40（1H，m），3.20（1H，dd;J＝14.4;4.7Hz;苄基），3.09（1H，m），2.92（1H，dd;J＝14.4，8.7Hz;苄基），2.25-1.95（4H，m），1.85-1.65（4H，m），1.47（9H，s），1.35（3H，d;J＝7.2Hz），1.23（3H，d;J＝7.2Hz），0.956-0.922（12H，交叠二重峰）.
MS（FAB+VE）：m/z 893（M+H）+，793，762，706，662，645，634，514，474，420，364。
（1R，2R）-2-（（（2S）-2-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-氧代-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
d）于H2气氛中，将实例21（c）的六肽（8.1mg，9.1mmol）在甲醇（4ml）中的溶液与10%Pd/C（7mg）一起搅拌15小时，过滤，蒸发，得白色固体状本标题化合物（7.2mg，9mmol）。
TLC：（95∶5 CHCl3∶CH3OH），Rf＝0.15。
NMR（1∶1 CD3OD：CDCl3）：δ7.21（5H，m），4.80（1H，m），4.36-4.12（5H，m），3.81（1H，dd;J＝10.9，5.3Hz;CH2OH），3.72（3H，s），3.67（1H，dd;J＝10.9，5.8Hz;CH2OH），3.41（1H，m），3.20（1H，dd;J＝14.3，4.6Hz;苄基），3.07（1H，m），2.88（1H，dd;J＝14.3，9.0Hz;苄基），2.22-1.96（4H，m），1.81-1.67（4H，m），1.47（9H，s），1.38（3H，d;J＝7.3Hz），1.27（3H，d;J＝7.3Hz），0.960-0.932（12H，交叠二重峰）.
MS（FAB+VE）：m/z803（M+H）+，787，703，672，616，572，544，473，330，315，298，274，244，203.
MS（FAB-VE）：m/z        802        698，307，273，241，201，185，153.
实例22
（1R，2R）-2-（（（2S）-2-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-氧代-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯盐酸盐之制备
将实例21（d）化合物（5mg，6.2mmol）溶解于三氟乙酸（0.25ml），90分钟后，真空浓缩此溶液，将剩余物溶解于甲醇（0.5ml），并加入浓HCl（约0.025ml）。浓缩此溶液，用***研制所得胶状产物，真空干燥，得白色固体状本标题化合物（4.5mg）。
NMR（CD3OD）：δ7.20（5H，m），4.72（1H，dd;J＝8.5，5.0Hz），4.38（1H，m），4.31（2H，m），4.19（1H，d），3.92（3H，m），3.70（3H，s），3.48（1H，m），3.19（1H，dd;J＝14.3，5.0Hz;苄基），3.08（1H，m），2.83（1H，dd;J＝14.3，8.5Hz;苄基），2.21-1.98（4H，m），1.84-1.65（4H，m），1.35（3H，d;J＝7.2Hz），1.29（3H，d;J＝7.1Hz），0.958-0.921（12H，交叠二重峰）.
′MS（FAB+VE）：m/z703（M+H）+.
实例23
（1S，2S）-2-（（（1S，2S）-2-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯之制备
（1S，2S）-2-（（（1RS，2S）-2-叔丁氧羰基氨基-1-羟基-3-苯基）丙 基）环戊基羰基-L-缬氨酰-L-缬氨酸甲酯
a）将实例8产物（35.5mg，97.8mmol）和HOBT（26mg，196mmol）溶解于二噁烷（0.5ml）和DMF（0.1ml）中，并加入DCC（20.2mg，98.1mmol）。搅拌20分钟后，加入N-甲基吗啉（32ml，290mmol）和缬氨酰缬氨酸甲酯盐酸盐（52mg，195mmol）。三天后，用乙酸稀释该混合物，过滤，用稀HCl萃取。浓缩有机物层。将此粗制品用快速色谱法纯化（50∶1 CHCl3∶CH3OH），先洗脱得异构体A（26mg，45.9mmol，收率47%），然后洗脱出异构体B（25mg，43.1mmol，收率44%）。
异构体A：
（1S，2S）-2-（（（1R，2S）-2-（叔丁氧羰基）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
TLC：（25∶1        CHCl∶CH        OH），Rf＝0.55。
NMR（CDCl3）：δ7.28（5H，m），6.73（1H，d;J＝8.7Hz;NH），6.42（1H，d;J＝8.6Hz;NH），5.16（1H，d;J＝9.5Hz;BocNH），4.58（1H，dd;J＝8.8，5.2Hz），4.32（1H，dd;J＝8.6，6.0Hz），3.91（1H，明显四重峰），3.76（3H，s），3.25（1H，明显二重峰;J＝10.2Hz），2.95-2.83（2H;苄基），2.52（1H，明显四重峰），2.30-2.10（3H，m），2.00-1.55（6H，m），1.39（9H，s），0.990-0.907（12H，明显四重峰）.
MS（FAB+VE）：m/z576（M+H）+，476，389，345，317，246，225.
异构体B：
（1S，2S）-2-（（（1S，2S）-2-（叔丁氧羰基）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
TLC：（25∶1 CHCl3∶CH3OH），Rf＝0.45。
NMR（CDCl3）：δ7.24-7.15（5H，m），6.77（1H，d;J＝8.3Hz），6.56（1H，d;J＝8.2Hz），4.80（1H，d;J＝8.4Hz），4.47（1H，dd;J＝8.4，4.9Hz），4.36（1H，明显三重峰），3.80-3.60（5H，m），3.08（1H，dd），2.69（2H，m;苄基），2.53（1H，m），2.25-2.05（2H，m），2.00-1.60（6H，m），1.32（9H，s），0.979-0.855（12H，交叠二重峰）.
MS（FAB+VE）：m/z576（M+H）+，476，389，246，231，152，132.
（1S，2S）-2-（（（1S，2S）-2-氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯盐酸盐
b）将实例23（a）的异构体B（25mg，43mmol）溶解于三氟乙酸（0.25ml），1小时后，旋转蒸发浓缩此溶液。剩余物浣解于CH3OH，用浓HCl（0.05ml）处理，再次浓缩。用***研制并真空干燥，得到白色粉末状本标题化合物（22mg，43mmol）。
（1S，2S）-2-（（（1R，2S）-2-氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯盐酸盐
c）按实例23（b）的方法将实例23（a）的异构体A（26mg，45mmol）用三氟乙酸及HCl处理，得到本标题化合物（19.9mg，39mmol）。
（1S，2S）-2-（（（1S，2S）-2-（叔丁氧基羰基-L-（O-苯基甲基）丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
d）于-40℃和氩气氛中，向Boc-Ser（Bzl）-Ala-Ala（19.4mg，44.4mmol）在THF（0.5ml）中的溶液加入N-甲基吗啉（8.8ml）和氯甲酸异丁酯（5.8ml，44.4mmol），搅拌20分钟后，再加入N-甲基吗啉（8.8ml），随后加入实例23（b）化合物（22mg，43mmol）在THF（1.0ml）中的溶液。将混合物升温至20℃并搅拌过夜。用CH2Cl2稀释反应混合物并用5%HCl洗涤，MgSO4干燥，浓缩。剩余物用快速色谱法提纯，得白色固体状本标题化合物（25mg，28mmol），收率65%。
NMR（CDCl3）：δ7.40-7.05（11H，m），7.00-6.80（4H，m;NH），5.53（1H，d;BocNH），4.52（2H，s），4.47-4.30（4H，m），4.19-4.06（2H，m），3.97（1H，宽峰），3.80-3.62（2H，m），3.69（3H，s），3.07（1H，dd），2.83（1H，dd），2.66（1H，m），2.52（1H，m），2.34（1H，宽峰），2.23-2.03（2H，m），2.00-1.84（2H，m），1.80-1.60（4H，m），1.46（9H，s），1.32（3H，d;J＝7.0Hz），1.15（3H，d;J＝7.1Hz），0.939（6H;两个交叠二重峰），0.871（6H，两个交叠二重峰）.
MS（FAB+VE）：m/z895（M+H）+，795（M-Boc+H）+，764，708，664，618，565，547，476，416，388.
（1S，2S）-2-（（（1R，2S）-2-（叔丁氧羰基-L-（O-苯甲基）丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
e）按实例23（d）的相似步骤，应用实例25（c）制备的三肽（19.9mg，39mmol），Boc-Ser（Bzl）-Ala-Ala（17.5mg，40mmol），异丁酰氯甲酸酯（5.2ml，40mmol）和N-甲基吗啉（2×8.8ml），得白色固体状本标题化合物（23.2mg，26mmol），收率67%。
NMR（CDCl3）：δ7.38-7.17（10H，m），7.10（2H，m;NH），6.96（1H，d;J＝8.3Hz;NH），6.87（1H，d;J＝9.1Hz;NH），6.63（1H，d;J＝8.4Hz;NH），5.50（1H，d;J＝6.4Hz;BocNH），4.56（2H，s;苄基），4.53-4.36（4H，m），4.39（2H，m），4.15（1H，明显四重峰），3.84（1H，dd;J＝9.4，4.6Hz），3.74（3H，s），3.66（1H，dd;J＝9.4，5.8Hz），3.33（1H，明显三重峰），2.94-2.91（2H，m;苄基），2.57（1H，明显四重峰），2.26-2.08（4H，m）;1.95-1.75（3H，m），1.67-1.50（2H，m），1.45（9H，s），1.37（3H，d;J＝7.1Hz），1.30（3H，d;J＝7.1Hz），0.950-0.892（12H，交叠二重峰）.
（1S，2S）-2-（（（1S，2S）-2-（叔丁氧羰基-L-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
f）将实例23（d）化合物（25mg，28mmol）在甲醇（1ml）中的溶液于H2气氛中与10%Pd/C（12mg）搅拌15小时。过滤，蒸发掉溶剂，得白色固体状本标题化合物（20.7mg，25.7mmol），收率92%。
TLC：（95∶5 CHCl3∶CH3OH），Rf＝0.39。
NMR（CDCl3）：δ7.71（1H，宽峰;NH），7.58（1H，宽峰 d;NH），7.16（5H，m），6.97（2H，m;NH），6.12（1H，宽峰;NH），4.75（1H，宽峰;BocNH），4.42（1H，dd），4.40-4.04（5H，m），3.89（1H，宽峰），3.70（3H，s），3.64（2H，m），3.03（1H，dd），2.82-2.44（4H，m），2.23-1.87（4H，m），1.80-1.60（4H，m），1.45（9H，s），1.35（3H，d;J＝6.8Hz），1.09（3H，d;J＝6.9Hz），0.963（6H;两个二重峰），0.853（6H，两个二重峰）.
MS（FAB+VE）：m/z805（M+H）+，789，705，674，618，574，476，416，388，300.
MS（FAB-VE）：m/z 803（M-H）-.
实例24
（1S，2S）-2-（（（1S，2S）-2-（L-丝氨酰-L-丙氨酰-L-丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯三氟乙酸盐之制备
将实例23（f）的产物（1.3mg，1.6mmol）溶解于三氟乙酸，90分钟后，将溶液减压浓缩至干。剩余物用***研制，减压除掉***，得白色固体状本标题六肽。
实例25
（1S，2S）-2-（（（1R，2S）-2-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-L-缬氨酰-L-缬氨酸甲酯之制备
应用实例23（f）的相同步骤，将实例23（e）的六肽（23mg，26mmol）脱除苄基，得到白色固体状本标题化合物（18.9mg，23.5mmol），收率90%。
TLC：（95∶5 CHCl3∶CH3OH），Rf＝0.45。
NMR（CDCl3）：δ7.47（1H，d;J＝7.3Hz;NH），7.34（1H，d;J＝6.8Hz;NH），7.29-7.16（5H，m），7.09（1H，d;J＝8.9Hz，NH），6.79（1H，d;J＝8.5Hz;NH），5.79（1H，d;J＝6.5Hz;NH），4.76（1H，宽峰），4.45-4.20（5H，m），4.11（1H，明显四重峰），3.94（1H，dd;J＝10.9，4.3Hz），3.74（3H，s），3.66（1H，dd），3.31（1H，宽二重峰），2.91（2H，明显二重峰），2.58（1H，明显四重峰），2.44（2H，宽峰），2.28-2.08（3H，m），1.95-1.71（3H，m），1.59（2H，m），1.45（9H，s），1.41（3H，d;J＝7.1Hz），1.30（3H，d;J＝7.1Hz），0.951-0.906（12H，m）.
MS（FAB+VE）：m/z805（M+H）+，787，731，705，674，618，547，519，476.
MS（FAB-VE）：m/z803，711，699.
实例26
（1S，2S）-2-（（（1R，2S）-2-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯三氟乙酸盐之制备
将实例25化合物（1.2mg，1.5mmol）溶解于三氟乙酸，90分钟后，将溶液减压浓缩至干，用***研制剩余物，得白色固体物。
实例27
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-2-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯之制备
（1R，2R）-2-（（（1RS，2S）-1-羟基-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸
a）向实例5的差向异构体（36mg，0.10mmol）在二噁烷（0.4ml）中的溶液，加入N-羟基苯并***（27毫克，0.20mmol）和DCC（22mg，0.11mmol）。搅拌20分钟后，加入N-甲基吗啉（27ml，0.25mmol），然后加入缬氨酰缬氨酸甲酯盐酸盐（53mg，0.20mmol）。混合物搅拌5天，过滤，浓缩。快速色谱法提纯（25∶1 CHCl3∶CH3OH），得白色泡沫状本标题化合物差向异构体（51mg，0.089mmol），收率89%。
TLC：（20∶1 CHCl3∶CH3OH），Rf＝0.37。
NMR（CDCl3）：δ7.35-7.15（5H，m），7.05-6.75（2H，m;NH），5.13（1H，m;BocNH），4.50（1H，m），4.30（1H，m），3.85-3.60（5H，m），2.95-2.58（3H，m），2.43-1.55（8H，m），1.45-1.25（9H，两个单峰;Boc），1.05-0.90（12H，m）.
MS（FAB+）：m/z576（M+H）+，476（M-OCOC（CH3）3）+.
（1R，2R）-2-（（（1RS，2S）-1-羟基-2-氨基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯盐酸盐
b）将实例27（a）的肽（48mg，83mmol）溶解于三氟乙酸（0.5ml），1小时后，旋转蒸发浓缩此溶液，将剩余物溶解于CH3OH，用浓HCl（0.1ml）处理，再次浓缩。用***研制并减压干燥，得到白色粉末状标题化合物差向异构体（42mg，82mmol）。
（1R，2R）-2-（（（1RS，2S）-2-（叔丁氧羰基-（O-苯甲基）-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
c）于-40℃及氩气氛中，向Boc-Ser（Bzl）-Ala-Ala（35mg，0.080mmol）在THF（0.4ml）的溶液中，加入N-甲基吗啉（11ml，0.10mmol）和氯甲酸异丁酯（10.4ml，0.080mmol），搅拌20分钟后，再加入11ml N-甲基吗啉，然后加入实例27（b）化合物（42mg，0.082mmol）在THF（1ml）中的溶液。将混合物搅拌并升温至20℃过夜，然后溶解于CH2Cl2并依次用5%HCl，5%NaHCO3及水洗涤。蒸发溶剂得61mg粗制产品。将50mg粗制品用快速色谱法纯化（梯度洗脱，50∶1至25∶1 CHCl3∶CH3OH），洗脱出纯的异构体A（16mg），然后是混合组分（11mg），再后是纯的异构体B（13mg）。
异构体B：
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-2-（叔丁氧羰基-L-（O-苯甲基）丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
TLC：（25∶1 CHCl3∶CH3OH），Rf＝0.40
NMR（CDCl3）：δ7.40-6.95（15H，m;芳族+NH），5.58（1H，d;BocNH），4.53（2H，s;苄基），4.51（1H，dd），4.37（2H，m），4.26-4.20（3H，m），3.75（2H，m），3.71（3H，s），3.54（1H，宽峰），2.96-2.90（2H;苄基），2.69（1H，m），2.38（1H，m），2.15（2H，m;CH（CH3）2），1.90-1.60（6H，m），1.46（9H，s;Boc），1.37（3H，d;J＝7.2Hz;CH3），1.20（3H，d;J＝7.2Hz;CH3），0.937-0.980（12H，交叠二重峰;CH3）.
异构体A：
（1R，2R）-2-（（（1R，2S）-2-（叔丁氧羰基-L-（O-苯甲基）丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
TLC：（25∶1 CHCl3∶CH3OH），Rf＝0.45
NMR（CDCl3）：δ7.79（14H，d;NH），7.40-7.10（11H，m;芳族+NH），6.70（2H;NH），5.59（1H，d;J＝3.3Hz;NH），4.93（1H，d;J＝3.2Hz），4.54（2H，s;苄基），4.47（1H，dd;J＝8.5，5.0Hz），4.30-4.20（4H，m），4.14（1H，m），3.78（1H，m），3.71（3H，s），3.67（1H，m），2.90（1H，dd;苄基），2.77（2H，m），2.35-2.10（4H，m），1.95-1.55（6H，m），1.49（9H，s;Boc），1.40（3H，d;J＝7.3Hz;CH3），1.12（3H，d;J＝7.3Hz;CH3），0.99（6H，两个二重峰;CH3），0.91（6H，两个二重峰;CH3）.
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-2-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
d）于H2气氛中，将实例27（c）的异构体B（13mg，15mmol）在甲醇（5ml）中的溶液与10%Pd/C（10mg）一起搅拌15小时。过滤，蒸发，得到白色固体状本标题肽（12mg，15mmol）。
TLC：（95∶5 CHCl3∶CH3OH），Rf＝0.21
NMR（CD3OD）：δ7.21（5H，m），4.35（1H，m），4.30-4.13（4H，m），4.08（1H，宽峰），3.85（1H，dd;J＝10.8，5.4Hz）CH2OH），3.73（1H，m），3.72（3H，s），3.58（1H，明显t;J＝4.3Hz），2.92（1H，dd;J＝13.7，6.2Hz;苄基），2.75（1H，dd;苄基），2.71（1H，m），2.37（1H，宽峰m），2.19-2.02（2H，m;CH（CH3）2），1.85-1.60（6H，m），1.48（9H，s;Boc），1.41（3H，d;J＝7.3Hz;CH3），1.21（3H，d;J＝7.3;CH3），0.934-0.928（12H;交叠二重峰;CH3）.
MS（FAB+VE）：m/z805（M+H）+，674，618，574，476，309，274，246，228，203.
实例28
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-2-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯盐酸盐之制备
将实例27（d）的产物（12mg，15mmol）溶解于三氟乙酸（0.5ml），90分钟后，真空浓缩此溶液;将剩余物溶解于甲醇（1ml），加入浓HCl（约0.05ml）。浓缩此溶液，用***研制所得的胶状物，真空干燥，得白色粉末状本标题化合物（11mg）。
NMR（CD3OD）：δ7.23（5H，m），4.50-4.25（3H，m），4.16（1H，m），4.05-3.90（3H，m），3.70（3H，s），3.51（1H，dd），3.00-2.70（2H，m），2.56（1H，m），2.32（1H，m），2.20-1.95（2H，m），1.80-1.58（6H，m），1.40（3H，d;J＝7.1Hz），1.27（3H，d;J＝7.2Hz），0.959-0.931（12H，交叠二重峰）.
MS（FAB+VE）：m/z705（M+H）+，574，476.
实例29
（1R，2R）-2-（（（1R，2S）-2-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯之制备
在H2气氛中，将实例27（c）的异构体A（15.5mg，17.3mmol）与10%Pd/C（10mg）在甲醇（5ml）中搅拌15小时。过滤并蒸发，得到本标题肽（13.8mg，17.2mmol）。
TLC：（95∶5 CHCl3∶CH3OH），Rf＝0.27。
NMR（CD3OD）：δ7.22（5H，m），4.40-4.10（6H，m），3.86（1H，dd;J＝11.0，5.5Hz;CH2OH），3.78（1H，dd;J＝11.0，6.0;CH2OH），3.72（3H，s），3.58（1H，dd;J＝10.0，1.8），2.98（1H，dd;J＝14.1，3.4Hz;苄基），2.81-2.71（2H，m），2.34（1H，m），2.24-1.60（8H，m），1.50（9H，s），1.40（3H，d;J＝7.3Hz;CH3），1.11（3H，d;J＝7.4Hz;CH3），1.02-0.940（12H，四个二重峰;CH（CH3）2）.
MS（FAB+VE）：m/z805（M+H）+，674，618，574，519，475，308，264.
实例30
（1R，2R）-2-（（（1R，2S）-2-（丝氨酰丙氨酰-L-丙氨酰）氨基羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯盐酸盐之制备
采用实例28的步骤，将实例29的六肽（13.8mg，17.2mmol）用三氟乙酸及HCl处理，得到本标题化合物。
NMR（CD3OD）：δ7.20（5H，m），4.39-4.17（4H，m），4.07-3.92（4H，m），3.70（3H，s），3.52（1H，dd;J＝9.5，2.9Hz），2.98（1H，dd;J＝14.2，3.4Hz;苄基），2.82-2.68（2H，m），2.38（1H，m），2.21-1.55（8H，m），1.35（3H，d;J＝7.2Hz），1.20（3H，d;J＝7.1Hz），1.01-0.889（12H，四个二重峰）.
MS（FAB+VE）：m/z705（M+H）+，575，476.
实例31
（1R，2R）-2-（（（1RS，2S）-2-（乙酰丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟 基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯之制备
（1R，2R）-2-（（（1RS，2S）-2-（乙酰-（O-苯甲基）丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
a）将实例27（c）化合物的1∶1差向异构体混合物溶解于三氟乙酸（0.5ml）。75分钟后，真空浓缩此溶液，剩余物溶于CH2Cl2并用5%NaHCO3萃取，用MgSO4干燥CH2Cl2层，浓缩得白色固体物（8.8mg），TLC：（25∶1 CHCl3∶CH3OH）Rf＝0.13。将此固体物于1∶1 CH2Cl2∶二噁烷（2ml）及乙酐（1.1ml，12mmol）中搅拌成悬浮液，30分钟后，旋转蒸发脱除溶剂，剩余物用快速色谱法纯化（9∶1 CHCl3∶CH3OH），得到白色固体状本标题差向异构体（9.2mg，11.0mmol）。
TLC：（25∶1 CHCl3∶CH3OH），Rf＝0.25，0.18。
NMR（CD3OD）：δ7.38-7.11（10H，m），4.57（2H，s），4.53-3.97（6H，m），3.78（2H，明显三重峰），3.70（3H，s），3.68（1H，m），3.53（1H，m），3.00-2.59（2H，m），2.35（1H，m），2.18-1.98（5H，m），1.95-1.55（6H，m），1.37（3H;交叠二重峰），1.17-1.07（3H，两个二重峰），0.94（12H，交叠二重峰）.
（1R，2R）-2-（（（1RS，2S）-2-（乙酰丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯基）丙基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
b）于氢气氛中（1大气压），将实例31（a）的差向异构体（9.2mg，11.0mmol）在乙酸（1ml）中溶液与10%Pd/C（6.0mg）搅拌18小时，过滤并减压浓缩，得白色固体状本标题差向异构体混合物（8.2mg，11.0mmol）。
TLC：（9∶1 CHCl3∶CH3OH），Rf＝0.35，0.27。
NMR（CD3OD）：δ7.21（5H，m），4.42-4.09（6H，m），3.89-3.60（2H，m），3.70（3H，s），3.04（1H，m），2.99-2.59（2H，m），2.34（1H，m），2.18-1.99（5H，m），1.92-1.55（6H，m），1.38（3H，交叠二重峰），1.20-1.08（3H，两个二重峰），0.93（12H，交叠二重峰）.
MS（FAB+VE）：m/z747（M+H）+，616，517，476，317，272，246，228，201，183.
实例32
反式-2-（（1-甲氧基-1-（2-苯基-1-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基）乙基）氧膦基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯之制备
反式-2-（（1-甲氧基-1-（2-苯基-1-苯甲氧羰基氨基）乙基）氧膦基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
a）于-40℃，将氯甲酸异丁酯（13ml，0.10mmol）加入搅拌中的11（d）化合物（45mg，0.10mmol）和N-甲基吗啉（17ml，0.15mmol）在THF的溶液中。30分钟后，再加入N-甲基吗啉（17ml，0.15mmol），然后加入固体的缬氨酰缬氨酸甲酯盐酸盐（40mg，0.15mmol），搅拌此混合物并俟其升温至20℃，14小时后，混合物用5%HCl稀释并用CH2Cl2萃取。浓缩萃取液并用快速色谱法纯化（25∶1 CHCl3∶CH3OH），得白色固体状本标题化合物（65mg，98.9mmol），收率99%。
TLC：（9∶1 CHCl3∶CH3OH），Rf＝0.6。
NMR（CDCl3）：δ7.33-7.10（10H，m），5.08-4.77（2H，m），4.70-4.24（3H，m），3.82-3.66（6H，m），3.41-2.63（3H，m），2.24-1.51（8H，m），1.03-0.89（13H，m）.
反式-2-（（1-甲氧基-1-（1-氨基-2-苯基）乙基）氧膦基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
b）在氢气氛中（1大气压），将实例32（a）化合物（30mg，46mmol）在甲醇（1.5ml）中溶液与10%Pd/C（30mg）搅拌9小时。将混合物过滤并真空浓缩，得到玻璃状本标题化合物（20mg，38mmol），收率84%。
NMR（CDCl3）：δ7.38-7.18（5H，m），4.51（1H，m），4.30（1H，m），3.90-3.68（6H，m），3.44-3.03（2H，m），2.93-2.48（1H，m），2.25-1.67（8H，m），1.27（1H，m），1.01-0.85（13H，m）.
反式-2-（（1-甲氧基-1-（2-苯基-1-（叔丁氧羰基-（O-苯甲基）丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基）乙基）氧膦基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲 酯
c）按实例27（c）的相似步骤，应用实例32（b）化合物（20mg，38mmol）、Boc-Ser（Bzl）-Ala-Ala（18.4mg，42.0mmol）、N-甲基吗啉（7.0ml，63mmol）和氯甲酸异丁酯（5.5ml，42mmol）反应，然后用快速色谱法纯化（50∶1 CHCl3∶CH3OH），得玻璃状本标题化合物（23.5mg，24.9mmol），收率65%。
TLC：（9∶1 CHCl3∶CH3OH），Rf＝0.5。
NMR（CDCl3）：δ7.39-7.13（10H，m），4.80-4.20（8H，m），3.90-3.60（8H，m），3.45-2.70（3H，m），2.22-1.64（8H，m），1.50-1.25（12H，m），1.10（3H，m），1.04-0.85（13H，m）.
反应-2-（（1-甲氧基-1-（2-苯基-1-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基）乙基）氧膦基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯
d）应用实例27（d）的步骤，将实例32（c）化合物氢解，得白色固体状本标题化合物（19.1mg，22mmol），收率93%。
NMR（CD3OD）：δ7.32-7.16（5H），4.75-4.10（6H），3.87-3.66（8H），3.32-2.72（3H），2.20-1.62（8H），1.50-1.28（12H），1.13（3H），1.05-0.85（13H）.
MS（FAB+VE）：853（M+H）+，753。
实例33
反应-2-（（1-羟基-1-（2-苯基-1-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基）乙基）氧膦基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯氢溴酸盐之制备
将三甲基溴甲硅烷（4.0ml，30mmol）加入到实例32（d）化合物（9.6mg，11.3mmol）在无水CH2Cl2（1ml）的溶液中。4.5小时后，加入1∶1水∶乙酸（0.5ml）。将混合物浓缩并真空干燥成为固体物。剩余物溶解于甲醇（1ml）并用含30%HBr的乙酸（50ml）处理，再次浓缩，真空干燥，得淡黄色粉末状本标题化合物（9mg）。
NMR（CD3OD）：δ7.30-7.15（5H，m），4.55-3.92（5H，m），3.83-3.66（5H，m），3.30-2.08（4H，m），2.20-1.64（8H，m），1.47-1.25（4H，m），1.12（3H，m），1.05-0.90（12H，m）.
MS（FAB+VE）：m/z739，（M-HBr+H）+，260，232，159.
实例34
（5S，4RS）-5-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯之制备
（5S）-5-（叔丁氧羰基氨基）-1，4-二氧代-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯
a）于-40℃和氩气氛中，向12（b）化合（160mg，0.495mmol）在THF（5ml）中溶液加入N-甲基吗啉（66mg，0.66mmol），随后加入氯甲酸异丁酯（68mg，0.495mmol）。反应混合物搅拌15分钟，然后加入N-甲基吗啉（66mg，0.66mmol），然后滴加入缬氨酰缬氨酸甲酯盐酸盐（120mg，0.45mmol）在THF（6ml）中的溶液。混合物于-40℃搅拌30分钟，然后于20℃搅拌7小时。用1∶1乙酸乙酯∶二氯甲烷（100ml）稀释反应混合物，依次用5%HCl、5%NaHCO3、饱和NaCl水溶液洗涤。用MgSO4干燥有机萃取液，过滤，减压蒸发得油状物。用硅胶快速色谱法提纯（25∶1氯仿∶甲醇），得白色泡沫状本标题化合物（160mg），收率70%。
NMR（CDCl3）：δ7.25（5H，m），6.34（1H，d），6.15（1H，d），5.24（1H，d），4.58（2H，m），4.31（1H，dd），3.78（3H，s），3.19（1H，m），2.95（1H，m），2.87（2H，m），2.52（2H，t），2.21（2H，五重峰），1.43（9H，s），0.98（12H，m）.
MS（FAB+）：m/z534;
MS（FAB-）：m/z532
（5S，4RS）-5-（叔丁氧羰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯
b）于0℃，向实例34（a）化合物（160mg，3.0mmol）在甲醇中溶液分批加入氢硼化钠（5.7mg，1.5×10-4mol）。20分钟后，用5%HCl稀释混合物，用二氯乙烷萃取三次。MgSO4干燥有机物相，过滤，蒸发得白色碎片状物。用硅胶快速色谱纯化（40∶1氯仿∶甲醇），得白色碎片状本标题化合物（112mg），收率70%。
NMR（CDCl3/MeOD）：δ7.15（5H，m）;4.38（1H，dd）;4.10（1H，m）;3.63（3H，s）;3.0 to 1.5（8H，m）;1.28（9H，s）;0.88（12H，m）.
（5S，4RS）-5-（叔丁氧羰基-（O-苯甲基）丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯
c）将实例34（b）的肽（98mg，0.183mmol）溶解于纯净三氟乙酸（3ml），室温搅拌2小时，减压浓缩，溶解于甲醇，用3滴浓HCl处理，减压蒸发，得86mg白色碎片状三肽胺盐酸盐。
于-40℃和氩气氛中，向Boc-Ser（OBz）-Ala-Ala（87.4mg，0.20mmol）在THF（5ml）中的溶液加入N-甲基吗啉（25ml，0.27mmol），再加入氯甲酸异丁酯（27mg，0.20mmol）。混合物搅拌15分钟，再加入N-甲基吗啉（25ml，0.27mmol），然后滴加先前制备的5-氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸盐酸盐（86mg，0.18mmol）在1ml THF中的溶液。混合物于-40℃搅拌30分钟，然后升温至20℃搅拌17小时，用1∶1乙酸乙酯∶二氯甲烷（100ml）稀释反应混合物，依次用5%HCl、5%NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液洗涤，蒸发得白色固体物。用硅胶快速色谱法纯化（20∶1氯仿∶甲醇），得白色晶体标题六肽（98mg），收率63%。
1        氯仿∶甲醇），得白色晶体标题六肽（98mg），收率63%。
NMR（CDCl3/CD3OD）：δ7.1（5H，m），6.95（5H，m），3.48（3H，s），1.29（9H，s），1.05（6H，m），4.2-1.5（m），0.70（12H，m）.
MS（FAB+）：m/z 855;
MS（FAB-）：m/z 853
（5S，4RS）-5-（（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基）-4-羟基-1-氧代-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯
d）向实例34（c）化合物（31mg，36.2mmol）在9∶1甲醇∶乙酸中的溶液，加入10%Pd/C（35mg），混合物于H2（1大气压）气氛中搅拌6小时。反应混合物通过Celite板过滤，Celite 依次用乙酸、甲醇、乙酸乙酯洗涤。溶液合并后减压蒸发，得白色晶体状本标题化合物（21mg），收率75%。
NMR（CDCl3/CD3OD）：δ7.14（5H，m），4.33（1H，m），4.08（4H，m），3.60（3H，s），2.95（1H，dd），2.70（1H，m），2.35（1H，m），2.06（2H，m），1.72（1H，m），1.40（9H，s），1.22（6H，m）;0.85（12H，m）.
MS（FAB+）：m/z 765;
MS（FAB-）：m/z 764.
实例35
（4RS，5S）-5-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰缬氨酸甲酯之制备
（5S）-5-（叔丁氧羰基氨基）-1，4-二氧代-6-（4-苄氧苯基）己基-缬氨酰缬氨酸甲酯
a）于-40℃和氩气氛中，向实例13（c）化合物（810mg，1.9mmol）在THF（20ml）中的溶液加入N-甲基吗啉（0.27ml，2.5mmol）和氯甲酸异丁酯（0.246ml，1.9mmol）。将反应混合物搅拌15分钟，再加入N-甲基吗啉（0.27ml，2.5mmol），随后加入缬氨酰缬氨酸甲酯盐酸盐（459mg，1.7mmol）。于-40℃搅拌反应混合物30分钟，然后升温至室温，再搅拌17小时。用1∶1乙酸乙酯∶CH2Cl2稀释反应混合物，依次用5%HCl、5%NaHCO3水溶液、饱和NaCl水溶液洗涤。用MgSO4干燥此溶液，过滤，减压蒸发。固体剩余物用硅胶快速色谱法提纯，用40∶1 CHCl3∶CH3OH洗脱，得本标题化合物（838mg），收率76%。
NMR（CDCl3）：δ7.4（5H，m），7.02（4H，dd），6.42（1H，br d），6.18（1H，br d），5.19（1H，br d），5.0（2H，s），4.51（2H，m），4.25（1H，m），3.70（3H，s），3.04（1H，m），2.82（3H，m），2.48（2H，m），2.15（2H，m），1.39（9H，s），0.91（12H，m）.
（4RS，5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-苄氧苯基）己基-缬氨酰缬氨酸甲酯
b）于0℃，向实例35（a）化合物（144mg，0.225mmol）的甲醇溶液分批加入氢硼化钠（4.28mg，0.113mmol），20分钟后，用5% HCl稀释此混合物，用二氯甲烷萃取三次。MgSO4干燥萃取液，过滤，蒸发得白色固体物。用硅胶快速色谱法纯化此粗产物（20∶1氯仿∶甲醇），得白色晶体状本标题三肽（118mg），收率82%。
NMR（CDCl3）：δ7.4（5H，m），7.02（4H，dd），6.40（2H，m），5.03（2H，s），4.54（2H，m），4.30（1H，m），3.70（3H，s），3.61（2H，m），3.0 to 1.6（11H，m），1.38（9H，s），0.91（12H，m）.
（4RS，5S）-5-（叔丁氧羰基-（O-苯甲基）-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-苄氧苯基）己基-缬氨酰缬氨酸甲酯
c）按实例34（c）的步骤，将实例35（b）的三肽（115mg，0.179mmol）用三氟乙酸处理。应用N-甲基吗啉（50mg，0.51mmol）和氯甲酸异丁酯（26mg，0.19mmol）将所得盐酸盐与Boc-Ser（Bzl）-Ala-Ala（83mg，0.19mmol）进行偶合，得到白色晶体状本标题六肽（40mg），收率25%。
NMR（CDCl3/CD3OD）：δ7.35（10H，m），6.91（4H，dd），4.95（2H，d），4.48（2H，d），4.37（1H，d），4.07（4H，m），3.62（4H，s），3.60（1H，模糊 m），2.5 to 1.5（3H，m），1.38（9H，s），1.2（6H，m），0.80（12H，m）.
（4RS，5S）-5-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰缬氨酸甲酯
d）应用实例34（d）的氢解步骤，将实例35（c）化合物（39mg，40.6mmol）去除保护基，得白色晶体状本标题化合物（2.3mg），收率73%。
NMR（CDCl3/CD3OD）：δ6.79（4H，m），4.35（1H，q），4.2 to 3.8（5H，m），3.67（3H，s），3.0 to 2.5（2H，m），2.5 to 1.5（4H，m），1.41（9H，s），1.20（6H，m），0.89（12H，m）.
实例36
（3R，4S）-4-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-2，2-二氟-3-羟基-1-氧代-5-苯戊基-缬氨酰缬氨酸甲酯之制备
（3R，5S）-4-（苄氧羰基）氨基-2，2-二氟-3-羟基-5-苯戊酰-缬氨酰缬氨酸甲酯
a）向实例14（b）化合物（0.82g，2.20mmol）、苯并***-1-基氧基三（二甲基氨基鏻六氟磷酸盐）（1.07g，2.41mmol）及缬氨酰缬氨酸甲酯盐酸盐（0.64g，2.41mmol）在75ml无水乙腈中的溶液，加入三乙胺（0.66ml，4.83mmol）。搅拌4小时后，再加入纯净三乙胺（0.66ml，4.83mmol），将反应混合物搅拌过夜。用乙酸乙酯稀释此溶液，依次用2NHCl、5%NaHCO3、H2O洗涤，用MgSO4干燥后，过滤，真空浓缩。用快速色谱法提纯，用40∶1 CHCl3∶CH3OH洗脱，得白色固体碎片状本标题三肽（466mg），收率36%。
NMR（CDCl3）：δ7.34（10H，m），6.93（1H，br，J＝7.1Hz），6.75（1H，br d，J＝8.9Hz），5.03（2H，s），4.87（1H，m），4.60（1H，m），4.38（3H，m），3.63（3H，s），3.07（2H，m），2.32（1H，m），2.14（1H，m），1.93（1H，m），0.98（12H，m）
MS：m/z        592
（3R，4S）-4-氨基-2，2-二氟-3-羟基-1-氧代-5-苯戊基-缬氨酰缬氨酸甲酯盐酸盐
b）在H2气氛中，将实例36（a）的三肽（466mg，0.79mmol）在含10%Pd/C（450mg）的40ml冰乙酸中溶液用H2饱和并搅拌过夜。通过Celite
Figure 891046992_IMG31
板过滤，用甲醇稀释该溶液，并用浓HCl（100μl，1.0mmol）处理。真空浓缩此溶液，得到该粗制三肽盐酸盐，为蓬松白色固态晶体（390mg），收率100%。
（3R，4S）-4-（叔丁氧羰基-（O-苄基）丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-2，2-二氟-3-羟基-1-氧代-5-苯戊基-缬氨酰缬氨酸甲酯
c）于-40℃，向Boc-Ser（Bzl）-Ala-Ala（380mg，0.87mmol）和N-甲基吗啉（108μl，0.99mmol）在无水THF（6ml）中的溶液，滴加氯甲酸异丁酯（112ml，0.87mmol）。搅拌30分钟后，再加入N-甲基吗啉（112ml，0.87mmol），随后再加入实例36（b）的固体化合物。将反应混合物搅拌过夜，并逐渐升温至室温。用CH2Cl2稀释此溶液，依次用10%HCl、5%NaHCO3、H2O洗涤。用MgSO4干燥有机物层，过滤，真空浓缩。用快速色谱法纯化，用30∶1 CHCl3∶CH3OH洗脱，得淡黄色固体状本标题六肽（636mg），收率83%。
NMR（DMSO-d6）：δ8.31（1H，brd;J＝7.1Hz），8.12（1H，brd;J＝9.5Hz），7.98（1H，brd;J＝6.5Hz），7.78（2H，m），7.31（5H，m），7.18（5H，m），6.99（1H，brd;J＝7.1Hz），6.28（1H，m），4.48（2H，s），4.22（4H，m），3.62（3H，s），3.57（1H，m），2.98（1H，m），2.71（1H，m），2.17（2H，m），1.41（9H，s），1.15（3H，d;J＝6.5Hz），1.03（3H，d;J＝7.1Hz），0.92（12H，m）.
MS（FAB+）：m/Z＝877（M+H+）
（3R，4R）-4-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-2，2-二氟-3-羟基-1-氧代-5-苯戊基-缬氨酰-L-缬氨酸甲酯
d）将实例36（c）的被护六肽（13mg，15mmol）溶解于5∶1乙酸∶甲醇（6ml）。加入10% Pd/C（15mg）并用H2气体饱和。在H2气氛中搅拌过夜，将溶液通过Celite 板过滤，真空浓缩，得白色晶体状本标题产物（11.5mg），收率99%。
NMR（CDCl3/CD3OD）：δ7.24（5H，m），4.18（6H，m），3.77（1H，m），3.65（3H，s），3.52（1H，m），3.09（1H，m），2.87（1H，m），2.03（3H，m），1.39（9H，s），1.31（3H，d，J＝5.94Hz），1.06（3H，d，J＝6.6Hz），0.90（12H，m），
MS：m/z        787
实例37
（3R，4S）-4-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-2，2-二氟-3-羟基-1-氧代-5-苯戊基-缬氨酰缬氨酸甲酯三氟乙酸盐之制备
向实例36（d）的N-被护六肽（1.1mg，1.4mmol）加入二滴TFA，2小时后，将氩以细流通入该混合物，以蒸发过量的TFA。加入3滴***并蒸发，以此方式重复3次。真空干燥剩余物。
实例38
4-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-2，2-二氟-1，3-二氧代-5-苯戊基-缬氨酰缬氨酸甲酯之制备
4-（叔丁氧羰基-（O-苄基）丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-2，2-二氟-1，3-二氧代-5-苯戊基-缬氨酰缬氨酸甲酯
a）向实例37的α，α-二氟代醇（102mg，0.12mmol）和Dess-Martin periodinane（247mg，0.58mmol）在2ml无水DMF中的溶液，滴加入纯净TFA（45μl，0.58mmol）。搅拌16小时后，用***稀释此溶液，并倾入饱和NaHCO3（20ml）水溶液和10%硫代硫酸钠水溶液（7ml）中，将混合物剧烈搅拌1小时，用乙酸乙酯萃取，合并萃取液，MgSO4干燥，过滤，真空浓缩。用快速色谱法纯化，用含0-30%甲醇的氯仿梯度洗脱，得白色固 体状本标题α，α-二氟代酮（70mg），收率69%。
NMR（CDCl3/CD3OD）：δ7.27（10H，m），4.50（2H，s），4.34（6H，m），3.71（3H，s），3.66（2H，m），3.25（1H，m），2.99（1H，m），2.24（2H，m），1.42（9H，s），1.34（3H，m），1.08（3H，m），0.92（12H，m）.
MS（FAB+）：m/z875（M+H+）
4-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-2，2-二氟-1，3-二氧代-5-苯戊基-缬氨酰缬氨酸甲酯
b）将实例38（a）的被护六肽（15mg，17μmol）在含有15mg 10%Pd/C的冰乙酸（4ml）中的溶液用H2饱和，并于H2气体气氛中搅拌过夜。混合物通过Celite
Figure 891046992_IMG33
板过滤，真空浓缩。快速色谱法纯化，应用含0-50%甲醇的氯仿进行梯度洗脱，得白色晶体状本标题脱除苄基的产物（9mg），收率67%。
NMR（DMSO-d6）：δ9.01（1H，m），8.36（2H，m），7.95（2H，m），7.17（5H，m），6.68（1H，m），4.85（1H，m），4.18（4H，m），3.91（1H，m），3.58（3H，s），3.45（2H，m），3.08（2H，m），2.66（1H，m），2.00（2H，m），1.45（9H，s），1.11（6H，m），0.88（12H，m）.
MS（FAB+）：m/z785（M+H+）.
实例39
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH之制备
按实例1的常规方式制备被护七肽树脂Boc-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。用含50%TFA的CH2Cl2除掉N-端基Boc基团并用含7%DIEA的CH2Cl2中和所得TFA盐之后，将此与树脂结合的肽用乙酐（2ml）在CH2Cl2（30ml）中的溶液乙酰化，反应30分钟。
于0℃，在苯甲醚（1ml）存在下用无水液态HF（10ml）处理，反应50分钟，使该肽与该树脂断开，并除去侧链保护基。真空除去HF之后，用***洗涤该树脂并风干。此树脂依次用2×30ml 1% HOAc/H2O和2×30ml HOAc/H2O萃取，合并萃取液，冷冻干燥，得318mg粗制肽。
将一份130mg粗制肽用凝胶过滤法纯化，用G-15Sephadex 2.6×70cm柱，用1%HOAc作为洗脱剂。将适宜组分汇集，冷冻干燥，得120mg本标题化合物。
TLC：（正丁醇/乙酸/H2O4∶1∶1），Rf＝0.34;（正丁醇/乙酸乙酯/乙酸/水1∶1∶1∶1），Rf＝0.66;
HPLC：k′＝3.0（Hamilton PRP-1，CH3CN/H2O/0.1%TFA，10%至40%CH3CN，用15分钟，线性梯度，1.5ml/分钟）;
FAB-MS：m/z847.6（M+H+）。
按上述方法，用Boc-Thr（Bzl）替代Boc-Ser（Bzl），得到Ac-Thr-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2。
实例40
Ac-Ser-Ala-Ala-Tyr-Pro-Val-Val-NH2之制备
用常规方式制备被护七肽树脂Boc-Ser（Bzl）-Als-Ale-Tyr-（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。用含50% TFA的CH2Cl2除去N-端基Boc基团并用含6%DIEA的CH2Cl2中和所得的TFA盐之后，用含2ml乙酐的CH2Cl2（3ml）将该与树脂结合的肽乙酰化，反应30分钟。
于0℃，在萃甲醚（1ml）存在下，用无水液态HF（10ml）处理，反应50分钟，使该肽与该树脂断开，并除去侧链保护基。真空除去HF后，用***洗涤该树脂并风干。然后该树脂依次用2×30ml 1% HOAc/H2O萃取，再用2×30ml 10% HOAc/H2O萃取，合并萃取物，冷冻干燥，得到599mg粗制肽。
应用正丁醇/乙酸/HO4∶1∶5体系以逆流分配法提纯该粗制肽。汇集适当组分，蒸发至干，剩余物从1%HOAc中冷冻干燥，得435mg部分纯化的肽。将100mg一份部分纯化的肽通过凝胶过滤进一步纯化，使用2.6×60cm G-15 Sephadex 柱，用1%HOAc作为洗脱剂。汇集适当组分，冷冻干燥，得到85mg经纯化的本标题化合物。
TLC：（正丁醇/乙酸/H2O4∶1∶1），Rf＝0.72;
HPLC：k′＝2.8（Hamilton PRP-1，CH3CN/H2O/0.1%TFA，5%至40%CH3CN，用15分钟，线性梯度，1.5ml/分钟）;
FAB-MS：m/z747（M+H+）。
实例41
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-D-Pro-Val-Val-NH之制备
按上述制备1mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-D-Pro-Val-Val-BHA。于0℃将此树脂用10ml        HF/1ml苯甲醚处理，反应50分钟，使该肽与该树脂断开。真空除去HF之后，用***洗涤该树脂，风干，用3×30ml冰乙酸萃取，合并乙酸萃取物并冷冻干燥，得406mg粗制肽。
此粗制肽在正丁醇-乙酸-H2O（4∶1∶5）中进行逆流分配提纯，利用TLC确定适宜组分位置，将之汇集，蒸发至干，剩余物从1%乙酸中冷冻干燥，得260mg纯化的肽。
TLC：（正丁醇-乙酸-H2O4∶1∶1），Rf＝0.15;（正丁醇-乙酸-H2O1∶1∶1），Rf＝0.54;（正丁醇-乙酸乙酯-乙酸-H2O1∶1∶1∶1），Rf＝0.72。
FAB-MS：m/z847（M+H）+
氨基酸分析（在含0.005（w/v）苯酚的2∶1HCl/TFA中水解，160℃，1小时）：Asp，1.00;Ser，0.75;Gln，0.99;Pro，0.99;Val，0.96;Tyr，1.10。
实例42
Dns-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2之制备
按上述制备1/2mmol被护肽基树脂Dns-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃用10mlHF/1ml苯甲醚处理，反应50分钟，使该肽与该树脂断开。真空除去HF之后，用***洗涤该树脂，风干，依 次用30ml        10%乙酸萃取和用2×30ml        1%乙酸萃取。合并乙酸萃取液，冷冻干燥得290mg粗制肽。
将73mg粗制肽通过凝胶过滤法纯化，用Sephadex G-15，用10%乙酸作为洗脱剂。将适宜组分冷冻干燥，得56mg纯化的肽。
TLC：（正丁醇-乙酸-H2O4∶1∶1），Rf＝0.15;
HPLC：（Hamilton PRP-1，CH3CN/H2O/0.1%TFA，5%至40%CH3CN梯度，用15分钟），k′＝3.32;
FAB-MS，m/z1038（M+H）+
氨基酸分析（在6N        HCl中水解，110℃，24小时）：Asp，1.00;Ser，0.17;Glu，1.00;Pro，1.00;Val，1.38;Tyr，1.78。
实例43
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Arg-NH2之制备
按上述制备1mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Arg（Tos）-BHA。于0℃，用10ml        HF/1ml苯甲醚处理，反应50分钟，使该肽与该树断开。真空除去HF，用***洗涤该树脂，风干，用3×30ml冰乙酸萃取。合并萃取液，冷冻干燥，得639mg粗制肽。
粗制肽用正丁醇-乙酸-H2O（4∶1∶5）逆流分配提纯，利用TLC定出适宜组分位置，将之汇集，蒸发至干，剩余物从1%乙酸中冷冻干燥，得518mg部分提纯的肽。将100mg一份部分提纯肽用凝胶过滤法进一步提纯，用G-15，1%乙酸作为洗脱剂。汇集适宜组分并冷冻干燥，得61.5mg纯化的肽。
TLC：（正丁醇-吡啶-乙酸-H2O15∶10∶3∶12），Rf＝0.43;（正丁醇-乙酸乙酯-乙酸-H2O1∶1∶1∶1），Rf＝0.34;
HLPC：（Hamilton PRP-1，CH3CN/H2O/0.1% TFA，5%至40%CH3CN梯度，用15分钟），k′＝1.94。
FAB-MS：m/z904（M+H）+
氨基酸分析（在6NHCl中水解，110℃，18小时）：
Asp，1.00，Ser，0.98;Glu，1.00;Pro，0.88;Val，0.56;Tyr，0.86;Arg，0.67。
实例44
Ac-Ser-Gln-Ala-Tyr-Pro-Val-Val-Val-NH2之制备
按上述制备1/2mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Ala-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃，用10ml HF/1ml苯甲醚处理，反应1小时，使该肽与该树脂断开。用***洗涤该肽基树脂，用冰乙酸萃取该肽。萃取液冷冻干燥，得220mg产物，收率55%。将100mg粗制肽用凝胶过滤法纯化，用Sephadex G-15，用1%乙酸洗脱，得85mg产物。
梯度HPLC：5%至40%，0.1%TFA（CH3CN），线性，用15分钟，k′＝2.61。
TLC：（B∶A∶W        1∶1∶1），Rf＝0.67;
FAB-MS：m/z 804（M+H）+;
氨基酸分析：（HCl∶TFA        2∶1，0.005%        w/v苯酚，160℃，1小时）：Ser，0.89;Glu，1.00;Pro，1.04;Ala，1.00;Val，1.75;Tyr，0.89;肽含量：98.94%。
实例45
Ac-Ser-Ser-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH之制备
按上述制备1/2mmol被护肽树脂Ac-Ser（Bzl）-Ser（Bzl）-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃，用10ml HF/1ml苯甲醚处理，反应1小时，使该肽与该树脂断开，用***洗涤该肽基树脂，用冰乙酸萃取该肽。萃取液冷冻干燥得283mg产物，收率70%。取100mg粗制肽用凝胶过滤法纯化，用Sephadex
Figure 891046992_IMG38
G-15，用1%乙酸洗脱，得78mg产物。
梯度HPLC：5%至40%，0.1%TFA（CH3CN），线性，用15分钟，k′＝2.58;
TLC：Rf＝0.70，B∶A∶W        1∶1∶1;
FAB-MS：m/z806（M+H）+
氨基酸分析：（HCl∶TFA        2∶1，0.005%w/v苯酚，160℃，1小时）;Asp，1.00;Ser，1.59;Pro，0.90;Val，1.91;Tyr，0.91;肽含量80.6%。
实例46
Ac-Ser-Arg-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2之制备
按上述制备1/2mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Arg-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃，用10ml HF/1ml苯甲醚处理，反应1小时，使该肽与该树脂断开。用***洗涤该肽基树脂，用冰乙酸萃取该肽。将萃取物冷冻干燥，得348.5mg产物，收率80%。取100mg粗制肽用凝胶过滤法纯化，用Sephadex G-15，用1%乙酸洗脱，得87mg产物。
梯度HPLC：5%至40%，0.1%TFA（CH3CN），线性，用15分钟，k′＝2.64;
TLC：（B∶A∶W        1∶1∶1），Rf＝0.60;
FAB-MS：m/z 875（M+H）+
氨基酸分析：HCl/TFA/苯酚;Asp，1.00;Ser，0.80;Pro，0.83;Val，1.85;Tyr，0.94;Arg，0.97。肽含量101.3%。
实例47
Ac-Ser-Lys-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2之制备
按上述制备1/2mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Lys-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃，用10ml        HF/1ml苯甲醚处理，反应1小时，使该肽与该树脂断开。用***洗涤该肽基树脂，用冰乙酸萃取该肽。将萃取液冷冻干燥，得343，79mg产物，收率81%。
取100mg粗制肽用凝胶过滤法纯化，用Sephadex
Figure 891046992_IMG40
G-15，用1%乙酸洗脱，收得87mg产物。
梯度HPLC：5%至40%，0.1%TFA（CH3CN），线性，用15分钟，k′＝2.47;
TLC：（B∶A∶W        1∶1∶1），Rf＝0.60;
FAB-MS：m/z 847（M+H）+
氨基酸分析：（HCl∶TFA        2∶1，0.005%w/v苯酚，160℃，1小时）;Asp，1.00;Ser，0.81;Pro，0.95;Val，1.87;Tyr，1.00;Lys，0.84。肽含量92.3%。
实例48
Ac-Ser-Glu-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2之制备
按上述制备1/2mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Glu（OBzl）-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃，用10ml        HF/1ml苯甲醚反应1小时，将该肽断开。用***洗涤该肽基树脂，用冰乙酸萃取该肽。将萃取液冷冻干燥，得286.22mg产物，收率67%。
取100mg粗制肽用凝胶过滤法纯化，用Sephadex G-15，用1%乙酸洗脱，得77mg。
TLC：（B∶A∶W        1∶1∶1），Rf＝0.38;
梯度HPLC：5%至40%，0.1%TFA（CH3CN），线性，用15分钟，k′＝2.72;
FAB-MS：m/z 848（M+H）+
氨基酸分析：HCl/TFA/苯酚;Asp，1.06;Ser，0.84;Glu，1.00;Pro，0.88;Ala，1.00;Val，1.85;Tyr，1.00;肽含量94.3%。
实例49
Ac-Ser-Ala-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2之制备
按上述制备1/2mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Ala-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃用10ml        HF/1ml苯甲醚反应1小时，使该肽断开。用***洗涤该肽基树脂，用冰乙酸萃取该肽。萃取液冷冻干燥，得330mg产物，收率84%。
取100mg粗制肽用凝胶过滤法纯化，用Sephadex G-15，用1%乙酸洗脱，得86mg产物。
TLC：（B∶A∶W        1∶1∶1），Rf＝0.70;
梯度HPLC：5%至40%，0.1%TFA（CH3CN），线性，用15分钟，k′＝2.62;
FAB-MS：m/z 790（M+H）+
氨基酸分析：HCl/TFA/苯酚;Asp，1.00;Ser，0.81;Pro，0.94;Ala，1.00;Val，1.87;Tyr，0.76。肽含量72.77%。
实例50
Ac-Ser-Gln-Ser-Tyr-Pro-Val-Val-NH2之制备
按上述制备1/2mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Ser（Bzl）-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃，用10ml        HF/1ml苯甲醚反应1小时，使该肽断开。用***洗涤该肽基树脂，用冰乙酸萃取该肽。萃取液冷冻干燥，得285mg产物，收率70%。
取100mg粗制肽用凝胶过滤法纯化，用Sephadex
Figure 891046992_IMG43
G-15，用1%乙酸洗脱，得87mg产物。
TLC：（B∶A∶W        1∶1∶1），Rf＝0.68;
梯度HPLC：5%至40%，0.1%TFA（CH3CN），线性，用15分钟，k′＝2.51;
FAB-MS：m/z820（M+H）+
氨基酸分析：HCl/TFA/苯酚;Ser，1.60;Glu，1.00;Pro，0.91;Val，1.83;Tyr，0.94。肽含量84%。
实例51
Ac-Ser-Gln-Arg-Tyr-Pro-Val-Val-NH2之制备
按上述制备1/2mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Arg-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃，用10ml        HF/1ml苯甲醚反应1小时，使该肽断开。用***洗涤该肽树脂，用冰乙酸萃取该肽，萃取液冷冻干燥，得380.54mg产物，收率86%。
取100mg粗制肽用凝胶过滤法纯化，用Sephadex
Figure 891046992_IMG44
G-15，用1%乙酸洗脱，得89mg产物。
TLC：（B∶A∶W        1∶1∶1），Rf＝0.66;
梯度HPLC：5%至40%，0.1%TFA（CH3CN），线性，用15分钟，k′＝2.58;
FAB-MS：m/z889（M+H）+
氨基酸分析：HCl/TFA/苯酚;Ser，0.80;Glu，1.00;Pro，1.00;Val，1.88;Arg，1.01;Tyr，0.81。肽含量85.33%。
实例52
Ac-Ser-Gln-Lys-Tyr-Pro-Val-Val-NH2之制备
按上述制备1/2mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Lys（Clz）-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃，用10ml        HF/1ml苯甲醚反应1小时，使该肽断开。用***洗涤该肽树脂，并用冰乙酸萃取该肽。将萃取液冷冻干燥，得332mg产物，收率77.32%。
取100mg粗制肽用凝胶过滤法纯化，用Sephadex
Figure 891046992_IMG45
G-15，用1%乙酸洗脱，得85mg产物。
TLC：（B∶A∶W        1∶1∶1），Rf＝0.69;
梯度HPLC：5%至40%，0.1%TFA（CH3CN），线性，用15分钟，k′＝2.48;
FAB-MS：m/z861（M+H）+
氨基酸分析：HCl/TFA/苯酚;Ser，0.79;Glu，1.00;Pro，0.94;Val，1.85;Tyr，0.96;Lys，0.90。肽含量71.26%。
实例53
Ac-Ser-Gln-Asp-Tyr-Pro-Val-Val-NH2之制备
按上述制备1/2mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asp（OBzl）-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃，用10ml HF/1ml苯甲醚反应1小时，使该肽断开。用***洗涤该肽树脂，并用冰乙酸萃取该肽。萃取液冷冻干燥得340mg，收率80%。取100mg粗制肽用凝胶过滤法纯化，用Sephadex G-15，用1%乙酸洗脱，得84mg产物。
TLC：（B∶A∶W        1∶1∶1），Rf＝0.73;
梯度HPLC：5%至40%，0.1%TFA（CH3CN），线性，用15分钟，k′＝2.63;
FAB-MS：m/z848（M+H）+
氨基酸分析：HCl/TFA/苯酚;ASP，1.02;Ser，0.79;Glu，1.00;Pro，0.97;Val，1.86;Tyr，0.82。肽含量79.13%。
实例54
Ac-Asp-Gln-Asp-Tyr-Pro-Val-Val-NH2之制备
按上述制备1/2mmol被护肽基树脂Ac-Asp（OBzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃，用10ml含10%苯甲醚的无水HF反应1小时，使该肽断开并去除保护基。于0℃真空除去HF，用***洗涤该树脂。用冰乙酸萃取该肽，冷冻干燥得288mg，收率65.9%。在正丁醇-乙酸-水（4∶1∶5        v/v/v）中逆流分配提纯该肽，各管中液体用薄层色谱（TLC）法检验，汇集适宜的组分，蒸发，从0.2N乙酸中冷冻干燥，得234mg产物，收率81.2%。
TLC：（B∶E∶A∶W        1∶1∶1∶1），Rf＝0.77;（B∶P∶A∶W）15∶10∶3∶12），Rf＝0.56。
FAB-MS：m/z875（M+H）+
HPLC：4.5mm×25cm        Altex        Ultrasphere        5m        ODS，220nm        UV鉴定，水-乙腈-0.1%        TFA，5%至40%乙腈梯度，用15分钟，k′＝3.71;
恒溶剂HPLC：85∶15水-乙腈，0.1%TFA，k′＝4.77;
氨基酸分析：（在含0.005%w/v苯酚的2;1HCl/TFA中，160℃，水解1小时），Asp，2.05;Glu，1.00;Pro，1.03;Val，1.94;Tyr，0.84。
实例55
Ac-His-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2之制备
按上述制备1/2mmol被护肽基树脂Ac-His（Tos）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃，用10ml含10%苯甲醚的无水HF反应1小时，使该肽断开并去保护基。于0℃真空蒸发HF，用***洗涤该树脂。用冰乙酸萃取该肽，冷冻干燥得311mg产物，收率69.4%。在正丁醇-乙酸-水（4∶1∶5        v/v/v）中逆流分配，部分提纯该肽。各管中液体用TLC检验，将适当组分汇集，蒸发，从0.2N乙酸中冷冻干燥，得200mg产物， 收率65.3%。取87mg进行最后纯化，采用凝胶过滤法，用Spehadex G-15，0.2N乙酸洗脱，得48mg产物，收率55.2%。
TLC：（B∶P∶A∶W        15∶10∶3∶12），Rf＝0.51;（B∶A∶W        1∶1∶1），Rf＝0.71;
HPLC：4.55mm×25cm        Altex        Ultrasphere        5m        ODS，220nm        UV鉴定，水-乙腈-0.1%        TFA，5%至40%乙腈梯度，用15分钟，k′＝4.94;
恒溶剂HPLC：85∶15水-乙腈，0.1%        TFA，k′＝3.76;
FAB-MS：m/z897（M+H）+
氨基酸分析：（在含0.005%w/v苯酚的2∶1        HCl/TFA中，160℃，水解1小时），Asp，1.03;Glu，1.00;Pro，1.13;Val，2.00;Tyr，1.97，His，1.28。
实例56
Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH之制备
按上述制备1/2mmol被护肽基树脂Boc-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（Brz）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃，用含10%苯甲醚的10ml无水HF反应1小时，将该肽断开并去除保护基。0℃真空除去HF，用***洗涤该树脂。用冰乙酸萃取该肽，冷冻干燥得225mg，收率55.9%。在正丁醇-乙酸-水（4∶1∶5        v/v/v）中逆流分配提纯该肽。各管中液体用TLC检验，汇集适当组分，蒸发，从0.2N乙酸中冷冻干燥，得188mg，收率83.5%。
TLC：（B∶E∶A∶W        1∶1∶1∶1），Rf＝0.68;（B∶E∶A∶W        15∶10∶3∶12），Rf＝0.54;
HPLC：4.5mm×25cm        Altex        Ultrasphere        5m        ODS，220nm        UV鉴定，水-乙腈-0.1%TFA，5%至40%乙腈梯度，用15分钟，k′＝4.89;
恒溶剂HPLC：85∶15水-乙腈，0.1%TFA，k′＝2.78;
FAB-MS：m/z805.6（M+H）+
氨基酸分析：（含0.005%        w/v苯酚的2∶1        HCl/TFA中，160℃，水解1小时），Asp，1.03;Ser，0.78;Glu，1.00;Pro，0.88;Val，1.93，Tyr，0.66。
在上述步骤中用3-苄氧基丙酸替代Boc-Ser（Bzl），得到3-羟基丙酰 -谷氨酰胺酰天冬酰胺酰酪氨酰脯氨酰缬氨酰缬氨酰胺，这是一种脱氨-氨基肽。
在上述反应步骤中用Boc-D-Ser（Bzl）替代Boc-Ser（Bzl），得到D-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2。
实例57
Ac-Ser-Gln-Gly-Tyr-Pro-Val-Val-NH2之制备
按上述制备1/2mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Gly-Tyr（Brz）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃，用含10%苯甲醚的10ml无水HF反应1小时，使该肽断开并去除保护基。于0℃真空除去HF，用***洗涤该树脂，用冰乙酸萃取该肽，得200mg产物，收率50.6%。在正丁醇-乙酸-水（4∶1∶5        v/v/v）中逆流分配提纯该肽，各管中液体用TLC检验，汇集适宜组分，蒸发，从0.2N乙酸中冷冻干燥，得145mg产物，收率72.5%。
TLC：（B∶E∶A∶W        1∶1∶1∶1），Rf＝0.63;（B∶A∶W        4∶1∶1），Rf＝0.40;
HPLC：4.5mm×25cm        Altex        Ultrasphere        5m        ODS，220        nm        UV鉴定，水-乙腈-0.1%，TFA，5%-40%乙腈梯度，用15分钟，k′＝4.56;
恒溶剂HPLC：85∶15水-乙腈-0.1%TFA，k′＝3.46;
FAB-MS：m/z790（M+H）+
氨基酸分析：（含0.005%        w/v苯酚的2∶1        HCl/TFA中，160℃水解1小时），Ser，0.71;Glu，0.97;Gly，1.00;Pro，1.02;Val，1.70;Tyr，0.76。
实例58
Ala-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2之制备
按上述制备被护肽基树脂Boc-Ala-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃，用含10%苯甲醚的10ml无水HF反应1小时，使该肽断开并去除保护基。于0℃真空除去HF，用***洗涤该树脂，用冰乙酸萃取该肽，冷冻干燥，得245mg产物，收率56.0%。在正丁醇-乙酸-水（4∶1∶5        v/v/v）中将该肽逆流分配提纯，各管中液体用TLC检验，汇集适宜组分，蒸发，从0.2N乙酸中冷冻干燥，得185mg产物，收率75.5%。
TLC：（B∶E∶A∶W        1∶1∶1∶1），Rf＝0.64;（B∶P∶A∶W        15∶10∶3∶12），Rf＝0.60;
HPLC：4.5mm×25cm        Altex        Ultrasphere        5m        ODS，220nm        UV鉴定，水-乙腈-0.1%        TFA，5%-40%乙腈梯度，用15分钟，k′＝3.86;
恒溶剂HPLC：85∶15水-乙腈-0.1%        TFA，k′＝2.71;
FAB-MS：m/z876（M+H）+
氨基酸分析：（含0.005%        w/v苯酚的2∶1        HCl/TFA中，160℃水解1小时），Asp，1.00;Ser，0.69;Glu，0.98;Pro，0.95;Ala，0.99;Val，1.91;Tyr，0.94。
实例59
Ac-Ser-Gln-Asn-（4′NO2）Phe-Pro-Val-Val-NH2之制备
按上述制备1/2mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asu-（4′NO2）Phe-Pro-Val-Val-BHA。于0℃，用15ml HF/ml苯甲醚反应1小时，使该肽断开。用***洗涤该肽基树脂，用冰乙酸萃取该肽，萃取液冷冻干燥得701.8mg产物，收率80%。
取100mg粗制肽用凝胶过滤法提纯，用1%乙酸洗脱，得68mg产物。取35mg进一步用制备HPLC提纯（PRP-1半制备式，18%0.1%TFA（CH3CN），6ml/分钟），得22mg产物。
TLC：（B∶A∶W        1∶1∶1），Rf＝0.54;
梯度HPLC：5%至40%，0.1%TFA（CH3CN），线性，用15分钟，k′＝3.18;
FAB-MS：m/z 876（M+H）+
氨基酸分析：（含0.005%        w/v苯酚的2∶1        HCl/TFA中，160℃水解1小时），Asp，1.01;Ser，0.81;Glu，.100;Pro，0.90;Val，2.00;硝基Phe，0.91。
肽含量103.67%。
实例60
Dns-Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-OH的制备
按前述方法制备0.5mmole被护肽基树脂Boc-Arg（Tos）-Ala-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-Merrifield树脂。在用50%TFA/CH2Cl2除去Boc基团并用7%DIEA/CH2Cl2中和之后，添加3当量混于DMF中的丹磺酰氯，反应1小时，从而将肽丹酰化。用10mlHF/1ml苯甲醚于0℃处理该树脂50分钟，从其中脱离丹酰基肽。于真空下除去HF，然后用醚洗涤该树脂，风干，并用3×30ml冰醋酸萃取。于真空下除去HF，然后用醚洗涤该树脂，风干，并用3×30ml冰醋酸萃取。合并冰醋酸萃取液，将其冻干，得321mg粗产物肽。
在2.6×70cm的Sephadex        G-15柱上以1%HoAc为洗脱液进行凝胶过滤，将100mg上述粗肽的等分样品纯化。收集适当的级分并冻干，得24.6mg标题肽。
TLC：（B∶A∶W        1∶1∶1）Rf＝0.84
HPLC：（Hamilton PRP-1，CH3CN/H2O/0.1% TFA，梯度5-40%CH3CN，15分钟），k′＝3.61。
FAB-MS：m/z 1266（M+H）+
氨基酸分析：（于160℃在含有0.005%（重量/体积）酚的HCl/TFA（2∶1）中水解1小时）：Asp，1.00;Ser，0.31;Glu，0.91;Pro，0.99;Ala，0.96;Val，1.96;Tyr，1.19;Arg，0.85。
实例61
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-Gln-Asn-NH2的制备
按前述方法制备1mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-Gln-Asn-BHA。用10ml        HF/1ml苯甲醚于0℃处理50分钟将肽从该树脂中脱离。真空下除去HF后，用醚洗涤该树脂，风干，用3×30ml冰醋酸萃取。合并醋酸萃取液，冻干，得862.3mg粗产物肽。
通过在nBuOH-HOAc-H2O（4∶1∶5）中进行逆流蒸馏将上述粗肽提纯。收集由TLC确定的适当级分，蒸干，剩余物从1%HoAc冻干，得712.9mg标题肽。
TLC：（B∶A∶W        1∶1∶1）Rf＝0.61
HPLC：（Hamilton PRP-1，CH3CN/H2O/0.1% TFA，梯度5-40%CH CN，15分钟），k′＝2.17。
FAB-MS：m/z1089（M+H）+
氨基酸分析：（于160℃在含有0.005%（重量/体积）酚的HCl/TFA（2∶1）中水解1小时）：Asp，1.81;Ser，0.97;Glu，2.00;Pro，0.88;Val，1.23;Tyr，1.81。
实例62
Ac-Ala-Thr-Leu-Asn-Phe-Pro-Ile-Ser-Pro-Ile-Glu-NH2的制备
按前述方法制备1mmole被护肽基树脂Ac-Ala-Thr（Bzl）-Leu-Asn-Phe-Pro-Lle-Ser（Bzl）-Pro-Ile-Glu（OBzl）-BHA。用10ml        HF/1ml苯甲醚于0℃处理50分钟，从该树脂中脱离肽。真空下除去HF后，用醚洗涤该树脂，风干，并用3×30ml        1%        HoAc和3×30ml        50%        HoAc萃取。合并HoAc萃取液，用水稀释，冻干，得862.3mg粗产物肽。
通过在nBuOH-HoAc-H2O（4∶1∶5）中进行逆流蒸馏将上述粗肽提纯。收集由TLC确定的适当级分，蒸干，剩余物从1%HoAc中冻干。在2.6×70cm的Sephadex G-15柱上用1%HoAc为洗脱液，将上述肽进一步纯化。收集适当的级分，冻干。用HPLC在Hamilton PRP-1柱上（CH3CN/H2O/0.1%TFA，梯度20-40%CH3CN，15分钟）将100mg上述肽的等分样品进一步纯化。收集适当级分，蒸干，从冰醋酸中冻干，得22.6mg标题肽。
HPLC：（Hamilton PRP-1，CH3CN/H2O/0.1%TFA，梯度5-40%CH3CN，15分钟），k′＝2.94。
FAB-MS：m/z1241（M+H）+
实例63
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-NH
按前述方法制备1mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-BHA。用10mlHF/1ml苯甲醚于0℃处理50分钟，将肽从树脂中脱离。真空下除去HF后，用醚洗涤该树脂，风干，用3×30ml        1%        HoAc和3×30ml        10%        HoAc萃取。合并HoAc萃取液，冻干，得144.7mg粗产物肽。
通过在nBuOH-HoAc-H2O（4∶1∶5）中进行逆流蒸馏将上述粗肽纯化。收集由TLC确定的适当级分，蒸干，剩余物从1%HoAC中冻干，得150mg肽。在2.6×70cm Sephadex G-15柱上用1%HoAc为洗脱液进行凝胶过滤，将上述肽进一步提纯。收集适当的级分，冻干，得到101.3mg标题肽。
TLC：（B∶A∶W        4∶1∶1）Rf＝0.65
HPLC：（Hamilton PRP-1，CH3CN/H2O/0.1%TFA，梯度5-40%CH3CN，15分钟），k′＝2.08。
FAB-MS：m/z748（M+H）+
氨基分析：（于160℃在含有0.005%（重量/体积）酚的HCl/TFA（2∶1）中水解1小时）：Asp，1.00;Ser，0.55;Glu，0.98;Pro，1.19;Val，0.95;Tyr，0.99。
实例64
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-Arg-NH2的制备
按前述方法制备0.5mmole被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr-（BrZ）-Pro-Val-Val-Arg（Tos）-BHA。用10ml        HF/1ml苯甲醚于0℃处理50分钟将肽从树脂中脱离。真空下除去HF后，用醚洗涤该树脂，风干，用3×30ml冰HoAc萃取，合并HoAc萃取液，冻干，得329mg粗产品肽。
在nBuOH-HoAc-H2O（4∶1∶5）中进行逆流蒸馏将上述粗肽提纯。收集由TLC确定的适当级分，蒸干，剩余物从1%HoAc中冻干，得79mg标题肽。
TLC：（B∶E∶A∶W        1∶1∶1∶1）Rf＝0.46
HPLC：（Altex Ultrasphere C18，CH3CN/H2O/0.1% TFA，梯度5-40%CH3CN，15分钟），k′＝3.71。
FAB-MS：m/z 1003（M+H）+
氨基酸分析：（于160℃在含有0.005%（重量/体积）酚的HCl/TFA（2∶1）中水解1小时）：Asp，1.00;Ser，0.73;Glu，0.98;Pro，0.98;Val，1.84;Tyr，1.08;Arg，0.99。
实例65
Ac-Ala-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2的制备
按前述方法制备0.5mmole被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr-（BrZ）-Pro-Val-Val-Arg（Tos）-BHA。用10ml        HF/1ml苯甲醚于0℃处理50分钟，将肽从树脂中脱离。真空下除去HF后，用醚洗涤该树脂，风干，用3×30ml冰HOAc萃取。合并HOAc萃取液，冻干，得329mg粗产物肽。
在nBuOH-HOAc-H2O（4∶1∶5）中进行逆流蒸馏，将上述粗肽提纯。收集由TLC确定的适当级分，蒸干，剩余物从1% HOAc中冻干，得235mg标题肽。
TLC：（B∶E∶A∶W        1∶1∶1∶1）Rf＝0.69
HPLC：（Altex Ultrasphere C18，CH3CN/H2O/0.1% TFA，梯度5-40%CH3CN，15分钟），k′＝4.48。
FAB-MS：m/z        831（M+H）
氨基酸分析：（于160℃在含有0.005%（重量/体积）酚的HCl/TFA（2∶1）中水解1小时）：Asp，1.00;Ala，0.99;Glu，0.98;Pro，0.95;Val，1.97;Tyr，1.85。
实例66
Ala-Ala-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2的制备
按前述方法制备0.5mmole被护肽基树脂Boc-Ala-Ala-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。用10ml        HF/1ml苯甲醚于0℃处理50分钟，将肽从树脂上脱离。真空下除去HF后，用醚洗涤该树脂，风干，用3×30ml冰HOAc萃取。合并HOAc萃取液，冻干，得265mg粗产物肽。
通过在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上以1%HOAc作为洗脱液进行凝胶过滤，将75mg上述粗肽的等分样品进一步纯化。收集适当的级分，冻干，得50mg标题肽。
TLC：（B∶A∶W        1∶1∶1）Rf＝0.54
HPLC：（Altex Ultrasphere C18，CH3CN/H2O/0.1% TFA，梯度5-40%CH3CN，15分钟），k′＝4.67。
FAB-MS：m/z 947（M+H）+
氨基酸分析：（于160℃在含有0.005%（重量/体积）酚的HCl/TFA（2∶1）中水解1小时）：Asp，1.00;Ser，0.61;Ala，1.52;Glu，0.99;Pro，0.86;Val，1.90;Tyr，0.98。
实例67
Ac-Cys-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2的制备
按前述方法制备0.5mmole被护肽基树脂Ac-Cys（Mbz）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。用10ml        HF/1ml苯甲醚于0℃处理50分钟，将肽从树脂上脱离。真空下除去HF后，用醚洗涤该树脂，风干，用3×30ml冰HOAc萃取。合并HOAc萃取液，冻干，得292mg粗产物肽。
在nBuOH-HOAc-H2O（4∶1∶5）中进行逆流蒸馏，将上述粗肽提纯。收集由TLC确定的适当级分，蒸干，剩余物从1%HOAc中冻干，得188mg标题肽。
TLC：（B∶E∶A∶W        1∶1∶1∶1）Rf＝0.67
HPLC：（Altex Ultrasphere C18，CH3CN/H2O/0.1%TFA，梯度5-40%CH3CN，15分钟），k′＝3.7。
FAB-MS：m/z 863（M+H）+
氨基酸分析：（于0℃用过甲酸氧化4小时，然后于160℃在含0.005%（重量/体积）酚的HCl/TFA（2∶1）中水解1小时）：Cys-SO3H，0.98;Asp，1.03;Glu，1.00;Pro，1.13;Val，1.94;Tyr，1.78。
实例68
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-△3-Pro-Val-Val-NH2的制备
按前述方法制备0.5mmole被护肽基树脂Ac-Ser（BzL）-Gln-Asn-Tyr-（BrZ）-△3-Pro-Val-Val-BHA。用10ml        HF/1ml苯甲醚于0℃处理50分钟，将肽从树脂上脱离。真空下除去HF后，用醚洗涤该树脂，风干，用4×20ml冰HOAc萃取。合并HOAc萃取液，冻干，得250mg粗产物肽。
在2.6×70cm        Sephadex        G-10柱上用0.2N        HOAc作为洗脱液进行凝胶过滤，将100mg上述粗肽的等分样品纯化。收集适当的级分，冻干，得41mg标题肽。
HPLC：（Altex Ultrasphere C18，CH3CN/H3O/0.1% TFA，梯度10-40%CH3CN，30分钟），k′＝3.00。
FAB-MS：m/z 803（M+H）+
氨基酸分析：（于160℃在含有0.005%（重量/体积）酚的HCl/TFA（2∶1）中水解1小时）：Asp，1.00;Ser，0.66;Glu，0.95;Val，1.88;Tyr，0.95。
实例69
Ac-Ser-Gly-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH的制备
按常规方法制备0.5mmole被护肽基树脂Boc-Ser（Bzl）-Gly-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤该树脂，风干，用3×30ml        10%        HOAc萃取。用水稀释HOAc萃取液，冻干，得167mg粗产物肽。将该粗肽溶于1%HOAc，于2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上提纯。收集适当的级分，冻干，得138mg纯化的肽。
HPLC：k′＝4.17（Beckman Ultrasphere ODS，5% CH3CN/0.1% TFA至40%CH3CN/0.1 TFA，15分钟）
MS（FAB）：m/z 776（M+H）+
氨基酸分析：Asp        1.00，Gly        1.03，Pro        0.90，Val        1.88，Tyr        0.80，Ser        0.68。
实例70
2-天冬酰胺酰基氨基-3-苯基-丙基-脯氨酰基缬氨酰基缬氨酸酰氨的制备
按照常规方法采用实例2（d）的化合物和实例15的程序，制备0.5mmole被护肽基树脂Boc-Asn-（2-氨基-3-苯基丙基-脯氨酰基）-Val-Val-BHA。于0℃在苯甲醚（1ml）的存在下用无水HF（10ml）处理1小时，将肽解除保护并从树脂上脱离。真空下除去HF后，用***洗涤该树脂，风干，用2×30ml冰HOAc萃取。合并HOAc萃取液，冻干，得139.6mg粗产物肽。在Sephadex        G-15柱上用1%HOAc作为洗脱液进行凝胶过滤将上述粗肽纯化。合并适当的级分，得81.1mg纯化的肽，HPLC上出现单峰。
HPLC：（Hamilton        PRP-1，5-40%        C/0.1%        TFA，15分钟）k′＝2.47
FAB-MS：m/z560.5（M+H）+
实例71
（4S，5S）-5-氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，氯化氢的制备
（4S，5S）-5-（叔丁氧基羰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-苄氧基苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯
a）于0℃向实例35（a）化合物（1.08g，1.70mmol）的甲醇溶液分批添加硼氢化钠（32mg，0.85mmol）。30分钟之后，TLC显示反应已完成，用5%HCl水溶液稀释，用CH2Cl2萃取三次。将合并的有机萃取液干燥（用MgSO4），过滤，减压蒸发，得到一种白色固体的异构体混合物（1.05g，97%）。在1″×25cm的HPLC硅胶柱上用40∶1的CH2Cl2：MeOH以20毫升/分的流量将上述异构体洗脱。收集在14.5分钟时首先洗出的所需的（4S）异构体，蒸发，得到白色固体标题化合物（295mg，34%）。
NMR（CDCl3）：δ7.43（5H，m），7.02（4H，dd），6.40（1H，d），6.32（1H，d），5.04（2H，s），4.50（2H，m），4.26（2H，m），3.70（3H，s），2.71（2H，m），2.43（2H，m），2.11（2H，m），1.39（9H，s），0.91（12H，m）.
MS（FAB）：m/z 642.4（M+H）+.
（4S，5S）-5-氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-苄氧基苯基）己基缬氨酰基缬氨酸甲酯，氯化氢
b）将实例71（a）的化合（295mg，0.46mmol）溶于纯净的三氟乙酸（1ml）中，搅拌3分钟。将上述溶液减压蒸发。再将其溶于MeOH，用浓HCl（3滴）处理，减压蒸发，得到白色固体标题化合物。
实例72
（4S，5S）-5-（丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，乙酸盐的制备
（4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-（4-苄氧基）苯基-4-羟基-（1-氧代）己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯
a）在氩气保护下将苄酯基丙氨酰基丙氨酸（56mg，0.19mmol）的THF溶液冷却至-40℃。向上述溶液中添加N-甲基吗啉（28ml，0.25mmol），接着添加氯甲酸异丁酯（25ml，0.19mmol）。将反应混合物搅拌15分钟，补加N-甲基吗啉（28ml，0.251mmol），接着添加实例71（b）的化合物（100mg， 0.173mmol）。于-40℃将所得的混合物搅拌30分钟，温热至室温，搅拌16小时。用乙酸乙酯/CH2Cl2（1∶1）稀释该混合物，依次用5%HCl水溶液，5%NaHCO3水溶液和饱和NaCl洗涤。干燥该溶液（用MgSO4），过滤，减压蒸发。在1″×25cm HPLC硅胶柱上用CHCl3/MeOH/H2O（95∶5∶0.5）将固体剩余物洗脱，得到白色固体标题化合物（96mg，77%）。
NMR（CD3OD/CDCl3）：δ7.15（10H，m），6.80（4H，dd），4.90（2H，s），4.81（2H，s），3.90（2H，q），3.75（1H，m），3.51（3H，s），3.36（1H，m），2.59（2H，m），2.11（2H，m），1.88（3H，m），1.48（2H，m），1.10（8H，m），0.76（12H，d）.
MS（FAB）：m/z818.3（M+H）+.
（4S，5S）-5-（丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，乙酸盐
b）向实例72（a）化合物（90mg，0.11mmol）的乙酸溶液添加10%载于活性炭上的钯（90mg）。用气球将氢气鼓泡通过该溶液，历时60分钟。然后在氢气中继续搅拌该混合物14小时。将所得的悬浮液通过Celite滤垫过滤，减压蒸馏，得到白色固体标题化合物（74mg，98%）。
NMR（CD3OD/CDCl3）：δ7.06（1H，d），6.78（4H，dd），4.29（1H，d），4.16（1H，m），4.03（1H，d），3.60（3H，s），2.62（2H，m），1.85（7H，br m），1.57（2H，m），1.16（6H，m），0.80（12H，d）.
MS（FAB）：m/z 594.4（M+H）+.
实例73
（4S，5S）-5-丙氨酰基氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，乙酸盐的制备
（4S，5S）-5-丙氨酰基氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯
a）采用实例72（b）的步骤，用苄酯基丙氨酸（34mg，0.16mmol）代替苄酯基丙氨酰基丙氨酸，并采用氯甲酸异丁酯（20ml，0.15mmol）、N-甲基吗啉（44ml，0.40mmol;分为二等分加入）和实例71（b）的化合物（79mg，0.137mmol），制取标题化合物。用柱色谱法在硅胶柱上以MeOH/CHCl3（5∶95）为洗脱液将粗产物纯化，得到白色固体标题化合物（60mg，82%）。
NMR（CD3OD/CDCl3）：δ7.13（10H，m），6.81（4H，dd），4.92（2H，s），4.70（2H，s），4.21（1H，m），3.96（2H，d），3.76（1H，m），3.55（3H，s），3.34（1H，m），2.61（2H，m），2.12（2H，m），1.89（3H，m），1.48（2H，m），1.04（4H，d），0.71（12H，d）.
MS（FAB）：m/z747.3（M+H）+.
（4S，5S）-5-丙氨酰基氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，乙酸盐
b）按照实例72（b）的步骤制备标题化合物，其中用实例73（a）的化合物（60mg）代替实例72（a）的化合物，得到白色固体标题化合物（52mg，100%）。
NMR（CD3OD/CDCl3）：δ8.19（1H，d），7.95（1H，d），7.70（1H，d），6.78（4H，dd），4.15（2H，m），3.95（1H，m），3.73（1H，q），3.58（3H，s），3.43（1H，m），2.66（2H，m），2.21（2H，t），1.90（3H，m），1.53（2H，q），1.36（3H，d），1.17（2H，br），0.93（2H，m），0.78（12H，d）.
MS（FAB）：m/z523.2（M+H）+.
实例74
（4S，5S）-5-（叔丁氧基羰基丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯的制备
按实例72（a）的步骤制备上述标题化合物。其中用叔丁氧基羰基丙氨酸（52mg，0.275mmol）代替苄酯基丙氨酰基丙氨酸，并采用实例71（b） 的化合物（144mg，0.25mmol）、N-甲基吗啉（79ml，0.742mmol;分两次加入）和氯甲酸异丁酯（36ml，0.275mmol）。用MeOH/CH2Cl2（1∶25）在硅胶上洗脱粗产物将其纯化，得到白色固体（55mg，55%）。将一部产物（12.5mg，0.0172mmole）在乙酸中与10%载于活性炭上的钯（10mg）一起进行搅拌。通过气球将氢气鼓泡通入该溶液，历时60分钟。然后将混合物在正氢压下保持14小时。将所得的悬浮液通过Celite滤垫进行过滤，减压蒸发，得到白色固体标题化合物（7.5mg，70%）。
NMR（CD3OD/CDCl3）：δ6.72（4H，dd），4.23（1H，d），3.65-3.92（3H，m），3.54（3H，s），3.38（2H，m），2.60（2H，m），1.62-2.20（5H，m），1.49（3H，m），1.26（9H，s），1.04（5H，m），0.77（12H，d）.
MS（FAB）：m/z623.3（M+H）+.
实例75
（4S，5S）-5-（（β-丙氨酰基）丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，氯化氢的制备
（4S，5S）-5-（（β-丙氨酰基）丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯
a）向苄酯基-β-丙氨酸（23mg，0.105mmol）和羟基苯并***（26mg，0.19mmol）的DMF（0.8ml）溶液中添加二环己基碳化二亚胺（22mg，0.105mmol），于室温搅拌上述混合物20分钟。向此溶液添加N-甲基吗啉（32ml，0.29mmol）和实例73（b）的化合物（50mg，0.0956mmol）。将所得溶液于室温搅拌6天，然后用CHCl稀释，并依次用10% HCl、5%NaHCO3水溶液和H2O洗涤。干燥有机层（用MgSO4），过滤，减压蒸发，得到一白色固体（44mg）。在1″×25cm HPLC硅胶柱上用MeOH/CHCl3（6∶96）将该产物洗脱，得到白色固体标题化合物（12mg，20%）。
NMR（CD3OD/CDCl3）：δ7.51（1H，d），7.30（1H，d），7.18（5H，br s），6.94（1H，d），6.69（4H，dd），4.90（2H，s），4.19（1H，m），3.82（1H，m），3.56（3H，s），3.42（1H，m），3.18（3H，m），2.59（2H，m），2.15（4H，m），1.90（2H，m），1.49（2H，m），1.08（3H，d），0.80（12H，d）.
MS（FAB）：m/z728.3（M+H）+.
（4S，5S）-5-（（β-丙氨酰基）丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯氯化氢
b）向实例75（a）化合物（11mg，0.015mmol）的MeOH溶液添加10%载于活性炭上的钯（5mg）。通过气球向该溶液鼓泡通入氢气1小时，然后在氢气中（1个大气压）搅拌14小时。将所得悬浮液通过Celite滤垫进行过滤，加几滴浓HCl。减压蒸发该溶液，得到白色固体标题化合物（10mg，95%）。
NMR（CD3OD/CDCl3）：δ7.60（1H，d），6.59（4H，dd），4.06（1H，t），3.89（2H，m），3.66（1H，m），3.44（3H，s），3.27（1H，m），2.72（2H，m），2.41（5H，m），1.98（2H，t），1.79（3H，m），1.32（2H，m），1.07（1H，m），0.94（3H，d），0.67（12H，d）.
实例76
（4S，5S）-5-氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，氯化氢的制备
（4S，5S）-5-氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯
a）于0℃向实例34（a）化合物（4.59g，8.61mmol）的MeOH（150ml）溶液添加硼氢化钠（0.33g，8.7mmol）。所得混合物温热至室温，搅拌30分钟。将混合物倒入5%HCl（500ml）中，用CH2Cl2（3×100ml）萃取。干燥合并的有机萃取液（用MgSO4），过滤，减压蒸发，得到一种立体异构体的混合物。将该混合物溶于2%MeOH/CHCl3（70ml），过滤，分批用HPLC纯化（采用2″×25cm硅胶柱，用2%MeOH/CHCl3洗脱）。收集首先洗脱出的所需的（4S）异构体，减压蒸发，得到标题化合物（1.23g，产率27%）。
NMR（CDCl3）：δ7.27（5H，m），6.94（1H，d），6.76（1H，d），5.10（1H，d），4.51（1H，dd），4.36（1H，br t），3.74（3H，s），3.70-3.50（3H，m），2.89（2H，d），2.40（2H，m），2.24-2.00（2H，m），1.95-1.65（2H，m），1.38（9H，s），0.91（12H，m）.
MS（FAB）：m/z 536.2（M+H）+.
（4S，5S）-5-氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，氯化氢
b）用三氟乙酸（5ml）处理实例75（a）的肽（1.0g，1.87mmol），将所得混合物搅拌10分钟。向其中添加甲醇（25ml），接着添加浓HCl（0.20ml），减压蒸蒸出溶剂。向剩余物添加Et2O，蒸发，得到白色粉状的标题化合物，它不经进一步纯化直接使用。
NMR（CD3OD）：δ7.30（5H，m），4.26（2H，m），3.69（3H，s），3.60（1H，m），3.34（1H，m），3.07（1H，dd），2.88（1H，dd），2.40（2H，m），2.08（2H，m），1.80（2H，m），0.94（12H，m）.
MS（FAB）：m/z 436.2（M+H）+.
实例77
（4S，5S）-5-（丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，乙酸盐的制备
（4S，5S）-5-（丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯
a）于-40℃在氩气保护下向苄酯基丙氨酸（413mg，1.85mmol）的无水THF（5ml）溶液添N-甲基吗啉（0.24ml，2.2mmol），接着再添加氯甲酸异丁酯（0.240ml，1.85mmol）。搅拌20分钟后，补加N-甲基吗啉（0.24ml，2.2mmol），接着添加实例76（b）化合物（0.83g，1.76mmol）的THF（10ml）溶液。所得混合物温热至室温，搅拌过夜。将反应混合物溶解于EtOAc，依次用10%HCl，5%NaHCO3水溶液和H2O洗涤，然后干燥（用MgSO4）。过滤及真空除溶剂后，得到一白色固体，用闪式色谱以4%至10%MeOH/CHCl3的溶剂梯度洗脱，将上述产物纯化（0.975g，产率86%）。
NMR（CD3OD）：δ7.34（5H，m），7.23（5H，m），5.09（2H，s），4.32（1H，d），4.19（1H，d），4.09（2H，m），3.71（3H，s），3.60（1H，m），2.85（2H，m），2.30（2H，m），2.10（2H，m），1.70（2H，m），1.23（3H，d），0.94（12H，m）.
MS（FAB）：m/z 641.3（M+H）+.
（4S，5S）-5-（丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，乙酸盐
b）向实例77（a）化合物（969mg，1.51mmol）在MeOH/HOAc（1∶1，15ml）中的溶液添加10%载于活性炭上的钯（100mg）。向该混合物通氢气，于氢气氛下保持18小时。将反应混合物通过Celite滤垫过滤，减压蒸发，得到白色固体标题化合物（0.84g，产率98%）。
NMR（CD3OD）：δ7.25（5H，m），4.32（1H，d），4.21（1H，d），4.10（1H，br t），3.77（1H，apparent q），3.71（3H，s），3.60（1H，br t），2.96（1H，dd），2.83（1H，dd），2.35（2H，t），2.08（2H，m），1.96（3H，s），1.70（2H，m），1.44（3H，d），0.95（12H，d）.
MS（FAB）：m/z 507.2（M+H）+.
实例78
（4S，5S）-5-（丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯的制备
（4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯
a）于-40℃在氩气氛下于10分钟内向苄酯基丙氨酸（337mg，1.51mmol）和N-甲基吗啉（0.198ml，180mmol）在无水THF（10ml）的溶液添加氯甲酸异丁酯（0.196ml，1.51mmol）。进一步搅拌20分钟后，补加N-甲基吗啉（0.198ml，1.80mmol），接着添加实例77（b）化合物（0.84g，1.48mmol）的THF（20ml）溶液。添加二甲基甲酰氨（10ml），为促进搅拌作用除去降温浴。将反应混合物重新冷却至-40℃，然后逐渐温热至室温，搅拌过夜。将反应混合物溶于10% MeOH/CHCl3（500ml），依次用H2O（200ml），10%HCl（200ml）和H2O（200ml）洗涤。减压蒸发有机萃取液，将剩余物溶于CHCl3/MeOH/H2O（80∶20∶2 22ml）。用闪式色谱以CHCl3/MeOH/H2O（90∶10∶1）为洗脱液将上述溶液分三批纯化，得到米色固体粗产物（950mg）。将此粗产物溶于5%MeOH/CHCl3（75ml），过滤，用HPLC（采用1″×25cm硅胶柱，用5%MeOH/CHCl3洗脱）分批（每批8ml）进行进一步纯化，得到白色固体标题化合物（721mg，68%）。
NMR（CD3OD/CDCl3）：δ7.35（5H，m），7.22（5H，m），5.12（2H，d），4.36（1H，d），4.29（1H，q），4.16（2H，m），4.05（1H，m），3.73（3H，s），3.57（1H，m），2.92（1H，dd），2.81（1H，dd），2.32（2H，m），2.09（2H，m），1.72（2H，m），1.36（3H，d），1.27（3H，d），0.94（12H，2 overlapping d′s）.
MS（FAB）：m/z 712.4（M+H）+.
（4S，5S）-5-（丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯
b）向实例78（a）化合物（715mg，1.01mmol）的MeOH（45ml）溶液添加10%载于活性炭上的钯（100mg）。向反应混合物通入氢气，然后在氢气氛中保持48小时。过滤上述混合物，于真空下除去溶剂，得到白色固体标题化合物（599mg，100%）。
NMR（CD3OD）：δ7.24（5H，m），4.32（2H，m），4.21（1H，d），4.03（1H，br t），3.94（1H，q），3.71（3H，s），3.59（1H，br t），2.86（2H，2 交叠 dd），2.31（2H，t），2.07（2H，m），1.68（2H，m），1.52（3H，d），1.32（3H，d），0.94（12H，交叠d）.
MS（FAB）：m/z 578.3（M+H）+.
实例79
（4S，5S）-5-（丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-环己基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯的制备
向实例78（b）化合物（5.4mg，9.4mmol）的MeOH（5ml）溶液添加PtO2（10mg），将所得混合物在Parr氢化器上于60psig H2压下摇振2天。过滤该混合物，于真空下除去溶剂，得到白色固体标题化合物（3.4mg，62%）。
NMR（CD3OD）：δ4.42-4.15（3H，m），3.97（2H，m），3.71（3H，s），3.52（1H，m），2.35（2H，t），2.10（2H，m），1.85（1H，br d），1.80-1.15（21H，m），1.65（12H，m）.
MS（FAB）：m/z 584.4（M+H）+.
实例80
（4S，5S）-5-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，乙酸盐
（4S，5S）-5-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氢基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯
a）于-40℃在10分钟内向苄酯基-（O-苄基）丝氨酸（311mg，0.945mmol）和N-甲基吗啉（130ml，1.20mmol）的THF（20ml）溶液添加氯甲酸异丁酯（123ml，0.945mmol）。继续搅拌30分钟后，添加混于20%DMF/THF（25ml）中的实例78（b）化合物（520mg，0.900mmol）。所得混合物慢慢温热至室温，搅拌20小时。用CHCl3（150ml）稀释该混合物，用H2O洗涤两次。减压蒸发有机萃取液。用闪式色谱以10%MeOH/CHCl3为洗脱液将固体剩余物（870mg）纯化，得到仍然含有少量杂质的产物（640mg）。将该产物溶于4%MeOH/CHCl3（20ml），过滤，用HPLC分六批进一步提纯（采用1″×25cm硅胶柱以4%MeOH/CHCl3为洗脱液），得到白色固体标题化合物（414mg，52%）。
NMR（CD3OD/CDCl3）：δ7.10（10H，m），7.01（5H，m），4.94（2H，s），4.35（2H，s），4.25-3.80（6H，m），3.55（2H，m），3.52（3H，s），3.38（1H，m），2.73（1H，dd），2.63（1H，dd），2.10（2H，m），1.90（2H，m），1.57（2H，m），1.17（3H，d），0.93（3H，d），0.73（12H，交叠d）.
MS（FAB）：m/z 889.4（M+H）+.
（4S，5S）-5-〔（O-苯基甲基）丝氨酰丙氨酰丙氨酰基〕氨基-1-氧代-6-苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，乙酸盐
b）向实例80（a）的化合物（409mg，0.461mmol）在MeOH/HOAc（2∶1，15ml）中的混合物添加10%载于活性炭上的钯（80mg）。向反应混合物通入氢气，然后在氢气氛中保持16小时。将该混合物通过Celite滤垫过滤，减压蒸发，得到白色固体标题化合物（353mg，94%）。
NMR（CDCl3）：δ7.31（5H，m），7.24（5H，m），4.58（2H，s），4.42-4.18（4H，m），4.05（1H，m），3.94（1H，m），3.85-3.70（2H，m），3.70（3H，s），3.58（1H，m），2.91（1H，dd），2.81（1H，dd），2.30（2H，m），2.12（2H，m），1.98（3H，s），1.72（2H，m），1.37（3H，d），1.22（3H，d），0.94（12H，m）.
MS（FAB）：m/z755.3（M+H）+.
（4S，5S）-5-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，乙酸盐
c）向实例80（a）化合物（353mg，0.46mmol）的MeOH（20ml）溶液添加10%载于活性炭上的钯（85mg）。将氢气通入该混合物，然后在氢气氛中保持2天。向其中添加乙酸（5ml），接着补加10%Pd/C（150mg）。在氢气氛中继续搅拌4天后，将反应混合物通过Celite过滤，减压蒸出溶剂，得到标题化合物＊273mg，88%）。
NMR（CD3OD）：δ7.23（5H，m），4.43-4.18（4H，m），4.05（1H，br t），3.85（2H，m），3.70（3H，s），3.59（2H，m），2.92（1H，dd），2.80（1H，dd），2.30（2H，m），2.07（2H，m），1.96（3H，s），1.71（2H，m），1.40（3H，d），1.25（3H，d），0.94（12H，m）.
MS（FAB）：m/z 665.3（M+H）+.
实例81
（4S，5S）-5-〔（D-丝氨酰基）丙氨酰丙氨酰基〕氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯的制备
（4S，5S）-5-〔（苄酯基-D-丝氨酰基）丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯
a）向苄酯基-D-丝氨酸（8.4mg，35mmol）和羟基苯并***（9.5mg，70mmol）在DMF（8滴）中的溶液添加二环己基碳化二亚胺（7.2mg 35mmol），所得混合物搅拌20分钟。添加实例78（b）的化合物（20mg，35mmol），接着补加DMF（7滴），将混合物搅拌2天。用10%MeOH/CHCl3稀释上述混合物，依次用10%HCl，5%NaHCO3水溶液和H2O洗涤。于真空下除去溶剂，用闪式色谱以10%MeOH/CHCl3为洗脱液将剩余物提纯，得到标题化合物（4.2mg，14%）。
NMR（CDCl3/CD3OD）：δ7.26（5H，s），7.17（5H，m），5.11（1H，d），4.96（1H，d），4.35-4.10（5H，m），3.96（1H，m），3.83（1H，dd），3.72（1H，dd），3.64（3H，s），3.47（1H，m），2.87（1H，dd），2.72（1H，dd），2.34-1.95（4H，m），1.70（2H，m），1.34（3H，d），1.24（3H，d），0.87（12H，d）.
MS（FAB）：m/z 799.5（M+H）+.
（4S，5S）-5-（（D-丝氨酰基）丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯
b）向实例81（a）化合物（3.9mg，4.9mmol）的MeOH（2ml）溶液添加10%载于活性炭上的钯（2mg）。向反应混合物通入氢气，然后于氢气氛中保持2天。通过Celite过滤上述混合物，减压蒸发，得到白色固体标题化合物（3.4mg，98%）。
NMR（CD3OD）：δ7.22（5H，m），4.25（4H，m），4.05（1H，m），3.82（2H，m），3.69（3H，s），3.55（1H，m），2.90（1H，dd），2.78（1H，dd），2.29（2H，br t），2.05（2H，m），1.69（2H，m），1.37（3H，d），1.25（3H，d），0.92（12H，overlapping d′s）.
MS（FAB）：m/z 665.4（M+H）+.
实例82
（4RS，5S）-5-氨基-6-（4-苄氧基）苯基-4-羟基-1-氧代己基-缬氨酰基缬氨酸苄酯，氯化氢的制备
（5S）-6-（4-苄氧基）苯基-5-（叔丁氧基羰基）氨基-（1，4-二氧代）己基-缬氨酰基缬氨酸苄酯
a）于-40℃在氩气下向实例13（c）化合物（43mg，0.10mmol）的THF溶液添加N-甲基吗啉（16ml，0.14mmol），接着添加氯甲酸异丁酯（13ml，0.10mmol）。搅拌15分钟后，补加N-甲基吗啉（16ml，0.14mmol），接着添加缬氨酰基缬氨酸苄酯氯化氢（51mg，0.15mmol）。所得的混合物温热至 室温，搅拌过夜。用5%HCl稀释该混合物，用CHCl3萃取三次。将合并的有机萃取液蒸发，用闪式色谱以MeOH/CHCl3（1∶25）为洗脱液将剩余物提纯，得到白色固体标题化合物（62mg，100%）。
NMR（CDCl3）：δ7.34（10H，m），7.07（2H，d），6.89（2H，d），6.52（1H，d），6.31（1H，d），5.2（1H，m），5.16（2H，dd），5.02（2H，s），4.59（1H，dd），4.49（1H，dd），4.30（1H，dd），3.08（1H，dd），2.84（3H，m），2.46（2H，m），2.13（2H，m），1.86（1H，br s），1.39（9H，s），0.91（12H，m）.
（4S，5S）-6-（4-苄氧基）苯基-5-（叔丁氧基羰基）氨基-4-羟基-1-氧代己基-缬氨酰基缬氨酸苄酯
b）向实例82（a）化合物（61mg，0.10mmol）的MeOH/CH2Cl2（5∶1，6ml）溶液添加硼氢化钠（5mg，0.13mmol），所得混合物搅拌20分钟。用5%HCl水溶液稀释反应混合物，用CH2Cl2萃取若干次。将合并的有机萃取液干燥（用MgSO4），过滤，减压蒸发，得到白色固体标题化合物（61mg，100%）。
NMR（CDCl3/CD3OD）：δ7.35（10H，m），7.12（2H，d），6.90（2H，d），5.17（2H，dd），5.02（2H，s），4.47（1H，m），4.17（1H，apparent t），3.68（1H，m），3.53（1H，m），2.96-2.55（2H，m），2.36（2H，m），2.19（1H，m），2.10-1.81（2H，m），1.70（1H，m），1.35（9H，2单峰），0.91（12H，m）.
MS（FAB）：m/z 718.5（M+H）+.
（4S，5S）-5-氨基-6-（4-苄氧基）苯基-4-羟基-1-氧代己基-缬氨酰基缬氨酸苄酯，氯化氢
c）向实例82（b）化合物（60mg，97mmol）与CH2Cl3（2ml）的混合物添加三氟乙酸（0.5ml），所得溶液搅拌2小时。添加甲醇，接着添加浓HCl（2滴）。减压蒸发该溶液。用Et2O研制剩余物，得到白色固体标题化合物（56mg，100%）。
NMR（CD3OD）：δ7.36（10H，m），7.20（2H，d），6.97（2H，d），5.15（2H，m），5.07（2H，s），4.34（1H，m），4.21（1H，m），3.84-3.53（1H，m），3.44-3.20（1H，m），2.97（1H，m），2.80（1H，m），2.44（2H，m），2.15（1H，m），2.02（1H，m），1.94-1.62（2H，m），0.94（12H，m）.
（4RS，5S）-5-氨基-6-（4-羟基）苯基-4-羟基-1-氧代己基-缬氨酰基缬氨酸苄酯，氯化氢
d）将实例82（c）的化合物（50mg）溶于乙酸，与10%载于活性炭上的钯（50mg）一同搅拌。将氢气鼓泡通过该溶液2小时，并于氢气氛下搅拌20小时。所得悬浮液通过Celite滤垫过滤，减压蒸发，得到标题化合物。
实例83
（4RS，5S）-5-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-（4-羟基）苯基-4-羟基-1-氧代己基-缬氨酰基缬氨酸，氯化氢的制备
（4RS，5S）-5-〔（叔丁氧基羰基-（0-苯基甲基）丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基〕-6-（4-苄氧基）苯基-4-羟基-1-氧代己基-缬氨酰基缬氨酸苄酯
a）于-40℃在氩气下向叔丁氧基羰基-（0-苄基）丝氨酰丙氨酰基丙氨酸（46.8mg，107mmol）的THF（1ml）溶液添加N-甲封吗啉（16.5ml，150mmol），接着添加氯甲酸异丁酯（13.8ml，107mmol）。搅拌15分钟后，补加N-甲基吗啉（16.5ml，150mmol），接着添加实例82（c）化合物（56mg，97mmol）的THF（0.75ml）溶液。所得混合物温热至室温，搅拌过夜。用5%HCl稀释反应混合物，用CH2Cl2萃取若干次。减压蒸发合并的有机萃取液，用闪式色谱以MeOH/CHCl3（1∶9）为洗脱液将固体剩余物提纯，得到标题化合物（79.5mg，87%）。
NMR（CDCl3/CD3OD）：δ7.32（15H，m），7.14（2H，m），6.84（2H，m），5.16（2H，dd），5.00（2H，d），4.56-4.40（2H，2d），4.21-3.53（9H，m），3.10-2.65（2H，m），2.48-2.28（2H，m），2.25-2.0（2H，m），1.96-1.68（2H，m），1.50（9H），1.39（3H，交叠d′s），1.17（3H，2d′s），0.96（12H，m）.
MS（FAB）：m/z1037.4（M+H）+.
（4RS，5S）-5-（叔丁氧基羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-（4-羟基）苯基-4-羟基-1-氧代己基-缬氨酰基缬氨酸
b）向实例83（a）化合物（79mg，76mmol）的MeOH/HOAc（3∶1，5ml）溶液添加10%载于活性炭上的钯（45mg）。将氢气通入该混合物，然后在1个大气压的H2中保持24小时。通过Celite滤垫将反应混合物过滤，减压除溶剂。用闪式色谱以CHCl3/MeOH/H2O/HCO2H（90∶10∶1∶1至80∶20∶2∶1的梯度）进行洗脱，从而将固体剩余物纯化。得到白色固体标题化合物（37.5mg，64%）。
NMR（CD3OD）：δ7.03（2H，m），6.66（2H，m），4.4-4.05（5H，m），4.03-3.50（4H，m），3.06-2.54（2H，m），2.38（2H，m），2.14（2H，m），1.96-1.62（2H，m），1.48（9H），1.38（3H，m），1.22（3H，2d′s），0.96（12H，d）.
MS（FAB）：m/z 767.3（M+H）+
（4S，5S）-5-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-（4-羟基）苯基-4-羟基-1-氧代己基-缬氨酰基缬氨酸，氯化氢
c）用三氟乙酸（0.25ml）处理实例83（b）的化合物（5.9mg，7.7mmol），所得溶液搅拌90分钟。添加甲醇，接着添加浓HCl（1滴），减压蒸发该混合物。用Et2O研制剩余物，得到白色粉状标题化合物。
NMR（CD3OD）：δ7.03（2H，m），6.68（2H，m），4.42-4.17（5H，m），3.92（4H，m），3.04-2.54（2H，m），2.33（2H，m），2.22-1.97（2H，m），1.95-1.55（2H，m），1.35（3H，ovel交叠d），1.26（3H，交叠d），0.98（12H，m）.
MS（FAB）：m/z 667.4（M+H）+.
实例84
（4RS，5S）-5-（叔丁氧基羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-6-（4-羟基）苯基-1-氧代己基-缬氨酰基酰氨的制备
（5S）-6-（4-苄氧基）苯基-5-（叔丁氧基羰基）氨基-1，4-二氧代己基-缬氨酰基酰氨
a）于-40℃在氩气下向实例13（c）化合物（25mg，58.5mmol）的THF溶液添加N-甲基吗啉（9.9μl，90μmol），接着添加氯甲酸异丁酯（7.6ml，58.5mmol）。搅拌15分钟后，添加缬氨酸酰氨（14mg，120mmol），所得混合物温热至室温，搅拌过夜。用5%HCl稀释反应混合物，用CHCl3萃取三次。真空除溶剂，剩余物用闪式色谱以MeOH/CHCl3（1∶9）为洗脱液进行提纯，得到黄色固体标题化合物（23.5mg，75%）。
NMR（CD3OD/CDCl3）：δ7.36（5H，m），7.12（2H，d），6.91（2H，d），5.05（2H，s），4.33（1H，m），4.22（1H，m），3.07（1H，dd），2.83（3H，m），2.52（2H，t），2.13（1H，七重峰），1.39（9H，s），0.97（6H，交叠d）。
（4S，5S）-6-（4-苄氧基）苯基-5-（叔丁氧基羰基）氨基-4-羟基-1-氧代己基-缬氨酰基酰氨
b）向实例84（a）化合物（23mg，44mmol）的CH2Cl2/MeOH（1∶4，2.5ml）溶液添加NaBH4（3mg，80mmol）。搅拌15分钟后，用5%HCl稀释该混合物，用CH2Cl2萃取若干次。用H2O洗涤合并的有机萃取液，用MgSO4干燥。过滤及真空除溶剂后，得到白色固体标题化合物（23mg，100%）。
NMR（CD3OD/CDCl3）：δ7.36（5H，m），7.13（2H，d），6.90（2H，d），5.04（2H，s），4.20（1H，明显 t），3.67（1H，m），3.53（1H，m），3.02-2.30（4H，m），2.10（1H，m），2.02-1.61（2H，m），1.35（9H，2单峰），0.97（6H，交叠d）.
MS（FAB）：m/z 528.3（M+H）+.
（4RS，5S）-6-（4-苄氧基）苯基-5-氨基-4-羟基-1-氧代己基-缬氨酰基酰氨基，氯化氢
c）将实例84（b）的化合物（22mg，42mmol）溶于纯净的三氟乙酸（0.1ml）。1小时后添加甲醇，接着添加浓HCl（2滴）。真空除溶剂，得到收湿固体形式的标题化合物（22mg）。
NMR（CD3OD）：δ7.35（5H，m），7.20（2H，2二重峰），6.98（2H，2二重峰），5.07（2H，s），4.21（1H，m），3.83-3.53（1H，m），3.47-3.21（1H，m），2.98（1H，m），2.81（1H，m），2.43（2H，m），2.09（1H，m），1.98-1.62（2H，m），0.98（6H，m）.
（4RS，5S）-5-（叔丁氧基羰基-（0-苯基甲基）丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-（4-苄氧基）苯基-4-羟基-1-氧代己基缬氨酰基酰氨
d）于-40℃在氩气下向叔丁氧基羰基-（0-苯基甲基）丝氨酰丙氨酰基丙氨酸（20mg，46mmol）的THF（1ml）溶液添加N-甲基吗啉（8.2ml，75mmol），接着添加氯甲酸异丁酯（6.0ml，46mmol）。所得混合物搅拌15分钟，补加N-甲基吗啉（8.2ml，75mmol），接着添加实例84（c）化合物（22mg）的THF（0.8ml）溶液。将该混合物温热至室温，搅拌过夜。将上述过夜后已固结的反应混合物溶于CHCl3/MeOH（1∶1），用5%HCl洗涤。减压蒸发有机萃取液。将剩余物（51mg）溶于CHCl3/MeOH/乙酸（9∶1∶0.5，2ml），用6″×15mm闪式硅胶柱（洗脱液为9∶1的CH2Cl3/MeOH）纯化，得到黄色固体（19.5mg）。HPLC分析色谱（二氧化硅;9∶1CH2Cl2∶MeOH流动相;检测器275nm）表明4-羟基非对映异构体比例为2∶1。用闪式色谱在硅胶柱上以CHCl/MeOH/H        O（80∶20∶2）为洗脱液进一步进行纯化，得到标题化合物白色固体（13.8mh，39%）。
NMR（CD3OD/CDCl3/DMSO-d6）：δ7.32（10H，m），7.12（2H，m），6.82（2H，m），5.00（2H，s），4.19（5H，m），4.00（1H，m），3.68（4H，m），3.10-2.60（2H，m），2.42（2H，m），2.13（1H，m），1.99-1.63（2H，m），1.50（9H，s），1.37（3H，交叠d），1.12（3H，d），0.95（6H，m）.
MS（FAB）：m/z 847.5（M+H）+.
（4RS，5S）-5-（叔丁氧基羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-6-（4-羟基）苯基-1-氧代己基-缬氨酰基酰氨
e）向实例84（d）化合物（13.8mg，16.3mmol）的MeOH（5ml）溶液添加10%载于活性炭上的钯（7mg）。将氢气鼓泡通入上述混合物，然后于1个大气压的H2气氛中保持24小时。过滤及减压蒸发掉溶剂后，得到白色固体标题化合物（10.7mg，99%）。
NMR（CD3OD）：δ7.05（2H，2二重峰），6.64（2H，2二重峰），4.18（5H，m），3.95（1H，m），3.88-3.67（3H，m），3.60（1H，m），3.09-2.53（2H，m），2.37（2H，m），2.11（1H，m），2.00-1.65（2H，m），1.47（9H，2s），1.38（3H，交叠d），1.21（3H，2二重峰），0.95（6H，m）.
MS（FAB）：m/z 667.2（M+H）+.
实例85
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-1-羟基-2-氨基-3-环己基）丙基）环戊烷羰基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，氯化氢的制备
（1R，2R）-2（（（1S，2S）-1-羟基-2-叔丁氧基羰基氨基-3-苯基）丙 基）环戊烷羰基-缬氨酰基缬氨酸甲酯
a）按实例27（a）的方法，将实例6（b）的化合物（54mg，150μmol）与N-羟基苯并***（40mg，300μmol）、DCC（33mg，170μmol）、N-甲基吗啉（40μl，380μmol）和缬氨酰缬氨酸甲酯氯化氢（80mg，300μmol）反应，得到标题化合物。
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-1-羟基-2-叔丁氧羰基氨基-3-环己基）丙基）环戊烷羰基-缬氨酰基缬氨酸甲酯
b）于60psig H2压在Parr氢化器上将实例85（a）化合物（10mg，17.4mmol）的MeOH（3ml）溶液与PtO2（10mg）一同摇振。26小时之后，将混合物通过Celite滤垫过滤，减压蒸发。剩余物用闪式色谱以CHCl3/MeOH（25∶1）为洗脱液进行提纯，得到标题化合物（9mg，89%）。
NMR（CDCl3）：δ6.58（1H，d），6.44（1H，d），4.68（1H，d），4.51（1H，dd），4.23（1H，br t），3.74（3H，s），3.60（1H，m），3.47（1H，m），2.68（1H，br t），2.39-2.02（4H，m），2.0-1.5（12H，m），1.45（9H，s），1.40-1.08（6H，m），0.94（12H，m）.
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-1-羟基-2-氨基-3-环己基）丙基）环戊烷羰基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，氯化氢
c）将实例85（b）的化合物（9mg，15.5mmol）溶于纯净的三氟乙酸，搅拌几分钟。减压蒸发该溶液，将剩余物溶于MeOH，用浓HCl处理，真空除溶剂后得到标题化合物。
实例86
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-1-羟基-2-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基-3-环己基）丙基）环戊烷羰基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，氯化氢的制备
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-1-羟基-2-（叔丁氧羰基）-（0-苯基甲基）丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基-3-环己基）丙基）环戊烷羰基-缬氨酰基缬氨酸甲酯
a）于-40℃在氩气下向叔丁氧羰基-（0-苄基）丝氨酰丙氨酰基丙氨酸（6.6mg，15mmol）的THF（0.5ml）溶液添加N-甲基吗啉（2.2ml，20mmol），接着添加氯甲酸异丁酯（2.0ml，15mmol）。所得混合物搅拌15分钟，补加N-甲基吗啉（2.2ml，20mmol），接着添加实例85（c）化合物（15mmol）的THF（0.5ml）溶液。将混合物温热至室温，搅拌过夜。将该混合物在EtOAc和稀HCl之间进行分配。用NaHCO3水溶液和饱和NaCl水溶液洗涤有机萃取液，用MgSO4干燥。过滤及真空除溶剂后得到白色固体（12mg）。用闪式色谱以CHCl3/MeOH（25∶1）为洗脱液将上述产物提纯，得到无色玻璃状的标题化合物（6.2mg.46%）。
NMR（CDCl3）：δ7.35（5H，m），7.0-6.6（5H，m），5.49（1H，br d），4.54（2H，s），4.52-4.08（5H，m），3.99（1H，br），3.78（2H，m），3.72（3H，s），3.42（1H，br t），2.71（1H，m），2.20（4H，m），1.95-1.55（12H，m），1.46（9H，s），1.40（6H，d），1.35-1.06（6H，m），0.94（12H，m）.
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-1-羟基-2-（叔丁氧羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基-3-环己基）丙基）环戊烷羰基-缬氨酰基缬氨酸甲酯
b）向实例86（a）化合物（6.2mg，6.9mmol）的MeOH（1ml）溶液添加10%载于活性炭上的钯（5mg）。将氢气通入该反应混合物，然后在1个大气压的H2压下保持6小时。将该混合物通过Celite滤垫过滤，真空除溶剂，得到无色玻璃状标题化合物（6mg）。
NMR（CDCl3/CD3OD）：δ4.43（1H，d），4.38-4.05（4H，m），3.85（2H，m），3.73（3H，s），3.62（1H，m），3.45（1H，m），2.68（1H，m），2.30-2.05（4H，m），1.9-1.55（12H，m），1.46（9H，s），1.40（6H，overlapping d′s），1.35-1.10（6H，m），0.94（12H，m）.
MS（FAB）：m/z 811.5（M+H）+.
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-1-羟基-2-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基-3-环己基）丙基）环戊烷羰基-缬氨酰基缬氨酸甲酯，氯化氢
c）将实例86（b）的化合物（6mg，7mmol）溶于几滴三氟乙酸。于室温搅拌40分钟后，用MeOH稀释该溶液，滴入一滴浓HCl/二噁烷。减压蒸发所得混合物，得到标题化合物。
NMR（CD3OD）：δ4.50-4.15（4H，m），3.93（4H，m），3.71（3H，s），3.45（1H，t），2.65（1H，m），2.29（1H，m），2.2-2.0（3H，m），1.93-1.53（12H，m），1.5-1.1（6H，m），1.41（3H，d），1.35（3H，d），0.96（12H，m）.
MS（FAB）：m/z 711.5（M+H）+.
实例87
（4S，5S）-5-（甲氧羰基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-（1-氧代）己基-缬氨酰基缬氨酸
（5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-6-苯基-（1，4-二氧代）己基-缬氨酰基缬氨酸苄酯
a）于-40℃在5分钟内向（5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-4-氧代-6-苯基己酸（160mg，0.500mmol）和N-甲基吗啉（66μl，0.60mmol）的THF（4ml）溶液添加氯甲酸异丁酯（65μl，0.50mmol）。继续搅拌15分钟后，补加N-甲基吗啉（66μl），接着添加混于DMF（1.5ml）中的缬氨酰基缬氨酸苄酯氯化氢（205mg，0.60mmol）。所得混合物慢慢温热至室温，搅拌15小时。用CHCl3将其稀释，依次用10%HCl和H2O洗涤。减压蒸发有机萃取液，剩余物用闪式色谱（25∶1CHCl3∶MeOH）提纯，得到白色固体标题化合物（253mg，85%）。
（4S，5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-4-羟基-6-苯基-（1-氧代）己基-缬氨酰基缬氨酸苄酯
b）将实例87（a）的产物（253mg，0.415mmol）溶于5ml MeOH，添加NaBH4（17mg，0.45mmol）。按拌20分钟后，用5%HCl稀释上述混合物，用 CH2Cl2萃取。除去溶剂，剩余物通过HPLC在硅胶柱上以2%MeOH/CH2Cl2为洗脱液进行纯化，首先洗出的是标题化合物（75.6mg），然后是其相应的（4R）非对映异构体（135mg）。
（4S，5S）-5-氨基-4-羟基-6-苯基-（1-氧代）己基-缬氨酰基缬氨酸苄酯氯化氢
c）将实例87（b）的产物（75mg）溶于TFA（0.5ml）。5分钟后添加MeOH（2ml），接着添加浓HCl（50μl）。将该溶液浓缩成胶体，与***一起研制，干燥，得到白色粉末（70mg）。
（4S，5S）-5-（甲氧羰基丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-6-苯基-（1-氧代）己基-缬氨酰基缬氨酸苄酯
d）于-40℃在5分钟内向甲氧羰基丙氨酰丙氨酸（29.7mg，0.135mmol）和N-甲基吗啉（17μl，0.15mmol）的THF（2ml）溶液添加氯甲酸异丁酯（17.6μl，0.13mmol）。继续搅拌15分钟后，补加N-甲基吗啉（17μl），接着添加（4S，5S）-5-氨基-4-羟基-6-苯基-（1-氧代）己基-缬氨酰基缬氨酸苄酯氯化氢（68mg，0.124mmol）的THF/DMF（2∶1，1.5ml）溶液。所得混合物慢慢温热至室温，搅拌15小时。用CHCl/MeOH（9∶1）稀释该混合物，依次用10%HCl和H2O洗涤。减压蒸发有机萃取液，得到白色固体标题化合物（95mg）。
TLC（9∶1CHCl3∶MeOH）：Rf＝0.5.
NMR（CD3OD/CDCl3）：δ7.4-7.25（10H，m），5.17（2H，dd），4.45（1H，obsc.），4.30（1H，m），4.18-4.00（3H，m），3.69（3H，s），3.56（1H，m），2.88（2H，ddd），2.32（2H，m），2.19（1H，m），2.03（1H，m），1.72（2H，m），1.34（3H，d），1.28（3H，d），0.91（12H，交叠d）.
MS（FAB）：m/z 712.4（M+H）+.
（4S，5S）-5-（甲氧羰基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-（1-氧代）己基-缬氨酰基缬氨酸
e）向实例87（d）产物（85mg，0.12mmol）的MeOH（5ml）溶液添加10%载于活性炭上的钯（13mg）。将氢气通入反应混合物，然后在氢气氛下保持3.5小时。将混合物通过Celite进行过滤，减压蒸发，得到白色固体标题化合物（70.5mg，95%）。
NMR（CD3OD）：δ7.23（5H，m），4.37-4.00（5H，m），3.66（3H，s），3.58（1H，m），2.88（2H，ddd），2.32（2H，m），2.18（1H，m），2.06（1H，m），1.73（2H，m），1.32（3H，d），1.26（3H，d），0.95（12H，m）.
MS（FAB）：m/z 622.3（M+H）+.
实例88
（4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-（1-氧代）己基-缬氨酰基缬氨醇（valinol）的制备
向（4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-（1-氧代）己基-缬氨酰基缬氨酸甲酯（4.8mg）的CHCl3/MeOH（9∶1，1ml）溶液添加过量的LiBH4（大约5mg）。10分钟后用5%HCl稀释该溶液，用CHCl3/MeOH（9∶1）萃取。用水洗涤有机层，浓缩。剩余物用闪式色谱（9∶1 CHCl3∶MeOH）提纯，得到白色固体标题化合物（1.9mg）。
NMR：（CD3OD/CDCl3）：δ7.2-7.0（10H，m），4.93（2H，d），4.1（1H，obsc.），4.00-3.80（3H，m），3.50-3.35（4H，m），2.68（2H，ddd），2.13（2H，m），1.92（1H，m），1.69（1H，m），1.54（2H，m），1.16（3H，d），1.08（3H，d），0.75（12H，m）.
MS（FAB）：m/z 684.3（M+H）+.
实例89
（4S，5S）-5-（4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-6-苯基-（1-氧代）己基-缬氨酸异丁基酰氨的制备
（5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-4-氧代-6-苯基己酸苄酯
a）在搅拌下向（5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-4-氧代-6-苯基己酸（1mmol）的干乙腈（10ml）溶液添加DBU（1mmol），接着添加苄基溴（1.5mmol）。2小时后用5%HCl稀释该混合物，用CH2Cl2萃取。浓缩有机层，剩余物用闪式色谱（CHCl3）纯化，得到上述酯（370mg）。
NMR（CDCl3）：δ7.4-7.0（10H，m），5.10（2H，s），5.03（1H，d），4.51（1H，q），3.18-2.83（2H，m），2.73（2H，m），2.60（2H，m），1.39（9H，s）.
MS（FAB）：m/z 412（M+H）+.
（4S，5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-4-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）-6-苯基己酸苄酯
b）按实例87（b）的方法在MeOH中用NaBH4还原实例89（a）的产物（产率96-98%）。将所得的粗产物醇的非对映异构体混合物以大约2M的浓度溶于DMF，添加咪唑（2.4当量）和叔丁基二甲基甲硅烷基氯（1.2当量）。将该混合物搅拌2天，然后用水稀释，用乙酸乙酯萃取。用MgSO4干燥有机层，浓缩。剩余物用闪式色谱（5∶1己烷∶EtOAc）及HPLC（15∶1己烷∶EtOAc）纯化，得到首先洗出的标题化合物（产率25%），接着是其相应的（4R）-甲硅烷氧基苄酯（产率70%）。
（4S）异构体：
NMR（CDCl3）：δ7.4-7.12（10H，m），5.08（2H，s），4.67（1H，d），3.85（1H，q），3.68（1H，m），2.72（2H，m），2.36（2H，m），1.78（2H，m），1.41（9H，s），0.88（9H，s），0.10（6H，d）.
MS（FAB）：m/z 529（M+H）+.
（4S，5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-4-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）-6-苯基己酸
c）按实例87（e）的方法氢解实例89（c）的产物，得到松脆泡沫状的标题化合物（产率99%）。
NMR（CDCl3）：δ7.35-7.10（5H，m），4.69（2H，br d），3.88（1H，q），3.70（1H，m），2.72（2H，m），2.31（2H，m），1.78（2H，m），1.30（9H，s），0.89（9H，s），0.10（6H，d）.
MS（FAB）：m/z 438.2（M+H）+.
（4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）-6-苯基-（1-氧代）己基-缬氨酸异丁基酰氨
d）按实例87（a）的方法用丙氨酸异丁基酰氨氯化氢偶合实例89（c）的产物，得到粗产物（4S，5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-4-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）-6-苯基己酰基-缬氨酸异丁基酰氨（产率80%），然后按实例87（c）的方法将其直接转化为相应的氯化氢化物。按照1-步骤-1的方法将粗氯化氢化物偶合到苄酯基丙氨酸，接着用闪式色谱（20∶1 CHCl3∶MeOH）提纯，得到白色固体标题化合物（产率60%）。
NMR（CDCl3）：δ7.45-7.10（10H，m），6.38（1H，m），5.08（2H，m），4.21（2H，m），3.70（1H，m），2.73（2H，m），2.33（1H，m），2.12（2H，m），1.25（4H，m），0.91（22H，m），0.10（6H，d）.
MS（FAB）：m/z 697.3（M+H）+.
（4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-6-苯基-（1-氧代）己基-缬氨酰基异丁基酰氨
e）向实例89（d）产物的THF溶液添加溴化四丁基铵（5当量）。搅拌14小时后，用水稀释该混合物，用二氯甲烷萃取。除去溶剂后得到白色固体标题化合物。
NMR（CDCl3/CD3OD）：δ7.28-7.05（10H，m），4.96（2H，s），4.02-3.76（4H，m），3.47（1H，m），2.9-2.60（4H，m），2.13（2H，m），1.82（1H，q），1.55（3H，m），1.09（4H，d），0.70（12H，d）.
MS（FAB）：m/z 583.3（M+H）+.
实例90
（4RS，5S）-5-（（叔丁氧羰基）异亮氨酰基）氨基-7-甲基-4-羟基-1-氧代辛基亮氨酰基天冬氨酸甲酯的制备
（5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-7-甲基-4-氧代辛酸
a）按实例12（a，b）的方法制备上述标题化合物，不同之处是用Boc-亮氨酸N-甲氧基-N-甲基酰氨代替Boc-苯基闪氨酸N-甲氧基-N-甲基酰氨。
NMR（CDCl3）：δ5.0（1H，d），4.35（1H，m），3.5（1H，s），2.8（2H，m），2.6（3H，t），1.5（9H，s），0.90（8H，d）.
（5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-7-甲基-（1，4）-二氧代辛基亮氨酰基-（0-苄基）天冬氨酸甲酯
b）按实例34（a）的方法，用实例90（a）的产物和亮氨酰基-（0-苄基）天冬氨酸甲酯氯化氢制备标题化合物。
（4RS，5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-7-甲基-4-羟基-1-氧代辛基亮氨酰基-（0-苄基）天冬氨酸甲酯
c）在乙酸中用过量NaBH3CN还原实例90（b）的产物（2天），经水溶液整理及闪式色谱处理后，得到作为4R和4S非对映异构体1∶1混合物的标题化合物。
NMR（CDCl3）：δ7.35（5H，s），7.05（1H，d），6.15（1H，m），5.15（2H，s），4.85（2H，m），4.55（1H，d），4.4（1H，m），3.65（3H，s），2.9（2H，m），2.4（2H，t），1.5（9H，s），0.90（12H，m）.
MS（FAB）：622.3（M+H）+.
（4RS，5S）-5-（（叔丁氧羰基）异亮氨酰基）氨基-7-甲基-4-羟基-1-氧代辛基亮氨酰基-（0-苄基）天冬氨酸甲酯
d）按实例76（b）和77（a）的方法由实例90（c）的产物制备标题化合物，不同之处是用Boc-异亮氨酸代替Cbz-丙氨酸。
NMR（CDCl3）：δ7.4（5H，s），7.0（1H，d），6.3（0.5H，d），6.2（0.5H，d），5.15（2H，s），5.05（2H，m），4.9（1H，m），4.5（1H，m），3.7（3H，d），3.0（2H，m），2.45（3H，m），1.5（15H，s），1.3（15H，s），0.90（19H，m）.
MS（FAB）：735.5（M+H）+.
（4RS，5S）-5-（叔丁氧羰基）异亮氨酰基）氨基-7-甲基-4-羟基-1-氧代辛基天冬氨酸甲酯
e）按实例77（b）的方法由实例90（d）的产物制备标题化合物。
NMR：δ4.55（1H，t），4.35（1H，m），3.8（2H，m），3.65（3H，s），3.45（1H，m），2.7（1H，m），2.5（1H，m），2.3（2H，m），1.4（9H，s），1.2（6H，s），0.90（15H，m）.
MS（FAB）：667.4（M+Na）+;643.5（M-H）-.
实例91
（4R，5S）和（4S，5R）-苄酯基丙氨酰基-（3-羟基-5-氨基-6-苯基）己酰基缬氨酰基-（4-氨基甲基）吡啶的制备
Boc-缬氨酰基-（4-氨基甲基）吡啶
a）将Boc-L-缬氨酸（5.0g，23mmol）与4-氨基甲基吡啶（2.5g，23mmol）一同溶于100ml CH2Cl2。添加二环己基碳化二亚胺（4.75g，23mmol），搅拌过夜。过滤反应混合物，依次用1N NaHCO3（3×50ml）和水（1×50ml）洗涤，用Na2SO4干燥。减压除去溶剂，用己烷研制剩余物，过滤，结晶。将上述部分纯化的产物在乙酸乙酯中通过硅胶床进一步纯化。蒸发溶剂，得到3.64g白色固体产物。
NMR（CDCl3）：δ0.83（d），0.90（6H，d），1.30（9H，s），3.8-4.0（1H，dd），4.38（2H，d），5.2（1H，d），7.1（d），8.5（4H，d）.
（5S）-苄酯基丙氨酰基-（4-氧代-5-氨基-6-苯基）己酰基缬氨酰 基-（4-氨基甲基）吡啶
b）于室温用4N        HCl/二噁烷处理Boc-L-缬氨酰基-（4-氨基甲基）吡啶（2.0g）30分钟，蒸干，将剩余物溶于水中，过滤，冻干，得到L-缬氨酰基-（4-氨基甲基）吡啶二氯化氢盐。
将L-缬氨酰基-（4-氨基甲基）吡啶二氯化氢盐（0.16g，0.5mmol）和Boc-4-氧代-5（S）-氨基-6-苯基己酸溶于10ml DMF。向其中添加苯并***-1-基氧三（二甲氨基）鏻六氟磷酸盐（0.332g，0.75mmol），1-羟基苯并***（0.101g，0.75mmol）和二异丙基乙胺（0.097g，0.75mmol），反应混合物于室温搅拌过夜。补加苯并***-1-基氧三（二甲氨基）鏻六氟磷酸盐（0.332g，0.75mmol），1-羟基苯并***（0.101g，0.75mmol）和二异丙基乙胺（0.097g，0.75mmol），令反应于室温再进行24小时。蒸出溶剂后，将反应混合物溶于乙酸乙酯，用10%K2CO3、饱和NaHSO4和水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩为油状。在硅胶柱上用5%甲醇/二氯甲烷提纯，得到99mg（4S）-Boc-（3-氧代-4-氨基-5-苯基）己酰基缬氨酰-（4-氨基甲基）吡啶。
于室温用4N        HCl/二噁烷处理上述5（S）-Boc-（4-氧代-5-氨基-6-苯基）己酰基缬氨酰基-（4-氨基甲基）吡啶30分钟，蒸干，将剩余物溶于水中，过滤，冻干，得70mg（5S）-（3-氧代-5-氨基-6-苯基）己酰基缬氨酰基-（4-氨基甲基）吡啶二氯化氢盐。
将（5S）-（3-氧代-5-氧基-6-苯基）己酰基缬氨酰基-（4-氨基甲基）吡啶二氯化氢盐（67mg，0.15mmol）与苄酯基-L-丙氨酸（51mg，0.23mmol）、苯并***-1-基氧三（二甲氨基）鏻六氟磷酸盐（102mg，0.23mmol）、1-羟基苯并***（31mg，0.23mmol）和二异丙基乙胺（30mg，0.23mmol）一同溶于DMF，将该混合物搅拌过夜。蒸发反应混合物，剩余物溶于乙腈，用HPLC制备色谱纯化（Beckman        Ultrasphere，梯度为10%乙腈-水-0.1%TFA至50%乙腈-水-0.1%TFA，历时30分钟，流 量为4ml/分）。收集适当的级分，蒸干，从1%乙酸中冻干，得29mg所需产物。
FAB-MS：m/z616.2（M+H）+，614.2（M-H）-。
（3R，4S）和（3S，4R）-苄酯基丙氨酰基-（3-羟基-4-氨基-5-苯基）己酰基缬氨酰基-（4-氨基甲基）吡啶。
c）将（4S）-苄酯基丙氨酰基-（3-氧代-4-氨基-5-苯基）己酰基缬氨酰基-（4-氨基甲基）吡啶（14）（20mg，0.033mmol）溶于5ml甲醇，添加氢硼化钠（1.4mg，0.036mmol）。于室温放置30分钟之后，补加1mg氢硼化钠，令反应于室温再进行30分钟。蒸掉溶剂，将剩余物溶于乙酸，冻干。用HPLC制备色谱（Beckman        Ultrasphere        ODS，28.5%乙腈-71.5%水-0.1%TFA）分离上述醇的非对映异构体混合物。收集适当的级分，蒸干，从1%乙酸中冻干，得7mg异构体A和6mg异构体B。
异构体A：
FAB-MS：m/z 618.5（M+H）+，616.4（M-H）-。
HPLC：k＝9.6（Beckman        Ultrasphere        ODS，梯度为10%乙腈-水-0.1%TFA至50%乙腈-水-0.1%TFA，历时30分钟）。
异构体B：
FAB-MS：m/z 618.5（M+H）+，616.4（M-H）-。
HPLC：k＝9.9（Beckman        Ultrasphere        ODS，梯度为10%乙腈-水-0.1%TFA至50%乙腈-水-0.1%TFA，历时30分钟）。
实例92
（3S）-Boc-缬氨酰基-4-甲基-3-氨基-2-戊酮的制备
Boc-L-缬氨酸N，O-二甲基酰氨
a）将二甲基羟胺氯化氢（3.91g，40mmol）溶于25ml CH2Cl2，冷却至0℃。添加三乙胺（4.14g，40mmol），得到一种稠的悬浮液，将其温热至室温。
将Boc-L-缬氨酸（8.68g，40mmol）溶于50ml THF和180ml CH2Cl2，冷却至-20℃。添加N-甲基哌啶（4.88ml，40mmol），接着添加氯甲酸乙酯（4.34g，40mmol）。5分钟之后，添加二甲基羟胺溶液，将反应物温热至室温。3小时之后，用1N HCl（2×100ml）和1N NaOH（2×100ml）洗涤反应混合物，用Na2SO4干燥，蒸发至无色油，这种油无需进一步纯化即可使用。
3（S）-4-甲基-3-叔丁氧羰基氨基-2-戊酮
b）将Boc-L-缬氨酸N，O-二甲基酰氨（2.6g，10mmol）溶于30ml***，滴加17ml溴化甲基镁在***中的3M溶液（51mmol）。于室温搅拌3小时，然后倒入冰水中，用1N HCl酸化至pH为2，用乙酸乙酯（3×50ml）萃取。用Na2SO4干燥萃取液，浓缩为无色油，用硅胶色谱柱以2%甲醇/CH2Cl2为洗脱液进行纯化，得1.74g所需产物。
NMR（CDCl3）：δ0.82（3H，d），1.05（3H，d），1.45（9H，s），2.2（3H，s），4.3（1H，m），5.25（1H，br.d）.
（3S）-Boc-缬氨酰基-4-甲基-3-氨基-2-戊酮
c）于室温将4-甲基-3（S）-叔丁氧羰基氨基-2-戊酮与4N HCl/二噁烷一同搅拌30分钟，在高真空下进行浓缩，然后从CH2Cl2中蒸发若干次，以除去残余物的HCl。将所得的氯化氢盐溶于CH2Cl2，用1当量的三乙胺中和。然后添加二环己基碳化二亚胺（1当量）和Boc-L-缬氨酸（1当量），于室温搅拌过夜。将反应混合物过滤，用1N Na2CO3洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，得到粗产物二肽，然后用硅胶色谱柱将其提纯。
（4S，5S）-苄氧羰基丙氨酰丙氨酰基-（6-苯基-5-氨基-4-羟基己酰基）-缬氨酰基-（4-甲基-3（S）-氨基-2-戊酮）
d）于室温用4N HCl/二噁烷处理实例92（c）的化合物30分钟，高真空下浓缩，从CH2Cl2中蒸发若干次，以除去残余物的HCl，得到（3S）-缬氨酰基-4-甲基-3-氨基-2-戊酮氯化氢。在实例89的方法中用上述化合物代替缬氨酸异丁基酰氨即可得到标题化合物。
实例93
（5S）-Boc-5-氨基-6-苯基-反-3-己烯酸
反-3-己烯酸单甲酯
a）将Diazald（21.4g，100mmol）溶于醚中，于65℃添加KOH（5g），水（8ml）和醚（25ml）组成的溶液。将所得的重氮甲烷直接蒸馏到β-反-氢化粘康酸（10g，69mmol）溶液中。蒸发该溶液，用闪式色谱在硅胶柱上用2%乙酸/氯仿将剩余物纯化，得1.24g所需产物。
NMR（CDCl3）：δ10.85（1H，s），5.75（2H，m），3.68（3H，s），3.23（4H，m）.
6-（2-氧代-4-（苯基甲基）-3-噁唑烷基）-反-3-己烯酸（4S）-甲酯
b）将反-3-己烯酸单甲酯（1.24g，7.8mol）与三乙胺（1.42ml，10.2mmol）一同溶于50ml THF，冷却至-78℃。添加新戊酰氯（1.06ml，8.6mmol）于-78℃搅拌15分钟，然后温热至0℃，保持45分钟。将（S）-苄基噁唑烷酮（2.5g，14.1mmol）溶于30ml THF，于氩气下冷却至-78℃。慢慢添加丁基锂（5.6ml 2.5M己烷溶液），搅拌5分钟。将上述混合酸酐冷却至-78℃，通过套管添加锂化的噁唑烷酮。于-78℃搅拌15分钟，然后在1.5小时内温热至室温。用100ml 1M NaHSO4将反应淬灭，减压除去THF。用CH2Cl2萃取含水剩余物，用0.25M的NaHSO4洗涤萃取液，用MgSO4干燥，蒸干。通过闪式色谱在硅胶柱上以30%乙酸乙酯/己烷洗脱将粗产物纯化，得1.40g所需产物。
NMR（CDCl3）：δ7.3（5H，m），5.8（2H，m），4.7（1H，m），4.2（2H，d），3.62（3H，s），3.1（6H，m）.
FAB-MS，m/z 318（M+H）+.
6-（2-氧代-4-（苯基甲基）-3-噁唑烷基）-5-（苯基甲基）-反-3-己烯酸（4S，5S）-甲酯
c）将实例93（b）的噁唑烷酮（3.9mmol）溶于50ml        THF，冷却至-78℃。添加potassium        hexamethyldisilazide（7.8ml        0.5M的THF溶液，3.9mmol），于-78℃搅拌15分钟。添加苄基溴（0.93ml，7.8mmol），将混合物温热至室温，搅拌过夜。浓缩反应混合物，用重力色谱在硅胶柱上以20%乙酸/己烷洗脱将剩余物纯化，得0.38g所需产物（和0.09g5（R）异构体）。
NMR（CDCl3）：δ7.27（10H，m），7.0（2H，m），5.73（2H，m），4.75（3H，m），4.05（2H，m），3.60（3H，s），3.0（7H，m）.
FAB-MS：m/z 408（M+H）+.
5-（苯基甲基）-反-3-己烯酸-（5S）-单甲酯
d）将实例93（c）的烷基化的噁唑烷酮（0.38g，0.93mmol）溶于13.9ml THF和4.6ml水，冷却至0℃。添加过氧化氢（0.63ml的30%溶液），接着添加氢氧化锂（78.1mg，2当量）。于0℃搅拌30分钟后，添4.5ml 1.5M浓度的Na2SO3将反应淬灭。减压除去THF，用NaHCO3将该水溶液的pH调至10，用乙酸乙酯和醚洗涤。然后用1M HCl将pH降至1，用乙酸乙酯萃取。合并萃取液，用Na2SO4干燥，蒸发，得到粗产物。用闪式色谱纯化（在硅胶柱上用2%乙酸/氯仿洗脱），得50mg所需产物。
NMR（CDCl3）：δ9.43（1H，s），7.25（5H，m），5.64（2H，m），3.65（3H，s），3.05（5H，m）.
（5S）-单甲基-5-（苯基甲基）-反-3-己烯酰氨
e）将实例93（d）的羧酸（50mg，0.2mmol）溶于3ml甲苯，冷却至-5℃。添加三乙胺（28ml，0.2mmol），接着添加氯甲酸乙酯（16ml，0.2mmol）。于-5℃搅拌1小时后，将氨鼓泡通入该溶液，然后温热至室温，搅拌2天。蒸发该溶液，将剩余物溶于乙酸乙酯，用0.5M的NaHCO3洗涤，用MgSO4干燥。蒸出溶剂后得到50mg所需产物。
NMR（CDCl3）：δ7.25（5H，m），5.84（2H，m），3.68（3H，s），3.0（5H，m）.
5-氨基-6-苯基-反-3-己烯酸-（5S）-甲酯
f）将实例93（e）的化合物溶于乙腈/水（4∶1）添加Ⅰ，Ⅰ-双（三氟乙酸基）碘氧基苯（1.5当量），于室温进行搅拌，直至反应完成。用1N的HCl将反应混合物酸化至pH为2，用醚洗涤。然后用1N的NaOH将该水溶液的pH调至10，用乙酸乙酯萃取反应产物。用Na2SO4干燥萃取液，蒸发，得到所需产物。
5-叔丁氧羰基氨基-6-苯基-反-3-己烯酸-（5S）-甲酯
g）将实例93（f）的化合物与三乙胺（3当量）-同溶于DMF。添加二叔丁基碳酸氢酯（3当量），于室温反应过夜。减压除去溶剂，用闪式色谱在硅胶柱上将产物纯化。
（5S）-Boc-5-氨基-6-苯基-反-3-己烯酸
h）将实例93（g）的化合物溶于二噁烷/1N        NaOH（1∶1，1当量NaOH），于室温搅拌直至反应完全。用1N        HCl酸化上述溶液，用乙酸乙酯萃取，得到所需产物。
实例94
（5S）-丙氨酰丙氨酰基-（5-氨基-6-苯基-反-3-己烯酰基）-缬氨酰基缬氨酸酰氨的制备
按实例1的常规方法制备被护肽基树脂（5S）-Boc-Ala-Ala-（5-氨基-6-苯基-反-3-己烯酰基）-Val-Val-BHA。于0℃用10ml无水HF液/1ml苯甲醚处理1小时，将肽从树脂上脱离。于真空下除去HF后，用***洗涤该树脂，风干，用2×50ml冰醋酸萃取，冻干，得到粗产物肽。用Sephadex        G-15以10%乙酸水溶液为洗脱液进行凝胶过滤，从而将粗产物纯化。
实例95
Asn-Pro-Val-Val-NH2的制备
按常规方法制备0.5mmol被护肽基树脂Boc-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%HoAc萃取。用水稀释HOAc萃取液，冻干，得145mg粗产物。将上述粗肽（100mg）溶于1%HOAc，在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上纯化。收集适当级分，冻干，得84.4mg纯化的产物。
HPLC：k′＝2.95（Hamilton PRP-1
Figure 891046992_IMG48
，5% CH3CN/0.1% TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）.
MS（FAB）：m/z 590（M+H）+
实例96
Ala-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2的制备
按常规方法制备0.5mmol被护肽基树脂Boc-Ala-Asn-Tyr（BrZ）-PrO-Val-Val-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%        HoAc萃取。用水稀释HOAc萃取液，冻干，得136.6mg粗产物。将该粗肽溶于1%HOAc，在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上纯化。收集适当级分，冻干，得116.7mg纯化的产物。
HPLC：k′＝2.47（Hamilton PRP-1
Figure 891046992_IMG49
，5% CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）.
MS（FAB）：m/z 661（M+H）+
实例97
Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val的制备
按常规方法制备0.5mmol被护肽基树脂Boc        Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-Merrifield树脂。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml10%HOAc萃取。用水稀释HOAc萃取液，冻干，得248.8mg粗产物。将粗肽（90mg）溶于1%HOAc，在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上纯化。收集适当级分。冻干，得58.8mg纯化的产物。
HPLC：k′＝2.86（Hamilton PRP-1
Figure 891046992_IMG50
，10%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）.
MS（FAB）：m/z806（M+H）+
实例98
Ser-Gln-Asn-Cha-Pro-Val-Val-NH2的制备
按常规方法制备0.5mmol被护肽基树脂Boc-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Cha-Pro-Val-Val-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%HOAc萃取。用水稀释HOAc萃取液，冻干，得316mg粗产物肽。将粗肽（100mg）溶于1%HOAc，在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上纯化。收集适当级分，冻干，得88.1mg纯化的产物。
HPLC：k′＝3.31（Hamilton PRP-1 ，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）
MS（FAB）：m/z795（M+H）+
氨基酸分析：Asp        1.00，Ser        0.72，Gln        1.02，Pro        0.97，Val        2.01。
实例99
Ac-Ser-Gln-Asn-Cha-Pro-Val-Val-NH2的制备
按常规方法制备0.5mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Cha-Pro-Val-Val-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30HOAc萃取。用水稀释HOAc萃取液，冻干，得280mg粗产物肽。将粗肽（100mg）溶于1%HOAc，在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上纯化。收集适当级分，冻干，得74.1mg纯化的产物。
HPLC：k′＝3.27（Hamilton PRP-1
Figure 891046992_IMG52
，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）
MS（FAB）：m/z 837（M+H）+
氨基酸分析：Asp1.00，Ser0.75，Glu0.99，Pro0.96，Val1.90。
实例100
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-NH2的制备
按常规方法制备1.0mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%        HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得145mg粗产物肽。将粗肽（130mg）溶于1%HOAc，在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上纯化。收集适当级分，冻干，得101mg纯化的产物。
MS（FAB）：m/z 748.7（M+H）+
HPLC：k′＝2.08（Hamilton PRP-1 ，5%CH3CN/0.1% TFA至40%CH3CN/0.1% TFA，15 min.）.
氨基酸分析：Asp1.00，Ser0.55，Glu0.98，Pro1.19，Val0.95，Tyr0.99。
实例101
Ac-Asp-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-Arg-NH的制备
按常规方法制备0.5mmol被护肽基树脂Ac-Asp（OBzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Arg（Tos）-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%        HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得404mg粗产物肽。粗肽（100mg）溶于1%HOAc，在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上纯化。收集适当级分，冻干，得84.2mg部分纯化的产物。用HPLC制备色谱（Hamilton        PRP-1， 11%CH3CN/0.1%TFA）将上述部分纯化的肽进一步提纯，得78.8mg纯化的产物。
HPLC：k′＝2.04（Hamilton PRP-1 ，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）
MS（FAB）：m/z932（M+H）+
氨基酸分析：Asp1.88，Glu0.90，Pro0.76，Val1.00，Tyr0.33，Arg1.01。
实例102
Asp-Glu-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2的制备
按常规方法制备1.0mmol被护肽基树脂Boc-Asp（OBzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃用无水HF处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%HOAc萃取。用水稀释HOAc萃取液，冻干，得671mg粗产物肽。将粗肽（100mg）溶于1%HOAc，在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上的纯化。收集适当级分，冻干，得74.5mg纯化的产物。
HPLC：k′＝2.44（Hamilton PRP-1 ，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）
MS（FAB）：m/z833（M+H）+
氨基酸分析：Asp2.00，Glu0.98，Pro0.96，Val        2.04，Tyr        0.34。
实例103
Ac-Ala-Ala-Ser-Glu-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2的制备
按常规方法制备0.5mmol被护肽基树脂Ac-Ala-Ala-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%        HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得到粗产物。
实例104
Ac-Ala-Gln-Gly-Tyr-Pro-Val-Val-NH2的制备
按常规方法制备0.5mmol被护肽基树脂Ac-Ala-Gln-Gly-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml 10% HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得275mg粗产物肽。将粗肽在n-BuOH-HOAc-H2O（4∶1∶5）体系中逆流蒸馏进行纯化，得235mg纯化的产物。
HPLC：k′＝4.48（Beckman Ultrasphere
Figure 891046992_IMG56
ODS，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）
MS（FAB）：m/z 831（M+H）+
氨基酸分析：Asp1.02，Glu1.00，Pro0.97，Val1.23，Tyr0.87，Ala1.04.
实例105
D-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2的制备
按常规方法制备0.5mmol被肽基树脂Boc-D-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%HOAc萃取。用水稀释HOAc萃取液，冻干，得271mg粗产物肽。将粗肽（98mg）溶于10%HOAc，在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上纯化。收集适当级分，冻干，得73mg纯化的产物。
HPLC：k′＝4.45（Beckman Ultrasphere ODS，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）
MS（FAB）：m/z 805（M+H）+
氨基酸分析：Asp1.00，Glu0.99，Pro        1.11，Val1.89，Tyr        0.57，Ser0.68.
实例106
Ac-D-Ser-Gly-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2的制备
按常规方法制备0.5mmol被护肽基树脂Ac-D-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得248mg粗产物肽。将粗肽（93mg）溶于10%        HOAc，在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上纯化。收集适当级分，冻干，得75mg纯化的产物。
HPLC：k′＝4.16（Beckman Ultrasphere ODS，5% CH3CN/0.1%
TFA至40%CH3CN/0.1% TFA，15min.）
MS（FAB）：m/z 847（M+H）+
氨基酸分析：Asp        1.00，Ser        0.67，Glu        0.99，Pro        0.93，
Val        2.00，Tyr        0.30.
实例107
Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ala-Val-NH2的制备
按常规方法制备0.5mmol被护肽基树脂Boc-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Ala-Val-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%        HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得202mg粗产物肽。将粗肽（102mg）溶于1%HOAc，在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上纯化。收集适当级分，冻干，得74mg纯化的产物。
HPLC：k′＝3.96（Beckman Ultrasphere ODS，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）
MS（FAB）：m/z777（M+H）+
氨基酸分析：Asp1.05，Ser0.91，Glu1.00，Ala1.02，Pro0.86，Val1.09，Tyr0.61.
实例108
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Gly-Val-NH2的制备
按常规方法制备0.5mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Try（BrZ）-Pro-Gly-Val-BHA。于0℃用无水HF处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%        HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得153mg粗产物肽。将粗肽（100mg）溶于10%HOAc，在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上纯化。收集适当级分，冻干，得76mg纯化的产物。
HPLC：k′＝3.87（Beckman Ultrasphere
Figure 891046992_IMG60
ODS，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）
MS（FAB）：m/z 805（M+H）+
氨基酸分析：Asp1.00，Ser0.84，Glu0.95，Gly1.00，Pro        0.97，Val1.06，Tyr0.77.
实例109
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-Arg-NH2的制备
按常规方法制备0.5mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-Arg（Tos）-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml 10%HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得329mg粗产物肽。将粗肽在n-BuOH-HoAc-H2O（4∶1∶5）体系中通过逆流蒸馏进行纯化。收集适当级分，冻干，得172mg纯化的产物。
MS（FAB）：m/z1003（M+H）+
HPLC：k′＝3.71（Beckman Ultrasphere
Figure 891046992_IMG61
C18，5%CH3CN/0.1% TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）.
氨基酸分析：Asp1.00，Ser0.73，Glu0.98，Pro0.98，Val1.84，Tyr1.01，Arg0.99.
实例110
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Glu-Val-NH2的制备
按常规方法制备0.5mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Glu（OBzl）-Val-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%        HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得184mg粗产物肽。将粗肽溶于10%HOAc，在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上纯化。收集适当级分，冻干，得64mg纯化的产物。
HPLC：k′＝3.83（Bechman Ultrasphere
Figure 891046992_IMG62
ODS，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）
MS（FAB）：m/z877（M+H）+
氨基酸分析：Asp1.00，Ser0.77，Glu2.03，Pro0.87，Val1.08，Tyr1.01.
实例111
Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Glu-Val-NH2的制备
按常规方法制备0.5mmol被护肽基树脂Boc-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Glu（OBzl）-Val-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得216mg粗产物肽。将粗肽（91mg）溶于10%HOAc，在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上纯化。收集适当级分，冻干，得67mg纯化的产物。
HPLC：k′＝3.35（Beckman Ultrasphere ODS，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）
MS（FAB）：m/z 835（M+H）+
氨基酸分析：Asp0.97，Ser0.90，Glu2.03，Pro1.00，Val0.84.
实例112
Ac-Ser-Gln-Gly-Tyr-Pro-Lys-Val-NH2的制备
按常规方法制备0.5mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Gly-Tyr（BrZ）-Pro-Lys（Cl Z）-Val-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml 10%HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得280mg粗产物肽。提供在nBuOH-HOAc-H2O（4∶1∶5）体系中进行逆流蒸馏将粗肽纯化，得242mg纯化的产物。
HPLC：k′＝4.41（Beckman Ultrasphere
Figure 891046992_IMG64
ODS，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）
MS（FAB）：m/z 876（M+H）+
氨基酸分析：Asp1.00，Ser0.68，Glu1.01，Pro0.82，Val1.14，Tyr1.06，Lys1.00.
实例113
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-NH2的制备
按常规方法制备1.0mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得400mg粗产物肽。将粗肽（100mg）溶于1%HOAc，在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上纯化。收集适当级分，冻干，得92.8mg纯产物。
MS（FAB）：m/z649（M+H）+
HPLC：k′＝1.57（Hamilton PRP-1
Figure 891046992_IMG65
，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）.
氨基酸分析：Asp1.00，Ser0.92，Glu1.03，Pro0.87，Tyr0.95.
实例114
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-Gln-Asn-NH2的制备
按常规方法制备1.0mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-Gln-Asn-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml 10%HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得862mg粗产物。将粗肽在n-BuOH-HOAc-H2O（4∶1∶5）体系中逆流蒸馏，进行纯化。收集适当级分，冻干，得713mg纯产物。
MS（FAB）：m/z1089（M+H）+
HPLC：k′＝2.17（Hamilton PRP-1
Figure 891046992_IMG66
，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）.
氨基酸分析：Asp1.81，Ser0.97，Glu2.00，Pro0.88，Val1.81，Tyr1.23.
实例115
Ac-Ser-Gln-Asn-Phe-Pro-Val-Val-NH2的制备
按常规方法制备1.0mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Phe-Pro-Val-Val-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml 10%HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得573mg粗产物肽。用HPLC制备色谱（Hamilton PRP-1，17%CH3CN/0.1%TFA）提纯粗肽（30mg），得24.5mg纯产物。
MS（FAB）：m/z831（M+H）+
HPLC：k′＝3.02（Hamilton PRP-1
Figure 891046992_IMG67
，5% CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1% TFA，15min.）.
氨基酸分析：Asp1.06，Ser0.86，Glu1.00，Pro1.02，Val1.95，Phe1.00.
实例116
Boc-L-缬氨酸异丙基酰氨的制备
将Boc-L-缬氨酸（0.5g，2.3mmol）与异丙基酰氨（0.39ml，4.6mmol）、苯并***-1-基氧三（二甲氨基）鏻六氟磷酸盐（2.03g，4.6mmol）、1-羟基苯并***（0.63g，4.6mmol）和二异丙基乙胺（1.2ml，6.9mmol）一同溶于25ml DMF。于室温搅拌2小时，然后蒸干。剩余物溶于乙酸乙酯，用1N NaHSO4、1N NaHCO3和水洗涤，Na2SO4干燥。减压除溶剂，得0.53g粗产物。用闪式色谱在硅胶柱上以25%MeOH/CHCl3为洗脱液将产物纯化，得358mg纯产物。
MS（DCI），m/z259（M+H）+.
NMR（CDCl3）：δ0.90ppm，d，0.98ppm，d，6H;1.16ppm，d，6H;1.35ppm，s，9H;4.1ppm，dd，1H;5.25ppm，d，1H;6.14ppm，d，1H.
实例117
Ac-Tyr-Pro-Val-Val-NH2的制备
按常规方法制备0.5mmol被护肽基树脂Ac-Tyr（BrZ）-Pro-Val-Val-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得98.7mg粗产物肽。将粗肽溶于1%HOAc，在2.6×70cm        Sephadex        G-15柱上纯化。收集适当级分，冻干，得78.5mg纯产物。
HPLC：k′＝2.96（Hamilton PRP-1 ，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）.
MS（FAB）：m/z 518（M+H）+
实例118
Ac-Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-NH2的制备
按常规方法制备1.0mmol被护肽基树脂Ac-Arg（Tos）-Ala-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-BHA。于0℃用无水HF液处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得0.21mg粗产物肽。在n-BuOH-EtOAc-HOAc-H2O（2∶2∶1∶5）体系中进行逆流蒸馏将粗肽纯化。收集适当级分，冻干，得549mg部分纯化的产物。将部分纯化的肽（100mg）溶于10%HOAc，在2.6×70cm Sephadex G-15柱上纯化。收集适当级分，冻干，得94mg纯产物。
MS（FAB）：m/z876（M+H）+
HPLC：k′＝2.78（Beckman Ultrasphere
Figure 891046992_IMG69
C18，5%CH3CN/0.1% TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）.
氨基酸分析：Asp1.00，Ser1.03，Glu1.01，Pro0.91，Ala1.02，Arg0.99，Tyr0.94.
实例119
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro的制备
按常规方法制备1.0mmol被护肽基树脂Ac-Ser（Bzl）-Gln-Asn-Tyr（BrZ）-Pro-Merifield树脂。于0℃用无水HF处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml        10%HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得458.5mg粗产物，不经进一步纯化直接使用。
实例120
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-NHiPr的制备
于室温用50%TFA/CH2Cl2处理20分钟将Boc-Val异丙基酰氨1034（24.4mg，154mmol）解除保护。将反应混合物蒸干，剩余物从CH2Cl2中蒸发6次，用7%二异丙基胺/CH2Cl2处理，蒸发3次，然后从CH2Cl2中蒸发四次。将剩余物与肽1035（50mg，77mmol）、苯并***-1-基氧基（二甲氨基）鏻六氟磷酸盐（68mg，154mmol）、1-羟基苯并***（20.8mg，154mmol）和二异丙基乙胺（40.2ml，231mmol）一同溶于25ml DMF，于室温反应过夜。将反应混合物蒸干，剩余物溶于MeOH中，用HPLC制备色谱（Beckman Ultrasphere ODS，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15分钟）纯化，得41mg纯肽。
HPLC：k′＝4.97（Beckman Ultrasphere
Figure 891046992_IMG70
ODS，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）
MS（FAB）：m/z 790.5（M+H）+
Amino氨基酸分析：Asp1.00，Ser0.72，Glu1.02，Pro1.13，Val0.65，Tyr0.83.
实例121
Ac-Arg-Lys-Ile-Leu-Phe-Leu-Asp-Gly-NH2的制备
按常规方法制备1.0mmol被护肽基树脂Boc-Age（Tos）-Lys（Cl Bzl）-Ile-Leu-Phe-Leu-Asp（OBzl）-Gly-BHA。于0℃用无水HF处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml 10%HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得520mg粗产物肽。在n-BuOH-HOAc-H2O（4∶1∶5）体系中进行逆流蒸馏将粗肽纯化。收集适当组分，冻干，得440mg部分纯化的产物。用HPLC制备色谱（Hamilton PRP-1，23%CH3CN/0.1%TFA）进一步纯化，得37.5mg纯肽。
HPLC：k′＝3.81（Hamilton PRP-1 ，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）
MS（FAB）：m/z1002（M+H）+
氨基酸分析：Asp1.00，Gly1.05，Ile0.91，Leu2.08，Lys0.94，Arg1.07，Phe1.29.
实例122
Ac-Arg-Lys-Ile-Leu（4′NO2）Phe-Leu-Asp-Gly-NH2的制备
按常规方法制备1.0mmol被护肽基树脂Ac-Arg（Tos）-Lys（Cl2Z）-Ile-Leu-（4′NO2）Phe-Leu-Asp（OBzl）-Gly-BHA。于0℃用无水HF处理1小时，将肽从树脂上脱离。除去HF后，用醚洗涤树脂，风干，用3×30ml 10%HOAc萃取。用水稀释萃取液，冻干，得980mg粗产物肽。在n-BuOH-HOAc-H2O（4∶1∶5）体系中进行逆流蒸馏将粗肽纯化，得853mg部分纯化的肽。用HPLC制备色谱（Hamilton PRP-1，23%CH3CN/0.1%TFA）将部分纯化的肽（50mg）进一步提纯，得43.4mg纯肽。
HPLC：k′＝3.87（Hamilton PRP-1
Figure 891046992_IMG72
，5%CH3CN/0.1%TFA至40%CH3CN/0.1%TFA，15min.）
MS（FAB）：m/z1047.7（M+H）+
氨基酸分析：Asp1.00，Gly1.04，Ile0.89，Leu2.00，Arg0.91，（4′NO2）Phe0.97，Lys0.91.
实例123
（4S，5S）-4-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）-5-（叔丁氧羰基）氨基-6-苯基己酸的制备
（S）-叔丁氧羰基苯基丙氨酸N-甲氧基-N-甲基酰氨
a）按“有机合成”杂志（Org.Syn.67，69（1988）介绍的方法制备标题化合物，不同之处是用Boc-（L）-Phe代替Boc-（L）-Leu。
〔a〕365＝+34°（Cl，乙醇）。
（6S）-5-氧代-6-（叔丁氧羰基）氨基-7-苯基庚烯-1
b）向一个经火焰干燥，装有机械搅拌、温度计、冷凝器、Ar鼓泡装置和盛有纯净4-溴-1-丁烯（90.2ml，0.889mol）的附加漏斗的2升3颈烧瓶中，添加Mg粉（32g，1.3mol）和干燥***（600ml）。补加2ml溴丁烯，用水浴将搅拌的混合物温热至30℃直至反应开始进行（约5分钟）。然后在1.5小时内将其余的溴丁烯加入，添加的速度以能保持温和回流为度。再将混合物加热回流30分钟，然后冷却至5℃。于15分钟内分批添加实例123（a）化合物（54.0g，0.175mol）的***（130ml）溶液，反应温度保持在12℃以下。于5℃剧烈搅拌1小时后，将所述混合物小心地倒入500ml冷（5-10℃）3N        HCl中。出现分层，水层用2×200ml ***萃取。用5% NaHCO3和盐水洗涤合并的有机层，MgSO4干燥，过滤，通过旋转蒸发进行浓缩，得到白色固体粗产物（49.4g，0.163mol，产率93%），其纯度足以保证用于下一步反应。用闪式色谱（二氧化硅，10%乙酸乙酯/己烷）对部分产物进行纯化，以便进行分析。
mp：74-75℃。
〔a〕D＝-36.8°（Cl，乙醇）
（5S）-4-氧代-5-（叔丁氧羰基）氨基-6-苯基己酸
c）于3℃将实例123（b）化合物（45.0g，0.148mol）与苯（550ml）、水（550ml）和乙酸（115ml）一同剧烈搅拌。添加溴化四丁基铵（490mg），接着添加KMnO4（83g）。将搅拌的混合物温热至室温。2.5小时后，补加KMnO4（14g）。再过30分钟后，将反应混合物冷却至5℃，添加500ml饱和KHSO4水溶液。搅拌30分钟，过滤。出现分层，用4×200ml乙酸乙酯萃取水层。用盐水洗涤合并的有机层，MgSO4干燥，过滤，浓缩至油状。在350ml己烷/乙酸乙酯（6∶1）中将上述油结晶，得到白色固体标题化合物（33.3g，70%）。
〔a〕D＝-36.1°
（5S）-4-氧代-5-（叔丁氧羰基）氨基-6-苯基己酸苄酯
d）于4℃在搅拌下向实例123（c）化合物（33.2g）的乙腈（500ml）溶液添加二氮杂双环十一烷（15.7g），接着添加苄基溴（26.0g）。搅拌此混合物并温热至室温，历时3小时。然后通过旋转蒸发浓缩至70ml。用CH2Cl2稀释该混合物，用1N NCl，5%NaHCO3和盐水洗涤，MgSO4干燥，浓缩为黄色固体。用***/己烷（3∶1）研制该固体，得到标题化合物（33.0g，78%）。
mp：86-87.5℃
〔a〕D＝-27.8°
（4S，5S）-4-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）-5-（叔丁氧羰基）氨基-6 -苯基己酸苄酯
e）将实例123（d）化合物（28.0g）的甲醇（840ml）溶液冷却至5℃，搅拌下一次性加入NaBH4（1.30g）。30分钟后，添加乙酸（10ml）。通过旋转蒸发对该混合物进行浓缩，然后用CH2Cl2稀释，水洗。干燥有机层（Na2SO4），浓缩，得到非对映异构体粗醇的白色固体（27.7g，99%）。将该粗醇与咪唑（17.7g）和叔丁基二甲基甲硅烷基氯（20.7g）一同溶于140ml DMF。混合物于室温静置3天，然后用500ml 1N冷HC稀释，用6×100ml CH2Cl2萃取。用3×100ml水洗涤合并的有机萃取液，干燥（Na2SO4），真空浓缩，同时温热至40℃，得一油状物（42g）。用HPLC制备色谱分四等份将上述两种异构体分离（2.5Kg（3in×1m）Vydac HS＝氧化硅，己烷/乙酸乙酯（90∶10），200毫升/分钟），得9.0g油状标题化合物。
HPLC：RT        9.18分（4S异构体），12.2分（4R异构体）（YMC二氧化硅A-003，4.6mm×25cm，UV探测于254nm，91∶9己烷∶乙酸乙酯，10毫升/分），（3R）∶（4S）＝3∶1。
〔a〕D＝-14.4°
（4S，5S）-4-（叔丁基二甲基甲硅烷氧基）-5-（叔丁氧羰基）氨基-6-苯基己酸
f）将实例123（e）的化合物（7.7g）溶于乙酸乙酯（150ml），同时添加5%载于碳上的Pd（0.75g），于25psi H2压下摇振4小时。将混合物通过Celite过滤，真空浓缩，得到无色玻璃状标题化合物（6.3g，98%）。
〔a〕D＝-24.7°
实例124
（5S）-苄氧羰基丙氨酰丙氨酰基-（5-氨基-6-苯基-反-3-己烯酰基）缬氨酰基缬氨酸酰氨的制备
将实例94的化合物溶于DMF，向其中添加2当量三乙胺和1.5当量N-（苄氧基羰氧基）琥珀酰亚胺。用HPLC监测反应物，通过HPLC用乙腈-水-0.1%三氟乙酸体系在Hamliton        PRP-1聚苯乙烯柱上直接从反应混合物提纯出所需产物。
实例125
（5S）-苄氧羰基丙氨酰丙氨酰基-（5-氨基-6-苯基-顺-3，4-二羟基己酰基）缬氨酰基缬氨酸酰氨的制备
将实例124的化合物与N-甲基吗啉N-氧化物（3当量）一同溶于THF。添加四氧化锇（0.04当量，2.5%叔丁醇溶液），令反应于室温进行。反应完成后，将反应混合物在乙酸乙酯和盐水之间进行分配，用乙酸乙酯回洗该盐水，用10%Na2SO3和1N NaHSO4洗涤合并的乙酸乙酯层，Na2SO4干燥，蒸发，得到一种顺式醇的非对映异构体混合物粗产物。通过HPLC制备色谱用乙腈-水-0.1%三氟乙酸体系在Hamilton PRP-1聚苯乙烯柱上将粗产物纯化。
实例126
（4S，5S）-丙氨酰丙氨酰基-（6-苯基-5-氨基-4-羟基己酰基）缬氨酰基缬氨酸
按常规方法制备被护肽基树脂（4S，5S）-Boc-Ala-Ala-（6-苯基-5-氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基己酰基）-Val-Val-Merrifield树脂。于0℃用10ml无水HF/1ml苯甲醚处理1小时，将肽从树脂上脱离并解除保护。真空除HF后，用醚洗涤树脂，风干，用2×50ml冰醋酸萃取，冻干，得到粗产物肽。在Sephadex        G-15柱上用10%乙酸水溶液作为洗脱液通过凝胶过滤将粗产物纯化。
实例127
（4S，5S）-苄氧羰基丙氨酰丙氨酰基-（6-苯基-5-氨基-4-羟基己酰基）缬氨酰基缬氨酸
将实例126的化合物溶于DMF，向其中添加2当量三乙胺和1.5当量 N-（苄氧基羰氧基）琥珀酰亚氨。用HPLC监测反应物，通过HPLC制备色谱用乙腈-水-0.1%三氟乙酸体系在Hamilton        PRP-1聚苯乙烯柱上从反应物直接提纯出产物。
实例128
（4S，5S）-苄氧羰基丙氨酰丙氨酰基-（6-苯基-5-氨基-4-羟基己酰基）缬氨酰缬氨酰基-（5-氨基戊基）酰氨的制备
单-Boc-1，5-二氨基戊烷
a）于0℃用二叔丁基碳酸氢酯（7.24g，33.2mmol）处理1，5-二氨基戊烷（14.0ml，120mmol）的CH2Cl2（70ml）溶液，于室温搅拌过夜，用75ml CHCl3稀释反应混合物，用5%碳酸钠水溶液洗涤，MgSO4干燥，蒸发。将剩余物溶于最少体积的1N HCl（10ml），用***洗涤。用2N NaOH将水层碱化至pH10，用乙酸乙酯萃取。合并萃取液，MgSO4干燥，蒸发，得1 所需产物。
NMR（CDCl3）：δ1.43（17H，br.s），2.53-2.83（2H，m），2.90-3.10（2H，m），4.80-5.10（1H，br.s）.
MS（CI）：m/z 237（M+Cl）-.
（4S，5S）-苄氧羰基丙氨酰丙氨酰基-（6-甲基-5-氨基-4-羟基己酰基）缬氨酰缬氨酰基-（5-氨基戊基）酰氨
b）将实例126的化合物与单-Boc-1，5-二氨基戊烷（3当量）、1-羟基苯并***（1.5当量）和二异丙基碳化二亚胺（1.5当量）一同溶于DMF。于室温搅拌下进行反应，用HPLC监测。反应完成后，将反应混合物蒸干，于0℃用三氟乙酸将剩余物处理30分钟。减压除去三氟乙酸，将剩余物溶于甲醇，通过反相HPLC色谱采用乙腈-水-0.1%三氟乙酸体系在Hamiton        PRP-1聚苯乙烯柱上进行纯化。
实例129
（4S，5S）-苄氧羰基丙氨酰丙氨酰基-（6-苯基-5-氨基-4-羟基己酰 基）缬氨酰缬氨酰基-（5-胍基戊基）酰氨的制备
将实例128的化合物溶于水中，用3N        NaOH将pH调至10。冷却到0℃后，添加用3N        NaOH将pH调至10的0-甲基异脲硫酸酯的水溶液。用HPLC监测反应，通过添加3N        NaOH将pH连续地调至10。反应完成后，添加1%乙酸将pH降至4.5，用反相HPLC色谱纯化产物（采用乙腈-水-0.1%三氟乙酸体系在Hamilton        PRP-1聚苯乙烯柱上进行）。
实例130
（4S，5S）-丙氨酰丙氨酰基-（6-苯基-5-氨基-4-羟基己酰基）缬氨酰基缬氨酸酰氨
按实例1的常规方法制备被护肽基树脂（4S，5S）-Boc-Ala-Ala-（6-苯基-5-氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基己酰基）-Val-Val-BHA。于0℃用10ml无水HF/1ml苯甲醚处理1小时，将肽从树脂上脱离并解除保护。真空除HF后，用***洗涤树脂，风干，用2×50ml冰醋酸萃取，冻干，得到粗产物肽。在Sephadex        G-15柱上以10%乙酸乙酯溶液为洗脱液进行凝胶过滤，从而将粗产物纯化。
实例131
（4S，5S）-丙氨酰基-（6-苯基-5-氨基-4-羟基己酰基）缬氨酰基缬氨酸酰氨的制备
按常规方法制备被护肽基树脂（4S，5S）-Boc-Ala-（6-苯基-5-氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基己酰基）-Val-Val-BHA。于0℃用10ml无水HF/1ml苯甲醚处理1小时，将肽从树脂上脱离并解除保护。真空除HF后，用***洗涤树脂，风干，用2×50ml冰醋酸萃取，冻干，得到粗产物肽。通过凝胶过滤将粗产物纯化（在Sephadex        G-15柱上进行，以10%乙酸水溶液为洗脱液）。
实例132
（4S，5S）-苄氧羰基丙氨酰丙氨酰基-（6-苯基-5（S）-氨基-4（S）-羟基己酰基）缬氨酰基缬氨酸酰氨的制备
将实例130的化合物溶于DMF，向其中添加1当量三乙胺和1.5当量N-（苄氧基羰氧基）琥珀酰亚胺。用HPLC监测反应，用HPLC制备色谱从反应混合物中直接提纯出产物（采用乙腈-水-0.1%三氟乙酸体系在Hamilton        PRP-1聚苯乙烯柱上进行）。
实例133
（4S，5S）-丙氨酰丙氨酰基-（6-苯基-5-氨基-4-羟基己酰）缬氨酸
按常规方法制备被护肽基树脂（4S，5S）-Boc-Ala-Ala-（6-苯基-5-氨基-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基己酰基）-Val-Merrifield树脂。于0℃用10ml无水HF/1ml苯甲醚处理1小时，将肽从树脂上脱离并解除保护。真空除HF后，用***洗涤树脂，风干，用2×50ml冰醋酸萃取，冻干，得到粗产物肽。通过凝胶过滤将粗产物纯化（在Sephadex        G-15柱上进行，以10%乙酸水溶液为洗脱液）。
实例134
（4S，5S）-苄氧羰基丙氨酰丙氨酰基-（6-苯基-5-氨基-4-羟基己酰基）缬氨酸的制备
将实例133的化合物溶于DMF，向其中添加2当量三乙胺和1.5当量N-（苄氧基羰氧基）琥珀酰亚胺。用HPLC监测反应，通过HPLC制备色谱从反应混合物中直接提纯出产物（在Hamilton        PTP-1聚苯乙烯柱上进行，采用乙腈-水-0.1%三氟乙酸体系）。
实例135
（4S，5S）-苄氧羰基丙氨酰丙氨酰基-（6-苯基-5-氨基-4-羟基己酰基）缬氨酰基-（1-氨基甲基-2-甲基）丙基酰氨
苄酯基-L-缬氨醇
a）将L-缬氨醇溶于含1当量NaOH的水中，在冰浴中冷却至5℃。分批交替添加氯甲酸苄酯（1.1当量）和4N        NaOH（1.2当量）。反应完成后， 用乙酸萃取反应混合物，合并萃取液，用Na        SO干燥，浓缩。用闪式色谱在硅胶柱上将粗产物纯化。
1-邻苯二甲酰基氨基-2-苄酯基氨基-3-甲基丁烷
b）将苄酯基-L-缬氨醇与三苯膦（1.1当量）和邻苯二甲酰亚胺（1.1当量）-同溶于THF，在冰-盐浴中冷却至-5℃。添加二异丙基叠氮基二羧酸酯（1.1当量），于-5℃搅拌1小时，温热至室温。于室温搅拌过夜后，将反应混合物蒸发，用闪式色谱纯化剩余物，得到所需化合物。
1-叔丁氧羰基氨基-2-苄酯基氨基-3-甲基丁烷
c）将1-邻苯二甲酰基氨基-2-苄酯基氨基-3-甲基丁烷溶于乙醇，于室温用水合肼（2当量）处理。当TLC显示反应已完成时，将反应混合物蒸发，将剩余物溶于DMF。添加二叔丁基碳酸氢酯（3当量）和三乙胺（3当量）。将反应混合物蒸发，剩余物用闪式色谱在硅胶柱上纯化，得到所需化合物。
（4S，5S）-苄氧羰基丙氨酰丙氨酰基-（6-苯基-5-氨基-4-羟基己酰）-缬氨酰基-（1-氨基甲基-2-甲基）丙基酰氨
d）将1-叔丁氧羰基氨基-2-苄酯基氨基-3-甲基丁烷溶于甲醇，在10%载于碳上的钯的存在下于40Psig氢化1小时。通过Celite滤垫将反应混合物过滤，蒸干，得到1-叔丁氧羰基-2-氨基-3-甲基丁烷。
（4S，5S）-苄氧羰基丙氨酰丙氨酰基-（6-苯基-5-氨基-4-羟基己酰基）-缬氨酰基-（1-氨基甲基-2-甲基）丙基酰氨
e）将实例134的化合物与1-叔丁氧羰基-2-氨基-3-甲基丁烷（3当量）、1-羟基苯并***（1.5当量）和二异丙基碳化二亚胺（1.5当量）一同溶于DMF，于室温搅拌下进行反应，用HPLC监测，当反应完成后，将反应物蒸干，于0℃用三氟乙酸处理剩余物30分钟。减压除去三氟乙酸，将剩余物溶于甲醇，用反相HPLC色谱提纯（采用乙腈-水-0.1三氟乙酸体系在Hamilton        PRP-1聚苯乙烯柱上进行）。
实例136
（2R，5S）-2-（苯基甲基）-5-叔丁氧羰基氨基-6-苯基-3-己烯酸的制备
2（S）-叔丁氧羰基氨基-3-苯基丙醇
a）将Boc-L-苯基丙氨酸溶于含三乙胺（1当量）的THF，冷却至-5℃。在15分钟内滴加溶于THF的氯甲酸乙酯（21当量），并于-5℃搅拌30分钟。过滤反应混合物，在30分钟内将其滴加到0℃的氢硼化钠（2.5当量）水溶液中。温热至室温，搅拌2小时。用1N HCl将反应混合物酸化，分离水层，用***洗涤。合并醚和THF层，用10% NaOH和水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，得到标题化合物。
（2S）-1-（甲基磺酰基）氧-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基丙烷
b）将实例136（a）的化合物溶于含三乙胺（1.5当量）的CH2Cl2，冷却至-10℃。在10分钟内向其中添加甲磺酰氯（1.1当量）。于-10℃搅拌10分钟后，用冰水、冷的10%HCl，饱和NaHCO3和盐水萃取反应混合物。用Na2SO4干燥有机层，浓缩，得到标题化合物。
（2S）-1-苯硫基-2-叔丁氧羰基氨基-3-苯基丙烷
c）将苯硫酚（4当量）溶于THF/甲醇混合物。添加甲醇钠（4当量），于室温搅拌15分钟。添加实例136（b）的化合物（1当量），将温度升至50℃，保持2.5小时。用10%NaOH稀释反应混合物，用CH2Cl2萃取，蒸发，得到标题化合物。
（2S）-1-（苯磺酰基）-2-叔丁氧羰基氨基-3-苄基丙烷
d）将实例136（c）的化合物溶于CH2Cl2，冷却至0℃，添加间氯过苯甲酸（3.5当量）。温热至室温，搅拌1小时。将反应混合物在CH2Cl2和饱和NaHSO3之间进行分配，用1N NaHCO3洗涤有机层，用Na2SO4干燥，蒸发，得到标题化合物。
（4R）-（2-氧代-4-（苯基甲基）-3-慀唑烷基）-5-甲基-3-戊烯酸酯
e）按实例93（b）的步骤制备标题化合物，不同之处是用4-甲基-3-戊烯酸代替单甲基反-3-己烯酸，用（R）-苄基慀唑烷酮代替（S）-苄基慀唑烷酮。
（2R，4R）-（2-氧代-4-（苯基甲基）-3-慀唑烷基）-2-（苯基甲基）-5-甲基-3-戊烯酸酯
f）按实例93（c）的方法用实例136（e）的化合物制备标题化合物。
（2R）-2-（苯基甲基）-5-甲基-3-戊烯-1-醇
g）将实例136（f）的化合物在THF中冷却至-78℃，用LiAlH4（1当量）处理。于-78℃搅拌30分钟后，在1小时内温热至0℃。30分钟后，将处于0℃的反应混合物再次冷却至-78℃，添加1ml乙酸乙酯。用饱和氯化铵水溶液于-78℃将反应淬灭。温热至室温，用水稀释。用***萃取，Na2SO4干燥萃取液，蒸发，得到标题化合物，用闪式色谱在硅胶柱上将其纯化。
（2R）-1-（四氢吡喃基）氧-2-（苯基甲基）-5-甲基-3-戊烯
h）将实例136（g）的化合物溶于CH2Cl2，添加二氢吡喃（1.5当量）和对甲苯磺酸吡啶（0.1当量），于室温搅拌4小时。用***稀释反应溶液，用盐水洗涤，Na2SO4干燥，蒸发，得到标题化合物。
（2S）-2-（苯基甲基）-3-四氢吡喃氧基丙醛。
i）将实例136（h）的化合物溶于CH2Cl2，冷却至-78℃，用臭氧处理直至产生持续的蓝色。用二甲硫淬灭该反应，温热至室温，蒸发浓缩，得到标题化合物，无需进一步纯化可直接使用。
（2R，5S）-1-（四氢吡喃基）氧代-2-（苯基甲基）-5-叔丁氧羰基氨基-6-苯基-3-己烯
j）将实例136（d）的砜在THF中的溶液冷却至-78℃，用甲基锂（2当量，1.6M***溶液）处理5分钟，于-78℃搅拌20分钟。在另一个烧瓶中，将实例136（i）的醛（2.75当量）在THF中冷却至-78℃，用溶于THF的甲醇二异丁基铝（2.25当量）（将等摩尔甲醇添加到1M氢化二异丁基铝THF溶液中而制成）处理。将该醛溶液通过套管转移到二价砜阴离子中，于-78℃搅拌30分钟。添加饱和氯化铵水溶液将反应淬灭，用***萃取产物，MgSO4干燥，减压浓缩。
将粗β-羟基砜溶于甲醇，冷却至0℃。添加磷酸氢二钠（4当量），接着添加汞齐（12当量）。于0℃搅拌4小时后，用水稀释，用CH2Cl2萃取，MgSO4干燥，浓缩。用闪式色谱在硅胶柱上纯化该粗产物，得到标题化合物。
（2R，5S）-2-（苯基甲基）-5-叔丁氧羰基氨基-6-苯基-3-己烯酸
k）将实例136（j）的化合物溶于丙酮，冷却至0℃，滴加Jones试剂（3当量）进行处理。搅拌3小时后，用水稀释反应混合物，用醚萃取。用5% NaOH洗涤上述醚萃取液，合并洗涤液，用10%HCl将其酸化至pH为2，用醚萃取。用Na2SO4干燥醚萃取液，蒸发，得到标题化合物。
实例137
（2R，5S）-丙氨酰丙氨酰基-（2-（苯基甲基）-5-氨基-6-苯基-反-3-己烯酰基）-缬氨酰缬氨酸酰氨的制备
按实例1的常规方法制备被护肽基树脂（2R，5S）-Boc-Ala-Ala-（2-（苯基甲基）-5-氨基-6-苄基-反-3-己烯酰基）-Val-Val-BHA。于0℃用10ml无水HF/1ml苯甲醚处理1小时，将肽从树脂上脱离。真空除HF后，用***洗涤树脂，风干，用2×50ml冰醋酸萃取，冻干，得到粗产物肽。通过凝胶过滤（在Sephadex        G-15柱上进行，以10%乙酸水溶液为洗脱液）将粗产物纯化，得到标题化合物。
实例138
（2R，5S）-苄氧羰基丙氨酰丙氨酰基-（2-（苯基甲基）-5-氨基-6-苯基-反-3-己烯酰基）-缬氨酰基缬氨酸酰氨的制备
将实例137的化合物溶于DMF，向其中添加2当量三乙胺和1.5当量N-（苄氧基羰氧基）琥珀酰亚胺。用HPLC监测反应，通过HPLC制备色谱从反应混合物中直接提纯出所需产物（采用乙腈-水-0.1%三氟乙酸体系，在Hamilton        PRP-1聚苯乙烯柱上进行）。
实例139
（6S）-6-（叔丁氧羰基）氨基-7-苯基-5-氧代庚酸的制备
按实例12的方法制备标题化合物，不同之处是用5-溴-1-戊烯代替-4-溴-1-丁烯。
按实例19，34，76，77，78，88和135所述方法，分别制备下列化合物：
a）（5S，6S）-6-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）-氨基-7-苯基-5-羟基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸甲酯;
b）（5S，6S）-6-（苄酯基丙氨酰基）氨基-7-苯基-5-羟基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸甲酯;
c）（5S，6S）-6-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-7-苯基-5-羟基-（1-氧代）庚基缬氨酰缬氨酸酰氨;
d）（5S，6S）-6-（苄酯基丙氨酰基）氨基-7-苯基-5-羟基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸酰氨;
e）（5S，6S）-6-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-7-苯基-5-羟基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨醇;
f）（5S，6S）-6-（苄酯基丙氨酰基）氨基-7-苯基-5-羟基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨醇;
g）（5S，6S）-6-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-7-苯基-5-羟基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨（（S）-1-氨基-3-甲基丁基-2-）酰氨;
h）（5S，6S）-6-（苄酯基丙氨酰基）氨基-7-苯基-5-羟基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨（（S）-1-氨基-3-甲基丁基-2-）酰氨。
实例140
按实例151的方法制备（2R，5S）-2-甲基-5-（叔丁氧羰基）氨基-6-苯基-4-氧代己酸，按实例19，34，76，77，78，88和135的方法，分别制备下列化合物：
a）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-甲基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸甲酯;
b）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-甲基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸酰氨;
c）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-甲基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸酰氨;
d）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-甲基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨醇;
e）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-甲基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨醇;
f）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-甲基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨（（S）-1-氨基-3-甲基丁基-2-）酰氨;
g）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-甲基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨（（S）-1-氨基-3-甲基丁基-2-）酰氨;
h）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-甲基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸;
i）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-甲基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸。
实例141
（2R，5S）-2-苄基-5-（叔丁氧羰基）氨基-6-苯基-4-氧代己酸的制备
按实例151的方法制备标题化合物，不同之处是用3-溴-2-苯基甲基-1-苄氧基丙烷代替3-溴-2-甲基-1-苄氧基丙烷。
按实例19，34，76，77，78，88和135的方法由（2R，5S）-2-苄基-5-（叔丁氧羰基）氨基-6-苯基-4-氧代己酸分别制备下列化合物：
a）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-苄基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸甲酯;
b）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-苄基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸甲酯;
c）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-苄基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸酰氨;
d）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-苄基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸酰氨;
e）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-苄基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨醇;
f）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-苄基-（1-氨代）庚基缬氨酰基缬氨醇;
g）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-苄基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨（（S）-1-氨基-3-甲基丁基-2-）酰氨;
h）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-苄基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨（（S）-1-氨基-3-甲基丁基-2-）酰氨;
i）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-苄基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸;
j）（2R，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-2-苄基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸。
实例142
（3RS，5S）-3-异丁基-5-（叔丁氧羰基）氨基-6-苯基-4-氧代己酸的制备
4-羟基-6-甲基-1-庚烯
a）于0℃向异丁醛（1.0g 11.6mmol）的无水THF（30ml）溶液添加溴化烯丙基镁（12.2mmol）。温热至室温，再搅拌2小时。倒入搅拌的5%HCl和***混合物中将反应淬灭。分离有机层，用水和盐水洗涤，MgSO4干燥。过滤，蒸出溶剂，得到标题化合物。
4-溴-6-甲基-1-庚烯
b）将实例142（a）的化合物（0.8g，0.625mmol）溶于CH2Cl2（25ml），用甲磺酰氯（0.72G，0.625mmol）和三乙胺（0.63g，0.625mmol）在二氯甲烷中处理。于室温搅拌3小时后，将反应物倒入5%冷HCl和***中。经过标准萃取处理得到粗甲磺酸酯。在干DMF中于120℃用过量的LiBr（3当量）处理该粗甲磺酸酯6小时。冷却，用水稀释。用戊烷进行萃取处理后，得到标题化合物，蒸馏纯化。
（3RS，5S）-3-异丁基-5-（叔丁氧羰基）氨基-6-苯基-4-氧代己酸
c）按实例12的方法制备标题化合物，不同之处是用4-溴-6-甲基-1-庚烯代替4-溴-1-丁烯。
按实例19，34，76，77和78的方法分别制备下列化合物：
a1）（3SR，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-3-异丁基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸甲酯;
b1）（3SR，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-3-异丁基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸甲酯;
c1）（3SR，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）、氨基-6-苯基-4-羟基-3-异丁基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酰氨;
d1）（3SR，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-3-异丁基-（1-氧代）庚基缬氨酰基结氨酰氨。
实例143
（3RS，5S）-3-甲基-5-（叔丁氧羰基）氨基-6-苯基-4-氧代己酸的制备
按实例142的方法制备标题化合物，不同之处是用乙醛代替异丁醛。
按实例19，34，76，77和78的方法分别制备下列化合物：
a）（3SR，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-3-甲基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸甲酯;
b）（3SR，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-3-甲基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸甲酯;
c）（3SR，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-3-甲基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酰基;
d）（3SR，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-3-甲基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酰氨。
实例144
（3RS，5S）-3-苄基-5-（叔丁氧羰基）氨基-6-苯基-4-氧代己酸
按实例142的方法制备标题化合物，不同之处是用苯乙醛代替异丁醛。
按实例19，34，76，77和78的方法制备下列化合物：
a）（3SR，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-3-苄基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸甲酯;
b）（3SR，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-3-苄基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸甲酯;
c）（3SR，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-3-苄基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酰氨;
d）（3SR，4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-6-苯基-4-羟基-3-苄基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酰氨。
实例145
（5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-5-苯基-4-氧代戊酸的制备
按实例12的方法制备标题化合物，不同之处是用Boc-苯基甘氨酸代替Bco-苯基丙氨酸。
按实例34，76，77和78的方法制备下列化合物：
a）（5S，4S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-5-苯基-4-羟基-（1-氧代）戊基缬氨酰基缬氨酸甲酯;
b）（5S，4S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-5-苯基-4-羟基-（1-氧代）戊基缬氨酰基缬氨酸甲酯。
实例146
（5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-7-苯基-4-氧代庚酸的制备
按实例12的方法制备标题化合物，不同之处是用Boc-高苯基丙氨酸代替苯基丙氨酸。
按实例34，76，77和78的方法制备下列化合物：
a）（4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-7-苯基-4-羟基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸甲酯;
b）（4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-7-苯基-4-羟基-（1-氧代）庚基缬氨酰基缬氨酸甲酯。
实例147
（5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基缬氨酸异丁基酰氨的制备
（5S）-5-（叔丁氧基）氨基-1，4-二氧代-6-苯基己基缬氨酸异丁基酰氨
a）于-40℃滴加氯甲酸异丁酯（1.0mmol）处理实例12（h）化合物（1.0mmol）和NMM（1.2mmol）的THF（5ml）溶液。15分钟后，添加L-缬氨酸异丁酰氨（1.2mmol）的DMF（2ml）溶液。温热至室温，搅拌过夜，然后将该混合物倒入4%HCl水溶液，用CHCl3萃取。依次用5%NaHCO3和水洗涤有机层，浓缩，得到标题化合物。
（5S）-5-（叔丁氧羰基）-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基缬氨酸异丁基酰氨
b）由混于甲醇中的NaBH4（1当量）还原实例147（a）的产物。添加稀HCl，用CHCl3萃取。分离出产物，用HPLC制备色谱以CH2Cl2/CH3OH为洗脱液进行纯化，得到标题化合物，及其羟基差向异构体。
（5S）-5-氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基缬氨酸异丁基酰氨
c）将实例147（b）的化合物溶于最少体积的纯TFA。5分钟后，加入甲醇，接着添加1当量浓HCl。真空除溶剂，得到标题化合物。
（5S）-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基缬氨酸异丁基酰氨
d）于-40℃滴加氯甲酸异丁酯（0.50mmol）处理Cbz-丙氨酸（0.50mmol）和NMM（0.60mmol）的THF（5ml）溶液。5分钟后，补加NMM（0.60mmol），接着添加实例147（c）化合物（0.60mmol）的DMF（2ml）溶液。将混合物温热至室温，搅拌过夜。添加5%HCl，用CHCl3萃取，分离出产物。
实例148
（5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基缬氨酸异丁基酰氨的制备
按实例147（d）的方法制备标题化合物，不同之是用Cb-丙氨酰丙氨酸90.50mmol）代替Cbz-丙氨酸。
实例149
5-（十四烷基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基缬氨酸异丁基 酰氨的制备
向实例147（c）产物（0.10mmol）的吡啶（2ml）溶液添加十四酸酐（0.12mmol）。12小时后，用10%HCl稀释该溶液，用乙酸乙酯萃取。用5%NaHCO3和H2O洗涤有机层，浓缩，得到标题化合物。
实例150
5-（硬脂基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基缬氨酸异丁基酰氨的制备
按实例149的方法制标题化合物，不同之处是用硬脂酸酐代替十四酸酐。
实例151
5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-4-羟基-2-甲基-1-氧代-6-苯基己基缬氨酰基缬氨酸甲酯的制备
5-（叔丁氧羰基）氨基-4-氧代-2-甲基-6-苯基-1-苄氧基己烷
a）按实例12（a）的方法制备标题化合物，不同之处是用3-溴-2-甲基-1-苄氧基丙烷（J.Med.Chem.30，374，（1987））代替4-溴-1-丁烯。
5-（叔丁氧羰基）氨基-4-氧代-2-甲基-1-羟基-6-苯基己烷
b）按实例86（b）的方法氢解实例151（a）的产物来制备标题化合物。
5-（叔丁氧羰基）氨基-4-氧代-2-甲基-6-苯基己酸
c）向实例151（b）的产物与苯/H2O/AcOH（5∶1∶1）的混合物添加（n-Bu）4NBr（0.01当量）。加入KMnO4（3.5当量），将该混合物搅拌2小时，然后添加饱和二硫化钠水溶液。若干分钟之后，用饱和KHSO4水溶液将该混合物酸化至pH1-2，然后用EtOAc萃取。浓缩有机层，用硅胶色谱（乙酸乙酯/己烷/HOAc）纯化剩余物，得到标题化合物。
5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基缬氨酰基结氨酸甲酯
d）按实例35（a）的方法将实例15（c）的化合物偶合到缬氨酰基缬氨酸甲酯上，不同之处是用实例151（c）的化合物5-（叔丁氧羰基）氨基-4-氧代-6-（4-苄氧基苯基）己酸。按实例84（b）的方法用NaBH还原上述酮。按实例35（c）的方法将氨基解除保护，并按实例72（a）的方法将其偶合到Cbz-丙氨酸，得到标题化合物。
实例152
7-甲基-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-3，4-二羟基-2-苯基甲基-1-氧代辛基缬氨酸异丁基酰氨的制备
7-甲基-4，5-O-（叔丁氧羰基）-N-异丙基-3-羟基-2-苯基甲基辛酸苄酯
a）向1.1mmol苄基-3-苯基丙酸锂（由二异丙基酰氨锂（1.1mmol）和苄基-3-苯基丙酸酯（1.1mmol）制备）的-78℃溶液添加2，2-二甲基-3-（叔丁氧羰基）-4-异丙基-5-甲酰基-1，3-噁唑烷（1.0mmol）（J.Med.Chem.30        976（1987））的THF（2ml）溶液。于-78℃搅拌1小时，温热至室温，用pH7的磷酸酯缓冲液稀释。用氯仿萃取该混合物，浓缩有机层，用闪式色谱提纯剩余物，得到作为异构体混合物的标题化合物。
7-甲基-5-（叔丁氧羰基）氨基-3，4-二氧异亚丙-2-苯基甲基辛酸苄酯
b）将实例152（a）产物（0.5mmol）的CH2Cl2（10ml）溶液与樟脑磺酸（0.1mmol）一同搅拌过夜。将过量固体NaHCO3与丙酮（10ml）一同加入，将混合物剧烈搅拌1小时，用Celite过滤。浓缩，用闪式色谱提纯，得到标题化合物。
7-甲基-5-（叔丁氧羰基）氨基-3，4-二氧异亚丙基-2-苯基甲基辛酸
c）在1大气压H2压下将实例152（b）产物（0.2mmol）的甲醇（5ml）溶液与10%载于炭上的Pd（20mg）一同搅拌8小时。用Celite过滤该混合物，浓缩，得到标题化合物。
7-甲基-5-（叔丁氧基氨基）-3，4-二氧异亚丙基-2-苯基甲基-1-氧代辛基缬氨酸异丁基酰氨
d）按实例87（a）的方法制备标题化合物，不同之处是用实例152（c）的产物代替5-（叔丁氧羰基）氨基-4-氧代-6-苯基己酸，并省略5%HCl洗涤步骤。
7-甲基-5-氨基-3，4-二羟基-2-苯基甲基-1-氧代辛基缬氨酸异丁基酰氨，氯化氢
按实例147（c）的方法由实例152（d）的化合物制备标题化合物。
7-甲基-5-（苄酯基丙氨酰基）氨基-3，4-二羟基-2-苯基甲基-1-氧代辛基缬氨酸异丁基酰氨
f）按实例147（d）的方法制备标题化合物，不同之处是采用实例152（e）的产物。
实例153
（4S，5S）-5-（丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-羟苯基）己基缬氨酰基缬氨醇的制备
（4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-苄氧基苯基）己基缬氨酰基缬氨酸
a）将实例72（a）的化合物（1mmol）溶于甲醇（10ml），滴加氢氧化钾（1.5mmol）水（2ml）溶液。用薄层色谱监测反应，直至酯水解反应完成。用5%HCl中和，减压蒸出甲醇，将剩余物溶于CHCl3。用5%HCl和水洗涤有机萃取液，MgSO4干燥。过滤和蒸出溶剂后得到标题化合物。
（4S，5S）-5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-苄氧基苯基）己基缬氨酰基缬氨醇
b）于氩气下将实例153（a）的化合物（0.5mmol）溶于CH2Cl2（5ml），冷却至0℃。滴加甲硼烷甲硫醚（0.55mmol）。于5℃搅拌5小时，于室温搅拌2小时。添加3ml甲醇，接着添加2ml乙酸，再于室温搅拌2小时。减压蒸出溶剂，将剩余物溶于CHCl3，依次用5%HCl、H2O和5%NaHCO3洗涤。用MgSO4干燥有机萃取液，过滤，蒸出溶剂，得到标题化合物。
（4S，5S）-5-（丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-羟苯基）己基缬氨酰基缬氨醇
c）向实例153（b）化合物（0.2mmol）的乙酸溶液添加10%载于活性炭的钯（150mg）。将氢气鼓泡通入该混合物60分钟，在氢存在下搅拌20小时。通过Celite过滤所得的悬浮液，减压蒸出溶剂，得到标题化合物。
实例154
4-甲基-3-〔5-（丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-羟苯基）己基缬氨酰基〕氨基-2-戊酮的制备
4-甲基-3-〔5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-苄氧基苯基）己基缬氨酰基〕氨基-2-戊酮
a）于0℃将实例153（a）的化合物（0.2mmol）溶于二氯甲烷（4ml），添加草酰氯（0.25mmol），然后加一滴DMF。于0℃搅拌5小时，于室温搅拌5小时后，将上述二氯甲烷溶液滴加到过量的重氮甲烷与Et2O和THF的混合物中。于10℃搅拌1小时后，添加乙酸直至不再有氮气逸出。蒸出溶剂，将剩余物溶于CHCl3，用水洗涤，MgSO4干燥。过滤及蒸掉溶剂后，得到标题化合物。
4-甲基-3-〔5-（丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-（4-羟苯基）己基缬氨酰基〕氨基-2-戊酮
b）向实例154（a）化合物（0.1mmol）的乙酸溶液添加10%载于炭上的钯（80mg）。将氢气鼓泡通入该混合物60分钟，于氢气下搅拌20小时。通过Celite将所得悬浮液过滤，减压蒸出溶剂，得到标题化合物。
实例155
Ac-Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2的制备
按实例1的方法制备标题化合物，不同之处是用Boc-Phe代替Boc-Tyr（BrZ）。
实例156
按实例58方法制备下列肽，不同之处是分别用Boc-His（Tos），Boc-Val，Boc-Ile，Boc-Lys（Clz），Boc-Ser（Bzl），Boc-D-Arg（Tos）或Boc-Met代替Boc-Ala：His-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2;
Val-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2;
Ile-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2;
Lys-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2;
D-Arg-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2
Ser-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2;
Met-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2;
实例157
按实例38的方法制备下列肽，不同之处是由Bco-Ala-BHA，Boc-Gly-BHA，Boc-Ile-BHA，Boc-Leu-BHA或Boc-Met-BHA用作开始顺序。
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Val-NH2;
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Gly-NH2;
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Ile-NH2;
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Leu-NH2;
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Val-Met-NH2;
实例158
按实例39的方法制备下列肽，不同之处是在肽的第二残基中用Boc-Ala，Boc-Gly，Boc-Ile，Boc-Arg（Tos），Boc-Leu或Boc-Met代替Boc-Val。
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ala-Val-NH2;
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Gly-Val-NH2;
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Ile-Val-NH2;
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Arg-Val-NH2;
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Leu-Val-NH2;
Ac-Ser-Gln-Asn-Tyr-Pro-Met-Val-NH2;
实例159
按实例40的方法制备下列肽，不同之处是在肽的第五残基中用Boc-His（Tos），Boc-Val，Boc-Ile，Boc-Leu，Boc-Thr（Bzl）或Boc-Gln代替Boc-Ala：
Ac-Ser-Ala-His-Tyr-Pro-Val-Val-NH2;
Ac-Ser-Ala-Val-Tyr-Pro-Val-Val-NH2;
Ac-Ser-Ala-Leu-Tyr-Pro-Val-Val-NH2;
Ac-Ser-Ala-Thr-Tyr-Pro-Val-Val-NH2;
Ac-Ser-Ala-Gln-Tyr-Pro-Val-Val-NH2;
实例160
（5S，4RS）-5-（叔丁氧羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基缬氨酰基缬氨酸
将实例34（d）的化合物（50mg，6.5×10-5mole）溶于甲醇（5ml），滴加含碳酸钾（27mg，1.95×10-5mole）的水（1ml）。于室温搅拌6小时后，用乙酸乙酯和水稀释反应混合物。用稀HCl将pH调至3.0，分离水层。用水（1X）洗涤有机层，MgSO4干燥。过滤及蒸出乙酸乙酯后，得到标题化合物。
实例161
（5S，4RS）-5-〔（叔丁氧羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基〕-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基缬氨酰缬氨酸二乙基酰氨的制备
于-40℃在氩气下将实例160的化合物（60mg，7.8×10-5mole）溶于无水THF（4ml），添加N-甲基吗啉（10.2mg，1.01×10-4mole），接着添加氯甲酸丁酯（11mg，7.8×10-5mole）。搅拌15分钟后，添加二乙胺（11mg，1.56×10-4mole）。于-40℃继续搅拌30分钟后，升至室温继续搅拌。用乙酸乙酯稀释，依次用5%HCl、5%碳酸氢钠和盐水洗涤。用MgSO4干燥有机萃取液，过滤，真空蒸发，得到标题化合物。
按同样的方法制备（5S，4RS）-5-〔（叔丁氧羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基〕-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基缬氨酰基缬氨酸丁基酰氨，不同之处是用正丁基胺代替二乙胺。
实例162
（5S，4RS）-5-〔（叔丁氧羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基〕-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基缬氨酸异丁基酰氨的制备
（5S，4RS）-5-〔（叔丁氧羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基〕-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基缬氨酸甲酯
a）按实例34的方法制备标题化合物，不同之处是用缬氨酸甲酯代替缬氨酰基缬氨酸甲酯。
（5S，4RS）-5-〔（叔丁氧羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基〕-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基缬氨酸
b）按实例160的方法制备标题化合物，不同之处是用实例162（a）的肽代替。
（5S，4RS）-5-〔（叔丁氧羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰基）氨基〕-4-羟基-1-氧代-6-苯基己基缬氨酸异丁基酰氨
c）按实例161的方法由实例162（b）的肽制备标题化合物，不同之处是用异丁基胺代替二乙胺。
实例163
脂质体剂量单位组合物
将卵磷脂（1.4g）和磷脂酰甘油（0.6g）溶于300ml        20%甲醇/氯仿，蒸干。将肽溶液（30mg溶于200ml磷酸盐缓冲的盐水中）加到干燥磷脂膜上，将其在室温平衡1-2小时。然后涡动生成的脂质体分散液，使其均匀混合。将所得的悬浮体通过0.2μ的聚碳酸酯筛挤出五次，以产生均匀的尺寸分布。如有必要，可将该悬浮体渗析或超离心分离，以便除去未被包裹的肽。
实例164
脂质体剂量单位组合物
在烧杯中，将胆甾醇（49mg）和油酸（0.358g）温热至65℃，保持20-30分钟。保持温度同时慢慢添加磷酯（1g），确保完全被油酸润湿。分批以等量添加40℃的精氨酸溶液（0.22g，溶于3.37g水中），充分混合为淤浆。于40℃继续搅拌。均化一周以后，将肽（150mg）充分混入上述凝胶中。如要需要，可用乙酸将pH调至7.0。分批等量加入磷酸盐缓冲的盐水（pH7.4），同时加以搅动，使浓度达到每毫升200mg脂质体凝胶。脂质体自然形成。此例中制备了5g脂质悬浮体。标准剂量单位为1g脂质悬浮体。
实例165
非肠胃剂量单位组合物
按以下方法制备含25mg本发明肽的制剂：
将25mg肽溶于15ml蒸馏水中。在无菌条件下将该溶液过滤到一个25ml多剂量安瓿中，冻干。添加20ml        5%葡萄糖水溶液（D5W）将所得粉末再组成适于静脉或肌肉注射的形式。因此，剂量是由注射体积确定的。此溶液还适用于其它给药方法，如添加到瓶或袋中用于Ⅳ滴注注入。
实例166
口服剂量单位组合物
将35mg肽与75mg乳糖和5mg硬脂酸镁相混合并研磨，制成口服胶囊。将所得粉末筛分，填充到硬明胶胶囊。
以上充分公开了如何实施和使用本发明。然而，本发明并不限于这些实例。在说明书和权利要求书所限定的范围和基础上，还可对本发明做出一些改进和变动。

Claims (19)

1、制备式Ⅰ化合物及其药物上可接受的盐的方法
A-B-(Q)a-(C)b-(D)c-M-(W)d-(X)e-Y-Z (Ⅰ)
式中A是BocNH，CbzNH，H，R′R″N，R″CONR′或DnsNH，或a，b和c等于0以及Y为共价键时，A是H，Boc，Cbz，R″或R″CO；
B是1个或多个D或L氨基酸，β-Ala，或是共价键：
C和D可相同，也可不同，它们是Glx，Asx，Ala，β-Ala，Arg，Gly，Ile，Leu，Lys，Ser，Thr，Val，Met或His；
Q是D或L氨基酸，表示Ser，Thr，Asp，His，Cys，Arg或Ala；
W是Pro或△3-脱氢-Pro；
X是Ala，Gly，Ile，Leu，Val，Met，Lys，Glx或Asx；
Y是1个或多个D或L氨基酸，或是共价键；
Z是CO2R″″，CONR′R″″，COR′，CH2OH，CH2NR′R″″或H，或d和e等于0，
Y为共价键时，Z是OR″″或NR′R″″；
a，b，c，d和e各为0或1，但c和e不能同为0；
M是Cha，Phe(4′Ra)或-NHCHR1R2-；
其中R1为C1-5Alk，(CH2)nSC1-5Alk，(CH2)nOC1-5Alk，(CH2)nC3-7环烷基或(CH2)mC6H4-Ra；
Ra是卤素，OR′，NO2，NH2或H；
R2是(CH2)n-，CHR3(CH2)mCO-，CO(CH2)mCO-，
CHR3CHR3′(CH2)mCO-，CHR3CHR3′CHR1(CH2)mCO-，
CHR3CHR1CHR′(CH2)mCO-，CHR3CHR′CHR1(CH2)mCO-，
COCR1CHR′(CH2)mCO-，COCF2CR′R″(CH2)mCO-,COCF2(CH2)mCO-，
CH=CR′CHR″(CH2)mCO-，COCH=CR′(CH2)mCO-，
CH2S(O)pCHR′(CH2)mCO-，CH2NR′CHR″(CH2)mCO-，
p=O(OR′)(CH2)mCO-，
Figure 891046992_IMG1
R3和R3′分别为OH，H或NH2；
R4是OH，H，NH2或=O；
m是0，1，2或3；
n是1或2；
p是0，1或2；
R′是H或C1-5Alk；
R″是H或C1-18Alk；
R″″是H，C1-5AlK，C3-6环烷基，(CH2)nC6H5，(CH2)nC5H4N，(CH2)nOH，(CH2)nNH2或(CH2)nNHC(NH)NH2；
该方法包括：(a)与适当的氨基酸残基偶合；(b)任意除去任何保护基团，
(c)任意修饰该肽的氨基末端或羧基末端。
2、按权利要求1的方法，其中B是选自Ala，Gly，Val，Ile，Leu，Met，His，Lys，Arg，Glx，Asx，Cys，Ser和Thr的1个或2个D或L氨基酸，或为共价键，Y是选自Ala，Gly，Ile，Leu，Met，Val，Arg，Lys，Thr，Ser，Cys，Glx和Asx，或为共价键。
3、制备权利要求1或2的化合物的方法，其中Q是选自Ser，Thr，Asp和His的D或L氨基酸，D选自Glx，Asx，Ser，Ala，β-Ala，Ile，Leu，Val和Met。
4、制备权利要求1至3之任一项化合物的方法，其中d等于O，M为-NHCHR1R2。
5、按权利要求1至4之任一项的化合物，其中R1是CH2C6H4-Ra，CH2C6H11或C1-5Alk，R2是
CHR3CHR3′（CH2）mCO-，CHR3CHR3′CHR1CO-，CHR3CHR1CHR′CO-，CHR3（CH2）mCO-，CO（CH2）mCO-，COCR1CHR′（CH2）mCO-CHR3CF2（CH2）mCO-，-COCF2（CH2）mCO-，-P＝O（OR′）（CH2）mCO-，
6、制备权利要求1至5之任一项化合物的方法，其中Y是选自Ala，Gly，Ile，Met，Asx，Arg和Val的1个氨基酸，或为共价键，C和D选自Gln，Asn和Ala。
7、制备权利要求1至6之任一项化合物的方法，其中R2是CH（OH）CH2CH2CO-。
8、制备权利要求1至7之任一项化合物的方法，其中B是共价键，a等于0。
9、制备权利要求8的化合物的方法，其中b等于0。
10、制备权利要求9的化合物的方法，其中c或e等于0。
11、按权利要求1的化合物及其在药物上可接受的盐，其中的化合物有：
2-（乙酰-丝氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰）氨基-3-苯丙基-脯氨酰缬氨酰缬氨酰胺;
2-（丝氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰）氨基-3-苯丙基-脯氨酰缬氨酰缬氨酰胺;
4-（乙酰-丝氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰）氨基-3-羟基-1-氧-5-苯戊基脯氨酰缬氨酰缬氨酰胺;
4-（乙酰-丝氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰）氨基-3-羟基-1-氧-5-苯戊基缬氨酰缬氨酰胺;
4-（丝氨酰谷氨酰胺酰天冬酰胺酰）氨基-3（S）-羟基-1-氧-5-苯基戊基缬氨酰缬氨酰胺;
5-（苄酯基-丙氨酰丙氨酰）氨基-6-苯基-4-羟基-（1-氧）己基-缬氨酰缬氨醇;
苄酯基-丙氨酰-（3-羟基-5-氨基-6-苯基）己酰-缬氨酰-（4-氨甲基）吡啶;或
5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-6-苯基-（1-氧）己基-缬氨酸异丁基酰胺。
12、按权利要求1的化合物及其在药物上可接受的盐，其中化合物有：
2-（（2-叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-氧-3-苯丙基）环戊基羰基缬氨酸甲酯;
2-（2-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-氧-3-苯丙基）环戊羰基缬氨酰缬氨酸甲酯;
2-（2-叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-1-羟基-3-苯丙基）环戊基羰基缬氨酸缬氨酸甲酯;
2-（1-羟基-3-苯基-2-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨丙基）环戊基羰基缬氨酰缬氨酸甲酯;
2-（（1-甲氧基-1-（2-苯基-1-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基）乙基）氧膦基）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
2-（（1-羟基-1-（2-苯基-1-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基）乙基）氧膦酰）环戊基羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
5-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
5-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟基-苯基）己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
4-（叔丁氧羰基-丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-2，2-二氟-3-羟基-1-氧-5-苯戊基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
4-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-2，2-二氟-3-羟基-1-氧-5-苯戊基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
4-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-2，2-二氟-1，3-二氧-5-苯戊基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
5-（叔丁氧羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-6-（4-羟基）苯基-1-氧-己基-缬氨酰胺;
5-（（苄酯基-D-丝氨酰）丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
5-（（D-丝氨酰）丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
5-（叔丁氧羰基丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-6-（4-羟基）苯基-4-羟基-1-氧-己基-缬氨酰缬氨酸;
5-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-6-（4-羟基）苯基-4-羟基-1-氧-己基-缬氨酰缬氨酸;
2-（1-羟基-2-（丝氨酰丙氨酰丙氨酰）氨基-3-环己基）-丙基）环戊烷羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）5-（苄氧羰基丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）5-（丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）5-（叔丁氧羰基丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）-5-丙氨酰氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）5-（丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）5-〔（苄酯基-β-丙氨酰）丙氨酰〕氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）5-〔（β-丙氨酰）丙氨酰〕氨基-4-羟基-1-氧-6-（4-羟苯基）己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）5-（丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-环己基-己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）5-（苄酯基丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）5-（丙氨酰丙氨酰）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4RS，5S）5-氨基-6-（4-羟基）苯基-4-羟基-1-氧-己基-缬氨酰缬氨酸苄酯;
（1R，2R）-2-（（（1S，2S）-1-羟基-2-氨基-3-环己基）-丙基）环戊烷羰基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）5-氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）-5-（叔丁氧羰基）氨基-4-羟基-1-氧-6-苯己基-缬氨酰缬氨酸甲酯;
（4S，5S）5-（甲氧羰基-丙氨酰丙氨酰）氨基-6-苯基-4-羟基-（1-氧）己基-缬氨酰缬氨酸;或
（4RS，5S）5-（（叔丁氧羰基）异亮氨酰）氨基-7-甲基-4-羟基-1-氧-辛基-亮氨酰-天冬氨酸甲酯;或其羧酰胺。
13、权利要求4至11之任一项化合物在制造治疗病毒病药物中的应用。
14、制备药物组合物的方法，该组合物含有权利要求4至11之任一项化合物和药物上可接受的载体。
15、药物组合物，含有权利要求4至11之任一项化合物、叠氮胸苷和物上可接受的载体。
16、制备下式化合物的方法：
式中R1是C1-5Alk，-（CH2）nSC1-5Alk，-（CH2）nOC1-5Alk，-（CH2）nC3-7环
烷基或-（CH2）mC6H4-Ra;
Ra是卤素，NO2，OH，OC1-5Alk.NH2或H;
R5是H;
R6是CH3CO，C1-5Alk，Dns，Cbz或Boc，或R5和R6一起为苯二酰亚氨基;
m等于0，1，2或3;
n等于0或1;
-表示单键或双键;
X是H，卤素，OH，OC1-5Alk，NHR′R″或OCOC1-5Alk;
R′和R″是H或C1-5Alk，
该方法包括：
a）下式化合物在还原条件下与脯氨酸、△3-Pro或2-羟基哌啶的酯反应，
Figure 891046992_IMG4
然后可任意进行以下反应步骤：
b）将酯转化为羧酸、酯或酰胺;
c）将酸转化为酯、酰胺、酐或酰基卤。
17、制备下式化合物的方法：
式中R1是C1-5Alk，-（CH2）nOC1-5Alk，-（CH2）nC3-7环烷基或
-（CH2）mC6H4-Ra;
R4是OH，NH2，H或＝O;
Ra是卤素，NO2，OH，OC1-5Alk，NH2或H;
m等于0，1，2或3;
n等于0或1;
R5是H;
R6是CH3CO，C1-5Alk，Dns，Cbz或Boc，或R5和R6一起为苯二酰亚氨基;
X是H，卤素，OH，OC1-5Alk，NHR′R″或OCOC1-5Alk;
R′和R″是H或C1-5Alk;
该方法包括：
a）将R0为OH或＝0的下式化合物氧化为酮羧酸：
然后依次进行下列反应步骤：
b）将酮基进行任意还原或将其还原性胺化;
c）任意将羧酸转化为酯、酰胺、醛、酐或酰基卤。
18、制备下式化合物的方法：
式中R1是C1-5Alk，-（CH2）nOC1-5Alk，-（CH2）nC3-7环烷基或-（CH2）mC6H4-Ra;
R1′是H，C1-5Alk，-（CH2）nOC1-5Alk，-（CH2）nC3-7环烷基或-（CH2）mC6H4-Ra;
R4是OH，NH，H或＝0;
Ra是卤素，NO2，OH，OC1-5Alk，NH2或H;
m等于0，1，2或3;
n等于0或1;
R5是H;
R6是CH3CO，C1-5Alk，Dns，Cbz或Boc，或R5和R6一起为苯二酰亚氨基;
X是H，卤素，OH，OC1-5Alk，NHR′R″或OCOC1-5Alk;
R′和R″是H或C1-5Alk，但是R1不能是异丁基;
该方法包括：
a）将R0为OH或＝0的下式化合物氧化为羧酸：
然后依次进行下列反应步骤：
b）任意将酮基进行还原或将其还原性胺化;
c）任意将羧酸转化为酯、酰胺、醛、酐或酰基卤。
19、按权利要求18的方法，其中R1′是H，R1是CH2C6H4-Ra和R4是OH或＝0。
20、制备下式化合物的方法：
式中R1是C1-5Alk，-（CH2）nOC1-5Alk，-（CH2）nC3-7环烷基或
-（CH2）mC6H4-Ra;
Ra是卤素，NO2，OH，OC1-5Alk，NH2或H;
m等于0，1，2或3;
n等于0或1;
R6是CH3CO，C1-5Alk，Dns，Cbz或Boc，或R5和R6一起为苯二酰亚氨基;
X是H，卤素，OH，OC1-5Alk，NHR′R″或OCOC1-5Alk;
R′和R″是H或C1-5Alk;
该方法包括：
a）将下式化合物氧化为羧酸：
然后进行下列反应步骤：
b）任意将次膦酸烷基酯水解为次膦酸;
c）任意将羧酸转化为酯、酰胺、醛、酐或酰基卤。
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