CN103947584B - 一种鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法 - Google Patents
一种鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法,是将杜瓦罐内盛装有冻精的胶囊从液氮中取出,放入水浴锅中,保持水浴锅中水的温度为28℃,时间40‑42秒,然后取出装有解冻***的胶囊,将胶囊中的解冻***倒入盛精瓶内,即可对鲟鱼母本进行体外授精。本发明采取恒定水浴的方式对鲟鱼冻精进行解冻,让解冻的***适用适宜的使用环境,能够有效提高冻精的生存活力。解冻后***的活力接近鲜精,用其授精于鲜卵,其鲜卵受精率可达80‑90%,且胚胎发育良好,降低了产业化应用的生产成本,提高了冻精保存的使用价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种鱼类杂交育种的深低温融冻技术,特别是一种鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法。
背景技术
保全生物遗传多样性及杂交育种的应用,在水产养殖中选择—170℃以下深低温冻存***进行鱼类的繁衍,是生物技术创新应用的发展趋势。但目前,深低温保存鱼类***也只是高度发达国家用于实验室的方法,实际应用范围却非常有限,其主要原因,是由于许多种鱼类***在冷冻和解冻过程中会发生重大损害。损害的程度取决于冷冻速率、冷冻保护液以及融冻方法。
不少学者提出,在深低温保存冻精的过程中若能实现玻璃化,将更有利于生物遗传多样性保全和杂交育种的研究及应用,利于珍稀动物的保存。运用玻璃化冷冻的方法,如果能成功地实现低温保存遗传物质,将造福于人类。
现有的***冷冻保护方法—缓慢冷冻方法容易形成冰晶,会导致形成胞外冰与胞内冰而损伤细胞,加之冻融过程中的晶化再结晶,影响其成活率,使得这一生物冻存技术成本昂贵,应用效率极低。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足,而提供一种鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法。
本发明的技术方案是:一种鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法,将盛装有冻精的胶囊从杜瓦罐内的液氮中取出,放入水浴锅中,保持水浴锅中水的温度为28℃-36℃,时间40-50秒,然后取出装有解冻***的胶囊,将胶囊中的解冻***倒入盛精瓶内,即可对鲟鱼母本进行体外授精。
本发明再进一步的技术方案是: 解冻的鲟鱼冻精是采用如下方法冷冻的:将需冻存的鲟鱼***与抗冻保护液按体积份100:90—110的比例均匀稀释后,加入8-10体积份的鲜鸡蛋黄、46-48体积份的花生四烯酸、 6-8体积份的脂质,混匀后用冷冻胶囊盛装,置于抽屉式冷冻室中冷冻,冻速为-58至-68℃/min,冷冻到-56至-70℃后,再将盛有冻精的胶囊卸载在盛有液氮的杜瓦罐内,控制冻速为-148至-152℃/min,冷冻到-190至-196℃后冻存。
本发明再进一步的技术方案是: 抗冻保护液的制备方法是:按照配比将10%的二甲基酚加入到医用生理盐水中混和均匀,再加入甘露糖醇,混和均匀即可;抗冻保护液的重量配比为:医用生理盐水:10%的二甲基酚:甘露糖醇=100:8-10:6-8。
本发明由于采用如上方法,与现有技术相比,具有如下优点:
1、采取恒定水浴的方式对鲟鱼冻精进行解冻,让解冻的***适用适宜的使用环境。解冻后的***活力接近鲜精,授精于鲜卵,其鲜卵受精率可达80-90%。且胚胎发育良好,降低了产业化应用的生产成本,提高了冻精保存的使用价值。
2、由于解冻的鲟鱼冻精是采用快速降温的方法冷冻,用抗冻保护液作为防冻剂,使冰相变化时有效地改变冰微粒的面积,极大地改变了***冻存过程中形成的冰状形态,既削弱和抑制冻精冰粒的产生,又更有效地减小冰微粒在水介质中的可溶性,避免了结晶和重结晶,避免了冻精形成胞内冰与胞外冰的伤害,有效提高了冻精的生存活力。
具体实施方式
以下结合具体实施方式对本发明的详细结构作进一步描述。
实施例1:
一种鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法,是将杜瓦罐内盛装有冻精的胶囊从液氮中取出,放入水浴锅中,保持水浴锅中水的温度为34-36℃,时间40-42秒,然后取出胶囊,将胶囊中的解冻***倒入盛精瓶内,即可对鲟鱼母本进行体外授精。
实施例2:
一种鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法,是将杜瓦罐内盛装有冻精的胶囊从液氮中取出,放入水浴锅中,保持水浴锅中水的温度为32-34℃,时间42-45秒,然后取出胶囊,将胶囊中的解冻***倒入盛精瓶内,即可对鲟鱼母本进行体外授精。
实施例3:
一种鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法,是将杜瓦罐内盛装有冻精的胶囊从液氮中取出,放入水浴锅中,保持水浴锅中水的温度为30-32℃,时间45-48秒;然后取出胶囊,将胶囊中的解冻***倒入盛精瓶内,即可对鲟鱼母本进行体外授精。
实施例4:
一种鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法,是将杜瓦罐内盛装有冻精的胶囊从液氮中取出,放入水浴锅中,保持水浴锅中水的温度为28-30℃,时间48-50秒;然后取出胶囊。将胶囊中的解冻***倒入盛精瓶内,即可对鲟鱼母本进行体外授精。
Claims (6)
1.一种鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法,其特征是将盛装有冻精的胶囊从杜瓦罐内的液氮中取出,放入水浴锅中,保持水浴锅中水的温度为28℃-36℃,时间40-50秒,然后取出装有解冻***的胶囊,将胶囊中的解冻***倒入盛精瓶内,即可对鲟鱼母本进行体外授精;融冻的鲟鱼***是采用如下方法冷冻的:将需冻存的鲟鱼***与抗冻保护液按体积份100:90—110的比例均匀稀释后,加入8-10体积份的鲜鸡蛋黄、46-48体积份的花生四烯酸、6-8体积份的脂质,混匀成***混合液,用冷冻胶囊盛装,置于抽屉式冷冻室中冷冻,冻速为-58至-68℃/min,冷冻到-56至-70℃后,再将盛装有***混合液的胶囊卸载在盛有液氮的杜瓦罐内,控制冻速为-148至-152℃/min,冷冻到-190至-196℃后冻存。
2.根据权利要求1所述的鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法,其特征是抗冻保护液的制备方法是:按照配比将10%的二甲基酚加入到医用生理盐水中混和均匀,再加入甘露糖醇,混和均匀即可;抗冻保护液的重量配比为:医用生理盐水:10%的二甲基酚:甘露糖醇=100:8-10:6-8。
3.根据权利要求1所述的鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法,其特征是将杜瓦罐内盛装有冻精的胶囊从液氮中取出,放入水浴锅中,保持水浴锅中水的温度为34-36℃,时间40-42秒,然后取出装有解冻***的胶囊,将胶囊中的解冻***倒入盛精瓶内,即可对鲟鱼母本进行体外授精。
4.根据权利要求1所述的鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法,其特征是:将杜瓦罐内盛装有冻精的胶囊从液氮中取出,放入水浴锅中,保持水浴锅中水的温度为32-34℃,时间42-45秒,然后取出装有解冻***的胶囊,将胶囊中的解冻***倒入盛精瓶内,即可对鲟鱼母本进行体外授精。
5.根据权利要求1所述的鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法,其特征是:将杜瓦罐内盛装有冻精的胶囊从液氮中取出,放入水浴锅中,保持水浴锅中水的温度为30-32℃,时间45-48秒,然后取出装有解冻***的胶囊,将胶囊中的解冻***倒入盛精瓶内,即可对鲟鱼母本进行体外授精。
6.根据权利要求1所述的鲟鱼玻璃化冻精的解冻方法,其特征是:将杜瓦罐内盛装有冻精的胶囊从液氮中取出,放入水浴锅中,保持水浴锅中水的温度为28-30℃,时间48-50秒,然后取出装有解冻***的胶囊,将胶囊中的解冻***倒入盛精瓶内,即可对鲟鱼母本进行体外授精。
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