CN103918657B - 一种防治苹果病害的杀菌组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种与环境兼容性好，高效、低毒、低残留、由抑霉唑和井冈霉素组成的复配杀菌剂，尤其用于防治苹果轮纹病和褐斑病的应用研究。复配组合物中抑霉唑和井冈霉素两种成分的相加作用比例为6:1、3:1、1.5:1、1:1、1:6及1:12，增效比例为1:1.5和1:3，最佳比例为1:1.5，它在应用防治苹果轮纹病和褐斑病方面表现突出。

Description

一种防治苹果病害的杀菌组合物及其应用

技术领域

本发明涉及的是一种生物源杀菌剂，尤其是井冈霉素和抑霉唑复配后作为杀菌剂应用于防治苹果轮纹病和褐斑病，属于复配杀菌组合物技术领域。

背景技术

苹果轮纹病是苹果园中发生广、发生重的病害，可造成大量烂果。轮纹病从8月开始发生，至采收前持续增加。烂果率一般在20～50％，重者可达70～90％，直接影响果农经济收入。苹果褐斑病主要为害叶片，也能侵染果实、叶柄，能够导致早期落叶。一般田间5～6月开始发病。冬季温度潮湿，春雨早、雨量大，夏季阴雨连绵的年份，常发病早且重，多雨是该病流行的主要条件。危害严重年份，常造成苹果树早期大量落叶，削弱树势，对花芽形成和果品产量、质量都有明显影响。

长期以来，施用化学杀菌剂是防治作物病害的主要手段，大量化学农药的施用致使农田生态结构的破坏、防治对象的抗药性、农药残留等诸多副作用，这对农作物产业冲击尤为突出。公众对食品安全的密切关注，全球保护环境的日益渐高的呼声，要求科研人员寻找有效并安全的防治方法，因此开发和利用低毒、无害的农药资源日益受到各国的青睐。

生物源农药亦称“生物农药”，是指利用生物资源开发的农药，其有效成分是自然存在的，具有低毒、无污染、专一性强、易于降解、在生态环境中积累毒性可能性小、具有环境相容性等特性。对需求不断增长的有机食品、绿色食品具有保证作用，避免或减轻了应用化学农药造成的负面影响，且具有使病原菌难以产生抗药性等优点，是理想的农药类型。井冈霉素是由吸水链霉菌井冈变种生产的水溶性抗生素，具有较强的内吸性，易被菌体细胞吸收并在其内迅速传导，干扰和抑制菌体细胞生长和发育。井冈霉素能够被多种微生物分解，属高效、低毒杀菌剂。

抑霉唑是一种内吸性广谱杀菌剂，对侵袭水果、蔬菜和观赏植物的许多真菌病害都有防效，尤其对果蔬中常见的青霉病、绿霉病防效极佳，已被农业部推荐为绿色农业优先使用的杀菌剂之一。其作用机理是通过影响细胞膜的渗透性、生理功能和脂类合成代谢，从而破坏病菌的细胞膜，同时抑制病菌孢子的形成。

抑霉唑对于苹果轮纹病有较好的防治效果，但对苹果褐斑病的防治效果不显著，而井冈霉素对苹果褐斑病的防效较好但对轮纹病无明显防治效果。为了更好地防治苹果轮纹病和褐斑病，减少化学农药的使用，我们将生物源农药井冈霉素与化学农药抑霉唑复配，通过室内毒力测定和田间试验，确立了两种药剂的最优配比，供生产使用，以达到减少农药环境污染、控制病菌抗药性发生发展的目的。

发明内容

本发明是在探讨了抑霉唑及其复配组合物在农业领域中的应用，尤其是针对苹果轮纹病和褐斑病防治研究而完成的，旨在提供一种防治苹果轮纹病和褐斑病的抑霉唑和井冈霉素单剂及其复配组合物。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种防治苹果病害的杀菌组合物，特殊之处在于，其有效成分抑霉唑和井冈霉素的重量配比为12：1～1：12；

一种防治苹果病害的杀菌组合物，进一步的改进在于，其有效成分抑霉唑和井冈霉素的增效重量配比为1:1.5～3；

一种防治苹果病害的杀菌组合物，更进一步的改进在于，其有效成分抑霉唑和井冈霉素的最佳比例为1:1.5。

一种防治苹果病害的杀菌组合物，其有效成分抑霉唑和井冈霉素在整个复配组合物中的重量百分含量分别为4%和6%，余量为常规辅料添加物。

抑霉唑对苹果轮纹病具有很好的防治效果，井冈霉素对苹果褐斑病有很好的防治效果，本发明的一种抑霉唑和井冈霉素复配杀菌组合物应用于防治苹果轮纹病和苹果褐斑病。

本发明一种防治苹果病害的杀菌组合物在稀释800-1000倍下应用防治苹果轮纹病和苹果褐斑病具有较好的防效。

本发明抑霉唑和井冈霉素复配组合物具有以下优点：

1、具有增效作用。在室内对苹果轮纹病菌的防效实验中，抑霉唑和井冈霉素两者以1:1.5和1:3的配比均表现出增效作用，其中以1:1.5的配比增效最大，增效系数为1.67。

2、减少农药用量并且防效显著。我们制成10％抑霉唑·井冈霉素复配物在田间防治苹果轮纹病和褐斑病的药效试验中表现突出。具体表现为：10%复配物稀释800倍、1000倍两处理对苹果轮纹病的田间防效均在85％以上，其中800倍处理防效显著高于单剂10％抑霉唑水乳剂1000倍处理，1000倍处理与之防效相当；复配物稀释800、1000及1200倍对苹果褐斑病的防效均在85%以上，其中800倍明显优于对照单剂10%井冈霉素1000倍，1000和1200倍防效与之相当。这说明复配药剂10％抑霉唑·井冈霉素在药剂使用量减少的情况下仍然对防治苹果轮纹病和褐斑病有很好的防效。

3、高安全性。抑霉唑对人畜毒性低，井冈霉素是微生物源农药，无药害，对环境安全。我们制得的复配组合物对作物、环境和鲜果食用者更为安全。

4、降低了病菌产生抗药性风险。如优点2所述，复配组合物抑霉唑和井冈霉素的含量都比市场销售的药剂单剂少，在田间防治病害时用药量也减少，这大幅减轻了苹果轮纹病菌和褐斑病对药剂的选择压力，另外，抑霉唑和井冈霉素对病菌的作用方式不同，复配后更不易使病菌产生抗药性。

具体实施方式

本发明用以下具体实例进行详细说明，但绝非对本发明的限制。所有配比中百分比均为重量百分比。

实施例1

室内毒力测定与复配比例筛选

1.1实验药剂

98%抑霉唑原药，以色列马克西姆化学公司产品；

60%井冈霉素原药，浙江钱江生物化学股份有限公司产品。

1.2供试菌株

试验靶标为苹果轮纹病（Botryosphaeria dothidea）病菌菌株样本自田间病果上分离获得，单孢培养纯化得到的第一代菌株，4℃冰箱内保存备用。

1.3仪器设备

仪器设备主要有电子天平、超净工作台、生物培养箱、培养皿、移液器等。

1.4实验方法

采用FAO推荐的菌体生长速率法（Mycelium growth rate test）。

1.4.1药剂复配

表1抑霉唑和井冈霉素复配比例

表2复配药剂稀释浓度梯度

1.4.2含药平板的制备

按照1.4.1设定的药剂浓度梯度，将药剂加入定量溶化的PDA培养基中，制成含药平板，以不含药平板为空白对照，每浓度重复3次。

1.4.3接菌培养

用直径0.6㎝打孔器沿培养好的菌落边缘打取菌盘，用消毒接种针将菌盘反转移植到平板上，置于25℃条件下恒温培养6天。

1.4.4结果调查

以直尺交叉测量法测量菌落扩展直径，与不施药对照菌盘扩展直径相比，计算出药剂对菌丝生长的抑制率。

1.5统计分析

根据各药剂浓度对数值及对应的菌丝生长抑制率几率值作回归分析，计算各药剂毒力回归方程、相关系数（r）和EC₅₀。

进行药剂联合毒力测定时，根据Wadley法计算复配组合物的增效系数（SR），评价复配组合物的联合作用类型。根据增效系数（SR）来评价药剂复配的增效作用，即SR<0.5为拮抗作用，0.5≤SR≤1.5为相加作用，SR>1.5为增效作用。增效系数（SR）按式（1）、（2）计算：

$X_1=\frac{P_A+P_B}{P_A/A+P_B/B}\&times;100---\left(1\right)$

式中：

X₁----复配组合物EC₅₀理论值，单位为mg/L；

P_A----复配组合物中A的百分含量，单位为百分率（％）；

P_B----复配组合物中B的百分含量，单位为百分率（％）；

A----A的EC₅₀值，单位为mg/L；

B----B的EC₅₀值，单位为mg/L。

$\mathrm{SR}=\frac{X_1}{X_2}\&times;100---\left(2\right)$

式中：

SR----复配组合物的增效系数；

X₁----复配组合物EC₅₀理论值，单位为mg/L；

X₂----复配组合物EC₅₀实测值，单位为mg/L。

1.6结果分析

通过室内毒力实验，可得出抑霉唑和井冈霉素重量比12:1具有减效作用，6:1、3:1、1.5:1、1:1、1:6及1:12具有相加作用，1:1.5、1:3具有增效作用，1:1.5为最佳复配比例。

表3抑霉唑和井冈霉素最佳复配比例筛选

实施例2

田间小区试验

根据室内复配比例筛选实验筛选出抑霉唑:井冈霉素=1:1.5为最佳配比，我们配制了10%的抑霉唑·井冈霉素复配物。

2.1复配药剂防治苹果轮纹病田间试验

按照农业部农药检定所主编的“《农药田间药效试验准则（二）》第118部分：杀菌剂防治苹果轮纹病”设计10%抑霉唑·井冈霉素对苹果轮纹病的田间药效试验。

2.1.1供试药剂

10%抑霉唑水乳剂1000倍，陕西美邦农药有限公司产品；

10%井冈霉素水溶粉剂1000倍，浙江省桐庐汇丰生物科技有限公司产品；

10%抑霉唑·井冈霉素800倍、1000倍、1200倍，烟台农科院配制。

2.1.2对照药剂

70%甲基硫菌灵可湿性粉剂1000倍，日本曹达株式会社产品。

2.1.3小区设计

试验共设7个处理，每处理4个重复，共设28个小区，每小区4棵成株树。各小区随机排列。施药器械采用工农26型高压机动喷雾器，以树冠内全部枝梢叶片均匀着药，滴水为止。

2.1.4调查时间与方法

采收期每小区选中央2株，调查全部果实，记录总果数、病果数，以病果率计算防效。

2.1.5药效计算方法

2.1.6试验结果

在室内筛选的基础上制成的10％抑霉唑·井冈霉素在田间防治苹果轮纹病试验中表现突出，800倍、1000倍防效均在85％以上，其中800倍处理显著高于10％抑霉唑水乳剂1000倍和10％井冈霉素水溶粉剂1000倍，1000倍处理与10%抑霉唑水乳剂单剂防效相当（详细数据见表4）。

表410%抑霉唑·井冈霉素防治苹果轮纹病田间药效

处理	病果率（%）	防效（%）	差异显著性（5%）
				10%抑霉唑水乳剂1000倍	3.55	89.25	b
10%井冈霉素水溶粉剂1000倍	12.61	62.57	d
				10%抑霉唑·井冈霉素800倍	2.31	93.14	a
10%抑霉唑·井冈霉素1000倍	3.56	89.45	b
				10%抑霉唑·井冈霉素1200倍	5.59	83.41	c
70%甲基硫菌灵WP1000倍	5.60	83.37	c
				空白对照	33.69

2.2复配药剂防治苹果褐斑病田间试验

按照农业部农药检定所主编的“《农药田间药效试验准则（二）》第124部分：杀菌剂防治苹果斑点落叶病”设计10%抑霉唑·井冈霉素对苹果褐斑病的田间药效试验。

2.2.1供试药剂

10%抑霉唑水乳剂1000倍，陕西美邦农药有限公司产品；

10%井冈霉素水溶粉剂1000倍，浙江省桐庐汇丰生物科技有限公司产品；

10%抑霉唑·井冈霉素800倍、1000倍、1200倍，烟台农科院配制。

2.2.2对照药剂

10%苯醚甲环唑水分散粒剂1500倍，先正达苏州作物科学有限公司产品。

2.2.3小区设计

试验共设7个处理，每处理4个重复，共设28个小区，每小区4棵成株树。各小区随机排列。施药器械采用工农26型高压机动喷雾器，以树冠内全部枝梢叶片均匀着药，滴水为止。

2.2.4调查时间与方法

每小区选取中间2株，每株分东、西、南、北、中分别调查2个枝条全部叶片，以每一片叶上的病斑面积占整个叶面积百分率来分级。叶片分级方法：

0级：无病斑；

1级：病斑面积占整个叶面积的10%以下；

3级：病斑面积占整个叶面积的11%～20%；

5级：病斑面积占整个叶面积的21%～50%；

7级：病斑面积占整个叶面积的41%～65%；

9级：病斑面积占整个叶面积的65%以上。

2.2.5药效计算方法

2.2.6试验结果

在室内筛选的基础上制成的10％抑霉唑·井冈霉素复配物在田间防治苹果褐斑病试验中表现突出，800倍、1000倍、1200倍防效均在85％以上，其中800倍处理防效显著高于10％抑霉唑水乳剂1000倍和10％井冈霉素水溶粉剂1000倍，1000、1200倍处理与单剂井冈霉素防效相当，高于抑霉唑的防效（详细数据见表5）。

表510%抑霉唑·井冈霉素水剂防治苹果褐斑病田间药效

实施例3

安全性试验

复配组合物中抑霉唑和井冈霉素含量小于市售产品的含量，因此其对人畜的毒性与作物的安全性是符合要求的。复配杀菌剂经认定机构毒性试验结果表明属于微毒类农药：

大鼠急性经口毒性LD50♂>5000mg/kg，♀>5000mg/kg；

大鼠急性经皮毒性LD50♂>20000mg/kg，♀>20000mg/kg。

Claims (5)

1.一种防治苹果病害的杀菌组合物，特征在于，其有效成分抑霉唑和井冈霉素的重量配比为1：1.5～3。

2.如权利要求1所述的一种防治苹果病害的杀菌组合物，特征在于，其有效成分抑霉唑和井冈霉素的重量配比为1:1.5。

3.如权利要求1或2所述的一种防治苹果病害的杀菌组合物，特征在于，其有效成分抑霉唑和井冈霉素在整个复配组合物中的重量百分含量分别为4％和6％，余量为常规辅料添加物。

4.权利要求1或2所述的一种防治苹果病害的杀菌组合物应用于防治苹果轮纹病和苹果褐斑病的用途。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，将所述杀菌组合物制成的10％抑霉唑·井冈霉素复配组合物田间稀释800～1000倍防治苹果轮纹病和苹果褐斑病。