CN103898113A - 转录因子结合位点调节启动子强度的方法 - Google Patents
转录因子结合位点调节启动子强度的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103898113A CN103898113A CN201410088336.8A CN201410088336A CN103898113A CN 103898113 A CN103898113 A CN 103898113A CN 201410088336 A CN201410088336 A CN 201410088336A CN 103898113 A CN103898113 A CN 103898113A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- promotor
- transcription factor
- sequence
- binding site
- primer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了一种利用转录因子结合位点调节启动子强度的方法，属于生物化工领域。本发明从酿酒酵母启动子FBA1p中克隆得到一段含有转录因子Rap1、Gcr1和Gcr2的结合位点的核酸序列，通过OE-PCR的方法将这段序列与启动子融合可以调节启动子的强度。本发明创建的方法可以有效的调节启动子的强度，有利于外源基因在代谢工程中的表达。
Description
技术领域
本发明涉及转录因子结合位点调节启动子强度的方法，属于生物化工领域。
背景技术
随着代谢工程的发展以及合成生物学的兴起，无论是在宿主微生物中移植外源代谢途径还是延长宿主微生物的分支代谢途径，都涉及到多酶催化反应，大部分的研究主要集中于选择合适的酶来催化反应，这主要是因为酶是代谢工程中的首要决定因素，并且酶的来源十分广泛，而且在不同的宿主中表达可能会产生不同的催化特性。但是，选择合适的启动子对于代谢工程同样十分重要，这不仅是由于基因的转录水平是由启动子决定的，而且启动子易于控制调节基因的转录。
启动子的选择在代谢工程的设计中是十分重要的组成部分。在大肠杆菌中，通过利用强启动子对其进行代谢途径的改造，成功的在大肠杆菌中生产出1,4-丁二醇、1-丁醇、异丁醇和聚乳酸。在链霉菌中，利用不同的启动子激活其细胞内沉默的基因簇成功的合成出新的抗生素。在酿酒酵母细胞中，利用强组成型启动子过量表达磷酸戊糖途径的相关酶类，使酿酒酵母具有代谢木糖的能力。另外，通过多基因启动子穿梭技术提高了酿酒酵母利用木糖生产乙醇的效率，在引入大肠杆菌的***糖降解途径后，使其也可以利用***糖进行代谢发酵生产乙醇。半乳糖诱导型启动子在代谢工程中的应用也十分广泛，其中应用最为成功的是利用其在酿酒酵母中高效生产青蒿酸。
在代谢工程的实际应用中发现，启动子并不是越强越好，平衡的代谢流才最有利于目标产物的合成，因此不同强度的启动子就显得十分必要，在现有的启动子基础上对其进行改造可以满足这种需求，而主要的改造的方法有以下几种。1）Ep-PCR，Ep-PCR可以在DNA序列中随机的引入突变，在整个启动子的序列内引入随机突变可以建立数目相当的突变启动子文库，在合适的筛选方法下，可以得到强度不同的启动子。通过对酿酒酵母组成型启动子进行随机突变得到了一个强度范围差别15倍的突变启动子库。2）启动子间隔区的饱和突变，对启动子的间隔区进行饱和突变是一种十分有效的方法用于改变启动子的结构从而构建合成启动子文库。通过对大肠杆菌启动子的-35和-10保守区之间和周围的间隔区进行饱和突变可以得到强度不同的启动子。在乳酸链球菌的启动子的间隔区进行饱和突变后可以得到一个强度范围在400倍的人工启动子文库。3）启动子的杂交，启动子杂交的主要目的是将真核生物启动子的增强组件与核心启动子进行融合从而可以理性的增强启动子的转录水平并调控启动子的功能。通过这种启动子杂交的方式构建可以得到启动子强度差异90倍的启动子文库。这种方法除了可以应用在组成型启动子上外，还可以将诱导型启动子的调节元件也进行融合，使组成型的启动子改造成诱导型的启动子。
在启动子的序列内存在一些转录因子结合位点，细胞内的转录因子通过这些结合位点可以与启动子发生相互作用，增强启动子的强度。通过将这些转录因子结合位点***到启动子 中可以人为的调节启动子的强度，为启动子强度的调控提供技术方法。
发明内容
本发明的目的是为解决基因表达过程中启动子强度难以调节的问题，提供一种利用转录因子结合位点调节启动子强度的方法。
为达到上述目的，本发明的技术方案提供一种利用转录因子结合位点调节启动子强度的方法，从酿酒酵母启动子FBA1p中克隆得到一段含有转录因子Rap1、Gcr1和Gcr2结合位点的核酸序列，通过OE-PCR的方法将这段序列与启动子融合可以调节启动子的强度。
本发明的调节启动子强度的方法，具有以下优点：
1、本发明创建的方法可以有效的调节启动子的强度，有利于外源基因在代谢工程中的表达。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的具体实施方式进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1：转录因子结合位点增强启动子ENO2p的强度
1、从GenBank中查询酿酒酵母基因组中的XI号染色体（GenBank ID:BK006944.2），克隆出FBA1基因（GenBank ID:DAA09097.1）上游-495到-360区域的序列，此序列为含有转录因子Rap1、Gcr1和Gcr2结合位点的核酸序列。
引物序列为：
引物1：5’>CACTATAGGGCGAATTGGGTACCGGGCCCCCCCTCGAGGAATGTGTGGG TCATTACGTA<3’，下划线序列为与所用的线性质粒pRS41H的重叠序列。
引物2：5’>ATAAATACGTTTTTAACAATCAACTCTGGTAGGAAGATAAGGATGCTCAC GGCAGCGTG<3’，下划线序列为与启动子ENO2p的重叠序列。
2、从GenBank中查询酿酒酵母基因组中的VIII号染色体（GenBank ID:BK006934.2），克隆出ENO2基因（GenBank ID:DAA06866.1）上游-51到122区域的序列，此序列为ENO2基因的启动子序列。
引物序列为：
引物3：5’>CACTATAGGGCGAATTGGGTACCGGGCCCCCCCTCGAGGTATCTTCCTA CCAGAGTTGA<3’，下划线序列为与所用的线性质粒pRS41H的重叠序列。
引物4：5’>TTTCGGGCTCAATTGGAGTCACGCTGCCGTGAGCATCCTTATCTTCCTA CCAGAGTTGA<3’，下划线序列为与转录因子结合位点的重叠序列。
引物5：5’>CACCACCCCGGTGAACAGCTCCTCGCCCTTGCTCACCATTATTATTGTA TGTTATAGTA<3’，下划线序列为与报告基因eGFP的重叠序列。
3、从GenBank基因库中查询获得报告基因eGFP基因片段（KF844243.1），化学合成后扩增获得eGFP基因片段。
引物序列为：
引物6：5’>CATAACACCAAGCAACTAATACTATAACATACAATAATAATGGTGAGCA AGGGCGAGGA<3’，下划线序列为与与启动子ENO2p的重叠序列。
引物7：5’>GCTCCACCGCGGTGGCGGCCGCTCTAGAACTAGTGGATCTTACTTGTAC AGCTCGTCCA<3’，下划线序列为与所用的线性质粒pRS41H的重叠序列。
4、通过OE-PCR将转录因子结合位点与ENO2p启动子结合构建修饰启动子ENO2p+T，并与报告基因eGFP连接构建表达盒ENO2p+T-eGFP，同时将原始的ENO2p启动子通过OE-PCR与报告基因eGFP连接构建表达盒ENO2p-eGFP。将构建好的表达盒与Sal I和BamH I双酶切后的pRS41H质粒共同电击转入酿酒酵母INVSc1中，通过酿酒酵母自身的同源重组实现两个基因表达盒和质粒的连接，外源基因以质粒形式存在，构建酿酒酵母工程菌，具体过程如下：
利用引物1和引物5，以转录因子核酸序列和引物4、引物5扩增的ENO2p启动子序列为共同模板，通过OE-PCR方法构建修饰启动子ENO2p+T。
利用引物1和引物7，以ENO2p+T和报告基因eGFP基因片段为共同模板，通过OE-PCR方法构建基因表达盒ENO2p+T-eGFP；
利用引物3和引物7，以引物3、引物5扩增的ENO2p启动子序列和报告基因eGFP基因片段为共同模板，通过OE-PCR方法构建基因表达盒ENO2p-eGFP；
采用Sal I和BamH I双酶切pRS41H质粒，使其线性化；
将ENO2p+T-eGFP、ENO2p-eGFP基因表达盒分别和线性化的pRS41H质粒混合后电击转化酿酒酵母INVSc1，由于基因表达盒和线性化质粒之间彼此具有重叠序列，通过酿酒酵母自身的同源重组功能完成基因表达盒和质粒的组装连接，形成质粒pRS41H-ENO2p+T-eGFP和pRS41H-ENO2p-eGFP，获得酿酒酵母转化子。
5、酿酒酵母工程菌的鉴定
将上述电击转化后的酿酒酵母INVSc1涂布在含有潮霉素B抗性筛选平板上，由于pRS41H质粒含有潮霉素B抗性基因，转化成功的工程菌株在潮霉素B抗性平板上生长，菌落PCR进一步验证筛选获得的阳性酿酒酵母工程菌。
6、从平板上挑取筛选到的酿酒酵母工程菌单菌落，接种于含有2%的葡萄糖、2%蛋白胨和1%酵母粉的40mL培养基中，30℃、170rpm振荡培养36h。利用流式细胞仪检测细胞内eGFP的荧光强度发现含有转录因子结合位点的eGFP荧光强度相比较原始启动子要增强82%，说明转录因子结合位点可以有效提高启动子的强度。
实施例2：转录因子结合位点增强启动子PYK2p的强度
1、从GenBank中查询酿酒酵母基因组中的XI号染色体（GenBank ID:BK006944.2），克隆出FBA1基因（GenBank ID:DAA09097.1）上游-495到-360区域的序列，此序列为含有转录因子Rap1、Gcr1和Gcr2结合位点的核酸序列。
引物序列为：
引物1：5’>CACTATAGGGCGAATTGGGTACCGGGCCCCCCCTCGAGGAATGTGTGGG TCATTACGTA<3’，下划线序列为与所用的线性质粒pRS41H的重叠序列。
引物8：5’>TAGTATCGTGAGAGATATCGGAATATGTTCATAAAAGCGAGGATGCTCAC GGCAGCGTG<3’，下划线序列为与启动子PYK2p的重叠序列。
2、从GenBank中查询酿酒酵母基因组中的XV号染色体（GenBank ID:BK006948.2），克隆出PYK2基因（GenBank ID:DAA11108.1）上游-337到99区域的序列，此序列为PYK2基因的启动子序列。
引物序列为：
引物9：5’>CACTATAGGGCGAATTGGGTACCGGGCCCCCCCTCGAGGCGCTTTTATG AACATATTCC<3’，下划线序列为与所用的线性质粒pRS41H的重叠序列。
引物10：5’>TTTCGGGCTCAATTGGAGTCACGCTGCCGTGAGCATCCTCGCTTTTATG AACATATTCC<3’，下划线序列为与转录因子结合位点的重叠序列。
引物11：5’>CACCACCCCGGTGAACAGCTCCTCGCCCTTGCTCACCATCGATAGTGCT TTTGTTGTAA<3’，下划线序列为与报告基因eGFP的重叠序列。
3、从GenBank基因库中查询获得报告基因eGFP基因片段（KF844243.1），化学合成后扩增获得eGFP基因片段。
引物序列为：
引物12：5’>CTCTACGTCCATTGTAAGATTACAACAAAAGCACTATCGATGGTGAGCA AGGGCGAGGA<3’，下划线序列为与与启动子PYK2p的重叠序列。
引物7：5’>GCTCCACCGCGGTGGCGGCCGCTCTAGAACTAGTGGATCTTACTTGTAC AGCTCGTCCA<3’，下划线序列为与所用的线性质粒pRS41H的重叠序列。
4、通过OE-PCR将转录因子结合位点与PYK2p启动子结合构建修饰启动子PYK2p+T，并与报告基因eGFP连接构建表达盒PYK2p+T-eGFP，同时将原始的PYK2p启动子通过OE-PCR与报告基因eGFP连接构建表达盒PYK2p-eGFP。将构建好的表达盒与Sal I和BamH I双酶切后的pRS41H质粒共同电击转入酿酒酵母INVSc1中，通过酿酒酵母自身的同源重组实现两个基因表达盒和质粒的连接，外源基因以质粒形式存在，构建酿酒酵母工程菌，具体过程如下：
利用引物1和引物11，以转录因子核酸序列和引物10、引物11扩增的PYK2p启动子序列为共同模板，通过OE-PCR方法构建修饰启动子PYK2p+T。
利用引物1和引物7，以PYK2p+T和报告基因eGFP基因片段为共同模板，通过OE-PCR 方法构建基因表达盒PYK2p+T-eGFP；
利用引物9和引物7，以引物9、引物11扩增的PYK2p启动子序列和报告基因eGFP基因片段为共同模板，通过OE-PCR方法构建基因表达盒PYK2p-eGFP；
采用Sal I和BamH I双酶切pRS41H质粒，使其线性化；
将PYK2p+T-eGFP、PYK2p-eGFP基因表达盒分别和线性化的pRS41H质粒混合后电击转化酿酒酵母INVSc1，由于基因表达盒和线性化质粒之间彼此具有重叠序列，通过酿酒酵母自身的同源重组功能完成基因表达盒和质粒的组装连接，形成质粒pRS41H-PYK2p+T-eGFP和pRS41H-PYK2p-eGFP，获得酿酒酵母转化子。
5、酿酒酵母工程菌的鉴定
将上述电击转化后的酿酒酵母INVSc1涂布在含有潮霉素B抗性筛选平板上，由于pRS41H质粒含有潮霉素B抗性基因，转化成功的工程菌株在潮霉素B抗性平板上生长，菌落PCR进一步验证筛选获得的阳性酿酒酵母工程菌。
6、从平板上挑取筛选到的酿酒酵母工程菌单菌落，接种于含有2%的葡萄糖、2%蛋白胨和1%酵母粉的40mL培养基中，30℃、170rpm振荡培养36h。利用流式细胞仪检测细胞内eGFP的荧光强度发现含有转录因子结合位点的eGFP荧光强度相比较原始启动子要增强43%，说明转录因子结合位点可以有效提高启动子的强度。
实施例3：转录因子结合位点增强启动子MSY1p的强度
1、从GenBank中查询酿酒酵母基因组中的XI号染色体（GenBank ID:BK006944.2），克隆出FBA1基因（GenBank ID:DAA09097.1）上游-495到-360区域的序列，此序列为含有转录因子Rap1、Gcr1和Gcr2结合位点的核酸序列。
引物序列为：
引物1：5’>CACTATAGGGCGAATTGGGTACCGGGCCCCCCCTCGAGGAATGTGTGGG TCATTACGTA<3’，下划线序列为与所用的线性质粒pRS41H的重叠序列。
引物13：5’>CAAATAGCGCAACAGCTTCAAGTCCAATATTAAGATATAAGGATGCTCA CGGCAGCGTG<3’，下划线序列为与启动子MSY1p的重叠序列。
2、从GenBank中查询酿酒酵母基因组中的XVI号染色体（GenBank ID:BK006949.2），克隆出MSY1基因（GenBank ID:DAA11335.1）上游-203到21区域的序列，此序列为MSY1基因的启动子序列。
引物序列为：
引物14：5’>CACTATAGGGCGAATTGGGTACCGGGCCCCCCCTCGAGGTATATCTTAA TATTGGACTT<3’，下划线序列为与所用的线性质粒pRS41H的重叠序列。
引物15：5’>TTTCGGGCTCAATTGGAGTCACGCTGCCGTGAGCATCCTTATATCTTAA TATTGGACTT<3’，下划线序列为与转录因子结合位点的重叠序列。
引物16：5’>CACCACCCCGGTGAACAGCTCCTCGCCCTTGCTCACCATGATTCACAAT GTCTACCTGT<3’，下划线序列为与报告基因eGFP的重叠序列。
3、从GenBank基因库中查询获得报告基因eGFP基因片段（KF844243.1），化学合成后扩增获得eGFP基因片段。
引物序列为：
引物17：5’>CGATTGAACACAGCAATCTACAGGTAGACATTGTGAATCATGGTGAGC AAGGGCGAGGA<3’，下划线序列为与与启动子MSY1p的重叠序列。
引物7：5’>GCTCCACCGCGGTGGCGGCCGCTCTAGAACTAGTGGATCTTACTTGTAC AGCTCGTCCA<3’，下划线序列为与所用的线性质粒pRS41H的重叠序列。
4、通过OE-PCR将转录因子结合位点与MSY1p启动子结合构建修饰启动子MSY1p+T，并与报告基因eGFP连接构建表达盒MSY1p+T-eGFP，同时将原始的MSY1p启动子通过OE-PCR与报告基因eGFP连接构建表达盒MSY1p-eGFP。将构建好的表达盒与Sal I和BamH I双酶切后的pRS41H质粒共同电击转入酿酒酵母INVSc1中，通过酿酒酵母自身的同源重组实现两个基因表达盒和质粒的连接，外源基因以质粒形式存在，构建酿酒酵母工程菌，具体过程如下：
利用引物1和引物16，以转录因子核酸序列和引物15、引物16扩增的MSY1p启动子序列为共同模板，通过OE-PCR方法构建修饰启动子MSY1p+T。
利用引物1和引物7，以MSY1p+T和报告基因eGFP基因片段为共同模板，通过OE-PCR方法构建基因表达盒MSY1p+T-eGFP；
利用引物14和引物7，以引物14、引物16扩增的MSY1p启动子序列和报告基因eGFP基因片段为共同模板，通过OE-PCR方法构建基因表达盒MSY1p-eGFP；
采用Sal I和BamH I双酶切pRS41H质粒，使其线性化；
将MSY1p+T-eGFP、MSY1p-eGFP基因表达盒分别和线性化的pRS41H质粒混合后电击转化酿酒酵母INVSc1，由于基因表达盒和线性化质粒之间彼此具有重叠序列，通过酿酒酵母自身的同源重组功能完成基因表达盒和质粒的组装连接，形成质粒pRS41H-MSY1p+T-eGFP和pRS41H-MSY1p-eGFP，获得酿酒酵母转化子。
5、酿酒酵母工程菌的鉴定
将上述电击转化后的酿酒酵母INVSc1涂布在含有潮霉素B抗性筛选平板上，由于pRS41H质粒含有潮霉素B抗性基因，转化成功的工程菌株在潮霉素B抗性平板上生长，菌落PCR进一步验证筛选获得的阳性酿酒酵母工程菌。
6、从平板上挑取筛选到的酿酒酵母工程菌单菌落，接种于含有2%的葡萄糖、2%蛋白胨和1%酵母粉的40mL培养基中，30℃、170rpm振荡培养36h。利用流式细胞仪检测细胞内eGFP的荧光强度发现含有转录因子结合位点的eGFP荧光强度相比较原始启动子要增强105%，说明转录因子结合位点可以有效提高启动子的强度。
Claims (4)
1.一种转录因子结合位点调节启动子强度的方法的建立，其特征在于，从酿酒酵母INVSc1的启动子FBA1p中克隆得到一段含有Rap1、Gcr1和Gcr2转录因子结合位点的核酸序列，将这段序列通过OE-PCR的方法与其他启动子融合，可以调节其他启动子的强度。
2.如权利要求1所述的转录因子结合位点调节启动子强度的方法，其特征在于，所述的转录因子结合位点核酸序列来自酿酒酵母其他启动子或者具有相同或相似功能的序列。
3.如权利要求1所述的转录因子结合位点调节启动子强度的方法，其特征在于，所述的转录因子结合位点核酸序列来自大肠杆菌或其他生物中具有相同或相似功能的序列。
4.权利要求1、2、3所述的方法在单基因或多基因激活与转录中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410088336.8A CN103898113A (zh) | 2014-03-11 | 2014-03-11 | 转录因子结合位点调节启动子强度的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410088336.8A CN103898113A (zh) | 2014-03-11 | 2014-03-11 | 转录因子结合位点调节启动子强度的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103898113A true CN103898113A (zh) | 2014-07-02 |
Family
ID=50989683
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410088336.8A Pending CN103898113A (zh) | 2014-03-11 | 2014-03-11 | 转录因子结合位点调节启动子强度的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103898113A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108977890A (zh) * | 2017-06-05 | 2018-12-11 | 北京蓝晶微生物科技有限公司 | 一种启动子库以及利用其在细菌中构建不同强度表达***的方法 |
| CN110923242A (zh) * | 2019-12-14 | 2020-03-27 | 厦门梓蔓生物科技有限公司 | 一种***腺毛中分离的转录因子CsAPL1及其应用 |
| WO2022178741A1 (zh) * | 2021-02-25 | 2022-09-01 | 石河子大学 | 一种具有启动、终止双功能调控元件的构建方法和双功能元件库 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1309716A (zh) * | 1998-07-14 | 2001-08-22 | 阿文蒂斯药物德国有限公司 | 包含具重组转录因子结合位点的嵌合启动子的表达*** |
| CN103390119A (zh) * | 2013-07-03 | 2013-11-13 | 哈尔滨工程大学 | 一种转录因子结合位点识别方法 |
-
2014
- 2014-03-11 CN CN201410088336.8A patent/CN103898113A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1309716A (zh) * | 1998-07-14 | 2001-08-22 | 阿文蒂斯药物德国有限公司 | 包含具重组转录因子结合位点的嵌合启动子的表达*** |
| CN103390119A (zh) * | 2013-07-03 | 2013-11-13 | 哈尔滨工程大学 | 一种转录因子结合位点识别方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| CONCETTA COMPAGNO ET AL.: "The promoter of Saccharomyces cerevisiae FBA1 gene contains a single positive upstream regulatory element", 《FEBS LETTERS》, vol. 293, no. 12, 30 November 1991 (1991-11-30), pages 97 - 100, XP002993280, DOI: doi:10.1016/0014-5793(91)81160-A * |
| XIAO ZENG ET AL.: "Specialized Rap1p/Gcr1p transcriptional activation through Gcr1p DNA contacts requires Gcr2p，as does hyperphosphorylation of Gcr1p", 《GENETICS》, vol. 147, 31 October 1997 (1997-10-31), pages 493 - 505 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108977890A (zh) * | 2017-06-05 | 2018-12-11 | 北京蓝晶微生物科技有限公司 | 一种启动子库以及利用其在细菌中构建不同强度表达***的方法 |
| CN108977890B (zh) * | 2017-06-05 | 2022-02-15 | 北京蓝晶微生物科技有限公司 | 一种启动子库以及利用其在细菌中构建不同强度表达***的方法 |
| CN110923242A (zh) * | 2019-12-14 | 2020-03-27 | 厦门梓蔓生物科技有限公司 | 一种***腺毛中分离的转录因子CsAPL1及其应用 |
| CN110923242B (zh) * | 2019-12-14 | 2021-04-13 | 厦门梓蔓生物科技有限公司 | 一种***腺毛中分离的转录因子CsAPL1及其应用 |
| WO2022178741A1 (zh) * | 2021-02-25 | 2022-09-01 | 石河子大学 | 一种具有启动、终止双功能调控元件的构建方法和双功能元件库 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Cui et al. | Homology‐independent genome integration enables rapid library construction for enzyme expression and pathway optimization in Yarrowia lipolytica | |
| Cha et al. | Metabolic engineering of Caldicellulosiruptor bescii yields increased hydrogen production from lignocellulosic biomass | |
| Charubin et al. | Engineering Clostridium organisms as microbial cell-factories: challenges & opportunities | |
| Sun et al. | Cloning and characterization of a panel of constitutive promoters for applications in pathway engineering in Saccharomyces cerevisiae | |
| Kim et al. | Combinatorial design of a highly efficient xylose-utilizing pathway in Saccharomyces cerevisiae for the production of cellulosic biofuels | |
| Xiong et al. | Condition-specific promoter activities in Saccharomyces cerevisiae | |
| GB2528177A (en) | Compositions and methods for rapid and dynamic flux control using synthetic metabolic valves | |
| Ergün et al. | Recombinant protein production in Pichia pastoris: from transcriptionally redesigned strains to bioprocess optimization and metabolic modelling | |
| EP2084288A1 (en) | Process for the biological production of 1,3-propanediol from glycerol with high yield | |
| Takayama et al. | Enhancing 3-hydroxypropionic acid production in combination with sugar supply engineering by cell surface-display and metabolic engineering of Schizosaccharomyces pombe | |
| CN114774477A (zh) | 使用了重组酵母的乙醇的制造方法 | |
| CN110484572A (zh) | 一种提高酿酒酵母橙花叔醇产量的方法 | |
| Jagtap et al. | Improving ethanol yields in sugarcane molasses fermentation by engineering the high osmolarity glycerol pathway while maintaining osmotolerance in Saccharomyces cerevisiae | |
| Cui et al. | Improvement of ClosTron for successive gene disruption in Clostridium cellulolyticum using a pyrF-based screening system | |
| CN107326041A (zh) | 一种利用终止子调控酿酒酵母基因表达强度的方法 | |
| Wei et al. | A Thi2p regulatory network controls the post-glucose effect of xylose utilization in Saccharomyces cerevisiae | |
| US9382557B2 (en) | Yeast strain for lactic acid production by using pentose and hexose | |
| CN103898113A (zh) | 转录因子结合位点调节启动子强度的方法 | |
| Lin et al. | Improvement of cellulase and xylanase production in Penicillium oxalicum under solid-state fermentation by flippase recombination enzyme/recognition target-mediated genetic engineering of transcription repressors | |
| Li et al. | Visualized multigene editing system for Aspergillus niger | |
| CN104220600B (zh) | 启动子及其用途 | |
| Lee et al. | Cas9-based metabolic engineering of Issatchenkia orientalis for enhanced utilization of cellulosic hydrolysates | |
| Gilbert et al. | Rapid strain improvement through optimized evolution in the cytostat | |
| US9309542B2 (en) | Recombinant Caldicellulosiruptor bescii and methods of use | |
| Parachin et al. | The deletion of YLR042c improves ethanolic xylose fermentation by recombinant Saccharomyces cerevisiae |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140702 |