CN103881084A - 一种支化聚乙二醇的磷脂类衍生物及其组成的脂质膜结构体 - Google Patents

一种支化聚乙二醇的磷脂类衍生物及其组成的脂质膜结构体 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种支化聚乙二醇的磷脂类衍生物及其组成的脂质膜结构体，其通式如下所示，其中，X1、X2各自独立地为1-20个碳原子的烃基；n1、n2各自独立地为1～1000的整数，n3为0～1000的整数，且2≤n1+n2+n3≤2000；Y为支化中心，具有1-20个原子，采用共价键与L1、L2、L3相连接；L1、L2、L3为Y与聚乙二醇单元的连接基团；q为0或1；当n3=0时，q为0且Y不为2～10个氨基酸残基的聚氨基酸残基；L4为连接基团；M为氢原子或阳离子；R为疏水性脂质的残基。采用所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物所组成的脂质膜结构体用于包裹药物可有效延长药物在体内的循环时间。

Description

一种支化聚乙二醇的磷脂类衍生物及其组成的脂质膜结构体
技术领域
本发明涉及高分子合成领域，尤其涉及一种支化聚乙二醇的磷脂类衍生物及其组成的脂质膜结构体。
背景技术
脂质体是脂质（常见的为磷脂、胆固醇）分散在水中形成的一种包封一部分水相的封闭囊泡，外形为球形、类球形、椭圆形等形状，直径大小约为几十纳米到几十微米。脂质体为一种新型药物载体，其在血液中的稳定性是发挥药物载体作用的关键。在传统的脂质体制剂中，当静脉给药时，具有在血液中的滞留性差、易于被肝脏、脾脏等网状内皮***（以下简称为“RES”）捕获的问题，在利用脂质体作为药物传递***，将药物传递至“RES”***以外的器官或使试剂长时间地滞留在血液中控制药物释放时，存在着困难。除此外，血液中有多种破坏因素：高密度脂蛋白（HDL）是破坏脂质体的主要成分，HDL和脂质体易发生apoA-1与磷脂的互换，脂质体膜形成孔洞；引起药物渗漏和水、电解质的大量进入，最终渗透裂解脂质体；血清白蛋白与脂质体磷脂结合形成复合物，降低其稳定性；血液中的磷脂酶可水解磷脂。这些因素综合使传统脂质体的半衰期仅十几分钟。
为了延长脂质体的半衰期，避免RES的捕获，目前主要利用糖脂、糖蛋白质或亲水性聚合物修饰脂质体表面，使脂质体具有长循环特性。目前，采用聚乙二醇（PEG）偶联并组装到脂质体膜上，可以延长脂质体的血循环时间。同时，聚乙二醇的分子量越大对脂质体的血循环时间的延长效果越好。影响聚乙二醇化脂质体延长血循环时间的因素有：①立***阻：聚乙二醇在脂质体表面呈部分延展的构象，这一立***阻层犹如一把“刷子”，将靠近的大分子或脂蛋白复合物推离脂质体，从而减弱血中各种成分的作用，特别是血浆蛋白的调节作用以及随后的RES摄取作用，同时脂蛋白的交换、磷脂酶的水解等均受到有效抑制。②提高膜表面亲水性：聚乙二醇有很长的极性基团，能提高脂质体表面的亲水性，从而提高了单核吞噬细胞***（MPS）对其吸收破坏作用的能垒，有效组织了脂质体表面与血白蛋白的调节作用，并降低了脂质体对MPS的亲和作用。一般认为，立***阻和提高膜表面的亲水性两个因素同时存在，两者共同作用使PEG化脂质体成为一种长效脂质体。
利用肿瘤组织的pH值比周围正常组织低的事实，可以设计pH敏感性脂质体。其原理是：低pH时可导致脂肪酯羧基的质子化而引起六方晶相（非相层接头）的形成，导致脂质体膜的不稳定，产生聚集或融合，将包封的物质导入胞浆及主动靶向病变组织，肿瘤组织等靶部位高效地释放包封在脂质体内的生物相关物质，同时避免RES清除及溶酶体的降解，增加组织对药物的摄取量。
发明内容
本发明的发明目的，是为了更有效延长药物在体内的循环时间，提供一种支化聚乙二醇的脂质衍生物及其组成的脂质膜结构体。
本发明的上述目的通过如下技术方案予以实现：
一种支化聚乙二醇的磷脂类衍生物，其通式如式（1）所示：
其中，X1、X2各自独立地为具有1至20个碳原子的烃基；n1、n2各自独立地为1～1000的整数，n3为0～1000的整数，且2≤n1+n2+n3≤2000；Y为支化中心，具有1至20个原子，采用共价键与L1、L2、L3相连接；L1、L2、L3为支化中心Y与聚乙二醇单元的连接基团；q为0或1；当n3=0时，q为0且Y不为2～10个氨基酸残基的聚氨基酸残基；L4为连接基团，为聚乙二醇衍生物与相应磷脂化合物发生化学反应形成的残基；M为氢原子或阳离子；R为疏水性脂质的残基。
上述n1,n2,n3优选满足1≤n1≤200，1≤n2≤200，0≤n3≤200，且2≤n1+n2+n3≤200。
当n3=0，q为0且Y不为2～10个氨基酸残基的聚氨基酸残基，则所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物通式如式（2）所示：
Figure BDA0000477507130000022
其中，X1、X2各自独立地为具有1至20个碳原子的烃基；n1、n2各自独立地为1～1000的整数，且2≤n1+n2≤2000；Y为支化中心，具有1至20个原子，采用共价键与L1、L2相连接；L1、L2为支化中心Y与聚乙二醇单元的连接基团；L4为连接基团，为聚乙二醇衍生物与相应磷脂化合物发生化学反应形成的残基；M为氢原子或阳离子；R为含有反应性基团的疏水性脂质的残基。
当n3为1～1000，则所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物通式如式（3）所示：
Figure BDA0000477507130000023
其中，X1、X2各自独立地为具有1至20个碳原子的烃基；n1、n2各自独立地为1～1000的整数，n3为1～1000的整数，且3≤n1+n2+n3≤2000；Y为支化中心，具有1至20个原子，采用共价键与L1、L2、L3相连接，且Y不为2～10个氨基酸残基的聚氨基酸残基；L1、L2、L3为支化中心Y与聚乙二醇单元的连接基团；q为0或1；L4为连接基团，为聚乙二醇衍生物与相应磷脂化合物发生化学反应形成的残基；M为氢原子或阳离子；R为疏水性脂质的残基。
上述Y为碳原子支化中心，其结构表示如下：
Figure BDA0000477507130000024
其中，R1为氢原子、具有1至20个碳的烃基或含有含杂原子基团的具有1至20个碳的烃基。所述R1优选为氢原子、或为具有1至20个碳的烃基，或为含酯基、尿烷基、酰胺基、醚基、硫醚、双键、叄键、碳酸酯基、仲胺基或叔胺基的具有1至20个碳的烃基。
上述Y为氮原子支化中心，其结构表示如下：
Figure BDA0000477507130000031
上述R为疏水性脂质的残基。
该疏水性脂质没有特别限定，可为含有脂肪烃、甘油脂、鞘脂、类固醇等当中的一种或任意2种及2种以上的复合脂质。
当R为脂肪烃的残基，结构表示如下：
Figure BDA0000477507130000032
R7可以是饱和或不饱和，可以是直链状、支链状、环状、梳状、超支化状、树枝状等结构。其碳原子数为4～50。对于该脂肪烃的残基没有特别限定，可以来自丁基、叔丁基、戊基、庚基、2-乙基己基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、异硬脂酰基、十八烯基、十八碳二烯基、十九烷基、二十烷基、二十二烷基、二十二烷烯基、二十四烷基、二十六烷基、二十八烷基、三十烷基、三十二烷基等。
对于脂肪烃的残基，相应的脂肪烃没有特别限定，可以为脂肪酸、脂肪胺、脂肪醇及其衍生物，优选脂肪醇和脂肪酸，进一步优选脂肪醇。例如，作为脂肪族醇可以选自丁醇、叔丁醇、戊醇、庚醇、2-乙基己醇、辛醇、癸醇、十二烷醇、十四烷醇、十六烷醇、十七烷醇、十八烷醇、十八烯醇、十八二烯醇、十八三烯醇、二十烷醇、二十二烷醇、二十二烯醇、二十四烷醇、二十六烷醇、二十八烷醇、三十烷醇、三十二烷醇等，优选相应的脂肪族单醇。例如，作为脂肪酸可以选自丁酸、叔丁酸、戊酸、庚酸、2-乙基己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、反油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生四烯酸、山嵛酸、芥酸、木蜡酸、蜡酸、二十八烷酸、蜂花酸、虫漆蜡酸等，优选相应的脂肪族单羧酸。例如，作为脂肪胺可以选自丁胺、叔丁胺、戊胺、庚胺、2-乙基己胺、辛胺、癸胺、十二烷胺、十四烷胺、十六烷胺、十七烷胺、十八烷胺、十八烯胺、十八二烯胺、十八三烯胺、二十烷胺、二十二烷胺、二十二烯胺、二十四烷胺、二十六烷胺、二十八烷胺、三十烷胺、三十二烷胺等，优选相应的脂肪族单胺。
当R为甘油脂的残基，甘油脂可以为二酰基甘油酯。其结构表示如下：
Figure BDA0000477507130000033
基于该甘油脂质残基的磷脂作为甘油磷脂，可以为磷脂酰乙醇胺、磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰氨基酸等。甘油磷脂中多个存在的酰基的碳数各自独立，碳原子数为4～50。该酰基可以相同或不同，可以是饱和或不饱和，可以是直链状或支链状。另外，对酰基的种类也没有特别限定，通常可以优选来源于脂肪酸的酰基。具体举例如，丁酸、叔丁酸、戊酸、庚酸、2-乙基己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、反油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生四烯酸、山嵛酸、芥酸、木蜡酸、蜡酸、二十八烷酸、蜂花酸、虫漆蜡酸等脂肪酸来源的酰基。
当R为甘油脂的残基，甘油脂也可以为单酰基甘油酯，其结构表示如下：基于该甘油脂质残基的磷脂作为溶血磷脂，其中存在的酰基的碳数为4～50。该酰基可以是饱和或不饱和，可以是直链状或支链状。另外，对酰基的种类也没有特别限定，通常可以优选使用来源于脂肪酸的酰基。具体举例如，丁酸、叔丁酸、戊酸、庚酸、2-乙基己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、反油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生四烯酸、山嵛酸、芥酸、木蜡酸、蜡酸、二十八烷酸、蜂花酸、虫漆蜡酸等脂肪酸来源的酰基。
R也可以来自结构
Figure BDA0000477507130000042
或基于此结构的衍生物，其中R2、R3各自独立地为含有4至50个碳原子的烃基。R优选含有鞘氨醇骨架。R含有鞘氨醇骨架时，其结构可表示为R可以为来自上述鞘氨醇骨架的衍生物。当R为具有鞘氨醇的骨架或基于此骨架的衍生物时，R为鞘脂残基。基于该鞘脂残基的鞘磷脂可以为神经鞘磷脂及其衍生物，例如磷酸乙醇胺神经酰胺、磷酸甘油神经酰胺、磷酸甘油磷酸酯神经酰胺等。对于与鞘氨醇结合的脂肪酸，可以为丁酸、叔丁酸、戊酸、庚酸、2-乙基己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、反油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生四烯酸、山嵛酸、芥酸、木蜡酸、蜡酸、二十八烷酸、蜂花酸、虫漆蜡酸等。
当R为类固醇的残基，该类固醇可以为胆固醇、谷甾醇、维生素D、二氢胆固醇、麦角固醇、羊毛留醇、胆汁醇、性激素等及其衍生物。
上述R2、R3、R4、R5、R6、R7优选为丁基、叔丁基、戊基、庚基、2-乙基己基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基、(Z)-9-十四烯基、(Z)-8-十七烯基、(Z)-12-二十一烯基，且在同一分子中，可以相同也可以不同。
基于疏水性脂质残基R所形成的磷脂可以为天然磷脂，也可以为人工合成磷脂。例如，天然磷脂可以为脑磷脂、卵磷脂、鞘磷脂、溶血磷脂等，人工合成磷脂可以为磷脂酰乙醇胺，如二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺等。
所述L4没有特别限定，优选来自
Figure BDA0000477507130000044
Figure BDA0000477507130000045
Figure BDA0000477507130000051
其中Z没有特别限定，优选亚烷基或含有酯基、尿烷基、酰胺基、醚基、硫醚、双键、叄键、碳酸酯基、仲胺基或叔胺基等基团的亚烷基；
g为0或1；
f为2至10的整数。
所述X1、X2各自独立地为具有1至20个碳原子的烃基，优选为甲基、乙基、丙基、丙烯基、丙炔基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、庚基、2-乙基己基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基、苄基或丁基苯基，且在同一分子中，X1、X2可以相同也可以不同。
所述L1、L2、L3各自独立地为含有在光照、酶、酸性或碱性条件下稳定存在的醚基、硫醚基、酰胺基、双键、叄键、仲胺基或叔胺基等基团的具有1至20个碳原子的二价烃基。
所述M为氢原子或阳离子，优选氢原子、钠离子或NH4 +。
所述支化聚乙二醇的磷脂衍生物中，可含有磷脂酰乙醇胺的残基，即磷脂酰乙醇胺与其它反应性基团反应后形成的残基。
所述磷脂酰乙醇胺没有特别限定，优选二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二油脂酰基磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺，二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二亚麻酰磷脂酰乙醇胺、二芥酰磷脂酰乙醇胺或1-棕榈酰-2-油酰磷脂酰乙醇胺。
一种含有上述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物的脂质膜结构体。本发明中的“脂质膜结构体”是指由双亲性脂质或/及其衍生物的亲水基团与水相接触形成的粒子。所述脂质膜结构体，可以为空心或实心的封闭形态，也可以为非封闭的膜形态。当为空心的封闭形态时，即为脂质体（liposome），有的文献上也称为脂质囊泡（lipid vesicle）。
所述脂质膜结构体中，支化聚乙二醇的磷脂类衍生物所占质量百分数为0.1%～30%，优选1%～30%，再优选3%～25%，更优选3%～20%，进一步优选为3%-15%。
所述脂质膜结构体，除支化聚乙二醇修饰的磷脂衍生物外，还含有未用聚乙二醇修饰的脂质成分。所述未修饰的脂质成分可以为含4-50个碳原子的酰基化合物、脂肪酰甘油酯、鞘脂、甘油磷脂、糖脂、甘油糖脂、类固醇等脂质。可以为天然脂质或人工合成脂质。所述未用聚乙二醇修饰的脂质成分，可以为上述脂质成分中的单一组分，也可以为两种或两种以上脂质成分的混合脂质。
所述脂质膜结构体中未用聚乙二醇修饰的脂质成分，优选磷脂酰乙醇胺。所述磷脂酰乙醇胺优选含脂肪族酰基的磷脂酰乙醇胺。所述脂肪族酰基优选来自8-24个碳原子的酰基化合物，进一步优选8-24个碳原子的酰基化合物。例如，所述酰基可以为丁酸、叔丁酸、戊酸、庚酸、2-乙基己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、反油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生四烯酸、山嵛酸、芥酸、木蜡酸、蜡酸、二十八烷酸、蜂花酸、虫漆蜡酸等脂肪酸来源的酰基，优选辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、反油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生四烯酸、山嵛酸、芥酸、木蜡酸等来源的酰基，进一步优选月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、反油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生四烯酸、山嵛酸、芥酸、木蜡酸等来源的酰基。
当所述脂质膜结构体中的未用聚乙二醇修饰的脂质成分中含有磷脂酰乙醇胺，以此作为膜的组成成分，所述磷脂酰乙醇胺可举例如二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二油脂酰基磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺，二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二亚麻酰磷脂酰乙醇胺、二芥酰磷脂酰乙醇胺或1-棕榈酰-2-油酰磷脂酰乙醇胺。
所述脂质膜结构体的形态没有特别限定，可以为脂质体（或脂质囊泡）、胶束、混合胶团、复合型乳剂、层状结构物等形态，优选其形态为脂质体。
所述脂质膜结构体，可以进一步封装生物相关物质。
所述脂质膜结构体，所封装的生物相关物质在低pH时释放，优选pH≤6.8，更优选pH≤6.5，进一步优选pH≤6.0。
所述脂质膜结构体其形态优选为脂质体。
所述脂质体，可以进一步封装生物相关物质。
所述脂质体，所封装的生物相关物质在低pH时释放，优选pH≤6.8，更优选pH≤6.5，进一步优选pH≤6.0。
所述脂质膜结构体或所述脂质体中封装的生物相关物质没有特别限定，包括但不限于多肽、蛋白质、酶、小分子药物、核苷、核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、核酸、多糖、甾体化合物、脂类化合物、糖脂、糖蛋白、类固醇。
本发明还公开了一种具有通式（2）所示的支化聚乙二醇的磷脂类衍生物：
Figure BDA0000477507130000071
其中，X1、X2各自独立地为具有1至20个碳原子的烃基；n1、n2各自独立地为1～1000的整数，且2≤n1+n2≤2000；Y为具有1至20个原子的碳原子支化中心或N原子支化中心，采用共价键与L1、L2、L4相连接，且Y不为2～10个氨基酸残基的聚氨基酸残基；L1、L2各自独立地为连接支化中心Y与聚乙二醇单元或L4的含有在光照、酶、酸性或碱性条件下稳定存在的醚基、硫醚基、酰胺基、双键、叄键、仲胺基或叔胺基等基团的具有1至20个碳原子的二价烃基；L4为连接基团，为聚乙二醇衍生物与相应磷脂化合物发生化学反应形成的残基；L4没有特别限定，可选自以下基团之一：
Figure BDA0000477507130000072
其中，Z为亚烷基或含有酯基、尿烷基、酰胺基、醚基、硫醚、双键、叄键、碳酸酯基、仲胺基或叔胺基等基团的亚烷基；
g为0或1；
f为2至10的整数；
M为氢原子或阳离子；
R为疏水性脂质残基，没有特别限定，可为脂肪烃残基，二酰基甘油脂质残基，单酰基甘油脂质残基，含有鞘氨醇类骨架的脂质残基或类固醇残基中的一种或其复合脂质的残基。
还公开了含通式（2）所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物的脂质体，所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物占该脂质体总质量的1%～30%，优选为3%-20%，更优选为3%-15%。
含通式（2）所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物的脂质体中，其封装有生物相关物质。所述生物相关物质没有特别限定，包括但不限于多肽、蛋白质、酶、小分子药物、核苷、核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、核酸、多糖、甾体化合物、脂类化合物、糖脂、糖蛋白或类固醇等，可为上述一种或一种以上的生物相关物质。
本发明还公开了一种具有通式（3）所示的支化聚乙二醇的磷脂类衍生物：
Figure BDA0000477507130000091
其中，X1、X2各自独立地为具有1至20个碳原子的烃基；n1、n2各自独立地为1～1000的整数，n3为1～1000的整数，且3≤n1+n2+n3≤2000；Y为具有1至20个原子的碳原子支化中心或氮原子支化中心，采用共价键与L1、L2、L3相连接；L1、L2、L3各自独立地为连接支化中心Y与聚乙二醇单元的含有在光照、酶、酸性或碱性条件下稳定存在的醚基、硫醚基、酰胺基、双键、叄键、仲胺基或叔胺基等基团的具有1至20个碳原子的二价烃基；L4为连接基团，为聚乙二醇衍生物与相应磷脂化合物发生化学反应形成的残基，L4没有特别限定，可选自以下基团之一：
Figure BDA0000477507130000092
Figure BDA0000477507130000093
Figure BDA0000477507130000101
其中，Z为亚烷基或含有酯基、尿烷基、酰胺基、醚基、硫醚、双键、叄键、碳酸酯基、仲胺基或叔胺基的亚烷基；
g为0或1；
f为2至10的整数；
M为氢原子或阳离子；
R为疏水性脂质残基，没有特别限定，可以为脂肪烃残基，二酰基甘油脂质残基，单酰基甘油脂质残基，含有鞘氨醇类骨架的脂质残基或类固醇残基中的一种或其复合脂质的残基。
还公开了含通式（3）所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物的脂质体，所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物占该脂质体总质量的1%～30%，优选为3%-20%，更优选为3%-15%。
含通式（3）所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物的脂质体中，其封装有生物相关物质。所述生物相关物质没有特别限定，包括但不限于多肽、蛋白质、酶、小分子药物、核苷、核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、核酸、多糖、甾体化合物、脂类化合物、糖脂、糖蛋白或类固醇等，可为上述一种或一种以上的生物相关物质。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
（1）本发明采用磷脂与支化聚乙二醇进行连接，所述支化聚乙二醇的脂质衍生物仍具有更好的形成脂质体的特性；
（2）相对于相同分子量的线性聚乙二醇，由于具有特殊的分子形态，带支链的聚乙二醇可以在脂质体的表层形成一层伞形的保护层，增大了周围的空间位阻，比线性聚乙二醇能更有效地阻止体内其它大分子物质对药物的进攻，减少了脂质体被RES摄取、被酶水解，更延长了药物在体内的作用时间，使形成的脂质体具有更长的生物体内代谢半衰期；
（3）在达到相同保护效果的脂质体中，支化聚乙二醇的脂质衍生物的比例比直链聚乙二醇化的脂质体衍生物所占比例小，更有利于形成的脂质体的稳定性，更有效防止所包载药物的泄露；
（4）本发明所述脂质膜结构体中封装的生物相关物质在低pH值（优选pH≤6.8，更优选pH≤6.5，进一步优选pH≤6.0）时释放，该pH敏感的特性，使得脂质膜结构体可以选择性地在肿瘤等靶部位聚集释放，可增强药物递送的被动靶向性，进一步避免RES清除及溶酶体的降解作用，增加组织对药物的摄取量，进而提高治疗效果，并降低毒副作用。
具体实施方式
一种支化聚乙二醇的磷脂类衍生物，其通式如式（1）所示：
Figure BDA0000477507130000111
其中，X1、X2各自独立地为具有1至20个碳原子的烃基，且在同一分子可以相同也可以不同。其中包含但不局限于甲基、乙基、丙基、丙烯基、丙炔基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、庚基、2-乙基己基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基、苄基或丁基苯基；优选为具有1至10个碳原子的烃基；更优选为具有1至5个碳原子的烃基；所述X1、X2最优选为甲基。
其中，n1、n2表示两个分支链的聚合度，独立地为1～1000的整数，其中，所述n1、n2优选为10～800的整数。所述n1、n2更优选为10～200的整数。所述n1、n2更优选为10～25的整数。
其中，n3表示主链的聚合度，为0～1000的整数，其中，所述n3优选为0或10～800的整数。所述n3更优选为0或10～200的整数。其中，所述n3更优选为0或10～25的整数。
其中，Y为支化中心，具有1至20个原子，采用共价键与L1、L2、L3相连接，其中心的支化原子可以为碳原子或氮原子。当Y支化中心为碳原子时，其结构表示如下：
Figure BDA0000477507130000112
其中，R1为氢原子、具有1至20个碳的烃基或含有杂原子基团的具有1至20个碳的烃基。R1优选为氢原子、或为具有1至20个碳的烃基，或为含酯基、尿烷基、酰胺基、醚基、硫醚、双键、叄键、碳酸酯基、仲胺基或叔胺基的具有1至20个碳的烃基。R1的结构没有特别限定，可以为直链、支链、环状或含环状结构。
其中，Y支化中心也可以为氮原子，其结构表示如下：
其中，L1、L2、L3为支化中心Y与聚乙二醇单元的连接基团，没有特别限定。所述L1、L2、L3可以是直链或带支链基团。所述L1、L2、L3优选为具有1至20个碳原子的烃基。
其中，所述L1、L2、L3优选为可稳定存在的基团，优选为含有在光照、酶、酸性或碱性条件下稳定存在的醚基、硫醚基、酰胺基、双键、叄键、仲胺基或叔胺基等基团的二价烃基。
其中，L4为连接基团，为聚乙二醇衍生物与相应磷脂化合物发生化学反应形成的残基。。L4没有特别限定，优选来自氨基、酯基、碳酸酯基、三氮唑、异恶唑、醚基、酰胺基、亚酰胺基、亚胺基、仲氨基、叔胺基、硫酯基、硫醚基、二硫基、尿烷基、硫代碳酸酯基、磺酸酯基、磺酰胺基、氨基甲酸酯基、酪氨酸基、半胱氨酸基或组氨酸基的二价烷基。
其中，L4优选为
Figure BDA0000477507130000121
Figure BDA0000477507130000122
Figure BDA0000477507130000131
其中Z为亚烷基或含有酯基、尿烷基、酰胺基、醚基、硫醚、双键、叄键、碳酸酯基、仲胺基或叔胺基等基团的亚烷基；
g为0或1；
f为2至10的整数。
其中，M为氢原子或阳离子；
其中，阳离子优选钠离子，铵根离子；最优选钠离子。
其中，R为疏水性脂质的残基。
所述疏水性脂质没有特别限定，可为脂肪烃、甘油脂、鞘脂、糖脂、甘油糖脂、类固醇等当中的一种或其复合脂质。
当R为脂肪烃的残基，可以是饱和或不饱和，可以是直链状、支链状、环状、梳状、超支化状、树枝状等结构。其碳原子数为4～50。对于该脂肪烃的残基没有特别限定，可以来自丁基、叔丁基、戊基、庚基、2-乙基己基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、异硬脂酰基、十八烯基、十八碳二烯基、十九烷基、二十烷基、二十二烷基、二十二烷烯基、二十四烷基、二十六烷基、二十八烷基、三十烷基、三十二烷基等。
对于脂肪烃的残基，相应的脂肪烃没有特别限定，例如可以为脂肪醇、脂肪酸、脂肪胺及其衍生物，优选脂肪醇和脂肪酸，进一步优选脂肪醇。例如，作为脂肪族醇可以选自丁醇、叔丁醇、戊醇、庚醇、2-乙基己醇、辛醇、癸醇、十二烷醇、十四烷醇、十六烷醇、十七烷醇、十八烷醇、十八烯醇、十八二烯醇、十八三烯醇、二十烷醇、二十二烷醇、二十二烯醇、二十四烷醇、二十六烷醇、二十八烷醇、三十烷醇、三十二烷醇等，优选相应的脂肪族单醇。例如，作为脂肪酸可以选自丁酸、叔丁酸、戊酸、庚酸、2-乙基己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、反油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生四烯酸、山嵛酸、芥酸、木蜡酸、蜡酸、二十八烷酸、蜂花酸、虫漆蜡酸等，优选相应的脂肪族单羧酸。例如，作为脂肪胺可以选自丁胺、叔丁胺、戊胺、庚胺、2-乙基己胺、辛胺、癸胺、十二烷胺、十四烷胺、十六烷胺、十七烷胺、十八烷胺、十八烯胺、十八二烯胺、十八三烯胺、二十烷胺、二十二烷胺、二十二烯胺、二十四烷胺、二十六烷胺、二十八烷胺、三十烷胺、三十二烷胺等，优选相应的脂肪族单胺。
对于甘油脂的残基，甘油脂可以为二酰基甘油脂。基于该甘油脂质残基的磷脂作为甘油磷脂，例如可以为磷脂酰乙醇胺、磷脂酸、磷脂酰甘油、磷脂酰氨基酸等。甘油磷脂中多个存在的酰基的碳数各自独立，碳原子数为4～50。该酰基可以相同或不同，可以是饱和或不饱和，可以是直链状或支链状。另外，对酰基的种类也没有特别限定，通常可以优选使用来源于脂肪酸的酰基。具体举例如，丁酸、叔丁酸、戊酸、庚酸、2-乙基己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、反油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生四烯酸、山嵛酸、芥酸、木蜡酸、蜡酸、二十八烷酸、蜂花酸、虫漆蜡酸等脂肪酸来源的酰基。
当R为甘油脂的残基，甘油脂也可以为单酰基甘油脂。基于该甘油脂质残基的磷脂作为溶血磷脂，，其中存在的酰基的碳数为4～50。该酰基可以是饱和或不饱和，可以是直链状或支链状。另外，对酰基的种类也没有特别限定，通常可以优选使用来源于脂肪酸的酰基。具体举例如，丁酸、叔丁酸、戊酸、庚酸、2-乙基己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、反油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生四烯酸、山嵛酸、芥酸、木蜡酸、蜡酸、二十八烷酸、蜂花酸、虫漆蜡酸等脂肪酸来源的酰基。
当R为鞘脂的残基，该鞘脂残基含有鞘氨醇骨架。基于该鞘脂残基的鞘磷脂可以为神经鞘磷脂及其衍生物，例如磷酸乙醇胺神经酰胺、磷酸甘油神经酰胺、磷酸甘油磷酸酯神经酰胺等。对于与鞘氨醇结合的脂肪酸，可以为丁酸、叔丁酸、戊酸、庚酸、2-乙基己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、反油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生四烯酸、山嵛酸、芥酸、木蜡酸、蜡酸、二十八烷酸、蜂花酸、虫漆蜡酸等。
当R为类固醇的残基，该类固醇可以为胆固醇、谷甾醇、二氢胆固醇、麦角固醇、羊毛留醇、维生素D、胆汁醇、性激素等及其衍生物。优选胆固醇及其衍生物。
基于该疏水性脂质残基所形成的磷脂可以为天然磷脂，也可以为人工合成磷脂。例如，天然磷脂可以为脑磷脂、卵磷脂、鞘磷脂、溶血磷脂等，人工合成磷脂可以为磷脂酰乙醇胺，如二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺等。
其中，当n3为0，q为0且Y不为2～10个氨基酸残基的聚氨基酸残基，则所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物通式如式（2）所示：
Figure BDA0000477507130000141
其中，X1、X2、n1、n2、Y、L1、L2、L4、M、R与上述相同，在此不一一赘述。
其中，当n3为1～1000，则所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物通式如式（3）所示：
Figure BDA0000477507130000151
其中，其中，X1、X2、n1、n2、Y、L1、L2、L3、L4、M、R与上述相同，在此不一一赘述。
制备方法：
所述单一官能化的支化聚乙二醇（1）可由聚乙二醇衍生物（4）和磷脂化合物（5）经过一步或多步反应得到。
Figure BDA0000477507130000152
其中，其中所述R8、R9为功能性基团，包括但不仅限于以下几类：
类A：
Figure BDA0000477507130000153
类B：
Figure BDA0000477507130000154
类C：
类D：
Figure BDA0000477507130000161
类E：
Figure BDA0000477507130000162
类F：
Figure BDA0000477507130000163
类G：
Figure BDA0000477507130000164
类H：
Figure BDA0000477507130000165
上述类A～类H中，Z为聚乙二醇和功能性基团之间的共价键连接基团，没有特别限制；g为0或1。其中，Z可以为亚烷基或含有酯基、尿烷基、酰胺基、醚基、双键、叄键、碳酸酯基、仲胺基或叔胺基等基团的亚烷基。其中，Z优选为亚烷基或含醚键、酰胺键、仲氨基的亚烷基。所述亚烷基优选为亚甲基、1,2-亚乙基、1,3-亚丙基、1,2-亚丙基、异亚丙基、亚丁基、亚戊基以及亚己基。
上述类B中，Y为具有1至10个碳原子的烃基或包括氟原子的具有1至10个碳原子的烃基。其中，所述Y优选为甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、乙烯基、苯基、苄基、对甲基苯基、三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-（三氟甲氧基）苯基。其中，所述Y优选为甲基、对甲基苯基、2,2,2-三氟乙基、三氟甲基、乙烯基。
上述类D中，所述W为卤原子。所述W优选为Br或Cl。
上述类G中，所述Q没有特别限制，只要有助于不饱和键电子的诱导、共轭效应即可。当Q处于环上时，可以是一个或多个。所述Q优选为氢原子、卤素、卤代烷、烷氧基、羰基化合物、硝基化合物。所述Q优选为氢原子、氟原子、三氟甲基或甲氧基。
上述类G中，所述M是环上连接Z的原子，所述M可以是碳原子或氮原子。
L4为R8、R9的反应残基。
对本发明的支化聚乙二醇的磷脂类衍生物的制备方法进行说明，本发明的支化聚乙二醇的磷脂类衍生物的制备方法没有特别限定，作为举例说明可以通过以下的方法进行制备：含反应性基团的脂肪烃、甘油脂、鞘脂、糖脂、甘油糖脂、类固醇等疏水性脂质残基的磷脂化合物与含反应性官能基团的支化聚乙二醇衍生物反应。
1、当L4中含有酰胺键（-CONH-）时，可以通过采用以下方式进行合成：
1.1采用末端含有氨基的聚乙二醇衍生物与末端含有羧酸的磷脂化合物或末端含有氨基的磷脂化合物与末端含有羧酸的聚乙二醇衍生物进行缩合反应得到。
其中，并不特别限制缩合剂，但优选N,N’-二环己基羰二亚胺（DCC），1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU），苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU），最优选为DCC。而一般缩合剂的用量为羧酸摩尔当量的1至20倍，优选为5-10倍，这个反应可以加入适当的催化剂（如4-二甲基氨基吡啶）。
溶剂可以是无溶剂或非质子性溶剂，非质子性溶剂包括甲苯、苯、二甲苯、乙腈、乙酸乙酯、***、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺，优选四氢呋喃、二氯甲烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺。
碱包括一般为有机碱（如三乙胺、吡啶、4-二甲基氨基吡啶、咪唑或二异丙基乙基胺），优选三乙胺、吡啶。碱的用量为羧酸的摩尔当量的1至50倍，优选为1至10倍，更优选为2至3倍。
反应温度为0至200℃，优选0至100℃，更优选为25至50℃，反应时间优选为10分钟至48小时，更优选为30分钟至24小时。得到的产物可通过萃取、柱层析、重结晶、吸附处理、沉淀、反沉淀、薄膜透析或超临界提取等纯化方法加以纯化。
1.2采用末端含有氨基的聚乙二醇衍生物与磷脂的羧酸衍生物或末端含有氨基的磷脂化合物与聚乙二醇羧酸衍生物进行反应得到。其中，羧酸衍生物为能与胺基反应生成酰胺键的活性中间体，优选为酰卤、羧酸的琥珀酰亚胺活性酯。
一般反应溶剂可以是无溶剂或非质子性溶剂，非质子性溶剂包括甲苯、苯、二甲苯、乙腈、乙酸乙酯、***、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺，优选四氢呋喃、二氯甲烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺。
碱包括一般为有机碱（如三乙胺、吡啶、4-二甲基氨基吡啶、咪唑或二异丙基乙基胺），优选三乙胺、吡啶。碱的用量为羧酸衍生物的1至50倍，优选为1至10倍，更优选为2至3倍。
反应温度为0至200℃，优选0至100℃，更优选为25至80℃，反应时间优选为10分钟至48小时，更优选为30分钟至24小时。得到的产物可通过萃取、柱层析、重结晶、吸附处理、沉淀、反沉淀、薄膜透析或超临界提取等纯化方法加以纯化。
2、当L4中含有尿烷键（-OCONH-）时，可以通过采用以下方式进行合成：采用末端含有氨基的聚乙二醇衍生物与末端含有活性碳酸酯的磷脂化合物或末端含有氨基的磷脂化合物与末端含有活性碳酸酯的聚乙二醇衍生物进行缩合反应得到。
其中活性甲酸酯可以为可以与氨基发生反应得到尿烷键的衍生物，包括但不限于琥珀酰亚胺碳酸酯（SC）、对硝基苯酚碳酸酯（NPC）、2，4，6-三氯苯酚碳酸酯、咪唑碳酸酯、N-羟基苯并三氮唑碳酸酯，优选琥珀酰亚胺碳酸酯（SC）、对硝基苯酚碳酸酯（NPC）。
一般反应溶剂可以是无溶剂或非质子性溶剂，非质子性溶剂包括甲苯、苯、二甲苯、乙腈、乙酸乙酯、***、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺，优选四氢呋喃、二氯甲烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺。
碱包括一般为有机碱（如三乙胺、吡啶、4-二甲基氨基吡啶、咪唑或二异丙基乙基胺），优选三乙胺、吡啶。碱的用量为羧酸衍生物的1至50倍，优选为1至10倍，更优选为2至3倍。
反应温度为0至200℃，优选0至100℃，更优选为25至80℃，反应时间优选为10分钟至48小时，更优选为30分钟至24小时。得到的产物可通过萃取、柱层析、重结晶、吸附处理、沉淀、反沉淀、薄膜透析或超临界提取等纯化方法加以纯化。
3、当L4中含有酯键（-OCO-）时，可以采用末端含有羟基的聚乙二醇衍生物与末端含有羧酸的磷脂化合物或末端含有羟基的磷脂化合物与末端含有羧酸的聚乙二醇衍生物进行缩合反应得到。
溶剂可以是无溶剂或非质子性溶剂，非质子性溶剂包括甲苯、苯、二甲苯、乙腈、乙酸乙酯、***、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺，优选四氢呋喃、二氯甲烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺。
其中，并不特别限制缩合剂，但优选N,N’-二环己基羰二亚胺（DCC），1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDC·HCl），2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯（HATU），苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU），最优选为DCC。而一般缩合剂的用量为羧酸摩尔当量的1至20倍，优选为5-10倍，这个反应可以加入适当的催化剂（如4-二甲基氨基吡啶）。
溶剂可以是无溶剂或非质子性溶剂，非质子性溶剂包括甲苯、苯、二甲苯、乙腈、乙酸乙酯、***、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺，优选四氢呋喃、二氯甲烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺。
碱包括一般为有机碱（如三乙胺、吡啶、4-二甲基氨基吡啶、咪唑或二异丙基乙基胺），优选三乙胺、吡啶。碱的用量为羧酸的摩尔当量的1至50倍，优选为1至10倍，更优选为2至3倍。
反应温度为0至200℃，优选0至100℃，更优选为25至80℃，反应时间优选为10分钟至48小时，更优选为30分钟至24小时。得到的产物可通过萃取、柱层析、重结晶、吸附处理、沉淀、反沉淀、薄膜透析或超临界提取等纯化方法加以纯化。当L4中含有仲胺键（-CH2NHCH2-）时，可以采用末端含有醛基的聚乙二醇衍生物与末端含有胺酸的磷脂化合物或末端含有醛基的磷脂化合物与末端含有胺酸的聚乙二醇衍生物进行缩合、还原反应得到。
反应温度为0至200℃，优选0至100℃，更优选为25至80℃，反应时间优选为10分钟至48小时，更优选为30分钟至24小时。得到的产物可通过萃取、柱层析、重结晶、吸附处理、沉淀、反沉淀、薄膜透析或超临界提取等纯化方法加以纯化。
4、当L4中含有仲胺键（-CH2NHCH2-）时，可以采用末端含有醛基的聚乙二醇衍生物与末端含有胺酸的磷脂化合物或末端含有醛基的磷脂化合物与末端含有胺酸的聚乙二醇衍生物进行缩合、还原反应得到。
反应一般在缓冲溶液中进行，优选使用乙酸缓冲溶液、磷酸缓冲溶液、Tris酸缓冲溶液、硼酸缓冲溶液等，另外为了更好的助溶，反应体系中还可以进一步添加不参与反应的乙腈、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺等有机溶剂，反应的PH值为2～8.5，优选为3～7。
反应温度为0至200℃，优选0至100℃，更优选为25至80℃，反应时间优选为10分钟至48小时，更优选为30分钟至24小时。当不存在还原剂时，则形成希夫碱。
其中还原剂没有特别限制，优选硼氢化钠、氢化铝锂、氰基硼氢化钠、硼氢化锂、硼氢化钾等，更优选氰基硼氢化钠，一般氰基硼氢化钠的用量为醛基物质的量的1-20倍，优选3-5倍。
得到的产物可通过萃取、柱层析、重结晶、吸附处理、沉淀、反沉淀、薄膜透析或超临界提取等纯化方法加以纯化。
5、当L4中含有硫醚键（>CHS-）时，可以采用末端含有巯基的聚乙二醇衍生物与末端含有马来酰亚胺的磷脂化合物或末端含有巯基的磷脂化合物与末端含有马来酰亚胺的聚乙二醇衍生物进行缩合、还原反应得到。
反应一般在缓冲溶液中进行，优选使用乙酸缓冲溶液、磷酸缓冲溶液、Tris酸缓冲溶液、硼酸缓冲溶液等，另外为了更好的助溶，反应体系中还可以进一步添加不参与反应的乙腈、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺等有机溶剂，反应的PH值为2～8.5，优选为3～7。
反应温度为0至200℃，优选0至100℃，更优选为25至80℃，反应时间优选为10分钟至48小时，更优选为30分钟至24小时。
得到的产物可通过萃取、柱层析、重结晶、吸附处理、沉淀、反沉淀、薄膜透析或超临界提取等纯化方法加以纯化。
6、当L4中含有三氮唑基团时，可以采用含有炔基的聚乙二醇衍生物与末端含有叠氮的磷脂化合物或含有炔基的磷脂化合物与末端含有叠氮的聚乙二醇衍生物进行反应得到。
溶剂可以是无溶剂或非质子性溶剂，非质子性溶剂包括甲苯、苯、二甲苯、乙腈、乙酸乙酯、***、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、氯仿、二氯甲烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺，优选四氢呋喃、二氯甲烷、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺。
反应温度为0至200℃，优选25至150℃，其中可以采用光照、微波、加入催化剂、加热等方法促进反应的进行。其中光照的优选紫外光、红外光、远红外光；催化剂优选一价铜催化剂（I）。反应时间优选为10分钟至48小时，更优选为30分钟至24小时。
得到的产物可通过萃取、柱层析、重结晶、吸附处理、沉淀、反沉淀、薄膜透析或超临界提取等纯化方法加以纯化。
本发明的“脂质膜结构体”是指由双亲性脂质或/及其衍生物的亲水基团与水相接触形成的粒子。
对于本发明的脂质膜结构的形态没有特别限定。例如，可以为空心或实心的封闭形态，也可以为非封闭的膜形态。例如，可以为脂质体（或脂质囊泡）、胶束、混合胶团、复合型乳剂、层状结构物等形态，优选其形态为脂质体。例如，可以为干燥状态、可以分散在水性溶剂中、也可以为分散于水性溶剂后进一步干燥或冻结的状态。
对于干燥的脂质混合物形态，例如，可将脂质成分先溶解于有机溶剂中，然后用冷冻干燥法、旋转蒸发仪减压干燥法或喷雾干燥法进行干燥，所述有机溶剂可以为***、三氯甲烷等。
对于分散于水性溶剂中的形态，可以为囊泡或脂质体、胶束、混合胶团、复合型乳剂、层状结构物等，优选脂质体，进一步优选单室脂质体。
对于分散于水相后进一步冻结的状态，可以采用冷冻干燥法、旋转蒸发仪减压干燥法或喷雾干燥法等方法进行干燥。对于分散于水性溶剂后进一步冻结的状态，可在溶剂凝固点以下保存，优选-20℃及以下，进一步优选为-80℃及以下，更优选为液氮中保存。
对于本发明的脂质膜结构体，除支化聚乙二醇修饰的磷脂衍生物外，还含有未用聚乙二醇修饰的脂质成分。
其中，本发明的支化聚乙二醇修饰的磷脂衍生物的质量百分数为0.1%～30%，优选1%～30%，再优选3%～25%，更优选3%～20%，进一步优选为3%-15%。
所述未修饰的脂质成分可以为含4-50个碳原子的酰基化合物、脂肪酰甘油酯、鞘脂、甘油磷脂、糖脂、甘油糖脂、类固醇等。可以为天然脂质或人工合成脂质。所述未用聚乙二醇修饰的脂质成分，可以为上述脂质成分中的单一组分，也可以为两种或两种以上脂质成分的混合脂质。
对于所述含4-50个碳原子的酰基化合物，可以是饱和或不饱和。其结构没有特别限定，例如可以是直链状、支链状、环状、梳状、超支化状、树枝状等结构。
对于所述脂肪酰甘油酯，可以为单酰甘油酯或二酰甘油酯或三酰甘油酯，优选三酰甘油酯，即甘油三酯。
对于所述鞘脂，具有鞘氨醇骨架，例如可以为鞘磷脂、糖鞘脂等。优选鞘磷脂。
对于所述甘油磷脂，可以为二酰基甘油磷脂，也可以为单酰基甘油磷脂。例如可以为脑磷脂、卵磷脂、溶血磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰氨基酸等。优选卵磷脂、磷脂酰乙醇胺等。
上述含4-50个碳原子的酰基化合物、脂肪酰甘油酯、鞘脂、甘油脂、甘油磷脂、磷脂酰乙醇胺等结构中的酰基，优选8-24个碳原子的酰基化合物，进一步优选8-24个碳原子的酰基化合物。例如，所述酰基可以为丁酸、叔丁酸、戊酸、庚酸、2-乙基己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、反油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生四烯酸、山嵛酸、芥酸、木蜡酸、蜡酸、二十八烷酸、蜂花酸、虫漆蜡酸等脂肪酸来源的酰基，优选辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、反油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生四烯酸、山嵛酸、芥酸、木蜡酸等来源的酰基，进一步优选月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、反油酸、亚油酸、亚麻酸、花生酸、花生四烯酸、山嵛酸、芥酸、木蜡酸等来源的酰基。
对于所述类固醇，例如可以为胆固醇、谷甾醇、二氢胆固醇、麦角固醇、羊毛留醇、维生素D、胆汁醇、性激素等及其衍生物。优选胆固醇及其衍生物，通常用作膜稳定剂，例如琥珀酸胆固醇酯等。胆固醇半琥珀酸酯是一种具有pH敏感性的辅料，在中性及碱性条件下，具有稳定脂质膜结构的作用，起到缓释效果，而在酸性条件下，如pH≤6.8，更优选pH≤6.5，进一步优选pH≤6.0，则促进药物的释放，显示出突释效果，由此可用来增加药物对肿瘤等靶部位的选择性，增强靶向性，提高疗效。
对于所述天然脂质，例如可以为脑磷脂、卵磷脂、溶血磷脂、鞘磷脂、大豆磷脂酰乙醇胺、卵黄磷脂酰乙醇胺、胆固醇等。对于所述人工合成脂质，例如可以为磷脂酰甘油、含鞘氨醇骨架的磷脂、磷脂酰氨基酸等。优选磷脂酰甘油，例如可以为磷脂酰乙醇胺，如二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺、N-戊二酰基-磷脂酰乙醇胺、加氢大豆磷脂酰乙醇胺、加氢卵黄磷脂酰乙醇胺等。
对于所述两种或两种以上脂质成分的混合脂质，例如可以为卵磷酯/胆固醇/磷脂酰甘油的组合。其混合的摩尔比例为15-85/5-65/1-50(%mol)、优选25-70/10-50/10-30(%mol)。
对于分散于水性溶剂中的脂质膜结构体，对其尺寸没有特别限定。以动态光散射法测定的粒径为例进行说明。例如，为脂质体或乳液时，粒径范围优选为20nm～10μm，更优选50nm～5μm。例如，当为胶束形态时，粒径范围优选为5nm～150nm，更优选5nm～100nm。例如，当为层状结构物时，单层厚度优选为5nm～15nm，更优选5nm～10nm。
对于水性溶剂的种类没有特别限定，只要将本发明的支化聚乙二醇修饰的磷脂衍生物分散于其中时可获得稳定的脂质膜结构体。例如可以为Tris缓冲液、磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、硼酸缓冲液、磷酸缓冲生理盐水、生理盐水、细胞培养用培养基等，此外还可以加入葡萄糖、乳糖、蔗糖等糖水溶液、甘油、丙二醇等多元醇、L-谷氨酰胺等氨基酸水溶液、可溶解于其中的化学因子等。采用分散于水性溶剂中的形式进行保存时，出于物理稳定性等方面的考虑，为了长期稳定地进行保存，优选尽量减少水性溶剂中的电解质，并尽量去除溶解氧，例如可以采用氮气起泡法。采用干燥状态保存时，优选对糖水溶液或多元醇水溶液分散的脂质膜结构体进行干燥，可以采用冷冻干燥法、喷雾干燥法等，可长期保存。
对水性溶剂的浓度没有特别限定。例如，对于糖水溶液，优选为2%～15%(w/v)，进一步优选为5%～10%(w/v)。对于多元醇溶液，优选1%～8%(w/v)，进一步优选为2%～3%(w/v)。对于缓冲溶液，优选5mM～50mM，进一步优选为10mM～25mM。
对于水性溶剂中脂质膜结构体的浓度没有特别限定，经支化聚乙二醇修饰的磷脂衍生物及未经修饰的脂质成分，统称为脂质混合物，其总浓度优选为0.1mM～500mM，更优选为1mM～200mM，进一步优选为2mM～100mM。
对于脂质膜结构体分散于水性溶剂的获得方式没有特别限定。例如可以通过将上述干燥的脂质混合物加入到水性溶剂中，然后进行乳化而制得，乳化方法可以为超声法、匀浆机法、高压喷射乳化机法等方式。
对于脂质膜结构体分散于水性溶剂的形态，没有特别限定，例如可以为脂质体（或脂质囊泡）、胶束、混合胶团、复合型乳剂、层状结构物等形态，优选其形态为脂质体。
所述分散于水溶剂的脂质体，其制备方法没有特别限定，例如可以采用薄膜分散法、反相蒸发法、溶剂注入法、冻干法、二次乳化法、挤出法等。当采用挤出法时，有利于获得小且具有均一粒径的脂质体。
对于将分散于水性溶剂的脂质膜结构体或脂质体进一步进行干燥的方法，没有特别限定，例如可以采用冷冻干燥法或喷雾干燥法。相应的水性溶剂，如上所述，可以使用糖水溶液或多元醇水溶液，其中糖水溶液优选蔗糖水溶液、乳糖水溶液。对分散于水性溶剂的脂质膜结构体进行干燥，可以长期保存。此外，在该干燥的脂质膜结构体中加入生物相关物质的水溶液，可实现脂质混合物的高效水合，可以使生物活性物质保持于脂质膜结构体方面，具有良好的效率。
所述脂质膜结构体，封装有生物相关物质。
所述脂质体形态的脂质膜结构体，封装有生物相关物质。
所述脂质膜结构体及脂质体封装生物相关物质的方法并无特别限定，包括但不限定于众所周知的封装方法，例如脂质体的形成和生物相关物质的装载在同一步骤完成，对应被动封装技术，又例如也可先形成空白脂质体，再借助特定的梯度（如pH梯度，或硫酸铵梯度）来实现生物相关物质的装载，对应主动封装技术。
所述被动封装技术无特别限定，例如，可基于干燥的脂质膜结构体或干燥粉末，例如薄膜分散法、有机溶剂冻干法、喷雾干燥法、流化床包衣法、单相溶液冻干法等；可基于乳剂，例如反相蒸发法、二次乳化法等；可基于混合胶团，例如交叉流透析法等；可基于有机溶剂（如乙醇）、磷脂或磷脂衍生物、水三相混合物，例如乙醇注入法、Alza公司的制备技术、交叉流注射技术等。
所述主动封装技术无特别限定。通常可以采取以下步骤：（1）空白脂质体的制备；（2）特定梯度的创造，可通过透析、柱层析等方式实现；（3）在合适的温度下，将膜内外已形成梯度的空白脂质体与待包封的生物相关物质孵育，以完成装载。例如，pH值梯度法、硫酸铵梯度法、醋酸钙梯度法、内碱外酸的pH值梯度法等。
所述脂质膜结构体及脂质体，其封装的生物相关物质在低pH值时释放，优选pH≤6.8，更优选pH≤6.5，进一步优选pH≤6.0。
对于构成脂质膜结构体及脂质体的未用聚乙二醇修饰的脂质成分中所用的磷脂成分，例如鞘磷脂、甘油磷脂、磷脂酰氨基酸等，当使用酸性磷脂时，在低pH值下，由于质子化导致脂质膜表面电荷消失而变得不稳定，由此赋予脂质膜结构体pH敏感性，可以在靶点部位尤其是肿瘤部位高效释放在脂质膜结构体内封装的生物相关物质。例如，对于亲水部分含有末端羧基的酸性磷脂，当pH≤6.8，优选pH≤6.5，更优选pH≤6.0时，脂质膜结构体由于质子化导致不稳定。所述酸性磷脂，可以通过相应的磷脂化合物与羧酸酐反应进行制备。所述酸性磷脂优选甘油磷脂，更优选二油酰基磷脂酰乙醇胺（DOPE）。
对于构成脂质膜结构体及脂质体的支化聚乙二醇修饰的磷脂衍生物，当L4断裂导致支化聚乙二醇脱离后，若生成的磷脂化合物为酸性磷脂，也可以使脂质膜结构体具有pH敏感性。例如，对于采用末端含羧基的磷脂化合物与末端含氨基或羟基的支化聚乙二醇衍生物反应生成的聚乙二醇化脂质衍生物，支化聚乙二醇部分脱离后，由于亲水性保护层的消失，脂质膜结构体表面产生裸露的羧基，因而赋予其pH敏感性。
对于未经聚乙二醇修饰的脂质成分，当使用甘油磷脂，特别是二油酰基磷脂酰乙醇胺时，对于支化聚乙二醇修饰的磷脂衍生物，优选使用相应的二油酰基磷脂酰乙醇胺作为原料制备的支化聚乙二醇修饰的磷脂衍生物。脂质体的主要构成成分为二油酰基磷脂酰乙醇胺时，二油酰基磷脂酰乙醇胺在低pH的条件下，如pH6.8以下，优选pH6.5以下，更优选pH6.0以下易于形成六角相或反相胶束结构，发生聚集或融合，在支化聚乙二醇的保护层脱离后，脂质膜结构体转变为六角相而释放药物，可体现出pH响应性。
对于水性溶剂中的脂质体形态，其相变温度没有特定限制，所述相变温度即脂质体膜发生凝胶-液晶相转变的温度。当所述脂质体的相变温度高于正常生理温度，优选39-42℃时，可以采用肿瘤热疗法，利用物理能量在组织中沉淀而产生热效应，使肿瘤组织温度上升到相变温度之上，促使脂质双分子层由凝胶态向液晶态转变，使得脂质体膜通透性增加，进而在肿瘤部位高效释放药物，杀死癌细胞而不损伤正常组织，加强被动靶向效果。制备温度敏感性脂质体的方法优选反相蒸发法。一般含有二棕榈酰磷脂酰胆碱（DPPC）为主要膜材，对应热疗温度40～43℃。也可以加入适量的溶血磷脂单棕榈酰磷脂酰胆碱（MPPC）或单硬脂酰磷脂酰胆碱（MSPC），使得脂质体相变温度轻微降低，制备更适合临床的温和的热疗温度39～42℃。
所述包封于脂质膜结构体及脂质体的生物相关物质，对其亲疏水性无特别限定，可以为脂溶性或亲脂性，也可以为水溶性。
所述包封于脂质膜结构体及脂质体的生物相关物质，对其种类没有特别限定，包括生物活性物质和改性的生物活性物质，具体包括但不仅限于以下物质：多肽、蛋白质、酶、小分子药物、基因相关物质（核苷、核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、核酸）、多糖、类固醇、甾体化合物、糖脂、糖蛋白、脂类化合物、染料、神经传递蛋白、维生素。
（1）多肽和蛋白质
蛋白质和多肽没有特别限定，可举例如下：激素，如垂体激素、甲状腺激素、雄性激素、***以及肾上腺素等；血清蛋白，如血红蛋白以及血液因子等；免疫球蛋白，如IgG、IgE、IgM、IgA以及IgD等；细胞因子，如白介素、干扰素、粒细胞集落刺激因子、巨噬细胞集落刺激因子、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、血小板源生长因子、磷脂酶激活蛋白、胰岛素、高血糖素、胰高血糖素样肽及其类似物、凝集素、蓖麻毒蛋白、肿瘤坏死因子、表皮细胞生长因子、血管内皮生长因子、神经生长因子、骨生长因子、***、肝素结合生长因子、肿瘤生长因子、胶质细胞系源神经营养因子、巨噬细胞分化因子、分化诱导因子、白血病抑制因子、双调节素、生长调节素、促红细胞生长素、血细胞生长素、凝血细胞生长素以及降钙素；酶，如蛋白水解酶、氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂解酶、异构酶、连接酶、天冬胺酶、精氨酸酶、精氨酸脱氨酶、腺苷脱氨酶、超氧化物歧化酶、内毒素酶、过氧化氢酶、糜蛋白酶、脂肪酶、尿酸酶、弹性酶、链激酶、尿激酶、尿激酶原、腺苷二磷酸酶、酪氨酸酶、胆红素氧化酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖酶以及葡萄苷酸酶、降纤酶；单克隆或多克隆抗体及其片段；多聚氨酸，如聚L-赖氨酸，聚D-赖氨酸等；疫苗、抗原以及病毒，如乙型肝炎疫苗、疟疾疫苗、黑素瘤疫苗、HIV-1疫苗等。
（2）基因相关物质
基因相关物质没有特别限定，可列举如下：核苷、核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、核酸、DNA、RNA等。
（3）小分子药物
小分子药物没有特别限定，优选抗癌或抗肿瘤药物和抗真菌药物。抗癌或抗肿瘤药物，优选紫杉醇及其衍生物、阿霉素或盐酸阿霉素、柔红霉素、顺铂、道诺霉素、丝裂霉素、长春新碱、长春瑞滨、表柔比星、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、阿克拉霉素、伊达霉素、博来霉素、吡柔比星、培洛霉素、万古霉素、阿米卡星、喜树碱及其衍生物、羟基喜树碱、伊立替康、SN38、盐酸拓扑替康、奥沙利铂、米托蒽醌、全反式维A酸、阿糖胞苷等。抗真菌药物，优选两性霉素B、庆大霉素、制霉菌素、氟代胞嘧啶、咪康唑、氟康唑、伊曲康唑、酮康唑以及多肽抗真菌药物。
（4）维生素
维生素是人和动物为维持正常的生理功能而必需从食物中获得的一类微量有机物质，在人体生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用。具体包括但不限于维生素A、维生素B、维生素C、维生素E及维生素K等。
（5）糖类
糖类是构成细胞和器官的主要成分，没有特别限制，主要包括糖脂、糖蛋白、糖原等。糖脂在生物体分布较广，主要包含糖基酰甘油和糖鞘脂两大类，具体包含神经酰胺，脑苷脂，鞘氨醇、神经节苷脂以及甘油基糖脂等；糖蛋白是分支的寡糖链与多肽共价相连所构成的复合糖，通常分泌到体液中或是膜蛋白的组成成分，具体包括转铁蛋白、血铜蓝蛋白、膜结合蛋白、组织相容性抗原、激素、载体、凝集素以及抗体。
（6）脂类
脂类主要包括油脂和类脂两大类。其中，脂肪酸的成分没有特别限制，但优选具有12至24个碳原子的脂肪酸，而脂肪酸可以是饱和脂肪酸或不饱和脂肪酸。类脂包括糖脂、磷脂、胆固醇酯，其中，磷脂可以是天然的磷脂物质如蛋黄、大豆等，或可以是合成的磷酸酯化合物，优选磷脂酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、心磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇以及溶血甘油磷脂异构体。胆固醇及甾类化合物（类固醇）等物质对于生物体维持正常的新陈代谢和生殖过程，起着重要的调节作用，主要包括胆固醇、胆酸、性激素及维生素D等。
（7）其它
包封于脂质膜结构体及脂质体的生物相关物质并不限于疾病治疗用途，也可用于包括用于生物诊断、检测等其它用途的生物相关物质。例如用于定量或半定量分析的染料分子；例如可用于造影诊断、血液代用品等用途的氟碳分子等；例如抗寄生虫药物如伯氨喹等；例如可用作解毒剂的载体，如螯合剂乙二胺四乙酸（EDTA）、二乙撑三胺五醋酸（DTPA）等
脂质体、细胞、胶束等该领域技术人员所熟知的生物相关物质等。
下面结合一些具体实施方式对本发明所述一种支化聚乙二醇的脂质衍生物及含有该衍生物的脂质膜结构体做进一步描述。具体实施例为进一步详细说明本发明，非限定本发明的保护范围。
实施例1：L4中含有酰胺键的制备
A、缩合方法
L4中含有酰胺键化合物（A1-1）的合成，其中L1=L2=L3=CH2，Y=CH，X1=X2=CH3，q=1，R为二月桂酰基甘油酯残基，聚乙二醇分子量约为2000。
Figure BDA0000477507130000251
在干燥洁净的1L圆底烧瓶中加入40g支化聚乙二醇乙酸和DLPE(13.9克，1.2当量)后，氮气保护，加入溶剂二氯甲烷（500mL）后，室温搅拌10min后，依次加入20mL三乙胺和20g二环己烷碳二亚胺（DCC）的二氯甲烷溶液，室温下反应24小时后，过滤除去不溶物，浓缩，异丙醇重结晶，得到L4中含有酰胺键化合物（A1-1）。
化合物A1-1的氢谱数据如下：
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：0.95（-CH2CH3），1.21-1.65（CH3(CH2)9-），2.32-2.51(-CH2CH2COO-,-CH(CH2)3-)，3.35(CH3O-)，3.40-3.80(-CH2CH2O-，-CHCH2O-，-OCH2CH2NH-)，4.05-4.42(-OCH(CH2)CH2O-，-OCH2CH2NH-，-OCH2CONH-)，5.16（-OCH(CH2)CH2O-），8.38（-NHCO-）.
类似的，L4中含有酰胺化合物（A1-2）的合成，其中L1=L2=L3=CH2,X1=X2=CH3，Y为C-Bn，q=0，
Figure BDA0000477507130000261
A1-2的制备方法与A1-1的制备方法相同，在此不一一赘述；
化合物A1-2的氢谱数据如下：
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：0.85-1.62（-CH3，-CH2-，-CH-），2.15-2.19（-CH2C=CH-,-C=CHCH2-，-CCH2CONH-），2.62（-CH2Ph），3.35(CH3O-)，3.40-3.80(-CH2CH2O-,-CHO-,-OCH2CH2NH-)，4.05-4.10(-OCH2CH2NH-)，5.42(-C=CHCH2-)，7.27-7.42（-CH2C6H5）。
B、活性酯的方法
a.L4中含有酰胺键化合物（A1-3）的合成，其中L1=CH2CH2,L2=COCH2，L3=CH2CH2，X1=X2=CH3，Y为N，q=1，R为1-棕榈酰基-2-油酰基甘油酯残基，聚乙二醇分子量约为4000。
Figure BDA0000477507130000262
在干燥洁净的1L圆底烧瓶中加入支化聚乙二醇丙胺（40g）后，氮气保护，加入溶剂二氯甲烷（500mL）溶解后，室温搅拌10min后，依次加入20mL三乙胺和1-棕榈酰基-2-油酰基基磷脂酰乙醇胺戊酸琥珀酰亚胺活性酯（10.6克，1.2当量）的二氯甲烷溶液，室温下反应24小时后，浓缩，异丙醇重结晶，得到L4中含有酰胺键化合物（A1-2）。
化合物A1-3的氢谱数据如下：
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：0.95（-CH2CH3），1.21-1.73（-CH2-，-NHCH2CH2CH2-），2.15-2.19（-CH2CH=CHCH2-）2.32-2.41(CH2CON-，CH2COO-)，3.10(-NHCH2CH2CH2-),3.35(CH3O-)，3.40-3.80(-CH2CH2O-，-CHCH2O-，-OCH2CH2NH-)，4.05-4.42(-OCH2CH-，-OCH2CH2NH-)，5.16（-OCH(CH2)CH2O-），5.42-5.83（-CH2CH=CHCH2-,8.38（-NHCO-）.
b.L4中含有酰胺键化合物（A1-4）的合成，其中L1=L2=CH2，L3=CH2CH2，Y=N，X1=X2=CH3，q=0，R含有硬脂酰基及鞘氨醇骨架，聚乙二醇分子量约为2000。
在干燥洁净的1L圆底烧瓶中加入40g支化聚乙二醇丙酸琥珀酰亚胺和鞘磷脂(16.4克，1.2当量)后，氮气保护，加入溶剂无水二氯甲烷（500mL）后，室温反应24小时后，浓缩，异丙醇重结晶，得到L4中含有酰胺键化合物（A1-3）。
化合物A1-4的氢谱数据如下：
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：0.95（-CH2CH3），1.21-1.65（CH3(CH2)-），2.05-2.25（-CH=CHCH2-,-NHCOCH2-）,2.70-2.80(-NCH2CH2O-)，3.40-3.80(-CH2CH2O-.-NHCHCH2O-,-NHCH2CH2O-)，4.05-4.42(-CH=CHCH2O-,-OCH2CHNH-)，5.42-5.83（-CH2CH=CHCH2-），8.42（-NHCO-）.
实施例2：L4中含有氨基甲酸酯键的制备
A、活性酯合成方法：
L4中含有氨基甲酸酯键化合物（A2-1）的合成，其中L1=L2=CH2CH2,，L3=CH2CH2，X1=X2=CH3，Y为N，q=1，R为1-硬脂酰基-2-羟基甘油酯残基，聚乙二醇分子量约为1000。
Figure BDA0000477507130000281
在干燥洁净的500mL圆底烧瓶中加入支化聚乙二醇碳酸琥珀酰亚胺活性酯（20g）和1-硬脂酰基-2-羟基甘油基磷脂酰乙醇胺（11.6克，1.2当量）后，氮气保护，加入无水二氯甲烷（250mL）后，室温搅拌10min后，加入5mL三乙胺，室温下反应24小时后，浓缩，异丙醇重结晶，得到L4中含有氨基原酸酯键化合物（A2-1）。
化合物A2-1的氢谱数据如下：
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：0.95（-CH2CH3），1.21-1.65（CH3(CH2)16-），2.32-2.41(-CH2CH2COO-)，2.70-2.80(-NCH2CH2O-)，3.35(CH3O-)，3.40-3.80(-CH2CH2O-，-NCH2CH2O-)，4.05-4.42(-OCH2CH-，-OCH(CH2)CH2O-，-OCH2CH2NH-)，5.16（-OCH(CH2)CH2O-），8.38（-NHCO-）.
B、一步合成法
在本例中，L4中含有氨基甲酸酯键化合物（A2-2）的合成，其中L1=CH2CH2,L2=CH2CH2C≡C，L3=CH2CH2CH2,X1=n-C20H41,X2=CH3，Y为N，q=1，R为二油酰基甘油酯残基。总分子量约为3000，其中L1、L2连接的两个分支链的分子量约分别为1000、1000；主链的分子量约为1000。
Figure BDA0000477507130000291
在干燥洁净的500mL圆底烧瓶中加入支化聚乙二醇（30g）后，用无水二氯甲烷（250mL）溶解，冰浴下，缓慢低价DSC（2.8克，1.1当量）的乙腈溶液，缓慢升高至室温，反应8小时后，加入3mL三乙胺后，缓慢滴加二油酰磷脂酰乙醇胺（11克，1.5当量）的氯仿溶液后，室温下反应24小时后，浓缩，异丙醇重结晶，得到L4中含有氨基原酸酯键化合物（A2-2）。
化合物A2-2的氢谱数据如下：
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：0.95（-CH2CH3），1.21-1.73（-CH2-，-NCH2CH2CH2-），2.15-2.19（-CH2CH=CHCH2-，-CH2C≡C-），2.32-2.84(-CH2COO-，-NCH2CH2-)，3.35(CH3O-)，3.40-3.80(-CH2CH2O-，-OCH2CH2NH-)，4.05-4.42(-OCH2CH-，-OCH(CH2)CH2O-，-OCH2CH2NH-)，5.16（-OCH(CH2)CH2O-），5.42-5.83（-CH2CH=CHCH2-）,8.38（-NHCO-）.
实施例3：L4中含有酯键（-OCO-）的制备
A：L4中含有酯键化合物（A3-1）的合成，其中L1=L2=L3=CH2,X1=X2=CH3，Y为CH，q=1，R为二肉豆蔻磷脂酰甘油酯的残基。设计总分子量约为1500。
Figure BDA0000477507130000301
在干燥洁净的1L圆底烧瓶中加入支化聚乙二醇乙酸（30g）和二肉豆蔻磷脂酰甘油(66.6克，5当量)后，氮气保护，加入溶剂二氯甲烷（500mL）后，室温搅拌10min后，依次加入20mL三乙胺和20g二环己烷碳二亚胺（DCC）的二氯甲烷溶液，室温下反应24小时后，过滤除去不溶物，浓缩，用水溶解，过滤，透析，得到L4中含有酯键化合物（A3-1）。
化合物A3-1的氢谱数据如下：
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：0.95（-CH2CH3），1.21-1.65（-CH2-），2.32-2.41(-CH2CH2COO-)，2.51(-CH(CH2)3-)，3.35(CH3O-)，3.40-3.80(-CH2CH2O-)，4.05-4.42(-OCH2CH-，-OCH(CH2)CH2O-，-OCH2CH2NH-)，4.90-5.13（-OCH(CH2)CH2O-）。
实施例4：L4中含有仲胺键（-CH2NHCH2-）的制备
在本例中，L4中含有仲胺键化合物（A4-1）的合成，其中L1=L2=L3=CH2,X1=X2=CH3，Y为CH，q=1，R为二肉豆蔻磷脂酰甘油酯的残基。聚乙二醇总分子量约为2000。
Figure BDA0000477507130000311
在干燥洁净的1L圆底烧瓶中加入支化聚乙二醇丙醛（40g）和二肉豆蔻酰基磷脂酰丝氨酸(16.3克，1.2当量)后，氮气保护，加入pH值为5.0的PBS缓冲液（500mL）后，室温搅拌4小时后，加入氰基硼氢化钠（5克）后，室温下20℃反应24h，加入饱和氯化铵溶液淬灭后，用水稀释，二氯甲烷萃取，浓缩，透析，得到L4中含有仲胺键化合物（A4-1）。
化合物A4-1的氢谱数据如下：
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：0.95（-CH2CH3），1.21-1.73（-CH2-,-NCH2CH2CH2-），2.32-2.41(-CH2CH2COO-)，2.51(-CH(CH2)3-)，2.85(-NHCH2-)，3.35(CH3O-)，3.40-3.80(-CH2CH2O-，-CHCH2O-)，4.05-4.42(-OCH2CH-，-OCH(CH2)CH2O-)，4.90-5.13（-OCH(CH2)CH2O-,-NHCH(COOH)-）。
实施例5：L4中含有硫醚键（>CHS-）的制备
在本例中，L4中含有硫醚键（>CHS-）化合物（A5-1）的合成，其中L1=L2=L3=CH2CH2，X1=X2=CH3，Y为N，q=1，R为二硬脂酸甘油酯的残基。聚乙二醇总分子量约为2000。
在干燥洁净的500mL圆底烧瓶中加入100mL含有Y型聚乙二醇巯基衍生物（10克，5mmol/L）的磷酸盐缓冲溶液（pH=7.4），加入DSPE-MAL（5克，1.1当量）后，4℃条件下反应24小时后，加入蒸馏水稀释后，用二氯甲烷萃取，干燥，浓缩，异丙醇重结晶后得到L4中含有硫醚键（>CHS-）化合物（A5-1）。
化合物A5-1的氢谱数据如下：
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：0.95（-CH2CH3），1.21-1.65（CH3(CH2)16-），2.32-2.95(-CH2COO-，-NCH2CH2-，-NHCOCH2CH2-，-OCCH2CHS-，)，3.35(CH3O-)，3.40-3.80(-OCH2CH2O-，-NCH2CH2O-，-CONCH2CH-,-OCCHS-)，4.05-4.42(-OCH2CHO-，-OCH(CH2)CH2O-,-OCH2CH2NHCO-)，5.13（-OCH(CH2)CH2O-）,8.38（-NHCO-）.
实施例6：L4中含有三氮唑的制备
在本例中，L4中含有三氮唑化合物（A5-1）的合成，其中L1=L2=L3=CH2，X1=X2=CH3，Y为CH，q=1，R为二硬脂酸甘油酯的残基。聚乙二醇总分子量约为20000。
Figure BDA0000477507130000331
在干燥洁净的500mL圆底烧瓶中加入含有DIBO基团的Y型聚乙二醇（20克，1mmoL）后，加入乙腈，室温下搅拌至完全溶解后，缓慢滴加DSPE-N3的乙腈溶液（200mL）DSPE-N3（1.55克，2当量）后，室温下反应4个小时后，浓缩，透析得到L4中含有三氮唑（化合物（A6-1）。
化合物A6-1的氢谱数据如下：
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：0.95（-CH2CH3），1.21-1.65（CH3(CH2)16-），2.32-2.41(-CH2CH2COO-)，3.0-3.2（ArCH2-），3.35(CH3O-)，3.40-3.80(-CH2CH2O-，-CHCH2O-，-OCHCH2-，-NCH2CH2O-)，4.05-4.42(-OCH2CH-，-OCH(CH2)CH2O-)，4.33(-OCCH2O-)5.13（-OCH(CH2)CH2O-），5.62(ArCHO-)，7.31-7.65（C6H4-）。
实施例7：L4中含有4，5-二氢异恶唑
在本例中，L4中含有4，5-二氢异恶唑（A7-1）的合成，其中L1=L2=L3=CH2，X1=X2=CH3，Y为CH，q=1，R为二硬脂酸甘油酯的残基。聚乙二醇总分子量约为5000。
在干燥洁净的50mL圆底烧瓶中加入Y型聚乙二醇丙醛（2克，0.4mmoL）后，加入乙腈，室温下搅拌至完全溶解后，置换氮气，加入羟基胺盐酸盐（4mmol）后，加入醋酸钠调节至PH=8后，室温下反应过夜，浓缩，***沉淀，初步纯化后，直接用于下一步反应。
将上一步的粗产品，在干燥洁净的50mL圆底烧瓶中用N，N-二甲基甲酰胺（20mL）溶解后，置换氮气后，加入固体NCS（4mmol）,室温下反应过夜后，加入饱和碳酸氢钠溶液（20mL）,室温下继续搅拌4小时后，加入大量的二氯甲烷稀释后，用饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩，***沉淀。
在干燥洁净的500mL圆底烧瓶中加入上步得到的Y型聚乙二醇氰氧化合物后，加入乙腈，室温下搅拌至完全溶解后，缓慢滴加DSPE-Norbornene的乙腈溶液（100mL）后，室温下反应4个小时后，浓缩，异丙醇重结晶后得到L4中含有三氮唑（化合物（A7-1）。
化合物A7-1的氢谱数据如下：
1H NMR(CDCl3)δ(ppm)：0.95（-CH2CH3），1.21-2.01（CH3(CH2)16-，OCH2CH2CH<，>CHCH2CH<，-C(=N)CH2CH2O-），2.22-2.51(-CH2CH2COO-，>CHCHC(=N)-)，-CH(CH2)3-)，3.35(CH3O-)，3.40-3.80(-CH2CH2O-，-CHCH2O-)，4.05-4.42(-OCH2CH-，-OCH(CH2)CH2O-)，5.13（-OCH(CH2)CH2O-）。
实施例8-21：脂质体的制备及其稳定性测试
（1）脂质体的制备
使用实施例1中所得L4中含酰胺键的A1-3（实施例8）、A1-4（实施例9），实施例2中所得L4中含氨基甲酸酯键的A2-1（实施例10），A2-2（实施例11），实施例3中所得L4中含酯键的A3-1（实施例12），实施例4中所得L4中含仲胺键的A4-1（实施例13），分别与二油酰基磷脂酰乙醇胺（DOPE）制备脂质体。
使用实施例1中所得L4中含酰胺键的A1-2（实施例14），实施例5中所得L4中含硫醚键的A5-1（实施例15），实施例6中所得L4中含三氮唑的A6-1（实施例16），实施例7中所得L4中含4,5-二氢异恶唑的A7-1（实施例17），分别与DOPE、胆固醇制备脂质体。
使用实施例1中所得L4中含酰胺键的A1-3（实施例18），与DOPE和琥珀酸胆固醇酯（CHEMS）制备脂质体。
使用实施例2中所得L4中含氨基甲酸酯键的A2-2分别与二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺（DSPE）、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺（DPPE）制备脂质体，分别对应于实施例19-21。
参数如表1所示。
按照表1中所列参数称取实例中的几组不同的脂质混合物及对照例1中的DOPE，分别在氯仿中充分溶解，使用旋转蒸发仪去除溶剂，直至甁壁上形成均匀的脂质薄膜。向脂质薄膜中加入25mM荧光色素HPTS的Tris溶液2mL，其中含25mM的荧光色素淬灭剂DPX，pH=10.0。使用漩涡振荡器进行分散后，使用不同孔径的聚碳酸酯滤膜依次进行过滤，每种孔径过滤3遍，获得脂质体分散液。采用动态光散射法对粒径进行检测，所有脂质体的粒径均在100nm以下。
表1
编号 脂质体膜的组成 组成比（质量比）
实施例8 DOPE/A1-3 99/1
实施例9 DOPE/A1-4 97/3
实施例10 DOPE/A2-1 95/5
实施例11 DOPE/A2-2 95/5
实施例12 DOPE/A3-1 90/10
实施例13 DOPE/A4-1 85/15
实施例14 DOPE/胆固醇/A1-2 90/7/3
实施例15 DOPE/胆固醇/A5-1 90/7/3
实施例16 DOPE/胆固醇/A6-1 80/17/3
实施例17 DOPE/胆固醇/A7-1 50/45/5
实施例18 DOPE/CHEMS/A1-3 80/17/3
实施例19 DSPE/A2-2 70/30
实施例20 DPPE/A2-2 80/20
实施例21 DPPE/A2-2 99.9/0.1
对照例1 DOPE 100/0
（2）脂质体在缓冲液中的稳定性
将上述所得脂质体分散液在室温条件下放置1个月，经肉眼观察，实施例8-20仍都为均匀的脂质体分散液，目视未见变化。实施例21的分散液有轻微沉降。对照例1的脂质体分散液不稳定，可见沉降。
（3）脂质体的浓度响应性及pH敏感性
取实施例8-21的脂质体分散液，依次调制pH=5.0,6.0,6.5,6.8,7.0,8.0,9.0,10.0的分散液，在37℃孵育1h，然后采集样本，用pH10.0的缓冲液进行稀释，通过测定荧光强度，计算荧光色素HPTS从脂质体中的释放率R(t)=100×[I(t)-I(0)]/[I(∞)-I(0)]，其中I(t)是在时间t时的荧光强度，I(0)是初始残留荧光强度，I(∞)是用0.1%(w/v)Triton X-100溶解脂质体后所对应的最大荧光强度。
结果显示，HPTS从脂质体中的释放具有pH敏感性。低pH值时，实施例8-18中，HPTS释放率随聚乙二醇修饰的脂质衍生物含量的增加而降低，pH=6.0时，实施例8,9,10,11,12,13的释放率依次为26%,18%，12%,10%,5%,3%；pH=6.5时，实施例8,9,10,11,12,13的释放率依次为22%,16%,9%,8%,4%,2.5%。实施例11,19,20,21中，HPTS释放率随聚乙二醇修饰的脂质衍生物含量的增加而增加。对照例1中，pH=6.5时，释放率在80%以上，pH=6.0时，达90%以上。结果还表明，胆固醇的添加有利于提高脂质体膜的稳定性，释放率随胆固醇含量的增加而降低，pH=6.0时，实施例8,14,15,16,17的释放率依次为20%,17%,16%,11%,6%;pH=6.5时，实施例8,14,15,16,17的释放率依次为17%,15%,14%,10%,5%。对于实施例8-17，pH≤7.0时，释放率随pH的升高而降低，pH≥7.0时，释放率不超过3%，对于对照例1，pH=7.0时，释放率仍在20%以上，而pH≥8.0时，释放率不超过3%。
采用CHEMS做膜稳定剂时，参照实施例18，中性及碱性条件下（pH≥7.0）有利于脂质体膜结构的稳定性，对应的释放率不超过2%，而在酸性条件下，则有利于加速HPTS的释放，pH=5.0时释放率为42%，pH=6.0时，释放率为30%，pH=6.5时，释放率为21%，pH=6.8时，释放率为15%。
（4）脂质体在血清中的稳定性
取实施例8-21的脂质体分散液，分别用10%胎牛血清的培养基进行稀释，在37℃进行孵育，依次在0,1,6,12,18,24h采集样本，用pH10.0的Tris溶液进行稀释，测定荧光强度，计算HPTS的释放率。结果显示，实施例8-21的最大释放率依次为均为超过5%,均未见脂质体的崩塌。可见，脂质膜结构体在血清中比较稳定。
实施例22-25：包裹有抗癌药物（阿霉素）的脂质体在血液中的药代动力学评价及组织分布情况
（5）盐酸阿霉素脂质体的制备
使用实施例1中所得L4中含酰胺键的A1-1（实施例22）、A1-4（实施例23），实施例3中所得L4中含酯键的A3-1（实施例24），实施例5中所得L4中含硫醚键的A5-1（实施例25），分别与DOPE、CHEMS制备脂质体。
对照例分别采用未经支化聚乙二醇修饰的相应的磷脂，依次为二月桂酰基甘油磷脂酰乙醇胺（DLPE，对照例2）、含硬脂酰基的鞘磷脂（SSL，对照例3）、二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油酯（DMPG，对照例4）、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺（DSPE，对照例5）。
参数如表2所示。
采用与上述（1）相同的方法制备表2中实施例与对照例的包裹有盐酸阿霉素的脂质体分散液。用盐酸阿霉素代替荧光色素，采用硫酸铵梯度法将盐酸阿霉素封入脂质中，浓度为0.3mg盐酸阿霉素/mg脂质体。
表2
编号 脂质体膜的组成 组成比（质量比）
实施例22 DOPE/CHEMS/A1-1 80/17/3
对照例2 DOPE/CHEMS/DLPE 80/17/3
实施例23 DOPE/CHEMS/A1-4 65/20/15
对照例3 DOPE/CHEMS/SSL 65/20/15
实施例24 DOPE/胆固醇/A3-1 80/17/3
对照例4 DOPE/胆固醇/DMPG 80/17/3
实施例25 DOPE/胆固醇/A5-1 65/25/10
对照例5 DOPE/胆固醇/DSPE 65/25/10
表3
编号 脂质体膜的组成 组成比（质量比） t1/2γ
实施例22 DOPE/CHEMS/A1-2 80/17/3 63.4h
对照例2 DOPE/CHEMS/DLPE 80/17/3 9.9h
实施例23 DOPE/CHEMS/A1-4 65/20/15 61.5h
对照例3 DOPE/CHEMS/SSL 65/20/15 9.2h
实施例24 DOPE/胆固醇/A3-1 80/17/3 67.8h
对照例3 DOPE/胆固醇/DMPG 80/17/3 11.6h
实施例25 DOPE/胆固醇/A5-1 65/25/10 65.3h
对照例4 DOPE/胆固醇/DSPE 65/25/10 10.2h
（6）药代动力学评价
选用12周龄的雄性Sprague-Dawley大鼠，参照表2，尾静脉注射等剂量（15mg脂质体/kg）的盐酸阿霉素脂质体分散液，分别于1min,15min,30min,1h,2h,6h,12h,18h,24h后经大鼠眼球后静脉丛采集血液样本0.5ml，分离血清，-20℃保存，用于测定血药浓度。以盐酸柔红霉素作为内标，采用RP-HPLC法测定阿霉素浓度，所得的药物-时间数据符合三房室模型，处理所得的消除半衰期t1/2γ的结果如表3所示。对比实施例22与对照2，对比实施例23与对照例3，对比实施例24与对照例4，对比实施例25与对照例5，可见支化聚乙二醇修饰的磷脂衍生物参与构成的脂质体（实施例22-25）的半衰期显著延长，与未经支化聚乙二醇修饰的脂质体（对照例2-5）相比，提高到原来的5～10倍。
CHEMS作为膜稳定剂时，与胆固醇做稳定剂相比，其半衰期稍低，这是因为CHEMS本身具有pH敏感性，在中性及碱性条件下，具有稳定脂质膜结构或脂质体的作用，而在酸性条件下则导致脂质膜结构或脂质体的不稳定。
（7）组织分布情况
选用12周龄的雄性Sprague-Dawley大鼠，参照表2静脉注射等剂量（15mg脂质体/kg）的盐酸阿霉素脂质体分散液，分别于给药后5min,2h,6h,12h,24h,用驱血法处死一组大鼠，并切除脑、心、肝、肺、肾、脾、胃肠，取一定量组织，在磷酸盐缓冲液中、冰浴条件下，经高速分散制备成组织匀浆，-20℃保存，用于组织浓度测定。以盐酸柔红霉素作为内标，采用RP-HPLC法测定阿霉素浓度。结果表明，经支化聚乙二醇修饰后的脂质体，与未用支化聚乙二醇修饰的脂质体相变，其在心脏的分布显著降低，大大降低了心脏毒性，同时在肝脏、肾脏处的分布量增大，显示出增强的肝、肾靶向性。此外，采用CHEMS的实施例22-23和对照例2-3，较之实施例24-25和对照例4和5，其在胃部的分布量显著增大，靶向性大大提高。
实施例26-29：包裹抗癌药物（阿霉素）的脂质体的抗肿瘤效果评价
使用实施例1中所得L4中含酰胺键的A1-1（实施例26），A1-4（实施例27），实施例3中所得L4中含酯键的A3-1（实施例28），实施例5中所得L4中含硫醚键的A5-1（实施例29），分别与DOPE、CHEMS制备脂质体。
对照例分别采用未经支化聚乙二醇修饰的相应的磷脂，依次为二月桂酰基甘油磷脂酰乙醇胺（DLPE，对照例5）、含硬脂酰基的鞘磷脂（SSL，对照例6）、二肉豆蔻酰基磷脂酰甘油酯（DMPG，对照例7）、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺（DSPE，对照例8）。
追加一个对照例9，采用DLPE-mPEG取代A1-1，两者的区别在于将支化聚乙二醇替换为同等分子量的线性PEG，DLPE-mPEG由与支化聚乙二醇同等分子量的单甲氧基聚乙二醇乙酸与DLPE反应制备而成。
按照表4，采用上述（5）中方法制备相应盐酸阿霉素脂质体分散液。
采用动物移植性肿瘤实验法，用H22小鼠肝癌细胞接种于小鼠右侧腋皮下形成实体瘤，分别在接种2天、7天后，进行尾静脉注射给药，给药方式为单次给药，给药剂量为15mg·kg-1。接种2周后，将小鼠颈椎脱臼处死，剥离肿瘤，并称重。结果表明，经支化聚乙二醇修饰后的脂质体（实施例26-29，相比于未经修饰的对照例5-8具有更高的抑瘤率。含有CHEMS的实施例26-27较之实施例28-29具有更高的抑瘤率。
此外，支化聚乙二醇修饰的脂质体（实施例26）较线性聚乙二醇修饰的脂质体（对照例9）具有更高的抑瘤率。
通过上述结果可知，本发明的脂质体在中性及碱性条件下稳定，而在肿瘤等偏酸性部位受到pH值的影响，封装的生物相关物质的释放率明显提高，这些部位的药物分布量也选择性提高，显示出较好的被动靶向性，可避免因频繁给药或加大给药量而造成的毒副作用。
表4
编号 脂质体膜的组成 组成比（质量比）
实施例26 DOPE/CHEMS/A1-1 80/17/3
对照例5 DOPE/CHEMS/DLPE 80/17/3
实施例27 DOPE/CHEMS/A1-4 65/20/15
对照例6 DOPE/CHEMS/SSL 65/20/15
对照例9 DOPE/CHEMS/DLPE-mPEG 80/17/3
实施例28 DOPE/胆固醇/A3-1 80/17/3
对照例7 DOPE/胆固醇/DMPG 80/17/3
实施例29 DOPE/胆固醇/A5-1 65/25/10
对照例8 DOPE/胆固醇/DSPE 65/25/10
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (29)

1.一种支化聚乙二醇的磷脂类衍生物，其特征在于，所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物通式如式（1）所示：
其中，X1、X2各自独立地为具有1至20个碳原子的烃基；n1、n2各自独立地为1～1000的整数，n3为0～1000的整数，且2≤n1+n2+n3≤2000；Y为支化中心，具有1至20个原子，采用共价键与L1、L2、L3相连接；L1、L2、L3为支化中心Y与聚乙二醇单元的连接基团；q为0或1；当n3=0时，q为0且Y不为2～10个氨基酸残基的聚氨基酸残基；L4为连接基团，为聚乙二醇衍生物与相应磷脂化合物发生化学反应形成的残基；M为氢原子或阳离子；R为疏水性脂质的残基。
2.根据权利要求1所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物，其特征在于，n1,n2,n3优选满足1≤n1≤200，1≤n2≤200，0≤n3≤200，且2≤n1+n2+n3≤200。
3.根据权利要求1所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物，其特征在于，Y为碳原子支化中心，其结构表示如下：其中，R1为氢原子、具有1至20个碳的烃基或含有杂原子基团的具有1至20个碳的烃基。
4.根据权利要求3所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物，其特征在于，所述R1为氢原子、或为具有1至20个碳的烃基，或为含酯基、尿烷基、酰胺基、醚基、硫醚、双键、叄键、碳酸酯基、仲胺基或叔胺基的具有1至20个碳的烃基。
5.根据权利要求1所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物，其特征在于，Y为氮原子支化中心，其结构表示如下：
Figure FDA0000477507120000013
6.根据权利要求1所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物，其特征在于，R为疏水性脂肪烃残基，或二酰基甘油脂质残基，或单酰基甘油脂质残基，或含有鞘氨醇类骨架的脂质残基，或类固醇残基，或上述任两种及两种以上的复合脂质残基；
当R为二酰基甘油脂质残基，其结构表示如下：
Figure FDA0000477507120000014
R4、R5为具有4至50个碳原子的烃基；
当R为单酰基甘油脂质残基，其结构表示如下：
Figure FDA0000477507120000021
R6为具有4至50个碳的烃基；
当R为含有鞘氨醇类骨架的脂质残基，其结构表示如下：
Figure FDA0000477507120000022
或表示为
Figure FDA0000477507120000023
R2、R3各自独立地为具有4至50个碳原子的烃基；
当R为疏水性脂肪烃残基，其结构表示如下：R7为具有4至50个碳的烃基，可以是直链、支链、环状或带环状基团的链状；
当R为类固醇的残基，该类固醇为胆固醇、谷甾醇、维生素D、二氢胆固醇、麦角固醇、羊毛留醇、胆汁醇或性激素，或上述类固醇的衍生物；
所述R2、R3、R4、R5、R6、R7为丁基、叔丁基、戊基、庚基、2-乙基己基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基、(Z)-9-十四烯基、(Z)-8-十七烯基、(Z)-12-二十一烯基，且在同一分子中，可以相同也可以不同。
7.根据权利要求1所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物，其特征在于，L4为
Figure FDA0000477507120000025
Figure FDA0000477507120000031
其中，Z为亚烷基或含有酯基、尿烷基、酰胺基、醚基、硫醚、双键、叄键键、碳酸酯基、仲胺基或叔胺基等基团的亚烷基；
g为0或1；
f为2至10的整数。
8.根据权利要求1所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物，其特征在于，所述X1、X2为甲基、乙基、丙基、丙烯基、丙炔基、异丙基、丁基、叔丁基、戊基、庚基、2-乙基己基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基、苄基或丁基苯基，且在同一分子中，可以相同也可以不同。
9.根据权利要求1所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物，其特征在于，所述L1、L2、L3各自独立地为含有在光照、酶、酸性或碱性条件下稳定存在的醚基、硫醚基、酰胺基、双键、叄键、仲胺基或叔胺基的具有1至20个碳原子的二价烃基。
10.根据权利要求1所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物，其特征在于，M为氢原子、钠离子、NH4 +。
11.根据权利要求1所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物，其特征在于，含有磷脂酰乙醇胺的残基。
12.根据权利要求11所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物，其特征在于，所述磷脂酰乙醇胺为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二油脂酰基磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺、二亚麻酰磷脂酰乙醇胺、二芥酰磷脂酰乙醇胺、1-棕榈酰-2-油酰磷脂酰乙醇胺或二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺。
13.一种含有权利要求1～12中任一项所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物的脂质膜结构体。
14.根据权利要求13所述脂质膜结构体，其特征在于，支化聚乙二醇的磷脂类衍生物为该脂质膜结构体的总质量的0.1%～30%。
15.根据权利要求13所述脂质膜结构体，其特征在于，支化聚乙二醇的磷脂类衍生物为该脂质膜结构体的总质量的1%～30%，优选为3%-20%，更优选为3%-15%。
16.根据权利要求13所述脂质膜结构体，其特征在于，还含有磷脂酰乙醇胺作为膜的组成成分。
17.根据权利要求16所述脂质膜结构体，其特征在于，其中磷脂酰乙醇胺为二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二油脂酰基磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺或二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺，二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二亚麻酰磷脂酰乙醇胺、二芥酰磷脂酰乙醇胺、1-棕榈酰-2-油酰磷脂酰乙醇胺或二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺。
18.根据权利要求13所述脂质膜结构体，其特征在于，其封装有生物相关物质。
19.根据权利要求18所述脂质膜结构体，其特征在于，所述生物相关物质为多肽、蛋白质、酶、小分子药物、核苷、核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、核酸、多糖、甾体化合物、脂类化合物、糖脂、糖蛋白或类固醇。
20.根据权利要求13所述脂质膜结构体，其特征在于，其形态为脂质体。
21.根据权利要求20所述脂质膜结构体，其特征在于，脂质体中封装有生物相关物质。
22.根据权利要求21所述脂质膜结构体，其特征在于，所述生物相关物质为多肽、蛋白质、酶、小分子药物、核苷、核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、核酸、多糖、甾体化合物、脂类化合物、糖脂、糖蛋白或类固醇。
23.根据权利要求21述脂质膜结构体，其特征在于，所述生物相关物质在pH≤6.8时释放，优选在pH≤6.5时释放，更优选在pH≤6.0时释放。
24.一种支化聚乙二醇的磷脂类衍生物，其特征在于，所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物通式如式（2）所示：
Figure FDA0000477507120000041
其中，X1、X2各自独立地为具有1至20个碳原子的烃基；n1、n2各自独立地为1～1000的整数，且2≤n1+n2≤2000；Y为具有1至20个原子的碳原子支化中心或N原子支化中心，采用共价键与L1、L2、L4相连接，且Y不为2～10个氨基酸残基的聚氨基酸残基；L1、L2各自独立地为连接支化中心Y与聚乙二醇单元或L4的含有在光照、酶、酸性或碱性条件下稳定存在的醚基、硫醚基、酰胺基、双键、叄键、仲胺基或叔胺基的具有1至20个碳原子的二价烃基；L4为连接基团，为聚乙二醇衍生物与相应磷脂化合物发生化学反应形成的残基，L4选自以下基团之一：
Figure FDA0000477507120000061
其中，Z为亚烷基或含有酯基、尿烷基、酰胺基、醚基、硫醚、双键、叄键、碳酸酯基、仲胺基或叔胺基的亚烷基；
g为0或1；
f为2至10的整数；
M为氢原子或阳离子；
R为疏水性脂质残基，选自脂肪烃残基，二酰基甘油脂质残基，单酰基甘油脂质残基，含有鞘氨醇类骨架的脂质残基或类固醇残基中的一种或其复合脂质的残基。
25.一种含有权利要求24所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物的脂质体，其特征在于，所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物占该脂质体总质量的1%～30%，优选为3%-20%，更优选为3%-15%。
26.根据权利要求25所述脂质体，其特征在于，其封装有多肽、蛋白质、酶、小分子药物、核苷、核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、核酸、多糖、甾体化合物、脂类化合物、糖脂、糖蛋白或类固醇等一种或一种以上的生物相关物质。
27.一种支化聚乙二醇的磷脂类衍生物，其特征在于，所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物通式如式（3）所示：
Figure FDA0000477507120000062
其中，X1、X2各自独立地为具有1至20个碳原子的烃基；n1、n2各自独立地为1～1000的整数，n3为1～1000的整数，且3≤n1+n2+n3≤2000；Y为具有1至20个原子的碳原子支化中心或氮原子支化中心，采用共价键与L1、L2、L3相连接；L1、L2、L3各自独立地为连接支化中心Y与聚乙二醇单元的含有在光照、酶、酸性或碱性条件下稳定存在的醚基、硫醚基、酰胺基、双键、叄键、仲胺基或叔胺基的具有1至20个碳原子的二价烃基；L4为连接基团，为聚乙二醇衍生物与相应磷脂化合物发生化学反应形成的残基，L4选自以下基团之一：
Figure FDA0000477507120000063
Figure FDA0000477507120000071
其中，Z为亚烷基或含有酯基、尿烷基、酰胺基、醚基、硫醚、双键、叄键、碳酸酯基、仲胺基或叔胺基的亚烷基；
g为0或1；
f为2至10的整数；
M为氢原子或阳离子；
R为疏水性脂质残基，选自脂肪烃残基，二酰基甘油脂质残基，单酰基甘油脂质残基，含有鞘氨醇类骨架的脂质残基或类固醇残基中的一种或其复合脂质的残基。
28.一种含有权利要求27所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物的脂质体，其特征在于，所述支化聚乙二醇的磷脂类衍生物占该脂质体总质量的1%～30%，优选为3%-20%，更优选为3%-15%。
29.根据权利要求28所述脂质体，其特征在于，其封装有多肽、蛋白质、酶、小分子药物、核苷、核苷酸、寡核苷酸、多核苷酸、核酸、多糖、甾体化合物、脂类化合物、糖脂、糖蛋白或类固醇等一种或一种以上的生物相关物质。
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