CN103859237B - 一种复合型水产微囊开口饵料及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种复合型水产微囊开口饵料及其制备方法和应用，该开口饵料由含有不同比例蝇蛆蛋白多肽、食用菌发酵液、乳酸菌、螺旋藻粉、大豆磷脂、植物油为主要原料与海藻酸钠按一定比例混合经高速匀浆后加压喷入CaCl2溶液中形成微胶囊颗粒并过滤后制成的水产微囊开口饵料。本发明的开口饵料具有微米至毫米不同粒径又可在一定的时间内在水中悬浮，适合刚孵化的水产幼苗在不同生长阶段的食用，可增强机体免疫力，调节肠道生态平衡促进其生长发育，不添加抗生素和脱壳素，且无化学药物残留，符合绿色饵料及饲料添加剂的要求，制备成本低廉、使用方便，可在水产育苗和养殖业领域广泛推广使用。
Description
技术领域
本发明涉及一种水产养殖微囊饵料，特别涉及水产幼苗的微囊开口饵料及其制备方法与应用。
背景技术
由于孵化成苗的水产动物第一次开口进食往往是被动式的，其幼苗死亡率非常之高。原因是自然环境不可能提供足够的高质量开口饲料，并且养殖水体由于常年循环养殖，积累了大量病原微生物，不利于水产幼苗的生长发育。因此大批量繁育幼苗是人工饲养水产动物的关键，而开口饵料的研制则成为技术关键。对水产幼苗开口饵料的基本要求是要有高动物性蛋白组成的均衡营养成分，以便刚孵化为鱼的幼鱼苗喜食和生长。同时由于鱼苗嘴仅有200微米大小，因此通常此类开口饵料的粒径要小于200微米，且易在水中分散。以便于幼苗吞咽。
我国的水产苗种生产，长期以来主要采用鱼粉、单胞藻、强化浮游动物、添加半人工饲料(蛋黄、豆浆)等方法，来解决苗种幼体的开口饵料和幼体生长培育所需的饵料。随着规模化养殖的发展，对水产养殖苗种生产要求提高，传统使用的生物活性饵料，特别是卤虫卵，由于受自然环境的影响，生产不稳定，不仅在产量上已远远不能满足苗种生产需求，同时由于其昂贵的价格，更是增加了苗种生产的波动性和风险。
我国水产养殖业规模很大，但存在诸多用药问题，造成鱼体及水体中抗生素、重金属等的残留和蓄积，严重的影响了我国无公害水产养殖的发展。国内使用18万吨抗生素中有一半以上用于畜牧、水产养殖业，养殖业使用抗生素的量已经远远超过人类临床上使用量的总和。食物、动物中抗生素残留及由此产生的这些耐药菌通过食物或动物与人的接触传播给人类，危害人类健康。我国水产品出口因抗生素超标而被退回造成的经济损失超过几十亿元，农药残留和抗生素超标已经成为制约我国水产品出口的一个瓶颈。
因此，寻找一种蛋白来源丰富、质量良好，同时可减少或取代抗生素使用的新型绿色饲料添加剂具有很大的实用意义。
蝇蛆蛋白的营养成分全面，粗蛋白含量高，含量达到60%，必需氨基酸丰富，赖氨酸和蛋氨酸含量分别为鱼粉的2.6和2.7倍。蝇蛆蛋白含有一种很强杀菌作用的“抗菌活性肽”，能有效抑制入侵的病菌，且对动物和人类无毒无害，符合绿色养殖的要求，将是水产品的最佳饵料。但是蝇蛆蛋白的水溶性差，溶出率低，不能为水产幼苗有效利用。此外通常蝇蛆蛋白粉中抗菌活性肽的含量也很低，限制其进一步的利用。
经液体深层培养的食用菌发酵液及其菌丝体丰富的氨基酸、维生素、微量元素，更含有较多的β-D（1.3）葡聚糖、木聚糖、戊聚糖、γ-氨基丁酸、谷胱甘肽等多种免疫调节活性物质，可以增强水产幼苗的体质，增强其抗病能力，减少或不使用抗生素等物质。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种复合型水产微囊开口饵料，可模拟天然水产养殖开口饵料。
本发明还要解决的技术问题是提供上述复合型水产微囊开口饵料的制备方法。
本发明最后要解决的技术问题是提供上述复合型水产微囊开口饵料的应用。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种复合型水产微囊开口饵料，它包括如下重量百分数的组分：
以上组分重量百分比之和为100%；
额外加：
海藻酸钠 1～3%。
一种复合型水产微囊开口饵料，它优选包括如下重量百分数的组分：
以上组分重量百分比之和为100%；
额外加：
海藻酸钠 2～3%。
其中，所述的蝇蛆蛋白多肽液，其中的蛋白浓度为10mg/mL以上，氨基氮含量为10mg/100mL以上，对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌活性小于1mg/mL。
其中，所述的蝇蛆蛋白多肽液按如下方法制备得到：将蝇蛆虫体与磷酸缓冲液混合后高速匀浆打碎，离心后取上清液保存，沉淀继续与磷酸缓冲液混合，用磷酸或者醋酸调pH值至1～4，加入酸性蛋白酶于37℃酶解1～3小时，再用NaOH调pH值至7～10，再在37℃酶解1～3小时，酶解液与所述上清液混合即得。
所述的蝇蛆优选采用猪、牛或鸡粪温育孵化家蝇蛆，利用猪、牛或鸡粪的微生物特别是一些大肠杆菌、沙门氏菌等病原菌刺激诱导蝇蛆分泌产生各种抗菌肽或抗菌活性物质。
所述的蝇蛆蛋白多肽液优选按如下方法制备得到：将由猪、牛或鸡粪温育孵化家蝇蛆用清水漂洗干净后，按重量比2：1的比例加入0.05M的磷酸缓冲液中经高速匀浆机打匀后在6000rpm条件下离心20分钟，取上清液保存，离心沉淀用同样比例的磷酸缓冲液混匀，用磷酸或醋酸调至pH1～4，加入酸性蛋白酶于37℃保温1～3小时，再用NaOH调至pH7～10，同样在37℃保温1～3小时，酶解后混合物与前述离心上清液混合即为高蛋白浓度、具有一定抗菌活性的蝇蛆蛋白多肽。
其中，所述的食用菌匀浆液，其中β-1，3葡聚糖的含量为0.1wt%以上，木糖、木聚糖和戊聚糖的各自含量为1wt%以上，γ-氨基丁酸含量为0.1wt%以上，谷胱甘肽含量为10μg/mL以上。
其中，所述的食用菌匀浆液按如下方法制备得到：将食用菌种子液按10～30wt%的接种量加入培养基中进行液体深层发酵培养3～7天后将发酵液及其菌丝体经匀浆机打匀即得，发酵培养期间控制通气量5～35L/小时，溶氧量控制在DO值10～30%；其中，所述的培养基包含如下重量百分数的组分：啤酒糟5～30%，麦麸1～5%，黄豆粉0.05～1.0%，糙米粉1～9%，蔗糖1～3%，磷酸氢二钾0.05～0.5%，硫酸镁0.03～0.3%，CaCl20.1～3.0%，维生素B110～50mg/L，其余为水，pH6～8。
其中，所述的食用菌为香菇、草菇、蘑菇、木耳、银耳、猴头、竹荪、松口蘑、口蘑、红菇、牛肝菌、羊肚菌、马鞍菌、块菌和侧耳菇中的任意一种或几种的混合物。
其中，所述的乳酸菌菌悬液中，乳酸菌的含量为106～1012CFU/mL。
其中，所述的乳酸菌菌悬液按如下方法制备得到：利用含有木糖、木聚糖、戊聚糖的发酵液（可选用上述食用菌发酵后的上清液为发酵液），按常规发酵方法进行发酵，要求发酵结束后乳酸菌含量不得低于109CFU/mL，发酵液经3000～7000rpm条件下离心5～30分钟后，将离心菌体用同样条件下的离心的上清液调整为106～1012CFU/mL的混合液，或者OD600值0.1以上，此为乳酸菌菌悬液。所用乳酸菌为嗜热乳链球菌、保加利亚乳杆菌或两种菌的等量混合菌。
本发明的复合型水产微囊开口饵料，所含营养成分为蝇蛆蛋白多肽、食用菌发酵液、乳酸菌、螺旋藻粉、大豆磷脂、植物油等，其中蝇蛆蛋白多肽具有多种功能性多肽（包括抗菌肽）和丰富的脂肪酸，还有18种氨基酸及钙、磷等矿物质，食用菌发酵液、螺旋藻粉能提供丰富的核苷酸、维生素、微量元素等物质，是水产幼苗的优质营养源。蝇蛆蛋白多肽、食用菌、乳酸菌发酵液含有较多的免疫多糖、木聚糖、戊聚糖、抗菌肽、γ-氨基丁酸类特殊有效成分，有利于提高水产幼苗的免疫功能，维持消化道正常生理环境和生态平衡，提高抗病能力。大豆磷脂、植物油等含有多种不饱和脂肪酸和磷脂类物质，可促进水产幼苗的神经***乃至个体的发育。通过本发明提供各种有效成分组合，为水产幼苗在不同阶段的生长发育提供优质高营养成分、不含抗生素和脱壳素、符合绿色环保要求，制备成本低廉、使用方便的饵料，可在绿色水产育苗和养殖业领域广泛推广使用。
上述复合型水产微囊开口饵料的制备方法，将配方量的蝇蛆蛋白多肽液、食用菌匀浆液、乳酸菌菌悬液、螺旋藻粉、大豆磷脂、水和海藻酸钠混合，40～60℃水浴搅拌混匀，然后加入配方量的花生油或豆油用高速匀浆机打匀后即刻用雾化器加压喷入15～20wt%CaCl2水溶液中形成微胶囊颗粒并用80目筛子过滤后制成粒径小于1毫米微囊。
其中，所述的花生油或豆油的配方量选择2个以上不同的量，制备2批以上的饵料，利用油脂比重低于水的特性，并利用不同浓度的油脂含量能使饵料的比重不同从而悬浮于水的不同深度。该开口饵料微囊颗粒可在水中不同深度稳定悬浮性，能有效防止营养物质流失水中，大大提高了其有效利用度。
上述复合型水产微囊开口饵料在制备水产幼苗开口饵料中的应用。其中，所述水产幼苗优选为对虾幼苗。
经本发明制备的饵料可在现场制备后即刻投撒水塘中喂饲，也可保存于15wt%氯化钙、10wt%丙酸钙组成的保鲜水溶液中密闭分装后经Co60照射后长期保存和使用，也可经烘干后磨碎过筛后分装保存。
有益效果：本发明将含有不同比例蝇蛆蛋白多肽、食用菌发酵液、乳酸菌、螺旋藻粉、大豆磷脂、植物油为主要原料与海藻酸钠按一定比例混合经高速匀浆后加压喷入CaCl2溶液中形成微胶囊颗粒并过滤后制成的微囊，为水产幼苗提供高动物性蛋白、营养成分均衡、具有一定抗菌能力、促进水产幼苗的神经***乃至个体的发育、可调节幼苗消化道正常生理环境和生态平衡开口饵料。本发明所采用的原料为全天然原料，对水产动物和人体无毒无害，对环境友好，符合绿色养殖的要求，因而具有广阔的市场前景。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1：
1.1蝇蛆蛋白多肽液的制备：
将由猪、牛或鸡粪温育孵化家蝇蛆1kg用清水漂洗干净后，加入0.05M的磷酸缓冲液500mL，用高速匀浆机打匀后在6000rpm条件下离心20分钟，取上清液保存，离心沉淀加入同样体积0.05M磷酸缓冲液混匀，用磷酸调至pH3，加入酸性蛋白酶于37℃保温1～小时，再用NaOH调至pH8，同样在37℃保温1小时，酶解产物与前述离心上清液混合，加入0.05M的磷酸缓冲液调整蛋白浓度不低于10mg/mL，氨基氮含量不低于10mg/100mL，即得蝇蛆蛋白多肽溶液，经检测其对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌活性小于1mg/mL。1.2食用菌发酵匀浆液的制备：
取啤酒糟20wt%，麦麸4wt%，黄豆粉0.6wt%，糙米粉5wt%，蔗糖2wt%,磷酸氢二钾0.2wt%，硫酸镁0.15wt%，CaCl21.5wt%，维生素B120mg/L，混合后加适量自来水使其混合均匀，用醋酸和碳酸钠调pH至6～8，经高压灭菌后接入20wt%的食用菌菌种，所述的食用菌为香菇、草菇、蘑菇、木耳、银耳、猴头、竹荪、松口蘑、口蘑、红菇、牛肝菌、羊肚菌、马鞍菌、块菌和侧耳菇中的任意一种或几种的混合物。运用气升式发酵罐进行液体深层培养。其间控制通气量20L/小时，溶氧量控制在DO值10%，发酵周期为4天。将含菌丝体发酵液经匀浆机打匀后备用，经检测，其中β-1，3葡聚糖的含量为0.1wt%以上，木糖、木聚糖和戊聚糖的各自含量为1wt%以上，γ-氨基丁酸含量为0.1wt%以上，谷胱甘肽含量为10μg/mL以上。
1.3乳酸菌菌悬液的制备：
利用上述1.2制备的食用菌发酵上清液为培养基，经高压灭菌后接入1v/v%的乳酸菌菌种，运用气升式发酵罐进行液体深层培养。其间控制通气量5L/小时，溶氧量控制在DO值2%，发酵至109CFU/mL即停止发酵，发酵液经3000rpm条件下离心30分钟后，将离心菌体用同样条件下的离心的上清液调整为106～1012CFU/mL的混合液，或者OD600值0.1以上，此为乳酸菌菌悬液。所用乳酸菌为嗜热乳链球菌、保加利亚乳杆菌或两种菌的等量混合菌。
1.4微囊开口饵料的制备：
一种复合型水产微囊开口饵料，它包括如下重量百分数的组分：
额外加：
海藻酸钠 2%。
将配方量的蝇蛆蛋白多肽液、食用菌匀浆液、乳酸菌菌悬液、螺旋藻粉、大豆磷脂、水和海藻酸钠混合，45℃水浴搅拌混匀，然后加入配方量的花生油或豆油用高速匀浆机打匀后即刻用雾化器加压喷入15wt%CaCl2水溶液中形成微胶囊颗粒并用80目筛子过滤后制成粒径小于1毫米微囊。该饵料在现场制备后即刻投撒水塘中喂饲。
实施例2：
2.1蝇蛆蛋白多肽液的制备：
将由猪、牛或鸡粪温育孵化家蝇蛆10kg用清水漂洗干净后，加入0.05M的磷酸缓冲液5000mL，经均质机在20～40MPa条件下均质2次，得到均一乳液；乳液在6000rpm条件下离心20分钟，取上清液保存，离心沉淀加入同样体积0.05M磷酸缓冲液混匀，用磷酸调至pH3，加入酸性蛋白酶于37℃保温3小时，再用NaOH调至pH8，同样在37℃保温3小时，酶解产物与前述离心上清液混合，加入0.05M的磷酸缓冲液调整蛋白浓度不低于10mg/mL，氨基氮含量不低于10mg/100mL，即得蝇蛆蛋白多肽溶液。
2.2食用菌发酵匀浆液的制备：
取啤酒糟20wt%，麦麸5wt%，黄豆粉0.6wt%，糙米粉8wt%，蔗糖2wt%,磷酸氢二钾0.2wt%，硫酸镁0.15wt%，CaCl21.5wt%，维生素B120mg/L，混合后加适量自来水使其混合均匀，用醋酸和碳酸钠调PH至6～8，经高压灭菌后接入20wt%的食用菌菌种，所述的食用菌为香菇、草菇、蘑菇、木耳、银耳、猴头、竹荪、松口蘑、口蘑、红菇、牛肝菌、羊肚菌、马鞍菌、块菌和侧耳菇中的任意一种或几种的混合物。运用气升式发酵罐进行液体深层培养。其间控制通气量20L/小时，溶氧量控制在DO值20%，发酵周期为5天。将含菌丝体发酵液经匀浆机打匀后备用，经检测，其中β-1，3葡聚糖的含量为0.1wt%以上，木糖、木聚糖和戊聚糖的各自含量为1wt%以上，γ-氨基丁酸含量为0.1wt%以上，谷胱甘肽含量为10μg/mL以上。
2.3乳酸菌菌悬液制备：
利用上述2.2制备的食用菌发酵上清液为培养基，经高压灭菌后接入2v/v%的乳酸菌菌种，运用气升式发酵罐进行液体深层培养。其间控制通气量8L/小时，溶氧量控制在DO值5%，发酵至109CFU/mL即停止发酵。发酵液经6000rpm条件下离心20分钟后将离心菌体用同样条件下的离心上清液调整为1010CFU/mL，或者OD600值0.5以上的菌悬液，此为乳酸菌菌悬液。所用乳酸菌为嗜热乳链球菌、保加利亚乳杆菌或两种菌的等量混合菌。
2.4微囊开口饵料的制备：
一种复合型水产微囊开口饵料，它包括如下重量百分数的组分：
额外加：
海藻酸钠 3%。
将配方量的蝇蛆蛋白多肽液、食用菌匀浆液、乳酸菌菌悬液、螺旋藻粉、大豆磷脂、水和海藻酸钠混合，45℃水浴搅拌混匀，然后加入配方量的花生油或豆油用高速匀浆机打匀后即刻用雾化器加压喷入20wt%CaCl2水溶液中形成微胶囊颗粒并用80目筛子过滤后制成粒径小于1毫米微囊。该饵料可保存于15wt%氯化钙、10wt%丙酸钙组成的保鲜溶液中密闭分装后经Co60照射后长期保存和使用，也可经烘干后磨碎过筛后分装保存。
实施例3：
取上述实施例中1、2制备的饵料的比例按15㎏/吨天然饲料的比例混合均匀后喂养动物投喂饵料（对照组为常规饵料：螺旋藻、酵母、车元、蛋黄等；实验组：常规饵料用25%，本发明的微囊饵料用75%），原操作规程不变，仍为一日三次：早（5：00），晚（15：00），夜间（零时）或早、晚两次，也可根据当地喂养方法使用。
定期观察动物的使用后生长情况：体重增加速度、死亡率、存活率以及动物发育情况（如对虾的变蚤状I、II、变糠期、***时间），并和对照组（除不加开口饵料其余相同）作比较，对虾体长增长速度实验结果见表1。
表1
另据观察结果发现实验组成活率明显高于对照组，并且虾苗活力大，发育的也快。变糠期对照组用了59小时，实验组用了56小时。***期，对照组用了54小时，实验组用了51小时，而且成活率一直高于对照组10个百分点。
通过实验证明：实验组成活率高于对照组，发育的也快，***需要的时间短，而且苗齐，苗壮。
育苗实验最后结果：实验组150万尾对虾幼体育成仔虾50万尾，对照组4000万尾育成仔虾200万尾。
Claims (5)
1.一种复合型水产微囊开口饵料，其特征在于，它包括如下重量百分数的组分：
以上组分重量百分比之和为100％；
额外加：
海藻酸钠 1～3％；
其中，所述的蝇蛆蛋白多肽液，其中的蛋白浓度为10mg/mL以上，氨基氮含量为10mg/100mL以上，对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌活性小于1mg/mL；所述的蝇蛆蛋白多肽液按如下方法制备得到：将蝇蛆虫体与磷酸缓冲液混合后高速匀浆打碎，离心后取上清液保存，沉淀继续与磷酸缓冲液混合，用磷酸或者醋酸调pH值至1～4，加入酸性蛋白酶于37℃酶解1～3小时，再用NaOH调pH值至7～10，再在37℃酶解1～3小时，酶解液与所述上清液混合即得；所述的蝇蛆为采用猪、牛或鸡粪温育孵化家蝇蛆；
其中，所述的食用菌匀浆液，其中β-1，3葡聚糖的含量为0.1wt％以上，木糖、木聚糖和戊聚糖的各自含量为1wt％以上，γ-氨基丁酸含量为0.1wt％以上，谷胱甘肽含量为10μg/mL以上；所述的食用菌匀浆液按如下方法制备得到：将食用菌种子液按10～30wt％的接种量加入培养基中进行液体深层发酵培养3～7天后将发酵液及其菌丝体经匀浆机打匀即得，发酵培养期间控制通气量5～35L/小时，溶氧量控制在DO值10～30％；其中，所述的培养基包含如下重量百分数的组分：啤酒糟5～30％，麦麸1～5％，黄豆粉0.05～1.0％，糙米粉1～9％，蔗糖1～3％，磷酸氢二钾0.05～0.5％，硫酸镁0.03～0.3％，CaCl20.1～3.0％，维生素B110～50mg/L，其余为水，pH6～8；
其中，所述的乳酸菌菌悬液中，乳酸菌的含量为106～1012CFU/mL。
2.根据权利要求1所述的复合型水产微囊开口饵料，其特征在于，所述的食用菌为香菇、草菇、蘑菇、木耳、银耳、猴头、竹荪、松口蘑、口蘑、红菇、牛肝菌、羊肚菌、马鞍菌、块菌和侧耳菇中的任意一种或几种的混合物。
3.权利要求1所述的复合型水产微囊开口饵料的制备方法，其特征在于，将配方量的蝇蛆蛋白多肽液、食用菌匀浆液、乳酸菌菌悬液、螺旋藻粉、大豆磷脂、水和海藻酸钠混合，40～60℃水浴搅拌混匀，然后加入配方量的花生油或豆油用高速匀浆机打匀后即刻用雾化器加压喷入15～20wt％CaCl2水溶液中形成微胶囊颗粒并用80目筛子过滤后制成粒径小于1毫米微囊。
4.根据权利要求3所述的复合型水产微囊开口饵料的制备方法，其特征在于，所述的花生油或豆油的配方量选择2个以上不同的量，制备2批以上的饵料，使饵料的比重不同从而悬浮于水的不同深度。
5.权利要求1所述的复合型水产微囊开口饵料在制备水产幼苗开口饵料中的应用。
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