CN103735591B - 一种抗消化性溃疡的组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种抗消化性溃疡的药物组合物。所述药物组合物含有有效量的螺旋藻多糖、苍术硬脂以及药学上可接受的药用辅料,该药物组合物可用于制备预防或治疗胃溃疡的药物或功能食品。
Description
技术领域
本发明属于药物和食品组合物领域,具体地,涉及一种含螺旋藻多糖和苍术硬脂的药物组合物,以及所述药物组合物的制备方法及其在制备治疗或预防消化性溃疡的药物或食品中的应用。
技术背景
螺旋藻(Spirulina)是蓝藻门、颤藻目、颤藻科、螺旋藻属低等藻类植物,是单细胞和多细胞的丝状微生物,丝体螺旋状。目前已发现的螺旋藻有35种以上,在淡水和咸水均有生长,其中用于食品生产的螺旋藻主要有钝顶螺旋藻(Spirulinaplatensis)和极大螺旋藻(Spirulinamaxima)。
螺旋藻多糖是从螺旋藻中分离、纯化的一种水溶性杂多糖,近现代研究资料其具有抗病毒、杭肿瘤、杭氧化、杭辐射、杭突变和增强免疫力等多种生物医药功能。
根据《中国药典》(2010版),苍术是指菊科苍术属植物茅苍术(南苍术)Atractylodeslancea、北苍术Atractylodeschinensis的干燥根茎。除此之外,作为药用植物使用的同属植物还包括关苍术Atractylodesjaponica、朝鲜苍术A.koreana、全叶苍术A.chinensis、赤峰苍术A.Chinensis。
苍术已有数千年的中医药传统应用历史。传统中医药文献记载,苍术味辛、苦,性温,归脾、胃、肝经,具有燥湿健脾,祛风湿,明目之功效。主要用于脘腹胀满、泄泻、水肿、脚气痿痹、风湿痹痛、风寒感冒、雀目夜盲。
消化性溃疡主要指发生于胃及十二指肠的慢性溃疡,是一多发病、常见病,总发病率可占人口的约10%~12%。消化性溃疡的临床特点为慢性过程,周期发作,中上腹节律性疼痛,其病理本质是消化食物的胃酸和胃蛋白酶消化了自身的胃壁和十二指肠壁,从而损伤胃和十二指肠黏膜组织并导致疾病。
消化性溃疡的发病机理中,胃酸分泌过多起重要作用。十二指肠溃疡肠溃疡患者的胃酸基础分泌量和最大分泌量可明显高于常人;十二指肠溃疡绝不发生于无胃酸分泌或分泌很少的人,而胃溃疡病人的BAO和MAO均与正常人相似,甚至低于正常人。
幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,HP)感染是慢性胃炎的主要病因,是引起消化性溃疡的重要病因。在HP粘附的上皮细胞可见微绒毛减少,细胞间连接丧失,细胞肿胀、表面不规则,细胞内粘液颗粒耗竭,空泡样变,细菌与细胞间形成粘着蒂和浅杯样结构。
消化性溃疡的治疗措施包括情志、饮食调节以及药物治疗。
制酸药如碳酸氢钠、氢氧化铝凝胶、次碳酸铋等可减低胃、十二指肠的酸度,缓解疼痛,促进溃疡愈合。抗胆碱能药阿托品、普鲁苯辛、胃复安等能抑制迷走神经而减少胃酸分泌,但其延缓胃排空可引起胃泌素分泌增加。组胺H2受体桔抗剂甲氰咪胍、法莫替丁等与组织胺竞争H2受体,消除组胺致胃酸分泌作用。酸泵抑制剂如奥美拉唑(omeprazde,OMP)和兰索拉唑(1anzoprazde,LAN)和抑制幽门螺旋菌药物如甲硝唑及利福西生组成三联疗法,以治疗幽门螺旋菌阳性的消化性溃疡病。
已有资料显示,螺旋藻多糖对应激性溃疡有预防和治疗作用(吴小梅等,螺旋藻预防大鼠应激性胃溃疡的实验研究.交通医学,1997;11(2):148-149),关苍术及茅苍术提取物、苍术合剂等对实验性溃疡具有拮抗作用(朱东海等,野生与栽培苍术对鼠胃溃疡模型的药理研究.中国中药杂志,2010;35(13):1758-1762;朴世浩等,关苍术正丁醇萃取物的抗溃疡作用研究.中草药,1996;27(7):410-413;宁海容等,苍术合剂抗大鼠溃疡性结肠炎的作用及抗氧化机制研究,中山大学学报(医学科学版),2008;(3S):169-171)。
迄今,现有技术中未有将苍术硬脂与螺旋藻多糖混合制备的组合物的报道,也没有该组合物可产生协同抗溃疡作用的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种将苍术硬脂与螺旋藻多糖混合制备的组合物,本发明将熔融状态的苍术硬脂与螺旋藻多糖混合,室温下可得固体状混合物;所得挥发油总多糖混合物可以产生协同抗溃疡作用,特别是对幽门螺旋杆菌所致的实验性胃溃疡模型具有显著的预防和治疗作用。此外,本发明还在于提供该组合物的制备方法及其在制备治疗和/或预防胃溃疡药物或食品中的应用。
本发明的下述技术方案是用于实现上述的发明目的的:
本发明首先提供一种食用和/或药用组合物,所述组合物含有预防和/或治疗胃溃疡有效剂量的螺旋藻多糖提取物、苍术硬脂以及药物和/或食品制备中可接受的赋形剂。其中:
所述螺旋藻多糖提取物是从钝顶螺旋藻Spirulinaplatensis和/或极大螺旋藻Spirulinamaxima中提取获得的总多糖,其中,所述螺旋藻多糖提取物中总糖含量不低于提取物总量的80%;多糖的平均分子量不低于10kD。
所述苍术硬脂是从苍术AtractylodesLances干燥根茎中提取获得的总挥发油,其中苍术醇和桉叶油醇的含量之和不低于挥发油总量的50%。
所述螺旋藻多糖与苍术硬脂的组成比例在5:1~5:4的范围内。
本发明所述食用和/或药用组合物是指本发明所述组合物既可用作功能性食品,也可用作预防和治疗消化性溃疡的药物组合物。
本发明所述螺旋藻多糖可任选从钝顶螺旋藻Spirulinaplatensis和/或极大螺旋藻Spirulinamaxima中提取。本发明实验研究结果显示,将钝顶螺旋藻多糖和/或极大螺旋藻多糖用于本发明之药物组合物可产生近似的抗溃疡活性。
不同物种的苍术属植物干燥根茎中所含挥发油的化学成分组成差异较大,本发明所述苍术硬脂是指从茅苍术又称南苍术AtractylodesLances干燥根茎中提取获得的挥发油。所述苍术硬脂中,以重量比计,苍术醇(hinesol)和桉叶油醇(β-eudesmol)的含量之和不低于挥发油总量的50%。苍术醇(hinesol)和桉叶油醇(β-eudesmol)如下所示。
苍术硬脂所含的苍术醇和β-桉叶油醇可通过气象色谱-质谱联用仪确认,而其含量可通过气相色谱法检测。
本发明研究发现,螺旋藻多糖与苍术硬脂的组成比例在5:1~5:4的范围内时,所述组合物均具有良好协同抗实验性胃溃疡活性。本发明优选的实施方案中,其所述药物组合物中的螺旋藻多糖与苍术硬脂的组成比例在3:1~3:2的范围内。
本发明还提供了所述螺旋藻多糖的制备方法,所述方法包括如下步骤:
(1)水提取法获得螺旋藻水提物;
(2)将步骤(1)所得螺旋藻水提物的水溶液经C1-C4低级醇或酮分级沉淀获得螺旋藻总多糖;
(3)将步骤(2)所得螺旋藻总多糖可进一步任选采用超滤或色谱层析方法获得纯化螺旋藻多糖提取物。
其步骤(1)中,所述水提法提取一般是以约8~15倍重量的水,在室温至100℃条件下提取2~3遍;可以任选将所得水溶液适当浓缩后进行下一步处理;
步骤(2)中,优选的低级醇酮包括乙醇和丙酮,所得沉淀可任选采用低级醇酮洗涤1~3遍后,采用减压干燥、冷冻干燥的方法干燥。
步骤(2)所得总多糖可以直接用于本发明组合物的制备。本领域技术人员可以理解,所述总多糖也可以进一步采用超滤法、凝胶色谱法、离子交换层析法进行进一步纯化。
根据本发明多次重复试验研究结果,所得螺旋藻多糖提取物中的中性糖含量不低于总提取物的80%;高效凝胶色谱法(HPGPC)检测结果表明,由于原料来源(生产商及生产批次不同)以及纯化程度的影响,所得螺旋藻多糖的分子量不尽相同,但总体上,其平均分子量均不低于10kD。
本发明还进一步提供权利要求1~2所述苍术硬脂的制备方法,所述方法可任选采用(1)水蒸气蒸馏法、(2)超临界萃取法、(3)有机溶剂提取法提取获得总挥发油,即本发明所述之苍术硬脂。
所述挥发油提取方法为本领域技术人员所熟知,其中,水蒸气蒸馏法是常用挥发油提取方法;而CO2超临界萃取法可以提高挥发油的提取得率,但其产物中可含有较高含量的脂肪酸及其酯,本领域技术人员可以理解,进一步采用结晶、溶剂萃取等方法可以降低或部分脱除超临界萃取法产物中的脂肪酸及其酯的含量。
本发明还提供本发明所述药物组合物的固体制剂制备方法,其步骤包括:
(1)60℃~80℃下使制剂量的苍术硬脂呈熔融状态,搅拌加入制剂量的螺旋藻多糖,-18℃~4℃冷藏使之凝固,低温粉碎;
(2)步骤(1)所得产物中加入生理学可接受的药用赋形剂并制粒;
(3)将步骤(2)所得颗粒压片或填充胶囊。
一般而言,植物挥发油类成分由于其油状物性质,多制备成软胶囊类制剂,固体制剂制备具有一定的难度。本发明发现,将螺旋藻多糖搅拌混合于熔融状态下的苍术硬脂中,在降低温度的情况下,可获得易于粉碎的固形物,其固形物粉碎后,可容易地与药学上可接受的赋形剂混合,且所得混合物粉末或颗粒可具有良好的流动性,因此易于制备填充胶囊或压制成片剂。
所述药学上可接受的赋形剂可包括但不限于填充剂、助滑剂、粘合剂、着色剂等。对于固体片剂还可任选采用包衣剂、着色剂等包衣。
本发明研究证明,本发明所述之含苍术硬脂和螺旋藻多糖的组合物在幽门结扎、幽门螺旋杆菌所致的胃溃疡模型以及化学性十二指肠溃疡模型均具有显著的预防和/或治疗溃疡的作用,且其作用呈现明显的协同作用效应,因此本发明的进一步提供本发明所述药物组合物在制备预防和/或治疗胃溃疡药物中的用途。
附图说明
图1为钝顶螺旋藻多糖和极大螺旋藻多糖的高效凝胶色谱,(A:钝顶螺旋藻多糖;B:极大螺旋藻多糖);
图2为苍术硬脂GC-MS谱图(A:GC谱图;B:苍术醇MS谱图;C:β-桉叶油醇MS谱图)。
具体实施方式
本发明以下结合附图,用具体实施例对本发明的实质性内容作进一步说明。但是,这些具体实施例仅用于说明本发明,对本发明的范围不构成任何限制。
实施例1:
螺旋藻多糖和苍术硬脂制备:
1.1螺旋藻多糖制备:
取钝顶螺旋藻(Spirulinaplatensis)和极大螺旋藻(Spirulinamaxima)干粉各1000g,95%(V/V)乙醇浸泡脱脂,离心去乙醇,80℃下15L水提取两遍,合并水提取液,减压浓缩至提取液总体积约10L,加30L95%(V/V)乙醇,4℃下静置过夜,离心得沉淀。分别以3L纯水溶解所得沉淀,离心去不溶物,上清液以2NHCl调pH2.8,4℃下静置约4hr,离心去沉淀(蛋白),2NNaOH调pH中性,加9L95%(V/V)乙醇,4℃下静置过夜,离心得沉淀,所得沉淀以2L90%乙醇洗涤两遍,室温下减压干燥分别得总多糖约35.6g和42.8g。
取钝顶螺旋藻总多糖20g溶解于650ml纯水中,3kD超滤膜(Millipore超滤装置)超滤,截留溶液冷冻干燥得钝顶螺旋藻多糖18.5g;
另取极大螺旋藻总多糖20g,溶解于650ml纯水中,过Sephadex-G50凝胶色谱柱(Ф8cmx150cm)纯化,收集含糖组分后,冷冻干燥得极大螺旋藻总多糖15.3g。
硫酸苯酚法检测所述钝顶螺旋藻总多糖、钝顶螺旋藻多糖、极大螺旋藻总多糖、极大螺旋藻多糖中的糖含量分别为86.4%,89.8%,85.3%和91.5%。
以标准葡聚糖为标准,高效凝胶色谱(HPGPC)法检测所述钝顶螺旋藻多糖和极大螺旋藻多糖的分子量分别为约16.7kD和28.6kD。
附图1A和1B所示为钝顶螺旋藻多糖和极大螺旋藻多糖的HPGPC检测图谱。
1.2苍术硬脂制备
方法:取已粉碎的茅苍术AtractylodesLances干燥根茎颗粒三份各1kg,分别用于水蒸气蒸馏提取、有机溶剂提取和CO2超临界提取。其中:
(1)水蒸气蒸馏提取是将1kg茅苍术干燥根茎颗粒置入挥发油提取器的磨口瓶中,按中国药典附录方法连续蒸馏5小时,然后停止加热,冷却后放水,收集蒸馏液表面的油状物。
(2)有机溶剂提取法是将1kg茅苍术干燥根茎颗粒置入烧瓶中,以正己烷作为溶剂,回流提取8h,减压蒸馏除去溶剂,得到提取产物。
(3)CO2超临界萃取法是将1kg茅苍术干燥根茎颗粒放入超临界流体萃取器中,流量~35kg/h,温度~50℃、压力~20MPa下静态萃取1hr、动态萃取3hr。在分离压力~10MPa,温度40℃下,析出挥发油。
气相色谱法分析法检测三种提取法所得苍术硬脂中苍术醇和β-桉叶油醇的含量,所述检测的色谱条件为,HP-5MS色谱柱,石英毛细管柱(30m×250μm×0.25μm);气化室温度280℃;质谱检测器,离子源温度230℃;四极杆温度150℃;柱温(程序升温):80℃(1min),12℃/min升温至280℃(15min);分流比1:100;载气He,流量1.5ml/min。
结果:水蒸气蒸馏法获得苍术硬脂约28.3g,所得产物在低温下(20℃或以下)呈浅黄色固状物。气相色谱法检测,其苍术醇和β-桉叶油醇的含量之和为约72.3%。
正己烷提取法获得苍术硬脂约28.3g,所得产物为粘稠的黄色油状物。气相色谱法检测,其苍术醇和β-桉叶油醇的含量之和为约55.5%;
CO2超临界萃取法获得苍术硬脂约41.6g,所得产物在低温下(20℃或以下)呈浅黄色固状物。气相色谱法检测,其苍术醇和β-桉叶油醇的含量之和为约69.2%。
水蒸气蒸馏法获得苍术硬脂的气相色谱-质谱(GC-MS)分析图谱见附图2,根据GC-MS计算其主要组成成分含量如表1所示:
表1.水蒸气蒸馏法制备的苍术硬脂主要化学成分GC-MS分析
实施例2:
螺旋藻多糖-苍术硬脂组合物对消化性溃疡模型的治疗作用
2.1大鼠幽门结扎型胃溃疡模型
试验样品:
螺旋藻多糖,实施例1所述钝顶螺旋藻多糖;
苍术硬脂,实施例1之1.2项所述水蒸气蒸馏法提取产物;
组合物A,其为重量比为2:1的钝顶螺旋藻多糖和水蒸汽蒸馏所得苍术硬脂的混合物。
组合物B,其为重量比为5:1的极大螺旋藻多糖和正己烷提取的苍术硬脂的混合物。
组合物C,其为重量比为5:4的极大螺旋藻多糖和超临界萃取的苍术硬脂的混合物。
试验方法:体重160~180gSD大鼠64只,随机分为8组(每组8只),即模型对照组,螺旋藻多糖给药组,苍术硬脂给药组,螺旋藻多糖-苍术水挥发油组合物给药组(分别设A,200mg/kg、A,100mg/kg、B,200mg/kg、C,100mg/kg给药组),阳性对照组(50mg/kg雷尼替丁)。
试验前48小时大鼠禁食不禁水。试验时,大鼠麻醉固定后,无菌操作结扎幽门。术后各试验组动物分别灌胃相应的受试药物,阳性对照组灌胃雷尼替丁,模型组按同法给予等量的溶剂,并停止供水供食。
18小时后处死大鼠,打开腹腔,近膈处结扎食道,取胃于1%甲醛溶液固定10分钟。沿胃大弯切开胃壁,洗净内容物,展开胃壁并用大头针固定在蜡板上,观察胃粘膜面,按常规方法记录每组溃疡动物数、溃疡面积以及溃疡指数。
试验结果:实验结果见表1。
结果表明,与模型组比较,除螺旋藻多糖组外,各给药组发生溃疡的鼠数有所减少、溃疡程度显著减轻,溃疡面积缩小,溃疡指数降低。组合物A的抗溃疡结果显示,螺旋藻多糖-苍术硬脂组合物的药效学作用显然优于相应的螺旋藻多糖、苍术水挥发油单独给药的药效,且其药效具有协同增效的药效学效应。组合物B和组合物C的药效学实验结果表明,钝顶螺旋藻多糖和极大螺旋藻多糖联用苍术硬脂均可产生协同增效作用;水蒸气蒸馏、超临界萃取以及有机溶剂提取所得苍术硬脂均有抗溃疡作用。
表2.大鼠幽门结扎型胃溃疡动物模型试验结果
2.2幽门螺旋杆菌致大鼠胃溃疡模型
试验样品:螺旋藻多糖苍术硬脂组合物D,其为重量比为3:2的钝顶螺旋藻多糖和水蒸汽蒸馏所得苍术硬脂的混合物。
试验方法:体重160~180gSD大鼠40只。大鼠禁食24hr,戊巴比妥麻醉后,剖腹,用直径5.5mm滤纸蘸取冰醋酸酸浸渍胃窦部浆膜面两次,每次30s,生理盐水棉球搽洗灼伤部位3次,缝合腹腔,术后一般喂养。术后3天,大鼠禁食24hr后灌胃幽门螺旋杆菌HP109CFUP/只,之后连续四天每日灌胃HP,共5次。
造模后,将大鼠随机分为4组(每组10只),即模型对照组,250mg/kg和125mg/kg剂量的组合物D给药组,阳性对照组(枸橼酸铋钾片/替硝唑片/克拉霉素片,75mg/kg)。各给药组连续灌胃给药7天,模型组给予等体积生理盐水。末次灌药后2周处死动物,取胃观察并计算溃疡指数;同时取胃窦部组织做尿素酶依赖性试验(RUT)检查实验动物Hp的存在。
实验结果:螺旋藻多糖苍术硬脂组合物D对HP感染具有显著的抑制作用,对冰乙酸性灼伤-HP感染性溃疡模型具有良好的治疗作用。
表3.大鼠幽门结扎型胃溃疡动物模型试验结果
2.3实验性大鼠十二指肠溃疡模型
试验样品:螺旋藻多糖苍术硬脂组合物D,其为重量比为3:2的钝顶螺旋藻多糖和水蒸汽蒸馏所得苍术硬脂的混合物。
试验方法:体重160~180gSD大鼠40只。大鼠禁食不禁水12hr后,大鼠颈背部皮下注射300mg/kg剂量的10%L-半胱胺酸盐酸盐,6hr后再次皮下注射200mg/kg的10%L-半胱胺酸盐酸盐。术后第4日将大鼠随机分为4组(每组10只),即模型对照组,240mg/kg和120mg/kg剂量的组合物D给药组,阳性对照组(雷尼替丁,40mg/kg)。术后第5日开始灌胃给药,每日分2次给予所述给药剂量。模型对照组给予等容量生理盐水。给药10天后,断椎处死动物,结扎幽门和贲门,取出并分离十二指肠。沿十二指肠系膜对侧剪开十二指肠,记录面积并计算十二指肠溃疡指数。
实验结果:表3所示实验结果显示,螺旋藻多糖苍术硬脂组合物D对盐酸半胱氨酸致大鼠十二指肠溃疡有显著的保护作用。
表4.大鼠十二指肠溃疡动物模型试验结果
实施例3:
螺旋藻多糖苍术硬脂组合物的制剂及制备方法
3.1固体片剂制备
处方:
制法:60℃下熔融的苍术油,搅拌中加入螺旋藻多糖,0℃下放置过夜,所得固形物粉碎(80目),加处方量糊精混合制粒,所得颗粒加处方量硬脂酸镁混合,常规方法压制成片片剂。
3.2硬胶囊制备
处方:
制法:60℃下熔融的苍术硬脂,搅拌中加入螺旋藻多糖,0℃下放置过夜,所得固形物粉碎(80目),加处方量乳糖、糊精混合均匀,加入预先配好的HPMC溶液制成软材,20目筛制粒,60℃干燥约30分钟,18目筛整粒,装2#胶囊即可。
实施例3两个剂型,也可以作为食品用。
Claims (7)
1.一种组合物,由预防或治疗消化性溃疡有效量的螺旋藻多糖提取物、苍术硬脂以及药物或食品制备中可接受的赋形剂组成,其中:
所述螺旋藻多糖提取物是从钝顶螺旋藻Spirulinaplatensis和/或极大螺旋藻Spirulinamaxima中提取的总糖含量不低于提取物总量的80%,多糖的平均分子量不低于10kD的总多糖;
所述苍术硬脂是从苍术Atractylodeslancea提取的其中苍术醇和桉叶油醇的含量之和不低于挥发油总量50%的总挥发油;
所述螺旋藻多糖与苍术硬脂的组成重量比在5:1~5:4范围内。
2.如权利要求1所述的组合物,其中所述螺旋藻多糖与苍术硬脂的组成重量比在3:1~3:2范围内。
3.如权利要求1或2所述的组合物,其中螺旋藻多糖的制备方法为:
(1)水提取法获得螺旋藻水提物;
(2)将步骤(1)所得螺旋藻水提物的水溶液经C1-C4低级醇或酮分级沉淀获得螺旋藻总多糖;
(3)将步骤(2)所得螺旋藻总多糖进行超滤处理或色谱层析纯化获得螺旋藻多糖提取物。
4.如权利要求1或2所述的组合物,其中苍术硬脂的制备方法取水蒸气蒸馏法或超临界萃取法或有机溶剂提取法。
5.如权利要求1或2所述的组合物,其中固体制剂的制备方法为:
(1)60℃~80℃下使处方量的苍术硬脂呈熔融状态,搅拌加入处方量的螺旋藻多糖,-18℃~4℃冷藏使之凝固,低温粉碎;
(2)步骤(1)所得产物中加入药理学上可接受的药用赋形剂并制粒;
(3)将步骤(2)所得颗粒压片或填充胶囊。
6.权利要求1或2所述组合物在制备预防或治疗消化性溃疡药物中的应用。
7.权利要求1或2所述组合物在制备预防或治疗消化性溃疡食品中的应用。
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螺旋藻治疗消化性溃疡100例;吴世林等;《世界华人消化杂志》;20001031;第8卷(第10期);1194-1195 * |
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Publication number | Publication date |
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CN103735591A (zh) | 2014-04-23 |
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