CN103705431B - 一种鱼源胶原抗氧化肽美容面膜及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种鱼源胶原抗氧化肽美容面膜及其制备方法，其特征在于其成分按重量百分比计为：鱼源胶原抗氧化肽5～10份、白芨胶10～15份、原花青素1～2份、天门冬提取物8～10份、甘油5～10份、霍霍巴油2～5份、维生素E醋酸酯混合物1-2份、香精0.2-1.0份，表面活性剂1～2份、防腐剂0.15～0.2份；本发明将鱼鳞或鱼骨提取的胶原抗氧化肽经过TGase改性和与白芨胶复合交联可使胶原蛋白的韧性、延展性、粘连性和热稳定性得到较大的改善，其主要由天然动、植物中高分子物质构成，具有良好的韧性和延展性，可根据使用人不同的面部特征任意的延展，并且自身具有良好的粘性，不需要其它的粘合剂，使用方便安全。

Description

一种鱼源胶原抗氧化肽美容面膜及其制备方法

技术领域

本发明属于生物制品领域，具体涉及到一种鱼源胶原抗氧化肽美容面膜及其制备方法。

背景技术

胶原蛋白是自然界中存在最为广泛的动物蛋白，它对紫外线的损伤具有良好的修复作用，而且它在化妆品配方中有良好的配伍性、稳定性及抗菌性。另外，胶原蛋白与皮肤有极好的吸附性和相容性，有阻断褐色素生成的功能。同时，胶原水解物多肤链中含氨基、羟基等亲水基团，对人体皮肤有保湿作用。除此之外，胶原蛋白结合护肤品晚霜使用具有活肤修复及保湿锁水、加速细胞复制增殖、大幅提高角质层的代谢速度、修复受损细胞、减少皱纹增加弹性以及高效锁水作用。经研究实验表明，水解胶原蛋白溶液还具有抑菌防腐效果。不过，胶原蛋白本身具有机械性能和热稳定性差的缺点，限制了其应用。通常使用的胶原蛋白基生物材料都要经过改性，以改善胶原蛋白物化方面的性能。。

胶原蛋白改性方法应用较多的是化学交联，改性剂主要是戊二醛、碳化二亚胺类和环氧类化合物。而戊二醛与蛋白的反应过程可逆，生成schiff碱的结构不稳定，很容易水解产生具有代谢毒性的游离小分子醛(CN1861801A)。此外，常用的改性方法还有以胶原蛋白与其它天然高分子材料共混。虽然共混能够借助氢键等次级键提高胶原蛋白的强度，并增添许多胶原蛋白不具有的优良性质，但是该方法改性的胶原蛋白膜材料在力学性能、热稳定性、阻湿性等方面仍然不能满足面膜材料的要求。

白芨为兰科多年生草本植物白芨的地下地茎。含有淀粉、葡萄糖、挥发油、黏液质等成分，味苦、甘，性平且黏滑。外用可润滑肌肤，除面上暗疮。《药性论》曰:“治面上斑疮，令人肌滑。”《本草纲目》曰:“洗面黑，去暗斑。”它主要是润肤白面，去斑灭瘢，而且能医手足皲裂等，是古代美容的常用药。白芨质地黏腻，含有胶质，它能改善局部血液循环，促进上皮细胞修复，能止血、敛疮、润肤和生肌。白芨鳞茎组织中含40％-50％天然水溶性多糖，俗称白芨胶，其化学成分是葡萄甘露聚糖，两种糖基的比例大约为4:1，胶的平均分子量65000-150000kD，具有抗炎、促凝血、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化等生物学活性，是一种优良的天然增稠剂和成膜材料。白芨胶胶无抗原性和致热原性，与机体组织能够较好地相容，并可被机体缓慢地降解吸收，因此白芨多糖胶作为生物医学材料具有潜在的发展前景，此外，白芨胶可替代化学增稠剂应用于日化产品中，具有对皮肤刺激性小，并有延缓皮肤衰老的功效。

随着科学技术的发展和人民生活水平的不断提高，化妆品在人们生活中占据越来越重要的位置，从而带动了化妆品科学技术的发展。目前市场上销售的面膜类美容化妆品有粉状、或泥状、或膏状，主流面膜还是以纸质面膜为主，但其具有如下缺点：1.面膜的延展性不好，很难完全符合每一个人的面部形状特征；单纯的胶原蛋白面膜热稳定性低、韧性、延展性和粘连性差，不能较好的满足面膜的使用性能，而且传统的改性方法可能会水解产生有代谢毒性的游离小分子醛；且有效成分胶原多肽含量低，一般1％左右，而如果加入大量的胶原多肽其面膜的机械性能差的缺点，需加入大量的无效成分基质如成膜材料等；2.由于面膜的粘性不好，很容易掉下来，给使用者带来诸多不方便之处；3.面膜敷的时间过长会导致养分被面膜反吸回来，从而引起脸部皮肤干燥等缺陷；4.使用的载体及其他原材料，如透明质酸等昂贵，增加产品成本；文献中有胶原蛋白和壳聚糖结合的面膜，但是由于壳聚糖水溶性差，其制备过程中需加入大量的刺激性酸性成分；且目前没有胶原多肽和白芨胶结合的面膜上市。

发明内容

本发明的目的是提供了一种鱼源胶原抗氧化肽美容面膜及其制备方法，其面膜胶原肽含量高，具有良好的韧性、延展性和保湿性、美容护肤，安全无毒，克服了单纯的胶原蛋白面膜热稳定性低、韧性、延展性和粘连性差等缺点，

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种鱼源胶原抗氧化肽美容面膜，其特征在于其成分按重量计为：鱼源胶原抗氧化肽5～10份、白芨胶10～15份、原花青素1～2份、天门冬提取物8～10份、甘油5～10份、霍霍巴油2～5份、维生素E醋酸酯混合物1-2份、香精0.2-1.0份，表面活性剂1～2份、防腐剂0.15～0.2份；所述的防腐剂为尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的重量比为4:1；所述的表面活性剂为吐温20；所述鱼源胶原抗氧化肽为从鱼鳞或鱼骨中提取的胶原抗氧化肽；所述天门冬提取物为天门冬以水或含水乙醇提取的提取物。

更进一步的，所述的鱼源胶原抗氧化肽美容面膜的制备方法，其特征在于包括下列步骤：

1)将鱼源胶原抗氧化肽溶于蒸馏水中，50-60℃水浴加热至完全溶解，制成质量分数为10％的胶原抗氧化肽溶液，冷却至室温备用；在胶原抗氧化肽溶液中添加质量为胶原抗氧化肽的2％的TGase，50℃水浴条件下反应2h，80℃灭酶5min，冷却至室温；

2)将白芨胶浸入蒸馏水，待充分膨胀后，置50-60℃的水浴中使其溶解，加水稀释至制成质量分数为20％的白芨胶溶液；

3)将上述制得的胶原蛋白溶液和白芨胶溶液混合，搅拌均匀，再加入原花青素混合均匀，于30-50℃恒温搅拌1-3小时，制得原液；

4)在上述原液中，加入天门冬提取物，混合均匀，制得水相；将甘油、霍霍巴油、维生素E醋酸酯混合物、表面活性剂、香精和防腐剂混合均匀，制得油相；将上述水相和油相混合，充分搅拌均匀，在0.1MPa下减压脱气30min，制得混合溶液；

5)将上述混合溶液倒入模具中成型，于40-60℃干燥3-10小时，揭膜即得到胶原抗氧化肽美容面膜。

优选的，所述鱼源胶原抗氧化肽的制备方法为：

1)前处理：将鱼鳞或鱼骨原料清洗干净，用料液质量比为1:20的0.1mol/L的NaOH溶液浸泡，用自来水冲洗pH至中性，再用蒸馏水冲洗3遍；

2)脱钙：鱼骨原料用料液质量比为1：5的0.5mol/L的EDTA溶液浸泡5整天，用NaOH调pH7.0-7.8，每24小时更换一次EDTA溶液，用自来水冲洗pH至中性，再用蒸馏水冲洗3遍，再用料液质量比为1：20的10％的异丙醇溶液浸泡24小时，再用自来水冲洗pH至中性，再用蒸馏水冲洗3遍；鱼鳞原料用料液质量比为1:20的0.4mol/LHCl溶液浸泡，同时用磁力搅拌器搅拌90分钟后，用自来水冲洗pH至中性，再用蒸馏水冲洗3遍；

3)水煮：将鱼鳞或鱼骨原料与料液质量比为1:1-2的水加入瞬间变压提取灌上的高压浸渍罐中，通过气泵向高压浸渍罐内充气加压8～10kgf/cm²，浸泡1-2小时；将高压浸渍罐内的物料放入瞬间变压提取灌的高压浸渍罐上的低压提取灌内，加料液质量比为1:30的蒸馏水，抽真空，保持90℃低压微沸煎煮1-2小时，提取液用双层脱脂纱布过滤；

所述瞬间变压提取灌包括设有蒸气夹套的低压提取灌，低压提取灌上设有通过联通阀连接的高压浸渍罐，所述高压浸渍罐上部设有可封闭的进料口、压力表和连接气泵的进气阀；所述低压提取灌的罐体上设有可封闭的进料口、出渣口、冷凝器和连有真空泵的抽气阀；

4)酶解：在过滤液中放入复合蛋白酶进行酶解2-6h，酶解温度为45-55℃，pH为7-8；然后在90-100℃下灭酶4-10min；所述复合蛋白酶选自胶原蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶的至少两种；复合蛋白酶的加入量按质量百分比为原料质量的0.1-0.5％；

5)精制：酶解液经过离心后，上清液采用超滤膜过滤分离，收集分子量≤4000道尔顿的组分进行脱色，脱盐，喷雾干燥或冷冻干燥，得到鱼源胶原抗氧化肽粉末。

优选的，所述白芨胶的制备方法为：将白芨，粉碎，加6-8倍量的50-60℃水浸泡6-8h，时时搅拌、滤过，滤液备用；药渣再4-6倍量的50-60℃水浸泡2次，每次浸泡4h，滤过；合并3次滤液，浓缩成稠膏状，冷却后加95％乙醇，使含醇量达70％-75％，搅拌，即析出大量絮状沉液，静置1h，真空抽滤至干，真空干燥，研细，即得。

酶交联剂可以引起胶原多肽分子内或分子间的交联反应，从而改善胶原多肽的性能。最常用的酶是谷氨酞胺转移酶(TGase)。TGase能催化谷氨酞胺γ-氨基和赖氨酸的ε-氨基形成交联键，从而改善胶原多肽的流变特性和机械性能。分子量较大的胶原多肽的机械强度比分子量小的要高，但其抗氧化性能一般是随着分子量的减小而增大，本发明将其经过TGase改性，改善了其机械性能，而其抗氧化性能降低不明显，取得了意向不到的技术效果。

相对于现有技术，本发明的有益效果是：

1)本发明的胶原抗氧化肽美容面膜主要由天然动、植物中高分子物质构成，无毒、无味、无副作用；它不仅具有双重保湿效果、好的韧性、延展性及粘接性、且还具有肤感更佳，深层洁肤的功能，是一种经济实用有效的护肤美容化妆品。本发明中使用的交联剂是原花青素，除了其本身具有的无毒性、强抗氧化性等优良的生物学性能外，采用它制备的美容面膜可避免游离小分子醛造成的代谢毒性现象和化学交联剂在材料中的残留；本发明将鱼源胶原抗氧化肽经过TGase改性和与白芨胶复合交联可使胶原蛋白的韧性、延展性、粘连性和热稳定性得到较大的改善，克服了单纯的胶原蛋白面膜热稳定性低、韧性、延展性和粘连性差等缺点，且其鱼源胶原抗氧化肽在TGase改性前后抗氧化性变化不明显。本发明胶原抗氧化肽美容面膜具有良好的韧性和延展性，可根据使用人不同的面部特征任意的延展，并且自身具有良好的粘性，不需要其它的粘合剂，使用方便安全。经试验，本发明的胶原抗氧化肽美容面膜的抗撕强度≥600g/cm³，吸水率≥25倍，其吸湿性和抗撕强度优异。

2)白芨胶属多糖类，胶原抗氧化肽属蛋白质类，蛋白质和糖类在一起可能存在氢键作用和静电作用，再加上原花青素交联作用，在胺基、羟基等之间相互交联，进一步提高其力学强度。白芨胶作为成膜材料可以增加面膜的溶胀性和柔韧性，经过可以改善胶原海绵的机械强度，其对面部的粘附速度快，粘附牢度强，弹性好，透气性好；白芨胶具有止血抗菌和促进伤口愈合，改善局部血液循环，能止血、敛疮、润肤和生肌；皮肤疾病大多由邪热炽盛、肺胃蕴热所致，天门冬具有滋阴，润燥，清肺，降火的功效，《本草纲目》云：煮食之，令人肌体滑泽白净，除身上一切恶气不洁之疾。经试验发明还具有美白的效果，白芨和天门冬中都有粘液质和多糖，加入到化妆品中可增加药物的粘着性和胶化功能及药物在皮肤表面形成薄膜的能力。本发明胶原抗氧化肽美容面膜采用甘油作保湿剂，结合胶原蛋白、白芨胶固有的保湿功能，从而实现了双重保湿效果，而且其韧性决定了它具有很好的肤感。本发明的美容面膜不仅可以提高胶原蛋白面膜的保湿功能，还可以软化角质层，有助于消除皱纹、面膜干燥过程中使得皮肤适度收缩，使得松弛肌肤绷紧、同时美白肌肤并是受损肌肤得到修复，达到美容的目的。

3)本发明采用水煮法和酶法提取胶原抗氧化肽，方法操作简便，产品收率高。本发明的鱼源胶原抗氧化肽具有强抗氧化活性，且可溶性好，无异味，可用于制备美容功能的化妆品。经预处理的鱼鳞或鱼骨原料经高压浸渍后，水大量进入细胞膜内，然后经瞬间释放压力进入低压提取灌内，可有效撑破细胞膜，有利于有效成分的快速溶出。采用温浸+醇沉法提取纯化白芨胶，不但减少了杂质含量，而且工艺简单、大大降低了生产成本，所制得的白芨胶纯度高。

附图说明

下面结合附图对本发明用到的设备作进一步说明：

图1是瞬间变压力提取灌的结构示意图；

图中：1为高压浸渍罐、2为视镜、3为可封闭的进料口、4为压力表、5为连接气泵的进气阀、6为低压提取罐、7为冷凝器、8为蒸气夹套、9为出渣口、10为放料阀、11连有真空泵的抽气阀、12联通阀。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例一：

1、鱼源胶原抗氧化肽的制备：

1)前处理：将鱼鳞原料清洗干净，用料液质量比为1：20的0.1mol/L的NaOH溶液浸泡，用自来水冲洗pH至中性(冲洗10遍左右)，再用蒸馏水冲洗3遍；

2)脱钙：鱼鳞原料用料液质量比为1：20的0.4mol/LHCl溶液浸泡，同时用磁力搅拌器搅拌90分钟后，用自来水冲洗pH至中性(冲洗10遍左右)，再用蒸馏水冲洗3遍；

3)水煮：将鱼鳞或鱼骨原料与料液质量比为1:1的水加入瞬间变压提取灌上的高压浸渍罐中，通过气泵向高压浸渍罐内充气加压8～10kgf/cm²，浸泡2小时；将高压浸渍罐内的物料放入瞬间变压提取灌的高压浸渍罐上的低压提取灌内，加料液质量比为1：30的蒸馏水，抽真空，保持90℃低压微沸煎煮1小时，提取液用双层脱脂纱布过滤；

如图1所示，所述瞬间变压提取灌包括设有蒸气夹套8的低压提取灌6，低压提取灌6上设有通过联通阀12连接的高压浸渍罐1，所述高压浸渍罐1上部设有可封闭的进料口3、压力表4和连接气泵的进气阀5；所述低压提取灌6的罐体上设有可封闭的进料口3、出渣口9、冷凝器7和连有真空泵的抽气阀11；

4)酶解：在过滤液中放入复合蛋白酶进行酶解2-6h，酶解温度为45-55℃，pH为7-8；然后在90-100℃下灭酶4-10min；所述复合蛋白酶为碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶；复合蛋白酶的加入量按质量百分比为原料质量的0.5％；

5)精制：酶解液经过离心后，上清液采用超滤膜过滤分离，收集分子量≤4000道尔顿的组分进行脱色，脱盐，喷雾干燥或冷冻干燥，得到鱼源胶原抗氧化肽粉末。

2、白芨胶的制备：将白芨，粉碎，加8倍量的60℃水浸泡8h，时时搅拌、滤过，滤液备用；药渣再加6倍量的60℃水浸泡2次，每次浸泡4h，滤过；合并3次滤液，浓缩成稠膏状，冷却后加95％乙醇，使含醇量达70％，搅拌，即析出大量絮状沉液，静置1h，真空抽滤至干，真空干燥，研细，即得。

3、天门冬提取物的制备：天门冬以8倍量的水提取2-3次，合并提取液，浓缩干燥，即得天门冬提取物。

4、胶原抗氧化肽美容面膜的制备：

处方按重量百分比计为：鱼源胶原抗氧化肽5份、白芨胶10份、原花青素1份、天门冬提取物10份、甘油5份、霍霍巴油2份、维生素E醋酸酯混合物1份、香精0.2份，表面活性剂1份、防腐剂0.15份；所述的防腐剂为尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的重量比为4：1；所述的表面活性剂为吐温20；所述鱼源胶原抗氧化肽为从鱼鳞或鱼骨中提取的胶原抗氧化肽。

1)将鱼源胶原抗氧化肽溶于蒸馏水中，50-60℃水浴加热至完全溶解，制成质量分数为10％的胶原抗氧化肽溶液，冷却至室温备用；在胶原抗氧化肽溶液中添加质量为胶原抗氧化肽的2％的TGase，50℃水浴条件下反应2h，80℃灭酶5min，冷却至室温；

2)将白芨胶浸入蒸馏水，待充分膨胀后，置50-60℃的水浴中使其溶解，加水稀释至制成质量分数为20％的白芨胶溶液；

3)将上述制得的胶原蛋白溶液和白芨胶溶液混合，搅拌均匀，再加入原花青素混合均匀，于40℃恒温搅拌1小时，制得原液；

4)在上述原液中，加入天门冬提取物，混合均匀，制得水相；将甘油、霍霍巴油、维生素E醋酸酯混合物、表面活性剂、香精和防腐剂混合均匀，制得油相；将上述水相和油相混合，充分搅拌均匀，在0.1MPa下减压脱气30min，制得混合溶液；

5)将上述混合溶液倒入模具中成型，于40℃干燥10小时，揭膜即得到胶原抗氧化肽美容面膜。

实施例二：

1、鱼源胶原抗氧化肽的制备：

1)前处理：将鱼骨原料清洗干净，用料液质量比为1：20的0.1mol/L的NaOH溶液浸泡，用自来水冲洗pH至中性(冲洗10遍左右)，再用蒸馏水冲洗3遍；

2)脱钙：鱼骨原料用料液质量比为1:5的0.5mol/L的EDTA溶液浸泡5整天，用NaOH调pH7.0-7.8，每24小时更换一次EDTA溶液，用自来水冲洗pH至中性(冲洗10遍左右)，再用蒸馏水冲洗3遍，再用料液质量比为1：20的10％的异丙醇溶液浸泡24小时，再用自来水冲洗pH至中性(冲洗10遍左右)，再用蒸馏水冲洗3遍；

3)水煮：将鱼骨原料与料液质量比为1:2的水加入瞬间变压提取灌上的高压浸渍罐中，通过气泵向高压浸渍罐内充气加压8～10kgf/cm²，浸泡1小时；将高压浸渍罐内的物料放入瞬间变压提取灌的高压浸渍罐上的低压提取灌内，加料液质量比为1:30的蒸馏水，抽真空，保持90℃低压微沸煎煮2小时，提取液用双层脱脂纱布过滤；

4)酶解：在过滤液中放入复合蛋白酶进行酶解2-6h，酶解温度为45-55℃，pH为7-8；然后在90-100℃下灭酶4-10min；所述复合蛋白酶为胶原蛋白酶、中性蛋白酶；复合蛋白酶的加入量按质量百分比为原料质量的0.3％；

5)精制：酶解液经过离心后，上清液采用超滤膜过滤分离，收集分子量≤4000道尔顿的组分进行脱色，脱盐，喷雾干燥或冷冻干燥，得到鱼源胶原抗氧化肽粉末。

2、白芨胶的制备：将白芨，粉碎，加6倍量的50℃水浸泡6h，时时搅拌、滤过，滤液备用；药渣再加4倍量的50℃水浸泡2次，每次浸泡4h，滤过；合并3次滤液，浓缩成稠膏状，冷却后加95％乙醇，使含醇量达75％，搅拌，即析出大量絮状沉液，静置1h，真空抽滤至干，真空干燥，研细，即得。

3、天门冬提取物的制备：天门冬以10倍量的水提取2-3次，合并提取液，浓缩干燥，即得天门冬提取物。

4、胶原抗氧化肽美容面膜的制备：

处方按重量百分比计为：鱼源胶原抗氧化肽5份、白芨胶10份、原花青素1份、天门冬提取物8份、甘油10份、霍霍巴油5份、维生素E醋酸酯混合物2份、香精1.0份，表面活性剂2份、防腐剂0.2份；所述的防腐剂为尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的重量比为4:1；所述的表面活性剂为吐温20；所述鱼源胶原抗氧化肽为从鱼鳞或鱼骨中提取的胶原抗氧化肽。

1)将鱼源胶原抗氧化肽溶于蒸馏水中，50-60℃水浴加热至完全溶解，制成质量分数为10％的胶原抗氧化肽溶液，冷却至室温备用；在胶原抗氧化肽溶液中添加质量为胶原抗氧化肽的2％的TGase，50℃水浴条件下反应2h，80℃灭酶5min，冷却至室温；

2)将白芨胶浸入蒸馏水，待充分膨胀后，置50-60℃的水浴中使其溶解，加水稀释至制成质量分数为20％的白芨胶溶液；

3)将上述制得的胶原蛋白溶液和白芨胶溶液混合，搅拌均匀，再加入原花青素混合均匀，于50℃恒温搅拌1-3小时，制得原液；

4)在上述原液中，加入天门冬提取物，混合均匀，制得水相；将甘油、霍霍巴油、维生素E醋酸酯混合物、表面活性剂、香精和防腐剂混合均匀，制得油相；将上述水相和油相混合，充分搅拌均匀，在0.1MPa下减压脱气30min，制得混合溶液；

5)将上述混合溶液倒入模具中成型，于40-60℃干燥3-10小时，揭膜即得到胶原抗氧化肽美容面膜。

实施例三：

1、鱼源胶原抗氧化肽的制备：

1)前处理：将鱼鳞原料清洗干净，用料液质量比为1：20的0.1mol/L的NaOH溶液浸泡，用自来水冲洗pH至中性(冲洗10遍左右)，再用蒸馏水冲洗3遍；

2)脱钙：鱼鳞原料用料液质量比为1:20的0.4mol/LHCl溶液浸泡，同时用磁力搅拌器搅拌90分钟后，用自来水冲洗pH至中性(冲洗10遍左右)，再用蒸馏水冲洗3遍；

3)水煮：将鱼鳞原料与料液质量比为1:1.5的水加入瞬间变压提取灌上的高压浸渍罐中，通过气泵向高压浸渍罐内充气加压8～10kgf/cm²，浸泡1.5小时；将高压浸渍罐内的物料放入瞬间变压提取灌的高压浸渍罐上的低压提取灌内，加料液质量比为1:30的蒸馏水，抽真空，保持90℃低压微沸煎煮1.5小时，提取液用双层脱脂纱布过滤；

4)酶解：在过滤液中放入复合蛋白酶进行酶解2-6h，酶解温度为45-55℃，pH为7-8；然后在90-100℃下灭酶4-10min；所述复合蛋白酶选自胶原蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶的至少两种；复合蛋白酶的加入量按质量百分比为原料质量的0.3％；

5)精制：酶解液经过离心后，上清液采用超滤膜过滤分离，收集分子量≤4000道尔顿的组分进行脱色，脱盐，喷雾干燥或冷冻干燥，得到鱼源胶原抗氧化肽粉末。

2、白芨胶的制备：将白芨，粉碎，加8倍量的60℃水浸泡8h，时时搅拌、滤过，滤液备用；药渣再加6倍量的60℃水浸泡2次，每次浸泡4h，滤过；合并3次滤液，浓缩成稠膏状，冷却后加95％乙醇，使含醇量达70％，搅拌，即析出大量絮状沉液，静置1h，真空抽滤至干，真空干燥，研细，即得。

3、天门冬提取物的制备：天门冬以10倍量的50％乙醇提取3次，合并提取液，浓缩干燥，即得天门冬提取物。

4、胶原抗氧化肽美容面膜的制备：

处方按重量百分比计为：鱼源胶原抗氧化肽10份、白芨胶15份、原花青素2份、天门冬提取物8份、甘油8份、霍霍巴油4份、维生素E醋酸酯混合物1.5份、香精0.5份，表面活性剂1.5份、防腐剂0.2份；所述的防腐剂为尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的重量比为4:1；所述的表面活性剂为吐温20；所述鱼源胶原抗氧化肽为从鱼鳞或鱼骨中提取的胶原抗氧化肽。

1)将鱼源胶原抗氧化肽溶于蒸馏水中，50-60℃水浴加热至完全溶解，制成质量分数为10％的胶原抗氧化肽溶液，冷却至室温备用；在胶原抗氧化肽溶液中添加质量为胶原抗氧化肽的2％的TGase，50℃水浴条件下反应2h，80℃灭酶5min，冷却至室温；

2)将白芨胶浸入蒸馏水，待充分膨胀后，置50-60℃的水浴中使其溶解，加水稀释至制成质量分数为20％的白芨胶溶液；

3)将上述制得的胶原蛋白溶液和白芨胶溶液混合，搅拌均匀，再加入原花青素混合均匀，于30℃恒温搅拌2小时，制得原液；

4)在上述原液中，加入天门冬提取物，混合均匀，制得水相；将甘油、霍霍巴油、维生素E醋酸酯混合物、表面活性剂、香精和防腐剂混合均匀，制得油相；将上述水相和油相混合，充分搅拌均匀，在0.1MPa下减压脱气30min，制得混合溶液；

5)将上述混合溶液倒入模具中成型，于40℃干燥10小时，揭膜即得到胶原抗氧化肽美容面膜。

实施例四：

1、鱼源胶原抗氧化肽的制备：

1)前处理：将鱼骨原料清洗干净，用料液质量比为1：20的0.1mol/L的NaOH溶液浸泡，用自来水冲洗pH至中性，再用蒸馏水冲洗3遍；

2)脱钙：鱼骨原料用料液质量比为1：5的0.5mol/L的EDTA溶液浸泡5整天，用NaOH调pH7.4，每24小时更换一次EDTA溶液，用自来水冲洗pH至中性，再用蒸馏水冲洗3遍，再用料液质量比为1:20的10％的异丙醇溶液浸泡24小时，再用自来水冲洗pH至中性，再用蒸馏水冲洗3遍；

3)水煮：将鱼骨原料与料液质量比为1:1.5的水加入瞬间变压提取灌上的高压浸渍罐中，通过气泵向高压浸渍罐内充气加压8～10kgf/cm²，浸泡1.5小时；将高压浸渍罐内的物料放入瞬间变压提取灌的高压浸渍罐上的低压提取灌内，加料液质量比为1：30的蒸馏水，抽真空，保持90℃低压微沸煎煮1.5小时，提取液用双层脱脂纱布过滤；

4)酶解：在过滤液中放入复合蛋白酶进行酶解2-6h，酶解温度为45-55℃，pH为7-8；然后在90-100℃下灭酶4-10min；所述复合蛋白酶为胶原蛋白酶、中性蛋白酶；复合蛋白酶的加入量按质量百分比为原料质量的0.3％；

5)精制：酶解液经过离心后，上清液采用超滤膜过滤分离，收集分子量≤4000道尔顿的组分进行脱色，脱盐，喷雾干燥或冷冻干燥，得到鱼源胶原抗氧化肽粉末。

2、白芨胶的制备：将白芨，粉碎，加6倍量的50℃水浸泡6h，时时搅拌、滤过，滤液备用；药渣再加4倍量的50℃水浸泡2次，每次浸泡4h，滤过；合并3次滤液，浓缩成稠膏状，冷却后加95％乙醇，使含醇量达70％，搅拌，即析出大量絮状沉液，静置1h，真空抽滤至干，真空干燥，研细，即得。

3、天门冬提取物的制备：天门冬以10倍量的70％乙醇提取2次，合并提取液，浓缩干燥，即得天门冬提取物。

4、胶原抗氧化肽美容面膜的制备：

处方按重量百分比计为：鱼源胶原抗氧化肽10份、白芨胶10份、原花青素1.5份、天门冬提取物10份、甘油10份、霍霍巴油4份、维生素E醋酸酯混合物2份、香精0.7份，表面活性剂2份、防腐剂0.15份；所述的防腐剂为尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的重量比为4:1；所述的表面活性剂为吐温20；所述鱼源胶原抗氧化肽为从鱼鳞或鱼骨中提取的胶原抗氧化肽。

1)将鱼源胶原抗氧化肽溶于蒸馏水中，50-60℃水浴加热至完全溶解，制成质量分数为10％的胶原抗氧化肽溶液，冷却至室温备用；在胶原抗氧化肽溶液中添加质量为胶原抗氧化肽的2％的TGase，50℃水浴条件下反应2h，80℃灭酶5min，冷却至室温；

2)将白芨胶浸入蒸馏水，待充分膨胀后，置50-60℃的水浴中使其溶解，加水稀释至制成质量分数为20％的白芨胶溶液；

3)将上述制得的胶原蛋白溶液和白芨胶溶液混合，搅拌均匀，再加入原花青素混合均匀，于50℃恒温搅拌1-3小时，制得原液；

4)在上述原液中，加入天门冬提取物，混合均匀，制得水相；将甘油、霍霍巴油、维生素E醋酸酯混合物、表面活性剂、香精和防腐剂混合均匀，制得油相；将上述水相和油相混合，充分搅拌均匀，在0.1MPa下减压脱气30min，制得混合溶液；

5)将上述混合溶液倒入模具中成型，于40-60℃干燥3-10小时，揭膜即得到胶原抗氧化肽美容面膜。

实施例五：本发明胶原抗氧化肽和美容面膜在抑制细胞黑色素合成的试验

小鼠B16黑色素瘤细胞己成为定量评价黑色素合成的模型***。取对数生长期的B16细胞，经0.25％(重量百分数)胰酶消化，以RPMI-1640完全培养基配成密度为5*10⁵/mL细胞悬液，接种于细胞培养板，置于37℃、5％(体积百分数)CO₂的培养箱内培养。

贴壁24h后，弃培养液，分别加入质量比为5％的胶原抗氧化肽的完全培养液(样品1为5％的胶原抗氧化肽溶液，样品2为含量5％的胶原抗氧化肽的实施例二的美容面膜溶液)，对照组加入等体积的完全培养基，继续培养48h。分别测定细胞内黑色素含量、酪氨酸酶活性和还原型谷胱甘肽含量。

表本发明胶原抗氧化肽和美容面膜在抑制细胞黑色素合成的影响

^**P＜0.01与对照组比较

结果表明，样品组1和2均能显著降低B16细胞黑色素含量，抑制酪氨酸酶活性，提高还原型谷胱甘肽含量。酪氨酸酶是调控黑色素合成的关键限速酶，还原型谷胱甘肽是生物体内重要的抗氧化剂，在抑制黑色素合成过程中起了重要作用，它主要通过巯基和酪氨酸酶的作用位点结合而抑制酪氨酸酶的活性。以上分析说明，胶原抗氧化肽具有显著抑制细胞黑色素合成的作用，具有美白作用。

实施例六：本发明胶原抗氧化肽抗氧化性能的试验研究：

体外实验采用连苯三酚和Cu²⁺-H₂O₂***测定了胶原抗氧化肽和TGase改性的胶原抗氧化肽对超氧阴离子自由基和羟自由基清除活性。结果表明，上述胶原抗氧化肽和TGase改性的胶原抗氧化肽能够显著清除超氧阴离子自由基与羟自由基。

表本发明的胶原抗氧化肽和TGase改性的胶原抗氧化肽的抗氧化性能

通过体外实验证明，制得的胶原抗氧化肽和TGase改性的胶原抗氧化肽具有显著的抗氧化活性。

Claims (1)

1.一种鱼源胶原抗氧化肽美容面膜，其特征在于其成分按重量计为：鱼源胶原抗氧化肽5～10份、白芨胶10～15份、原花青素1～2份、天门冬提取物8～10份、甘油5～10份、霍霍巴油2～5份、维生素E醋酸酯混合物1-2份、香精0.2-1.0份，表面活性剂1～2份、防腐剂0.15～0.2份；所述的防腐剂为尼泊金甲酯和尼泊金丙酯，尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的重量比为4:1；所述的表面活性剂为吐温20；所述鱼源胶原抗氧化肽为从鱼鳞或鱼骨中提取的胶原抗氧化肽；所述天门冬提取物为天门冬以水或含水乙醇提取的提取物，所述的鱼源胶原抗氧化肽美容面膜的制备方法包括下列步骤：

1)将鱼源胶原抗氧化肽溶于蒸馏水中，50-60℃水浴加热至完全溶解，制成质量分数为10％的胶原抗氧化肽溶液，冷却至室温备用；在胶原抗氧化肽溶液中添加质量为胶原抗氧化肽的2％的TGase，50℃水浴条件下反应2h，80℃灭酶5min，冷却至室温；

2)将白芨胶浸入蒸馏水，待充分膨胀后，置50-60℃的水浴中使其溶解，加水稀释至制成质量分数为20％的白芨胶溶液；

3)将上述制得的胶原蛋白溶液和白芨胶溶液混合，搅拌均匀，再加入原花青素混合均匀，于30-50℃恒温搅拌1-3小时，制得原液；

4)在上述原液中，加入天门冬提取物，混合均匀，制得水相；将甘油、霍霍巴油、维生素E醋酸酯混合物、表面活性剂、香精和防腐剂混合均匀，制得油相；将上述水相和油相混合，充分搅拌均匀，在0.1MPa下减压脱气30min，制得混合溶液；

5)将上述混合溶液倒入模具中成型，于40-60℃干燥3-10小时，揭膜即得到胶原抗氧化肽美容面膜，

所述鱼源胶原抗氧化肽的制备方法为：

1)前处理：将鱼鳞或鱼骨原料清洗干净，用料液质量比为1:20的0.1mol/L的NaOH溶液浸泡，用自来水冲洗pH至中性，再用蒸馏水冲洗3遍；

2)脱钙：鱼骨原料用料液质量比为1:5的0.5mol/L的EDTA溶液浸泡5整天，用NaOH调pH7.0-7.8，每24小时更换一次EDTA溶液，用自来水冲洗pH至中性，再用蒸馏水冲洗3遍，再用料液质量比为1:20的10％的异丙醇溶液浸泡24小时，再用自来水冲洗pH至中性，再用蒸馏水冲洗3遍；鱼鳞原料用料液质量比为1:20的0.4mol/LHCl溶液浸泡，同时用磁力搅拌器搅拌90分钟后，用自来水冲洗pH至中性，再用蒸馏水冲洗3遍；

3)水煮：将鱼鳞或鱼骨原料与料液质量比为1:1-2的水加入瞬间变压提取灌上的高压浸渍罐中，通过气泵向高压浸渍罐内充气加压8～10kgf/cm²，浸泡1-2小时；将高压浸渍罐内的物料放入瞬间变压提取灌的高压浸渍罐上的低压提取灌内，加料液质量比为1:30的蒸馏水，抽真空，保持90℃低压微沸煎煮1-2小时，提取液用双层脱脂纱布过滤；

所述瞬间变压提取灌包括设有蒸气夹套的低压提取灌，低压提取灌上设有通过联通阀连接的高压浸渍罐，所述高压浸渍罐上部设有可封闭的进料口、压力表和连接气泵的进气阀；所述低压提取灌的罐体上设有可封闭的进料口、出渣口、冷凝器和连有真空泵的抽气阀；

4)酶解：在过滤液中放入复合蛋白酶进行酶解2-6h，酶解温度为45-55℃，pH为7-8；然后在90-100℃下灭酶4-10min；所述复合蛋白酶选自胶原蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、中性蛋白酶的至少两种；复合蛋白酶的加入量按质量百分比为原料质量的0.1-0.5％；

5)精制：酶解液经过离心后，上清液采用超滤膜过滤分离，收集分子量≤4000道尔顿的组分进行脱色，脱盐，喷雾干燥或冷冻干燥，得到鱼源胶原抗氧化肽粉末；

所述白芨胶的制备方法为：将白芨，粉碎，加6-8倍量的50-60℃水浸泡6-8h，时时搅拌、滤过，滤液备用；药渣再4-6倍量的50-60℃水浸泡2次，每次浸泡4h，滤过；合并3次滤液，浓缩成稠膏状，冷却后加95％乙醇，使含醇量达70％-75％，搅拌，即析出大量絮状沉液，静置1h，真空抽滤至干，真空干燥，研细，即得。