CN103698444A - 毒杀芬单体的分离和测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于农副产品或食品检测领域，涉及农药残留的检测，具体地，涉及毒杀芬单体的分离和测定方法。更具体地，本发明涉及一种测定烟草中毒杀芬单体的方法，特别涉及一种能分别或者同时测定烟草中毒杀芬单体的方法。所述从样品中分离毒杀芬单体的方法，包括使用环己烷-丙酮溶液进行分离的步骤。所述测定毒杀芬单体的方法，包括使用将分离的毒杀芬单体进行气相色谱串联质谱测定的步骤。本发明能分别测定烟草中毒杀芬类农残主要单体，且操作简单、检测快速。本发明能够实现至少七种毒杀芬单体的同时有效分离和检测。

Description

毒杀芬单体的分离和测定方法

技术领域

本发明属于农副产品或食品检测领域，涉及农药残留的检测，具体地，涉及毒杀芬单体的分离和测定方法。更具体地，本发明涉及一种测定烟草中毒杀芬单体的方法，特别涉及一种能分别或者同时测定烟草中毒杀芬单体的方法。

背景技术

毒杀芬（Toxaphene）是一种以松节油为主要原料合成的有机氯类农药，自1972年美国环保署颁布滴滴涕禁令后，毒杀芬使用量迅速增长并成为美国乃至世界范围内使用的主要杀虫剂，仅1970年到1993年间毒杀芬在全球的使用量就高达6.7×10⁵吨。

毒杀芬具有致畸、致癌、致突变等剧毒性，并且稳定性高、易于被生物体富集，故20世纪90年代后相继被各国禁止生产，并于2002年被列为《斯德哥尔摩公约》中12种首要控制的可持续有机污染物之一，许多国家和组织对其在食品中的最大残留限量做了严格规定，如德国规定毒杀芬在鱼中的最大残留限量为0.1mg／kg(以Parlar26、Parlar50、Parlar62这3种毒杀芬主要单体总残留量计)。欧盟规定Parlar26、Parlar50、Parlar62在水果、蔬菜和谷物中的最大残留限量均为0.1mg／kg。

虽然毒杀芬在全球已被禁用，但由于它稳定性高、半衰期长，目前仍滞留于土壤中。多年生根茎类中药材极有可能受其污染，而目前我国还没有毒杀芬在中药材中的残留检测标准。为保证人们用药安全，迫切需要建立灵敏、准确的中药材中毒杀芬残留量测定方法。

但是，毒杀芬成分极其复杂，仅其主要成分氯代冰片烷类化合物的数量从理论上推断就达32768种，实际所含化合物也至少有1000多种。

目前，毒杀芬残留检测多采用气相色谱-质谱法(GC-MS)，但是该方法但选择性不高，无法去除色素等样品基体干扰，而需要复杂的前处理过程来净化样品，例如采用硅藻土柱吸附去杂质，正己烷洗过。此外，GC-MS检测，无法将毒杀芬单体分离开，并且检测的是毒杀芬的总量。

然而，现有技术中检测的样品基质以土壤等环境样品和鱼等海产品居多，尚未见烟草中毒杀芬残留主要单体测定方法的报道。目前，尚需要一种能分别测定烟草中毒杀芬农残主要单体的方法，并且为推进毒杀芬的安全性评价提供技术支持。

并且实际上，不管使用何种方法，对于毒杀芬各种单体的有效逐一分离和测定，涉及的因素和条件诸多，故而是本领域始终未能真正解决的技术难题。

发明内容

本发明人经过深入的研究和创造性的劳动，得到了一种毒杀芬单体的分离（提取）和测定方法。本发明人惊奇地发现，所述方法能够将毒杀芬的单体逐一分离出来，并且能够有效地测定各个单体的浓度。由此提供了下述发明：

本发明的一个方面涉及一种从样品中分离毒杀芬单体的方法，其使用环己烷-丙酮溶液进行萃取，得到提取液。

在本发明的一个实施方案中，环己烷-丙酮溶液需要完全浸没样品。

在本发明的一个实施方案中，样品取1－10g，环己烷-丙酮溶液用量为20－100mL。

根据本发明的任一项所述的方法，其中，所述样品为农副产品或固态食品；具体地，为烟草原料或者烟草制品；更具体地，为烤烟、香料烟或白肋烟。

根据本发明的任一项所述的方法，其中，所述毒杀芬单体为选自Parlar26、Parlar50、Parlar62、Parlar40、Parlar42、Parlar44和Parlar32中的任意1、2、3、4、5、6或7种。

根据本发明的任一项所述的方法，其中，所述环己烷-丙酮溶液为环己烷与丙酮体积比9：1至4:1的环己烷-丙酮溶液。具体地，环己烷与丙酮体积比为9：1、8：1、7：1、6：1、5：1或4：1。优选地，环己烷与丙酮体积比为8：1至5：1，更优选为7：1至5：1，进一步优选为6.5：1至5.5：1，特别优选为6：1。

不拘于理论的限制，尽管毒杀芬能够溶于一些有机溶剂，但是，由于毒杀芬极性较弱，本发明人进行了深入的研究分析，其中还比较了环己烷、乙酸乙酯、环己烷及其不同配比的混合溶液，结果发现，特别是对于烟草样品，体积比为6：1环己烷-丙酮溶液的回收率高，干扰少。

根据本发明的任一项所述的方法，其还包括将提取液进行振荡和除去固体残渣的步骤。

根据本发明的任一项所述的方法，其中，所述振荡为涡旋振荡，所述除去固体残渣为过滤（优选使用0.45μm的滤膜）；优选地，所述涡旋振荡的时间为至少1分钟；更优选为至少5分钟；特别优选为至少10分钟；进一步优选为10－40分钟。

本发明的再一方面涉及一种测定样品中毒杀芬单体的方法，包括本发明中任一项所述的从样品中分离毒杀芬单体的方法；具体地，包括将本发明中任一项所述的从样品中分离毒杀芬单体的方法得到的产物进行气相色谱串联质谱测定的步骤。

在本发明的一个实施方案中，所述测定（或者分离测定）毒杀芬单体的方法如附图1所示。

在本发明的一个实施方案中，分离检测的毒杀芬单体的色谱图可以与附图2进行比对。

根据本发明任一项所述的方法，其中，所述气相色谱串联质谱测定的条件为：所用色谱柱为HP-5的毛细管柱，所用载气为0.8－1.2mL/min的氦气，所用离子源为电子轰击离子源，所用检测模式为选择离子扫描模式，所监测离子为毒杀芬单体特征离子对。

不拘于理论的限制，不拘于实际上，并非采用气相色谱串联质谱（GC-NCI-MS/MS）就一定能将毒杀芬的单体逐一分离出来。本发明人通过专业的摸索优化和反复实验，创造性地在一整套技术方案包括色谱柱的选择、分离程序的优化、离子对的选择等的基础上，才将毒杀芬的单体逐一分离出来。从而实现上述七种毒杀芬单体的同时有效分离和检测。这在实施例1－3中得到了验证。

根据本发明任一项所述的方法，其中，所述毒杀芬单体特征离子对为231/195、233/197、195/159、305/269、358/323、341/305和/或377/341。

根据本发明任一项所述的方法，其中，所用载气为0.8、0.9、1.0、1.1或1.2mL/min的氦气。

在本发明的一个实施方案中，称取1－10g待测样品（烟草，例如烤烟、香料烟、白肋烟）于50－100mL的离心管中，加入20－50mL体积比9：1至4:1的环己烷-丙酮溶液，涡旋振荡10－40分钟，经0.45μm的滤膜过滤后，滤液用气相色谱串联质谱测定。其中，所述的气相色谱串联质谱检测条件为：所用色谱柱为HP-5的毛细管柱，所用载气为0.8－1.2mL/min的氦气，所用离子源为电子轰击离子源，所用检测模式为选择离子扫描模式，所监测离子为毒杀芬主要单体特征离子对。

不拘于理论的限制，对本发明而言，能检出的单体种类由实际样品含有的毒杀芬单体种类数决定。

本发明中，

术语“烤烟”是指烟叶，一年生草本，茄科。植株被腺毛，高1米左右。叶柄不明显或成翅状柄。用手摸起来，叶发黏。圆锥花序顶生。花萼筒状，花冠漏斗状，形似军号，末端粉红色。蒴果，种子黄褐色。原产于南美洲，世界各地有栽培。主要采用烘烤技术醇化。

术语“香料烟”是指香料烟茄科，烟草属，为一年生草本植物，其株型紧凑，叶片小，茎秆细，易燃烧，填充力强，芳香气味好，香浓味醇，故有“香料烟”之称。

术语“白肋烟”是指白肋烟红花烟种。它起源于美国俄亥俄州，混合型卷烟的原料，也可用于雪茄烟、斗烟和嚼烟。

发明的有益效果

本发明能分别测定烟草中毒杀芬类农残主要单体，且操作简单、检测快速。本发明能够实现至少七种毒杀芬单体的同时有效分离和检测。

附图说明

图1：本发明的操作流程示意图。

图2：本发明的标准溶液色谱图。其中，各个峰表示的含义为：1.Parlar26；2.Parlar32；3.Parlar40；4.Parlar42；5.Parlar44；6.Parlar50；7.PCB202；8.Parlar62。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1：烤烟样品中的毒杀芬单体的测定

称取1g烤烟样品于50mL离心管中，加入20mL体积比4:1的环己烷-丙酮溶液的提取液，涡旋振荡10min，经滤膜过滤后，用气相色谱串联质谱测定。

气相色谱串联质谱检测条件为：色谱柱为HP-5的毛细管柱，载气为0.8mL/min的氦气，离子源为电子轰击离子源，检测模式为选择离子扫描模式，所监测离子对为231/195、233/197、195/159、305/269、358/323、341/305和377/341，有检测出的检测毒杀芬单体为Parlar26（231/195）、Parlar40（195/159），含量分别为5.2μg/kg、18.6μg/kg。

实施例2：香料烟样品中的毒杀芬单体的测定

称取5g香料烟样品于50mL离心管中，加入30mL体积比6:1的环己烷-丙酮溶液的提取液，涡旋振荡30min，经滤膜过滤后，用气相色谱串联质谱测定。

气相色谱串联质谱检测条件为：色谱柱为HP-5的毛细管柱载气为1mL/min的氦气，离子源为电子轰击离子源，检测模式为选择离子扫描模式，所监测离子对为231/195、233/197、195/159、305/269、358/323、341/305和377/341，有检测出的检测毒杀芬单体为Parlar32（233/197）、Parlar40（195/159）、Parlar44（231/195），含量分别为10.6μg/kg、203.9μg/kg、79.2μg/kg。

实施例3：白肋烟样品中的毒杀芬单体的测定

称取10g白肋烟样品于100mL离心管中，加入50mL体积比9：1的环己烷-丙酮溶液的提取液，涡旋振荡40min，经滤膜过滤后，用气相色谱串联质谱测定。

气相色谱串联质谱检测条件为：色谱柱为HP-5的毛细管柱，载气为1.2mL/min的氦气，离子源为电子轰击离子源，检测模式为选择离子扫描模式，所监测离子对为231/195、233/197、195/159、305/269、358/323、341/305和377/341，有检测出的检测毒杀芬单体为Parlar26（231/195）、Parlar40（195/159）、Parlar50（341/305）、Parlar62（377/341），含量分别为2.1μg/kg、115.9μg/kg、8.0μg/kg、26.7μg/kg。

尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。

Claims (10)

1.一种从样品中分离毒杀芬单体的方法，其使用环己烷-丙酮溶液进行分离，得到提取液。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，环己烷-丙酮溶液需要完全浸没样品；具体地，样品取1－10g，环己烷-丙酮溶液用量为20－100mL。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述样品为农副产品或固态食品；具体地，为烟草原料或者烟草制品；更具体地，为烤烟、香料烟或白肋烟。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述毒杀芬单体为选自Parlar26、Parlar50、Parlar62、Parlar40、Parlar42、Parlar44和Parlar32中的任意1、2、3、4、5、6或7种。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述环己烷-丙酮溶液中环己烷与丙酮的体积比为9：1至4：1；优选地，环己烷与丙酮体积比为8：1至5:1；更优选为7：1至5：1；进一步优选为6.5：1至5.5：1；特别优选为6：1。

6.根据权利要求1所述的方法，其还包括将提取液进行振荡和除去固体残渣的步骤。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，所述振荡为涡旋振荡，所述除去固体残渣为过滤；优选地，所述涡旋振荡的时间为至少1分钟；更优选为至少5分钟；特别优选为至少10分钟；进一步优选为10－40分钟；优选地，所述过滤使用0.45μm的滤膜。

8.一种测定样品中毒杀芬单体的方法，包括权利要求1至7中任一项所述的从样品中分离毒杀芬单体的方法；具体地，包括将权利要求1至7中任一项的产物进行气相色谱串联质谱测定的步骤。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述气相色谱串联质谱测定的条件为：所用色谱柱为HP-5的毛细管柱，所用载气为0.8－1.2mL/min的氦气，所用离子源为电子轰击离子源，所用检测模式为选择离子扫描模式，所监测离子为毒杀芬单体特征离子对；具体地，所用载气为0.8、0.9、1.0、1.1或1.2mL/min的氦气。

10.根据权利要求8所述的方法，其中，所述毒杀芬单体特征离子对为231/195、233/197、195/159、305/269、358/323、341/305和/或377/341。

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