CN103695406A - 郁金香苯丙氨酸解氨酶TfPAL蛋白及其编码基因 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种郁金香苯丙氨酸解氨酶TfPAL蛋白及其编码基因,所述蛋白质为如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质或如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经过取代、缺失或者添加一个或几个氨基酸且具有郁金香苯丙氨酸解氨酶活性的蛋白质。本发明还提供了一种编码上述蛋白质的如SEQ ID NO.1所示的核酸序列。本发明为今后利用基因工程技术调控郁金香TfPAL基因的时空表达特性,从而调控花色提供了理论依据,具有实践应用价值。
Description
技术领域
本发明属于植物分子生物学领域,涉及郁金香花色苷合成途径中的关健酶及其编码基因,具体涉及一种郁金香苯丙氨酸解氨酶TfPAL蛋白及其编码基因。
背景技术
苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia-lyase,PAL)为植物苯丙烷类物质代谢途径的关键酶(Okada等,2008),是连接初生代谢和次生代谢的纽带,它在类黄酮、黄酮醇、花青素、单宁、异黄酮、黄烷酮、木质素、香豆素、芥子酸酯和水杨酸等次生代谢产物合成中起着重要作用,这些物质涉及植物生长发育、抗虫抗病、信号转导、紫外线防御和花粉育性等方面(Dixon等,2002),因此PAL与植物有着十分密切的关系,是近年来的研究热点。
近年来,已有研究者对包括凤仙花、尾穗苋、甜叶菊、甘薯、玉米、棉花和桃在内多种植物的PAL活性进行了研究,结果表明:(1)PAL的活性与植物花色苷含量明显正相关。(2)强光、激素、低温、机械损伤及病虫害侵染都可以诱异PAL活性升高。(3)PAL活性与组织中氮素含量呈负相关。具体到PAL活性与花色苷合成的关系,Arakawa认为,活性受光调节的PAL才是花色苷合成的关键酶(Arakawa O,1988)。苹果果皮中PAL活性的增加伴随着花色苷含量的增加,但可能不是控制花色苷的唯一关键酶(周爱琴等,1997)。另有研究证实乙烯可以通过诱导PAL活性而提高花色苷合成量(Cheng G和Breen P,1991)
PAL基因在植物中以多基因家族的形式存在,覆盆子中至少有2个基因成员,拟南芥中有4个成员,番茄中至少有26个,而马铃薯(Solanum tuberosum)中更多,估计有40~50个(Chang等2008;Joos和Hahlbrock,1992;Kumar和Ellis,2001)。PAL存在于所有绿色植物中,已从水稻、小麦、玉米等多种植物中得到分离纯化,真菌和藻类细胞中也有发现(Heilmann和Merfort,1998)。但郁金香(Tulipa fosteriana)中PAL基因的克隆及其表达模式尚不清楚。目前,未有任何与郁金香PAL蛋白及其编码基因序列相关的文献报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种郁金香苯丙氨酸解氨酶TfPAL蛋白及其编码基因。本发明提供了一种郁金香TfPAL蛋白序列,以及一种编码上述蛋白质的核酸序列;公开了郁金香TfPAL蛋白及其核苷酸序列在郁金香不同器官、不同发育阶段的表达模式;为今后利用基因工程技术调控郁金香TfPAL基因的时空表达特性,从而主调控花色提供了理论依据,具有一定的应用价值。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的,
第一方面,本发明涉及一种具有郁金香苯丙氨酸解氨酶活性的蛋白质,所述蛋白质是由如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质;或由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经过取代、缺失或者添加一个或几个氨基酸且具有郁金香苯丙氨酸解氨酶活性的由(a)衍生的蛋白质。该蛋白质在花朵花瓣的不同着色阶段、不同器官内的有无及活性大小存在较大差异。
优选的,所述蛋白质为SEQ ID NO.2所示氨基酸序列经过1~50个氨基酸的缺失、***和/或取代,或者在C末端和/或N末端添加1~20个以内氨基酸而得到的序列。
进一步优选的,所述蛋白质为SEQ ID NO.2所示氨基酸序列中1~10个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成的序列。
第二方面,本发明涉及一种编码上述蛋白质的核酸序列。
优选的,所述核酸序列具体为:
(a)碱基序列如SEQ ID NO.1第1~2136位所示;
或(b)与SEQ ID NO.1第1~2136位所示的核酸有至少70%的同源性的序列;
或(c)能与SEQ ID NO.1第1~2136位所示的核酸进行杂交的序列。
优选的,所述核酸序列具体为SEQ ID NO.1第1~2136位所示的核酸序列中1~90个核苷酸的缺失、***和/或取代,以及在5’和/或3’端添加60个以内核苷酸形成的序列。
本发明提供的分离出的DNA分子,该分子包括:具有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的DNA分子;或者编码具有郁金香TfPAL蛋白质活性的多肽的核苷酸序列,而且与SEQ ID NO.1所示序列有至少70%的同源性;或者能与SEQ ID NO.1所示序列的核苷酸序列杂交。
在本发明中,“分离的DNA”、“纯化的DNA”是指,该DNA或片段已从天然状态下位于其两侧的序列中分离出来,还指该DNA或片段已经与天然状态下伴随核酸的组分分开,而且已经与在细胞中相伴随的蛋白质分开。
在本发明中,术语“郁金香苯丙氨酸解氨酶TfPAL蛋白编码基因”指编码具有郁金香TfPAL蛋白活性的多肽的核苷酸序列,如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列及其简并序列。该简并序列是指,位于SEQ ID NO.1所示序列中,有一个或多个密码子被编码相同氨基酸的简并密码子所取代后而产生的序列。由于密码子的简并性,所以与SEQ ID NO.1所示序列的同源性低至约70%的简并序列也能编码出SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。该术语还包括与SEQ ID NO.1所示序列中从核苷酸第1~2136位的核苷酸序列的同源性至少70%的核苷酸序列。
该术语还包括能编码具有与天然的郁金香TfPAL相同功能的蛋白的SEQ ID NO.1所示序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于):通常为1~90个核苷酸的缺失、***和/或取代,以及在5’和/或3’端添加为60个以内核苷酸。
在本发明中,术语“郁金香苯丙氨酸解氨酶TfPAL蛋白”是指具有郁金香TfPAL蛋白活性的SEQ ID NO.2所示序列的多肽。该术语还包括具有与天然郁金香TfPAL相关相同功能的、SEQ ID NO.2所示序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于):通常为1~50个氨基酸的缺失、***和/或取代,以及在C末端和/或N末端添加一个或为20个以内氨基酸。例如,在本领域中,用性能相近或相似的氨基酸进行取代时,通常不会改变蛋白质的功能。又比如,在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。该术语还包括郁金香TfPAL蛋白的活性片段和活性衍生物。
本发明的郁金香TfPAL多肽的变异形式包括:同源序列、保守性变异体、等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严谨条件下能与郁金香TfPAL相关DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及利用郁金香TfPAL多肽的抗血清获得的多肽或蛋白。
在本发明中,“郁金香TfPAL保守性变异多肽”指与SEQ ID NO.2所示序列的氨基酸序列相比,有至多10个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成多肽。这些保守性变异多肽最好根据表1进行替换而产生。
表1
最初的残基 | 代表性的取代 | 优选的取代 |
Ala(A) | Val;Leu;Ile | Val |
Arg(R) | Lys;Gln;Asn | Lys |
Asn(N) | Gln;His;Lys;Arg | Gln |
Asp(D) | Glu | Glu |
Cys(C) | Ser | Ser |
Gln(Q) | Asn | Asn |
Glu(E) | Asp | Asp |
Gly(G) | Pro;Ala | Ala |
His(H) | Asn;Gln;Lys;Arg | Arg |
Ile(I) | Leu;Val;Met;Ala;Phe | Leu |
Leu(L) | Ile;Val;Met;Ala;Phe | Ile |
Lys(K) | Arg;Gln;Asn | Arg |
Met(M) | Leu;Phe;Ile | Leu |
Phe(F) | Leu;Val;Ile;Ala;Tyr | Leu |
Pro(P) | Ala | Ala |
Ser(S) | Thr | Thr |
Thr(T) | Ser | Ser |
Trp(W) | Tyr;Phe | Tyr |
Tyr(Y) | Trp;Phe;Thr;Ser | Phe |
Val(V) | Ile;Leu;Met;Phe;Ala | Leu |
发明还包括郁金香TfPAL蛋白或多肽的类似物。这些类似物与郁金香TfPAL相关多肽的差别可以是氨基酸序列上的差异,也可以是不影响序列的修饰形式上的差异,或者兼而有之。这些多肽包括天然或诱导的遗传变异体。诱导变异体可以通过各种技术得到,如通过辐射或暴露于诱变剂而产生随机诱变,还可通过定点诱变法或其它已知分子生物学的技术。类似物还包括具有不同于天然L-氨基酸的残基(如D-氨基酸)的类似物,以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如β、γ-氨基酸)的类似物。应理解,本发明的多肽并不限于上述列举的代表性的多肽。
修饰(通常不改变一级结构)形式包括:体内或体外的多肽的化学衍生形式如乙酰化或羧基化。修饰还包括糖基化,如那些在多肽的合成和加工中或进一步加工步骤中进行糖基化修饰而产生的多肽。这种修饰可以通过将多肽暴露于进行糖基化的酶(如哺乳动物的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修饰形式还包括具有磷酸化氨基酸残基(如磷酸酪氨酸,磷酸丝氨酸,磷酸苏氨酸)的序列。还包括被修饰从而提高了其抗蛋白水解性能或优化了溶解性能的多肽。
在本发明中,可用实时荧光定量PCR的方法分析郁金香TfPAL基因产物的表达模式,即分析TfPAL基因的mRNA转录物在细胞中的存在与否和数量。
此外,根据本发明的郁金香TfPAL核苷酸序列和氨基酸序列,可以在核酸同源性或表达蛋白质的同源性基础上,筛选郁金香TfPAL相关同源基因或同源蛋白。
为了得到与郁金香TfPAL相关基因的点阵,可以用DNA探针筛选郁金香cDNA文库,这些探针是在低严谨条件下,用32P对郁金香TfPAL相关的全部或部分做放射活性标记而得的。适合于筛选的cDNA文库是来自郁金香的文库。构建来自感兴趣的细胞或者组织的cDNA文库的方法是分子生物学领域众所周知的。另外,许多这样的cDNA文库也可以购买到,例如购自Clontech,Stratagene,Palo Alto,Cal.。这种筛选方法可以识别与郁金香TfPAL相关的基因家族的核苷酸序列。
本发明的郁金香TfPAL相关核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法,可根据本发明所公开的有关核苷酸序列,尤其是开放阅读框序列来设计引物,并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板,扩增而得有关序列。当序列较长时,常常需要进行两次或多次PCR扩增,然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。
在获得了有关序列后,可用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体,再转入细胞,然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。
此外,还可通过化学合成将突变引入本发明蛋白序列中。
除了用重组法产生之外,本发明蛋白的片段还可用固相技术,通过直接合成肽而加以生产(Stewart等人,(1969)固相多肽合成,WH Freeman Co.,San Francisco;Merrifield J.(1963)J.Am Chem.Soc85:2149-2154)。在体外合成蛋白质可以用手工或自动进行。例如,可以用Applied Biosystems的431A型肽合成仪(Foster City,CA)来自动合成肽。可以分别化学合成本发明蛋白的各片段,然后用化学方法加以连接以产生全长的分子。
郁金香为世界十大切花之一,观赏价值极高,应用广泛,丰富花色为郁金香育种的主要目的之一。本发明的有益效果在于:首次公开了郁金香花瓣中花色苷合成关键酶苯丙氨酸解氨酶TfPAL蛋白及其编码基因,为今后利用基因工程技术调控郁金香TfPAL基因的时空表达特性,从而调控花色提供了理论基础,具有一定的应用价值。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明,但不以任何形式限制本发明。应当指出的是,对本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,例如Sambrook等分子克隆:实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1、郁金香TfPAL基因的克隆
1.植物材料的获得
将健康、大小一致的郁金香球茎(Tulipa fosteriana ‘Shangnongzaoxia’,已通过上海市农作物品种审定委员会审定。编号:沪农品认花卉2011第004号)按常规种植并进行田间管理,待花朵完全开放,花瓣完全着色时采集花瓣组织,用于提取RNA。
2.RNA的抽提
利用“RNA prep pure植物总RNA提取试剂盒”抽提总RNA(RNA prep pure PlantKit:天根生化科技(北京)有限公司)。用甲醛变性胶电泳鉴定RNA的完整性,然后在分光光度计(Thermo Scientific NANODROP 1000 Spectrophotometer)上测定RNA的纯度及浓度。
3.基因的全长克隆
根据其它物种中FLS基因的氨基酸保守序列,利用同源性基因克隆原理,采用RACE方法(3’-Full RACE Core Set Ver.2.0:宝生物工程(大连)有限公司,SMARTerTM RACEcDNA Amplification Kit:Clontech Laboratories,Inc.)进行cDNA全长克隆,分三个阶段进行:
(1)RT-PCR获得基因中间片段
将提取的RNA进行反转录(Prime Script II 1st Strand cDNA Synthesis Kit:宝生物工程(大连)有限公司),以第一链cDNA为模板,利用引物TfPAL-F(5’-AACACCAYCCWGGYCARATT-3’)(序列如SEQ ID NO.3所示)和TfPAL-R(5’-GAGCAGTAWGAYGCCATK-3’)(序列如SEQ ID NO.4所示)进行PCR,扩增得中间片段,回收并连接到pMD18-T vector载体上,用RV-M和M13-47作为通用引物,采用终止物荧光标记(Big-Dye,Perkin-Elmer,USA)的方法,在ABI377测序仪(Perkin-Elmer,USA)上进行测序。测序结果通过在NCBI网站进行BLAST(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)比对已有的数据库(GenBank),知其核酸序列及编码蛋白与已知的百合(Liliumhybrida)苯丙氨酸解氨酶的同源性很高,故初步认为它是一个苯丙氨酸解氨酶。
(2)3’RACE
3’端的序列通过使用试剂盒3’-Full RACE Core Set Ver.2.0(宝生物工程(大连)有限公司)进行巢式PCR扩增获得。第一轮PCR上游引物为TfPAL31(5’-AAGGTGCTGACAACAGGTGCTAACG-3’)(序列如SEQ ID NO.5所示),下游引物为试剂盒提供的Outer primer,以第一轮PCR产物稀释50倍,取1μl作为模板进行第2轮PCR。第2轮PCR的上游引物为TfPAL32(5’-CGGGGAGAAGGAAAAGGATGTGAGT-3’)(序列如SEQID NO.6所示),下游引物为试剂盒提供的inner primer。
将3’RACE得到TfPAL的3’末端序列回收,连接到pMD18-T vector载体上,以RV-M和M13-47为引物,送上海Invitrogen公司进行测序。测序结果通过在NCBI网站进行BLAST(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)比对已有的数据库(GenBank),知其核酸序列及编码蛋白与已知的百合(Lilium hybrida)苯丙氨酸解氨酶的同源性高。
(3)5’RACE
5’端的序列通过使用SMARTerTMRACE cDNA Amplification Kit获得,以5’RACEready cDNA为模板,通过进行巢式PCR扩增获得。第一轮PCR上游引物为试剂盒提供的UPM,下游引物为TfPAL51(5’-AGCCCTGACCCAACAGCAGTGCCATTTA-3’)(序列如SEQID NO.7所示),以第一轮PCR产物为模板进行第2轮PCR。第2轮PCR的上游引物为试剂盒提供的NUP,下游引物为TfPAL52(5’-TTGGTGTTGAGGAGACTGGTGATGGCTT-3’)(序列如SEQ ID NO.8所示)将5’RACE扩增获得TfPAL的5’末端序列进行回收、连接、测序。测序结果通过在NCBI网站进行BLAST(http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)比对已有的数据库(GenBank),知其核酸序列及编码蛋白与已知的百合(Lilium hybrida)苯丙氨酸解氨酶的同源性高。
将通过上述3种方法获得的序列的测序结果进行拼接,将拼接序列提交BLAST分析,结果证明从郁金香中新得到的TfPAL基因确为一个与苯丙氨酸解氨酶相关的基因。将测序结果结合NCBI的ORF Finding(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf)预测,发现了郁金香TfPAL基因的起始密码子与终止密码子,根据获得的序列,分别从起始密码子和终止密码子处设计特异性引物ORF-F(5’-ATGGAGCAGAACGGCAATGGAGTCG_-3’)(序列如SEQ ID NO.9所示),ORF-R(5’-TTAGCTGATTGGAAGAGGAGCACC-3’)(序列如SEQ IDNO.10所示),以郁金香cDNA为模板进行PCR,扩增得到2136bp郁金香TfPAL蛋白的全长编码基因序列(SEQ ID NO.1)。
实施例2、郁金香TfPAL基因的序列信息与同源性分析
郁金香TfPAL全长CDS开放读码框序列为2136bp,详细序列见SEQ ID NO.1所示序列;根据CDS开放读码框序列推导出郁金香TfPAL的氨基酸序列,共711个氨基酸残基,分子量为77098.9道尔顿,等电点(pI)为6.20,详细序列见SEQ ID NO.2所示序列。
将郁金香TfPAL的CDS开放读码框序列及其编码蛋白的氨基酸序列用BLAST程序在Non-redundant GenBank+EMBL+DDBJ+PDB和Non-redundant GenBank CDStranslations+PDB+SwissProt+Superdate+PIR数据库中进行核苷酸和蛋白质同源性检索。表2为本发明的郁金香TfPAL基因与百合(Lilium hybrida)PAL基因mRNA的核苷酸序列的同源比较(GAP)结果;由表2可知,它与百合(Lilium hybrida)苯丙氨酸解氨酶(GenBank登陆号AB699156.1)在核苷酸水平上具有82%的相似性;表3为本发明的郁金香TfPAL基因与百合(Lilium hybrida)PAL基因mRNA的氨基酸序列的同源比较(FASTA)结果,其中,相同的氨基酸在两个序列之间用氨基酸单字符标出;由表3可知,在氨基酸水平上,它也与百合(Lilium hybrida)苯丙氨酸解氨酶(GenBank登陆号BAM28966.1)也有94%的一致性和89%的相似性;由表2和表3可知,郁金香TfPAL基因与百合(Lilium hybrida)苯丙氨酸解氨酶无论从核酸还是蛋白水平上都存在较高的同源性。
表2
表3
实施例3、郁金香TFPAL基因在花朵不同发育阶段及在郁金香不同组织中的表达差
异性
1.材料的获得
在郁金香花朵的4个不同发育阶段(花蕾,花瓣未着色;花蕾,花瓣开始着色;花朵部分开放,花瓣未完全着色;花朵完全开放,花瓣完全着色),于田间采取其球茎、地上茎、叶片以及花瓣(各着色阶段花瓣的混合样),将样品分别用铝铂纸包好后立刻投入液氮中,接着转入-80℃超低温冰箱中贮存待用。
2.RNA的提取
利用RNA prep pure植物总RNA提取试剂盒(RNA prep pure Plant Kit:天根生化科技(北京)有限公司)提取郁金香不同发育阶段花朵的花瓣以及不同组织中的RNA。
3.RNA的完整性、纯度、浓度的确定
用普通琼脂糖凝胶电泳(胶浓度1.2%;0.5×TBE电泳缓冲液;150v,15min)检测完整性;电泳条带中最大rRNA亮度应为第二条rRNA亮度的1.5-2.0倍,否则表示rRNA样品的降解。纯度较好的RNA,A260/A280以及A260/A230约为2.0左右;用分光光度计测定OD值并计算RNA含量。
4.cDNA的获得
以500ng的总RNA为模板,按照宝生物公司TaKaRa PrimeScriptTMRT reagent KitPerfect Real Time试剂盒操作说明进行反转录获得cDNA备用。
5.实时荧光定量PCR分析TfPAL基因在各器官与组织中的表达量
根据已经获得的郁金香TFLS基因的序列,利用引物设计软件Primer premier 5.0设计用于Real-time PCR中郁金香TfPAL基因定量分析的特异性引物:TfPAL-qF(5’-AGTACGTATTTGCCTACGCCGA-3’)(序列如SEQ ID NO.11所示)和TfPAL-qR(5’-CTCACATCCTTTTCCTTCTCCC-3’)(序列如SEQ ID NO.12所示),内参基因为Actin(GenBank登陆号AB711684),其引物为Actin-F(5’-AGTCAGTCATACAGTGCCAATC-3’)(序列如SEQID NO.13所示),Actin-R(5’-TCATAAGAGAGTCGGTCAAATCC-3’)(序列如SEQ ID NO.14所示)。
6.制作目的基因及内参基因的标准曲线
用EASY Dilution(试剂盒提供)将标准品cDNA溶液进行梯度稀释,然后分别以稀释后的cDNA溶液为模板,以目的基因及内参基因的特异性引物进行Real-time PCR扩增,反应结束后绘制溶解曲线和标准曲线;分析溶解曲线,判断目的基因及内参基因的溶解曲线是否得到单一峰,以判断使用该引物能否得到单一的PCR扩增产物;通过标准曲线确定模板cDNA的合适稀释倍数。
7.待测样品中目的基因的实时荧光定量分析
以合成的cDNA第一条链为模板,分别用目的基因与内参照基因的特异性引物扩增进行荧光定量分析,Real-time PCR反应在BIO-RAD Chromo 4实时定量仪上进行,反应体系为20μL,反应采用三步法,94℃ 变性20s,接着41个循环:94℃ 15s;60℃ 25s;72℃ 20s;每次扩增完成后,均做溶解曲线,以检验扩增产物是否为特异产生。
采用2-ΔΔCt法作相对定量分析,结果表明TfPAL基因的表达水平随着花朵的发育而不断上升。在最后一个发育阶段的表达量为第一阶段表达量的11.2倍,与花色苷的积累呈现相同的趋势,表明TfPAL与花色苷的合成正相关。TfPAL基因在球茎、地上茎、叶、花瓣中均有表达,在花朵中表达量最高,其次为地上茎,在球茎中的表达量最低。在花瓣中的表达量为分别为在地上茎、叶片、球茎中表达量的1.6、2.3、2.6倍,这说明TfPAL基因的表达具有一定的组织特异性。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是,本发明并不局限于上述特定实施方式,本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改,这并不影响本发明的实质内容。
Claims (6)
1.一种如下(a)或(b)的蛋白质:
(a)由如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质;
(b)SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经过取代、缺失或者添加一个或几个氨基酸且具有郁金香苯丙氨酸解氨酶活性的由(a)衍生的蛋白质。
2.如权利要求1所述的蛋白质,其特征是,所述蛋白质为SEQ ID NO.2所示氨基酸序列经过1~50个氨基酸的缺失、***和/或取代,或者在C末端和/或N末端添加1~20个以内氨基酸而得到的序列。
3.如权利要求2所述的蛋白质,其特征是,所述蛋白质为SEQ ID NO.2所示氨基酸序列中1~10个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成的序列。
4.一种编码如权利要求1所述蛋白质的核酸序列。
5.如权利要求4所述的核酸序列,其特征是,所述核酸序列具体为:
(a)碱基序列如SEQ ID NO.1第1~2136位所示;
或(b)与SEQ ID NO.1第1~2136位所示的核酸有至少70%的同源性的序列;
或(c)能与SEQ ID NO.1第1~2136位所示的核酸进行杂交的序列。
6.如权利要求4所述的核酸序列,其特征是,所述核酸序列具体为SEQ ID NO.1第1~2136位所示的核酸序列中1~90个核苷酸的缺失、***和/或取代,或者在5’和/或3’端添加60个以内核苷酸形成的序列。
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