CN103675282A - 骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒及其用途 - Google Patents

骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2、校准品，试剂R1包括受体物质，试剂R2包括底物，试剂R1内还包括肝源性碱性磷酸酶复合免疫抑制剂。本发明在现有碱性磷酸酶检测免疫抑制连续监测法的基础上，在底物试剂中加入肝源性碱性磷酸酶复合免疫抑制剂，与血清中肝源性的碱性磷酸酶特异性结合，从而抑制血清中肝源性碱性磷酸酶的活性，仅使骨源性的碱性磷酸酶催化底物反应，从而测得血清中骨源性碱性磷酸酶的浓度。本发明不仅能定量检测血清中碱性磷酸酶的含量，还可以利用现有的全自动生化分析仪并且操作简单，检验结果准确迅速，检验成本低。

Description

骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒及其用途
技术领域
本发明涉及医疗检测领域，特别涉及骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒。 
背景技术
人血清中的碱性磷酸酶（ALP）主要有肝源性碱性磷酸酶和骨源性碱性磷酸酶组成，其他来源的碱性磷酸酶含量很低。因此，肝胆或骨骼疾病都会引起血清内碱性磷酸酶升高。那么，在需要筛选或诊断骨骼疾病时，仅检测血清碱性磷酸酶的含量没有特异性，无法为疾病的诊断提供准确的依据；故而需要仅检测出血清中骨源性碱性磷酸酶的含量。目前市场上骨源性碱性磷酸酶测定试剂盒主要采用酶联免疫吸附法（ELISA），只能定性或半定量测定人血清中的骨源性碱性磷酸酶的浓度，并且测定过程烦琐，速度慢，人为因素影响大；目前国际上还有采用化学发光法测定人血清中的骨源性碱性磷酸酶，但是它需要采用Beckman Coulter，Inc.公司的专用Access免疫测定***，价格昂贵，速度较慢。 
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒。本发明要解决的技术问题是：定量检测血清中碱性磷酸酶的含量，并且操作简单，检验结果准确迅速，检验成本低。为了实现上述技术目的，本发明在现有碱性磷酸酶检测免疫抑制连续监测法的基础上，在底物试剂中加入肝源性碱性 磷酸酶复合免疫抑制剂，与血清中肝源性的碱性磷酸酶特异性结合，从而抑制血清中肝源性碱性磷酸酶的活性，仅使骨源性的碱性磷酸酶催化底物反应，使底物分解出磷酸酰基，磷酸酰基与受体物结合，生成游离的对硝基苯酚。对硝基苯酚在碱性溶液中转变成醌式结构，呈现较深的黄色。在波长405nm处监测吸光度增高速率，与标准物质对照，可以计算出人血清中骨源性碱性磷酸酶的浓度。 
本发明的技术方案为：骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2、校准品，所述试剂R1包括受体物质，所述试剂R2包括底物，其特征在于，所述试剂R1内还包括肝源性碱性磷酸酶复合免疫抑制剂。 
上述方案中，所述受体物质为2-氨基-2-甲基-1-丙醇或乙二醇胺，所述试剂R1内还包括镁离子制剂；所述试剂R2内的底物为对硝基苯磷酸二钠；所述校准品为骨源性碱性磷酸酶校准液。 
上述方案中，所述肝源性碱性磷酸酶复合免疫抑制剂为肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体复合免疫抑制剂。以肝源性碱性磷酸酶为抗原可以制备得特异性的肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体，该单克隆抗体可以与肝源性碱性磷酸酶进行高度特异性的抗原抗体反应。而碱性磷酸酶的水解磷酸对硝基苯的位点可以被抑制剂所抑制。将抑制碱性磷酸酶的水解磷酸对硝基苯位点的抑制剂标记到肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体上，就可以得到肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体复合免疫抑制剂，它具有特异性结合肝源性碱性磷酸酶并抑制其水解磷酸对硝基苯的能力。因此，本发明在受体试剂R1中加入肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体复合免疫抑制剂可以使血清中肝源性碱性磷酸酶失去水解磷酸对硝基苯的能力，从而仅使血清中骨源性的碱性磷酸酶催化底物反应使底物分解出磷酸酰基，磷酸酰基与受体物结合，生成游离的对硝基苯酚。对硝基苯酚在碱性溶液中转变成醌 式结构，呈现较深的黄色。在波长405nm处监测吸光度增高速率，与标准物质对照，可以计算出人血清中骨源性碱性磷酸酶的浓度。 
上述方案中，所述试剂R1中受体物质的摩尔浓度为1.0mmol/L，所述镁离子制剂的摩尔浓度为2.0mmol/L，所述肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体的重量百分比浓度为1%；所述试剂R2中对硝基苯磷酸二钠的摩尔浓度为30mmol/L；所述骨源性碱性磷酸酶校准液的酶活性浓度为300U/L。 
上述方案中，所述镁离子制剂为醋酸镁或氯化镁。 
上述方案中，所述试剂盒还包括质控品，所述质控品包括骨源性碱性磷酸酶质控液1、骨源性碱性磷酸酶质控液2和骨源性碱性磷酸酶质控液3。 
上述方案中，所述质控品包括骨源性碱性磷酸酶质控液1的酶活性浓度为50～100U/L，骨源性碱性磷酸酶质控液2的酶活性浓度为200～250U/L，骨源性碱性磷酸酶质控液3的酶活性浓度为250～300U/L。 
上述方案中，所述试剂R1中还含有重量含量1‰的防腐剂；所述试剂R2中还含有重量含量1‰的防腐剂。 
本发明还公开了骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒的用途：用于筛查或辅助诊断因钙营养不良引起的骨钙化障碍或其它原因引起的代谢性骨病。 
本发明的优点和有益效果在于：本发明提供一种骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒，可以定量检测血清中碱性磷酸酶的含量，可以利用现有的全自动生化分析仪并且操作简单，检验结果准确迅速，检验成本低。 
附图说明
图1为本发明在OLYMPUS AU400/640/2700/5400全自动生化分析仪的参数设定表 
图2为本发明实施例1的测试进程图 
图3为本发明实施例2的测试进程图 
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的具体实施方式作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。 
实施例1 
本发明是一种骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2、校准品，试剂R1包括受体物质2-氨基-2-甲基-1-丙醇、醋酸镁以及肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体复合免疫抑制剂、防腐剂，其中2-氨基-2-甲基-1-丙醇的摩尔浓度为1.0mmol/L，醋酸镁的摩尔浓度为2.0mmol/L,肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体复合免疫抑制剂的重量含量为1%，为了延长试剂的使用时间，在试剂R1内还包含重量含量为1‰的防腐剂；试剂R2包括底物对硝基苯磷酸二钠和防腐剂，对硝基苯磷酸二钠的摩尔浓度为30mmol/L,防腐剂的重量含量为1‰；校准品为骨源性碱性磷酸酶校准液，其酶活性浓度为300U/L。试剂盒内试剂的包装规格为试剂R145ml×1；试剂R215ml×1。试剂盒置于2-8℃避光密封保存，自生产之日起可稳定12个月。 
按照图1所示参数表设定奥林巴斯2700全自动生化分析仪，标准品浓度和位置根据实际使用情况输入。 
待测血液样本A采集后进行离心处理，取血清待用；使用奥林巴斯2700全自动生化分析仪，将试剂R1加入比色杯中，十秒内加入待测血清；将比色杯置于37℃孵育4分钟；然后加入试剂R2，充分搅拌；延迟1.5分钟后，连续测定1.5到3分钟的吸光度数值，并记录。通过与标准曲线对照，可以计算得样品中 的骨源性碱性磷酸酶的酶活性浓度为150U/L。测试进程图见图2，其主波长：405nm；副波长：700nm；反应方法：速率法；反应方向：正；定标方式：线性LINEAR。 
实施例2 
本发明是一种骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2、校准品和质控品，试剂R1包括受体物质乙二醇胺、氯化镁镁以及肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体复合免疫抑制剂、防腐剂，其中乙二醇胺的摩尔浓度为1.0mmol/L，氯化镁的摩尔浓度为2.0mmol/L,肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体复合免疫抑制剂的重量含量为1%，为了延长试剂的使用时间，在试剂R1内还包含重量含量为1‰的防腐剂；试剂R2包括底物对硝基苯磷酸二钠和防腐剂，对硝基苯磷酸二钠的摩尔浓度为30mmol/L,防腐剂的重量含量为1‰；校准品为骨源性碱性磷酸酶校准液，其酶活性浓度为300U/L；质控品为骨源性碱性磷酸酶质控液1、骨源性碱性磷酸酶质控液2、骨源性碱性磷酸酶质控液3，骨源性碱性磷酸酶质控液1的酶活性浓度为50～100U/L，骨源性碱性磷酸酶质控液2的酶活性浓度为200～250U/L，骨源性碱性磷酸酶质控液3的酶活性浓度为250～300U/L。 
试剂盒内试剂的包装规格为试剂R150ml×2；试剂R210ml×2。试剂盒置于2-8℃避光密封保存，自生产之日起可稳定12个月。 
待测血液样本B采集后进行离心处理，取血清待用；使用奥林巴斯2700全自动生化分析仪，将试剂R1加入比色杯中，十秒内加入待测血清；将比色杯置于37℃孵育5分钟；然后加入试剂R2，充分搅拌；延迟1分钟后，连续测定1.5到3分钟的吸光度数值，并记录。采用K因子法，可以计算得样品中的骨源性碱性磷酸酶的酶活性浓度为250U/L。测试进程图见图3，其主波长：405nm；副 波长：700nm；反应方法：速率法；反应方向：正；定标方式：线性LINEAR。 
使用本发明定量检测骨源性碱性磷酸酶的浓度还可以使用于日立7180；罗氏COBAS；奥林帕斯2700；贝克曼CX9、DXC800；东芝40；杜邦RXL；雅培C8000；西门子2400、迈瑞BS300等型号的全自动生化分析仪。 
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。 

Claims (9)

1.骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2、校准品，所述试剂R1包括受体物质，所述试剂R2包括底物，其特征在于，所述试剂R1内还包括肝源性碱性磷酸酶复合免疫抑制剂。
2.根据权利要求1所述的骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒，其特征在于，所述受体物质为2-氨基-2-甲基-1-丙醇或乙二醇胺，所述试剂R1内还包括镁离子制剂；所述试剂R2内的底物为对硝基苯磷酸二钠；所述校准品为骨源性碱性磷酸酶校准液。
3.根据权利要求2所述的骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒，其特征在于，所述肝源性碱性磷酸酶复合免疫抑制剂为肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体复合免疫抑制剂。
4.根据权利要求3所述的骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中受体物质的摩尔浓度为1.0mmol/L，所述镁离子制剂的摩尔浓度为2.0mmol/L，所述肝源性碱性磷酸酶单克隆抗体的重量百分比浓度为1%；所述试剂R2中对硝基苯磷酸二钠的摩尔浓度为30mmol/L；所述骨源性碱性磷酸酶校准液的酶活性浓度为300U/L。
5.根据权利要求2～4任一所述的骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒，其特征在于，所述镁离子制剂为醋酸镁或氯化镁。
6.根据权利要求1～4任一所述的骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括质控品，所述质控品包括骨源性碱性磷酸酶质控液1、骨源性碱性磷酸酶质控液2和骨源性碱性磷酸酶质控液3。
7.根据权利要求6所述的骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒，其特征在于，所述质控品包括骨源性碱性磷酸酶质控液1的酶活性浓度为50～100U/L，骨源性碱性磷酸酶质控液2的酶活性浓度为200～250U/L，骨源性碱性磷酸酶质控液3的酶活性浓度为250～300U/L。
8.根据权利要求1～4任一所述的骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中还含有重量含量1‰的防腐剂；所述试剂R2中还含有重量含量1‰的防腐剂。
9.骨源性碱性磷酸酶定量检测试剂盒用于筛查或辅助诊断因钙营养不良引起的骨钙化障碍或其它原因引起的代谢性骨病。
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