CN103675262A - 一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法 - Google Patents

一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103675262A
CN103675262A CN201310741811.2A CN201310741811A CN103675262A CN 103675262 A CN103675262 A CN 103675262A CN 201310741811 A CN201310741811 A CN 201310741811A CN 103675262 A CN103675262 A CN 103675262A
Authority
CN
China
Prior art keywords
squamous cell
living cells
oral squamous
cell carcinomas
fluorescence labeling
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201310741811.2A
Other languages
English (en)
Inventor
步荣发
黄雪蕾
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Individual filed Critical Individual
Priority to CN201310741811.2A priority Critical patent/CN103675262A/zh
Publication of CN103675262A publication Critical patent/CN103675262A/zh
Priority to PCT/CN2014/082006 priority patent/WO2015096456A1/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
    • G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5064—Endothelial cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G01N33/57492—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving compounds localized on the membrane of tumor or cancer cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/588—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with semiconductor nanocrystal label, e.g. quantum dots
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/18—Dental and oral disorders

Abstract

本发明公开了一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法，该方法用荧光偶联的尼妥珠单克隆抗体对口腔鳞癌活细胞进行标记。本发明的方法可对口腔鳞癌活细胞进行稳定标记，从而可以进行口腔鳞癌活细胞的观察研究，丰富了研究人员的实验手段，拓展了相应的研究领域。

Description

一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法
技术领域
本发明属于肿瘤分子影像技术领域，具体涉及一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法。
背景技术
口腔鳞状细胞癌(Oral squmaous cell carcinoma，OSCC)简称口腔鳞癌，为主要发生于口腔粘膜上皮等部位的恶性肿瘤，是头颈部常见的恶性肿瘤，约占口腔颌面部恶性肿瘤的90%-95%，常引起严重的口腔颌面畸形及咀嚼、吞咽和语言等功能障碍并威胁患者生命。口腔鳞癌的发病部位以舌部最多，其次以牙龈为多，此外，在颊粘膜、腭、口底等其它的口腔粘膜、以及颌骨、唾液腺上也有发生。
现有技术中对口腔鳞癌细胞的荧光标记主要是采用固定后的死细胞，虽然经固定的细胞形态完整，成像效果良好，但没有办法对口腔鳞癌细胞活细胞进行稳定的标记，从而无法进行口腔鳞癌活细胞的观察研究。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法。
本发明的技术方案如下：
一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法，用荧光偶联的尼妥珠单克隆抗体对口腔鳞癌活细胞进行标记。
在本发明的一个优选实施方案中，所述荧光偶联的尼妥珠单克隆抗体所用的荧光材料为近红外荧光材料Alexa680。
进一步优选的，包括如下步骤：
（1）将近红外荧光材料Alexa680与尼妥珠单克隆抗体偶联；
（2）将Alexa680偶联的尼妥珠单克隆抗体与的口腔鳞癌活细胞进行避光孵育后洗涤；
（3）进行流式细胞仪检测和共聚焦显微镜检测。
进一步优选的，所述流式细胞仪检测的激发波长为633nm，发射滤片670LP。
进一步优选的，所述共聚焦显微镜检测的激发波长为633nm，发射滤片650LP。
在本发明的一个优选实施方案中，所述荧光偶联的尼妥珠单克隆抗体所用的荧光材料为量子点Qdot800。
进一步优选的，包括如下步骤：
（1）将量子点Qdot800与尼妥珠单克隆抗体偶联；
（2）将Qdot800偶联的尼妥珠单克隆抗体与口腔鳞癌活细胞进行避光孵育后洗涤；
（3）进行流式细胞仪检测和共聚焦显微镜检测。
进一步优选的，所述流式细胞仪检测的激发波长为407nm，发射滤片780/60nm。
进一步优选的，所述共聚焦显微镜检测的激发波长为488nm，发射滤片650LP。
本发明的有益效果是：
1、本发明的方法用荧光偶联的尼妥珠单克隆抗体对口腔鳞癌活细胞进行稳定标记，从而可以进行口腔鳞癌活细胞的观察研究，丰富了研究人员的实验手段，拓展了相应的研究领域；
2、本发明的采用近红外荧光材料Alexa680和量子点Qdot800作为荧光标记材料与口腔鳞癌特异性单克隆抗体尼妥珠进行偶联，荧光强度高、标记特异性强，成像稳定且保存时间长；
3、本发明的方法操作简便快速，且成本低廉。
4、尼妥珠单克隆抗体(Nimotuzumab，h-R3，商品名泰欣生)是一种新的已临床应用的人源化抗EGFR单克隆抗体分子靶向药物，本方法可用于标记其它过表达EGFR的细胞。
附图说明
图1为本发明实施例2的共聚焦显微镜照片之一（400×）；
图2为本发明实施例2的共聚焦显微镜照片之二（1000×）；
图3为本发明实施例4的共聚焦显微镜照片（1000×）。
具体实施方式
以下通过具体实施方式结合附图对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。
实施例1
（1）按产品说明书操作，将近红外荧光材料Alexa680（invitrogen公司）与尼妥珠单克隆抗体（百泰公司）偶联，制备荧光标记的尼妥珠单克隆抗体探针（Alexa680–Nim）；
（2）取对数生长期的口腔鳞癌CAL27细胞消化后，倒置相差显微镜下计数，离心弃上清，加入PBS调整细胞密度至2×106/mL，然后将细胞悬液分至流式专用管中，100μL/管。
（3）加入Alexa680–Nim，使其在PBS中的终浓度为25μg/mL，4℃避光孵育半小时。
（3）标记实验：分实验组和对照组
实验组：加入Alexa680–Nim，使其在PBS中的终浓度为25μg/mL，4℃避光孵育半小时；
对照组：包括以下四组，其余处理及孵育条件与实验组相同
①PBS空白对照
②用Alexa680代替Alexa680–Nim，浓度25μg/mL
③先将细胞用含尼妥珠单抗1uL的PBS100μL在4℃孵育半小时，PBS洗涤1次，再加入含Alexa680–Nim的PBS100μL，浓度25μg/mL
④小鼠骨骼肌成肌细胞系C2C12加入Alexa680–Nim，浓度25μg/mL；
（4）将上述各组分别用PBS洗涤细胞2次，1300rpm离心5分钟，重悬于500μL PBS中。
（5）Beckman流式细胞仪检测，激发波长633nm，发射滤片670LP，配套软件进行结果分析，结果显示在25μg/mL的低浓度下，Alexa680-Nim即可对CAL27细胞达到很高的的标记率（﹥98%），对照组均未检测到明显的荧光。表明Alexa680-Nim对口腔鳞癌细胞CAL27细胞的标记特异性很强，标记率很高。
实施例2
（1）按产品说明书操作，将近红外荧光材料Alexa680与尼妥珠单克隆抗体偶联，制备荧光标记的尼妥珠单克隆抗体探针（Alexa680–Nim）；
（2）生长良好的CAL27细胞消化后传代于直径35mm、中央玻底孔径10mm的玻底培养皿中，2－3天后细胞生长至70－80%。
（3）标记前12小时，将待用细胞培养液换为无血清培养液，标记前轻轻吸去培养基，PBS洗涤2次。
（4）于中央的玻底孔加入含Alexa680-Nim的无血清培养基50uL，浓度100μg/mL，4℃避光孵育半小时。
（5）取出细胞，吸去液体，PBS洗涤3次，加入少量PBS，共聚焦显微镜下观察。
（6）共聚焦显微镜观测条件：激发波长633nm，发射滤片650LP。结果如图1和图2所示，可检测到荧光定位主要定位在胞膜上，胞浆内有极少量荧光，胞核里没有，与EGFR表达部位一致。而对照组同样操作则均未检测到明显的荧光（对照组设计同实施例1）。表明Alexa680-Nim标记的尼妥珠单抗荧光探针可以特异性的标记CAL27细胞表达的EGFR，特异性很强，标记率很高。
实施例3
（1）按产品说明书操作，将量子点Qdot800（invitrogen公司）与尼妥珠单克隆抗体（百泰公司）偶联，制备荧光量子点尼妥珠单克隆抗体探针（Qdot800–Nim）；
（2）取对数生长期的口腔鳞癌CAL27细胞消化后，倒置相差显微镜下计数，离心弃上清，加入PBS调整细胞密度至2×106/mL，然后将细胞悬液分至流式专用管中，100μL/管，按以下设计分别加入不同量的实验试剂至流式管中；
（3）标记实验：分实验组和对照组
实验组：加入Qdot800–Nim，使其在PBS中的终浓度为20nmol/L，4℃避光孵育半小时；
对照组：包括以下四组，其余处理及孵育条件与实验组相同。
①PBS空白对照
②用Qdot800代替Qdot800–Nim，浓度20nmol/L
③先将细胞用含尼妥珠单抗1uL的PBS100μL在4℃孵育半小时，PBS洗涤1次，再加入含Qdot800–Nim的PBS100μL，浓度20nmol/L
④小鼠骨骼肌成肌细胞系C2C12加入Qdot800–Nim，浓度20nmol/L；
（4）将上述各组分别用PBS洗涤细胞2次，1300rpm离心5分钟，重悬于500μL PBS中；
（5）BD流式细胞仪上机检测，激发波长407nm，发射滤片780/60nm，配套软件进行结果分析。结果显示：在20nmol/L的低浓度下，Qdot800–Nim即可对CAL27细胞达到很高的的标记率（﹥99%），荧光强，对照组则不能检测到荧光，表明Qdot800–Nim对口腔鳞癌细胞CAL27细胞的标记特异性很强，标记率很高。
实施例4
（1）按产品说明书操作，将量子点Qdot800（invitrogen公司）与尼妥珠单克隆抗体（百泰公司）偶联，制备荧光量子点尼妥珠单克隆抗体探针（Qdot800–Nim）；
（2）生长良好的CAL27细胞消化后传代于直径35mm、中央玻底孔径10mm的玻底培养皿中，2－3天后细胞生长至70－80%。
（3）标记前12小时，将待用细胞培养液换为无血清培养液，标记前轻轻吸去培养基，PBS洗涤2次。
（4）于中央的玻底孔内加入含Qdot800–Nim的无血清培养基50uL，浓度100nmol/L，4℃避光孵育半小时。
（5）取出细胞，吸去液体，PBS洗涤3次，加入少量PBS，共聚焦显微镜下观察。
（6）共聚焦显微镜观测条件：激发波长488nm，发射滤片650LP。结果如图3所示，CAL27细胞胞膜、胞浆中表达的EGFR被明亮的荧光所标记呈现。量子点的非特异性吸附非常低，对照组几乎观察不到荧光（对照组设计同实施例3）。实验结果证明，Qdot800标记的尼妥珠单抗荧光探针可以特异性的标记CAL27细胞表达的EGFR，标记效果好。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。

Claims (9)

1.一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法，其特征在于：用荧光偶联的尼妥珠单克隆抗体对口腔鳞癌活细胞进行标记。
2.如权利要求1所述的一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法，其特征在于：所述荧光偶联的尼妥珠单克隆抗体所用的荧光材料为近红外荧光材料Alexa680。
3.如权利要求2所述的一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）将近红外荧光材料Alexa680与尼妥珠单克隆抗体偶联；
（2）将Alexa680偶联的尼妥珠单克隆抗体与口腔鳞癌活细胞进行避光孵育后洗涤；
（3）进行流式细胞仪检测和共聚焦显微镜检测。
4.如权利要求3所述的一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法，其特征在于：所述流式细胞仪检测的激发波长为633nm，发射滤片670LP。
5.如权利要求3所述的一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法，其特征在于：所述共聚焦显微镜检测的激发波长为633nm，发射滤片650LP。
6.如权利要求1所述的一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法，其特征在于：所述荧光偶联的尼妥珠单克隆抗体所用的荧光材料为量子点Qdot800。
7.如权利要求6所述的一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）将量子点Qdot800与尼妥珠单克隆抗体偶联；
（2）将Qdot800偶联的尼妥珠单克隆抗体与口腔鳞癌活细胞进行避光孵育后洗涤；
（3）进行流式细胞仪检测和共聚焦显微镜检测。
8.如权利要求7所述的一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法，其特征在于：所述流式细胞仪检测的激发波长为407nm，发射滤片780/60nm。
9.如权利要求7所述的一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法，其特征在于：所述共聚焦显微镜检测的激发波长为488nm，发射滤片650LP。
CN201310741811.2A 2013-12-27 2013-12-27 一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法 Pending CN103675262A (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310741811.2A CN103675262A (zh) 2013-12-27 2013-12-27 一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法
PCT/CN2014/082006 WO2015096456A1 (zh) 2013-12-27 2014-07-11 一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310741811.2A CN103675262A (zh) 2013-12-27 2013-12-27 一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN103675262A true CN103675262A (zh) 2014-03-26

Family

ID=50313448

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310741811.2A Pending CN103675262A (zh) 2013-12-27 2013-12-27 一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN103675262A (zh)
WO (1) WO2015096456A1 (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104491881A (zh) * 2014-12-05 2015-04-08 北京肿瘤医院 一种荧光偶联的特异性前哨***显像剂及其制备方法
WO2015096456A1 (zh) * 2013-12-27 2015-07-02 步荣发 一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法
CN108277196A (zh) * 2018-01-19 2018-07-13 武汉大学 一种高效低毒的质粒dna转染方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1268377A (zh) * 2000-03-15 2000-10-04 中国医学科学院医药生物技术研究所 抗基质金属蛋白酶单抗Fab'药物偶联物及抗肿瘤作用
CN101246169A (zh) * 2007-05-23 2008-08-20 四川大学 口腔鳞癌诊断试剂、试剂盒及防治药物

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2499486A4 (en) * 2009-11-13 2013-11-27 Infinity Pharmaceuticals Inc COMPOSITIONS, KITS, AND METHODS FOR IDENTIFICATION, EVALUATION, PREVENTION, AND THERAPY OF CANCER
AU2013229786B2 (en) * 2012-03-08 2017-06-22 Halozyme, Inc. Conditionally active anti-epidermal growth factor receptor antibodies and methods of use thereof
CN103675262A (zh) * 2013-12-27 2014-03-26 步荣发 一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1268377A (zh) * 2000-03-15 2000-10-04 中国医学科学院医药生物技术研究所 抗基质金属蛋白酶单抗Fab'药物偶联物及抗肿瘤作用
CN101246169A (zh) * 2007-05-23 2008-08-20 四川大学 口腔鳞癌诊断试剂、试剂盒及防治药物

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
黄雪蕾: "舌鳞癌及前哨***近红外荧光活体成像的实验研究", 《中国博士学位论文全文数据库》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015096456A1 (zh) * 2013-12-27 2015-07-02 步荣发 一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法
CN104491881A (zh) * 2014-12-05 2015-04-08 北京肿瘤医院 一种荧光偶联的特异性前哨***显像剂及其制备方法
CN108277196A (zh) * 2018-01-19 2018-07-13 武汉大学 一种高效低毒的质粒dna转染方法
CN108277196B (zh) * 2018-01-19 2020-10-13 武汉大学 一种高效低毒的质粒dna转染方法

Also Published As

Publication number Publication date
WO2015096456A1 (zh) 2015-07-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103771390B (zh) 一种生物活性酶辅助微波法合成碳量子点的方法、由此制备的碳量子点及其应用
CN106053405A (zh) 一种基于单分子定位法的超分辨光学成像方法
CN103675262A (zh) 一种稳定荧光标记口腔鳞癌活细胞的方法
CN102608102A (zh) 一种基于表面增强拉曼光谱的人乳腺癌细胞mcf-7的特异性检测方法
CN109142712B (zh) 枝状纳米管阵列的制备方法、识别肿瘤细胞的方法及用于捕获和原位调控癌细胞的微流装置
Wang et al. Supramolecular self-assembly of atomically precise silver nanoclusters with chiral peptide for temperature sensing and detection of arginine
CN114303172A (zh) 用于使用显微镜对物体如细胞成像的x、y和z方向的低倍显微镜物镜预扫描和高倍显微镜物镜扫描
CN104685051A (zh) 用于对来自体液的循环上皮肿瘤细胞亚群体进行培养的方法
CN101831403A (zh) 体外扩增人脐带胎盘间充质干细胞的方法
Gambini et al. Differences in mitochondrial membrane potential identify distinct populations of human cardiac mesenchymal progenitor cells
CN104388384B (zh) 氧化型低密度脂蛋白在诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的应用
CN106434852A (zh) 一种基于手性自组装纳米传感器实现胞内端粒酶活性检测的方法
CN202583209U (zh) 一种胃蛋白酶原ⅰ光激发化学发光检测试剂盒
CN107764789A (zh) 半固体筛选培养基及其制备方法和应用
CN107227296A (zh) 一种骨髓单核细胞分离、鉴定及诱导分化的方法
CN102266561B (zh) Wnt/β-catenin信号通路抑制剂在制备促进细胞凋亡的药物中的应用
CN103060421A (zh) 一种脂肪细胞中自噬的监测方法
CN100501402C (zh) 一种稳定标记肝癌细胞的方法
CN103898063A (zh) 半固体筛选培养基以及杂交瘤细胞的筛选方法
CN102796701A (zh) 体外3d无支架悬浮培养扩增人脐带间充质干细胞的方法
Hudiță et al. Optimization of a flow cytometry method for the approach of liquid biopsy as a therapy modulation tool in patients with colorectal cancer
CN109580951A (zh) 多抗体联合检测早期肝癌标志物的试剂盒及其使用方法
JP6721868B2 (ja) スフェロイドの作製方法及び該方法に用いる培地
CN104316497A (zh) 基于纳米金及lscm反射光模式的细胞成像方法
CN102654499A (zh) 一种胃蛋白酶原ⅰ的光激发化学发光检测方法及试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20140326