CN103555768B - 一种枣子香料 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种枣子生物香料，该香料由枣子酶解、枣子酶解物发酵、枣子发酵液进行回流提取、浓缩制得枣子生物香料。枣子生物香料嗅香为酸甜的枣子果香香气及清爽的糖化香气，能与烟草香协调，增加卷烟的细腻甜润感；温和而留香持久，能够衬托烟叶的自然香味，提高品质和改进烟气吸味；可以起到改善口感、增加卷烟清香气息、减小卷烟刺辣的作用。本技术生产周期短，生产过程简单、可控，适宜规模化生产。本发明模拟天然植物的代谢过程，生产出烟用天然枣子生物香料，生产过程绿色环保，不需使用添加剂或多种溶剂来制备，制得的枣子生物香料安全可靠。
Description
技术领域
本发明属于烟草添加剂技术领域，具体涉及一种枣子生物香料。
背景技术
烟用香精是由多种香料调配出来的，具有一定的香型，可直接用于烟草加香的混合物。红枣也被称为大枣、枣子等，含有丰富的蛋白质、脂肪、糖份、胡萝卜素、维生素B、C、P及磷、钙、铁等，有维生素丸的美称，有较强的抑癌、抗过敏作用。作为中药已有2000多年的历史，主要用于中气不足、脾胃虚弱、体倦乏力、食少便溏、血虚萎黄、妇女脏燥等症的治疗。近年来药理研究发现，大枣中含有多种生物活性物质，如大枣多糖、黄酮类、皂甙类、三萜类、生物碱类、环磷酸腺甙、环磷酸乌甙等，对人体有多种保健功效。枣子提取物也是食品中常用的天然香料。但现有的枣子提取物生产过程中多使用添加剂或多种溶剂来制备，对产物安全性和可靠性有一定的影响。
发明内容
本发明的目的在于提供一种枣子生物香料及其制备方法，该方法模拟天然植物的代谢过程，生产出烟用天然枣子生物香料，生产过程绿色环保，同时将该枣子生物香料用来增加卷烟的香气力度、烟气明亮程度和改善卷烟口感。
为了达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：一种枣子生物香料，其特征在于，该香料由以下制备方法制得：
（1）枣子酶解，得枣子酶解物；
（2）枣子酶解物发酵，得枣子发酵液；
（3）将枣子发酵液进行回流提取、浓缩，得枣子生物香料。
所述步骤（1）中枣子酶解的方法包括以下步骤：
a.取干枣洗净，沥干，用破碎机将枣子破碎，然后将枣子与水按1:4的质量比投料到酶反应器中，开启搅拌、加热；
b.调整pH=6-6.5，当温度升至48℃±2℃时，按干枣子重量计，加入0.4%的果胶酶和0.2%的纤维素酶，48℃±2℃夏酶解反应5小时；
c.酶解完毕，进行巴氏灭菌处理，得枣子酶解物。
所述步骤（2）中枣子酶解物发酵的方法为，对置于发酵罐中的枣子酶解物接入工程菌一级种子液进行发酵，具体包括以下步骤：
a.工程菌的制备：
由自然分离的两株菌米曲霉菌和黄曲霉菌通过PEG诱导融合技术，经纯化培养分离得到一株工程菌菌株，具体为：
将米曲霉菌和黄曲霉菌分别按照下述方法培养：
将米曲霉菌经察氏液体培养基在35℃培养48小时后放入尖底离心管离心30min，转速4000r/min，收集沉降菌体Ⅰ；
按沉降菌体Ⅰ与SMM稳定液1：1等量混合并在32℃感受（感受就是保温使其保护原生质体不发生裂解）1小时后，再放入尖底离心管离心30min，转速4000r/min，收集沉降菌体Ⅱ；将沉降菌体Ⅱ与SMM稳定液配成5ml菌悬液；
本发明中SMM稳定液组成为：蔗糖103g/L，MgCl22.03g/L，溶剂为蒸馏水，pH6.7；
取菌悬液1ml+SMM稳定液1ml，用无菌水稀释10万倍，接种在察氏培养基平板上，在32℃培养48h，计其总菌落数，收集菌体，加入3%蜗牛酶1ml，0.2%的Macerozyme R-10 0.5ml，置于34℃水浴锅中酶解1.5h后放入尖底离心管离心30min，转速4000r/min，收集原生质体化沉降物，将原生质体化沉降物与SMM稳定液配成5ml菌悬液，用无菌水稀释10万倍，接种于察氏培养基平板上，在32℃培养48h，计数菌落数，得原生质体化后的米曲霉菌；
按上述制备原生质体化后的米曲霉菌的方法制得原生质体化后的黄曲霉菌；
取原生质体化后的米曲霉菌和黄曲霉菌各1ml，混合后加入1.8ml 的PEG4000，SMM稳定液0.2ml，3.68%的CaCl21ml，1%牛清蛋白1ml，在36℃水浴锅中融合30min后以2000r/min转速离心10min，收集沉降融合子；
融合子加SMM稳定液5ml，用无菌水稀释10万倍，接种于察氏培养基平板上，在32℃下培养48小时，分离出融合后的新菌落，得到工程菌，并通过液体石蜡密封法保存工程菌；
b.工程菌一级种子液的制备
液体培养基的配制：液体培养基的配制： 硝酸钠0.3%，磷酸氢二钾0.1%， MgSO4·7H2O 0.05%，氯化钾0.05%，硫酸亚铁0.001%，蔗糖3%，加蒸馏水到100%，调PH6.7，121℃灭菌15分钟；
将液体石蜡保藏的工程菌菌种活化，在无菌室接种到培养基中，28-32℃振荡培养48h，制得工程菌一级种子液；
c.发酵
将枣子酶解物置于发酵罐中，保持30℃±2℃，调整pH= 6-6.5，接入工程菌一级种子液，供氧，30℃±2℃发酵2天，25℃±2℃发酵2天，30℃±2℃再发酵3天，得枣子发酵液；
所述步骤（3）中对枣子发酵液进行回流提取、浓缩的方法包括以下步骤：
a.将枣子发酵液加入乙醇，配制成酒精含量为30%-32%的混合液，进行回流提取1小时；
b.将提取液经150-200目筛网过滤后用旋转蒸发器浓缩至含膏量为50-55%，得枣子生物香料。
将枣子生物香料用于制备卷烟，具体为：
将含有烟丝重量的0.01%的枣子生物香料添加进烟丝中制成卷烟。
将含有烟丝重量的0.03%的枣子生物香料添加进烟丝中制成卷烟。
将含有烟丝重量的0.05%的枣子生物香料添加进烟丝中制成卷烟。
将含有烟丝重量的0.1%的枣子生物香料添加进烟丝中制成卷烟。
枣子生物香料嗅香为酸甜的枣子果香香气及清爽的糖化香气，能与烟草香协调，增加卷烟的细腻甜润感；温和而留香持久，能够衬托烟叶的自然香味，提高品质和改进烟气吸味；可以起到改善口感、增加卷烟清香气息、减小卷烟刺辣的作用。
本发明的有益效果在于：本技术生产周期短，生产过程简单、可控，适宜规模化生产，本发明模拟天然植物的代谢过程，生产出烟用天然枣子生物香料，生产过程绿色环保，不需使用添加剂或多种溶剂来制备，制得的枣子生物香料安全可靠。
具体实施方式
（1）枣子酶解：
a.取干枣洗净，沥干，用破碎机将枣子破碎，然后将枣子与水按1:4的质量比投料到酶反应器中，开启搅拌、加热；
b.调整pH=6-6.5，当温度升至48℃±2℃时，按干枣子重量计，加入0.4%的果胶酶和0.2%的纤维素酶，48℃±2℃下酶解反应5小时；
c.酶解完毕，进行巴氏灭菌处理，得枣子酶解物。
（2）枣子酶解物发酵：
a.工程菌的制备：
由自然分离的两株菌米曲霉菌和黄曲霉菌通过PEG诱导融合技术，经纯化培养分离得到一株工程菌菌株，具体为：
将米曲霉菌和黄曲霉菌分别按照下述方法培养：
将米曲霉菌经察氏液体培养基在35℃培养48小时后放入尖底离心管离心30min，转速4000r/min，收集沉降菌体Ⅰ；
按沉降菌体Ⅰ与SMM稳定液1：1等量混合并在32℃感受（保温使其保护原生质体不发生裂解）1小时后，再放入尖底离心管离心30min，转速4000r/min，收集沉降菌体Ⅱ；将沉降菌体Ⅱ与SMM稳定液配成5ml菌悬液；
本实施例中SMM稳定液组成为：蔗糖103g/L，MgCl22.03g/L，溶剂为蒸馏水，pH6.7；
取菌悬液1ml+SMM稳定液1ml，用无菌水稀释10万倍，接种在察氏培养基平板上，在32℃培养48h，计其总菌落数，收集菌体，加入3%蜗牛酶1ml，0.2%的Macerozyme R-10 0.5ml，置于34℃水浴锅中酶解1.5h后放入尖底离心管离心30min，转速4000r/min，收集原生质体化沉降物，将原生质体化沉降物与SMM稳定液配成5ml菌悬液，用无菌水稀释10万倍，接种于察氏培养基平板上，在32℃培养36h，计数菌落数，得原生质体化后的米曲霉菌；
按上述制备原生质体化后的米曲霉菌的方法制得原生质体化后的黄曲霉菌；
取原生质体化后的米曲霉菌和黄曲霉菌各1ml，混合后加入1.8ml 的PEG4000，SMM稳定液0.2ml，3.68%的CaCl21ml，1%牛清蛋白1ml，在36℃水浴锅中融合30min后以2000r/min转速离心10min，收集沉降融合子；
融合子加SMM稳定液5ml，用无菌水稀释10万倍，接种于察氏培养基平板上，在32℃下培养36h，分离出融合后的新菌落，得到工程菌，并通过液体石蜡密封法保存工程菌；
b.工程菌一级种子液的制备
液体培养基的配制： 硝酸钠0.3%，磷酸氢二钾0.1%， MgSO4·7H2O 0.05%，氯化钾0.05%，硫酸亚铁0.001%，蔗糖3%，加蒸馏水到100%，调PH6.7，121℃灭菌15分钟；
将液体石蜡保藏的工程菌菌种活化，在无菌室接种到液体培养基中，28-32℃振荡培养48h，制得工程菌一级种子液；
c.发酵
将枣子酶解物置于发酵罐中，保持30℃±2℃，调整pH= 6-6.5，接入工程菌一级种子液，供氧，30℃±2℃发酵2天，25℃±2℃发酵2天，30℃±2℃再发酵3天，得枣子发酵液。
枣子生物香料的制备：
a.将枣子发酵液加入乙醇，配制成酒精含量为30%-32%的混合液，进行回流提取1小时；
b.将提取液经150-200目筛网过滤后用旋转蒸发器浓缩至含膏量为50-55%，得枣子生物香料。
应用例：
将实施例制得的枣子生物香料用于卷烟中，能够增加卷烟的香气柔和细腻程度以及改善卷烟口感。具体方法：
将制得的枣子生物香料稀释10倍，得生物香料稀释液，稀释剂可选择蒸馏水、丙二醇、乙醇、甘油、山梨醇中的一种或者相互间的任意组合，本实施例选用蒸馏水，将以上枣子生物香料稀释液按0.1%、0.3%、0.5%及1%量（相对于烟丝质量），用喉头喷雾器分别均匀地喷洒在于22℃±1℃和RH60%±2%条件下平衡48h的单料烟丝上，喷后，烟丝于22℃±1℃和RH60%±2%条件下平衡48h，并在该环境下，用卷烟器将加香烟丝卷制成烟支。对比实验组为空白烟丝，即在相同条件下，用喉头喷雾器分别均匀地喷洒蒸馏水。由公司专业评吸小组人员评吸，评吸情况如下：
用 量 评 吸 结 果
空白烟丝（对照样） 卷烟香气质地一般、烟气稍粗浊、余味有苦味；
加入0.01%枣子生物香料的烟丝 卷烟香气质地有提高，烟气细腻柔和、口感有改善；
加入0.03%枣子生物香料的烟丝 卷烟香气质地有提高，烟气细腻柔和、余味舒适；
加入0.05%枣子生物香料的烟丝 卷烟香气质地有提高、烟气细腻柔和、余味舒适；
加入0.1%枣子生物香料的烟丝 卷烟香气质地有提高、刺激增加，口感饱满。
Claims (3)
1.一种枣子生物香料，其特征在于，该香料由以下制备方法制得：
（1）枣子酶解，得枣子酶解物；具体为：
a.取干枣洗净，沥干，用破碎机将枣子破碎，然后将枣子与水按1:4的质量比投料到酶反应器中，开启搅拌、加热；
b.调整pH=6-6.5，当温度升至48℃±2℃时，按干枣子重量计，加入0.4%的果胶酶和0.2%的纤维素酶，48℃±2℃下酶解反应5小时；
c.酶解完毕，进行巴氏灭菌处理，得枣子酶解物；
（2）枣子酶解物发酵，得枣子发酵液；具体为：对置于发酵罐中的枣子酶解物接入工程菌一级种子液进行发酵，具体包括以下步骤：
a.工程菌的制备：
由自然分离的两株菌米曲霉菌和黄曲霉菌通过PEG诱导融合技术，经纯化培养分离得到一株工程菌菌株，具体为：
将米曲霉菌经察氏液体培养基在35℃培养48小时后放入尖底离心管离心30min，转速4000r/min，收集沉降菌体Ⅰ；
按沉降菌体Ⅰ与SMM稳定液1：1等量混合并在32℃感受1小时后，再放入尖底离心管离心30min，转速4000r/min，收集沉降菌体Ⅱ；将沉降菌体Ⅱ与SMM稳定液配成5ml菌悬液；SMM稳定液组成为：蔗糖103g/L，MgCl22.03g/L，溶剂为蒸馏水，pH6.7；
取菌悬液1ml+SMM稳定液1ml，用无菌水稀释10万倍，接种在察氏培养基平板上，在32℃培养48h，计其总菌落数，收集菌体，加入3%蜗牛酶1ml，0.2%的Macerozyme R-10 0.5ml，置于34℃水浴锅中酶解1.5h后放入尖底离心管离心30min，转速4000r/min，收集原生质体化沉降物，将原生质体化沉降物与SMM稳定液配成5ml菌悬液，用无菌水稀释10万倍，接种于察氏培养基平板上，在32℃培养48h，计数菌落数，得原生质体化后的米曲霉菌；
按上述制备原生质体化后的米曲霉菌的方法制得原生质体化后的黄曲霉菌；
取原生质体化后的米曲霉菌和黄曲霉菌各1ml，混合后加入1.8ml 的PEG4000，SMM稳定液0.2ml，3.68%的CaCl21ml，1%牛清蛋白1ml，在36℃水浴锅中融合30min后以2000r/min转速离心10min，收集沉降融合子；
融合子加SMM稳定液5ml，用无菌水稀释10万倍，接种于察氏培养基平板上，在32℃下培养48小时，分离出融合后的新菌落，得到工程菌，并通过液体石蜡密封法保存工程菌；
b.工程菌一级种子液的制备
液体培养基的配制： 硝酸钠0.3%，磷酸氢二钾0.1%， MgSO4·7H2O 0.05%，氯化钾0.05%，硫酸亚铁0.001%，蔗糖3%，加蒸馏水到100%，调PH6.7，121℃灭菌15分钟；
将液体石蜡保藏的工程菌菌种活化，在无菌室接种到液体培养基中，28-32℃振荡培养48h，制得工程菌一级种子液；
c.发酵
将枣子酶解物置于发酵罐中，保持30℃±2℃，调整pH= 6-6.5，接入工程菌一级种子液，供氧，30℃±2℃发酵2天，25℃±2℃发酵2天，30℃±2℃再发酵3天，得枣子发酵液；
（3）将枣子发酵液进行回流提取、浓缩，得枣子生物香料；具体为：
a.将枣子发酵液加入乙醇，配制成酒精含量为30%-32%的混合液，进行回流提取1小时；
b.将提取液经150-200目筛网过滤后用旋转蒸发器浓缩至含膏量为50-55%，得枣子生物香料。
2.根据权利要求1所述的枣子生物香料在改善卷烟口感上的应用。
3.一种卷烟，具有烟丝，其特征在于：所述卷烟中含有烟丝重量的 0.01%、0.03%、0.05%或0.1%比例的采用权利要求1中的方法制得的枣子生物香料。
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