CN103554209A - 从三七中制备人参皂苷Rg1的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种从三七中制备人参皂苷Rg1的方法，其特征在于，具体步骤为：将新鲜三七根洗净、切片、晒干、粉碎成三七粉；将三七粉用有机溶剂加热回流提取，合并提取液；将提取液旋转蒸发回收溶剂，得到三七提取物；将三七提取物用有机溶剂溶解，以层析用硅胶拌样，待有机溶剂挥发干净后，干法上硅胶柱，经二氯甲烷和甲醇梯度洗脱，收集含有人参皂苷Rg1的洗脱部分，回收溶剂，得到含有Rg1的粗品；将含有Rg1的粗品，用醋酸乙酯溶解，冷却析出晶体，过滤，得到Rg1纯品。本发明工艺简便，操作简单，仪器和设备要求低，可获得Rg1纯品；因工艺步骤少，产品收率高，适合工业化生产。

Description

从三七中制备人参皂苷Rg1的方法
技术领域
本发明涉及一种从三七药材中制备人参皂苷Rg1的新方法，尤其涉及一种从三七药材中提取分离和纯化人参皂苷Rg1的制备方法，属于天然活性产物制备方法技术领域。
背景技术
三七为五加科植物三七panax notoginseng(Burk)F.H.chen的干燥根，是我国名贵中药材，本品具有散瘀止血，消肿定痛。用于咯血，吐血，衄血，便血，崩漏，外伤出血，胸腹刺痛，跌打肿痛。现在主要用于心、脑血管***疾病的治疗。三七中成分复杂，从他的根、叶、果梗、花蕾、根茎中已经分离近百种成分，主要有皂苷类、挥发油类、氨基酸类、黄酮类、甾醇类、糖类、有机酸类、环二肽类、无机酸类，但其主要有效成分是三七皂苷。
近年的国内外研究表明，单体的生物活性至关重要，因可排除其他成分的存在，易于阐明他的确切药理作用和分析机制，通过多种单体皂苷的构效关系研究易于发现活性较强的化合物，目前三七中单体化合物多集中于Rg1、Rb1、Re、Ra等含量较高成分，现已证明人参皂苷Rg1对于老年性痴呆治疗有效，Re和Rg2抗心律失常较强，抗肿瘤Rh2和Rg3较强。正是由于单体皂苷作用不同，有需要制成单体皂苷制剂。从药材中寻找提取与分离单体的方法尤其重要，一种工艺简便、操作简单的方法是分离单体的目标。
人参皂苷Rg1：分子式：C42H72014，分子量801.03，
结构式为：
Figure BDA0000415057340000011
人参皂苷Rg1具有抗衰老、抗氧化、提高免疫力，增强记忆力等功能，对心脑血管、神经***、免疫***有广泛的药理作用。人参皂苷Rg1为人参萜三醇结构，首先是从人参中发现，在人参中含量较低，但在三七中含量较高。在植物中分离纯化纯品，一是工艺复杂，二是成分含量少，需要合理及简捷工艺，可使纯化化合物变为可行。有关制备人参皂苷Rg1的方法有多种，有的用乙醇回流提取，上硅胶或氧化铝柱进行分离，有的用超声波回流提取，提取物用酸碱沉淀分离，再用柱层析硅胶或氧化铝柱分离。还有的用D101大孔树脂获得总皂苷，再用硅胶柱分离获得纯品，有的已申请专利，但以上工艺流程长，操作复杂，获得纯品Rg1较困难。
发明内容
本发明的目的是提供一种工艺简便，操作简捷，产品收率高，经过数十次实验证明工艺稳定，有效地从三七中制备人参皂苷Rg1的新方法。
为了达到上述目的，本发明提供了一种从三七中制备人参皂苷Rg1的方法，其特征在于，具体步骤为：
第一步：将新鲜三七根洗净、切片、晒干、粉碎成三七粉；
第二步：将第一步得到的三七粉置于圆底烧瓶或回流提取装置中，用有机溶剂加热回流提取至少一次，合并提取液；
第三步：将第二步得到的提取液旋转蒸发回收溶剂，得到三七提取物；
第四步：将第三步得到的三七提取物用有机溶剂溶解，以层析用硅胶拌样，待有机溶剂挥发干净后，干法上硅胶柱，经二氯甲烷和甲醇梯度洗脱，薄层层析色谱检测洗脱进程，收集含有人参皂苷Rg1的洗脱部分，回收溶剂后，得到含有Rg1的粗品；
第五步：将得到的含有Rg1的粗品，用醋酸乙酯溶解，冷却到5℃-10℃时，析出晶体，过滤，得到Rg1纯品。
优选地，所述第二步中的有机溶剂为甲醇，三七粉和有机溶剂的体积比为1：2-3，每次加热回流的时间为1-3小时，加热回流提取的次数为4-5次。
优选地，所述第三步中的旋转蒸发的温度为0-50℃、压力为0.07-0.1Mpa。
优选地，所述第四步中的有机溶剂为甲醇，三七提取物与甲醇的重量体积比为20g：200ml(w／v)，三七提取物与拌样用硅胶的重量比为20g：1200g(w／w)，洗脱用的二氯甲烷和甲醇的体积比为7：1-1：1。
优选地，所述第五步中用高效液相色谱法(HPLC)测定含量，具体条件为：C18250×4.6mm色谱柱，以体积比为19.5：80.5的乙腈和水为流动相，流速1.0ml／min，检测波长为210nm。
优选地，所述第四步中所用的硅胶为200-300目柱层析用硅胶。
优选地，所述第四步中的薄层层析色谱的检测条件为：采用GF254板，展开剂为三氯甲烷、醋酸乙酯、甲醇和水的混合液，所述的三氯甲烷、醋酸乙酯、甲醇和水的体积比为15：40：22：10，以人参皂苷Rg1对照品为对照，直立上行展开，以10％硫酸乙醇溶液喷雾显色或以碘蒸气显色，在105℃加热10分钟，10％硫酸乙醇溶液时显紫色点，碘蒸气显色时，为黄色斑点。
本发明的制备方法中，人参皂苷Rg1的得率为0.8％(以干燥药材计)，纯度为98％，所得的人参皂苷Rg1可用于医药行业及其他用途。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明工艺简便，操作简单，仪器和设备要求低，一次溶剂回流提取，提取物一次上硅胶柱层析分离，可获得Rg1纯品；因工艺步骤少，产品收率高，适合工业化生产。
具体实施方式
为使本发明更明显易懂，兹以优选实施例，作详细说明如下。
实施例
将新鲜三七根5.5kg，洗净，切片，晒干，置粉碎机中粉碎成三七粉，约5kg，将上述三七粉置于回流提取装置中，加入化学纯甲醇，三七粉和甲醇的体积比为1：2.3，回流提取四次，每次提取3小时，每次提取所得的提取液过滤，合并提取液，在50℃、压力为0.08Mpa的条件下用旋转蒸发仪减压回收溶剂，得到提取物浸膏20g，提取率为0.4％。将提取物浸膏用200ml甲醇溶解，以1200g200-300目柱层析硅胶拌样，水浴加热使甲醇挥发干后，装入直径Φ10cm，预先加有3kg空白200-300目柱层析硅胶的色谱柱中，先用二氯甲烷：甲醇(7：1V／V)洗脱，再逐步增加洗脱液中甲醇的比例，依次用二氯甲烷：甲醇(7：2V／V)、二氯甲烷：甲醇(7：3V／V)、二氯甲烷：甲醇(7：4V／V)、二氯甲烷：甲醇(7：5V／V)、二氯甲烷：甲醇(7：6V／V)的洗脱液洗脱，每种比例的洗脱液使用到层析分离柱底部某一非主色带洗脱下来后，再换一种新的比例洗脱液，直至最终用二氯甲烷：甲醇(1：1V／V)的洗脱液洗脱，TLC薄层色谱层析检测洗脱进程，(硅胶板GF254板，展开剂为三氯甲烷、醋酸乙酯、甲醇和水的混合液，所述的三氯甲烷、醋酸乙酯、甲醇和水的体积比为15：40：22：10，以人参皂苷Rg1对照品为对照，直立上行展开，10％硫酸乙醇液喷雾显色，105℃加热10分钟，样品和对照品显相同的紫斑点。按250ml／流份接收，洗脱至57-74流份时，出现Rg1斑点，合并，在50℃、压力为0.08Mpa的条件下用旋转蒸发仪减压回收溶剂得Rg1粗品，用醋酸乙酯溶解，放置在8℃温度下，析出晶体，过滤，得到Rg1纯品。产品得率为0.8％，经HPLC检测纯度为98％。HPLC的具体条件为：C18250×4.6mm色谱柱，以体积比为19.5：80.5的乙腈和水为流动相，流速1.0ml／min，检测波长为210nm。
所得的人参皂苷Rg1的结构鉴别：白色粉末，mp191-193℃，[α]D20+26.00，元素分析C42H72014.2H20理论值：C60.28，H9.09：实验值C60.32，H9.06。FD-MS：839[M+K]+，823[M+Na]+，821[M+K-H20]+，805[M+Na-H20]+，677[M+K-162]+，661[M+Na-162]+，839[M+2K]+.EI-MS：m／e
797，770，752，710，525，483，482，465，464，423，422，405，404，389，331，295，289，271，269，229，211，202，187，169，153，109等。1HNMRδ(ppm)：0.95-1.18(6CH3)1.59和
Figure BDA0000415057340000041
1.99-2.10(10×OCOCH3)，4.79，4.68(各1H，J均为7.5Hz)，5.13
Figure BDA0000415057340000042
等。化合物的波普数据与人参皂苷Rg1的波普数据基本一致。

Claims (7)

1.一种从三七中制备人参皂苷Rg1的方法，其特征在于，具体步骤为：
第一步：将新鲜三七根洗净、切片、晒干、粉碎成三七粉；
第二步：将第一步得到的三七粉置于圆底烧瓶或回流提取装置中，用有机溶剂加热回流提取至少一次，合并提取液；
第三步：将第二步得到的提取液旋转蒸发回收溶剂，得到三七提取物；
第四步：将第三步得到的三七提取物用有机溶剂溶解，以层析用硅胶拌样，待有机溶剂挥发干净后，干法上硅胶柱，经二氯甲烷和甲醇梯度洗脱，薄层层析色谱检测洗脱进程，收集含有人参皂苷Rg1的洗脱部分，回收溶剂后，得到含有Rg1的粗品；
第五步：将得到的含有Rg1的粗品，用醋酸乙酯溶解，冷却到5℃-10℃时，析出晶体，过滤，得到Rg1纯品。
2.如权利要求1所述的从三七中制备人参皂苷Rg1的方法，其特征在于，所述第二步中的有机溶剂为甲醇，三七粉和有机溶剂的体积比为1：2-3，每次加热回流的时间为1-3小时，加热回流提取的次数为4-5次。
3.如权利要求1所述的从三七中制备人参皂苷Rg1的方法，其特征在于，所述第三步中的旋转蒸发的温度为0-50℃、压力为0.07-0.1Mpa。
4.如权利要求1所述的从三七中制备人参皂苷Rg1的方法，其特征在于，所述第四步中的有机溶剂为甲醇，三七提取物与甲醇的重量体积比为20g：200ml，三七提取物与拌样用硅胶的重量比为20g：1200g，洗脱用的二氯甲烷和甲醇的体积比为7：1-1：1。
5.如权利要求1所述的从三七中制备人参皂苷Rg1的方法，其特征在于，所述第五步中用高效液相色谱法测定含量，具体条件为：C18250×4.6mm色谱柱，以体积比为19.5：80.5的乙腈和水为流动相，流速1.0ml／min，检测波长为210nm。
6.如权利要求1所述的从三七中制备人参皂苷Rg1的方法，其特征在于，所述第四步中所用的硅胶为200-300目柱层析用硅胶。
7.如权利要求1所述的从三七中制备人参皂苷Rg1的方法，其特征在于，所述第四步中的薄层层析色谱的检测条件为：采用GF254板，展开剂为三氯甲烷、醋酸乙酯、甲醇和水的混合液，所述的三氯甲烷、醋酸乙酯、甲醇和水的体积比为15：40：22：10，以人参皂苷Rg1对照品为对照，直立上行展开，以10％硫酸乙醇溶液喷雾显色或以碘蒸气显色，在105℃加热10分钟，10％硫酸乙醇溶液时显紫色点，碘蒸气显色时，为黄色斑点。
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