CN103547684B - 杀微生物组合物及其生产方法和用途 - Google Patents

杀微生物组合物及其生产方法和用途 Download PDF

Info

Publication number
CN103547684B
CN103547684B CN201280024689.0A CN201280024689A CN103547684B CN 103547684 B CN103547684 B CN 103547684B CN 201280024689 A CN201280024689 A CN 201280024689A CN 103547684 B CN103547684 B CN 103547684B
Authority
CN
China
Prior art keywords
propionate
concentration range
gentamycin
sodium
calcium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201280024689.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103547684A (zh
Inventor
L.S.乌雷特斯基
K.霍兰
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Siemens Healthcare Diagnostics Inc
Original Assignee
Siemens Healthcare Diagnostics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Siemens Healthcare Diagnostics Inc filed Critical Siemens Healthcare Diagnostics Inc
Publication of CN103547684A publication Critical patent/CN103547684A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103547684B publication Critical patent/CN103547684B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/04—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom
    • A01N43/14—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom six-membered rings
    • A01N43/16—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with one or more oxygen or sulfur atoms as the only ring hetero atoms with one hetero atom six-membered rings with oxygen as the ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/7036—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin having at least one amino group directly attached to the carbocyclic ring, e.g. streptomycin, gentamycin, amikacin, validamycin, fortimicins

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

公开了显示提高的微生物功效的杀微生物组合物，以及生产和使用所述杀微生物组合物的方法。

Description

杀微生物组合物及其生产方法和用途
相关申请的交叉引用
不适用。
关于联邦政府资助的研究或开发的声明
不适用。
发明领域
本专利申请涉及杀微生物组合物，以及生产和使用所述组合物的方法。
背景
临床实验室仪器用于体液(例如但不限于全血、血清或血浆)的分析以便诊断各种疾病状态。为了利用这些仪器，宽广范围的试剂是必要的。由于这些试剂含有用于微生物的营养成分，微生物的生长常常是一个问题，尤其是对商业分销的产品，其为了成为商业实用的产品往往需要几个月或几年的保质期。
此类仪器和化学药品的一个子类是用在重症监护区的那些，在此处分析结果必须迅速获得。这些被用来测量项目，例如但不限于，如二氧化碳、氧气、总血红蛋白、钠、钾、氯、钙、镁、乳酸盐或葡萄糖的此类成分在血液中的浓度，以及物理性质如pH。在这种环境下，由于需要员工迅速对患者的诊断和治疗作出决定，所以***正常工作是尤为重要的。因此，杀微生物组合物通常包括在重症监护仪器所使用的试剂中以保持在制造过程中试剂不受污染且特别是保持仪器和传感器在其使用过程中不受污染。仪器的微生物污染会导致错误的结果，而试剂的微生物污染会造成试剂不稳定并可能损害仪器。
目前存在多种市售的杀微生物组合物，所述杀微生物组合物能与大部分现有技术的试剂和仪器相容。在此类试剂中利用的杀微生物组合物的一个实例公开在1995年11月7日Voo等提交的US 5,464,850中。然而，这些现有的杀微生物组合物与酶基传感器不相容；因此，在这些仪器中使用的酶基传感器的开发要求：鉴定新的和改进的杀微生物组合物，所述杀微生物组合物是有效的且不对所述酶产生不利影响。
因此，需要新的和改进的杀微生物组合物，所述杀微生物组合物克服了现有技术的组合物的缺点和缺陷。目前公开并要求保护的本发明构思涉及此类组合物以及生产和使用所述组合物的方法。
附图的简要说明
图1图示了肌酸酐生物传感器暴露于各种浓度的庆大霉素的影响。
图2图示了肌酸酐生物传感器暴露于各种浓度的丙酸盐的影响。
示例性实施方案的详细描述
下面详细的描述和附录描述和说明了各种示例性实施方案。说明书和附图用于使本领域技术人员能够制造和使用本发明，且不旨在以任何方式限制本发明的范围。
在通过示例性附图、实验、结果和实验步骤的方式详细解释本发明至少一个实施方案之前，应当理解本发明的应用不限于以下说明书列出或附图、实验和/或结果中说明的具体结构和组分排列。本发明能够有其他实施方案，或者以各种方式实施或进行。同样，本文所用的语言旨在给出最广的可能的范围和含义；并且实施方案应该是示例性的-不是详尽的。而且，应当理解本文采用的用语和术语是为了描述的目的，而并不应当认为是限制性的。
除非本文中另有定义，连同目前公开并要求保护的发明构思使用的科学和技术术语应当具有本领域技术人员通常理解的含义。而且，除非上下文另有要求，单数术语应当包括复数，并且复数术语应当包括单数。一般来说，本文所述的细胞和组织培养、分子生物学、以及蛋白和寡核苷酸或多核苷酸化学和杂交所用的命名以及它们的技术是本领域公知和常用的。标准技术用于重组DNA、寡核苷酸合成以及组织培养和转化(例如，电穿孔、脂质体转染)。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书或者如本领域通常完成的或者如本文所述来进行。前述技术和方法一般根据本领域公知的常规方法并如本说明书通篇引用和讨论的各种普通和更具体的参考文献所述来进行。参见例如，Sambrook等. MolecularCloning：A Laboratory Manual (2nd ed.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，ColdSpring Harbor，N.Y. (1989)和Coligan等. Current Protocols in Immunology(Current Protocols，Wiley Interscience (1994))，其通过引用并入本文。本文所述的分析化学、合成有机化学、以及医学化学和药物化学所用的命名以及它们的实验室方法和技术是本领域公知和常用的。标准技术用于化学合成、化学分析、药物制剂、配制和递送以及患者的治疗。
说明书中提到的所有出版物和专利申请是目前公开并要求保护的发明构思相关的领域技术人员的技术水平的指示。所有出版物和专利申请以相同程度通过引用并入本文，如同特别地和单独地指出将每个单独的出版物或专利申请通过引用并入本文。
可以根据本公开制备和执行本文公开并要求保护的所有组合物和/或方法而无需过多实验。虽然目前公开并要求保护的发明构思的组合物和方法已根据优选实施方案来描述，但是本领域技术人员会清楚变化可以应用于本文所述组合物和/或方法以及所述方法的步骤或步骤的顺序而不背离本发明构思的构思、精神和范围。本领域技术人员显而易见的所有这类相似的取代和修改被视为在如所附权利要求定义的发明构思的精神、范围和构思内。
如按照本公开所用，除非另有指明，以下术语应当理解为具有以下含义：
当在权利要求和/或说明书中与术语“包含”联用时，使用单词“一个(a)”或“一个(an)”可以表示“一个(one)”，但是其还与“一个或多个”、“至少一个”以及“一个或超过一个”的含义一致。在权利要求中使用术语“或”用来表示“和/或”，除非明确表示仅指可选物或者可选物互相排斥，虽然本公开支持仅指可选物和“和/或”的定义。在整个该申请中，术语“约”用来表示包括装置、用来确定值的方法的内在错误变化或者存在于研究对象之间的变化的值。术语“至少一个”的使用应当理解为包括一个以及超过一个的任何数量，包括但不限于2、3、4、5、10、15、20、30、40、50、100等。术语“至少一个”可以延伸高达100或1000或更多，取决于其连接的术语；此外，100/1000的数量并不认为是限制性的，因为更高的限制也可以产生令人满意的结果。
术语“约”用来表示包括装置、用来确定值的方法的内在错误变化和/或存在于研究对象之间的变化的值。
如本说明书和权利要求所用，单词“包含(comprising)”(以及包含的任何形式，如“包含(comprise)”和“包含(comprises)”)、“具有(having)”(以及具有的任何形式，如“具有(have)”和“具有(has)”)、“包括(including)”(以及包括的任何形式，如“包括(includes)”和“包括(include)”)或“含有(containing)”(以及含有的任何形式，如“含有(contains)”和“含有(contain)”)是包括性或开放性的，并且不排除额外的未列举的元素或方法步骤。
如本文所用，术语“或其组合”指该术语之前所列的项目的所有排列和组合。例如，“A、B、C或其组合”旨在包括以下的至少一种：A、B、C、AB、AC、BC或ABC，并且如果在特定上下文中顺序是重要的，还有BA、CA、CB、CBA、BCA、ACB、BAC或CAB。接续这个实例，明确包括含有一个或多个项目或术语的重复的组合，例如BB、AAA、MB、BBC、AAABCCCC、CBBAAA、CABABB等。技术人员会理解除非从上下文另外显而易见，在任何组合中通常没有对项目或术语的数量的限制。
术语“杀微生物组合物”是指可基本上抑制微生物的生长和/或杀死微生物的防腐剂组合物。对于本说明书的目的，“微生物”可以包括细菌、霉菌、酵母和/或病毒。微生物的特定实例可包括但不限于萤光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、皮氏罗尔斯顿氏菌(Ralstonia pickettii)、革兰氏阳性杆菌(Gram positive rods)、灰绿曲菌(Aspergillus glaucus)和点青霉菌(Penicillium notatum)。
庆大霉素是已知可有效对抗革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌的氨基糖苷类抗生素。已知庆大霉素对假单胞菌类特别有效。
丙酸盐是指丙酸的盐。它们被用作食品(例如但不限于面包、巧克力产品、奶酪等)防腐剂，因为已知它们是无毒的且表现出抗真菌性。
术语“生物传感器”是指用于分析物检测的装置，其使生物成分与理化检测器组件相结合。生物传感器包含生物成分，例如但不限于酶、抗体、组织、微生物、细胞器、细胞受体、核酸等。例如但不作为限制，按照目前公开并要求保护的发明构思所用的生物传感器可以是肌酸酐、血尿素氮(BUN)、葡萄糖、乳酸盐等。
如本文所用，短语“基本上不影响传感器的生物活性”是指保持大量的传感器生物(酶)活性和稳定性。例如但不作为限制，保留传感器的生物活性的至少30%，保留传感器的生物活性的至少40%，保留传感器的生物活性的至少50%，保留生物活性的至少60%，保留生物活性的至少70%，保留生物活性的至少80%，或保留生物活性的至少90%。此外，基本上保留生物传感器的酶稳定性，从而生物传感器的酶稳定性延长达(例如但不作为限制)超过4天、超过6天、超过8天、超过10天、超过12天、超过14天、超过20天、超过25天或超过28天。
目前公开并要求保护的发明构思涉及一种杀微生物组合物，其可有效对抗多种微生物(包括但不限于细菌和霉菌)达延长的时间段(即，在产品/试剂的寿命末期添加所述组合物)。此外，所述杀微生物组合物与处理其的试剂以及其中存在的任何传感器是相容的(包括生物传感器，例如但不限于酶基传感器)，且也与接触包括仪器的生物传感器的任何仪器相容；因此，所述杀微生物组合物不会对所述仪器产生不利影响且不会对所述传感器的生物活性和/或稳定性产生不利影响。因此，所述杀微生物组合物为本文所述的包含传感器的试剂和仪器提供了一种可行的防腐剂。
所述杀微生物组合物包括庆大霉素和至少一种丙酸盐，其中观察到庆大霉素和丙酸盐之间的杀微生物协同作用。如本文下面所示，协同关系维持或增强任一化合物本身的有效性，特别是对霉菌的抑制。
在一个实施方案中，存在于所述杀微生物组合物中的丙酸盐选自丙酸钙、丙酸钠及其组合。
目前公开并要求保护的发明构思还涉及包含本文上述的杀微生物组合物的试剂溶液。所述试剂溶液可以是，例如但不作为限制，临床化学试剂，且所述临床化学试剂可具有从约6.0至约8.0的范围的pH。
所述庆大霉素和至少一种丙酸盐可以任何浓度存在于所述杀微生物组合物和/或试剂溶液中，在该浓度下所述杀微生物组合物对微生物是有效的而基本上不影响试剂溶液中存在的至少一种传感器的生物活性，并因此使所述杀微生物组合物按照目前公开并要求保护的发明构思起作用的任何浓度落入目前公开并要求保护的发明构思的范围内。
在某些实施方案中，存在于所述杀微生物组合物中的至少一种丙酸盐为丙酸钙，丙酸钙在所述杀微生物组合物和/或试剂溶液中的浓度范围可以是约0.25mmol/L至约2.5mmol/L。在其它实施方案中，所述丙酸盐为丙酸钠，丙酸钠在所述杀微生物组合物和/或试剂溶液中的浓度范围可以是约4 mmol/L至约40 mmol/L。在某些实施方案中，庆大霉素在所述杀微生物组合物和/或试剂溶液中的浓度范围可以是约0.1%至约1%。
所述试剂溶液可进一步包括至少一种生物传感器，其中所述杀微生物组合物基本上不影响所述至少一种生物传感器的生物学活性。本领域已知的或以其他方式考量的任何生物传感器可根据目前公开并要求保护的发明构思来使用。例如但不作为限制，所述生物传感器可包括肌酸酐、血尿素氮(BUN)、葡萄糖和/或乳酸盐。这些类型的传感器可利用已知会受现有技术的杀微生物组合物不利影响的一些酶(例如但不限于脲酶、肌酸酐氨基水解酶、肌酸酐脒基水解酶、肌氨酸氧化酶等)，从而显示目前公开并要求保护的发明构思的优势之一。
一种或多种生物传感器可以是仪器的一部分。所述仪器可被配置成使试剂溶液与至少一种生物传感器接触。或者，所述仪器可以是***的一部分，在该***中使生物传感器与本发明的试剂溶液接触。所述***可包括含有至少一种生物传感器的仪器和上述用于清洁仪器和或其生物传感器的杀微生物溶液。所述杀微生物溶液可以是试剂溶液的一部分，其执行如本文进一步描述的仪器或传感器的其他功能。含有至少一种生物传感器和本文所述的杀微生物溶液或试剂溶液的试剂盒也可以是所述***的一部分。
目前公开并要求保护的发明构思进一步涉及用于杀死水性/试剂溶液中的微生物的方法。所述方法包括将本文上述的杀微生物组合物引入到水性/试剂溶液中。
目前公开并要求保护的发明构思进一步涉及用于抑制水性/试剂溶液中微生物生长的方法。所述方法包括将本文上述的杀微生物组合物引入到水性/试剂溶液中。
目前公开并要求保护的发明构思还涉及用于杀死与水性/试剂溶液相接触的固体表面上的微生物的方法。所述方法包括将本文上述的杀微生物组合物引入到水性/试剂溶液中。
目前公开并要求保护的发明构思还进一步涉及用于抑制与水性/试剂溶液相接触的固体表面上的微生物生长的方法。所述方法包括将本文上述的杀微生物组合物引入到水性/试剂溶液中，并使水性/试剂溶液的一部分与固体表面接触。
在某些实施方案中，目前公开并要求保护的发明构思的杀微生物组合物满足下列要求：(1)可溶解在中性pH和离子强度范围为70 mM至240 mM且优选160 mM的水溶液中，并在产品寿命期间维持pH值在+/- 0.005内；(2)有效对抗下列一种或多种—革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌、霉菌和酵母；(3)稳定的，所以在寿命末期，所述杀微生物组合物保持对感兴趣的有机体的微生物功效；(4)杀微生物剂降解产物必须不影响任何分析参数(即，pH)或仪器性能；(5)与所有试剂组分相容，包括但不限于被分析物、缓冲液、表面活性剂等；(6)与传感器相容，包括但不限于生物传感器(即，无干扰、漂移或使用寿命缩短)；(7)与仪器相容(即，部件无破坏、变色等)；(8)与仪器上所使用的所有样品类型相容(例如但不限于全血、血清、血浆、尿液、对照品等)而不引起沉淀、颜色改变或分析值的改变；(9)与在相同仪器上所使用的不同试剂中含有的其它杀微生物剂相容；(10)对使用者无害且在试剂中所需要的浓度下容易配置；(11)加工过程中原料处理的具体办法对生产工人不造成毒性危险；和(12)材料必须符合US和WW监管要求。
实施例显示的以及用各种不同化合物进行的MBC(最小杀菌浓度)筛选中所获得的结果的总结示于表1中。这些结果表明，庆大霉素和丙酸盐的组合与任一化合物单独相比，提供了大大增强的活性。此外，该组合与磺胺甲噁唑、叠氮化钠或叠氮化钠和丙酸盐的组合相比，对测试的细菌和霉菌也更有效得多。
下文提供实施例。然而，应当理解本发明的应用并不限于具体实验、结果和实验室方法。相反，实施例简单地提供为各种实施方案之一，并且是示例性的而不是穷尽的。
实施例1
最小杀菌浓度-含有庆大霉素和磺胺甲噁唑的1200XL Wash NEXT试剂
Wash NEXT基本池样品使用1%庆大霉素、1%磺胺甲噁唑、1%四环素和1%新生霉素来制备以准备用于最小杀菌测试。四环素和新生霉素样品不能用于此测试，因为没有抗生素完全溶于Wash试剂。四环素样品导致棕褐色的液体，由于它的颜色，因此也不能使用。针对从制造和现场试剂分离的有机体对庆大霉素和磺胺甲噁唑样品进行测试。
以下是实施例1所获得的结果的总结，其中庆大霉素或磺胺甲噁唑被添加到WashNEXT试剂中。
当庆大霉素被添加到Wash NEXT试剂中时，观察对下列有机体的杀菌活性：
萤光假单胞菌(D) 24小时100%防腐剂时全部杀死
48小时70%防腐剂时全部杀死
72小时30%防腐剂时全部杀死
恶臭假单胞菌-DRO(K) 8小时10%防腐剂时全部杀死
铜绿假单胞菌-KTO(L) 48小时90%防腐剂时全部杀死
72小时50%防腐剂时全部杀死
皮氏罗尔斯顿氏菌(AU) 8小时10%防腐剂时全部杀死
铜绿假单胞菌(AY) 8小时30%防腐剂时全部杀死
24小时10%防腐剂时全部杀死
革兰氏阳性杆菌(S) 8小时10%防腐剂时全部杀死。
由于霉菌在72小时的时间点仍然活着，对霉菌进行了14天的时间段。
灰绿曲菌-DMO(Q) 经14天的时间点从未达到全部杀死
点青霉菌-KMO(R) 经14天的时间点从未达到全部杀死。
当磺胺甲噁唑被添加到Wash NEXT试剂中时，观察对下列有机体的杀菌活性：
萤光假单胞菌(D) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
恶臭假单胞菌-DRO(K) 48小时70%防腐剂时全部杀死
72小时20%防腐剂时全部杀死
铜绿假单胞菌-KTO(L) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
皮氏罗尔斯顿氏菌(AU) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
铜绿假单胞菌(AY) 经72小时的时间点从未达到全部杀死。
由于霉菌和革兰氏阳性杆菌在72小时的时间点仍然活着，对这些霉菌和革兰氏阳性杆菌进行了14天的时间段。
灰绿曲菌-DMO(Q) 经14天的时间点从未达到全部杀死
点青霉菌-KMO(R) 经14天的时间点从未达到全部杀死
革兰氏阳性杆菌(S) 经14天的时间点从未达到全部杀死。
实施例1的材料和方法：
在开始MBC测试前，将储存的有机体解冻并进行替代。在一周前将霉菌换到SDA板上，且在测试开始前24小时将细菌换到TAT琼脂板上。所有板在32℃下培养。
将每个细菌有机体接种到离心管中的40 ml无菌盐水中以建立MacFarland #1的密度。然后制成两个1:100的连续稀释液，产生10-2和10-4的浓度。在取样前，将每种稀释液进行涡旋，并使用无菌的Eppendorf吸液管头进行每次转移。将10-4稀释液螺旋涂板(spiralplate)以产生初始接种浓度。
对于霉菌，将每个有机体接种到离心管中的40 ml无菌盐水中以建立MacFarland#5的密度。然后制成两个1:100的连续稀释液，产生10-2和10-4的浓度。在取样前，将每种稀释液进行涡旋，并使用无菌的Eppendorf吸液管头进行每次转移。将10-4稀释液螺旋涂板以产生初始接种浓度。
MBC托盘装备有配制的测试试剂。使用Matrix移液器，将试剂的100 µl等分试样分散到孔中，自100%至10%的增量稀释防腐剂的量，使用未经防腐处理的试剂作为稀释剂。在一排中，100%未经防腐处理的试剂作为阳性对照，并作为满簇生长(full mat of growth)的基准。在孔#12H中，移取100 µl未经防腐处理的试剂，且这个孔不接种有机体，因为它用于作为阴性对照。一旦制备好所有的托盘，就将制备的细菌/霉菌悬浮液倒入MBC接种托盘中。将这些放置到试剂盘中，并将0.01 ml接种物​​引入到各孔的100 μl试剂中。
对于细菌在8小时、24小时、48小时和72小时的时间点，且对于霉菌(和对于磺胺甲噁唑的革兰氏阳性杆菌)还有7天和14天，进行生长测试。这通过将无菌棉拭子浸入到各孔中，并吸收孔中所有的液体来进行。将该拭子辗到TAT琼脂板上，确保整个拭子接触琼脂。将板在32℃下培养48小时至7天，取决于有机体。生长的观察通过得分矩阵来进行，使用+代表满簇，+/-代表一些生长，数值代表实际菌落数，和–代表没有生长。
下面是含有实施例1中所获得的数据的表格。MBC测试得分用(+)表示有机体的满簇生长，相当于在未经防腐处理的试剂中的生物体。(+/-)表示有一些明显干扰成簇或导致数量下降到几乎可数的水平的杀死。实际的数字是在该浓度的防腐剂下生长的菌落的实际数目。(-)表示未发现生长。MBC托盘在整个测试中储存在室温下。
表2-9说明用庆大霉素所获得的结果。
表10-17说明用磺胺甲噁唑所获得的结果。
表18列出了阴性MBC对照的结果以及实施例1中每个物种所利用的起始浓度。
实施例2
最小杀菌浓度-具有(1)叠氮化钠，(2)丙酸钠和丙酸钙，(3)丙酸钠和丙酸钙加上叠氮化钠，以及(4)丙酸钠和丙酸钙加上庆大霉素的1200XL Wash NEXT试剂。
Wash NEXT基本池样品使用0.09%叠氮化钠以及丙酸钠和丙酸钙作为防腐剂来制备。具有两种丙酸盐的洗涤样品也通过将叠氮化钠添加到一个而庆大霉素添加到另一个来进行测试。所有四个样品准备用于最小杀菌测试并针对从制造和现场试剂分离的有机体进行测试。
下面是实施例2所获得的结果的总结，其中叠氮化钠、丙酸盐和/或庆大霉素被添加到Wash NEXT试剂中。在所有情况下，这些霉菌进行了14天的时间段，因为它们在72小时的时间点仍然活着。在所有情况下，除当丙酸盐和庆大霉素被添加到Wash NEXT试剂中时，革兰氏阳性杆菌也进行14天的时间段，因为它们在72小时的时间点仍然活着。
材料以及MBC测试的方法和分析与实施例1中相同。
当叠氮化钠被添加到Wash NEXT试剂中时，观察对下列有机体的杀菌活性：
萤光假单胞菌(D) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
恶臭假单胞菌-DRO(K) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
铜绿假单胞菌-KTO(L) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
皮氏罗尔斯顿氏菌(AU) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
铜绿假单胞菌(AY) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
革兰氏阳性杆菌(S) 经14天的时间点从未达到全部杀死
灰绿曲菌-DMO(Q) 经14天的时间点从未达到全部杀死
点青霉菌-KMO(R) 在14天50%防腐剂时全部杀死。
当丙酸钠和丙酸钙被添加到Wash NEXT试剂中时，观察对下列有机体的杀菌活性：
萤光假单胞菌(D) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
恶臭假单胞菌-DRO(K) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
铜绿假单胞菌-KTO(L) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
皮氏罗尔斯顿氏菌(AU) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
铜绿假单胞菌(AY) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
灰绿曲菌-DMO(Q) 在14天的时间点从未达到全部杀死
点青霉菌-KMO(R) 在14天的时间点从未达到全部杀死
革兰氏阳性杆菌(S) 在14天的时间点从未达到全部杀死。
当丙酸钠和丙酸钙加上叠氮化钠被添加到Wash NEXT试剂中时，观察对下列有机体的杀菌活性：
萤光假单胞菌(D) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
恶臭假单胞菌-DRO(K) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
铜绿假单胞菌-KTO(L) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
皮氏罗尔斯顿氏菌(AU) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
铜绿假单胞菌(AY) 经72小时的时间点从未达到全部杀死
灰绿曲菌-DMO(Q) 在14天的时间点从未达到全部杀死
点青霉菌-KMO(R) 在14天30%防腐剂时全部杀死
革兰氏阳性杆菌(S) 在14天的时间点从未达到全部杀死。
当丙酸钠和丙酸钙加上庆大霉素被添加到Wash NEXT试剂中时，观察对下列有机体的杀菌活性：
萤光假单胞菌(D) 8小时10%防腐剂时全部杀死
恶臭假单胞菌-DRO(K) 8小时10%防腐剂时全部杀死
铜绿假单胞菌-KTO(L) 24小时70%防腐剂时全部杀死
皮氏罗尔斯顿氏菌(AU) 48小时10%防腐剂时全部杀死
铜绿假单胞菌(AY) 8小时10%防腐剂时全部杀死
革兰氏阳性杆菌(S) 8小时10%防腐剂时全部杀死
灰绿曲菌-DMO(Q) 14天100%防腐剂时全部杀死
点青霉菌-KMO(R) 14天10%防腐剂时全部杀死。
下面是含有实施例2中所获得的数据的表格。
表19-26说明用叠氮化钠所获得的结果。
表27-34说明用丙酸钠和丙酸钙​所获得的结果。
表35-42说明用丙酸钠和丙酸钙以及叠氮化钠​所获得的结果。
表43-50说明用丙酸钠和丙酸钙以及庆大霉素​所获得的结果。
表51列出了阴性MBC对照的结果以及实施例2中每个物种所利用的起始浓度。
根据此测试，与Wash NEXT联合使用的防腐剂的最佳组合是丙酸钠和丙酸钙与庆大霉素的组合。所有测试的有机体在14天的测试点均被杀死。
实施例3
庆大霉素和丙酸盐对生物传感器的酶活性的影响的分析
在图1中，对各种浓度的庆大霉素对肌酸酐生物传感器(包含三种酶，肌酸酐氨基水解酶、肌酸酐脒基水解酶、肌氨酸氧化酶)的酶活性的影响进行了测定。在图2中，对各种浓度的丙酸盐对肌酸酐生物传感器(包含三种酶)的酶活性的影响进行了测定。
在两种情况下，O2%的下降速度是酶活性的指标；O2%的下降速度越快，酶活性越高。
在图1中，利用高浓度的庆大霉素(210 µM)，并且所述浓度不使肌酸酐生物传感器中这三种酶的酶活性失活。
在图2中，40 mM浓度的丙酸盐基本上不影响肌酸酐生物传感器中这三种酶的酶活性。
因此，实施例3表明目前公开并要求保护的发明构思的杀微生物组合物不降低生物传感器的酶活性。
因此，根据目前公开并要求保护的发明构思，已经提供了具有增强的微生物功效的杀微生物组合物以及生产和使用所述组合物的方法，其充分满足上文所列的目标和优势。虽然本发明已结合上文所列的具体附图、实验、结果和语言进行描述，显然许多替换、修改和变化将是本领域技术人员所明白的。因此，试图包括所有落入本发明的精神和宽广范围内的这样的替代、修改和变化。

Claims (7)

1.一种杀微生物组合物，其包含庆大霉素和至少一种丙酸盐的协同混合物，其中至少一种丙酸盐选自丙酸钙、丙酸钠及其组合，当所述丙酸盐为丙酸钙时，丙酸钙在所述杀微生物组合物中的浓度范围是0.25mmol/L至2.5mmol/L，当所述丙酸盐为丙酸钠时，丙酸钠在所述杀微生物组合物中的浓度范围是4mmol/L至40mmol/L，并且庆大霉素在所述杀微生物组合物中的浓度范围是0.1％至1％。
2.一种试剂溶液，其包含用于抑制试剂溶液中微生物生长的杀微生物组合物，所述杀微生物组合物包含庆大霉素和至少一种丙酸盐，其中至少一种丙酸盐选自丙酸钙、丙酸钠及其组合，当所述丙酸盐为丙酸钙时，丙酸钙在所述试剂溶液中的浓度范围是0.25mmol/L至2.5mmol/L，当所述丙酸盐为丙酸钠时，丙酸钠在所述试剂溶液中的浓度范围是4mmol/L至40mmol/L，并且庆大霉素在所述试剂溶液中的浓度范围是0.1％至1％。
3.权利要求2的试剂溶液，其进一步定义为具有6.0至8.0范围的pH的临床化学试剂。
4.一种用于抑制水溶液中微生物生长的方法，其包括将包含庆大霉素和至少一种丙酸盐的杀微生物组合物引入到所述水溶液，其中至少一种丙酸盐选自丙酸钙、丙酸钠及其组合，当所述丙酸盐为丙酸钙时，丙酸钙在所述水溶液中的浓度范围是0.25mmol/L至2.5mmol/L，当所述丙酸盐为丙酸钠时，丙酸钠在所述水溶液中的浓度范围是4mmol/L至40mmol/L，并且庆大霉素在所述水溶液中的浓度范围是0.1％至1％。
5.一种用于杀死与水溶液相接触的固体表面上的微生物的方法，其包括下列步骤：
将包含庆大霉素和至少一种丙酸盐的杀微生物组合物引入到所述水溶液；和
使一部分水溶液与固体表面接触，
其中至少一种丙酸盐选自丙酸钙、丙酸钠及其组合，当所述丙酸盐为丙酸钙时，丙酸钙在所述水溶液中的浓度范围是0.25mmol/L至2.5mmol/L，当所述丙酸盐为丙酸钠时，丙酸钠在所述水溶液中的浓度范围是4mmol/L至40mmol/L，并且庆大霉素在所述水溶液中的浓度范围是0.1％至1％。
6.一种***，其包含：
一种用于抑制微生物生长的杀微生物组合物，其包含庆大霉素和至少一种丙酸盐；
至少一种生物传感器，其中至少一种生物传感器包含肌酸肝；和
一种用于将所述杀微生物组合物应用到至少一部分所述生物传感器的装置且其中所述杀微生物组合物基本上不影响至少一种生物传感器的生物活性，其中短语“基本上不影响至少一种生物传感器的生物活性”是指保留生物传感器的生物活性的至少30％，
其中至少一种丙酸盐选自丙酸钙、丙酸钠及其组合，当所述丙酸盐为丙酸钙时，丙酸钙的浓度范围是0.25mmol/L至2.5mmol/L，当所述丙酸盐为丙酸钠时，丙酸钠的浓度范围是4mmol/L至40mmol/L，并且庆大霉素的浓度范围是0.1％至1％。
7.权利要求6的***，其中所述杀微生物组合物定义为具有6.0至8.0范围的pH的临床化学试剂。
CN201280024689.0A 2011-05-25 2012-05-24 杀微生物组合物及其生产方法和用途 Active CN103547684B (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161489874P 2011-05-25 2011-05-25
US61/489874 2011-05-25
US61/489,874 2011-05-25
PCT/US2012/039284 WO2012162466A1 (en) 2011-05-25 2012-05-24 Microbicidal compositions and methods of production use thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103547684A CN103547684A (zh) 2014-01-29
CN103547684B true CN103547684B (zh) 2016-11-16

Family

ID=47217731

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201280024689.0A Active CN103547684B (zh) 2011-05-25 2012-05-24 杀微生物组合物及其生产方法和用途

Country Status (5)

Country Link
US (1) US9131686B2 (zh)
EP (1) EP2689037B1 (zh)
CN (1) CN103547684B (zh)
DK (1) DK2689037T3 (zh)
WO (1) WO2012162466A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR3111551B1 (fr) * 2020-06-19 2022-08-26 Oreal Composition gélifiée comprenant un sel d’acide gras à chaîne courte

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3091572A (en) 1962-07-16 1963-05-28 Schering Corp Gentamycin and method of production
US5464850A (en) * 1991-10-04 1995-11-07 Ciba Corning Diagnostics Corp. Synergistic preservative systems for chemistry reagents
JP3509864B2 (ja) 1993-11-12 2004-03-22 ロシュ ダイアグノスティックス コーポレーション 試験片用グルコース検量剤および対照物質
US6589591B1 (en) 2001-07-10 2003-07-08 Baylor College Of Medicine Method for treating medical devices using glycerol and an antimicrobial agent
CA2474634C (en) * 2002-02-04 2010-10-19 Pharmacia Corporation Stable pharmaceutical composition useful for treating gastrointestinal disorders
US7183100B2 (en) 2003-04-01 2007-02-27 Biological Targets, Inc. Aconitase
EP1644024B1 (en) 2003-06-06 2019-07-31 Board of Regents, The University of Texas System Antimicrobial flush solutions
US8454566B2 (en) * 2003-07-10 2013-06-04 Medtronic Minimed, Inc. Methods and compositions for the inhibition of biofilms on medical devices
US20070093894A1 (en) * 2005-10-25 2007-04-26 Baylor College Of Medicine Incorporation of antimicrobial combinations onto devices to reduce infection
US8512731B2 (en) * 2007-11-13 2013-08-20 Medtronic Minimed, Inc. Antimicrobial coatings for medical devices and methods for making and using them

Also Published As

Publication number Publication date
CN103547684A (zh) 2014-01-29
US20140094424A1 (en) 2014-04-03
EP2689037A1 (en) 2014-01-29
US9131686B2 (en) 2015-09-15
DK2689037T3 (da) 2017-08-07
WO2012162466A1 (en) 2012-11-29
EP2689037B1 (en) 2017-04-12
EP2689037A4 (en) 2014-12-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20080166753A1 (en) Microbial Growth Assay
US20080318268A1 (en) Devices and Methods for the Selection of Agents with Efficacy Against Biofilm
EP2918672B1 (en) Method for determining the sensitivity of microorganisms to antimicrobial substances
KR20110132388A (ko) 데옥시리보뉴클레아제 활성을 검출하기 위한 방법 및 용품
US20210269764A1 (en) Microbiological growth media and methods of using the same
US9290789B2 (en) Method for measuring cells, and reagent for cell measurement
CN103547684B (zh) 杀微生物组合物及其生产方法和用途
Tsukatani et al. Rapid and simple determination of minimum biofilm eradication concentration by a colorimetric microbial viability assay based on reduction of a water-tetrazolium salt and combinated effect of antibiotics against microbial biofilm
CN1198774A (zh) 测试亲石蜡性微生物对抗微生物剂的敏感性的方法和装置
CN110437303B (zh) 一种抗菌肽及其应用
US20150366196A1 (en) Microbicidal compositions and methods of production use thereof
Doucet et al. Generation of greater bacterial biofilm biomass using PCR-Plate deep well microplate devices
RU2718910C1 (ru) Индикатор для выявления биологических плёнок бактерий на медицинских инструментах (варианты)
Kumar et al. Challenges and mitigation strategies associated with Burkholderia cepacia complex contamination in pharmaceutical manufacturing
Beizman-Magen et al. Inherent protection of bacteria from beta-lactam antibiotics by wet-dry cycles with microscopic surface wetness
Kher et al. Biofilm Models: Different Ways of Biofilm Characterization and Drug Discovery
Kole et al. Bactericidal, protozoacidal, and algicidal efficacy of Sanodrink: a complete water sanitizer in poultry farm
Abell-King et al. Bacterial multispecies invasion of human epithelial bladder cells
Gomez Inhibition of Staphylococcus aureus Biofilm by Variovorax paradoxus
JP5373239B2 (ja) サンプルを安定化するためのシステム
JP2021533828A (ja) 微小液滴を使用する抗菌薬感受性検査
RU2298036C2 (ru) Способ оценки уровня сорбционной активности сорбента
Lehtinen et al. Antimicrobial activity of formylchromones: Detection by a micro-scale method
Gradel Disinfection of empty animal houses–scientific evidence for applied procedures
Ewadh et al. Involvement of fucose in bacterial oxidative stress processes

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant