CN103472235A - 一种长效蛋白质溶液稳定剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用于蛋白质溶液的稳定剂，特别涉及一种长效蛋白质溶液稳定剂，其每100ml水中，含有：蛋白质0.1-5g，糖类物质0.1-10g，有机物0.1-10g，防腐剂0.01-0.1g，缓冲液盐类10-200mmol，pH7.2-7.4。本发明的组成成分简单，在保护蛋白稳定防止其变性的同时不会干扰目标反应的进行，对多数蛋白质溶液具有普遍的适用性；本发明的效果明显，可以长期的维持蛋白质溶液的有效性，所述蛋白质溶液待用于临床诊断试剂、生命科学研究等领域。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于蛋白质溶液的稳定剂。
背景技术
在临床检测、生命科学研究中，蛋白质检测试剂不仅要有一定的敏感度和特异性，其重复性和稳定性也是非常重要的。良好的稳定性，是其数据可靠性的一个重要标志。但是，一些酶类及蛋白标记物质，其稳定性是非常差的，在一般条件下极易降解或变性，导致检测试剂的整体失效。如在化学发光免疫分析（CLIA）中，酶结合物经稀释后很容易丧失活性，而酶活性的降低或丧失，都直接影响检测结果的准确性。因此，如何保持蛋白质尤其是酶的活性的稳定是蛋白质检测中的关键技术。
近年来，人们发现了一些有助于提高蛋白质溶液稳定性的物质，如牛血清白蛋白（BSA）等。将牛血清白蛋白添加到蛋白质溶液中，可以在一定程度上保持蛋白质的活性，但是效果仍然不理想。因此，很有必要开发一种由多组分构成的价格低廉且高效的蛋白质溶液稳定剂。中国专利CN200910210391.9公开了一种酶结合物稳定液，其由蛋白质物质、糖类物质、氨基酸类物质、安替比林、维生素C、表面活性剂、硫酸庆大霉素、Proclin300和磷酸盐缓冲液组成。该专利虽然有良好的稳定效果，但是成分较复杂，其中表面活性剂在生物科学领域有着广泛的应用，但是其仍旧具有一些生物毒性，如吐温类表面活性剂有溶血作用，且吐温20色深、有异味；安替比林和硫酸庆大霉素的加入虽然有助于提高酶的稳定性和抑制细菌生长，但是可能会增加酶结合试验中的背景，而影响试验结果。
发明内容
本发明的目的在于提供一种由多组分构成的、配方简单但是有效性高的，用于维持待用于临床检测、生命科学研究等领域中蛋白质溶液的活性的长效蛋白质溶液稳定剂。
为实现上述目的，本发明采用技术方案如下：
本发明的长效蛋白质溶液稳定剂，其特征在于每100ml水中，含有：
蛋白质 0.1-5g
糖类物质 0.1-10g
有机物 0.1-10g
防腐剂 0.01-0.1% (V/V)
缓冲液盐类 10-200mM，pH7.2-7.4
所述的蛋白质为重组人血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵清白蛋白或酪蛋白水解物中的一种或两种以上；
所述的糖类物质为葡萄糖、海藻糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、纤维二糖、肌糖、菊糖、右旋糖酐、麦芽糖糊精或肝素中的一种或两种以上；
所述的有机物为甘油、山梨醇、精氨酸、甘氨酸、甘露醇、聚乙二醇、脯氨酸、谷氨酸钠、谷氨酸、丙氨酸、赖氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、甲基丙烯酸酯类或聚乙烯亚胺中的一种或两种以上；
所述的防腐剂为ProClin150、ProClin200、ProClin300或ProClin5000中的一种；
所述的缓冲液盐类为磷酸盐缓冲液和/或NaCl-EDTANa缓冲液。
进一步的，本发明还包括金属离子螯合剂。
进一步的，本发明所述的蛋白质为重组人血清白蛋白、牛血清白蛋白或酪蛋白水解物中的一种。
进一步的，本发明所述的糖类物质为菊糖或右旋糖酐中的一种。
进一步的，本发明所述的有机物为甘油、山梨醇或甘露醇中的一种。
进一步的，本发明所述的缓冲液盐类为磷酸盐缓冲液。
进一步的，本发明所述的金属离子螯合剂为乙二胺四乙酸二钠盐。
其中所述蛋白质的作用是防止蛋白质——特别是酶的分解和非特异性吸附，抑制部分酶的变性，并能防止酶吸附到管壁而损失。
其中所述糖类物质的作用是阻止蛋白质结构的改变，防止蛋白质的伸展和聚集，并提供一种亲水的整体环境，可以显著提高酶与目的蛋白的稳定性。
其中所述有机物的作用是：使得目的蛋白优先与水分子结合，蛋白质表面张力增加，化学势提高，从而提高了整个蛋白质分子的稳定性。
其中所述防腐剂的作用是：防止细菌、真菌及酵母菌的生长，本发明选用的防腐剂具有光谱的抗菌性，能长时间的抑制细菌、真菌和酵母菌等微生物的生长。
其中所述缓冲盐的作用是：提供一定的离子环境。
其中金属离子螯合剂的作用是：螯合金属离子，避免金属离子对实验结果造成的影响。
本发明的有益效果在于：本发明的组成成分简单，在保护蛋白稳定防止其变性的同时不会干扰目标反应的进行，对多数蛋白质溶液具有普遍的适用性；本发明的效果明显，可以长期的维持蛋白质溶液的有效性，所述蛋白质溶液待用于临床诊断试剂、生命科学研究等领域。
具体实施方式
下面结合实施例及附表对本发明做进一步的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
牛血清白蛋白 0.5g
甘露糖 10g
山梨醇 10g
ProClin300 0.05%（m/v）
磷酸盐缓冲液 100mM，pH7.4
乙二胺四乙酸二钠盐 5mmol
加水定容至100ml。
制备方法：
配置50ml 200mM，pH7.4的磷酸盐缓冲液缓冲液；向配置好的缓冲液中加入上述重量的甘露糖、山梨醇、ProClin300以及乙二胺四乙酸二钠盐；充分溶解后，加入上述重量的牛血清白蛋白，加入去离子水定容至100ml。最后加入牛血清白蛋白可以进一步提高本实施例溶液的稳定性。
检测方法：
将辣根过氧化酶（蛋白质）浓缩液1μL用1000μL实施例1的稳定液稀释，以不加稳定剂的辣根过氧化酶工作液作为对照组，正常封装。
将两种溶液放置于37℃环境中，放置2、4、6、8、10、12、14、20天，以0天的辣根过氧化酶溶液作为对照，以酶联免疫法（使用抗甲状腺激素抗体检测试剂盒）检测并计算两种溶液的酶残余活性。
从表1的数据中可以看出，没有加稳定剂的溶液很快就失去了活性，而加有稳定剂的溶液随着时间的推移，其活性基本保持不变，显示本发明的稳定剂效果非常好。
表1稳定性检测结果
实施例2
重组人血清白蛋白 1g
菊糖 8g
甘露醇 5g
ProClin200 0.1%（m/v）
磷酸盐缓冲液 150mM，pH7.2
乙二胺四乙酸二钠盐 1mmol
加水定容至100ml。
制备方法：
配置50ml 300mM，pH7.2的磷酸盐缓冲液缓冲液；向配置好的缓冲液中加入上述重量的菊糖、甘露醇、ProClin200以及乙二胺四乙酸二钠盐；充分溶解后，加入上述重量的重组人血清白蛋白，加入去离子水定容至100ml。最后加入重组人血清白蛋白可以进一步提高本实施例溶液的稳定性。
检测方法：
将辣根过氧化酶（蛋白质）浓缩液1μL用1000μL实施例2的稳定液稀释，以不加稳定剂的辣根过氧化酶工作液作为对照组，正常封装。
将两种溶液放置于37℃环境中，放置2、4、6、8、10、12、14、20天，以0天的辣根过氧化酶溶液作为对照，以酶联免疫法（使用抗甲状腺激素抗体检测试剂盒）检测并计算两种溶液的酶残余活性。
从表2的数据中可以看出，没有加稳定剂的溶液很快就失去了活性，而加有稳定剂的溶液随着时间的推移，其活性基本保持不变，显示本发明的稳定剂效果非常好。
表2 稳定性检测结果
实施例3~6
检测方法：
将辣根过氧化酶（蛋白质）浓缩液1μL用1000μL实施例3~6的稳定液稀释，以不加稳定剂的辣根过氧化酶工作液作为对照组，正常封装。
将所得溶液放置于37℃环境中，放置20天，以0天的辣根过氧化酶溶液作为对照，以酶联免疫法（使用抗甲状腺激素抗体检测试剂盒）检测并计算两种溶液的酶残余活性。
从表3的数据中可以看出，没有加稳定剂的溶液很快就失去了活性，而加有稳定剂的溶液随着时间的推移，其活性基本保持不变，显示本发明的稳定剂效果非常好。
表3. 实施例3~6的酶标板稳定性检测结果
Claims (7)
1.一种长效蛋白质溶液稳定剂，其特征在于每100ml水中，含有：
蛋白质 0.1-5g
糖类物质 0.1-10g
有机物 0.1-10g
防腐剂 0.01-0.1% (V/V)
缓冲液盐类 10-200mM，pH7.2-7.4
所述的蛋白质为重组人血清白蛋白、牛血清白蛋白、卵清白蛋白或酪蛋白水解物中的一种或两种以上；
所述的糖类物质为葡萄糖、海藻糖、甘露糖、蔗糖、乳糖、纤维二糖、肌糖、菊糖、右旋糖酐、麦芽糖糊精或肝素中的一种或两种以上；
所述的有机物为甘油、山梨醇、精氨酸、甘氨酸、甘露醇、聚乙二醇、脯氨酸、谷氨酸钠、谷氨酸、丙氨酸、赖氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、甲基丙烯酸酯类或聚乙烯亚胺中的一种或两种以上；
所述的防腐剂为ProClin150、ProClin200、ProClin300或ProClin5000中的一种；
所述的缓冲液盐类为磷酸盐缓冲液和/或NaCl-EDTANa缓冲液。
2.根据权利要求1所述的一种长效酶标板稳定剂，其特征在于其还包括金属离子螯合剂。
3.根据权利要求1所述的一种长效酶标板稳定剂，其特征在于所述的蛋白质为重组人血清白蛋白、牛血清白蛋白或酪蛋白水解物中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种长效酶标板稳定剂，其特征在于所述的糖类物质为菊糖或右旋糖酐中的一种。
5.根据权利要求1所述的一种长效酶标板稳定剂，其特征在于所述的有机物为甘油、山梨醇或甘露醇中的一种。
6.根据权利要求1所述的一种长效酶标板稳定剂，其特征在于所述的缓冲液盐类为磷酸盐缓冲液。
7.根据权利要求2所述的一种长效酶标板稳定剂，其特征在于所述的金属离子螯合剂为乙二胺四乙酸二钠盐。
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