CN103439307A - 一种利用靛蓝染料快速检测食品中蛋白质的方法 - Google Patents

一种利用靛蓝染料快速检测食品中蛋白质的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103439307A
CN103439307A CN2013103947047A CN201310394704A CN103439307A CN 103439307 A CN103439307 A CN 103439307A CN 2013103947047 A CN2013103947047 A CN 2013103947047A CN 201310394704 A CN201310394704 A CN 201310394704A CN 103439307 A CN103439307 A CN 103439307A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mol
indigo
bovine serum
food
concentration
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2013103947047A
Other languages
English (en)
Inventor
陶慧林
徐铭泽
张庆军
黎舒怀
廖秀芬
孙超
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guilin University of Technology
Original Assignee
Guilin University of Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guilin University of Technology filed Critical Guilin University of Technology
Priority to CN2013103947047A priority Critical patent/CN103439307A/zh
Publication of CN103439307A publication Critical patent/CN103439307A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)

Abstract

本发明公开了一种利用靛蓝染料快速检测食品中蛋白质的方法。利用靛蓝与牛血清蛋白通过静电作用和疏水作用力形成聚集体，造成靛蓝的共振光散射强度发生相应的增强，从而建立了一种测定食品中蛋白质含量的方法。靛蓝的共振光散射信号增加值与待测牛血清蛋白的浓度在2×10-8~6×10-7摩尔/升（1.3×10-3~3.9×10-2克/升）范围内呈良好的线性关系，方法检出限为6×10-9摩尔/升（3.9×10-4克/升）。本发明克服了已有技术在检测时存在灵敏度低、应用范围窄等缺点，提高了灵敏度和选择性，对于食品中低浓度蛋白质的检测更加方便快速。

Description

一种利用靛蓝染料快速检测食品中蛋白质的方法
技术领域
本发明涉及一种利用靛蓝染料与共振光散射技术快速检测食品中痕量蛋白质的方法。
背景技术
蛋白质(protein)是生命的物质基础，在参与人体内反应、调节代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用，蛋白质的定量检测更是生命科学的重要研究课题。因此，寻求具有高灵敏度，高选择性的检测食品中蛋白质的方法具有重要意义。目前测定蛋白质的方法主要有荧光分析法、色谱法、化学发光法、共振光散射法等。其中共振光散射技术应用于生物大分子的分析具有简便、灵敏度高等特点，为生物化学和临床分析中样品的检测提供了一条新的途径，已成为目前研究生物大分子的重要手段。靛蓝是最早发现的天然染料之一，因其色泽鲜艳、价格低廉等被广泛用于印染、医药和食品等工业。研究发现，对于靛蓝的研究主要集中在药物中含量的测定及其染色能力等方面，而未见利用靛蓝的共振光散射信号测定食品中蛋白质的相关报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种方法简单，灵敏度高，选择性好，方便快速的对食品中痕量蛋白质进行检测的方法。
构思如下：靛蓝染料具有稳定、较强的共振光散射信号。当向靛蓝溶液加入不同浓度的牛血清蛋白后，靛蓝的共振光散射强度发生相应的增强，且其增加值与牛血清蛋白的浓度在2×10-8~6×10-7 摩尔/升（1.3×10-3~3.9×10-2 克/升）范围内呈良好的线性关系。具体机理如下：由于牛血清蛋白肽链上的氨基酸带正电荷，形成一个阳离子，而靛蓝结构中的羰基氧原子电负性很强，二者可以通过静电作用和疏水作用力形成聚集体，同时牛血清蛋白大分子形成的疏水性空腔可以与靛蓝产生包结配合作用，形成超分子结合物。
具体步骤如下：
（1）检测方法：
在12支10 毫升比色管中各加入1.00毫升1.0×10-4摩尔/升的靛蓝溶液，然后分别加入20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600微升1.0×10-3摩尔/升的牛血清蛋白溶液，再分别用pH＝4.5、浓度为0.05 摩尔/升的醋酸-醋酸钠缓冲溶液定容至刻度，反应3分钟后用荧光光度计进行共振光强度检测，令激发波长同发射波长相同，激发和发射狭缝宽度均为5纳米。
（2）工作曲线的绘制：
在12支10 毫升比色管中各加入1.00毫升1.0×10-4摩尔/升的靛蓝溶液，然后分别加入20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600微升1.0×10-3摩尔/升的牛血清蛋白溶液，再分别用pH＝4.5、浓度为0.05 摩尔/升的醋酸-醋酸钠缓冲溶液定容至刻度，充分摇匀后放置反应3分钟，进行共振光强度检测；牛血清蛋白的浓度c在2×10-8~6×10-7 摩尔/升（1.3×10-3~3.9×10-2 克/升）范围内与荧光增敏量（△IF）呈良好的线性关系，其线性回归方程为：ΔI=0.8654c+75.786，线性相关系数r = 0.9987。
本发明克服了已有技术在检测时存在灵敏度低、选择性差、反应时间长、稳定差的缺点，更好地提高了灵敏度和选择性，对于食品中低浓度蛋白质的检测更加准确方便快速。
附图说明
图1为本发明实施例在0.05摩尔/升的醋酸-醋酸钠缓冲溶液（pH=4.5）中，不同浓度的牛血清蛋白对靛蓝的共振光增敏光谱图。其中a为1×10-4摩尔/升的靛蓝的共振光散射光谱，b、c、d分别为8×10-8摩尔/升、2×10-7摩尔/升、4×10-7摩尔/升的牛血清蛋白对靛蓝的共振光增敏光谱图。
图2为本发明实施例牛血清蛋白含量与靛蓝共振光增敏量的关系图。
具体实施方式
实施例:
1、检测方法：
在12支10 毫升比色管中各加入1.00毫升1.0×10-4摩尔/升的靛蓝溶液，然后分别加入20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600微升1.0×10-3摩尔/升的牛血清蛋白溶液，再分别用pH＝4.5、浓度为0.05 摩尔/升的醋酸-醋酸钠缓冲溶液定容至刻度，反应充3分钟后用荧光光度计进行共振光强度检测，令激发波长同发射波长相同，激发和发射狭缝宽度均为5纳米。
2、标准工作曲线的绘制：
在12支10 毫升比色管中各加入1.00毫升1.0×10-4摩尔/升的靛蓝溶液，然后分别加入20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600微升1.0×10-3摩尔/升的牛血清蛋白溶液，再分别用pH＝4.5、浓度为0.05 摩尔/升的醋酸-醋酸钠缓冲溶液定容至刻度，充分摇匀后放置反应3分钟，进行共振光强度检测；牛血清蛋白的浓度c在2×10-8~6×10-7摩尔/升（1.3×10-3~3.9×10-2 克/升）范围内与荧光增敏量（△IF）呈良好的线性关系，其线性回归方程为：ΔI=0.8654c+75.786，线性相关系数r = 0.9987。
3、食品中蛋白质含量的检测：
取市售牛奶样品稀释1000倍作为待测溶液。取市售啤酒样品20毫升在60°C下加热30分钟以除去CO2，后将样品稀释1000倍作为待测溶液。
取适量的待测液按实验方法操作对样品进行测定，同时进行标准加入回收试验，结果如表1所示，其RSD≤2.1%(n=6)，加标回收率在98.3%~101.7%，说明方法具有较高的准确度和较好的精密度。
 
表1：样品测定和加标回收试验数据
Figure 2013103947047100002DEST_PATH_IMAGE001

Claims (1)

1.一种利用靛蓝染料快速检测食品中蛋白质的方法，其特征在于具体步骤为：
（1）检测方法：
在12支10 毫升比色管中各加入1.00毫升1.0×10-4摩尔/升的靛蓝溶液，然后分别加入20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600微升1.0×10-3摩尔/升的牛血清蛋白溶液，再分别用pH＝4.5、浓度为0.05 摩尔/升的醋酸-醋酸钠缓冲溶液定容至刻度，反应3分钟后用荧光光度计进行共振光强度检测，令激发波长同发射波长相同，激发和发射狭缝宽度均为5纳米；
（2）工作曲线的绘制：
在12支10 毫升比色管中各加入1.00毫升1.0×10-4摩尔/升的靛蓝溶液，然后分别加入20、60、100、140、180、220、260、340、420、500、580、600微升1.0×10-3摩尔/升的牛血清蛋白溶液，再分别用pH＝4.5、浓度为0.05 摩尔/升的醋酸-醋酸钠缓冲溶液定容至刻度，充分摇匀后放置反应3分钟，进行共振光强度检测；牛血清蛋白的浓度c在2×10-8~6×10-7 摩尔/升即1.3×10-3~3.9×10-2 克/升范围内与荧光增敏量△IF呈良好的线性关系，其线性回归方程为：ΔI=0.8654c+75.786，线性相关系数r = 0.9987。
CN2013103947047A 2013-09-30 2013-09-30 一种利用靛蓝染料快速检测食品中蛋白质的方法 Pending CN103439307A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2013103947047A CN103439307A (zh) 2013-09-30 2013-09-30 一种利用靛蓝染料快速检测食品中蛋白质的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2013103947047A CN103439307A (zh) 2013-09-30 2013-09-30 一种利用靛蓝染料快速检测食品中蛋白质的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN103439307A true CN103439307A (zh) 2013-12-11

Family

ID=49693008

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2013103947047A Pending CN103439307A (zh) 2013-09-30 2013-09-30 一种利用靛蓝染料快速检测食品中蛋白质的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103439307A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104880444A (zh) * 2015-05-21 2015-09-02 桂林理工大学 一种测定硫酸卡那霉素的方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101320044A (zh) * 2008-07-03 2008-12-10 广西师范大学 检测人尿微量白蛋白的共振散射光谱法
CN102565020A (zh) * 2012-01-13 2012-07-11 上海师范大学 一种利用量子点共振散射定量检测蛋白质的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101320044A (zh) * 2008-07-03 2008-12-10 广西师范大学 检测人尿微量白蛋白的共振散射光谱法
CN102565020A (zh) * 2012-01-13 2012-07-11 上海师范大学 一种利用量子点共振散射定量检测蛋白质的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
冯宁川 等: "亮黄共振光散射法测定微量蛋白质", 《理化检验-化学分册》, vol. 41, no. 2, 28 February 2005 (2005-02-28) *
张爱梅 等: "靛蓝胭脂红共振瑞利散射法测定蛋白质", 《分析科学学报》, vol. 22, no. 3, 30 June 2006 (2006-06-30) *
李怡 等: "一些酸性染料测定蛋白质的共振瑞利光散射方法研究", 《南昌大学学报(理科版)》, vol. 30, 30 September 2006 (2006-09-30), pages 1356 - 1357 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104880444A (zh) * 2015-05-21 2015-09-02 桂林理工大学 一种测定硫酸卡那霉素的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Miyado et al. Simultaneous determination of nitrate and nitrite in biological fluids by capillary electrophoresis and preliminary study on their determination by microchip capillary electrophoresis
Grau et al. Recent methodological advances in the analysis of nitrite in the human circulation: nitrite as a biochemical parameter of the L-arginine/NO pathway
Zinellu et al. N‐Methyl‐D‐glucamine improves the laser‐induced fluorescence capillary electrophoresis performance in the total plasma thiols measurement
DE60024448D1 (de) System zur elektrochemischen quantitativen analyse von analyten in einer festphase
Wu et al. Micro sequential injection: automated insulin derivatization and separation using a lab-on-valve capillary electrophoresis system
CN104345053B (zh) 一种检测血清肌酐的金纳米粒子生物传感器及其制备方法
CN106442515B (zh) 一种简单的银离子目视定量检测方法
Frantz et al. Quantitative hematocrit measurement of whole blood in a point-of-care lateral flow device using a smartphone flow tracking app
CN105044003A (zh) 比色/荧光双模态快速检测抗生素的纳米传感器以及检测抗生素的方法
Wang et al. Determination of excitatory amino acids in biological fluids by capillary electrophoresis with optical fiber light-emitting diode induced fluorescence detection
CN103788076A (zh) 一种检测半胱氨酸的试剂和方法
Xu et al. Simultaneous determination of urinary creatinine, calcium and other inorganic cations by capillary zone electrophoresis with indirect ultraviolet detection
CN103512855A (zh) 还原型谷胱甘肽的检测方法
CN104194771B (zh) 一种检测微量血清白蛋白的荧光试剂、制备方法及应用
CN105699309A (zh) 一种卡那霉素残留的可视检测方法
CN109187469A (zh) 一种用酶催化氧化tmb荧光光谱测定葡萄糖的方法
CN103439307A (zh) 一种利用靛蓝染料快速检测食品中蛋白质的方法
Xu et al. Detection of biological thiols based on a colorimetric method
CN102661943B (zh) 用表面增强拉曼光谱测定胱氨酸的方法
Gupta et al. Refractometric total protein concentrations in icteric serum from dogs
Ren et al. based analytical device for fast colorimetric detection of total hemoglobin and free hemoglobin from human blood sample
Tang et al. Ruthenium bipyridine complexes as electrochemiluminescent transducers for ionophore-based ion-selective detection
Huemer et al. Automated Lowry method for microgram protein determination
Tan et al. Detection of biothiols in cells by a terbium chelate-Hg (II) system
Coufal et al. An evaluation of the experimental approaches to detection of small ions in CE

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20131211