CN103436472B - 一种用于改进池塘水质的复合微生态制剂 - Google Patents
一种用于改进池塘水质的复合微生态制剂 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种用于改进池塘水质的复合微生态制剂，其制备方法的具体步骤：将冷冻保藏管中的沼泽红假单胞菌、硝化菌、乳酸杆菌、及酿酒酵母分别在斜面中活化，之后纯化得各斜面菌种，备用；利用各斜面菌种制备相应的原菌液；将各原菌液按2：2：1：1的菌量比接种于已灭菌的发酵培养基Ⅰ中进行培养，得复合微生态菌剂的一级种子；将一级种子按5%的接种量接种于已灭菌的发酵培养基Ⅱ中培养得复合微生态菌剂的二级种子；最后将二级种子按5%的接种量接种至已灭菌的发酵培养基Ⅲ培养以获得复合微生态菌剂的成品。采用本发明复合微生态制剂既能够提高水体中的溶氧量，又能降低水体中的COD，从而起到改善、优化池塘水质的作用。
Description
【技术领域】
本发明涉及一种水产养殖领域用的复合微生态制剂，尤其涉及一种用于改进池塘水质的复合微生态制剂。
【背景技术】
改革开放以来，我国的水产养殖业取得了突飞猛进的发展，成为世界上唯一养殖产量超过捕捞产量的渔业大国。在我国的水产养殖业中，池塘水产养殖占据了举足轻重的地位，现有的池塘水产养殖大多秉承了以“密、混、轮”为技术特征的传统养殖模式。为了提高单位水体的养殖产量，片面追求高产，往往过分的增加水体营养，过度投饵、施肥和加大放养密度，致使水中有害微生物、有害藻类的过快繁殖，及出现***物和残饵污染，破坏养殖水体的生态尤其是微生态环境，从而直接或间接地危害水体中的养殖生物，进而使得优质水产品种的养殖受到水质的限制。水体生态环境被破坏，池塘中水产动物的病害发生频繁，渔业蒙受巨大损失。为了预防或防止病害，目前在整个养殖周期中均在使用鱼药，鱼药的使用虽然取得应急治疗的效果，但更多地带来了诸如抗药性、在水产品和环境中蓄积残留等问题。因此，从生态学角度来看，尽管养殖池塘是一个极为复杂的水生生态***，但不论其多复杂，归根到底是一个环境的问题。养殖池塘水体生态环境的控制已成为发展我国池塘水产养殖的关键问题，因此对水产养殖池塘水质的净化和改进显得十分重要。
【发明内容】
本发明所要解决的技术问题在于提供一种用于改进池塘水质的复合微生态制剂。
本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：一种用于改进池塘水质的复合微生态制剂，其制备方法的具体步骤如下：
(1)原菌种斜面培养：将冷冻保藏管中的沼泽红假单胞菌、硝化菌、乳酸杆菌、及酿酒酵母分别在斜面中活化，之后分别置于90mm培养皿中进行纯化，得沼泽红假单胞菌斜面菌种、硝化菌斜面菌种、乳酸杆菌斜面菌种、及酿酒酵母斜面菌种，备用；
(2)原菌种液体培养：将沼泽红假单胞菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅰ中，之后于28℃-30℃厌氧钨丝灯光照培养5-7天得沼泽红假单胞菌原菌液；将硝化菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅱ中，接着于25℃-28℃下好氧培养3-5天得硝化菌原菌液；将乳酸杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅲ中，接着于37℃下厌氧培养1-2天得乳酸杆菌原菌液；将酿酒酵母斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅳ中，之后于28℃-30℃下好氧培养3天得酿酒酵母原菌液；
(3)一级种子培养：将沼泽红假单胞菌原菌液、硝化菌原菌液、乳酸杆菌原菌液、及酿酒酵母原菌液按2：2：1：1的菌量比接种于已灭菌的发酵培养基Ⅰ中进行培养，具体地：先接种硝化菌原菌液、酿酒酵母原菌液并于28℃-30℃下好氧培养3天，然后再接种沼泽红假单胞菌原菌液、乳酸杆菌原菌液37℃厌氧培养3天，得复合微生态制剂的一级种子；
(4)二级种子培养：将所得的一级种子按5％的接种量接种于已灭菌的发酵培养基Ⅱ中，并于28℃-30℃下先好氧培养3-5天再厌氧培养3-5天，得复合微生态制剂的二级种子；
(5)成品培养：将所得的二级种子按5％的接种量接种至已灭菌的发酵培养基Ⅲ中，并于28℃-30℃下先好氧培养3-5天再厌氧培养3-5天，获得所述复合微生态制剂的成品；
其中，液体培养基Ⅰ的组分：酵母粉10克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁0.5克、琼脂20克、水1000ml、PH7.0-7.2；液体培养基Ⅱ的组分：硝酸钠1克、硫酸镁0.03克、硫酸锰0.01克、磷酸氢二钾0.8克、碳酸钠1克、过磷酸钙0.25克、水1000ml、PH自然；液体培养基Ⅲ的组分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801ml、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.58克、硫酸锰0.28克、水1000ml、PH6.5；液体培养基Ⅳ的组分：马铃薯200克、蔗糖20克、水1000ml、PH自然；发酵培养基Ⅰ的组分：桔水5％、酵母粉0.5％、蛋白胨1％、氯化铵0.2％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％，余量为水；发酵培养基Ⅱ的组分：桔水5％、酵母粉0.1％、蛋白胨0.1％、氯化铵0.2％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％，余量为水；发酵培养基Ⅲ的组分：桔水5％、氯化铵0.2％、氯化钠0.05％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％，余量为水。
进一步地，所述步骤(1)中沼泽红假单胞菌在斜面中活化的具体操作为：用接种环将沼泽红假单胞菌接种于已灭菌的斜面培养基Ⅰ上，之后于28℃-30℃厌氧钨丝灯光照培养5-7天；所述斜面培养基Ⅰ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为15min；且该斜面培养基Ⅰ的组分：酵母粉10克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁0.5克、琼脂20克、水1000ml、PH 7.0-7.2。
进一步地，所述步骤(1)中硝化菌在斜面中活化的具体操作为：制备斜面培养基Ⅱ，并将斜面培养基Ⅱ置于121℃下灭菌20min，之后用接种环将硝化菌接种于斜面培养基Ⅱ上，然后于25℃-28℃下好氧培养3-5天；所述斜面培养基Ⅱ的组分：硝酸钠1克、硫酸镁0.03克、硫酸锰0.01克、磷酸氢二钾0.8克、碳酸钠1克、过磷酸钙0.25克、琼脂50克、水1000ml、PH自然。
进一步地，所述步骤(1)中乳酸杆菌在斜面中活化的具体操作为：用接种环将乳酸杆菌接种于已灭菌的斜面培养基Ⅲ上，之后于37℃下厌氧培养1-2天；所述斜面培养基Ⅲ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为20min；且该斜面培养基Ⅲ的组分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801ml、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.58克、硫酸锰0.28克、琼脂15克、水1000ml、PH6.5。
进一步地，所述步骤(1)中酿酒酵母在斜面中活化的具体操作为：用接种环将酿酒酵母接种于已灭菌的斜面培养基Ⅳ上，之后于28-30℃下好氧培养3天；所述斜面培养基Ⅳ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为30min；且该斜面培养基Ⅳ的组分：马铃薯200克、蔗糖20克、琼脂15-20克、水1000ml、PH自然。
本发明一种用于改进池塘水质的复合微生态制剂的有益效果在于：采用该复合微生态制剂既能够提高水体中的溶氧量，促进养殖生态系中的正常菌群和有益藻类活化生长，保持养殖水体的生态平衡；又能使池塘中的***物和残饵污染得到净化，稳定和改善水质，从而降低了水体中的COD；即本发明复合微生态制剂具有改善、优化池塘水质的作用。
【具体实施方式】
本发明一种用于改进池塘水质的复合微生态制剂，其制备方法的具体步骤如下：
(1)原菌种斜面培养：将冷冻保藏管中的沼泽红假单胞菌、硝化菌、乳酸杆菌、及酿酒酵母分别在斜面中活化，之后分别置于90mm培养皿中进行纯化，得沼泽红假单胞菌斜面菌种、硝化菌斜面菌种、乳酸杆菌斜面菌种、及酿酒酵母斜面菌种，备用；
(2)原菌种液体培养：将沼泽红假单胞菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅰ中，之后于28℃-30℃厌氧钨丝灯光照培养5-7天得沼泽红假单胞菌原菌液；将硝化菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅱ中，接着于25℃-28℃下好氧培养3-5天得硝化菌原菌液；将乳酸杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅲ中，接着于37℃下厌氧培养1-2天得乳酸杆菌原菌液；将酿酒酵母斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅳ中，之后于28℃-30℃下好氧培养3天得酿酒酵母原菌液；
(3)一级种子培养：将沼泽红假单胞菌原菌液、硝化菌原菌液、乳酸杆菌原菌液、及酿酒酵母原菌液按2：2：1：1的菌量比接种于已灭菌的发酵培养基Ⅰ中进行培养，具体地：先接种硝化菌原菌液、酿酒酵母原菌液并于28℃-30℃下好氧培养3天，然后再接种沼泽红假单胞菌原菌液、乳酸杆菌原菌液37℃厌氧培养3天，得复合微生态制剂的一级种子；
(4)二级种子培养：将所得的一级种子按5％的接种量接种于已灭菌的发酵培养基Ⅱ中，并于28℃-30℃下先好氧培养3-5天再厌氧培养3-5天，得复合微生态制剂的二级种子；
(5)成品培养：将所得的二级种子按5％的接种量接种至已灭菌的发酵培养基Ⅲ中，并于28℃-30℃下先好氧培养3-5天再厌氧培养3-5天，获得所述复合微生态制剂的成品。
其中：步骤(1)中沼泽红假单胞菌在斜面中活化的具体操作为：用接种环将沼泽红假单胞菌接种于已灭菌的斜面培养基Ⅰ上，之后于28℃-30℃厌氧钨丝灯光照培养5-7天；所述斜面培养基Ⅰ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为15min；且该斜面培养基Ⅰ的组分：酵母粉10克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁0.5克、琼脂20克、水1000ml、PH 7.0-7.2。步骤(1)中硝化菌在斜面中活化的具体操作为：制备斜面培养基Ⅱ，并将斜面培养基Ⅱ置于121℃下灭菌20min，之后用接种环将硝化菌接种于斜面培养基Ⅱ上，然后于25℃-28℃下好氧培养3-5天；所述斜面培养基Ⅱ的组分：硝酸钠1克、硫酸镁0.03克、硫酸锰0.01克、磷酸氢二钾0.8克、碳酸钠1克、过磷酸钙0.25克、琼脂50克、水1000ml、PH自然。步骤(1)中乳酸杆菌在斜面中活化的具体操作为：用接种环将乳酸杆菌接种于已灭菌的斜面培养基Ⅲ上，之后于37℃下厌氧培养1-2天；所述斜面培养基Ⅲ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为20min；且该斜面培养基Ⅲ的组分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801ml、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.58克、硫酸锰0.28克、琼脂15克、水1000ml、PH6.5。步骤(1)中酿酒酵母在斜面中活化的具体操作为：用接种环将酿酒酵母接种于已灭菌的斜面培养基Ⅳ上，之后于28-30℃下好氧培养3天；所述斜面培养基Ⅳ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为30min；且该斜面培养基Ⅳ的组分：马铃薯200克、蔗糖20克、琼脂15-20克、水1000ml、PH自然。
步骤(2)中液体培养基Ⅰ的组分：酵母粉10克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁0.5克、水1000ml、PH7.0-7.2；液体培养基Ⅱ的组分：硝酸钠1克、硫酸镁0.03克、硫酸锰0.01克、磷酸氢二钾0.8克、碳酸钠1克、过磷酸钙0.25克、水1000ml、PH自然；液体培养基Ⅲ的组分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801ml、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.58克、硫酸锰0.28克、水1000ml、PH6.5；液体培养基Ⅳ的组分：马铃薯200克、蔗糖20克、水1000ml、PH自然。
步骤(3)中发酵培养基Ⅰ的组分：桔水5％、酵母粉0.5％、蛋白胨1％、氯化铵0.2％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％，余量为水。步骤(4)中发酵培养基Ⅱ的组分：桔水5％、酵母粉0.1％、蛋白胨0.1％、氯化铵0.2％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％，余量为水。步骤(5)中发酵培养基Ⅲ的组分：桔水5％、氯化铵0.2％、氯化钠0.05％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％，余量为水。
需要说明的是，本发明中各培养基的百分比均为质量百分比。
本发明复合微生态制剂用于改进优化池塘的水质，申请人通过如下实验来说明该复合微生态制剂能够起到优化池塘水质，具体地：
在某水产养殖场中，取两池塘，该两池塘的面积、水深、养殖模式、放养量、配套设备、及饲养管理条件等配置均相同，且两池塘一个设置为试验池，另一个设置为对照池，在试验池中施用本发明复合微生态制剂，且施用量为400ml/亩，而对照池为空白对照池即未施用本发明复合微生态制剂；试验时间7月20到7月30；试验结果：经检测，试验池较之对照池，其水体中的溶氧量提高了从3.2mg/L提高到5.1mg/L，即提高了59％；COD从2500mg/L下降到1700mg/L，降低了32％。因此，通过该试验结果可知，采用本发明复合微生态制剂能够优化池塘中水体的水质，平衡养殖水体的生态环境，从而促进池塘中养殖生物的健康生长。
综上，采用该复合微生态制剂既能够提高水体中的溶氧量，促进养殖生态系中的正常菌群和有益藻类活化生长，保持养殖水体的生态平衡；又能使池塘中的***物和残饵污染得到净化，稳定和改善水质，从而降低了水体中的COD；即本发明复合微生态制剂具有改善、优化池塘水质的作用。
Claims (5)
1.一种用于改进池塘水质的复合微生态制剂，其特征在于：其制备方法的具体步骤如下：
(1)原菌种斜面培养：将冷冻保藏管中的沼泽红假单胞菌、硝化菌、乳酸杆菌、及酿酒酵母分别在斜面中活化，之后分别置于90mm培养皿中进行纯化，得沼泽红假单胞菌斜面菌种、硝化菌斜面菌种、乳酸杆菌斜面菌种、及酿酒酵母斜面菌种，备用；
(2)原菌种液体培养：将沼泽红假单胞菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅰ中，之后于28℃-30℃厌氧钨丝灯光照培养5-7天得沼泽红假单胞菌原菌液；将硝化菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅱ中，接着于25℃-28℃下好氧培养3-5天得硝化菌原菌液；将乳酸杆菌斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅲ中，接着于37℃下厌氧培养1-2天得乳酸杆菌原菌液；将酿酒酵母斜面菌种接种于已灭菌的液体培养基Ⅳ中，之后于28℃-30℃下好氧培养3天得酿酒酵母原菌液；
(3)一级种子培养：将沼泽红假单胞菌原菌液、硝化菌原菌液、乳酸杆菌原菌液、及酿酒酵母原菌液按2：2：1：1的菌量比接种于已灭菌的发酵培养基Ⅰ中进行培养，具体地：先接种硝化菌原菌液、酿酒酵母原菌液并于28℃-30℃下好氧培养3天，然后再接种沼泽红假单胞菌原菌液、乳酸杆菌原菌液37℃厌氧培养3天，得复合微生态制剂的一级种子；
(4)二级种子培养：将所得的一级种子按5％的接种量接种于已灭菌的发酵培养基Ⅱ中，并于28℃-30℃下先好氧培养3-5天再厌氧培养3-5天，得复合微生态制剂的二级种子；
(5)成品培养：将所得的二级种子按5％的接种量接种至已灭菌的发酵培养基Ⅲ中，并于28℃-30℃下先好氧培养3-5天再厌氧培养3-5天，获得所述复合微生态制剂的成品；
其中，液体培养基Ⅰ的组分：酵母粉10克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁0.5克、琼脂20克、水1000ml、PH7.0-7.2；液体培养基Ⅱ的组分：硝酸钠1克、硫酸镁0.03克、硫酸锰0.01克、磷酸氢二钾0.8克、碳酸钠1克、过磷酸钙0.25克、水1000ml、PH自然；液体培养基Ⅲ的组分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801ml、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.58克、硫酸锰0.28克、水1000ml、PH6.5；液体培养基Ⅳ的组分：马铃薯200克、蔗糖20克、水1000ml、PH自然；发酵培养基Ⅰ的组分：桔水5％、酵母粉0.5％、蛋白胨1％、氯化铵0.2％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％，余量为水；发酵培养基Ⅱ的组分：桔水5％、酵母粉0.1％、蛋白胨0.1％、氯化铵0.2％、氯化钠0.1％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％，余量为水；发酵培养基Ⅲ的组分：桔水5％、氯化铵0.2％、氯化钠0.05％、磷酸二氢钾0.1％、硫酸镁0.05％、硫酸锌0.025％、硫酸亚铁0.025％，余量为水。
2.根据权利要求1所述的一种用于改进池塘水质的复合微生态制剂，其特征在于：所述步骤(1)中沼泽红假单胞菌在斜面中活化的具体操作为：用接种环将沼泽红假单胞菌接种于已灭菌的斜面培养基Ⅰ上，之后于28℃-30℃厌氧钨丝灯光照培养5-7天；所述斜面培养基Ⅰ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为15min；且该斜面培养基Ⅰ的组分：酵母粉10克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁0.5克、琼脂20克、水1000ml、PH 7.0-7.2。
3.根据权利要求1所述的一种用于改进池塘水质的复合微生态制剂，其特征在于：所述步骤(1)中硝化菌在斜面中活化的具体操作为：制备斜面培养基Ⅱ，并将斜面培养基Ⅱ置于121℃下灭菌20min，之后用接种环将硝化菌接种于斜面培养基Ⅱ上，然后于25℃-28℃下好氧培养3-5天；所述斜面培养基Ⅱ的组分：硝酸钠1克、硫酸镁0.03克、硫酸锰0.01克、磷酸氢二钾0.8克、碳酸钠1克、过磷酸钙0.25克、琼脂50克、水1000ml、PH自然。
4.根据权利要求1所述的一种用于改进池塘水质的复合微生态制剂，其特征在于：所述步骤(1)中乳酸杆菌在斜面中活化的具体操作为：用接种环将乳酸杆菌接种于已灭菌的斜面培养基Ⅲ上，之后于37℃下厌氧培养1-2天；所述斜面培养基Ⅲ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为20min；且该斜面培养基Ⅲ的组分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸钠5克、柠檬酸二胺2克、吐温801ml、磷酸氢二钾2克、硫酸镁0.58克、硫酸锰0.28克、琼脂15克、水1000ml、PH6.5。
5.根据权利要求1所述的一种用于改进池塘水质的复合微生态制剂，其特征在于：所述步骤(1)中酿酒酵母在斜面中活化的具体操作为：用接种环将酿酒酵母接种于已灭菌的斜面培养基Ⅳ上，之后于28-30℃下好氧培养3天；所述斜面培养基Ⅳ的灭菌温度为121℃、灭菌时间为30min；且该斜面培养基Ⅳ的组分：马铃薯200克、蔗糖20克、琼脂15-20克、水1000ml、PH自然。
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| 朱将伟.一种水产养殖用微生物制剂的研究.《饲料工业》.2011,第32卷(第20期),55-58页. * |
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| CN103436472A (zh) | 2013-12-11 |
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