CN103392500B - 一种蝉花的培养方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种蝉花的培养方法，包括：将蝉拟青霉（Paecilomyces cicadae）活化后接种于培养基上，暗培养至长出菌蕾后，避光进行通风培养直至子实体成熟；所述暗培养的温度为25～28℃，所述通风培养的温度为23～26℃。采用本发明的培养方法，培养40天左右即可收获子实体，子实体粗壮，质优。另外，本发明的培养方法简单，培养周期较短，可大规模生产，且生产成本低廉。

Description

一种蝉花的培养方法
技术领域
本发明涉及食用菌生产技术领域，尤其涉及一种蝉花的培养方法。
背景技术
蝉花为传统名贵中药材，富含多糖、核苷、甘露醇、麦角甾醇等多种有效成分，味干，性寒，有散风热、镇惊、明目之功效。主治小儿天吊、惊痫、心悸、夜啼、目赤肿痛。蝉花作为我国传统中药材，早已闻名全世界。Rant于1925年提到，蝉棒束孢霉（Isaria cicadae）在中国叫“Sandwhe”，是治疗小儿用的药物。现代药理学实验表明，蝉花及其人工培养物具有明显的解热镇痛、镇静催眠、调节免疫、改善肾功能、滋补强壮和抗衰老抗肿瘤以及降血糖等功效。
蝉花别名虫花，是某些蝉若虫受蝉拟青霉菌（Paecilomyces cicadae）寄生后的产物，与冬虫夏草同属虫菌复合体。此菌于1838年由Miquel定名为蝉棒束孢霉（Isaria cicadae）。此后出现多种同物异名，如蝉草（Cordyceps cicadae）、基生棒束孢（Isaria basili）、辛克莱球壳孢（Sphaeriasinclairii）等。蝉拟青霉的有性阶段，被认为是大蝉草（Cordyceps cicadae），大蝉草俗名独角龙，子座棒状或角状，从寄主头部发出，单生或丛生，褐色。蝉拟青霉为蝉花的无性型，在自然界广为分布的是蝉拟青霉，大蝉草较为稀少。
蝉拟青霉的寄主有7种，即竹蝉（Platylomia pieli）、山蝉（Cicadaflammata）、蟪蛄（Platyleura kaempferi）、云南黑蝉（Cicadatra shaluensis）、草蝉（Mogannia conica）、小鸣蝉（Oncotympana ella）和透翅蝉（Hyalessaronsnana），多分布在我国南方诸省。蝉若虫在羽化前被蝉拟青霉孢子侵染寄生，当生活条件适宜时，菌丝开始大量生长，并吸收虫体的营养，经过一定时间蝉若虫就会死亡，最终虫体被菌丝体完全占有而只剩下一个空壳。气候适宜时，蝉拟青霉从营养阶段转化为生殖阶段，渐渐从整个菌丝体顶端生出蝉花子实体，子实体成熟后表面长出很多孢子粉，蝉拟青霉子实体常常长出地面形状似花，故而得名蝉花。
蝉花是一种具有广阔应用前景的药用资源菌，但是目前蝉花的使用中存在着资源有限，人工采集困难，原料不纯等问题，而且天然蝉花的产生总是依赖于寄主，而寄主又受自然环境的制约，特别是受气候因子或人为因素的影响。人工培养的蝉花在主要生物活性成分、药理学作用方面均和天然蝉花相似或超出天然蝉花。目前，国内的中医药事业蓬勃发展，对蝉花的需求量也越来越大，因此，推出人工培养品来替代日益枯竭的自然资源，是一条较为理想的途径。
发明内容
本发明提供了一种蝉花的培养方法，培养方法简单，培养周期较短，培养得到的子实体粗壮，质优，且生产成本低廉。
一种蝉花的培养方法，包括：将蝉拟青霉活化后接种于培养基上，暗培养至长出菌蕾后，避光进行通风培养直至子实体成熟；所述暗培养的温度为25～28℃，所述通风培养的温度为23～26℃。
实验中发现，光照条件下子实体畸形生长，较细或分叉较多，而且会过早地产生大量孢子粉。在黑暗条件下对蝉拟青霉进行培养，菌丝不但能正常生长，而且生长速度快。暗培养至长出菌蕾后，进行避光通风培养，使得的子实体生长粗壮有力，有利于高产优质。
在蝉花的培养过程中，温度至关重要，温度过低或过高均难以形成子实体或导致子实体生长畸形。适宜的暗培养温度加快了菌丝的生长，可使菌丝短时间内布满培养基表面，优选的，所述暗培养的温度为27～28℃，更优选为28℃。
适宜的通风培养温度能够使子实体生长正常，长且粗壮，优选的，所述通风培养的温度为23～24℃，更优选为23℃。
以重量份计，所述培养基包括：大米100份，蔗糖3～5份、蛋白胨0.5～0.8份、K2HPO40.1～0.3份、MgSO40.02～0.05份、VB10.01～0.03份和20％马铃薯液180～220份。在蝉花培养时，通常采用在培养基中添加蚕蛹粉、鸡蛋等动物性成分来促进子实体的生长，成本高。本发明通过合理搭配营养元素，保证了菌丝、子实体生长过程中的营养供应，可获得优质的子实体，且原料廉价易得。
优选的，以重量份计，所述培养基包括：大米100份，蔗糖4份、蛋白胨0.6份、K2HPO40.1份、MgSO40.04份、VB10.01份和20％马铃薯液200份。
所述培养基的制备方法为：
（1）将大米置于水中浸泡；
（2）将蔗糖、蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、VB1溶于20％马铃薯液，制得营养液；
（3）将浸泡后的大米与所述的营养液混合，高压灭菌制得所述培养基。
经过浸泡，可以让米粒充分吸收水分，这样蒸煮出来的米饭粒会更饱满，有利于蝉拟青霉的生长，一般，浸泡时的水温为30～60℃，浸泡时间为20～30min。
20％马铃薯液的制备方法为：将马铃薯置于沸水中煮20～30min后，过滤，定容。
培养过程中，控制环境湿度为70～80％，优选的，控制环境湿度为80%。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
（1）采用本发明的培养方法，培养40天左右即可收获子实体，子实体粗壮，质优。
（2）本发明的培养方法简单，培养周期较短，可大规模生产，且生产成本低廉。
附图说明
图1为实施例1蝉花培养过程中形成的菌蕾；
图2为实施例1培养得到的蝉花子实体。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步阐释。
实施例1
1、菌种准备
蝉拟青霉菌种由本实验室分离。
组织分离法：挑选采集的野生蝉花中，生长状态较好的子实体，用无菌水冲洗，刮掉表层，取肉质1mm大小于斜面培养基上，24-25℃培养10d，菌丝布满斜面，挑选长势良好的菌株，纯化后低温保藏蝉拟青霉菌种备用。
2、培养基制备
1）PDA培养基
称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸半个小时，纱布过滤，再加10-20g葡萄糖和17-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，补足水至1000ml，分装；
培养基于121℃条件下灭菌30分钟，冷却后贮存备用。
2）米饭培养基
（1）按常规方法制备20％马铃薯液。称取马铃薯小块200g，加水1000ml，煮沸20分钟后，过滤，在滤汁中补足水分到1000ml，即成20%马铃薯煮汁，备用；
（2）用30-60摄氏度的温水将大米浸泡20-30分钟，浸泡后将米粒取出晾干，然后平铺于2000mL耐高温的保鲜冷藏盒盒底，加入200ml营养液，营养液的组成为：蔗糖4g、蛋白胨0.6g、K2HPO40.1g、MgSO40.04g、VB10.01g、20％马铃薯液200mL，pH自然。
3、培养基分装、灭菌
将配制好的米饭培养基分装于耐高温的保鲜冷藏盒后，封盖，在1.05kg/cm2、121℃条件下蒸汽灭菌蒸煮30分钟，冷却后即可使用。
4、接种
将活化后的蝉拟青霉菌株接种到PDA培养基上，在25℃恒温培养箱中培养约10天后，在无菌条件下，用5mm打孔器将菌落边缘切成菌饼，然后在无菌条件下，将菌饼接种到冷却后的米饭培养基上。
5、培养
将接好种的米饭培养基置于恒温培养箱里，28℃避光培养。一般5天菌丝即可封面，10天可以封底。
避光培养15天左右菌落微***，形成直径约1cm的菌蕾，如图1所示。待形成菌蕾后，转移到23℃、通风透气良好的条件下避光培养，去掉盒盖，覆盖保鲜膜保湿在保鲜膜上用消毒后的手术刀或镊子扎几个小口，培养室内的湿度控制在80％，通气好的子实体粗壮有力，有利于高产优质。避光培养约21天后菌蕾上开始长出棒状的子实体。
6、采收子实体
将菌种接种到培养基上培养30-40天后，子实体逐渐成熟，此时将长出的子实体用镊子采出，去掉子实体连接的培养基，如图2所示，成熟子实体长度可至少达5cm。

Claims (3)

1.一种蝉花的培养方法，包括：将蝉拟青霉(Paecilomyces cicadae)活化后接种于培养基上，暗培养至长出菌蕾后，避光进行通风培养直至子实体成熟；所述暗培养的温度为28℃，所述通风培养的温度为23℃；
以重量份计，所述培养基包括：大米100份，蔗糖3～5份、蛋白胨0.5～0.8份、K2HPO40.1～0.3份、MgSO40.02～0.05份、VB10.01～0.03份和20％马铃薯液180～220份。
2.如权利要求1所述的培养方法，其特征在于，培养过程中，控制环境湿度为70～80％。
3.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，培养过程中，控制环境湿度为80％。
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